湖科大分子生物学总复习(完美版)2014

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第一章绪论

1、分子生物学研究内容有哪些方面?

答:结构分子生物学,基因表达的调节与控制,DNA重组技术及其应用,

结构基因组学、功能基因组学、生物信息学、系统生物学

第二章DNA and Chromosome

1、DNA的二级结构(Watson-Crick双螺旋)特点

DNA两条多核苷酸链反向平行盘绕而成的双螺旋结构:

○1为右手双螺旋,两条链以反平行方式排列;

○2两条由磷酸和脱氧核糖形成的主链骨架位于螺旋外侧,碱基位于内侧;

○3两条链间存在碱基互补,通过氢键连系,且A=T、G ≡ C(碱基互补原则);

○4碱基平面与螺旋纵轴接近垂直,糖环平面接近平行

○5螺旋的螺距为3.4nm,直径为2nm,相邻两个碱基对之间的垂直距离为0.34nm,每圈螺旋包含10个碱基对

○6螺旋结构中,围绕中心轴形成两个螺旋形的凹槽。(即有大小沟))

2、DNA变性和复性、Tm、退火概念

DNA变性:在某些理化因素作用下,DNA双链解开成两条单链的过程;

复性:变性DNA在适当条件下,分开的两条单链分子按照碱基互补原则重新恢复天然的双螺旋构象的现象;

Tm(熔链温度):DNA加热变性时,紫外吸收达到最大值的一半时的温度,即DNA分子内50%的双链结构被解开成单链分子时的温度)

退火:热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性,称为退火

3、真核生物基因组结构特点

○1真核基因组结构庞大哺乳类生物大于2X109bp

○2单顺反子

单顺反子:一个基因单独转录,一个基因一条mRNA,翻译成一条多肽链;

○3基因不连续性断裂基因(interrupted gene)、内含子(intron)、外显子(exon)

○4非编码区较多多于编码序列(9:1)

○5含有大量重复序列

4、假基因概念

基因组中存在的一段与正常基因非常相似但不能表达的DNA序列。

5、C值矛盾或C值悖论

C值的大小与生物的复杂度和进化的地位并不一致,称为C值矛盾或C值悖论

6、真核生物染色体的组成

蛋白质和DNA

7、Histone(组蛋白:染色体上的结构蛋白,包括H1、H2A、H2B、H3、H4)的特点

○1极端保守性

○2无组织特异性

鸟类、鱼类、两栖类红细胞中无H1,而有H5;精细胞的组蛋白为鱼精蛋白。

○3氨基酸分布的不对称性:N端碱性aa

○4可修饰作用:甲基化、乙酰化、磷酸化、糖基化

○5富含Lys的H5

8、核小体组成

组成染色体的基本结构单位,由组蛋白和200bp DNA组成的直径约10nm的球形小体

9、转座、转座子概念

转座:可移动因子介导的遗传物质的重排现象。

转座子:染色体、质粒或噬菌体上可以转移位置的遗传成分。

10、转座的机制

(1)转座的一般模式:转座子插到新的位点上,靶DNA上产生交错切口,所形成的单链

末端与转座子两端的反向重复序列相连,由DNA聚合酶填补缺口

已,DNA连接酶封闭切口。转座结束后,靶DNA发生一个整向重

复序列。

(2)复制型转座模式:转座子作为可移动的元件被复制,一个拷贝保留在供体原来的部位

不变;另一个拷贝则插入到受体的位点上,结果供体和受体都有一

个转座子的拷贝。

(3)非复制型转座:转座子从供体一个位点转移到受体新位点处,供体位点留下缺口,受到损伤(严重时致死)或宿主修复系统识别修复。

第三章DNA Replication and repair

1、DNA复制的主要特征

半保留复制、双向复制、半不连续复制

2、半保留复制概念

DNA生物合成时,母链DNA解开为两股单链,各自作为模板按碱基配对规律,合成与模板互补的子链。子代细胞的DNA,一股单链从亲代完整地接受过来,另一股单链则完全从新合成。两个子细胞的DNA都和亲代DNA碱基序列一致。这种复制方式称为半保留复制3、复制子概念

基因组中能独立进行复制的单位;每个复制子包含一个复制起点。原核生物的基因组只含一个复制起点,因此整个基因组为一个复制子;真核生物基因组含多个复制起点,称多复制子。

4、DNA 复制的几种方式

分为线性DNA双链的复制、环状DNA双链的复制

5、前导链(leading strand)、滞后链(lagging strand)、冈崎片段(Okazaki fragment)概念

前导链:以复制叉移动的方向为标准,一条模板链的走向是3’→5’,子代链复制时以5’→3’方向连续合成,这一条链称为前导链

滞后链:另一条模板链的走向是5’→3’,子代链通过不连续的5ˊ-3ˊ聚合而成,称为滞后链

冈崎片段:滞后链的合成是一段一段的。DNA复制时,由滞后链所形成的子代DNA短链

称为冈崎片段(是在DNA半不连续复制中产生的长度为1000-2000个碱基的短的DNA片段,能被连接形成一条完整的DNA链。)

6、DNA polymerases in E. coli 及其主要功能:P53

7、单链DNA结合蛋白(single stranded DNA binding protein, SSB)

在复制中维持模板处于单链状态并保护单链的完整。

8、常见的真核细胞DNA聚合酶及主要功能

DNA-pol α起始引发,有引物酶活性。

DNA-pol β高保真修复酶,碱基切除修复。

DNA-pol γ在线粒体DNA复制中起催化作用。

DNA-pol δ延长子链的主要酶,有解螺旋酶活性。

DNA-参与合成后随链,在复制过程中起校读、修复和填补缺口的作用。

9、拓扑异构酶作用机制

拓扑异构酶Ⅰ:切断DNA双链中一股链,使DNA解链旋转不致打结;适当时候封闭切口,DNA变为松弛状态。反应不需ATP。

拓扑异构酶Ⅱ:切断DNA分子两股链,断端通过切口旋转使超螺旋松弛。利用ATP供能,连接断端,DNA分子进入负超螺旋状态。

10、原核生物DNA复制过程

○1DNA双螺旋的解旋

首先在拓扑异构酶的作用下解开超螺旋,与解链酶共同作用解开双链,SSB(单链结合蛋白)结合在单链上稳定单链。

○2复制引发

引物酶先在DNA模板上合成一段RNA链,前导链以引物为模板合成新的DNA链,而后随链只有在复制叉进一步打开时,RNA引物才能与DNA单链结合。

○3复制延伸

前导链持续合成,而在后随链上DNA聚合酶3以5’到3’方向延伸RNA引物,直到遇见邻接引物的5号端形成冈崎片段。DNA聚合酶1切除引物后,由DNA连接酶连接相邻的冈崎片段成为一条完整的子代链。

○4复制终止

当复制叉前移遇到约22个碱基的重复性终止序列时,DNA双链不再解开,复制叉停止移动,其后双链解开,在DNA拓扑异构酶4的作用下复制叉解体,释放子链DNA。

11、在DNA 复制过程中,后随链是怎样合成的

后随链的合成分段进行,形成中间产物冈崎片段,再通过共价键连接形成一条完整的新DNA 链。共分为4个步骤:

○1首先引物酶合成约10个核苷酸大小的新引物,两个引物间的距离在细菌中为1000~2000个核苷酸,在真核细胞中为100~400个核苷酸;

○2DNA聚合酶Ⅲ以5’→3’方向延伸该引物,直到遇见邻接引物的5’端,这个新合成的DNA片段就是冈崎片段;

○3在E.coli中,DNA聚合酶Ⅰ具有3’→5’外切酶活性,被用来去除引物;

○4DNA连接酶连接相邻的冈崎片段使之成为一条完整的子代链。

12、与原核生物相比真核生物DNA复制的特点

(1)真核生物有多个复制起始位点,而原核只有一个起始位点。

(2)真核生物复制一旦启动,在完成本次复制前,不能在再启动新的复制,而

原核复制起始位点可以连续开始新的复制,特别是快速繁殖的细胞。

(3)真核生物和原核生物的复制调控不同。

(4)原核的DNA聚合酶III复制时形成二聚体复合物,而真核的聚合酶保持分离状态。(5)真核生物的聚合酶没有5'-3'外切酶活性,需要一种叫FEN1的蛋白切除5' 端引物,原核的DNA聚合酶I具有5'-3'外切酶活性。

13、端粒(telomere)概念

端粒是真核生物线性基因组DNA末端的一种特殊结构,它是一段DNA序列和蛋白质形成的复合体。其DNA序列相当保守,一般有多个短寡核苷酸串联在一起构成。人类的端粒DNA长5-15千碱基对。它具有保护线性DNA的完整复制、保护染色体末端和决定细胞的寿命等功能。

14、逆转录概念

以RNA为模板, 按照RNA中的核苷酸顺序合成DNA的过程,称为反转录。该过程由逆转录酶催化进行。亦称反转录。

15、几种修复机制

○1直接修复:光复活、烷基转移酶去烷基作用;○2切除修复:碱基切除修复、核苷酸切除修复

○3错配修复;○4重组修复;○5SOS修复。

第四章转录

1、模板链与编码链、启动子概念

模板链:DNA双链中按碱基配对规律能指引转录生成RNA的一股单链,称为模板链;

编码链:DNA双链中与模板链相对的另一股单链是编码链;

启动子:RNA聚合酶特异性识别和结合的DNA序列。启动子是基因(gene)的一个组成部分,控制基因表达(转录)的起始时间和表达的程度。

2、σ70 识别的启动子

E.coli中σ70 识别的启动子包含2个保守的核心序列:

○1-10 区(TATA box, Pribnow box)

中心位于转录起始位点上游10bp处,一致序列为T80A95T45A60A50T96, 所以称-10 区。(右下角的数字表示该碱基在这个位置出现的百分率)

○2-35 区(Sextama box)

中心位于转录起始位点上游35bp处,一致序列为T82T84G78A65C54A45。

3、转录的基本过程

转录是从DNA分子的特定部位开始的,这个部位也是RNA聚合酶全酶结合的部信这就是启动子。在原核生物中,当RNA聚合酶的δ亚基发现其识别位点时,全酶就与启动子的-35区序列结合形成一个封闭的启动子复合物。RNA链的延长靠核心酶的催化,在起始复合物上第一个GTP的核糖3’-OH上与DNA模板能配对的第二个三磷酸核苷起反应形成磷酸二酯键。聚合进去的核苷酸又有核糖3’-OH游离,这样就可按模板DNA的指引,一个接一个地延长下去。转录是在DNA模板的终止信号处停止,从而完成RNA的转录过程。(模版识

别、转录起始、转录延伸、转录终止)

4、终止子(terminator)和终止因子(termination factor) 概念

终止子:提供转录终止信号的DNA序列。

终止因子:协助RNA聚合酶识别终止信号的辅助因子(蛋白质)。

5、终止子的2个类型

强终止子(内部终止子)——不依赖于ρ因子

弱终止子——依赖于ρ因子

6、真核生物中的三种RNA聚合酶存在部位及作用

RNA聚合酶Ⅰ核仁产物为45S rRNA

RNA聚合酶Ⅱ核质产物为hnRNA

RNA聚合酶Ⅲ核质产物为tRNA

7、真核生物mRNA 加工

5’加帽;3’加poly A尾巴;拼接;编辑;修饰

8、5' m(7)GpppN、真核生物mRNA加尾信号

5' m(7)GpppN:真核细胞成熟mRNA的5′末端均有一个特殊的结构,即m7Gpp-pmnNp,称为“帽”。

真核生物mRNA加尾信号:真核生物mRNA的3’端都有一段多聚A尾巴(poly A tail),这种尾巴不由基因编码,而是在转录后加到mRNA上的。加尾过程受位于终止密码3’端的加尾信号序列所控制

9、外显子&内含子概念

不编码的插入序列,称内含子;编码的序列称外显子

10、断裂基因概念

大多数真核生物基因的核苷酸顺序不全部反映到蛋白质一级结构上。基因的编码序列被不编码的插入序列分割成几段,这样的基因称为断裂基因。

11、RNA编辑概念

mRNA分子由于核苷酸的缺失、插入或置换导致序列发生了不同于模板DNA的变化,这种

现象称为RNA编辑

12、原核和真核细胞的mRNA 的异同

同:mRNA在所有细胞内执行相同的功能,即通过密码三联子翻译生成蛋白质

异:

(1)真核生物5′-端有帽子结构,大部分成熟的mRNA还同时具有3′-多聚A尾巴,原核一般没有。

(2)原核的mRNA可以编码几个多肽,真核只能编码一个,原核生物以多顺反子的形式存在,真核以单顺反子形式存在。

(3)原核生物以AUG作为起始密码,有时以GUG,UUG作为起始密码,真核几乎永远以AUG作为起始密码。

(4)原核生物mRNA半衰期短,真核生物的mRNA半衰期长。

第五章翻译

1、密码子概念、特点

密码子:在mRNA的开放阅读框架区,以每3个相邻的核苷酸为一组,代表一种氨基酸(或其他信息),这种三联体形式的核苷酸序列称为密码子。

特点:方向性,连续性,简并性,摆动性,通用性

2、起始密码子和终止密码子

起始密码子:AUG

终止密码子:UAA、UAG、UGA

3、S-D序列

在各种mRNA起始AUG上游约8~13核苷酸部位,存在一段由4~9个核苷酸组成的一致序列,富含嘌呤碱基,如-AGGAGG-,称为Shine-Dalgarno序列(S-D序列),又称核糖体结合位点

4、tRNA的二级构象特点

带有4个恒定臂的三叶草型。

受体臂:由碱基配对的干组成,其端部有不配对的序列,其2'或3’羟基能与氨基酸相连;

TΨC臂:因其含有TΨC三联体而得名(Ψ代表假尿嘧啶,一种修饰碱基);

反密码子臂:在其环中央含有反密码子三联体;

D臂:因其含有二轻尿嘧啶而得名。

5、三种RNA 在蛋白质生物合成中的作用

rRNA: 核糖体RNA,与蛋白质共同构成核糖体

mRNA:信使RNA,构成翻译的模板,含密码子

tRNA:运输RNA,与mRNA结合部位为反密码子,用于运输氨基酸,并且每一个tRNA

对应一种氨基酸,而每个氨基酸可能对应不同的tRNA。

遗传密码子主要是能够使氨基酸按照一定的顺序排列,脱水缩合形成多肽,最终形成蛋白质。

6、蛋白质合成的过程

氨基酸的活化与转运

肽链合成的起始

肽链的延伸肽链合成——“核糖体循环”

肽链合成的终止

蛋白质前体的加工

蛋白质的折叠

7、原核细胞和真核细胞在合成蛋白质的起始有什么区别(起始因子、起始氨酰-tRNA、核糖体不同等)

起始因子不同:

起始氨酰-tRNA不同:真核生物的起始氨基酰-tRNA为Met-tRNAiMet,原核生物的起始氨

基酰-tRNA为fMet-tRNAfMet

核糖体不同:原核生物的mRNA与核糖体小亚基的结合先于起始tRNA与小亚基的结合,

而真核生物的起始tRNA与小亚基的结合先于mRNA与核糖体小亚基的结合。

8、肽链延伸过程

进位,成肽,转位,脱落

9、蛋白质合成后的加工修饰有哪些内容

N-端Met或fMet的切除,二硫键的形成,特定氨基酸的修饰,切除新生肽链中的非功能片段

10、蛋白转运的2种机制

翻译中转运:蛋白质合成与跨膜运送是同时进行的。

翻译后转运:蛋白质在核糖体上合成后释放到胞质中。当它们跨膜运送时,合成过程已完成,故称为“转译后运送”。

第六章原核生物基因表达的调控

1、什么是操纵子?简述乳糖操纵子在无乳糖、添加乳糖、葡萄糖和乳糖都存在时的工作原理。

操纵子:在原核生物中受同一蛋白质调控的一个转录功能单位,由启动子、操纵基因和结构基因组成。

在没有乳糖存在时,乳糖操纵子处于阻遏状态;

当有乳糖存在时,乳糖操纵子即可被诱导。

有葡萄糖和乳糖都存在时,细菌优先选择葡萄糖供能;葡萄糖耗尽后才开始利用培养基中的乳糖

2、cAMP—CAP的正调控

葡萄糖存在时

[cAMP]降低,因而[cAMP?CAP]降低, 抑制操纵子转录,只能利用葡萄糖;

无葡萄糖而只有乳糖时

[cAMP]高,cAMP?CAP与操纵子的CAP位点,激活转录,细菌利用乳糖。

3、弱化子工作的原理及其生物学意义

弱化子是指原核生物操纵子中能显著减弱甚至终止转录的一段核苷酸序列,该区域能形成不

同的二级结构,利用原核生物转录与翻译的偶联机制对转录进行调节。可以理解成“位于操纵子结构基因上游前导区的终止子”。

弱化作用的生物学意义:

氨基酸合成中的反馈抑制。经济的原则。

细菌利用阻遏和弱化双重机制感受细胞内外Trp的变化,精确调控Trp的合成。反应灵敏。单独的弱化作用的效率很高,其他氨基酸操纵子如His、Leu,没有阻遏蛋白,全靠弱化作用调节。效率高。

提供了一条不依靠调节蛋白,只依赖RNA结构的基因表达调控途径。

第七章真核生物基因表达调控

1、管家基因、顺式作用元件、反式作用因子

管家基因:其表达产物为细胞生命活动持续需要的、必不可少,如tRNA,rRNA基因,催化能量代谢的各种酶系,三羧酸循环中各种酶系等。

顺式作用元件:影响自身基因表达活性的非编码DNA序列,包括启动子、增强子和沉默子。由于它们与特定的基因连锁在一起,因此称为顺式作用元件。

反式作用因子:是指能直接或间接与顺式作用元件结合、参与转录调控的蛋白质。由于它们反式地激活或抑制另一基因的转录,故称反式作用因子。

2、DNA结合结构域

螺旋-转折-螺旋;锌指结构;碱性-亮氨酸拉链;碱性-螺旋-环-螺旋。

3、原核生物与真核生物基因表达在哪个层次的调控最关键?基因表达调控的生物学意义是什么?

转录

基因表达调控的生物学意义:维持个体生长、发育与分化;适应环境。

第八章基因工程技术

1、限制性核酸内切酶

识别DNA特异序列,并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。是细菌内存在的保护性酶。分为I、II、III三类。

2、基因载体常用的载体

载体是指用来携带外源目的基因、实现外源DNA克隆或/和蛋白质表达的DNA分子。

能使插入的外源DNA序列转录并翻译成多肽链的基因载体又称表达载体。

常用的载体:质粒、噬菌体DNA、病毒DNA

3、PCR的反应体系、原理及用途

模板1-100ng

引物1(10uM)0.1-0.5uM

引物2(10uM)0.1-0.5uM

dNTP(10mM) 1mM

聚合酶5-10U

聚合酶缓冲液(10*) 10倍稀释

水补足所需体积

基本原理是在模板、引物、4种dNTP和赖热DNA聚合酶存在的条件下,特异扩增位于两段已知序列之间的DNA区段的酶促合成反应。每一循环包括高温变性、低温退火、中温延伸三步反应。每一循环的产物作为下一个循环的模板,如此循环30次,介于两个引物之间的新生DNA片段理论上达到230拷贝(约为109个分子)。PCR技术的特异性取决于引物

与模板结合的特异性。

细胞生物学试题整理

细胞生物学与细胞工程试题 一:填空题(共40小题,每小题分,共20分) 1:现在生物学“三大基石”是:_,__。 2:细胞的物质组成中,_,_,_,_四种。 3:膜脂主要包括:_,_,_三种类型。 4:膜蛋白的分子流动主要有_扩散和_扩散两种运动方式。 5:细菌视紫红质蛋白结构的中部有几个能够吸光的_基因,又称发色基因。6:受体是位于膜上的能够石碑和选择性结合某种配体的_。 7:信号肽一般位于新合成肽链的_端,有的可位于中部。 8:次级溶酶体是正在进行或完成消化作用的溶酶体,可分为_,_,及_。 9狭义的细胞骨架(指细胞质骨架)包括_,_,_,_及_。 10:高等动物中,根据等电点分为3类:α肌动蛋白分布于_;β和γ肌动蛋白分布于所有的_和_。 11:染色质的化学组成_,_,_,少量_。 12:随体是指位于染色体末端的球形染色体节段,通过_与_相连。 13:弹性蛋白的结构肽链可分为两个区域:富含_,_,_区段。 14:细胞周期可分为G1期,S期,G2期,G2期主要合成_,_,_等。 二:名词解释(每个1分,共20小题) 1:支原体 2:组成型胞吐作用 3:多肽核糖体 4:信号斑 5:溶酶体 6:微管 7:染色单体 8:细胞表面 9:锚定连接 10:信号分子 11:荧光漂白技术

12:离子载体 13:受体 14:细胞凋亡 15:全能性 16:常染色质 17:联会复合体 18组织干细胞 19:分子伴侣 20:E位点 三:选择题(每题一分,共20小题) 1:细胞中含有DNA的细胞器有() A:线粒体B叶绿体C细胞核D质粒 2:细细胞核主要由()组成 A:核纤层与核骨架B:核小体C:染色质和核仁 3:在内质网上合成的蛋白质主要有() A:需要与其他细胞组分严格分开的蛋白B:膜蛋白C:分泌性蛋白 D:需要进行修饰的pro 4:细胞内进行蛋白修饰和分选的细胞器有() A:线粒体 B:叶绿体 C:内质网 D:高尔基体5微体中含有() A:氧化酶 B:酸性磷酸酶 C:琥珀酸脱氢酶 D:过氧化氢酶6:各种水解酶之所以能够选择性的进入溶酶体是因为它们具有()A:M6P标志 B:导肽 C:信号肽 D:特殊氨基序列7:溶酶体的功能有() A:细胞内消化 B:细胞自溶 C:细胞防御 D:自体吞噬8:线粒体内膜的标志酶是() A:苹果酸脱氢酶 B:细胞色素 C:氧化酶 D:单胺氧化酶9:染色质由以下成分构成() A:组蛋白 B:非组蛋白 C:DNA D:少量RNA

《分子生物学大(综合)实验》课程介绍(精)

《分子生物学大(综合)实验》课程介绍 课程代码(学校统一编制) 课程名称分子生物学大(综合)实验 英文名称MolecularBiologyBigExperiment 学分:3修读期:第七学期 授课对象:生物科学、生物技术 课程主任:姓名、职称、学位 关洪斌,副教授,博士 课程简介 21世记是生命科学的世记,而分子生物学是带动生命科学的前沿科学。分子生物学是在生物大分子水平上研究细胞的结构、功能及调控的学科,在现代生物学学科发展中的重要性与不容置疑的带头作用是众所周知的。许多重大的理论和技术问题都将依赖于分子生物学的突破。随着分子生物学研究工作的不断深入,相关实验技术方法和技术日新月异的发展。为了适应分子生物学研究工作日益发展的需要,满足培养从事现代生物学研究,尤其是进行分子生物学研究的人才的需要,特设置分子生物学大(综合)实验课程。本课程的教学目标和基本要求是使学习者基本掌握分子生物学实验技术的基本原理和方法,教学内容包括TRIZOL试剂盒提取RNA、RNA质量的检测、RT-PCR和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测cDNA。通过本实验可提高学生的动手能力和创造性思维能力,较好地掌握分子生物学实验操作和技能,为今后独立进行科研工作打下坚实基础。 实践教学环节(如果有) 实验内容包括TRIZOL试剂盒提取RNA、RNA质量的检测、RT-PCR和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测cDNA。 课程考核 实验报告 指定教材 自编 参考书目 1.分子生物学实验指导高等教育出版社施普林格出版社,1999 2.彭秀玲,袁汉英等.基因工程实验技术.湖南科学技术出版社,1997 3.吴乃虎.基因工程原理(上下册).科学出版社,1998 4.F.奥斯伯等著:颜子颖,王海林译.分子克隆实验指南(第二版).科学出版社,1998 5.J.萨姆布鲁克等著:金冬雁,黎孟枫等译.精编分子生物学实验指南.科学出版社,1993

(精选)分子生物学期末考试题目及答案

分子生物学复习提纲 一.名词解释 (1)Ori :原核生物基因质粒的复制起始位点,是四个高度保守的19bp组成的正向重复序列,只有ori能被宿主细胞复制蛋白质识别的质粒才能在该种细胞中复制。 ARS:自主复制序列,是真核生物DNA复制的起点,包括数个复制起始必须的保守区。不同的ARS序列的共同特征是一个被称为A区的11bp的保守序列。(2)Promoter:启动子,与基因表达启动有关的顺式作用元件,是结构基因的重要成分,它是位于转录起始位点5’端上游区大约100~200bp以内的具有独立功能的DNA序列,能活化RNA 聚合酶,使之与模板DNA准确地相结合并具有转录起始的特异性。 (3)r-independent termination不依赖r因子的终止,指在不依赖r因子的终止反应中,没有任何其他因子的参与,核心酶也能在某些位点终止转录。(强终止子) (4)SD sequence:SD序列(核糖体小亚基识别位点),存在于原核生物起始密码AUG上游7~12个核苷酸处的一种4~7个核苷酸的保守片段,它与16SrRNA3’端反向互补,所以可以将mRNA的AUG起始密码子置于核糖体的适当位置以便起始翻译作用。 Kozak sequence:存在于真核生物mRNA的一段序列,核糖体能够识别mRNA 上的这段序列,并把它作为翻译起始位点。 (5)Operator:操纵基因,与一个或者一组结构基因相邻近,并且能够与一些特异的阻遏蛋白相互作用,从而控制邻近的结构基因表达的基因。 Operon:操纵子,是指原核生物中由一个或多个相关基因以及转录翻译调控元件组成的基因表达单元。包括操纵基因、结构基因、启动基因。 (6)Enhancer:增强子,能强化转录起始的序列的为增强子或强化子Silencer:沉默子,可降低基因启动子转录活性的一段DNA顺式元件。与增强子作用相反。 (7)cis-acting element :顺式作用元件,存在于基因旁侧序列中能影响基因表达的序列,包括启动子、增强子、调控序列和可诱导元件,本身不编码任何蛋白质,仅仅提供一个作用位点,与反式作用因子相互作用参与基因表达调控。 trans-acting factor:反式作用因子,是指直接或间接地识别或结合在各类顺式作用元件核心序列上参与调控靶基因转录效率的蛋白质。具有三个功能结构域,即DNA结合域、转录结合域、结合其他结合蛋白的结构域。 (8)Open reading frame (ORF):开放式阅读框架,是指一组连续的含有三联密码子的能够被翻译成为多肽链的DNA序列。它由起始密码子开始,到终止密码子结束。 (9)Gene:基因,产生一条多肽链或功能RNA所需的全部核苷酸序列。(能转录且具有生物学功能的DNA/RNA的序列。)

细胞生物学第四版试题合集

第二章 1、如何理解“细胞是生命活动的基本单位”这一概念? 1)一切有机体都有细胞构成,细胞是构成有机体的基本单位 2)细胞具有独立的、有序的自控代谢体系,细胞是代谢与功能的基本单位 3)细胞是有机体生长与发育的基础 4)细胞是遗传的基本单位,细胞具有遗传的全能性 5)没有细胞就没有完整的生命 6)细胞是多层次非线性的复杂结构体系 7)细胞是物质(结构)、能量与信息过程精巧结合的综合体 8)细胞是高度有序的,具有自装配与自组织能力的体系 2、为什么说支原体可能是最小最简单的细胞存在形式? 一个细胞生存与增殖必须具备的结构装置与技能是:细胞膜、DNA与RNA、一定数量的核糖体以及催化主要酶促反应所需的酶,可以推算出一个细胞所需的最小体积的最小极限直径为140nm~200nm,而现在发现的最小的支原体的直径已经接近这个极限,因此比支原体更小更简单的结构似乎不能满足生命活动的需要。 3、怎样理解“病毒是非细胞形态的生命体”?试比较病毒与细胞的区别并讨论其相互的关系。 病毒是由一个核酸分子(DNA或RNA)芯和蛋白质外壳构成的,是非细胞形态的生命体,是最小、最简单的有机体。仅由一个有感染性的RNA构成的病毒,称为类病毒;仅由感染性的蛋白质构成的病毒称为朊病毒。病毒具备了复制与遗传生命活动的最基本的特征,但不具备细胞的形态结构,是不完全的生命体;病毒的主要生命活动必须在细胞内才能表现,在宿主细胞内复制增殖;病毒自身没有独立的代谢与能量转化系统,必须利用宿主细胞结构、原料、能量与酶系统进行增殖,是彻底的寄生物。因此病毒不是细胞,只是具有部分生命特征的感染物。 病毒与细胞的区别:(1)病毒很小,结构极其简单;(2)遗传载体的多样性(3)彻底的寄生性(4)病毒以复制和装配的方式增殖 4、试从进化的角度比较原核细胞。古核细胞及真核细胞的异同 第四章 1.何谓内在膜蛋白? 内在膜蛋白以什么方式与膜脂相结合? 内在膜蛋白是膜蛋白中与膜结合比较紧密的一种蛋白,只有用去垢剂是膜崩解后才可分离出来。 结合方式:膜蛋白的跨膜结构域与脂双层分子的疏水核心的相互作用(疏水作用);跨膜结构域两端携带正电荷的氨基酸残基与磷脂分子带负电的极性头部形成离子键,或带负电的氨基酸残基通过钙镁等阳离子与带负电的磷脂极性头部相互作用(静电作用):某些膜蛋白通过自身在胞质一侧的半胱氨酸残基共价结合到脂肪酸分子上,后者插入膜双分子层中进一步加强膜蛋白与脂双层的结合力 2.生物膜的基本结构特征是什么?这些特征与它的生理功能有什么联系? 膜的流动性:生物膜的基本特征之一,细胞进行生命活动的必要条件。 1)膜脂的流动性主要由脂分子本身的性质决定的,脂肪酸链越短,不饱和程度越高,膜脂的流动性越大。温度对膜脂的运动有明显的影响。在细菌和动物细胞中常通过增加 不饱和脂肪酸的含量来调节膜脂的相变温度以维持膜脂的流动性。在动物细胞中,胆固醇对膜的流动性起重要的双向调节作用。 膜蛋白的流动:荧光抗体免疫标记实验;成斑现象(patching)或成帽现象(capping) 2)膜的流动性受多种因素影响:细胞骨架不但影响膜蛋白的运动,也影响其周围的膜脂的流动。膜蛋白与膜分子的相互作用也是影响膜流动性的重要因素。 3)膜的流动性与生命活动关系:信息传递;各种生化反应;发育不同时期膜的流动性不同 3.细胞表面有哪几种常见的特化结构? 细胞表面特化结构主要包括:膜骨架、鞭毛、纤毛、变形足和微绒毛,都是细胞膜与膜内的细胞骨架纤维形成的复合结构,分别与维持细胞的形态、细胞的运动、细胞与环境的物质交换等功能有关。 第五章 1.比较载体蛋白与通道蛋白的异同 相同点:化学本质均为蛋白质、分布均在细胞的膜结构中,都有控制特定物质跨膜运输的功能。 不同点:载体蛋白:与特异的溶质结合后,通过自身构象的改变以实现物质的跨膜运输。 通道蛋白:①通过形成亲水性通道实现对特异溶质的跨膜转运 ②具有极高的转运效率 ③没有饱和值 ④离子通道是门控的(其活性由通道开或关两种构象调节) 2.比较P-型离子泵、V-型质子泵、F-型质子泵和ABC超家族的异同。 (1)相同点:①都是跨膜转运蛋白②转运过程伴随能量流动③都介导主动运输过程④对转运底物具有特异性⑤都是ATP驱动泵 (2)不同点:①P型泵转运过程形成磷酸化中间体,V型,F型,ABC超家族则无 ②P型,V型泵,ABC超家族都是逆电化学梯度消耗ATP运输底物,F型泵则是顺电化学梯度合成ATP ③P型泵主要负责Na+,K+,H+,CA2+跨膜梯度的形成和维持,V型,F型只负责H+的转运,ABC超家族转运多种物质 3.说明钠钾泵的工作原理及其生物学意义。 工作原理:在细胞内侧α亚基与钠离子相结合促进ATP水解,α亚基上的天冬氨酸残基引起α亚基的构象发生变化,将钠离子泵出细胞外,同时将细胞外的钾离子与α亚基的另一个位点结合,使其去磷酸化,α亚基构象再度发生变化将钾离子泵进细胞,完成整个循环。钠离子依赖的磷酸化和钾离子依赖的去磷酸化引起构象变化有序交替发生。每一个循环消耗一个ATP分子泵出三个钠离子和泵进两个钾离子。

1998-2016年中国科学技术大学841细胞生物学考研真题及答案解析 汇编

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分子生物学》实验17课时

(本科)生物科学专业 分子生物学实验 2013年制订 课程代码:学分:1 总学时:17 先修课程:《生物化学》,《有机化学》等。 开课对象:生物科学专业(本科) 一、课程的性质、目的与任务 分子生物学已成为生命科学的基础学科之一,其基本理论和实验技术已渗透到生物学的各个领域并促进了一批新学科的兴起和发展。目前,以分子生物学为基础的基因克隆重组技术已成为现代生物技术的核心。为了适应分子生物学技术的发展,落实培养创新人才的目标,特开展本实验课程,以培养学生的动手能力,加强学生对分子生物学实验技术的理解。除了增进对分子生物学内容的理解,更重要的是培养学生的实验技能和创新思维设计。通过实验原理的讲解和实验操作,使学生初步了解和熟悉现代分子生物学实验的基本原理、操作机能和实际应用,提高学生的创新思维和独立分析问题解决问题的能力。 二、实验内容与学时分配

实验一实验器材清洁灭菌与试剂配制 一、学习分子生物学实验室规则与注意事项 二、熟悉相关仪器的使用及操作规程 超净工作台、PCR仪、电泳仪及电泳槽、凝胶成像系统、恒温水浴锅、恒温培养箱、摇床、冷冻离心机、涡旋振荡器、高压蒸汽灭菌锅、微波炉、重蒸水装置、移液枪 三、器材的清洁与包装消毒(每组一份) 1.试管清洗与包装灭菌:用清洁液刷洗后自来水冲洗,再用蒸馏水冲洗两遍,晾干或烘干使用。取棉花与纱布,制成棉塞,塞好试管口。3只一组用报纸包裹、细绳扎紧,高温蒸汽灭菌。 2.培养皿清洗与包装灭菌:将培养皿清洗干净,晾干或烘干,盖好,4套一组用报纸包裹,灭菌。 3.离心管的包装与灭菌:将100ml烧杯清洗干净,晾干或烘干。取1.5ml及10ml 离心管装入烧杯中,包口灭菌。 4.枪头的灭菌:将10ul、200 ul和1000 ul枪头装入配套的枪头盒,包好灭菌。 5.清洗250ml、100ml和蓝口瓶盖盖。装好灭菌。 6.灭菌完毕后取出烘干或晾干,保存备用。 四、试剂的配制与灭菌: 1. LB培养基:酵母提取物 5g;蛋白胨 10g;NaCl 5g;琼脂 15~20g;定容至1000mL(NaOH调pH至7.0,121℃、20min高压灭菌)。有时需在培养基中添加抗生素,琼脂凝固点为40℃,所以添加抗生素最好在50~55℃。 2.电泳缓冲液:50×TAE缓冲液的配制:2 mol/L Tris-乙酸,0.05 mol/L EDTA (pH 8.0) 配制1000 ml Tris 242 g 冰乙酸 57.1 ml 0.5 mol/L EDTA 100 ml 加入600 ml去离子水后搅拌溶解,将溶液定容至1 L后。高温高压灭菌,室温保存。 1×TAE缓冲液的配制:

期末考试分子生物学精彩试题

选择题 1.证明DNA 是遗传物质的两个关键性实验是:肺炎球菌在老鼠体内的毒性和T2 噬菌体感染大肠杆菌。这两个实验中主要的论点证据是(C )。 A.从被感染的生物体内重新分离得到DNA 作为疾病的致病剂 B.DNA 突变导致毒性丧失 C.生物体吸收的外源DNA(而并非蛋白质)改变了其遗传潜能 D.DNA 是不能在生物体间转移的,因此它一定是一种非常保守的分子 E.真核心生物、原核生物、病毒的DNA 能相互混合并彼此替代 2.1953 年Watson 和Crick 提出(A )。 A.多核苷酸DNA 链通过氢键连接成一个双螺旋 B.DNA 的复制是半保留的,常常形成亲本-子代双螺旋杂合链 C.三个连续的核苷酸代表一个遗传密码 D.遗传物质通常是DNA 而非RNA E.分离到回复突变体证明这一突变并非是一个缺失突变 3.DNA 双螺旋的解链或变性打断了互补碱基间的氢键,并因此改变了它们的光吸收特性。以下哪些是对DNA 的解链温度的正确描述?(C,D ) A.哺乳动物DNA 约为45℃,因此发烧时体温高于42℃是十分危险的 B.依赖于A-T 含量,因为A-T 含量越高则双链分开所需要的能量越少 C.是双链DNA 中两条单链分开过程中温度变化范围的中间值 D.可通过碱基在260nm 的特征吸收峰的改变来确定 E.就是单链发生断裂(磷酸二酯键断裂)时的温度 4.Watson和Crick提出的经典DNA双螺旋结构属于(B) A.A型B.B型C.Z型 5.多种密码子编码一个氨基酸的现象,称为密码子的(B) A.连续性B.简并性C.通用性D.摆动性 6.真核基因经常被断开(B,D,E )。 A.反映了真核生物的mRNA 是多顺反子 B.因为编码序列外显子被非编码序列内含子所分隔 C.因为真核生物的DNA 为线性而且被分开在各个染色体上,所以同一个基因的不同部分可能分布于不同的染色体上 D. 表明初始转录产物必须被加工后才可被翻译 E.表明真核基因可能有多种表达产物,因为它有可能在mRNA 加工的过程中采用不同的外显子重组方式 7.选出下列所有正确的叙述。(A,C ) A.外显子以相同顺序存在于基因组和cDNA 中 B.内含子经常可以被翻译 C.人体内所有的细胞具有相同的一套基因 D.人体内所有的细胞表达相同的一套基因 E.人体内所有的细胞以相同的方式剪接每个基因的mRNA 8.下列哪些基因以典型的串联形式存在于真核生物 基因组?(B,C ) A.珠蛋白基因B.组蛋白基因 C.rRNA 基因D.肌动蛋白基因 9.细胞器基因组( A )。

1-7细胞生物学试题库

第一章绪论 第二章细胞的统一性与多样性 一、填空题 1 ? 细胞是构成有机体的基本单位,是代谢与功能的基本单位,是生长与发育的基本单位,是遗传的基本 单 位。 2. 目前发现的最小最简单的细胞是支原体, 它所具有的细胞膜、遗传物质( DNA 与 RNA )、 核糖体、酶 是一个细胞生存与增殖所必备的结构装置。 3 ? 按核酸类型病毒分为 ___________________ 、 ______________________ 。 4?与真核细胞相比,原核细胞在 DNA 复制、转录与翻译上具有时空连续性的特点。 5. 真核细胞的三大功能体系是 ______________ 系 统、 _________________ 系统和 _______ ___________________ 系 统。 6. ______ 年英国学者 ____________ 第 一次观察到细胞并命名为 Cell 。 7. 细胞基本共性是 _________ 、 __________________ 、 ________________ 、细胞分裂以 _________________ 的 方式增殖。 8. 细胞生物学是研究细胞基本 ___________ 规律的科学,是在 _______________ 、 ________________ 和 三个不同的层次上,以研究细胞的 ______________ 、 _____________ 、 ___________ 和 ______________ 等 为主要内容的一门科学。 、选择题 C.是否大于 1 卩 m D.同源蛋白质间氨基酸序列的差C 别) 8. 下列那一项不是原核生物所具有的特征?( D.运动 A ?固氮作用 B.光合作用 C. 有性繁殖 9. 下列关于病毒B 的. 所描有病毒必须在细胞内寄生 细胞生物学试题 库 1 ?下列属于真核细胞的有( B ) o A. 蓝藻 B.变形虫 C.细菌 D.支原体 2 ? 以下哪些细胞 器是由双层膜构成的 A.质膜、内质网、高尔基体 C.细胞核、线粒体、叶绿体 3. 原核细胞不具备下列那种核结糖构体: ? ( C ) B.核糖体、 D.溶酶体、 ( A ) C 细胞壁 植物细胞所特有的结构: 高尔基体 C 动物细胞所特有的结构: 核仁 C 中 心体 鞭毛、 中心粒 胞内体 A 线粒体 B 4. 与动物细胞相比, A 内质网 B 5. A 与内植质物网细胞相比, B 6. 下列哪一种不属于古细菌?( D ) 线粒体 A ?产甲烷菌 B. 嗜盐菌 C.嗜热菌 7. 下列哪些可作为区分原核细胞与真核细胞的标准?( A. 是否具有质膜 B.是否具有细胞核 核夕卜 DNA 液泡 溶酶体 D.蓝细菌 B )

细胞生物学考研题库【名校考研真题+章节题库】蛋白质分选与膜泡运输【圣才出品】

第11章蛋白质分选与膜泡运输 11.1名校考研真题 一、选择题 1.蛋白酶在高尔基体内水解的底物不包括()。[南开大学2011研] A.含不同信号序列的蛋白质 B.没有生物活性的蛋白原 C.含多个重复序列的多肽 D.被泛素化的蛋白质 【答案】D 【解析】很多多肽激素和神经多肽转运到高尔基体的TGN或者TGN形成的分泌小泡时,可以经过特异的水解最终形成有活性的多肽,主要包括:①没有生物活性的蛋白原;②含有多个氨基酸序列的前体,经过加工后形成有活性的多肽;③一个蛋白质分子的前体中含有不同的信号序列,最后加工成不同的产物。 2.内吞泡的形成需要()。[中山大学2007研] A.细胞质膜中有受体,并且细胞外基质中存在与膜受体特异结合的配体 B.衔接蛋白(adaptor protein) C.网格蛋白(clathrin) D.发动蛋白(dynamin) E.上述条件都存在 【答案】E

二、填空题 1.将核输入信号与核输出信号序列重组到同一个基因中,其表达的蛋白质在细胞内将会定位到______。[中山大学2017研] 【答案】细胞质 2.在细胞分泌活动中形成的组成型分泌泡的包被是______蛋白,调节型分泌泡的包被是网格蛋白。[中山大学2017研] 【答案】接合素 3.某些特殊的氨基酸序列可以作为分选标记影响蛋白质的定位,C端具有序列的蛋白质通常驻留在内质网腔,而带有______序列的蛋白质则会被输送到______。[南京师范大学2008研] 【答案】RGD;细胞外 【解析】含有RGD序列的蛋白多是细胞外基质的主要成分,如纤连蛋白、层粘连蛋白等,其能与膜上整联蛋白结合,介导细胞与胞外基质的黏着。 4.指导分泌性蛋白在粗面内质网上合成的决定因素有:______、______和______。[中科院-中科大2006研] 【答案】信号肽;信号识别颗粒;信号识别颗粒受体(停泊蛋白) 5.细胞分泌化学信号的作用方式可分为:________、________、________;通过化学突触传递神经信号。[郑州大学2006研] 【答案】自分泌;内分泌;旁分泌

细胞生物学题库 含答案

《细胞生物学》习题及解答 第一章绪论 本章要点:本章重点阐述细胞生物学的形成、发展及目前的现状和前景展望。要求重点掌握细胞生物学研究的主要内容和当前的研究热点或重点研究领域,重点掌握细胞生物学形成与发展过程中的主要重大事件及代表人物,了解细胞生物学发展过程的不同阶段及其特点。 二、填空题 1、细胞生物学是研究细胞基本规律的科学,是在、和三个不同层次上,以研究细胞的、、、和等为主要内容的一门科学。1、生命活动,显微水平,亚显微水平,分子水平,细胞结构与功能,细胞增殖、分化、衰老与凋亡,细胞信号传递,真核细胞基因表达与调控,细胞起源与进化。 2、年英国学者第一次观察到细胞并命名为cell;后来第一次真正观察到活细胞有机体的科学家是。2、1665,Robert Hooke,Leeuwen Hoek。 3、1838—1839年,和共同提出:一切植物、动物都是由细胞组成的,细胞是一切动植物的。3、Schleiden、Schwann,基本单位。 4、19世纪自然科学的三大发现是、和。4、细胞学说,能量转化与守恒定律,达尔文的进化论。 5、1858年德国病理学家魏尔肖提出的观点,通常被认为是对细胞学说的一个重要补充。5、细胞来自细胞。 6、人们通常将1838—1839年和确立的;1859年确立的;1866年确立的,称为现代生物学的三大基石。

6、Schleiden、Schwann,细胞学说,达尔文,进化论,孟德尔,遗传学。 7、细胞生物学的发展历史大致可分为、、、和分子细胞生物学几个时期。7、细胞的发现,细胞学说的建立,细胞学经典时期,实验细胞学时期。 三、选择题 1、第一个观察到活细胞有机体的是()。 a、Robert Hooke b、Leeuwen Hoek c、Grew d、Virchow 2、细胞学说是由()提出来的。 a、Robert Hooke和Leeuwen Hoek b、Crick和Watson c、Schleiden和Schwann d、Sichold和Virchow 3、细胞学的经典时期是指()。 a、1665年以后的25年 b、1838—1858细胞学说的建立 c、19世纪的最后25年 d、20世纪50年代电子显微镜的发明 4、()技术为细胞生物学学科早期的形成奠定了良好的基础。 a、组织培养 b、高速离心 c、光学显微镜 d、电子显微镜 四、判断题 1、细胞生物学是研究细胞基本结构的科学。( x) 2、细胞的亚显微结构是指在光学显微镜下观察到的结构。( x) 3、细胞是生命体的结构和生命活动的基本单位。( y) 4、英国学者Robert Hooke第一次观察到活细胞有机体。( x)

细胞生物学试题

细生大礼包第三弹 第六章、线粒体与细胞得能量转换 PART1教学大纲 1、教学内容 第一节线粒体得基本特征 第二节细胞呼吸与能量转换 第三节线粒体与疾病 2。教学基本要求 掌握:线粒体就是由双层单位膜套叠而成得封闭性膜囊结构,线粒体得化学组成(尤其就是各区间标志酶),细胞呼吸得概念与特点,细胞能量得转换分子-—ATP,丙酮酸在线粒体内生成乙酰辅酶A,三羧酸循环就是各种有机物进行最后氧化得过程,也就是各类有机物相互转化得枢纽,呼吸链概念,氧化过程中伴随磷酸化得藕联,1分子葡萄糖完全氧化释放得能量,化学渗透假说。 熟悉:线粒体得形态数量与细胞得类型与生理状态有关,线粒体得遗传体系,核编码蛋白质向线粒体得转运,葡萄糖在细胞质中得糖酵解,三羧酸循环,一分子葡萄糖经过三羧酸循环得总反应式,呼吸链与ATP合酶复合体就是氧化磷酸化得结构基础,根据结合变构机制ATP得合成。 了解:线粒体得起源与发生,NADH+H+ 通过线粒体内膜得穿梭机制,F0基片在ATP合成中得作用,与细胞死亡有关得线粒体机制,线粒体控制细胞死亡得假说,疾病过程中得线粒体变化,mtDNA突变与疾病。 3。重点与难点 重点:线粒体得组成结构,细胞呼吸与能量转换。 难点:电子传递链,氧化磷酸化,ATP生成。 Part 2 题库 一。填空题 1.线粒体就是细胞得基地,其主要功能就是。(七) 2.线粒体得嵴由向内腔突起而成,其上面得带柄结构就是 , 由、与三部分组成,该结构具有活性。功能就是。(七) 3.线粒体各部分结构中有各自特殊得标记酶,它们分别在外膜就是________,外腔就是________ ___,内膜就是__________,膜间腔就是______________。(七) 4.线粒体基因组共由个碱基组成,含个基因,可分别编码rRNA、tRNA与蛋白质。(七) 5.细胞氧化得过程包括三个步骤:①;②; ③。(七) 答案 :1、生物氧化与能量转换营养物质在线粒体内氧化并与磷酸化藕联生成ATP 2.内膜基粒头部炳部基片酶催化ADP磷酸化生成ATP 3.单胺氧化酶细胞色素氧化酶腺苷酸激酶

分子生物学实验课件..

实验一、菌株复壮与单菌落菌株的获取 一、实验目的 学习细菌培养的LB培养基及抗生素抗性筛选培养基的配制,掌握高压灭菌和获取细菌单菌落菌株两种基本实验操作技能。 二、实验材料、设备及试剂 1、实验材料 大肠杆菌(E. coli)DH5α菌株:R-,M-,Amp- 2、实验设备 恒温摇床,电热恒温培养箱,无菌工作台,高压灭菌锅 3、试剂 酵母浸膏,蛋白胨,氯化钠,琼脂,卡那霉素 三、实验步骤 液体LB(Luria-Bertain)培养基配方: 蛋白胨(typtone) 1.0% (1 g/100 ml) 酵母提取物(Yeast extraction)0.5% (0.5g/100 ml) 氯化钠 1.0% (1 g/100 ml) PH 7.0 固体LB培养基:每100 ml液体培养基中加入1.5g琼脂粉 请按试剂瓶上的编号使用相应编号的药勺取药,防止药品相互污染! (1)每组按上述液体LB培养基配方,以配制100ml的量称取药品放入烧杯。 (2)用量筒量取约80 ml 蒸馏水注入烧杯中,玻棒搅拌使药品完全溶解后用100ml量筒定容 至100ml。 (3)pH试纸检测pH值,并用1 N NaOH或1 N HCl调节pH值至7.0。 (4)将100ml溶液分装入两个三角瓶,每瓶为50ml。 (5)按固体培养基配方称取适量琼脂粉分别放入两个三角瓶中,以配制成两瓶50ml固体LB培 养基。 (6)两个三角瓶分别用锡纸包扎瓶口。并用记号笔在三角瓶上标注各组标记。 (7)把装有培养基三角瓶放入灭菌锅中,盖上锅盖,以对称方式拧紧锅盖,打开排气阀通电加

热,至有连续的白色水蒸气从排气阀排出时,关闭排气阀。当高压锅温度(气压)指示器指示锅内温度升高至121℃(0.1Mpa)时,调节电压(或利用手动开关电源的方式)使高压锅稳定在该温度(压力)下20 min,然后断开电源。待指示器指示压力降为0时,方可打开排气阀,然后再打开锅盖小心取出锅内物品。 (8)取出三角瓶后,在酒精灯火焰旁进行下述操作。 (9)取其中的一瓶直接倒培养皿,每皿倒入的量以刚好能在培养皿底铺展成薄薄的一层即可。 每组倒1块培养皿,在皿盖上用记号笔写上“LB”及各组的标记。 (10)另外一瓶培养基待温度降低至60℃左右时(刚能感觉不烫手),向培养基中加入0.1ml 50mg/ml的氨苄青霉素(Amp)溶液,使培养基中Amp的终浓度为50mg/L。快速充分混匀后每组倒1块培养皿,在皿盖上标注“LB+”及各组的标记。 (11)接种环蘸取菌液,密密划线。 (12)倒置于37℃恒温培养箱中进行培养。 (13)一天后观察菌落。 四、思考题 (1)在说明本实验所用的菌种时用到这样的符号:“R-,M-,Amp-”,这告诉我们关于该菌 种的什么信息? (2)在步骤7中,为何须待连续的白色水蒸气从排气阀排出时才能关闭排气阀?当灭菌完 毕,为何又须待高压锅指示器指示压力降为0时才能打开高压锅,而且操作次序必须是先打开排气阀然后才能打开高压锅盖? (3)在步骤12中,为何需将涂有菌的培养皿倒置于37℃恒温培养箱中进行菌的培养?为什 么不是正放呢? (4)你预计该实验结果是什么,即两种培养基上菌的生长情况如何? 实验二碱裂解法小量提取质粒DNA 一实验目的 了解少量质粒制备方法与原理,掌握碱法小量提取质粒DNA的操作步骤。 二实验原理 本实验利用NaOH破坏菌体细胞使核酸物质从细胞中释放出来,因此称为碱裂解法抽提。十二烷基磺酸钠(SDS)能裂解细菌细胞膜,但更重要的作用在于其与钾离子反应后所引起的溶液中绝大部分蛋白质以及基因组DNA共沉淀。由于还有很多蛋白质不能被共沉淀掉,因此要进一步用酚、氯仿对溶液进行抽提。最后加入2倍体积的无水乙醇或0.7倍体积的异丙醇沉淀就能得到质量稳定的质粒DNA。从细菌中分离质粒DNA

分子生物学期末考试重点

1.定义重组DNA技术 将不同的DNA片段按照人们的设计定向连接起来,然后在特定的受体细胞中与载体同时复制并得到表达,产生影响受体细胞的新的遗传性状。 2.说出分子生物学的主要研究内容 1.DNA重组技术 2.基因表达研究调控 3.生物大分子的结构功能研究 4.基因组、功能基因组与生物信息学研究 3.简述DNA的一、二、三级结构 一级:4种核苷酸的连接及排列顺序,表示了该DNA分子的化学成分 二级:2条多核苷酸连反向平行盘绕所形成的双螺旋结构 三级:DNA双螺旋进一步扭曲盘绕所形成的特定的空间结构 4.原核生物DNA具有哪些不同于真核生物DNA的特征? ①DNA双螺旋是由2条互相平行的脱氧核苷酸长链盘绕而成,多核苷酸的方向由核苷酸间的磷酸二酯键的走向决定,一条是5---3,另一条是3---5②DNA双螺旋中脱氧核糖和磷酸交替连接,排在外侧构成基本骨架,碱基排在内侧③两条链上的碱基通过氢键相结合,形成碱基对 5.DNA双螺旋结构模型是由谁提出的?沃森和克里克 6.DNA以何种方式进行复制,如何保证DNA复制的准确性? 线性DNA的双链复制:将线性复制子转变为环状或者多聚分子,在DNA末端形成发卡式结构,使分子没有游离末端,在某种蛋白质的介入下在真正的末端上启动复制。环状DNA 复制:θ型、滚环型、D型 ①以亲代DNA分子为模板进行半保留复制,复制时严格按照碱基配对原则 ②DNA聚合酶I 非主要聚合酶,可确保DNA合成的准确性

③DNA修复系统:错配修复、切除修复、重组修复、DNA直接修复、SOS系统 7.简述原核生物DNA复制特点 只有一个复制起点,复制起始点上可以连续开始新的DNA复制,变现为虽只有一个复制单元,但可以有多个复制叉 8.真核生物DNA的复制在哪些水平上受到调控? 细胞生活周期水平调控;染色体水平调控;复制子水平调控 9.细胞通过哪几种修复系统对DNA损伤进行修复? 错配修复,恢复错配;切除修复,切除突变的碱基和核苷酸片段;重组修复,复制后的修复;DNA直接修复,修复嘧啶二聚体;SOS系统,DNA的修复,导致变异 10.什么是转座子?分为哪些种类? 是存在于染色体DNA上可自主复制和移动的基本单位。可分为插入序列和复合型转座子11.什么是编码链?什么是模板链? 与mRNA序列相同的那条DNA链称为编码链,另一条根据碱基互补配对原则指导mRNA 合成DNA链称为模板链 12.简述RNA的种类及其生物学作用 mRNA:编码了一个或多个多肽链序列。 tRNA:把mRNA上的遗传信息变为多肽中的氨基酸信息。 rRNA:是核糖体中的主要成分。 hnRNA:由DNA转录生成的原始转录产物。 snRNA:核小RNA,在前体mRNA加工中,参与去除内含子。 snoRNA:核仁小RNA,主要参与rRNA及其它RNA的修饰、加工、成熟等过程。scRNA:细胞质小RNA在蛋白质合成过程起作用。

细胞生物学试题及答案

1.肌醇磷酸信号途径产生的两个信使? 产生:1、4、5-肌醇三磷酸(IP3)和二酰甘油(DGA)两个第二信使.IP3刺激细胞 内质网释放Ca2+进入细胞质基质,是细胞内Ca2+浓度升高,DGA 激活蛋白激酶C(PKC),活化的PKC进一步使底物蛋白磷酸化,以磷酸肌醇代谢为基础的信号通路的最大特点是胞外信号被摸受体接收后,同事产生两个胞内信使,分别激活两个不同的信号通路,即IP3/Ca2+和DGA/PKC途径实现细胞对外界的应答,因此这一信号系统有称为“双信使系统” 2.根据其溶解性,化学信号分为哪几种?(P220) 根据其溶解性,化学信号分为亲脂性和亲水性两类 A.亲脂性信号分子,主要代表甾类激素和甲状腺素,这类亲脂性分 子小,疏水性强,可穿过细胞质膜进入细胞,与细胞内受体结合形成激素受体复合物,近而调节基因表达, B.亲水性信号分子,包括神经递质、局部介质和大多数肽类激素, 他们不能透过靶细胞质膜,只能通过与靶细胞表面受体结合,经信号转换机制,在细胞内产生第二信使或激活蛋白酶活蛋白磷酸酶的活性,引起细胞的应答反应 C.NO是迄今在体内发现的一种气体信号分子,他能进入细胞直接激 活效应酶,参与体内众多的生理或病理过程 3.广义和狭义的细胞膜骨架 A.广义的细胞膜骨架:细胞质骨架、细胞膜骨架、细胞核骨架和

细胞外基质 B.狭义的细胞膜骨架:微丝、微管、中间丝三部分 4.溶酶体酶的特异性标志 溶酶体酶是在糙面内质网上合成并经过N-链接的糖基化修饰,然后转至高尔基体的顺面膜囊中寡糖链上的甘露糖残基被磷酸化形成M6p;在高尔基体的反面膜囊和TGN膜上存在M6P的受体,溶酶体的酶与其他蛋白质区分开来,最后以出牙的方式转运到溶酶体 5.含有(不含)DNA细胞器 含有DNA的细胞器:线粒体、叶绿体、细胞核、质粒 不含DNA的细胞器:高尔基体、内质网、溶酶体、中心体、核糖体 6.细胞内膜系统的构成(P175) 细胞内膜系统是指在结构、功能上相互关联、由膜包被的细胞器或细胞结构,主要包括内质网、高尔基体、溶酶体、胞内体和分泌泡 7.生物膜流动的镶嵌模型的要点 (1)膜的流动性,膜蛋白和膜脂均可侧向运动 (2)膜蛋白分布的不对称性,有的襄在膜表面,有的嵌入或横跨脂双分子层 8.染色体DNA的三种功能原件 在细胞时代中确保染色体的复制和稳定遗传,染色体应具有三种3

分子生物学期末复习(整理版)

1)分子生物学 从分子水平上研究生命现象物质基础的学科。研究细胞成分的物理、化学的性质和变化以及这些性质和变化与生命现象的关系,如遗传信息的传递,基因的结构、复制、转录、翻译、表达调控和表达产物的生理功能,以及细胞信号的转导等。 2)移动基因: 又称转座子。由于它可以从染色体基因组上的一个位置转移到另一个位置,是指在不同染色体之间跃迁,因此也称跳跃基因。 3)假基因: 有些基因核苷酸序列与相应的正常功能基因基本相同,但却不能合成出功能蛋白质,这些失活的基因称为假基因。 4)重叠基因: 所谓重叠基因是指两个或两个以上的基因共有一段DNA序列,或是指一段DNA序列成为两个或两个以上基因的组成部分。 5)基因家族: 是真核生物基因组中来源相同、结构相似、功能相关的一组基因。 6)基因:能够表达和产生蛋白质和RNA的DNA序列,是决定遗传性状的功能单位. 7)基因组:细胞或生物体的一套完整单倍体的遗传物质的总和. 8)端粒:以线性染色体形式存在的真核基因组DNA末端都有一种特殊的结构叫端粒.该结构是一段DNA序列和蛋白质形成的一种复合体,仅在真核细胞染色体末端存在. 9)操纵子:是指数个功能上相关的结构基因串联在一起,构成信息区,连同其上游的调控区(包括启动子和操纵基因)以及下游的转录终止信号所构成的基因表达单位,所转录的RNA为多顺反子. 10)顺式作用元件:是指那些与结构基因表达调控相关,能够被基因调控蛋白特异性识别和结合的特异DNA序列.包括启动子,上游启动子元件,增强子,加尾信号和一些反应元件等. 11)反式作用因子:是指真核细胞内含有的大量可以通过直接或间接结合顺式作用元件而调节 基因转录活性的蛋白质因子. 12)启动子:是RNA聚合酶特异性识别和结合的DNA序列. 13)增强子:位于真核基因中远离转录起始点,能明显增强启动子转录效率的特殊DNA序列.它可位于被增强的转录基因的上游或下游,也可相距靶基因较远.

翟中和第四版细胞生物学1~9章习题及答案

翟中和第四版细胞生物学1~9章习题及答案 https://www.360docs.net/doc/041614988.html,work Information Technology Company.2020YEAR

翟中和第四版《细胞生物学》习题集及答案 第一章绪论 一、名词解释 细胞生物学:是研究和揭示细胞基本生命活动规律的科学,它从显微、亚显微与分子水平上研究细胞结构与功能、细胞增殖、分化、代谢、运动、衰老、死亡,以及细胞信号传导,细胞基因表达与调控,细胞起源与进化等重大生命过程。 二、填空题 1、细胞分裂有直接分裂、减数分裂和有丝分裂三种类型。 2、细胞学说、能量转化与守恒和达尔文进化论并列为19世纪自然科学的“三大发现”。 3、细胞学说、进化论和遗传学为现代生物学的三大基石。 4、细胞生物学是从细胞的显微、亚显微和分子三个水平,对细胞的各种生 命活动展开研究的科学。 5、第一次观察到活细胞有机体的人是荷兰学者列文虎克。 三、问答题: 1、当前细胞生物学研究中的3大基本问题是什么? 答:①基因组是如何在时间与空间上有序表达的?

②基因表达产物是如何逐级组装成能行使生命活动的基本结构体系及各种细胞器的这种自组装过程的调控程序与调控机制是什么 ③基因及其表达的产物,特别是各种信号分子与活性因子是如何调节诸如细胞的增殖、分化、衰老与凋亡等细胞最重要的生命活动过程? 2、细胞生物学的主要研究内容有哪些? 答:①生物膜与细胞器②细胞信号转导③细胞骨架体系④细胞核、染色体及基因表达⑤细胞增殖及其调控⑥细胞分化及干细胞生物学⑦细胞死亡⑧细胞衰老 ⑨细胞工程⑩细胞的起源与进化 3、细胞学说的基本内容是什么? 答:①细胞是有机体,一切动植物都是由细胞发育而来,并由细胞和细胞产物所构成。 ②每个细胞作为一个相对独立的单位,既有它自己的生命,又对与其他细胞共同组成的整体的生命有所助益。 ③新的细胞可以通过已存在的细胞繁殖产生。 第二章细胞的统一性与多样性 一、名词解释 1、细胞:生命活动的基本单位。 2、病毒(virus):非细胞形态生命体,最小、最简单的有机体,必须在活细胞体内复制繁殖,彻底寄生性。 3、原核细胞:没有核膜包裹的和结构的细胞,细菌是原核细胞的代表。

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