氨基酸(amino acid, AA)含量测定试剂盒使用说明

氨基酸(amino acid, AA)含量测定试剂盒使用说明
氨基酸(amino acid, AA)含量测定试剂盒使用说明

氨基酸(amino acid,AA)含量测定试剂盒使用说明

分光光度法注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号:BC1570

规格:50T/48S

产品内容:

试剂一:液体×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体×1瓶,4℃保存。

试剂三:粉剂×1瓶(棕色),4℃避光保存。临用前加入2mL无水乙醇,盖紧后充分混匀,再加入28mL蒸馏水混匀,避光保存。

试剂四:粉剂×1管,4℃避光保存。临用前加10mL蒸馏水,充分溶解。

标准品:液体×1支,1μmol/mL标准液,4℃避光保存。

产品说明:

动物肝脏、肾脏是氨基酸代谢的主要器官,故尿中氨基酸的变化最能反应肝、肾的生理状态。另外,氨基酸还能反应灼伤、伤寒等方面情况。植物体内氨基酸含量对研究植物在不同条件下及不同生长发育时期氮代谢变化、植物对氮素的吸收、运输、同化及营养状况等有重要意义。

氨基酸的α-氨基可与水合茚三酮反应,产生蓝紫色化合物,在570nm有特征吸收峰;通过测定570nm吸光度,来计算氨基酸含量。

自备仪器及用品:

台式离心机、水浴锅、紫外分光光度计、1ml玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵、无水

乙醇、冰和蒸馏水。

操作步骤:

一、样品中AA提取:

1.按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL

试剂一)进行室温匀浆,然后转移到1.5mL EP管中,盖紧后(防止水分散失)置于沸水浴提取15min;自来水冷却后,8000g,,4℃离心10min,上清液置冰上待测。

2.细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量

(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

3.血清等液体:直接检测。

二、测定操作:

1.分光光度计预热30min,调节波长到570nm,蒸馏水调零。

2.空白管:取EP管,加入50μL蒸馏水,500μL试剂二,500μL试剂三和50μL试剂四,混匀后盖紧瓶盖(防止水分散失),置于沸水浴中保温15min,冷却后反复颠倒EP管数次,于570nm测定吸光值,记为A空白管。显色后务必在30min内测完。

3.标准管:取EP管,加入50μL标准品,500μL试剂二,500μL试剂三和50μL试剂四,混匀后盖紧瓶盖(防止水分散失),置于沸水浴中保温15min,冷却后反复颠倒EP管数次,于570nm测定吸光值,记为A标准管。显色后务必在30min内测完。

4.测定管:取EP管,加入50μL上清液,500μL试剂二,500μL试剂三和50μL试剂四,混匀后盖紧瓶盖(防止水分散失),置于沸水浴中保温15min,冷却后反复颠倒EP管数次,

于570nm测定吸光值,记为A测定管。显色后务必在30min内测完。

注意:空白管和标准管只需要测定一次。

三、氨基酸含量计算公式:

(1)按蛋白浓度计算

氨基酸含量(μmol/mg prot)=[C标准品×V标准品×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)]÷(V样×Cpr)=1×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)÷Cpr

(2)按样本质量计算

氨基酸含量(μmol/g)=[C标准品×V标准品×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)]÷(V样总÷V样)÷W=1×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)÷W

(3)按细胞数量计算

氨基酸含量(μmol/104cell)=[C标准品×V标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×(V样总÷V样×细胞数量)=1×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷细胞数量

(4)按照液体体积计算

氨基酸含量(μmol/mL)=[C标准品×V标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]÷V样=1×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)

C标准品:标准品浓度,1μmol/mL;V标准品:反应体系中加入标准品体积,0.05mL;W:样品质量,g;V样:反应体系中加入样品提取液体积,0.05mL;V样总:样品提取液总体积,1mL;;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL。

注意事项:

1.试剂盒中试剂三和试剂四均需临用前配制,且避光保存,配制好未使用完的4℃保存且

3天内使用完毕。

2.为保证实验结果的准确性,需先取1-2个样做预实验,如果测定的吸光值过高(高于2.5),

用蒸馏水稀释后再测定。

3.脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应在570nm处无吸收峰,因此,570nm处测定结果不含这

两种氨基酸的量。

氨基酸态氮的测定

FSPTWPJY003 酱油 氨基酸态氮的测定 中和滴定法 F_SP _TWP_JY _003 酱油—氨基酸态氮的测定—中和滴定法 1 范围 本方法采用滴定法测定酱油中氨基酸态氮的含量。 本方法适用于各种类型酱油中氨基酸态氮含量的测定。以g/100mL 报告其结果,测定值保留两位小数。 2 原理 利用氨基酸的两性作用,加入甲醛以固定氨基的碱性,使羧基显示出酸性,用氢氧化钠标准溶液滴定后定量,以酸度计测定终点。 3 试剂 3.1 甲醛溶液,体积百分数为37~40。 3.2 氢氧化钠标准溶液,c (NaOH)=0.1mol/L 3.2.1 配制 将氢氧化钠配成饱和溶液,注入塑料瓶(或桶)中,封闭放置至溶液清亮,使用前虹吸上层清液。量取5mL 氢氧化钠饱和溶液,注入1000mL 不含二氧化碳的水中,混匀。 3.2.2 标定 称取0.6g 于105~110℃烘至恒量的基准邻苯二甲酸氢钾,精确至0.0001g 。溶于50mL 不含二氧化碳的水中,加入2滴酚酞指示剂溶液,以新制备的氢氧化钠标准溶液滴定至溶液呈微红色为其终点。同时做空白试验。 3.2.3 计算 按下式计算氢氧化钠标准溶液的浓度: C =2042 .0)(1×?V V m 式中:C —氢氧化钠标准溶液浓度,mol/L ; m —基准邻苯二甲酸氢钾的质量,g ; V —滴定时所消耗氢氧化钠溶液的体积,mL ; V 1 —空白试验消耗氢氧化钠溶液的体积,mL ; 0.2042—与1.00mL 氢氧化钠标准溶液[c (NaOH)=1.000mol/L]相当的,以克表示的 邻苯二甲酸氢钾的质量。 3.3 氢氧化钠标准滴定溶液,c (NaOH)=0.05mol/L 将配制的0.1mol/L 氢氧化钠标准溶液准确稀释一倍。 4 仪器 4.1 分析天平,感量0.1mg 。 4.2 酸度计,附磁力搅拌器; 4.3 碱式滴定管,25mL 。 5 操作步骤 5.1 仪器校准 按仪器使用说明书校正pH 计,并注意校正温度使其与测定时保持一致。 将玻璃电极和甘汞电极事先用pH 9.22标准缓冲溶液校准。 5.2 样品的测定 吸取酱油样品5.0mL 置于100mL 容量瓶中,加水至刻度,混匀后吸取20.0mL ,置于200mL 烧杯中,加水60mL ,插入玻璃电极和甘汞电极,开动磁力搅拌器,用氢氧化钠标准滴定溶液

丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定试剂盒(丙氨酸底物法)产品技术要求sainuopu

丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定试剂盒(丙氨酸底物法) 适用范围:用于体外定量测定人体血清中丙氨酸氨基转移酶的活性。1.1 试剂盒包装规格 试剂1:1×25ml,试剂2:1×5ml;试剂1:2×60ml,试剂2:2×12ml; 试剂1:3×40ml,试剂2:3×8ml;试剂1:4×60ml,试剂2:4×12ml; 试剂1:2×400ml,试剂2:1×160ml;试剂1:2×40ml,试剂2:2×8ml。 1.2 试剂盒主要组成成分 2.1 外观 试剂1:无色液体;试剂2:无色液体。 2.2 净含量 液体试剂的净含量不得低于标示体积。 2.3 试剂空白 2.3.1试剂空白吸光度 在37℃、340nm波长、1cm光径条件下,试剂空白吸光度应不小于1.0。 2.3.2试剂空白吸光度变化率 在37℃、340nm波长、1cm光径条件下,试剂空白吸光度变化率(ΔA/min)应不大于0.004。

2.4 分析灵敏度 测定活性为50U/L样本时,吸光度变化率(ΔA/min)应不小于0.014。 2.5 线性范围 在(0,600)U/L线性范围内,线性相关系数r不小于0.990。在(100,600)U/L 范围内的线性相对偏差不大于±10%;测定结果(0,100]U/L时线性绝对偏差不大于±10 U/L。 2.6 重复性 重复测试两份高低浓度的样本,所得结果的变异系数(CV%)应不大于5%。 2.7 批间差 不同批号试剂测试同一份样本,测定结果的批间相对极差应不大于6%。 2.8 准确度 相对偏差:相对偏差应不超过±15%。 2.9 稳定性 效期稳定性:试剂盒在2℃~8℃下有效期为12个月,取失效期的试剂盒进行检测,试验结果应满足2.1、2.3、2.4、2.5、2.6、2.8要求。

血清铁浓度检测试剂盒说明书

货号:MS2802 规格:100管/96样 血清铁浓度检测试剂盒说明书 微量法 注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义: 血清铁是指血液中转铁蛋白所结合的铁,该指标常用于鉴别缺铁性与非缺铁性贫血。 测定原理: 亚硫酸钠还原血清Fe3+生成成Fe2+,Fe2+进一步与2, 2’- 联吡啶显色,在520nm处有吸收峰,测定该波长光吸收值即可计算血清铁含量。 自备实验用品及仪器: 离心机、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、冰醋酸、氯仿和蒸馏水。 试剂组成和配置: 试剂一:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前配制,加入15mL蒸馏水充分溶解。 试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前配制,加入469μL冰醋酸,加入15mL蒸馏水充分溶解。 标准液:液体×1 支(EP管),100μmol/L Fe3+标准液,4℃保存。 测定: 1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到520nm,蒸馏水调零。 2. 标准液解冻:提前取出标准液,置于室温下充分解冻后混匀。 3. 空白管:取EP管,依次加入125μL蒸馏水,125μL试剂一,125μL试剂二,混匀后盖紧, 置于沸水浴5min,自来水冷却。加入62μL氯仿(自备),充分震荡混匀;室温10000rpm,离心10min,小心吸取上层液210μL,加入微量石英比色皿/96孔板,于520nm 测定吸光度,记为A空白管。 4. 标准管:取EP管,依次加入125μL标准液,125μL试剂一,125μL试剂二,混匀后盖紧, 置于沸水浴5min,自来水冷却。加入62μL氯仿,充分震荡混匀;室温10000rpm,离心10min,小心吸取上层液210μL,加入微量石英比色皿/96孔板,于520nm测定吸光度,记为A标准管。 5. 测定管:取EP管,依次加入125μL血清,125μL试剂一,125μL试剂二,混匀后盖紧,置 于沸水浴5min,自来水冷却。加入62μL氯仿,充分震荡混匀;室温10000rpm,离心10min,小心吸取上层液210μL,加入微量石英比色皿/96孔板,于520nm测定吸光度,记为A测定管。注意:空白管和标准管只需测定一次。 血清铁浓度计算公式: 血清铁含量(μmol/dL)=[C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×V 总=10× (A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管) C 标准液:100 μmol/L Fe 3+ 标准液;V 总:1 dL=0.1 L。 注意事项: 1、血清铁含量少,所用器皿(EP 管)需要注意,避免被铁污染。 2、试剂一和试剂二溶液不稳定,需现配现用,新配制的试剂只能当天使用。 3. 最低检出限为1μmol/L。 第1页,共1页

氨基酸测定方法

4.1 光度分析法[5] [6] β-氨基丙酸和茚三酮溶液在弱酸的条件下可以生成蓝紫色物质[7],其颜色深浅主要与β-氨基丙酸的浓度有关。因此可利用此显色反应采用比色法定量测量β-氨基丙酸。我在实验中发现很多因素如浓度、pH 值、反应温度、以及反应时间等对此显色反应有很大的影响。如忽视这些因素会使实验产生很大的误差。就此显色反应的最佳条件我做了初步的探究。 4.1.1试剂的配制: 缓冲液的配制:配制pH= 6.00的NaAc -HAc 缓冲溶液 β-氨基丙酸标准溶液的配制: 用电子天平准确称取1.020 g β-氨基丙酸(生化纯),溶于250ml pH=6.00缓冲溶液中,得到C = 4.080 g/L 标准溶液。 茚三酮试剂的配制:称取0.5g 茚三酮溶于100ml 蒸馏水中,得到5g/L 的茚三酮水溶液。 4.1.2标准曲线的确定 分别准确移取0.30ml 、0.40ml 、0.50ml 、0.60ml 、0.70ml 、0.80ml 、0.90ml 、1.00ml 标准液于8个比色管中,用pH=6.00的缓冲溶液稀释到5.00ml 再加入1ml 茚三酮水溶液充分摇匀,将其放在沸水浴中加热10min 。冷却到室温,用7230型分光光度计在569nm 下测其吸光度。以吸光度和浓度作一个标准曲线。 4.1.3样品的测定 稀释待测液于0.24mg/ml —0.73mg/ml,调pH 值到6.00,以相同的反应条件,测其吸光值并与上面的标准曲线对照查出稀释液的浓度,再乘以稀释倍数即为β-氨基丙酸的浓度。 4.1.4 标准曲线的测定结果 β-氨基丙酸浓度在0.24mg/ml —0.73mg/ml 范围内与茚三酮水溶液反应,颜色表现出由浅蓝到深蓝的递增变化。用茚三酮比色法测得的一组数据得到的标准曲线如图1: 0.20.30.40.50.60.70.80.9 1.0 1.1 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 吸光度加入标液体积(ml) B 图 1 标准曲线的测定 Fig 1 Determination of the standard curve 注:在沸水中加热10min ,β-氨基丙酸标准溶液5ml 、茚三酮水溶液1ml 、缓冲溶液pH=6.00 4.1.5样品的测定分析 将待测的一批稀释50倍,母液稀释的程度可以根据以与标准溶液在相同的

酱油中氨基酸态氮含量的测定

酱油中氨基酸态氮含量的测定 摘要:本次实验用甲醛值法来测定酱油中氨基酸态氮的含量,甲醛值法滴定的终点容易判断。 关键词:酱油氨基酸态氮空白实验 前言:酱油是中国传统的调味品。主要由大豆、小麦、食盐经过制油、发酵等程序酿制而成的,色泽红褐色,有独特酱香,滋味鲜美。酱油的鲜味和营养价值取决于氨基酸态氮含量的高低,一般来说氨基酸态氮越高,酱油的等级就越高,也就是说品质越好。按照我国酿造酱油的标准,配制酱油每100ml中氨基酸态氮含量应≥0.4g 实验目的:1.掌握氨基酸态氮的测定原理2.了解酸碱滴定法在食品分析中的应用和学会判断有色溶液终点确定的方法 实验原理:氨基酸有氨基及羧基两种基团,具有酸碱两性,他们相互作用形成中性的内盐。加入甲醛溶液,氨基与甲醛作用,碱性消失,使羧基的酸性显现出来,用氢氧化钠标准溶液进行中和滴定,根据滴定用的氢氧化钠标准溶液的体积可计算出氨基酸态氮的含量。甲醛与氨基酸的反应如下: 实验仪器和药品:酸度计,电磁搅拌器,100ml容量瓶,5ml、20ml移液管,10ml 酸式滴定管,100ml量筒,100ml烧杯,250ml烧杯,NaOH固体(A.R.),邻苯二甲酸氢钾(A.R.),酚酞指示剂,分析天平,洗耳球,500ml橡胶或软木塞细口试剂瓶,250ml

锥形瓶(3个),50ml碱式滴定管,铁架台,酒精灯,石棉网,滴定管,温度计,玻璃棒,甲醛溶液w=36%,标准缓冲溶液(pH=6.86和pH=9.18),酱油,蒸馏水 1.0.05mol/LNaOH溶液的粗配:用天平迅速称量约0.6g固体NaOH放到烧杯中,用适量的新制的蒸馏水溶解稀释至300ml,盛于带橡胶塞或软木塞的试剂瓶中。 2.NaOH溶液的标定:用直接称量法准确称取邻苯二甲酸氢钾1.0~1.1g(称准至0.1mg)于洁净的250ml烧杯中,加入20~30ml蒸馏水,温热使之溶解,冷却至室温,定量转移定容于100ml容量瓶中,用移液管移取20ml于250ml锥形瓶中,加酚酞指示剂2滴,用NaOH溶液滴定至溶液呈现粉红色,30s内不褪色为终点,平行滴定3次。 酸度计的准备:酸度计先开机预热30分钟,将开关拨至PH位置,按“温度”键,调到室温,30分钟后,将电极插入PH=6.86的缓冲溶液中,调“定位”,用蒸馏水清洗并用纸吸干,再将电极插入PH=9.18的溶液中,调“斜率”,用蒸馏水清洗并吸干实验操作步骤:1. 准确吸取酱油5.0ml置于100ml容量瓶中,加水至刻度,摇匀后吸取20.0ml置于100ml烧杯中,加水60ml,插入酸度计,开动磁力搅拌器,用配好的NaOH标准溶液滴定酸度计指示pH=8.2,记录消耗氢氧化钠标准溶液的体积V(ml)2. 向上述溶液中准确加入甲醛溶液10.0ml,摇匀,继续用NaOH标准溶液滴定至pH=9.2,记录消耗氢氧化钠标准溶液的体积(ml),供计算氨基酸态氮含量用。3. 试剂空白试验:取蒸馏水80ml置于另一200ml洁净烧杯中,先用的氢氧化钠标准溶液滴定至pH=8.2,再加入10.0ml甲醛溶液,继续用NaOH标准溶液滴定酸度计指示pH=9.2,第二次所用的氢氧化钠标准溶液的体积V0为测定氨基酸态氮的试剂空白试验。 结果与计算: (V-V0)C×0.014×V2 X= ×100 1000×V3×V1 V——测定用的样品稀释液加入甲醛后消耗氢氧化钠标准溶液的体积,ml; V1——样品稀释液取用量,ml

血钙浓度检测试剂盒说明书 微量法

血钙浓度检测试剂盒说明书微量法 注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。货号:BC0725规格:100T/96S 产品内容: 试剂一:液体5mL×1瓶,4℃保存。试剂二:液体5mL×1瓶,4℃保存。 试剂三:液体×1瓶(空瓶,试剂自备)。取15mL 试剂瓶,依次加入9mL 无水甲醇和1mL 丙酮,盖紧混匀即可。 标准液:液体0.5mL×1支,2μmol/mL CaCl 2?2H 2O 溶液,4℃保存。临用前进行5倍稀释得到0.4μmol/mL 标准溶液。产品说明: 血钙几乎全部存在于血浆中,所以血钙主要指血浆钙。血浆钙有离子钙和结合钙两种形式,其中只有离子钙直接起生理作用,它与结合钙处于动态平衡,并受血液pH 的影响。血钙水平与多种重要的生理功能相关,过高或过低都会影响正常生理功能。本试剂盒用于检测血液中游离钙浓度。 在强碱溶液中游离钙与GBHA 反应生成红色钙-GBHA 复合物,在520nm 有吸收峰;通过测定520nm 吸光度,计算游离钙浓度。自备仪器和用品: 可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、无水甲醇、丙酮和蒸馏水。操作步骤: 1.分光光度计/酶标仪预热30min 以上,调节波长到520nm,蒸馏水调零。 2.加样表: 名称(μL) 空白管标准管测定管血浆--12蒸馏水12--0.4μmol/mL 标品 -12 -

试剂一505050 试剂二505050 试剂三100100100混匀;静置5min后于520nm测定吸光度A,记为A测定管、A空白管、A对照管。血钙浓度计算: 血钙含量(μmol/dL)=[C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×100 =40×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管) C标准液:0.4μmol/mL;100:单位换算系数,1dL=100mL。 注意事项: 1、宜早晨空腹采血,并且采血后应该尽快完成测定; 2、尽量在10min内完成测定; 3、因反应完成后需尽快测定,使用微量比色皿时,建议每批次测定5-10个样本; 4、若A测定管高于0.8,建议用蒸馏水稀释后测定。

血氨含量检测试剂盒说明书 可见分光光度法

血氨含量检测试剂盒说明书可见分光光度法 注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 货号:BC4380 规格:50T/48S 产品简介: 血氨主要来源是内源性氨和外源性氨。氨在血中保持恒定状态,即血氨的来源和去路保持动态平衡。氨是有毒物质,主要在肝脏行代谢解毒。当肝功能严重损害时,氨不能被解毒。氨在中枢神经系统聚集,从而导致肝性脑病。 本法根据氨的靛酚兰反应原理,通过蛋白沉淀剂将血清(浆)中蛋白沉淀后,利用酚-次氯酸盐直接显色法测定血氨,生成的蓝色靛酚和氨的浓度成正比,在630nm处有特殊吸收峰,据此可由吸光值计算出样品中血氨的含量。 试验中所需的仪器和试剂: 可见分光光度计、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、蒸馏水、EP管。产品内容: 提取液一:液体40mL×1瓶,4℃保存; 提取液二:液体40mL×1瓶,4℃保存; 试剂一A液:液体7mL×1瓶,4℃保存; 试剂一B液:液体28mL×1瓶,4℃保存;临用前将A液与B液按照体积比1:4混匀,根据试验所需量现配现用; 试剂二:液体35mL×1瓶,4℃保存; 标准品:液体1mL×1支,100μmol/ml氮标准液。 操作步骤: 一、适用范围 本试剂盒可测各种动物血清(浆)等样本中血氨的含量; 二、测定步骤:

1、分光光度计预热30min以上,调节波长至630nm,蒸馏水调零。 2、标准品的准备:将100μmol/mL的氮标准液用蒸馏水稀释至10、8、6、4、2、1、0.5、0μmol/mL的标 准溶液备用。 3、操作表:(在1.5mL EP管中操作) 试剂名称(μL)空白管测定管标准管 血清(浆)200 标准品稀释液200 蒸馏水200 提取液一500500500 提取液二500500500 充分混匀,3500rpm离心10min,取上清待测 上清液400400400 试剂一400400400 试剂二400400400 充分混匀,37℃水浴20min 取1mL反应液,于1mL玻璃比色皿中测定630nm处吸光值A,分别记为A空白管、A测定管、A标准管。计算ΔA=A测定管-A空白管,ΔA标准=A标准管-A空 白管。 三、血氨含量含量计算 1、标准曲线的绘制: 以各个标准溶液的浓度为x轴,其对应的ΔA标准为y轴,绘制标准曲线,得到标准方程y=kx+b,将ΔA带入方程得到x(μmol/mL) 2、血氨含量的计算: 血氨含量(μmol/mL)=x×V样÷V样=x。 V样:加入的样品体积,0.2mL。 注意事项 1.同一批检测样本需配1-2个空白管。 2.试剂一配置后尽快使用,若发现变色则不能使用。 3.所用器材和取血装置均应无氨;采血后应立即测定,不能立即测定2-8℃可保留2h;样本禁止溶血。

铁测定试剂盒(PAPS显色剂法)产品技术要求huayuyikang

铁测定试剂盒(PAPS显色剂法) 适用范围:本试剂用于体外定量测定人血清中铁的含量。 1.1 产品型号/规格 试剂1:1×20 ml、试剂2:1×5 ml;试剂1:1×40 ml、试剂2:1×10 ml;试剂1:2×40 ml、试剂2:2×10 ml;试剂1:4×40 ml、试剂2:4×10 ml;试剂1:4×60 ml、试剂2:2×30 ml;试剂1:1×80 ml、试剂2:1×20 ml;试剂1:2×80 ml、试剂2:2×20 ml;试剂1:5×80 ml、试剂2:5×20 ml;试剂1:3×60 ml、试剂2:1×45 ml;试剂1:6×70 ml、试剂2:3×35 ml;试剂1:5×40 ml、试剂2:1×50 ml;试剂1:4×40 ml、试剂2:2×20 ml;试剂1:4×80 ml、试剂2:4×20 ml;试剂1:4×50 ml、试剂2:1×50 ml;试剂1:8×50 ml、试剂2:2×50 ml;试剂1:8×16.8 ml、试剂2:8×4.2 ml。 1.2 划分说明 试剂1:醋酸缓冲液 0.2 mol/L 表面活性剂适量 稳定剂适量 试剂2:PAPS 2.6 mmol/L 2. 性能指标 2.1 外观和性状 2.1.1 试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏;中文包装标签应清晰、准确、牢固。 2.1.2 试剂1应为无色澄清液体;试剂2应为棕色液体。 2.2 净含量

不少于标示值。 2.3 试剂空白吸光度 在光径1 cm、主波长578 nm下,以蒸馏水为检测样本时,吸光度应不大于0.300 。 2.4 分析灵敏度 铁含量为30.00 μmol/L时,测定吸光度差值(△A)应大于0.080。 2.5 线性范围 铁试剂在线性范围(0~120] μmol/L内: (a)回归系数r应不小于0.990; (b)在(0~12.0 ] μmol/L范围内,线性绝对偏差应不大于±1.2 μmol/L;(c)在(12.0~120]范围内,线性相对偏差应不大于±10%。 2.6 测量精密度 2.6.1 重复性 变异系数(CV)均应不大于5%。 2.6.2 批间差 相对偏差(R)应不大于5%。 2.7 准确度 采用GBW09152 冷冻人血清中无机成分分析标准物质对试剂盒进行测试,相对偏差应不超过±10%。 2.8 稳定性 铁试剂盒贮存于2 ℃~8 ℃、避光环境中,有效期为12个月。有效期满后应满足2.1、2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7的要求。

电位滴定法测定酱油中氨基酸态氮的含量

实验九 电位滴定法测定酱油中氨基酸态氮的含量 一、实验原理 根据氨基酸的两性作用,加入甲醛以固定氨基的碱性,使羧基显示出酸性,将酸度计的玻璃电极及甘汞电极(或复合电极)插入被测液中构成电池,用碱液滴定,根据酸度计指示的pH 值判断和控制滴定终点。 二、仪器与试剂 1、仪器 电位滴定仪 磁力搅拌器 烧杯(250mL ) 微量滴定管 2、试剂 pH=6.18标准缓冲溶液;20%中性甲醛溶液;0.05mol/L 左右的NaOH 标准溶液 三、实验操作方法 (1)样品处理 先根据实验四测出待测酱油的比重,然后吸取酱油10.00mL 于100mL 容量瓶中,加水定容。吸取定容液20.00mL 于250mL 烧杯中,加水60mL ,放入磁力转子,开动磁力搅拌器使转速适当。用pH6.18的标准缓冲液校正好仪器,然后将电极清洗干净,再插入到上述酱油液中,用NaOH 标准溶液滴定至酸度计指示pH8.2,记下消耗的NaOH 溶液体积。 (2)氨基酸的滴定 在上述滴定至pH8.2的溶液中加入10.00 mL 的中性甲醛溶液,再用NaOH 标准溶液滴定至pH9.2,记下消耗的NaOH 溶液体积V 1。 (3)空白滴定 吸取80mL 蒸馏水于250mL 的烧杯中,用NaOH 标准溶液滴定至pH8.2,然后加入10.00mL 中性甲醛溶液,再用NaOH 标准溶液滴定至pH9.2,记下加入甲醛后消耗的NaOH 溶液体积V 2。 四、实验计算 式中: V 1——酱油稀释液在加入甲醛后滴定至pH9.2所用NaOH 标准溶液的100100 20V 014.0C V V %21?÷???-=酱油)(氨基酸态氮

人类K-ras基因突变检测试剂盒说明书

人类K-ras基因突变检测试剂盒(PCR-熔解曲线法)说明书 【产品名称】 通用名:人类K-ras基因突变检测试剂盒(PCR-熔解曲线法) 英文名:Diagnostic kit for Mutations of Human K-ras Gene (PCR-Melting Curve Analysis) 【包装规格】 20测试/盒 【预期用途】 K-ras基因位于12号染色体短臂上,是重要的癌基因之一,编码一种21kD 的kras蛋白,参与细胞内的信号传递,主要包括PI3K/PTEN/AKT 和 RAF/MEK/ERK信号转导途径,这些转导途径是当前肿瘤靶向药物研究的热点,靶向药物通过抑制这些途径发生药理作用。K-ras基因第12和13密码子发生突变,将导致kras蛋白变异并处于持续激活状态,使药物失效。。据中国2010版《肿瘤学临床实践指南》,在一项包含101例肺腺癌亚型细支气管肺泡癌患者的回顾性研究中,所有患者均接受厄洛替尼单药一线治疗。K-ras突变者无一例缓解(0/18),而无K-ras突变者则有20例缓解(20/62,32%),差别有统计学意义(P <0.01)。因此,指南建议,非小细胞肺癌和结直肠癌患者使用靶向药物前应进行K-ras基因突变状态的检测。 本试剂盒以人非小细胞肺癌、结直肠癌肿瘤组织切片提取的基因组DNA为检测样本,用于检测肿瘤组织K-ras基因第12,13密码子的12种体细胞突变(表1),提供突变状态的定性结果。为临床肿瘤靶向药物的个体化用药提供辅助诊断依据,本品适用于进入个体化靶向治疗疗程前的患者使用。 【检验原理】 本试剂盒基于实时PCR平台,结合了特异引物、荧光探针和熔解曲线技术,定性检测DNA样品中K-ras基因12,13密码子是否存在突变。用一对K-ras基因特异引物,该引物可

脯氨酸(Pro)含量测定试剂盒使用说明

脯氨酸(Pro)含量测定试剂盒使用说明 分光光度法50T/48S 货号:BC0290 测定意义: 脯氨酸(Pro)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,逆境条件下,植物体内Pro 含量显著增加。Pro增加量在一定程度上反映了抗逆性,抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此,脯氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。 测定原理: 用磺基水杨酸(SA)提取Pro,加热处理后,Pro与酸性茚三酮溶液反应生成红色;加甲苯萃取后,在520nm测定吸光度。 需自备的仪器和用品: 可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、冰乙酸、甲苯、研钵、冰和蒸馏水。 试剂的组成和配制: 提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存。 试剂一:冰乙酸4℃保存。(自备) 试剂二:液体45mL×1瓶,4℃保存。 试剂三:甲苯4℃保存。(自备) 标准品:脯氨酸10mg,4℃保存。

样品测定的准备: 1、细胞、细菌或组织样品的制备: 细菌或细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,弃上清;按照每100万细菌或细胞加入1mL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3秒,间隔10秒,重复30次),之后置沸水浴振荡提取10min;10000g,常温离心10min,取上清,冷却后待测。 组织:称取约0.1g组织,加入1mL提取液进行冰浴匀浆;之后置沸水浴振荡提取10min,10000g,常温离心10min,取上清,冷却后待测。 2、血清(浆)样品:取100μL血清(浆)加入1mL提取液,充分混匀,之后置沸水浴振荡提取10分钟,10000g,常温离心10分钟,取上清,冷却后待测。 3、标准品的处理:称取1mg,将标准品稀释为15、10、8、6、 4、2、1、0g/ml。 测定步骤: 1、分光光度计预热30min以上,调节波长至520nm,蒸馏水调零。 2、取0.5mL上清液(或稀释后的标准品)+0.5mL试剂一+0.5mL试剂二于有盖试管中,置沸水浴中保温30min(盖紧,防止水分散失),每10min振荡一次。 3、待冷却后,在试管中加入1mL试剂三,振荡30s,静置片刻,使色素转至试剂三中;吸取0.8mL-1mL上层溶液于1mL玻璃比色皿中,用试剂三调零,于520nm波长处比色,记录吸光值。 4、根据标准品吸光值和浓度,建立标准曲线。 Pro含量计算: 1、通过标准曲线计算样品脯氨酸含量(y为脯氨酸含量,μg/mL;x为OD值)

总铁结合力测定试剂盒(Ferene法)产品技术要求九州泰康

总铁结合力测定试剂盒(Ferene法) 适用范围:用于体外定量测定人血清中的总铁结合力。1.1包装规格 试剂Ⅰ(R1):60mL×3、试剂Ⅱ(R2):20mL×3、试剂Ⅲ(R1):60mL×3、试剂Ⅳ(R2):20mL×3; 试剂Ⅰ(R1):60mL×2、试剂Ⅱ(R2):20mL×2、试剂Ⅲ(R1):60mL×2、试剂Ⅳ(R2):20mL×2; 试剂Ⅰ(R1):60mL×1、试剂Ⅱ(R2):20mL×1、试剂Ⅲ(R1):60mL×1、试剂Ⅳ(R2):20mL×1; 试剂Ⅰ(R1):45mL×1、试剂Ⅱ(R2):15mL×1、试剂Ⅲ(R1):45mL×1、试剂Ⅳ(R2):15mL×1; 试剂Ⅰ(R1):90mL×1、试剂Ⅱ(R2):15mL×2、试剂Ⅲ(R1):90mL×1、试剂Ⅳ(R2):15mL×2。1.2主要组成成分

2.1 外观 试剂盒外观应整洁,文字符号标识清晰;试剂均为澄清溶液,无未溶解物。2.2 装量 试剂瓶内试剂的净含量不少于标示值。 2.3 试剂空白吸光度 在波长A600nm,记录吸光度值,试剂空白吸光度(R1+R2)不超过0.80A,试剂空白吸光度(R3+R4)不超过0.80A。 2.4 分析灵敏度 Fe:测试浓度100μmol/L的样本,吸光度变化值不低于0.002A。 UIBC:测试浓度50μmol/L的样本,吸光度变化值不低于0.002A。 2.5 线性 2.5.1铁离子: 在[1,120]μmol/L范围内,线性回归的确定系数应不低于0.990; 在[1,30)μmol/L范围内,线性绝对偏差不超过±3.0μmol/L; 在[30,120]μmol/L范围内,线性相对偏差不超过±10%; 2.5.2不饱和铁: 在[1,80]μmol/L范围内,线性回归的确定系数应不低于0.990; 在[1,30)μmol/L范围内,线性绝对偏差不超过±3.0μmol/L; 在[30,80]μmol/L范围内,线性相对偏差不超过±10%。 2.6 重复性 2.6.1批内重复性

酱油中总酸与氨基酸态氮含量的快速测定

酱油中总酸与氨基酸态氮含量的快速测定 酱油中的氨基酸态氮是氨基酸含量的特征指标,含量越高酱油的鲜味越强,质量越好。国家标准GB18186-2000规定,高盐稀态发酵酱油(含固稀发酵酱油)的氨基酸态氮(以氮计)每100ml酱油中的含量:特级、一级、二级和三级分别应≧0.8g、0.7g、0.55g和0.4g。低盐固态发酵酱油中的含量:特级、一级和二级分别应≧0.8g、0.7g和0.6g。配制酱油(SB 10336-2000)每100ml中氨基酸态氮含量应≧0.4g。 在所有酱油的卫生指标中,总酸(以乳酸计)含量每100ml中应≦2.5g。 方法一: 取1.0ml样品到10 ml比色管中,加水到10.0ml刻度,盖塞后混匀,从中取1.0ml放入100ml 三角烧瓶中,加入60ml蒸馏水,加1号显色剂4滴,摇匀,用滴瓶直立式一滴一滴地滴加总酸和氨基酸态氮测定液,每滴1滴都要摇匀,待溶液初显粉红色(可做一个对照样品便于观察),按每滴测定液相当于0.45 %克的总酸计算其含量(如果测定液消耗了5.5滴还未初显粉红色,表示总酸超标,应送实验室精确定量),向溶液中加入10.0ml36%的甲醛溶液和2号显色剂4滴,摇匀后继续滴定至蓝紫色,按每滴测定液相当于0.078 %克的氨基酸态氮计算其含量,同时做试剂空白试验(即不加样品所消耗测定液的滴数),比如样品消耗了11滴测定液,试剂空白消耗了7滴测定液,样品实际消耗为4滴测定液,这份样品中氨基酸态氮的含量为4×0.078%=0.31%克,为不合格产品。本方法测定的结果与国家标准规定量或标签标示量仅一滴(测定液)之差时,应慎重处理,可送实验室精确定量。 方法二: 取1.0ml样品到10 ml比色管中,加水到10.0ml刻度,盖塞后混匀,从中取1.0ml放入200ml 烧杯中,加入60ml蒸馏水,将校准过的便携笔式酸度计(使用前应用水浸泡3分钟)插入杯中,

glp-1试剂盒说明书

人胰高血糖素样肽1(GLP-1)ELISA 定量检测试剂盒 点击放大 产品型号: 48T/96T 产品报价: 产品特点: 本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法 (ELISA ),定量检测人血清、血浆及相关液体样本中 胰高血糖素样肽1(GLP-1)的含量 本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断。 人胰高血糖素样肽1(GLP --1)定量检测试剂盒(ELISA ) 使用说明书 【试剂盒名称】 人胰高血糖素样肽1(GLP-1)定量检测试剂盒(ELISA ) 【试剂盒用途】 定量检测人血清、血浆及相关液体样本中胰高血糖素样肽1(GLP-1)的含量。 【检测原理】 本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法(ELISA )。将标准品、待测样本加入到预 先包被人胰高血糖素样肽1(GLP-1)单克隆抗体透明酶标包被板中,温育足够时间后,洗涤 除去未结合的成分,再加入酶标工作液,温育足够时间后,洗涤除去未结合的成分。依次加 入底物A 、B ,底物(TMB )在辣根过氧化物酶(HRP )催化下转化为蓝色产物,在酸的作 用下变成黄色,颜色的深浅与样品中人胰高血糖素样肽1(GLP-1)浓度呈正相关,450nm 波 长下测定OD 值,根据标准品和样品的OD 值,计算样本中人胰高血糖素样肽1(GLP-1)含 量。 【试剂盒组成】

1 酶标包被板12孔×8条7 显色剂A液6mL 2 标准品0.3mL×6管8 显色剂B液6mL 3 20倍浓缩洗涤液25mL 9 终止液6mL 4 样本稀释液6mL 10 说明书1份 5 特殊稀释液6mL 11 封板膜2张 6 酶标试剂6mL 12 密封袋1个 备注:标准品(1号→6号)浓度依次为:8、4、2、1、0.5、0.25pmol/L 【需要而未提供的试剂和器材】 1、37℃恒温箱 2、标准规格酶标仪 3、精密移液器及一次性吸头 4、蒸馏水 5、一次性试管 6、吸水纸 【操作步骤】 1、准备:从冰箱取出试剂盒,室温复温平衡30分钟。 2、配液:用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。 3、加标准品和待测样本:取足够数量的酶标包被板,固定于框架上,分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔,记录各孔位置,在标准品孔中加入标准品50μL;待测样本孔中先加入待测样本10μL,再加样本稀释液40μL(即样本稀释5倍);空白对照孔不加。 4、温育:37℃水浴锅或恒温箱温育30min。 5、洗板:弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸 上拍干,如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。

酪氨酸解氨酶(TAL)活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法

酪氨酸解氨酶(TAL)活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法 注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 货号:BC4060 规格:50T/48S 产品内容: 提取液:液体60mL×1瓶,4℃保存。 试剂一:液体40mL×1瓶,4℃保存。 试剂二:粉剂×2瓶,4℃保存。临用前每瓶加入5mL双蒸水和20μL浓HCl充分溶解待用。现配现用。产品说明: 酪氨酸解氨酶(TAL)广泛存在于植物和微生物中,是苯丙氨酸次生代谢途径的关键酶之一。TAL能够跃过肉桂酸-4-羟基化酶(C4H)直接将酪氨酸转化为香豆酸,香豆酸可进一步生成白藜芦醇、柚皮素等具有抗氧化、抗衰老作用的苯丙素类天然产物。 TAL能够分解酪氨酸产生香豆酸,其在310nm下有吸收峰,根据吸光度的变化率可计算出TAL活性。 自备实验用品及仪器: 紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵/匀浆器、冰、浓盐酸和蒸馏水。 操作步骤: 一、样本处理: (1)组织:称取约0.1g组织,加入1mL提取液进行冰浴匀浆。12000g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。 (2)细胞或细菌:先收集细胞或细菌到离心管内,弃上清,按照每500万细胞或细菌加入1mL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3s,间隔10s,重复30次)。12000g,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。 二、测定步骤:

(1)紫外分光光度计预热30min,波长调至310nm。蒸馏水调零。 (2)加样表:在1mL石英比色皿中分别加入 试剂名称(μL)测定管 试剂一700 试剂二200 样品100 充分混匀后立即测定10s时在310nm下的吸光度,记为A1,之后迅速将其放入37℃水浴或37℃培养箱中3min。然后迅速拿出擦净后测定190s时的吸光度,记为A2。计算ΔA=A2-A1。 三、TAL活力计算: 1、按蛋白浓度计算: 单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟在310nm下吸光值变化0.01定义为一个酶活性单位。 TAL(U/mg prot)=ΔA÷0.01×V反总÷(V样×Cpr)÷T=333×ΔA÷Cpr。 2、按样本鲜重计算: 单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟在310nm下吸光值变化0.01定义为一个酶活性单位。 TAL(U/g鲜重)=ΔA÷0.01×V反总÷(W÷V提取×V样)÷T=333×ΔA÷W。 3、按细胞或细菌个数计算: 单位的定义:每104个细胞或细菌在反应体系中每分钟在310nm下吸光度变化0.01定义为一个酶活性单位TAL(U/104cell)=ΔA÷0.01×V反总÷(500÷V提取×V样)÷T=0.667×ΔA。 V反总:反应总体积,1mL;V样:加入的样品体积,0.1mL; Cpr:样品蛋白浓度,mg/mL;W:样品质量,g; V提取:提取液体积,1mL;500:500万个细胞; T:反应时间,3min。 注意事项: 1、当ΔA大于0.2或者A1大于1.5时,建议将样品用蒸馏水稀释后测量;ΔA过小时,建议增加酶促反应时间 (5min或10min)或增加加入的样品体积来测定。

铁测定试剂盒(亚铁嗪法)产品技术要求lepu

铁测定试剂盒(亚铁嗪法) 适用范围:用于体外定量测定人血清中铁的浓度。1.1规格 试剂1: 1×30mL,试剂2: 1×10mL; 试剂1: 2×60mL,试剂2: 2×20mL; 试剂1: 1×50mL,试剂2: 1×10mL; 试剂1: 1×40mL,试剂2: 1×10mL; 试剂1: 2×40mL,试剂2: 1×20mL; 试剂1: 2×40mL,试剂2: 2×10mL; 试剂1:3×28mL,试剂2:3×7mL; 试剂1:1×4L,试剂2:1×1L; 试剂1:2×4L,试剂2:1×2L。 1.2主要组成成分 试剂1主要组分: 试剂2主要组分: 2.1 净含量

应不低于试剂瓶标示装量。 2.2 外观 试剂1应为无色或浅色澄清液体,试剂2应为浅色或橙色澄清液体。外包装完好、无破损,标签完好、字迹清晰。 2.3 试剂空白 在600nm处测定试剂空白吸光度,应≤1.5; 2.4 分析灵敏度 测试25μmol/L的被测物时,吸光度变化(ΔA)应不低于0.005. 2.5 准确度 用参考物质(GBW09152)对试剂(盒)进行测试,相对偏差不超过±5%。 2.6 重复性 批内变异系数(CV)应不超过5%。 2.7 线性 2.7.1在[1,100]μmol/L 区间内,线性相关系数r应不低于0.990; 2.7.2[1,8)μmol/L区间内绝对偏差不超过±0.64μmol/L;[8,100]μmol/L区间内相对偏差不超过±8%。 2.8 批间差 对同一份样品进行重复测定,相对极差≤6%。 2.9 稳定性 取在2℃~8℃条件下贮存达到12个月后的试剂进行检测,应符合本标准2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7之规定。

氨基酸含量测定

茚三酮比色测定氨基酸含量 一、实验原理 氨基酸在碱性溶液中能与茚三酮作用,生成蓝紫色或黄色化合物(除脯氨酸外均有此反应),可用吸光光度法测定。生成的蓝紫色或黄色化合物颜色深浅与氨基酸含量成正比,其最大吸收波长分别为570nm或350nm,故据此可以测定样品中氨基酸含量。 二、实验试剂 (1)1.2%茚三酮溶液:称取茚三酮1g于盛有35mL热水的烧杯中使其溶解,加入40mg氯化亚锡(SnCl2?H2O),搅拌过滤(作防腐剂)。滤液置冷暗处过夜,加水至50mL,摇匀备用。 (2)pH 8.04磷酸缓冲液: Ⅰ、准确称取磷酸二氢钾(KH2PO4)4.5350g于烧杯中,用少量蒸馏水溶解后,定量转入500mL容量瓶中,用水稀释至标线,摇匀备用。 Ⅱ、准确称取磷酸氢二钠(Na2HPO4)11.9380g于烧杯中,用少量蒸馏水溶解后,定量转入500mL容量瓶中,用水稀释到标线,摇匀备用。 Ⅲ、取上述配好的磷酸二氢钾溶液10.0mL与190mL磷酸氢二钠溶液混合均匀即为pH8.04的磷酸缓冲溶液。 (3)氨基酸标准溶液:准确称取干燥的氨基酸(如异亮氨酸)0.2000g于烧杯中,先用少量水溶解后,定量转入100mL容量瓶中,用水稀释到标线,摇匀,准确吸取此液10.0mL于100mL容量瓶中,加水到标线,摇匀,此为200μg/mL 氨基酸标准溶液。 三、实验方法及步骤 (1)标准曲线绘制 准确吸取200μg/mL的氨基酸标准溶液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL (相当于0、100、200、300、400、500、600μg 氨基酸),分别置于25mL 容量瓶或比色管中,各加水补充至容积为 4.0mL,然后加入茚三酮溶液(20g/L)和磷酸盐缓冲溶液(pH为8.04)各1mL,混合均匀,于90℃水浴上加热至显色恒定为止(该加热过程至少需要25分钟),取出迅速冷至室温,加水至标线,摇匀。静置15min后,若生成蓝紫色化合物,在570nm波长下,以试剂空白为

酱油中氨基酸态氮含量的测定

前言 中国的酱油在国际上享有极高的声誊。三千多年前,我们的祖先就会酿造酱油了。最早的酱油是用牛、羊、鹿和鱼虾肉等动物性蛋白质酿制的,后来才逐渐改用豆类和谷物的植物性蛋白质酿制酱油用豆、麦、麸皮酿造的液体调味品。色泽红褐色,有独特酱香,滋味鲜美,有助于促进食欲。是中国的传统调味品。酿造酱油又可分为生抽和老抽:生抽——以优质黄豆和面粉为原料,经发酵成熟后提取而成。“色泽淡雅,酯香、酱香浓郁,味道鲜美。老抽——是在生抽中加入焦糖,经过特别工艺制成的浓色酱油,适用于红烧肉、烧卤食品及烹调深色菜肴。色泽浓郁,具有醋香和酱香。此次试验主要测定普通酱油、生抽、老抽中氨基酸态氮的含量。氨基态氮是酱油的营养指标,是酿造酱油中大都蛋白水解率高低的特征性指标,是酱油的质量指标,是酱油中氨基酸含量的特征指标,含量越高酱油的鲜味越强,质量越好。配制酱油(SB 10336-2000)每100ml 中氨基酸态氮含量应≥0.4g 【本任务应掌握知识点及技能】 【实验目的】 ⒈学习及掌握电位滴定法测氨基酸态氮的基本原理及操作要点。 ⒉会电位滴定法的基本操作技能。 【实验原理】 氨基酸含有羧基和氨基,利用氨基酸的两性作用,加入甲醛固定氨基的碱性,使羧基显示出酸性,用氢氧化钠标准溶液滴定后进行测量,以酸度计测定终点。此反应的化学方程式为: COOHRCHCNH OH NHCH RCH HCOH COOH NH RCH )()(22=+

O H OH NHCH RCH NaOH COOH OH NHCH RCH 222)()(+=+ PH=7.0是溶液中游离氢离子与氢氧化钠标准溶液完全反应后的PH 值,即有效酸度 PH=8.2是溶液中除有效酸度以外的物质与氢氧化钠标准溶液完全反应后的PH 值,即总酸 PH=9.2是溶液中氨基态氮中的羧基与氢氧化钠标准溶液完全反应后的PH 值 本实验用的是PH 为8.2和9.2数据。由于酱油还含有总酸度,即使不测定总酸度,也有将总酸中和。用PH=8.2时氢氧化钠消耗的体积与PH=9.2时氢氧化钠消耗的体积 的差计算出样品中氨基态氮含量。 【仪器和试剂】 1.仪器 酸度计PHS-3C 型、磁力搅拌器JB-1A 、碱式滴定管(50ml )、容量瓶(250ml ) 2.试剂 0.04515mol/L 氢氧化钠标准溶液、(1+1)甲醛溶液 【实验步骤】 氢氧化钠溶液的配制:称取0.5014g 氢氧化钠试剂溶解,稀释后定容于250ml 容量瓶中。 氢氧化钠溶液的标定:称取邻苯二甲酸氢钾2.5530g ,溶解,稀释后定容于250ml 容量瓶中。首先用25ml 移液管移取氢氧化钠溶液放入锥形瓶中,加入三滴酚酞指示剂,用邻苯二甲酸氢钾溶液滴定氢氧化钠溶液,溶液由红变为无色为滴定终点,计录用去邻苯二甲酸氢钾的体积,重复三次。 准确吸取酱油5.0ml 置于100ml 容量瓶中,加水至刻度,混匀后吸取20.0ml ,置于200ml 烧杯中,加水60ml ,插入酸度计复合电极,开动磁力搅拌器,用0.04515mol/L 氢氧化钠标准溶液滴定至酸度计指示PH=8.2,记录氢氧化钠标准溶液的体积(按总酸计算公式,可以算出酱油的总酸含量)。 向上述溶液中,准确加入(1+1)甲醛溶液20ml ,混匀。继续用0.04514mol/L 氢氧化钠标准溶液滴定至PH=9.2,计入用去氢氧化钠标准溶液的体积,供计算氨基酸态氮含量用。 试剂空白试验:取水80 ml ,先用0.04514mol/L 氢氧化钠标准溶液滴定至PH=8.2(记录用去氢氧化钠标准溶液的体积,此为测总酸的试剂空白试验)。再加入20ml 甲醛溶液,继续用0.04514mol/L 氢氧化钠标准溶液滴定至酸度计指示PH=9.2。第二次所用氢氧化钠标准溶液的体积为测定氨基酸态氮的试剂空白试验。 2.结果计算 ()100100 50141.03 21????-=V C V V ρ 式中 ρ—样品中氨基酸态氮的含量,g/100 ml; V 1—测定用的样品稀释液加入甲醛后消耗氢氧化钠 标准溶液的体积,

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