高级生化考题-核酸

1、卫星DNA：主要分布在染色体的着丝粒部位，由非常短的串联重复DNA序列组成。因其具低复杂性，又称简单序列DNA，又因为其不同寻常的核苷酸组成，经常在浮力密度梯度离心中从整个基因组DNA

中分离成一个或多个“卫星”条带，故称为卫星DNA。

2、小卫星DNA：一般位于端粒处，是由高度重复序列组成的小基因簇。两种形式：1.真核生物的端粒DNA，由几千个碱基的特性的五核苷酸或六核苷酸串联重复形成，2.高度可变的小卫星DNA，位于亚端粒区域在不同的个体和基因的不同位点上。

3、VNTRs序列：同向重复序列可变数，不仅用于基因范围的遗传作用，还广泛用于DNA印迹的诊断标记。

4、DNA指纹：在人类VNTRs位点1—5kb，但人的总DNA提取后用限制性内切酶切成不同的片断，然后以VNTRs中的特异序列为探针进行southern杂交，可发现阳性片断的大小各不相同。由于不同个体的这种串联重复的数目和位置各不相同，所以VNTRs的southern杂交带谱就具有高度的个体特异性，称DNA 指纹。

5、卫星DNA：重复单位序列最短，具高度多态性，在遗传上高度保守，是理想的遗传标志。

卫星RNA：是指一些必须依赖于辅助病毒的才能复制的小分子单链RNA片段，它被包装在辅助病毒的包体中。

6、信息沟：大沟，小沟，特别是大沟，对于在遗传上有重要功能的蛋白质识别DNA双螺旋结构上的特定信息是非常重要的，只有在沟内pr才能识别。

7、H---DNA：含有镜像重复的多聚py/多聚pu序列的DNA可通过hoogsteen 碱基配对形成的分子内三链结构。

8、变性：在加热或极端ph条件下，核酸的黏度会突然消失，实质是配对的碱基间的氢键断裂和相邻碱基间的碱基堆积力消失。变性因素：1.热力2.强碱3.强酸（甲酸等）4.有机溶剂5.变性剂（尿素，甲酰胺等）6.射线7.机械力

9、TM溶解温度：DNA热变性发生在一个很窄的温度范围内，通常把热变性过程中光吸收达最大吸收一半时的温度称TM。TM值的影响因素：1.核酸的均一程度，均一性越高的样品变性过程的温度范围越小

2.TM值与G—C含量成正比

3.与介质离子强度成正比。

10、复性：变性DNA在一定条件下又可使两条彼此分开的链重新缔合成双螺旋结构。

复性条件：1.有足够的盐浓度消除静电斥力，常用盐浓度0.15~0.50mol/l的Nacl；2.有足够的温度破坏无规则的氢键，一般比TM低20~25度的温度。

复性的影响因素：1.DNA片断的大小2. DNA的浓度3. DNA重复性4. 温度5.盐浓度

复性的检测：1.减色效应,紫外光吸收减少30% 2. 羟基磷灰石柱层析，对双链DNA吸附力较强，不易吸附单链。

11、核酸的非酶促转化：核酸作为遗传信息的载体部分是因为它遗传上的稳定性，它并非一成不变的，即使在生理条件下，在无酶催化下，也发生很慢的化学转化，1.脱氨基作用2.N-B-糖苷键的水解作用3. DNA 链的呼吸作用

12、核酸的酶促反应：1.DNA的甲基化：甲基化通常限定在DNA分子的特定序列区域，A，C碱基频率要比G，T要高。将甲基加入DNA中的酶称为DNA甲基转移酶或甲基化酶，都利用S-腺苷酰甲硫氨酸作为甲基供体。

13、Hoogsteen配对：已配对的碱基上存在着潜在的氢原子供体与受体，能进一步形成氢键特别是大沟中一些功能基团的重排。

14、超螺旋：如果DNA分子额外的多转几圈或少转几圈，都会使DNA中存在张力，此张力会使分子发生扭曲，这种扭曲态为超螺旋。

15、三链DNA：单链DNA与双链分子中的碱基互相作用，通过双链DNA的大沟，第三条链与双链中的一条链的碱基形成非WAHEN-CRICK配对，而是形成loosteen碱基配对形成的三链。

16、DNA双螺旋的呼吸作用：DNA双螺旋结构中的H 键处于不断的裂解和复合的热平衡状态，这种H键的快速断裂和再生过程成为DNA的呼吸作用。

17、分子杂交：不同来源的DNA分子放在一起热变性，然后慢慢冷却，让其复性，若这些异源DNA之间有互补或部分互补序列，则复性时会形成“杂交分子”，DNA与互补的RNA之间也可以发生杂交。

18、稳定双螺旋结构的力：1.碱基堆积力，电子云交错而形成的一种力，最主要的力；2.氢键，互补碱基间可形成氢键；3.离子键，对维持DNA的空间结构起作用。4.碱基分子内能

20、回文结构：又称反向重复序列，是一段能够自我互补的序列，能形成发夹结构或十字形结构。不配对的地方形成凸环。

21、镜像重复序列：在同一条DNA链上没有互补序列，不能形成发夹结构和十字形结构。能形成H—DNA。

22、拓扑异构酶：可以改变DNA拓扑异构体的L值，

使双链超螺旋DNA转变成松弛型环状DNA或使松弛型

环状DNA变成负超螺旋DNA的一种蛋白质。

23、基因文库：是一群细菌克隆，每个克隆含有一个

带有某一供体生物不同DNA片段的质粒或噬菌体载

体；这群克隆有95％-99％的可能性使基因组DNA的

每一片段至少存在于一个克隆中。

24、4.416螺旋（∏螺旋）：每转一圈需要4.4个氨基

酸残基，残基高度为0.12nm，螺旋半径为0.3nm，n=4.

不稳定.

25、a-螺旋（3.613螺旋）：是非整数螺旋，每转一圈

需要3.6个氨基酸残基，螺距为0.54nm，⊙=-55 ∮

=-45，由相邻螺旋间形成链内氢键，由氢键所封闭成

13环。

26、r-螺旋（310）：每转一圈需要3个氨基酸残基，

靠氢键所形成的环由10个原子组成，为r-螺旋

（310），⊙=-49∮=-26,残基高度为0.2nm，螺距为

0.6nm，螺旋半径为0.2nm。

27、卫星病毒：能编码自身蛋白，因此由它介导感染，

而在感染周期中必须利用辅助病毒的复制酶才能进

行复制和增殖，与此同时也干扰了辅助病毒的复制，

卫星病毒的基因组与辅助病毒的基因组没有同源性，

抗原性也不同。

28、CDNA文库：是由细胞全部MRNA反转录生成的CDNA

克隆的总合。

29、载体：将外源DNA带入宿主细胞并进行复制的运

载工具称为载体。

30、穿梭载体：通常是指那些既能在真核细胞中繁殖

又能在原核细胞中繁殖的载体。

31、转化：细菌或细胞吸收质粒DNA的过程。

32、转染：细菌或细胞吸收噬菌体DNA的过程。

33、转导：DNA通过正常的噬菌体感染途径进入细胞

的过程。

34、southern印迹法：将凝胶上分离的DNA片段转

移到硝酸纤维素膜上，再通过同位素标记的单链DNA

或RNA探针的杂交作用检测这些被转移的DNA片段的

方法。基本步骤：1、限制性酶切DNA分子2、琼脂

糖凝胶电泳分离3、碱变性4、转膜5、探针杂交6、

洗膜除去未杂交的探针7、放射性自显影。

35、nouthern印迹法：将RNA分子从电泳凝胶转移

到硝酸纤维素过滤膜或其它化学修饰的活性滤纸上，

然后再进行核酸杂交的一种实验方法。

36、wouthern印迹法：将蛋白质从电泳凝胶中转移

到硝酸纤维素过滤膜上，然后与放射性同位素I125

标记的特定蛋白质的抗体进行反应。

37、基因工程：是指在体外将核酸分子插入病毒，质

粒或其它载体分子，构成遗传物质的新组合，并使之

参与原先没有这类分子的寄主细胞，并能持续稳定

地繁殖。

一、DNA的多态性及产生多态性的原因：

脱氧核糖和磷酸组成的骨架上的许多键都可以转动，

随热力学的变化，可使链弯曲，伸展或碱基分开。这

就使具有同样碱基配对的DNA双螺旋可以采取另一

些构象，DNA构象上这种差异称为多态性。

原因：（1）脱氧核糖的五元环能折叠成各种构象（2）

组成磷酸脱氧核糖骨架的连续键可以转动（3）C1

—N糖苷键可以自由转动。

二、特殊序列及特殊结构的意义：

（1）是DNA结合蛋白的识别位点（2）与基因信息

表达调控有关（3）通过特殊序列调控细胞代谢的方

法，在医药和农业上具有潜在的应用价值，正成为具

有商业开发价值的领域。

三、真核生物基因组与与和原核生物基因组的区别：

1 真核基因组的长度比原核的大

2 真核基因组中有内含子经过翻译后被剪切．而原

核中没有内含子

3 真核基因表达调空正性调节为主要原核生物负调

节为主

4 有的原核基因组可以整合到真核基因中例如逆转

录病毒基因

5 原核生物的细胞中除了主染色体以外，还含有各种

质粒和转座因子。真核生物除了核染色体以外，还存

在细胞器DNA，如线粒体和叶绿体的DNA，为双链环

状，可自主复制。

6 原核生物的DNA位于细胞的中央，称为类核

（nucleoid）。真核生物有细胞核，DNA序列压缩为

染色体存在于细胞核中。

7 真核基因组都是由DNA序列组成，原核基因组还有

可能由RNA组成，如RNA病毒。

四、简述核酸DNA测序的主要方法及原理方法？

1、Sanger酶法----双脱氧链末端终止法：利用噬菌

体r13在生活周期上的特点，使用DNA重组技术，建

立了通用模板和通用引物的快速检测方法。原理及方

法：①、分别进行4组反应，每组反应中含有4dNTP

及其中的一种ddNTP。②、通过控制反应系统中dNTP

与ddNTP的比例，可以是双脱氧核苷酸随机的参入互

补链并在不同的位置上终止合成反应。最后得到一组

长短不同，而3“末端均以双脱氧核苷酸结尾的DNA

片段。4组反应就得到4套片段，而5‘端一律从引

物开始有相同起点带放射性标记。③、在高分辨率的

聚丙酰变性凝胶上电泳分离，可以按片段从小到大的

顺序读出氨基酸顺序。

2、Maxam—Gilbert化学法：在对末端标记的DNA进

行碱基特异性切割反应后进行凝胶分离的方法。此方

法不需要酶，对单链和双链DNA都适用，不受DNA

二级结构的干扰。适用于微克隆过的基因组DNA的测

序。原理及方法：①放射性标记末端②、碱基特异

性切割③、聚丙酰变性凝胶上电泳分离，对测序凝

胶的4个泳道进行分析就可以确定出序列。④特定的

碱基修饰反应。

3、杂交测序法与芯片技术：利用一组已知序列的寡

聚核苷酸端序列作为探针，同某一特定的较长的靶

DNA分子杂交，从而测定其核苷酸序列。原理及方法：

①把靶DNA分子同一组已知核苷酸顺序的寡核苷酸

探针杂交。②、然后对那些能够同靶DNA形成完全上

连体分子的寡核苷酸探针之间的碱基重叠关系作比

较分析，并据此推出靶DNA的核苷酸顺序。

4、PCR测序

5、单核苷酸测序法

五、理想载体的条件？

1、具有自主复制能力

2、分子量小，便于与DNA体外合作。

3、含有多种限制性内切酶的单一识别序列。

4、携带易于筛选的选择性标记，常用抗药性，营

养缺陷型和形成噬菌体的能力等作为选择标记。

5、使用安全。

六、简述RNA的功能？

1、控制蛋白质的合成

2、作用于RNA转录后加工

修饰3、基因表达及细胞功能的调节4、生物催化及

其他细胞功能5、遗传信息的加工与进化6、染色体、

核糖体、核酶等骨架构成的成分7、信号识别与传导。

七、RNA世界（RNA的多样性）？

1、mRNA:编码蛋白质的转录产物，携带翻译信息。

2、tRNA：翻译过程中的适配器，将mRNA的三联

体密码子翻译成蛋白质的序列，在反转录病毒

中tRNA可作为DNA的引物。

3、rRNA:核糖体的骨架构成，翻译机制的中心，

催化肽链的形成。

4、hnRNA：mRNA剪接前体，真核生物基因转录产

物经加工形成大小不等的中间产物。

5、snRNA：核质中低分子量的RNA，参与mRNA、

tRNA、rRNA前体的加工，协调胞内物质运输，

参与分泌蛋白的运输，代谢稳定进化上保守，

有些5‘端有帽子结构与蛋白质连在一起以核

糖核蛋白RNP形式存在。

6、siRNA：RNA干涉现象中，中介入细胞中特定

双链RNA加工裂解成的21-23nt的正义和反义

链组成等干扰基因表达的小分子RNA，其引发

的RNAi是转录后基因沉默现象的机制之一。

7、micRNA(反义RNA)：与mRNA互补，可与其形

成双螺旋结构阻断蛋白质的合成，在翻译水平上调节

G的表达。

8、ribozyme: 具有高效特异催化功能的RNA。

9、脱氧核酶（dexy ribozyme）:具有催化活性的

单链RNA分子，具有ASODN的反义抑制作用和

核酶的靶向性剪切活性，稳定性好。

10、ASODN（反义寡聚脱氧核糖核酸）：人工合成

的，与靶mRNA配对互补，以激活Rnaseh来降

解RNA/DNA杂交分子中的靶RNA，阻断RNA的

加工、翻译、抑制G的表达。

11、iRNA：在DNA复制过程中作为后滞链合成引物

的短RNA片段。

12、端粒RNA：端粒酶的组成部分，可作为形成端

粒重复序列的模版。

13、snoRNA(核仁小RNA)：核仁中RNA加工与碱基

修饰所必需的。

14、scRNA（胞质内小RNA）：在胞质中发现的多种

功能的低分子量RNA。

八、基因文库与CDNA文库的建立？

基因文库的建立：1、染色体DNA的片断化2、载体

DNA的制备3、体外联结与包装4、重组噬菌

体感染E.coli 5、基因组文库的鉴定与扩增

CDNA文库的建立：1、制备mRNA 2、合成cDNA 3、

制备载体DNA 4、双链cDNA的分子克隆5、对构建的

cDNA文库进行鉴定与扩增。