双抗原夹心ELISA方法检测艾滋病病毒抗体标准操作规程
双抗原夹心ELISA方法检测艾滋病病毒抗体标准操作规程
1、目的
规范抗-HIV抗体检测操作程序。
2、适用范围
本实施细则使用于对人类血清或血浆中艾滋病毒抗体的初筛检测。
3、原理
采用夹心ELISA方法检测血清或血浆样品中人类免疫缺陷病毒HIV（1+2型）抗体，预包被高纯度重组HIV（1+2型）抗原，待检血清中的抗HIV抗体与包被抗原反应，再与酶标HIV-1+2型抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，加底物（TMB）显色，在酶标仪上测定OD值，根据OD值判定有无HIV抗体的存在。
4、环境条件
室温18-25℃。室内相对湿度30-60％
5、试剂与材料
5.1、吸水纸；
5.2、说明书1份；
5.3、HIV抗原包被板1块，每板12条，每条8孔；
5.4、HIV酶标抗原工作液1瓶；
5.5、50倍浓缩洗液1瓶；
5.6、HIV阳性对照（已灭活）1支；
5.7、HIV阴性对照1支；
5.8、底物液A 1瓶；
5.9、底物液B 1瓶；
5.10、终止液1瓶；
5.11、封口胶2张；
5.12、塑料袋1个；
5.13、（新鲜）蒸馏水或去离子水；
5.14、一次性V型水槽；
5.15、一次性瓶（塑料），用于准备TMB底物液；
5.16、一次性乳胶手套；
5.17、记时器；
5.18、5％次氯酸钠或其他认可消毒液；
5.19、适用盛装有可能受污染的物品的容器；
5.20、尿过氧化物溶液2瓶，每瓶11ml。
6、仪器
6.1、酶标仪；
6.2、水浴箱（35-39℃）；
6.3、离心机；
6.4、洗板机；
6.5、打印机。
7、操作步骤
7.1、使用前将试剂盒从冰箱中取出平衡至室温，取出所须板条，剩余的及时封存放回冰箱。
7.2、每次实验均须设立空白对照孔2孔，不加样品和酶结合物，只加底物和终止液；抗-HIV 阳性对照孔3孔，每孔50或100μl。
7.3、其余各孔加待检测标本50或100μl。
7.4、覆盖粘胶纸，置37℃孵育30或60分钟。
7.5、将50倍浓缩洗液用纯化水50倍稀释后备用。
7.6、取出已孵育完毕的反应板，弃去粘胶纸，放入洗板机中，吸干板内液体，将洗涤液注满酶孔（约300μl/孔），吸干，反复5次，在干净纱布上将板拍干。
7.7、除空白孔外，每空加入酶标抗原工作液50或100μl，贴上封口胶。37℃温育20或30分钟。
7.8、洗涤同步骤7.6。
7.9、每孔加入底物缓冲液A50μl、TMB B50μl，混匀，置37℃显色10分钟。
7.10、加终止液50μl振荡反应板5秒种，使之充分混匀。
7.11、在酶标读数仪中，取波长450nm（建议使用双波长酶标仪比色，参考波长630nm），以空白对照孔校零，读取每孔吸收值（加终止液后，务必在15分钟内读数完毕）。
8、质量控制与评价
8.1、抗HIV阳性对照OD值＞0.8，抗HIV阴性对照OD值＜0.08或0.12。
8.2、阳性对照OD值有效范围：≥0.50。
8.3、阴性对照OD值有效范围：≤0.10。
8.4、阴、阳性对照和被检样本的OD值减去空白对照OD值即为计算值。
8.5、临界值（CUT OFF）=0.10或0.15+阴性对照OD均值。
8.6、样品OD值≥临界值者为HIV抗体阳性，初试阳性应重新取样双孔复试，复试阳性者应按照“全国HIV检测管理规范”送“HIV确认实验室”进行确认实验。
8.7、样品OD值≤临界值者为HIV抗体反应阴性。
8.8、阴性对照值若小于0.02，以0.02计算。
8.9、被检样本的OD值≥临界值判为HIV抗体阳性。
8.10、每次实验必须做外部质控。
8.11、质控血清有明确的标记，保存-20℃以下。
9、说明
9.1、本试剂的使用单位必须是经当地卫生部门批准的HIV初筛实验室。
9.2、整个检测工作必须符合HIV实验室管理规范和生物安全守则规定，严格防止交叉感染。
9.3、标本和酶结合物均应加样器加注，并经常校对其准确性。
9.4、所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.5、洗涤液若出现结晶，可置37℃溶解。
9.6、粘胶纸不能反复使用。
9.7、微孔条从冷藏环境中取出时，应在室温平衡至无潮气方可使用，未用完的须放入有干燥剂的密封袋中保存。
9.8、洗涤时各孔须加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。使用洗板机洗涤应设定30-60
秒浸泡时间。
9.9、HIV检测结果的判定必须以酶标仪的读数为准。建议用双波长450/630nm检测。
9.10、不同批号的试剂组不可混用。
10、方法编写依据
10.1、GB16000-1995。
10.2、《全国艾滋病检测技术规范》。
10.3、科华、吉比爱、梅里埃、万泰、丽珠HIV1+2抗体诊断试剂使用说明书。
编写：审核：批准：
批准日期：年月日实施日期：年月日
酶联免疫法ELISA方法检测乙型肝炎表面抗原标准操作规程
1、目的
规范乙型肝炎表面抗原检测操作程序。
2、适用范围
本实施细则使用于对人类血清或血浆的乙型肝炎表面抗原初筛检测。
3、原理
采用单克隆抗-HBs包被反应板，加入待测标本，同时加入多克隆抗-HBs-HRP，当标本中存在HBsAg时，该HBsAg与包被抗-HBs结合并与抗-HBs-HRP结合形成抗-HBs-HBAg-抗-HBs-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。
4、环境条件
温18-25℃。室内相对湿度30-60％
5、试剂与材料
5.1、吸水纸；
5.2、说明书1份；
5.3、HBsAg包被板1块，每板12条，每条8孔；
5.4、HBsAg酶标抗体工作液1瓶；
5.5、25倍浓缩洗液1瓶；
5.6、HBsAg阳性对照（已灭活）1支；
5.7、HBsAg阴性对照1支；
5.8、显色剂A 1瓶；
5.9、显色剂B 1瓶；
5.10、终止液1瓶；
5.11、封口胶2张；
5.12、（新鲜）蒸馏水或去离子水；
5.13、一次性V型水槽；
5.14、一次性瓶（塑料），用于准备TMB底物液；
5.15、一次性乳胶手套；；
5.16、记时器；
5.17、5％次氯酸钠或其他认可消毒液；
5.18、适用盛装有可能受污染的物品的容器；
5.19、尿过氧化物溶液2瓶，每瓶11ml。
6、仪器
6.1、酶标仪；
6.2、水浴箱（35-39℃）；
6.3、离心机；
6.4、洗板机；
6.5、打印机。
7、操作步骤
7.1、使用前将试剂盒从冰箱中取出平衡至室温，取出所须板条，剩余的及时封存放回冰箱。
7.2、每次实验均须设立空白对照孔1孔，不加样品和酶结合物，只加底物和终止液；每孔
加入阴性对照（或阳性对照）各50ul（或1滴）。
7.3、其余各孔加待检测标本50ul。
7.4、每孔加入酶结合物50ul（或1滴）充分混匀，覆盖粘胶纸，置37℃孵育30分钟。
7.5、将蒸馏水作25倍稀释后备用。
7.6、取出已孵育完毕的反应板，弃去粘胶纸，放入洗板机中，吸干板内液体，将洗涤液注
满每孔（约300μl/孔），吸干，反复5次，在干净纱布上将板拍干。
7.7、每孔加显色剂A液、B液各50ul（或1滴），充分混匀，贴上封口胶。37℃温育15分
钟。
7.8、每孔加入终止液50μl（或1滴），振荡反应板5秒钟，使之充分混匀。
7.9、在酶标读数仪中，取波长450nm（建议使用双波长酶标仪比色，参考波长630nm），先
以空白对照孔校零，读取每孔OD值（加终止液后，务必在15分钟内读数完毕）。
8、质量控制与评价
8.1、HBsAg阳性对照OD值＞2.1，HBsAg阴性对照OD值＜2.1。
8.2、阳性对照OD值有效范围：≥2.1。
8.3、阴性对照OD值有效范围：≤0.05。
8.4、阴、阳性对照和被检样本的OD值减去空白对照OD值即为计算值。
8.5、阴性对照值若小于0.05，以0.05计算。。
9、注意事项
9.1、从冷藏环境中取出的试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔反应条应置37℃平衡
30后方可使用，余者应及时封存于冰箱中以备后用。在平衡试剂的同时，待测标本需室温
平衡30分钟后再行测试。
9.2使用前试剂应摇匀，并弃去1~2滴后垂直滴加。
3、封片不能重复使用。
4、结果判断须在反应终止后10分钟内完成。
5、不同批号试剂不可混用。
6、待测标本不可用NaN3防腐。
7、本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。
10、贮存条件和有效期
试剂盒应置2℃~8℃中避光保存，有效期十二个月。国药准字S1*******（48人份）
国药准字S1*******（96人份）
10、方法编写依据
10.1、GB16000-1995。
10.2、《全国临床检验操作规程》。
10.3、科华、吉比爱、梅里埃、万泰、丽珠HBV抗体诊断试剂使用说明书。
编写：审核：批准：
批准日期：年月日实施日期：年月日
酶联免疫法ELISA方法检测乙型肝炎表面抗体标准操作规程
1、目的
规范乙型肝炎表面抗体检测操作程序。
2、适用范围
本实施细则使用于对人类血清或血浆的乙型肝炎表面抗体初筛检测。
3、原理
采用纯化单克隆HBsAg包被反应板，加入待测标本，同时加入HBsAg-HRP，当标本中存在抗-HBs时，该抗-HBs与包被HBsAg结合并与酶结合物结合形成HBsAg复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。
4、环境条件
温18-25℃。室内相对湿度30-60％
5、试剂与材料
5.1、吸水纸；
5.2、说明书1份；
5.3、抗-HBs包被板1块，每板12条，每条8孔；
5.4、抗-HBs酶标抗体工作液1瓶；
5.5、25倍浓缩洗液1瓶；
5.6、抗-HBs阳性对照（已灭活）1支；
5.7、抗-HBs阴性对照1支；
5.8、显色剂A 1瓶；
5.9、显色剂B 1瓶；
5.10、终止液1瓶；
5.11、封口胶2张；
5.12、（新鲜）蒸馏水或去离子水；
5.13、一次性V型水槽；
5.14、一次性瓶（塑料），用于准备TMB底物液；
5.15、一次性乳胶手套；
5.16、记时器；
5.17、5％次氯酸钠或其他认可消毒液；
5.18、适用盛装有可能受污染的物品的容器；
5.19、尿过氧化物溶液2瓶，每瓶11ml。
6、仪器
6.1、酶标仪；
6.2、水浴箱（35-39℃）；
6.3、离心机；
6.4、洗板机；
6.5、打印机。
6.5、打印机。
7、操作步骤
7.1、使用前将试剂盒从冰箱中取出平衡至室温，取出所须板条，剩余的及时封存放回冰箱。
7.2、每次实验均须设立空白对照孔1孔，不加样品和酶结合物，只加底物和终止液；每孔
加入阴性对照（或阳性对照）各50ul（或1滴）。
7.3、其余各孔加待检测标本50ul。
7.4、每孔加入酶结合物50ul（或1滴）充分混匀，覆盖粘胶纸，置37℃孵育30分钟。
7.5、将蒸馏水作25倍稀释后备用。
7.6、取出已孵育完毕的反应板，弃去粘胶纸，放入洗板机中，吸干板内液体，将洗涤液注
满每孔（约300μl/孔），吸干，反复5次，在干净纱布上将板拍干。
7.7、每孔加显色剂A液、B液各50ul（或1滴），充分混匀，贴上封口胶。37℃温育15分
钟。
7.8、每孔加入终止液50μl（或1滴），振荡反应板5秒钟，使之充分混匀。
7.9、在酶标读数仪中，取波长450nm（建议使用双波长酶标仪比色，参考波长630nm），先
以空白对照孔校零，读取每孔OD值（加终止液后，务必在15分钟内读数完毕）。
8、质量控制与评价
8.1、抗-HBs阳性对照OD值＞2.1，抗-HBs阴性对照OD值＜2.1。
8.2、阳性对照OD值有效范围：≥2.1。
8.3、阴性对照OD值有效范围：≤0.05。
8.4、阴、阳性对照和被检样本的OD值减去空白对照OD值即为计算值。
8.5、阴性对照值若小于0.05，以0.05计算。。
9、注意事项
9.1、从冷藏环境中取出的试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔反应条应置37℃平衡
30后方可使用，余者应及时封存于冰箱中以备后用。在平衡试剂的同时，待测标本需室温
平衡30分钟后再行测试。
9.2使用前试剂应摇匀，并弃去1~2滴后垂直滴加。
3、封片不能重复使用。
4、结果判断须在反应终止后10分钟内完成。
5、不同批号试剂不可混用。
6、待测标本不可用NaN3防腐。
7、本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。
10、贮存条件和有效期
试剂盒应置2℃~8℃中避光保存，有效期十二个月。国药准字S1*******（48人份）
国药准字S1*******（96人份）
10、方法编写依据
10.1、GB16000-1995。
10.2、《全国临床检验操作规程》。
10.3、科华、吉比爱、梅里埃、万泰、丽珠HBV抗体诊断试剂使用说明书。
编写：审核：批准：
批准日期：年月日实施日期：年月日
酶联免疫法ELISA方法检测乙型肝炎e抗原标准操作规程
1、目的
规范乙型肝炎e抗原检测操作程序。
2、适用范围
本实施细则使用于对人类血清或血浆的HBsAg初筛检测。
3、原理
采用多克隆抗-HBe包被反应板，加入待测标本，同时加入单克隆抗-HBe-HRP，如待测标本中含有HBeAg时就与包被抗-HBe、抗-HBe-HRP结合形成复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。
4、环境条件
温18-25℃。室内相对湿度30-60％
5、试剂与材料
5.1、吸水纸；
5.2、说明书1份；
5.3、抗-HBe包被板1块，每板12条，每条8孔；
5.4、HBeAg酶标抗体工作液1瓶；
5.5、25倍浓缩洗液1瓶；
5.6、HBeAg阳性对照（已灭活）1支；
5.7、HBeAg阴性对照1支；
5.8、显色剂A 1瓶；
5.9、显色剂B 1瓶；
5.10、终止液1瓶；
5.11、封口胶2张；
5.12、（新鲜）蒸馏水或去离子水；
5.13、一次性V型水槽；
5.14、一次性瓶（塑料），用于准备TMB底物液；
5.15、一次性乳胶手套；
5.16、记时器；
5.17、5％次氯酸钠或其他认可消毒液；
5.18、适用盛装有可能受污染的物品的容器；
5.19、尿过氧化物溶液2瓶，每瓶11ml。
6、仪器
6.1、酶标仪；
6.2、水浴箱（35-39℃）；
6.3、离心机；
6.4、洗板机；
6.5、打印机。
7、操作步骤
7.1、使用前将试剂盒从冰箱中取出平衡至室温，取出所须板条，剩余的及时封存放回冰箱。
7.2、每次实验均须设立空白对照孔1孔，不加样品和酶结合物，只加底物和终止液；每孔
加入阴性对照（或阳性对照）各50ul（或1滴）。
7.3、其余各孔加待检测标本50ul。
7.4、每孔加入酶结合物50ul（或1滴）充分混匀，覆盖粘胶纸，置37℃孵育30分钟。
7.5、将蒸馏水作25倍稀释后备用。
7.6、取出已孵育完毕的反应板，弃去粘胶纸，放入洗板机中，吸干板内液体，将洗涤液注
满每孔（约300μl/孔），吸干，反复5次，在干净纱布上将板拍干。
7.7、每孔加显色剂A液、B液各50ul（或1滴），充分混匀，贴上封口胶。37℃温育15分
钟。
7.8、每孔加入终止液50μl（或1滴），振荡反应板5秒钟，使之充分混匀。
7.9、在酶标读数仪中，取波长450nm（建议使用双波长酶标仪比色，参考波长630nm），先
以空白对照孔校零，读取每孔OD值（加终止液后，务必在15分钟内读数完毕）。
8、质量控制与评价
8.1、HBsAg阳性对照OD值＞2.1，HBsAg阴性对照OD值＜2.1。
8.2、阳性对照OD值有效范围：≥2.1。
8.3、阴性对照OD值有效范围：≤0.05。
8.4、阴、阳性对照和被检样本的OD值减去空白对照OD值即为计算值。
8.5、阴性对照值若小于0.05，以0.05计算。。
9、注意事项
9.1、从冷藏环境中取出的试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔反应条应置37℃平衡
30后方可使用，余者应及时封存于冰箱中以备后用。在平衡试剂的同时，待测标本需室温
平衡30分钟后再行测试。
9.2使用前试剂应摇匀，并弃去1~2滴后垂直滴加。
3、封片不能重复使用。
4、结果判断须在反应终止后10分钟内完成。
5、不同批号试剂不可混用。
6、待测标本不可用NaN3防腐。
7、本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。
10、贮存条件和有效期
试剂盒应置2℃~8℃中避光保存，有效期十二个月。国药准字S1*******（48人份）
国药准字S1*******（96人份）
10、方法编写依据
10.1、GB16000-1995。
10.2、《全国临床检验操作规程》。
10.3、科华、吉比爱、梅里埃、万泰、丽珠HBV抗体诊断试剂使用说明书。
编写：审核：批准：
批准日期：年月日实施日期：年月日
酶联免疫法ELISA方法检测乙型肝炎e抗体标准操作规程
1、目的
规范乙型肝炎e抗体检测操作程序。
2、适用范围
本实施细则使用于对人类血清或血浆的乙型肝炎e抗体检测。
3、原理
采用多克隆抗-HBe基因工程重组HBeAg包被反应板，加入待测标本，同时加入单克隆抗-HBeAg-HRP，与抗原形成竞争结合，如待测标本中抗-HBe含量高，则抗-HBe-HRP与HBeAg结合少，加入TMB底物时显色淡，反之则无显色深。
4、环境条件
温18-25℃。室内相对湿度30-60％
5、试剂与材料
5.1、吸水纸；
5.2、说明书1份；
5.3、抗-HBe包被板1块，每板12条，每条8孔；
5.4、抗-HBs酶标抗体工作液1瓶；
5.5、25倍浓缩洗液1瓶；
5.6、抗-HBs阳性对照（已灭活）1支；
5.7、抗-HBs阴性对照1支；
5.8、显色剂A 1瓶；
5.9、显色剂B 1瓶；
5.10、终止液1瓶；
5.11、封口胶2张；
5.12、（新鲜）蒸馏水或去离子水；
5.13、一次性V型水槽；
5.14、一次性瓶（塑料），用于准备TMB底物液；
5.15、一次性乳胶手套；
5.16、记时器；
5.17、5％次氯酸钠或其他认可消毒液；
5.18、适用盛装有可能受污染的物品的容器；
5.19、尿过氧化物溶液2瓶，每瓶11ml。
6、仪器
6.1、酶标仪；
6.2、水浴箱（35-39℃）；
6.3、离心机；
6.4、洗板机；
6.5、打印机。
7、操作步骤
7.1、使用前将试剂盒从冰箱中取出平衡至室温，取出所须板条，剩余的及时封存放回冰箱。
7.2、每次实验均须设立空白对照孔1孔，不加样品和酶结合物，只加底物和终止液；每孔
加入阴性对照（或阳性对照）各50ul（或1滴）。
7.3、其余各孔加待检测标本50ul。
7.4、每孔加入酶结合物50ul（或1滴）充分混匀，覆盖粘胶纸，置37℃孵育30分钟。
7.5、将蒸馏水作25倍稀释后备用。
7.6、取出已孵育完毕的反应板，弃去粘胶纸，放入洗板机中，吸干板内液体，将洗涤液注
满每孔（约300μl/孔），吸干，反复5次，在干净纱布上将板拍干。
7.7、每孔加显色剂A液、B液各50ul（或1滴），充分混匀，贴上封口胶。37℃温育15分
钟。
7.8、每孔加入终止液50μl（或1滴），振荡反应板5秒钟，使之充分混匀。
7.9、在酶标读数仪中，取波长450nm（建议使用双波长酶标仪比色，参考波长630nm），先
以空白对照孔校零，读取每孔OD值（加终止液后，务必在15分钟内读数完毕）。
8、质量控制与评价
8.1、抗-HBe阳性对照OD值＜COV，抗-HBe阴性对照OD值≥COV。
8.2、阳性对照OD值有效范围：＜COV。
8.3、阴性对照OD值有效范围：≥COV。
8.4、阴、阳性对照和被检样本的OD值减去空白对照OD值即为计算值。
8.5、阴性对照值若小于0.05，以0.05计算。。
9、注意事项
9.1、从冷藏环境中取出的试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔反应条应置37℃平衡
30后方可使用，余者应及时封存于冰箱中以备后用。在平衡试剂的同时，待测标本需室温
平衡30分钟后再行测试。
9.2使用前试剂应摇匀，并弃去1~2滴后垂直滴加。
3、封片不能重复使用。
4、结果判断须在反应终止后10分钟内完成。
5、不同批号试剂不可混用。
6、待测标本不可用NaN3防腐。
7、本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。
10、贮存条件和有效期
试剂盒应置2℃~8℃中避光保存，有效期十二个月。国药准字S1*******（48人份）
国药准字S1*******（96人份）
10、方法编写依据
10.1、GB16000-1995。
10.2、《全国临床检验操作规程》。
10.3、科华、吉比爱、梅里埃、万泰、丽珠HBV抗体诊断试剂使用说明书。
编写：审核：批准：
批准日期：年月日实施日期：年月日
酶联免疫法ELISA方法检测乙型肝炎核心抗体标准操作规程
1、目的
规范乙型肝炎核心抗体检测操作程序。
2、适用范围
本实施细则使用于对人类血清或血浆的乙型肝炎核心抗体初筛检测。
3、原理
采用基因工程重组HBcAg包被反应板，加入待测标本，同时加入抗-HBc-HRP，与抗原形成竞争结合，如待测标本中抗-HBc含量高，则抗-HBc-HRP与HBcAg结合少，加入TMB 底物时显色淡，反之则显色深。
4、环境条件
温18-25℃。室内相对湿度30-60％
5、试剂与材料
5.1、吸水纸；
5.2、说明书1份；
5.3、HBcAg包被板1块，每板12条，每条8孔；
5.4、抗-HBc酶标抗体工作液1瓶；
5.5、25倍浓缩洗液1瓶；
5.6、抗-HBc阳性对照（已灭活）1支；
5.7、抗-HBc阴性对照1支；
5.8、显色剂A 1瓶；
5.9、显色剂B 1瓶；
5.10、终止液1瓶；
5.11、封口胶2张；
5.12、（新鲜）蒸馏水或去离子水；
5.13、一次性V型水槽；
5.14、一次性瓶（塑料），用于准备TMB底物液；
5.15、一次性乳胶手套；
5.16、记时器；
5.17、5％次氯酸钠或其他认可消毒液；
5.18、适用盛装有可能受污染的物品的容器；
5.19、尿过氧化物溶液2瓶，每瓶11ml。
6、仪器
6.1、酶标仪；
6.2、水浴箱（35-39℃）；
6.3、离心机；
6.4、洗板机；
6.5、打印机。
7、操作步骤
7.1、使用前将试剂盒从冰箱中取出平衡至室温，取出所须板条，剩余的及时封存放回冰箱。
7.2、每次实验均须设立空白对照孔1孔，不加样品和酶结合物，只加底物和终止液；每孔加入阴性对照（或阳性对照）各50ul（或1滴）。
7.3、其余各孔加待检测标本50ul（待测标本用生理盐水作1：30稀释，检测结果为临床意义；或原血清不作稀释，检测结果为流行病学意义，）。
7.4、每孔加入酶结合物50ul（或1滴）充分混匀，覆盖粘胶纸，置37℃孵育30分钟。
7.5、将洗涤液用蒸馏水作25倍稀释后备用。
7.6、取出已孵育完毕的反应板，弃去粘胶纸，放入洗板机中，吸干板内液体，将洗涤液注满每孔（约300μl/孔），吸干，反复5次，在干净纱布上将板拍干。
7.7、每孔加显色剂A液、B液各50ul（或1滴），充分混匀，贴上封口胶。37℃温育15分钟。
7.8、每孔加入终止液50μl（或1滴），振荡反应板5秒钟，使之充分混匀。
7.9、在酶标读数仪中，取波长450nm（建议使用双波长酶标仪比色，参考波长630nm），先以空白对照孔校零，读取每孔OD值（加终止液后，务必在15分钟内读数完毕）。
8、质量控制与评价
8.1、CutoffValue计算：
8.2、原倍血清COV=阴性对照平均OD值×0.3
8.3、1：30稀释血清COV=阴性对照平均OD值×0.5
8.4、标本OD值≥COV为阴性，标本OD值＜COV为阳性。
9、注意事项
9.1、从冷藏环境中取出的试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔反应条应置37℃平衡30后方可使用，余者应及时封存于冰箱中以备后用。在平衡试剂的同时，待测标本需室温平衡30分钟后再行测试。
9.2使用前试剂应摇匀，并弃去1~2滴后垂直滴加。
9.3、封片不能重复使用。
9.4、结果判断须在反应终止后10分钟内完成。
9.5、不同批号试剂不可混用。
9.6、待测标本不可用NaN3防腐。
9.7、本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。
10、贮存条件和有效期
试剂盒应置2℃~8℃中避光保存，有效期十二个月。国药准字S1*******（48人份）国药准字S1*******（96人份）
10、方法编写依据
10.1、GB16000-1995。《全国临床检验操作规程》
10.2、科华、吉比爱、梅里埃、万泰、丽珠抗体诊断试剂使用说明书。
编写：审核：批准：
批准日期：年月日实施日期：年月日
酶联免疫法ELISA方法检测丙型肝炎病毒抗体标准操作规程
1、目的
规范丙型肝炎病毒抗体检测操作程序。
2、适用范围
本实施细则使用于对人类血清或血浆的丙型肝炎病毒抗体筛选检测。
3、原理
采用EIA间接测定法，在预包被有丙肝抗原的反应孔内加入待测标本，若标本中有抗HCV，则可在微孔板表面形成抗原—抗体复合体，再于酶标抗人IgG结合，形成抗原—抗体—酶标抗体复合物，经显色系统显色后，根据OD值判定有无HCV抗体的存在。
4、环境条件
温18-25℃。室内相对湿度30-60％
5、试剂与材料
5.1、吸水纸；
5.2、说明书1份；
5.3、HCV抗原包被板1块，每板12条，每条8孔；
5.4、HCV酶标抗体工作液1瓶；
5.5、20倍浓缩洗液1瓶；
5.6、HCV阳性对照（已灭活）1支；
5.7、HCV阴性对照1支；
5.8、显色剂A 1瓶；
5.9、显色剂B 1瓶；
5.10、终止液1瓶；
5.11、封口胶2张；
5.12、（新鲜）蒸馏水或去离子水；
5.13、一次性V型水槽；
5.14、一次性瓶（塑料），用于准备TMB底物液；
5.15、一次性乳胶手套；
5.16、记时器；
5.17、5％次氯酸钠或其他认可消毒液；
5.18、适用盛装有可能受污染的物品的容器；
5.19、尿过氧化物溶液2瓶，每瓶11ml。
6、仪器
6.1、酶标仪；
6.2、水浴箱（35-39℃）；
6.3、离心机；
6.4、洗板机；
6.5、打印机。
7、操作步骤
7.1、使用前将试剂盒从冰箱中取出平衡至室温，取出所须板条，剩余的及时封存放回冰箱。
7.2、每次实验均须设立空白对照孔1孔，不加样品和酶结合物，只加底物和终止液；每孔
加入阴性对照（或阳性对照）各100ul（或2滴）。加样品稀释液100 ul。其余孔加入
100 ul样品稀释液再加待测血清10 ul。充分混匀后，置37℃孵育30分钟。弃去孔
内样品，扣干。
7.3、将洗涤液用蒸馏水作20倍稀释后备用。用洗涤液注满每孔（至少300 ul洗涤液/孔）
勿溢出，静置5分钟后扣干，反复5次。
7.4、每孔加入酶结合物100ul（或2滴）充分混匀（空白对照孔除外），覆盖粘胶纸，置37℃
孵育20分钟同上法洗反映板5次。
7.5、每孔加显色剂A液、B液各50ul（或1滴），充分混匀，贴上封口胶。37℃温育10分
钟。
7.8、每孔加入终止液50μl（或1滴），振荡反应板5秒钟，使之充分混匀。
7.9、在酶标读数仪中，取波长450nm（建议使用双波长酶标仪比色，参考波长630nm），先
以空白对照孔校零，读取每孔OD值（加终止液后，务必在15分钟内读数完毕）。
8、质量控制与评价
8.1、阳性对照平均值大于1.20，实验结果有效。
8.2、实验设计要求阳性、阴性对照OD值之差应大于1.20，否则本次实验无效。
8.3、若阴性对照读数小于0.050时，按0.050计算。
8.4、临界值（Cut off value）=阴性对照平均值+0.1。
8.5、测试标本的计算值小于Cut off value则为HCV抗体阴性。
8.6、测试标本的计算值等于或大于Cut off value则为HCV抗体阳性。
9、注意事项
9.1、从冷藏环境中取出的试剂盒应置温平衡20分钟再进行测试。
9.2、若洗涤液不够可自行配制。PH7.2 0.1MPBS-0.5﹪Tween20。用前10倍稀释成0.01MBPS
—0.05﹪Tween20。
9.3、本试剂盒中的样品稀释液采用变色技术，在加原始血清或血浆标本后由黄绿色变为蓝
紫色。非原始血清或血浆（如稀释标本等）颜色变化不明显或变为其他颜色，为正常
现象。
9.5、不同批号试剂请勿通用。
9.6、本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。
10、贮存条件和有效期
试剂盒应置2℃~8℃中避光保存，有效期十二个月。国药准字S1*******（48人份）
国药准字S1*******（96人份）
10、方法编写依据
10.1、GB16000-1995。
10.2、《全国临床检验操作规程》。
10.3、科华、吉比爱、梅里埃、万泰、丽珠HCV抗体诊断试剂使用说明书。
编写：审核：批准：
批准日期：年月日实施日期：年月日
梅毒甲苯胺红不加热血清试验诊断标准操作规程（TRUST）
1、目的
规范梅毒甲苯胺红不加热血清试验诊断操作程序。
2、适用范围
本实施细则使用于对人类血清或血浆的梅毒抗体筛选检测。
3、原理
本试剂采用VDRL抗原重悬于含有特制的甲苯胺红溶液中制成。供在白色卡片上进行实验，以检测血清或血浆中反应素用。可作为梅毒病人的诊断和疗效之参考。
4、环境条件
室温2-25℃。室内相对湿度30-60％
5、试剂与材料
5.1、TRUST抗原悬液 2.5ML×1瓶；
5.2、阳性对照血清 1ML×1支说明书1份；
5.3、阴性对照血清 1ML×1支；
5.4、实验专用卡片 120人份；
5.5、专用滴管及针头一套；
5.6、使用说明书 1份；
5.7、HCV阴性对照 1支；
5.17、5％次氯酸钠或其他认可消毒液；
5.18、适用盛装有可能受污染的物品的容器；
6、仪器
6.3、离心机；
7、操作步骤
7.1、使用前将试剂盒从冰箱中取出平衡至室温，取出所须板条，剩余的及时封存放回冰箱。
7.2、每次实验均须设立空白对照孔1孔，不加样品和酶结合物，只加底物和终止液；每孔
加入阴性对照（或阳性对照）各100ul（或2滴）。加样品稀释液100 ul。其余孔加入100 ul样品稀释液再加待测血清10 ul。充分混匀后，置37℃孵育30分钟。弃去孔内样品，扣干。
7.3、将洗涤液用蒸馏水作20倍稀释后备用。用洗涤液注满每孔（至少300 ul洗涤液/孔）
勿溢出，静置5分钟后扣干，反复5次。
7.4、每孔加入酶结合物100ul（或2滴）充分混匀（空白对照孔除外），覆盖粘胶纸，置37℃
孵育20分钟同上法洗反映板5次。
7.5、每孔加显色剂A液、B液各50ul（或1滴），充分混匀，贴上封口胶。37℃温育10分
钟。
7.8、每孔加入终止液50μl（或1滴），振荡反应板5秒钟，使之充分混匀。
7.9、在酶标读数仪中，取波长450nm（建议使用双波长酶标仪比色，参考波长630nm），先
以空白对照孔校零，读取每孔OD值（加终止液后，务必在15分钟内读数完毕）。
法规标准和操作规程
法规标准和操作规程 建筑施工行业有关安全方面标准规范法律法规 认真贯彻执行国家安全生产方针、政策、法律、法规，把安全工作列入企业管理的重要议事日程，并定期组织学习以下法律、法规和有关的政策： 1 中华人民共和国安全生产法 2 中华人民共和国道路交通安全法 3 中华人民共和国环境保护法 4 中华人民共和国建筑法 5 中华人民共和国劳动合同法 6 中华人民共和国食品安全法 7 中华人民共和国未成年人保护法 8 中华人民共和国消防法 9 中华人民共和国职业病防治法 10 重大事故隐患管理规定 11 危险化学品安全管理条例 12 特种设备安全监察条例 13 特种设备事故报告和调查处理规定 14 安全生产事故隐患排查治理暂行规定 15 安全生产违法行为行政处罚办法 16 《〈生产安全事故报告和调查处理条例〉罚款处罚暂行规定》 17 安全生产许可证条例
18 仓库防火安全管理规则 19 高危行业企业安全生产费用财务管理暂行办法 20 工伤保险条例 21 建筑起重机械安全监督管理规定 22 建设工程安全生产管理条例 23 火灾事故调查规定 24 危险性较大的分部分项工程安全管理办法 25 建筑安全监管体系分类与编码标准 26 建筑施工特种作业人员管理规定 27 建筑业企业职工安全培训教育暂行规定 28 工伤认定办法 29 安全机构设置及专职安全生产管理人员配备办法 30 特大安全事故行政责任追究的规定 31 女职工劳动保护规定 32 企业职工伤亡事故报告和处理规定 33 起重机械安全监察规定 34 消防监督检查规定 35 职工带薪年休假条例 36 职业病危害事故调查处理办法 37 职业病诊断与鉴定管理办法 38 气瓶安全监察规定 39 生产安全事故报告和调查处理条例
HIV检测方法
HIV 实验室诊断
人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)及其相关标志的检测是预防 HIV 感染和艾滋病临床治疗中重要的环节，在艾滋病的防治工作中具有重要作用，如艾滋病的 诊断、HIV 感染的诊断、血源及器官供体的筛选、流行病学调查、艾滋病病人及 HIV 感染 者的病情动态观察、临床治疗疗效考核以及 HIV 疫苗的安全性和效果鉴定等。 HIV 感染标志分为病毒标志、免疫标志和相关标志三大类。病毒标志是指直接从 HIV 感染者体内分离出病毒或检出 HIV 组成成分(抗原或核酸)。免疫标志是指 HIV 感染所产生 的 HIV 抗原、抗体等免疫物质。相关标志是指 HIV 感染后与艾滋病病情进展有密切关系的 某些标志，如 CD4 细胞、CD8 细胞，β2 微球蛋白、有关细胞因子等。这些标志的测定可 为 HIV 感染及临床疗效的考核提供极为重要的诊断、治疗和预后指征。目前 HIV 抗体的检 测是艾滋病实验室检测中最常用的方法，因为 HIV 抗体是患者感染 HIV 后最容易检出并且 持续时间最长的免疫学标志，而且抗体的检测方法大多简便、经济，易于推广应用。 在介绍各种 HIV 实验室诊断方法之前，为了使实验室工作人员能够有效地确保结果准 确、可靠、优质，我们必须对作为一种感染因子的 HIV 以及由它所导致的致命性危害有基 本的认识。实验室工作人员应特别注意病毒的结构、抗原组成，人体的免疫反应，诊断试 验的基本原理、试验结果的解释，以及为了准确而有效地提供实验诊断所必需的质量保证 措施。如果由于缺乏技术专长或基本知识而造成不正确的试验结果是不可原谅的。现将有 关内容扼要介绍如下： 一、人类免疫缺陷病毒(HIV)概述 （一） 年份 1981 艾滋病病原体的发现和命名 事 由 命 名
美国首先在洛杉矶男性同性恋中发现 5 例以 往很罕见的卡氏肺囊虫肺炎和 26 例卡波济氏 肉瘤患者，这些病人均表现有严重的免疫缺 陷，但原因不明。
1982 年将这种新的疾病命名为 “获得性免疫缺陷综合征” Acquired Immuno Deficiency
Syndrome，AIDS，即艾滋病 淋巴结病相关病毒 Lym phadenopathy Associated
1983
从艾滋病流行学资料分析很可能是由病毒引 起的。 法国巴斯德研究所 Montagnier 等首先从 多发性淋巴结病综合症病人分离到一种新的 逆转录病毒
Virus，LAV
1984
美国国立癌症研究所 Robert Gallo 等报道从艾 滋病病人活检组织分离到一种新的逆转录病 毒与其以前发现的 HTLV-1 和 HTLV-Ⅱ不同。
人类嗜 T 淋巴细胞Ⅲ型病毒 Human T-cell Lymphatropic Virus
typeⅢ，HTLV-Ⅲ AIDS Related Virus， ARV
1984
美国加州大学分离出艾滋病相关病毒
ELISA检测方法有哪些
ELISA检测方法有哪些？ 酶联免疫吸附测定（Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA）是研究蛋白抗体的重要方法。它是采用抗原与抗体的特异结合将被测物质与酶标抗体进行直接或间接结合，然后通过标记酶与底物产生颜色反应进行定性和定量分析。那么，它与其它检测方法的灵敏度及您了解吗？跟着小编往下看 ELISA通常分为四种类型：直接法、间接法、竞争法、夹心法等，直接上图： 直接法（Direct ELISA）仅需要抗原和酶标一抗，操作简便，可避免交叉反应，然而该方法要求酶标一抗有较高的特异性要求，同时也并非所有的一抗适合标记处理。直接法在实际运用中并不多见，它并不能对样本中抗体进行定量分析，因为样本中抗体是非酶标抗体，无法进行后续显色，但是该法经过改进就是竞争性ELISA方法，见后文。 间接法（Indirect ELISA）使用了二抗增加信号强度，也使抗体的选择多样化，然而间接法容易产生交叉反应。间接法只能用于测定抗体，主要用于疾病的诊断，其优点是只需要改变包被抗原，酶标抗体是通用的。 夹心法（Sandwich ELISA）分为双抗体夹心法和双抗原夹心法： 双抗体夹心法中抗原被两个抗体——捕捉抗体和检测抗体，结合于不同位点。捕捉抗体固定于载体上，检测抗体通过结合抗原进行显色分析。应用于双抗体夹心法检测的抗体需是单抗，而且对同一抗原结合位点不同，如此才能避免交叉反应或两种抗体竞争性结合同一位点。夹心法具有高灵敏度、高专一性的优势，但该法只适用于有多个结合位点的抗原检测，主要用于检测各种大分子抗原——例如在医学检测中测定HBsAg、HBeAg、AFP等。由于双抗体夹心法特异性高，在检测过程中有时会将样本和酶标抗体同时加入进行反应（一步法），此时如果样本中抗原含量过高会导致其与固相抗体和酶标抗体均有结合而不形成“夹心复合物”，
常用的单克隆抗体检测方法
常用的单克隆抗体检测方法 通过杂交瘤技术制备单克隆抗体，在杂交瘤制备完成后，需要对抗体进行一个检测，本文介绍了几种常用的抗体检测的方法（1）免疫酶技术免疫酶技术是将抗原抗体反应的特异性和酶对底物显色反应的高效催化作用有机结合而 成的免疫学技术。由于它特异性强，灵敏度高，现已广泛用于筛选和鉴定单抗。①器材和试剂a、包被缓冲液：碳酸盐缓冲液：取0.2mol/L Na2CO3 8ml，0.2mol/L NaHCO3 17ml 混合，再加75ml蒸馏水，调PH至9.6。Tris-HCl缓冲液（PH8.0，0.02mol/L）：取0.1mol/L Tris 100ml，0.1mol/L HCl 58.4ml混合，加蒸馏水至1000ml。b、洗涤缓冲液（PH7.2的PBS）：KH2PO4 0.2g，KCl 0.2g，Na2HPO4·12H2O 2.9g，NaCl 8.0g，Tween-20 0.5ml，加蒸馏水至1000ml。c、稀释液和封闭液：牛血清白蛋白（BSA）0.1g，加洗涤液至100ml；或用洗涤液将小牛血清配成5-10%使用。d、酶反应终止液（2mol/L H2SO4）：取蒸馏水178.3ml，滴加浓硫酸（98%）21.7ml。e、底物缓冲液（PH5.0，磷酸盐-柠檬酸缓冲液）：取0.2mol/L Na2HPO4 25.7ml，0.1ml/L柠檬酸24.3ml，再加50ml蒸馏水。柠檬酸溶液及配成的底物缓冲液不稳定，易形成沉淀，因此一次不宜配制过多。f、底物使用液：OPD底物使用液（测490nm的OD值）：OPD 5mg，底物缓冲液10ml，3% H2O2
0.15ml。TMBS或TMB底物使用液（测450nm的OD值）：TMBS或TMB（1mg/ml）1.0ml，底物缓冲液10ml，1% H2O2 25ul。ABTS底物使用液（测410nm的OD值）：ABTS 0.5mg，底物缓冲液1ml，3% H2O2 2ul。g、抗体对照：以骨髓瘤细胞培养上清作为阴性对照，以免疫鼠血清作为阳性血清。h、抗原：可溶性抗原：尽量纯化，以获得高特异性。病毒感染的传代细胞或全菌抗原。淋巴细胞等悬液。i、酶标抗鼠抗体或酶标SPA或其他类似试剂。j、细胞固定液：-20℃丙酮；或丙酮-甲醛固定液：Na2HPO4 100mg，KH2PO4 500mg，蒸馏水150ml，丙酮225ml，甲醛125ml；或丙酮-甲醛溶液（1；1）；或-20℃甲醇。k、聚苯乙烯微孔板：40孔、96孔、或条孔；硬板或软板均可使用。l、酶联免疫阅读仪；或光镜。m、吸管、加样器及水浴箱、离心机等。②可溶性抗原的酶联免疫吸附试验（ELISA）a、纯化抗原用包被液稀释至1-20ug/ml。 b、以50-100ul/孔量加入酶标板孔中，置4℃过夜或37℃吸附2小时。 c、弃去孔内的液体，同时用洗涤液洗3次，每次3-5分钟，拍干。 d、每孔加200ul封闭液4℃过夜或37℃封闭2小时；该步骤对于一些抗原，可省略。 e、洗涤液洗3次；此时包被板可-20℃或4℃保存备用。 f、每孔加50-100ul 待检杂交瘤细胞培养上清，同时设立阳性、阴性对照和空白对照；37℃孵育1-2小时；洗涤，拍干。 g、加酶标第二抗体，每孔50-100ul，37℃孵育1-2小时，洗涤，拍干。 h、加底物
规章制度和操作规程修订管理制度
1目的 为确保安全生产规章制度和安全操作规程的实用性和有效性，特制订本制度。 2适用范围 本制度适用于本公司安全生产规章制度和安全操作规程的管理。 3职责 3.1总经理 3.1.1负责组织对安全生产规章制度与安全操作规程进行评审与修改。 3.1.2负责安全生产规章制度与安全操作规程的审核、批准。 3.2安全员 3.2.1负责对安全生产规章制度与安全操作规程进行评审与修改。 3.2.2负责对安全生产规章制度与安全操作规程的整理和归档。 4制定的评审、修改、批准、发放 4.1评审与修改的时机 a.国家及各部委、行业的最新发布的法律、法规、标准，需增加或取代正在执行的法律、法规、标准； b.公司发生事故； c.工艺、技术、材料发生变更。 4.2评审 4.2.1每隔三年对公司的安全生产规章制度和安全操作规程的实用性和有效性进行审查，填写“安全生产规章制度评审表”。 4.2.2评审报告内容： a.评审的目的、范围、依据； b.评审小组成员； c.评审日期； d.安全生产规章制度与安全操作规程的实用性和有效性； e.安全生产规章制度与安全操作规程不符合事实及修改情况；
f.评审结论。 4.3修改 根据评审结论，对现行的安全生产规章制度和岗位安全操作规程进行实用性和有效性的修改；修改后的安全生产规章制度和岗位安全操作规程由各级各类人员进行会审后，报公司总经理批准实施。 4.4对与安全生产有关的国家、行业的最新版本文件、安全监察的有关规定等，进行统一管理并及时传达到相关人员落实；相关人员传阅后及时交还给安全员。 4.5发放 公司将最新修订的“安全生产规章制度”和“岗位安全操作规程”及时发放到相关的岗位、相关人员。 5制度的保存与作废 5.1安全员负责保管安全生产规章制度和岗位安全操作规程的原文（电子版或纸质原文）。 5.2所有失效或作废的安全生产规章制度和岗位安全操作规程由安全员负责从发放或使 用的各级各类人员处收回，加盖“作废”印章，确保防止作废的制度继续使用。 5.3因某种原因需保留的已作废的制度，应加盖“参考”继续识别。
艾滋病(HIV)检测方法汇总
艾滋病（HIV）检测方法汇总 一、艾滋病简介 艾滋病日的概念来源于1988年，全球卫生部大臣关于艾滋病预防计划的高峰 会议上(W orld Summit of Ministers of Health on Programmes for AIDS Prevention)提 出的。从此，这个概念被全球各国政府、国际组织和慈善机构采纳。从此，这个概念被全球各国政府、国际组织和慈善机构采纳。自1981年世界第一例艾滋病病 毒感染者发现至今，短短20多年间，艾滋病在全球肆虐流行，已成为重大的公共 卫生问题和社会问题，引起世界卫生组织及各国政府的高度重视。为号召全世界人民行动起来，团结一致共同对抗艾滋病，1988年1月，世界卫生组织在伦敦召开 了一个有100多个国家参加的“全球预防艾滋病”部长级高级会议，会上宣布每年的12月1日为“世界艾滋病日” (World Aids Day) ;1996年1月，联合国艾滋病规划署(UNAIDS)在日内瓦成立;1997年联合国艾滋病规划署将“世界艾滋病日”更名为“世 界艾滋病防治宣传运动”，使艾滋病防治宣传贯穿全年。 二、艾滋病（HIV）检测方法 (一)抗体检测 主要有酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫荧光试验(IFA)。ELISA用去污剂裂解HIV或感染细胞液提取物作抗原，IFA用感染细胞涂片作抗原进行抗体检测，如果 发现阳性标本应重复一次。为防止假阳性，可做Westernblot(WB，蛋白印迹法)进 一步确证。 WB法是用聚丙烯酰胺凝胶电泳将HIV蛋白进行分离，再经传移电泳将不同 蛋白条带转移于硝酸纤维膜上，加入病人血清孵育后，用抗人球蛋白酶标抗体染色，就能测出针对不同结构蛋白抗体，如抗gp120、gp41、P24抗体，特异性较高。 快速检测法，也称为金标法，也是抗体检测的一种方法，根据免疫层析法的原理，用于HIV抗体检测的定性检测。 (二)抗原检测 用ELISA检测P24抗原,在HIV感染早期尚未出现抗体时,血中就有该抗原存在.由于P24量太少,阳性率通常较低。现有用解离免疫复合物法或浓缩P24抗原， 来提高敏感性。
蛋鸡抗体检测实验室建设方法
蛋鸡抗体检测实验室建设方法 一、面积、台面、墙面 面积至少要有6平方，放置一张操作台（桌子，面要平，长1.5米，宽1米），一张凳子，墙用彩钢板隔开，制作一个门，保持空间独立。 二、器材 1、一台小高压锅，用于灭菌。 2、冰箱，用于盛放易耗品等。 3、离心机（5000转以下）一台，用于制作红细胞。 4、移液枪两把，一把为1毫升的，另一把为200微升的。 5、电子天平一台。 三、耗材 1、枪头，1毫升的及200微升的，各500个。 2、盛放枪头的盒子，两种规格，各5个。 3、Ependorf管100个，Ependorf管架2个。 4、葡萄糖瓶子10各。 5、量筒2个。 6、记号笔一支。 四、 血凝试验(HA) 定义：某此病毒或病毒的血凝素，能选择性地使某种或某几种动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝(hemagglutination，HA)，也称直接血凝反应，利用这种特性设计的试验称血凝试验 (HA) 血凝抑制试验(HI) 定义：当病毒的悬液中先加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制(hemagglutination inhibiion，HI)反应，也称血凝抑制反应，利用这种特性设计的试验称血凝试验 (HI) 。 原理：特异性抗体与相应病毒结合，使病毒失去凝集红细胞的能力，从而抑制血凝现象。 用于禽流感、新城疫等具有血凝性病毒的鉴定 根据抗原与相应抗体的特异性中和反应原理，给未知病毒悬液中加入已知的抗禽流感病毒阳性血清或已知的抗新城疫病毒阳性血清，相应病毒便丧失了其凝集红细胞的能力。因此，可利用从发病的鸡、鸭、鹅体内分离的病毒作HA和HI试验。病毒悬液能凝集红细胞，并且能被已知的抗血清（阳性血清）所抑制，那么该病毒即是已知阳性血清相对应的病毒。如用新城疫阳性血清完全抑制了未知病毒培养物的血凝性，那么，这个未知病毒培养物就是新城疫病毒；如果病毒悬液虽然能凝集鸡红细胞，但不能被鸡新城疫血清所抑制，说明不是鸡新城疫病毒，可能是其他有血凝性的病毒。 阿氏（Alsevers）液配制
建筑安全生产管理法律、法规标准和操作规程
建筑施工行业有关安全生产方面标准规范法律法规为认真贯彻执行国家安全生产方针、政策、法律、法规，我公司把安全工作列入企业管理的重要议事日程，并定期组织员工学习以下法律、法规和有关的政策： 1 中华人民共和国安全生产法 2 中华人民共和国道路交通安全法 3 中华人民共和国环境保护法 4 中华人民共和国建筑法 5 中华人民共和国劳动合同法 6 中华人民共和国食品安全法 7 中华人民共和国未成年人保护法 8 中华人民共和国消防法 9 中华人民共和国职业病防治法 10 重大事故隐患管理规定 11 特大安全事故行政责任追究的规定 12 生产安全事故信息报告和处置办法 13 生产安全事故报告和调查处理条例 14 安全生产事故隐患排查治理暂行规定 15 安全生产违法行为行政处罚办法 16 《〈生产安全事故报告和调查处理条例〉 罚款处罚暂行规定》
17 安全生产许可证条例 18 仓库防火安全管理规则 19 高危行业企业安全生产费用财务管理暂行办法 20 工伤保险条例 21 建筑起重机械安全监督管理规定 22 建设工程安全生产管理条例 23 火灾事故调查规定 24 危险性较大的分部分项工程安全管理办法 25 建筑安全监管体系分类与编码标准 26 建筑施工特种作业人员管理规定 27 建筑业企业职工安全培训教育暂行规定 28 建筑施工现场环境与卫生标准JGJ146一2004 29 安全机构设置及专职安全生产管理人员配备办法 30 施工企业安全生产评价标准JGJT77－2003 31 施工企业安全生产评价标准JGJ/T77－2003 32 企业职工伤亡事故报告和处理规定 33 起重机械安全监察规定 34 建筑施工人员个人劳动保护用品使用管理暂行规定 35 职工带薪年休假条例 36 职业病危害事故调查处理办法 37 职业病诊断与鉴定管理办法 38 气瓶安全监察规定
全国艾滋病检测技术规范(2015年修订版)
附件1 全国艾滋病检测技术规范 National Guideline for Detection of HIV/AIDS （2015年修订版） 中国疾病预防控制中心 二○一五年十二月
全国艾滋病检测技术规范National Guideline for Detection of HIV/AIDS （2015年修订版） 中国疾病预防控制中心 二○一五年十二月
前言 艾滋病在我国的流行已数十年，随着感染者和临床病人的不断增加、感染人群的变化，艾滋病检测工作量逐渐加大，对监测和检测的需求也不断增加，承担艾滋病检测的实验室已遍及全国各级医疗、疾病预防控制、采供血、妇幼保健机构，出入境检验检疫、军队等各个系统。为了尽早发现HIV感染者和艾滋病病人，及早提供咨询、治疗，同时为适应基层艾滋病检测工作需求，在新的形势下，根据《关于艾滋病抗病毒治疗管理工作的意见》、《中国预防与控制艾滋病中长期规划（1998—2010年）》、《中国遏制与防治艾滋病十二五行动计划的通知（国办发[2012]4号）》、“四免一关怀”等国家艾滋病防治重要方针政策和十三五防治工作重点，在广泛征求各省、市疾病预防控制机构和医疗机构意见的基础上，在中华人民共和国卫生和计划生育委员会艾滋病专家及省级专家的参与下，中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心对《全国艾滋病检测技术规范（2009年版）》进行修改、增补和完善，制定出《全国艾滋病检测技术规范（2015年版）》（以下简称《规范》），使其既能满足目前艾滋病检测工作的实际需求，又能体现检测技术的发展。 本次《规范》修订工作立足于我国目前检测状况，结合发达国家使用的指南，主要对以下几个方面内容进行了修改、增补和完善：（1）完善了不同的检测策略，并将其整合为独立的一章；（2）增加了HIV-1新
ELISA检测
ELISA检测 ----- 固相捕获法测IgM抗体 在病原体急性感染的诊断中，通常需检测IgM抗体，如急性甲型肝炎诊断的血清抗HAVIgM检测、急性乙型肝炎病毒感染的血清抗HBc lgM检测和TORCH项目的系列IgM检测等。IgM抗体也有使用间接法测定的，如目前在市场上可见到的有些TORCH系列的IgM检测试剂盒。在使用间接法测IgM抗体时，由于临床血清样本中含有高浓度的IgG抗体，其中部分特异IgG抗体将与IgM抗体竞争与固相抗原结合，从而干扰IgM抗体的检测。 因此，在使用间接法测定IgM抗体时，通常须将血清样本用抗人IgG抗体或SPA预处理，以去除IgG的干扰。这样不但测定较为繁琐，而且影响测定的特异性和灵敏度。目前，常用的IgM抗体检测方法为捕获法，即以抗人IgM抗体(抗人u链)作为固相抗体，当加入血清标本时，其中的IgM类抗体(特异的和非特异的)即可被固相抗体捕获，再加入特异抗原，其与固相上捕获的IgM抗体结合后，加入酶标抗特异抗原的抗体，最后加入底物显色。具体操作步骤如下： 1．首先将抗人IgMbt链抗体于碳酸盐缓冲液中40c下过夜包被聚苯乙烯等固相，形成固相抗体，洗涤去除未与固相结合或结合不紧的抗体后，用小牛血清或牛血清白蛋白等封闭，洗涤去除未结合的部分及杂质。 2．加入含待测IgM抗体的临床样本如血清等，温育一定时间后洗板；此时，待测样本中的IgM抗体就会与固相上的抗P链抗体反应而吸附于固相上。 3．加入特异的抗原如HAV抗原、HBcAg等，温育一定时间后洗板；此时，特异抗原就会与固相上的特异IgM抗体发生反应。 4．加入酶标记的抗特异抗原的抗体，温育一定时间后洗板；此时，在固相上即形成相应的抗原抗体复合物。 5．加入酶底物，温育显色测定 本方法要着重注意的是RF(1gM类)及其他非特异IgM的干扰。RF(1gM类)由于其能与固相抗人u 链抗体结合，并可与随后加入的酶标抗体(动物IgG)反应，从而导致假阳性反应。而非特异IgM由于其
ELISA检测方法
ELISA（酶联免疫吸附测定，enzyme linked immunosorbent assay）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。 基本原理： ①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。 ②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。 ③在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。 ④加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅有无定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。 双抗夹心法 夹心法常用于检测大分子抗原，一般的操作步骤为: ①将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体； ②加入待测检体，检体中若含有待测的抗原，则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结； ③洗去多余待测检体，加入另一种对抗原专一的一次抗体，与待测抗原进行键结； ④洗去多余未键结一次抗体，加入带有酶的二次抗体，与一次抗体键结； ⑤洗去多余未键结二次抗体，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或仪器读取呈色结果。 间接法 间接法常用于检测抗体，一般的操作步骤为： ①将已知的抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余的抗原。
②加入待测检体，检体中若含有待测的一次抗体，则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结。 ③洗去多余待测检体，加入带有酶的二次抗体，与待测的一次抗体键结。 ④洗去多余未键结二次抗体，加入酶底物使酶呈色，藉仪器（ELISA reader）测定塑胶盘中的吸光值（OD值），以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体的含量。 竞争法 竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原，其操作步骤为： ①将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体； ②加入待测检体，使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结； ③加入带有酶的抗原，此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结，由于塑胶孔盘上固著的抗体数量有限，因此当检体中抗原的量越多，则带有酶的抗原可键结的固著抗体就越少，亦即，两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗体键结，即所谓竞争法之由来。 ④洗去检体与带有酶的抗原，加入酶底物使酶呈色，当检体中抗原量越多，代表塑胶孔盘内留下之带有酶的抗原越少，显色也就越浅。 注：当需要侦测无法获得两种以上单一性抗体的抗原，或是不易得到足够的纯化抗体以固著于孔盘上时，一般会考虑使用竞争法ELISA。
艾滋病检测点标准操作规程(胶体金法)
HIV抗体检测标准操作规程（SOP文件） 1、目的： 为了规范本卫生院艾滋病检测点的正常运行，保证艾滋病抗体检测的准确，确保实验室生物安全，特制定本操作规程。 2、适用范围： 适用于本卫生院艾滋病抗体检测从标本的采集、处理、检测到报告的全过程。 3、职责： 各检测工作人员按标准操作规程进行艾滋病抗体检测，本院艾滋病检测工作领导小组负责对检测活动全过程及各项生物安全措施执行情况进行监督。 4、标准操作程序： 4.1样品的采集和处理 4.1.1样品的采集： 4.1.1.1血清样品采集：用真空采血管抽取5mL静脉血，室温下自然放置1-2小时，待血清凝固和血块收缩后在用4000rmp离心15min，吸出血清备用。 4.1.1.2抗凝血样品采集：用加有抗凝剂的真空管或用消毒注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管，反复轻摇，分离血浆和血细胞备用。 4.1.1.3采样注意事项： 4.1.1.3.1采集样品应按临床采血技术规范及试剂盒说明书要求进行。 4.1.1.3.2采集标本时应注意安全，直接接触HIV感染者或艾滋病病人血液和体液的操作应戴双层手套。 4.1.2样品的保存： 用于抗体检测的血清或血浆样品应存放与-20℃以下，短期（1周）内进行检测的样品可存放于2-8℃。 4.1.3样品的运送： 4.1.3.1实验室间传递的样品应为血清或血浆，除特殊情况外一般不运送全血。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类、采样时间。
4.1.3.2将试管放入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒。在试管的周围垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。 4.1.4样品的接收： 4.1.4.1含有感染性样品的包裹必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培训的工作人员打开，用后的包裹应进行消毒。 4.1.4.2核对标本与送检单，检查样品管有无破损及遗漏。如发现遗漏应立即将尚存留的样品移出、对样品管和盛器消毒，同时还要报告有关领导和专家。 4.2检验方法和步骤 4.2.2快速检测法（胶体金法） 4.2.2.1原理 采用胶体金免疫技术和层析原理，定性测定血清样本中的HIV1+2抗体。 4.2.2.2操作步骤 4.2.2.2.1将标本平衡至室温。 4.2.2.2.2将所需数量的测试卡从包装盒中拿出平衡至室温，打开铝箔包装袋，平置于台面上并编号（与样本编号相对应）。 4.2.2.2.3用微量加样器取试剂说明书规定的样本血清或血浆，加到测试卡的加样处。 4.2.2.2.4在试剂说明书规定的时间内观察结果。 4.2.2.3结果判定： 4.2.2.3.1阳性：在检测区和对照区位置出现两条紫红色条带。如果检测区的条带隐约可见，建议对该样本重复试验，并使用其他厂家的试剂确认。 4.2.2.3.2阴性：只在对照区出现一条紫红色条带。 4.2.2.3.3无效：对照区未出现紫红色条带。 4.2.2.3.4注意：在规定的时间内不论测试区内的色带颜色深浅与否均应判为阳性。 4.3仪器的使用和维护 4.3.1设立常用仪器的维护制度，以保证正常运转；根据使用情况更换必要的部件： 4.3.2冰箱 定期检查温度并作好记录，必须每天检查和记录冷冻和冷藏室的温度。 4.3.3定期检查其他仪器设备。 4.4 HIV抗体筛查结果的记录、解释与报告 4.4.1筛查试验呈阴性反应出具HIV抗体阴性报告。 4.4.2筛查试验呈阳性反应，可出具“HIV抗体待复检”报告，不能出阳性报告。同时应尽快进行以下处理： 4.4.2.1填写HIV抗体筛查报告，经检测者、复核者和签发者审核签字。 4.4.2.2尽可能重新采集受检者的血样。
艾滋病检测方法有什么
艾滋病检测方法有什么 艾滋病这种传染病一般是通过血液啊，母乳啊或者是性传播的方式传染来的，得了这种疾病的患者一般是治愈率还是比较低的，那么我们从生活中是否也对这方面的疾病有所了解呢，多了解一些关于艾滋病的知识可以更好的进行了解，也可以减少疾病的发生，而艾滋病检测方法有什么呢，很多人都不知道，我们来了解一下啊。 一、酶联免疫吸附试验（ELISA） 目前应用的ELISA法有8种之多。它们的特异性和敏
感性超过99%。 二、颗粒凝集法（PA） PA为快速、简便的一种筛选方法。如属阳性，应经WB 证实。PA不需任何特殊仪器，其结果用肉眼可判别。全过程仅需5分钟。缺点有假阳性，且价格昂贵。 三、快速试剂
(一)人类免疫缺陷病毒(HIV)1+2型抗体诊断试剂(胶体硒法) 雅培人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂(胶体硒法)是用于体外，肉眼观察，定性的免疫分析，检测血清或血浆中的HIV-1和HIV-2抗体，用于帮助受感染个体的HIV-1和HIV-2抗体。本品仅用于无偿献血员现场初筛及临床紧急情况的使用，本品检测阳性者，需进行进一步筛查确认。 (二)InstantCHEKTM-HIVl+2金标快速诊断试剂 InstantCHEKTM-HIV1+2是一种快速、简单、灵敏的检验方法，用以检测艾滋病病毒(HIV-1和HIV-2)的抗体。该方法
适用于初筛检测，凡由该试剂测定为阳性者，需用另一种方法检测如ELISA或用蛋白印记法确定。 四、HIV-抗体确认实验 免疫印迹试验（WB）、条带免疫试验（LIATEK HIVⅢ）、放射免疫沉淀试验（RIPA）及免疫荧光试验（IFA）。国内常用的确认试验方法是WB。 (一_免疫印迹实验(westernblot，WB)是广泛用于许多传染病诊断的实验方法，就HIV的病原学诊断而言，它是首选的用以确认HIV抗体的确认实验方法，WB的检测结果常常被作为鉴别其他检验方法优劣的“金标准”。
安全生产规章制度和操作规程
附件（三） 安全生产规章制度 和 操作规程
安全生产规章制度 目录 一、安全生产责任与目标管理企业各级安全生产责任制 二、公司安全生产奖惩考核制度 三、安全技术措施经费提取和使用制度 四、安全检查制度 五、设备管理和维修制度 六、消防安全管理制度 七、劳动防护用品发放制度 八、职工伤亡事故报告及处理制度 九、安全教育和培训制度 十、对分包单位和安全设施所需材料、设备及防护用品供应单位的管理制度
安全生产责任与目标管理 企业各级安全生产责任制 为了进一步加强企业安全生产管理，明确责任，层层负责，层层把关，根据《建筑法》、《安全生产法》、《建设工程安全生产管理条例》等国家法律法规，特制定企业安全生产责任制。 1．总经理安全生产责任制 1．1认真贯彻执行《中华人民共和国安全生产法》、《建设工程安全生产管理条例》及行业主管癌门的有关安全生产法律、法规及标准。 1．2领导和管理公司劳动保护、安全生产、文明施工工作，对公司的安全工作负领导和管理责任。 1．3批准公司年度安全技术措施计划和企业安全总目标，并督促实施。 1．4接受工会对安全生产的监督，定期报告企业安全生产工作情况和措施的执行情况，接受员工代表反映的情况。 1．5审批安全生产必需资金和劳动保护措施的专项资金，支持和审批职工参加各类安全生产教育培训工作。 1．6主持召开安全生产会议，及时协调、解决安全生产方面的重大问题，督促、检查、支持安全管理部门履行职责。 1．7对重大伤亡事故，亲自参与调查，严格按照“四不放过”的原则调查处理。 2．生产副总经理安全生产责任制 2．1认真贯彻执行《中华人民共和国安全生产法》、《建设工程安全生产管理条例》及行业主管部门的有关安全生产法律、法规及标准。
HIV抗体检测
第二章 HIV抗体检测 1 范围 本章规定了HIV抗体的检测方法、检测程序、检测报告及检测策略，适用于各级各类医疗机构、疾病预防控制机构、检验检疫机构、采供血机构及卫生保健机构。可作为对HIV感染者/AIDS 病人的诊断、报告和处理的实验室依据。 2 规范性引用文件 Revised recommendations for the selection and use of HIV antibody tests. WHO/UNAIDS Revised version 2001. 实验室生物安全通用要求（GB 19489-2004）。 3 HIV抗体检测实验室 应符合《全国艾滋病检测工作规范（1997年版）》中对检测实验室人员、建筑设施和设备等条件的要求。 应符合《实验室生物安全通用要求》（GB 19489-2004）对II级生物安全实验室（BSL-2）的各项要求。 实验室的质量保证按本规范第八章规定执行。 实验室安全防护按本规范第七章规定执行。 4 HIV抗体检测的目的和要点 4.1 HIV抗体检测的目的 4.1.1 HIV抗体检测可用于监测、诊断、血液筛查。 4.1.2 以监测为目的的检测是为了解不同人群HIV感染率及其变化趋势而进行的检测，检测的人群包括各类高危人群和一般人群。 4.1.3 以诊断为目的的检测是为了确定个体HIV感染状况而进行的检测，包括临床检测和自愿咨询检测、术前检测、根据特殊需要进行的体检等。 4.1.4 以血液筛查为目的的检测是为了防止输血传播HIV而进行的检测，包括献血员筛查和原料血浆筛查。 4.2 HIV抗体检测的要点 4.2.1 筛查试验阳性不能出阳性报告。 4.2.2 严格遵守实验室标准操作程序（SOP）。 4.2.3 严格按照试剂盒说明书操作。 4.2.4 注意防止样品间交叉污染。
艾滋病检测
艾滋病检测 包括筛查试验(含初筛和复检)和确证试验。HIV1/2抗体筛查方 法包括ELISA法、化学发光法或免疫荧光试验、快速检测(斑点ELISA和斑点免疫胶体金或胶体硒快速试验、明胶颗粒凝集试验、 免疫层析试验)等，确证试验常用的方法是免疫印迹法。 筛查试验呈阴性反应可出具HIV1/2抗体阴性报告，见于未被 HIV感染的个体，但处于窗口期的新近感染者筛查试验也可呈阴性 反应。若呈阳性反应，应用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂 家的试剂进行重复检测，或另外两种不同原理或不同厂家的试剂进 行重复检测，如两种试剂复测均呈阴性反应，则为HIV抗体阴性;如 有一种或两种试剂呈阳性反应，需进行HIV抗体确证试验。确证试 验无HIV特异性条带产生，报告HIV1/2抗体阴性。确证试验出现 HIV1/2抗体特异带，但不足以判定阳性，报告HIV1/2抗体不确定，可在4周后随访。如带型没有进展或呈阴性反应，则报告阴性;如随 访期间发生带型进展，符合HIV抗体阳性判定标准则为HIV抗体阳性，如带型仍不满足阳性标准，继续随访到8周。如带型没有进展 或呈阴性反应则报告阴性;满足HIV阳性诊断标准则报告阳性，不满 足阳性标准可视情况决定是否继续随访。经确证试验HIV1/2抗体阳 性者，出具HIV1/2抗体阳性确认报告，并按规定做好咨询、保密和 报告工作。 抗原检测：主要检测HIV1的P24抗原核心蛋白。感染早期和晚期，P24抗原以游离形式出现，多数情况下以抗原抗体复合物形式 存在。P24一般在感染后1-2周内即可检出，随P24抗体产生而减少。一般持续0.5-5个月，如持续存在或再度出现则提示预后不良。 HIV感染人体后，出现CD4+T淋巴细胞进行性减少，CD4+/CD8+T 细胞比值倒置，细胞免疫功能受损。如果进行HAART，CD4+T淋巴细 胞在病程的不同阶段可有不同程度的增加。目前常用的CD4+T淋巴 细胞亚群检测方法为流式细胞术，可以直接获得CD4+T淋巴细胞数
A法规标准和操作规程
建筑施工行业有关安全方面标准规范法律法规 认真贯彻执行国家安全生产方针、政策、法律、法规，把安全工作列入企业管理的重要议事日程，并定期组织学习以下法律、法规和有关的政策： 1 中华人民共和国安全生产法 2 中华人民共和国道路交通安全法 3 中华人民共和国环境保护法 4 中华人民共和国建筑法 5 中华人民共和国劳动合同法 6 中华人民共和国食品安全法 7 中华人民共和国未成年人保护法 8 中华人民共和国消防法 9 中华人民共和国职业病防治法 10 重大事故隐患管理规定 11 危险化学品安全管理条例 12 特种设备安全监察条例 13 特种设备事故报告和调查处理规定 14 安全生产事故隐患排查治理暂行规定 15 安全生产违法行为行政处罚办法 16 《〈生产安全事故报告和调查处理条例〉罚款处罚暂行 规定》 17 安全生产许可证条例 18 仓库防火安全管理规则
19 高危行业企业安全生产费用财务管理暂行办法 20 工伤保险条例 21 建筑起重机械安全监督管理规定 22 建设工程安全生产管理条例 23 火灾事故调查规定 24 危险性较大的分部分项工程安全管理办法 25 建筑安全监管体系分类与编码标准 26 建筑施工特种作业人员管理规定 27 建筑业企业职工安全培训教育暂行规定 28 工伤认定办法 29 安全机构设置及专职安全生产管理人员配备办法 30 特大安全事故行政责任追究的规定 31 女职工劳动保护规定 32 企业职工伤亡事故报告和处理规定 33 起重机械安全监察规定 34 消防监督检查规定 35 职工带薪年休假条例 36 职业病危害事故调查处理办法 37 职业病诊断与鉴定管理办法 38 气瓶安全监察规定 39 生产安全事故报告和调查处理条例 40 生产安全事故信息报告和处置办法
常用的HIV诊断方法
HIV/AIDS艾滋病诊断是一个十分严肃的问题，任何诊断的错误结果无论是假阴性还是假阳性，对家庭和社会都会造成十分严重的后果。HIV检测是诊断HIV感染及艾滋病的重要实验室依据之一，要知道是否感染了HIV可以通过检测病毒的抗体、抗原、核酸或通过病毒培养来确定。常用于诊断HIV/AIDS的方法是HIV抗体检测，它是诊断HIV/AIDS的主要指标，也是世界卫生组织和我国卫生部推荐使用的HIV感染诊断方法。为了最大限度地保证诊断结果准确，HIV诊断采用特殊的检测策略，即先用敏感性高的初筛试剂进行初筛，如果阳性再用特异性强的确认试剂进行确认。检测HIV抗体常用的初筛方法有酶联免疫吸附试验(ELISA)、凝集试验和各种快速诊断方法，确认的方法有蛋白印迹法(WB)、放射免疫沉淀试验(RIP)、间接免疫荧光试验(IFA)等。一般先用ELISA做初筛试验;如果阳性，再用蛋白印迹法来确认。以下介绍一下较常用的HIV抗体测定的方法。 一．初筛试验方法 1．酶联免疫吸附试验（ELISA） 酶联免疫吸附试验简称酶标法，是最常用初筛检测方法，在HIV抗体的测定中有四种模式：间接法、双抗原夹心法、捕获法和竞争法，其中以间接法用的最多。 1）间接法：将HIV抗原纯化后固定于微孔板上，然后加入待测标本，清洗后加酶标记抗人免疫球蛋白（IgG），清洗后加入底物，产生有色反应即为阳性。（见图1） 2）双抗原夹心法：将HIV抗原固定于微孔板上,然后加入待测标本，清洗后加入酶标记的HIV抗原，清洗后加入底物，产生有色反应即为阳性。（见图2）
3）捕获法：将非特异性的兔抗人免疫球蛋白抗体固定于微孔板上，然后加入待测标本,清洗后加入酶标记的HIV抗原，清洗后加入底物，产生有色反应即为阳性。（见图3） 4）竞争法：：将HIV抗原固定于微孔板上,然后同时加入待测标本和一定数量的酶标HIV抗体，如果标本中有HIV抗体,即与加入的酶标HIV抗体竞争结合固定在微孔板上的抗原，标本中HIV抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体就愈少，清洗后加入底物。结果判断与间接法相反，产生有色反应即为阴性，无色反应的为阳性（见图4）
艾滋病检测方法有哪些 如何检测艾滋病
艾滋病检测方法有哪些如何检测艾滋病 一提起艾滋病，很多人都会避而远之，“谈艾色变”是很多人的第一反应。一些人怀疑自己感染了艾滋病，每天生活在恐惧与压力中，苦不堪言，这是人们对艾滋病相关知识缺乏了解所致。其实，艾滋病检测并不神秘，是一种非常普通与常见的检查。 艾滋病主要的检测方法： (一)抗体检测 主要有酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫荧光试验(IFA)。快速检测法，也称为金标法，也是抗体检测的一种方法，根据免疫层析法的原理，用于HIV抗体检测的定性检测。 (二)抗原检测 用ELISA检测P24抗原,在HIV感染早期尚未出现抗体时,血中就有该抗原存在.由于P24量太少,阳性率通常较低。现有用解离免疫复合物法或浓缩P24抗原，来提高敏感性。 (三)核酸检测 用PCR法检测HIV基因，具有快速、高效、敏感和特异等优点，目前该法已被应用于HIV感染早期诊断及艾滋病的研究中。 (四)病毒分离 常用方法为共培养法，即用正常人外周血液分离单个核细胞，加PHA刺激并培养后，加入病人单个核细胞诊断及艾滋病的研究中。 艾滋病常用的检测方法： (一)酶联法 即“酶联免疫法”，简称ELISA。它的中心就是让抗体与酶复合物结合，然后通过显色来检测。步骤其实很简单：ELISA用血清来检测，首先血液要经过至少半个小时的凝集，然后取血清(这是有些网友不理解为什么医院抽完了血对血置之不理的原因，其实是误会)。将酶复合物用稀释液稀释后，加血清及阴性、阳性对照，还有就是质控品(这是严格的要求，它的范围必须在质控范围内)。经过一个小时的孵育，然后洗板，加底物，半个小时避光反应后加终止液即完成反应部分，然后就是读数。由数值来判断结果的阴性或阳性。严格的讲，如果第一次检测为阳性的话，无论是哪个实验室，必须按照CDC的HIV操作规程来进行第二次检测，第二次的方法必须与第一次的不同，如还是阳性，将送艾滋病确认实验室确认。 (二)快速法 即“金标法”，又叫“胶体金法”，金标法是国际上较为先进的灵敏，特异，快速，简便，准确率高的体外诊断方法。测定结果仅凭特制的检测试纸在短时间内即可获得。金标法(艾滋病检测试纸)，取血后滴在试纸上，用15分钟的时间观察该试纸有无颜色变化。 艾滋病快速检测法可以在家里自己检测，操作简单方便，不需要特殊的仪器，在艾滋病试纸上先滴两滴血，再滴一滴稀释液，然后等待15分钟读取结果。结果判读也很简单，如果试纸上出现一条红色的直线，说明是阴性，如果是两条红线，就是阳性。如果检测出现阳性，按照HIV检测流程，需要进行复测。 使用快速法(艾滋病试纸)进行艾滋病自我检测应该在专业人员指导下进行，以确保整个自测操作过程规范正确，结果准确可靠。 (三)蛋白免疫印迹法(WB) 艾滋病确诊实验室常用的方法，主要用于确认试验，当初筛出现阳性时，需采用此方法进行确认实验。基本原理是HIV全病毒抗原经过SDS?PAGE电泳,将分子量大小不等的蛋白带分离开来,然后再把这些已经分离的不同蛋白带电转移到硝酸纤维素膜上。将此膜切割成条状,每一条硝酸纤维素膜上均含有经电泳分离过的HIV病毒抗原。将待检血清样品用稀释液稀释成1/100,再把它直接加到硝酸纤维素膜上,恒温震荡,