2株鸭源肠球菌的生物学特性的观察_韩梅红
[收稿日期]2007-06-28
[第一作者简介]韩梅红(1979),女,河南汝州市人,农学硕士,助教,主要从事免疫病理学方向研究.
2株鸭源肠球菌的生物学特性的观察
韩梅红 (长江大学动物科学学院,湖北荆州434025) 谷长勤
(华中农业大学动物医学院,湖北武汉430070)
[摘要]对2株鸭源肠球菌临床分离株和1株粪肠球菌参考菌株的形态特征、培养特性、生理生化特性、对药物的敏感性等生物学特性进行了初步研究。结果表明,3个被检菌株在光学显微镜下呈球形、革兰氏阳性染色和链状排列方式,能在10e 、45e 和6.5%NaCl 肉汤等条件下生长,能耐热60e 30min,其特性均符合肠球菌属的特征,各菌株生化反应特性均与粪肠球菌特性基本一致,3个菌株均可鉴定为粪肠球菌。药敏试验结果表明,3个菌株均对青霉素、万古霉素、庆大霉素、红霉素和氯霉素敏感而对四环素耐药。[关键词]鸭;肠球菌(Enter ococcus );生物学特性[中图分类号]Q852161+1;S858132
[文献标识码]A [文章编号]1673-1409(2007)03-S051-03
鸭的肠球菌(原属于链球菌属D 群)病是由肠球菌感染引起的小鸭的一种急性或慢性细菌性疾病,在世界各地呈散发性发生[1]。近几年来,随着集约化养禽业的发展,该病在我国部分地区的爆发时有发生[2,3]
。2000~2004年,北京、湖北等地鸭场先后多次爆发该病,死亡率均高达40%以上,造成了严重的经济损失。本研究对上述2株临床分离株和1株参考菌株的生物学特性进行了初步探讨。
1 材料与方法
1.1 材料与主要试剂
鸭源肠球菌临床分离株郑3株和北京株,由湖北省农业科学院畜牧兽医研究所提供,分离于自然感染发病濒死期和已死亡鸭的肝脏、心腔血和脑组织液;参考菌株1927(C55614)粪肠球菌,购自中国兽医药品监察所;药敏试验质控菌株AT CC25923,购自中国药品生物制品鉴定所;细菌微量生化鉴定管和抗菌药物药敏纸片均购自杭州微生物试剂有限公司;胰蛋白胨(Try ptone)为OXOID 产品,批号324075。1.2 培养基配制
马丁琼脂培养基、血清马丁肉汤、色素生成试验专用培养基和半固体琼脂等培养基常规配置[4,5]
;TH B(T odd -H ew itt Broth)培养基按文献[6]方法配制;水解酪蛋白琼脂培养基,购自中国药品生物制品鉴定所,批号20040112,按产品说明配制。
1.3 细菌的复苏与纯化
复苏培养时,用浸过70%酒精的脱脂棉擦拭封存有冻干粉末状肠球菌的安瓿管,将安瓿管口端置酒精灯火焰上烧热,立即滴1滴无菌冷水于烧热的部位将安瓿管顶部炸裂,用无菌镊子敲下口端的玻璃,再用无菌吸管吸取适量灭菌生理盐水注入安瓿管内,轻摇以溶解菌块,然后在无菌条件下用接种环挑取菌体悬浮液划线接种于含5%绵羊血的TH B 琼脂培养基上,37e 恒温培养24h 。剩余的菌液分别注入2管含10%兔血清的T H B 培养基中,37e 恒温培养18~24h 。
各菌株复苏培养24h 后,在TH B 血琼脂培养基上传代培养2~3次,每次均挑取单个典型菌落革兰氏染色、镜检并接种于下一代培养基,最后将纯化的细菌接种于T H B 液体培养基,37e 恒温培养18~24h,置4e 冰箱备用。
1.4 培养特性及细菌形态观察
无菌挑取纯化的菌液分别接种于TH B 血琼脂平板、马丁琼脂平板、T H B 、血清马丁肉汤等培养基,37
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51#长江大学学报(自科版)农学卷 2007年9月第4卷第3期Journal of Y angtze University(Nat Sci Edit)Ag ri Sci V Sep 12007,V o l 14N o 13
e 恒温培养18~24h,观察细菌生长情况及菌落特征。挑取肉汤培养物及平板上单菌落涂抹于洁净玻片上,常规方法作革兰氏染色,光学显微镜下观察细菌形态和染色特征。1.5 生理生化特性观察
(1)耐热试验 分别进行10e 、45e 和60e 耐热试验,按照文献[5]方法进行。
(2)生化鉴定 分别用3个菌株的18h T H B 培养物接种甘露醇、山梨醇、阿拉伯糖、蔗糖、棉子糖、山梨糖、乳糖、精氨酸脱羧酶、丙酮酸盐、胆汁七叶苷、6.5%NaCl 肉汤、pH 9.6葡萄糖肉汤等12种细菌微量生化鉴定管,按文献[5]的方法培养及判断结果。
(3)动力试验 采用半固体穿刺法,按照文献[5]方法进行。
(4)色素生成试验 检测非荧光色素生成情况,按照文献[5]方法进行。1.6 药敏试验
K-B 纸片扩散法检测被检菌株对青霉素、庆大霉素、链霉素、万古霉素、红霉素、环丙沙星、左氟沙星、氯霉素、利福平、四环素等10种抗菌药物的敏感性,操作方法、质量控制及结果判定均依据美国临床试验标准研究所CLSI/NCCLS 制定的最新规则及标准进行[7]
。
2 结果与分析
2.1 细菌形态及培养特性
3个被检菌株在光镜下均为革兰氏阳性小球菌,单个、成对或呈链状排列,链的长短不一,形状各异,有直链、/S 0型或/人0型排列;3个菌株在TH B 血琼脂平板、马丁琼脂平板上均长出灰白色、半透明、表面光滑、边缘整齐、圆形微凸、粘稠不易挑起的小菌落,其中参考株菌落小如针尖,郑3株菌落稍大,北京株呈直径约1.2mm 的露滴状菌落;3个菌株在T H B 血琼脂平板上均不溶血;在血清马丁肉汤和T H B 中均能生长,表现为肉汤轻度浑浊,试管底部有白色絮状沉淀,不生成菌环、菌膜。2.2 生理生化鉴定
表1 3株鸭源肠球菌不同菌株生理生化反应结果Table 1 The biochemical identification results of 3strai ns of
Entero cocc us isolated from ducks 试验项目郑3北京参考试验项目郑3北京参考甘露醇
+v +胆汁七叶苷+++山梨醇--+色素---阿拉伯糖---动力---蔗糖+++10e 生长+++棉子糖---45e 生长+++山梨糖---耐热60e 30min +++乳糖
+++ 6.5%N aCl 肉汤+++精氨酸脱羧酶+++pH 9.6葡萄糖肉汤
+
-+
丙酮酸盐
+
+
+
注:/+0表示阳性反应;/-0表示阴性反应;/v 0表示结果不确定。
3个菌株的生理生化鉴定结果详见表1。根据文献[5]的鉴定标准,这3株细菌均应鉴定为粪肠球菌。2.3 药敏试验
3个被检菌株对10种抗菌药物的敏感性结果详见表2。由表2可知,3个菌株对不同抗菌药物有不同程度的敏感性。其中,3个菌株均对青霉素、万古霉素、庆大霉素、氯霉素和红霉素高度敏感,而对四环素耐药,郑3株和北京株对环丙沙星中度敏感。郑3珠对链霉素,参考株对链霉素、四环素和环丙沙星均不产生抑菌环。
表2 3株鸭源肠球菌不同菌株对药物的敏感性
Table 2 The antibiotics sensiti vity of 3strains of Entero coc cus isolated from ducks
菌株抑菌圈直径/mm
青霉素万古霉素链霉素庆大霉素四环素氯霉素红霉素左氟沙星利福平环丙沙星郑330.25S 21.50S -31.67S 5.00R 31.17S 35.50S 22.75S 36.00S 20.25I 北京
37.17S 19.17S 27.33S
32.75S 8.75R
27.50S 34.00S 0.50R 35.00S 19.10I
参考
25.00S
18.00S
-16.00S
-26.00S
31.00S
22.50S
14.00R
-
注:/S 0表示高度敏感;/I 0表示中度敏感;/R 0表示耐药;/-0表示无抑菌环产生。
#52# 长江大学学报(自科版)农学卷2007年9月
3 小结与讨论
根据被检菌株在光学显微镜下呈球形、革兰氏阳性染色和链状排列方式,以及能在10e 、45e 、60e (30min)和6.5%NaCl 肉汤等条件下生长的特性,可初步判定为肠球菌群
[5,8]
。3个菌株的生化特性
与粪肠球菌生化特性基本一致,因此可鉴定为粪肠球菌[5]
。但3个菌株对山梨醇的反应结果不一致,郑3株和北京株反应为阴性;北京株不能在pH 9.6的葡萄糖肉汤中生长;这些都不符合文献报道的判定标准[5,8]。另外,北京株甘露醇反应多次试验结果不一致,因而不能确定其反应特性。对于这些例外情况,笔者认为可能有以下3个方面的原因:第一,在体外人工培养条件下,由于受多种因素的影响,细菌的生物学特性可能会发生改变;第二,可能是由细菌变异引起的,王亚宾等[9]从发病鸡体内分离出2株粪肠球菌,其生化特性也表现为山梨醇反应阴性;第三,肠球菌的某些生化特性本身是不能确定的,郁庆福[8]报道粪肠球菌的山梨醇反应为阴性,而东秀珠等
[5]
则认为该反应为阳性。因此,笔者认为在对临床分离的细菌进
行鉴定时,不能仅仅依靠生化鉴定的结果,还应结合细菌的形态、培养特性、对药物的敏感性等生物学特性综合考虑,必要时还应结合分子生物学方法进行鉴定。
综合3个菌株的药敏试验结果,建议临床上考虑使用青霉素、万古霉素、庆大霉素和红霉素单独或联合治疗,少用或不用四环素治疗鸭的肠球菌病;氯霉素、左氟沙星和利福平也可考虑,但氯霉素毒副作用较大,不宜常规应用。临床上最好先进行药敏试验,然后根据分离株的耐药特点来选择相应的治疗方案。
[参考文献]
[1][美]西格芒德O H (攀 璞,李承开,陈昭弈,等译).默克氏兽医手册[M ].南昌:江西人民出版社,1984.563.[2]陈一资,蒋文灿,胡 滨.对鸭场爆发罕见的粪链球菌的研究[J ].中国兽医学报,2003,23(4):324~325.[3]吴信明,苗立中,李峰,等.商品肉鸭链球菌病的诊治[J].中国家禽,2003,25(20):14.[4]朱立平,陈学清.免疫学常用实验方法[M ].北京:人民军医出版社,2000.10~16.[5]东秀珠,蔡妙英.常见细菌系统鉴定手册[M ].北京:科学出版社,2001.244~258.
[6]方绍庆,陆承平.猪链球菌2型江苏分离株溶血素的纯化[J ].中国预防兽医学报,2003,(5):44~46.[7]闻玉梅.美国微生物学会会讯摘要[J].国外医学微生物分册,2001,24:40.[8]郁庆福.现代卫生微生物学[M ].北京:人民卫生出版社,1995.161~170.
[9]王亚宾,陈丽颖,王自振,等.鸡链球菌病病原分群鉴定[J].河南农业大学学报,2001,35(4):381~382.
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53#第4卷第3期韩梅红等:2株鸭源肠球菌的生物学特性的观察
Abstract:Different media w ere used to asses t he pollen viability of lily.T he results show ed t hat the germination rate w as only4.7%on t he medium added w ith no chem-i cals,and as high as79.7%on the medium added w ith10%sucrose,100mg#L-1Boric
acid and0.02mg#L-1Zn2+.T he storag e environment affecting the pollen vitalit y w ere
also evaluated.It indicated t hat t he pollen grain stored in cold and dry environment could
keep the pollen vitality long er.
Key words:L ilium long if lor um;germination rate;storage;pollen;viability
037Comparative Study on Water Use Efficiency of4Bermudagrass Varieties
FEI Yong-jun,LI AO Qi-rong,ZENG Xua n Colleg e of H ortic ultur e and Gar dening,Yang tz e Univ er sity,Jing z hou,
H u bei434025,China
Abstract:The net photosynthesis rates and transpiration rates of4bermudagrass varie-ties(Jackpot,Common,040459/680and Xinnong No.1)plant ed on vegetation concrete condition w ere measured.T heir w ater use efficiencies(W UE)w ere calculat ed.T he re-sult s indicated that the difference level of photosynthesis w ere higher than those of tran-spiration rate and w ater use eff iciency;The w ater use ef ficiency of4bermudagrass varie-ties from high to low w as:Common(3.69),040459/680(3.56),Jackpot(3.31),Xin nong N o.1(3.16);There w ere remarkable correlation among the net photosynthesis rate,the t ranspiration rate and w ater use efficiency of4bermudagrass varieties.
Key words:Cy nodon dacty lon L.;net photosynthesis rate;t ranspiration rate;w at er use efficiency
040Study on the Testing of Seed Viability of Leersia hexandra with Triphenyl Ttetrazolium Chloride Method
ZHU Gui-cai Colle ge of L if e Science s,S un Yatsen Univ er sity,Guang z hou,Guang d ong510275,China;
Colle ge of H or ticultu re and Gar de ning,Yang tz e Univ er sity,J ing z hou,H ubei434025,China
YAO Zhe n,LUO Chen-mei ZHOU We n-lin Colleg e of H orticu ltur e and Gard ening,Yangtz e Univ er sity, J ing z hou,H ube i434025,China
YANG Zho ng-yi(Colle ge of L if e S cience s,S un Yatsen Univ ersity,Guang z hou,G uang dong510275,China)
Abstract:In order to research t he conditions of determining seed viability of L eer sia hex andra w ith T T C(triphenyl tetrazolium chloride)met hod,the seed viability of L eer-sia hex andra w as determined under t he conditions of different temperature(25e,30e
and35e)and TT C concent ration(0.5%and1.0%)during the period of diff erent dye-ing time(0~48h).T he results show ed t hat under t he conditions of the temperature of 35e,t he TT C concentrat ion of0.5%and at the dy eing time of30h,the dyeing eff ect w as best.T hey could be t he most appropriat e condit ion t o determine L eersia hex andra seed viability.
Key words:L eer sia hex andra;seed viabilit y;triphenyl tet razolium chloride
042Research on Appraisal Method for Economic Value of Gardening Trees in C ourtyard
GAO H ua n-zhang,HUANG Gua ng-y ua n Colle ge of H orticultur e and Gar dening,Yang tz e Univ er sity,J ing z hou,
H u bei434025,Ch ina
CHENG Shu-bing(Bur eau of L and sc ape A rch itecture of J in gz hou City,Jing z hou,H ube i434100,China)
GE NG Hong-we i(B ure au of L andscap e A rchitecture of H ong.an County,H ong.an,H ubei436100,China)
Abstract:According t o t he most popular guide for plant appraisal-N ort h American CT-LA2000and the present status of int ernal research,research on arbor and shrub on w estern campus of Yangt ze Universit y has w as done.It s total economic value has been evaluat ed by measuring the quant itat ive guide line of grow th,surveying the market price of corresponding species,analyzing influencing factors of economic value and adjust ing t he w eighed coefficient of influencing fact ors.The result s show ed t hat the application process w as simple,rapid,highly practical,and is suitable for t he act ual situation of the current g ardening trees.economic value.
Key words:gardening trees;value appraisal;Yang tze U niversity
051Identification and Virulence of Two Enterococcus Strains Isolated from Ducks HAN Me i-hong(Colle ge of A nimal S cience,Yang tze Univ ersity,J ingz hou,H u bei434025,China)
GU Cha ng-qin(College of A nimal M ed icine,H u azh ong A gr icu ltur al Univ er sity,W uhan,H ube i430070,China)
Abstract:T he morphological,cultural characters,biochemistry characters of tw o E n-
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terococcus strains isolated from dying ducks and one reference strain of E.f acial s w ere studied and the sensitivity to 10antimicrobic agents w ere evaluated to identify the iso -lates.Results show ed that the bacteria shared t he follow ing characteristics:g ram -pos-i tive cocci,arrayed by chain,survival 10e ,45e and 6.5%NaCl brot h,f ermentation of sucrose and other biochemistry characters.M ost of t hese biological charact ers corre -spond w ith E.f acials .Additionally,the result s of drug sensitivity t est indicat ed that t he sensitive extent of different strains to the antimicrobial agents varied obviously.In conclusion,all the three strains w ere sensit ive to penicillin,vancomy cin and g ent amy -cin,but resist ant to tet racycline.
Key words:duck;Enter ococcus ;biochemistry characters
054Studies on the Manufacture of Xielijing Oil Emulsion Injection
LI Peng (Colle ge of A nima l S cie nce ,Yang tze Unive rsity ,J in gz hou,H ubei 434025,China)
Abstract:Pef lox acin M esy late w as select ed as the main original medicine to develop the Xielijing oil emulsion injection.The quality,stuck thickness and t he unusual toxicity of t he injection had been ex aminated.The result indicated t hat the injection w as stable,se -cure and did not have the exceptionally poisonous and side effect s.T he manufacture of Xielijing oil emulsion injection w as feasible.
Key words:Xielijing;oil emulsion inject ion;manufacture
056Study on Pharmacokinetics of Defervescence Suppository for Animals in Rabbits
JIANG Ta o (Colleg e of A nimal Sc ienc e ,Yangtz e Univ er sity ,J ingz hou,H ube i 434025,China)WEI Yun -fa ng (A nimal M e dicine F actor y of T ianmen City ,T ianmen,H ube i 431700,Ch ina)
LIU Chu -han ,ZHAO Nia n -biao Dep
artment of B ioeng ine ering ,J in gz hou Vac ational and T echnical Colle ge ,
Jing z hou ,H ube i 434100,China
LI Hong -guan ,DONG Xiu -jun (A H usband ry B ureau of J ing shan County ,J ing shan,H ubei 431800,LIU Zho ng -g ui (A nimal H usband ry B ureau of Gong .an County ,G ong .an,H ube i 434300,Ch ina)
ZHAO Da o -xio ng (L iv estock and F ow l Comp any of L iu j iaxiang P rison ,Qianj iang ,H ube i 433125,China)
Abstract:To study the plasma pharmacokinet ics of diclofenac sodium suppositories w hich w as made by ourself in rabbit,diclofenac sodium suppositories f or 6healthy rab -bits (as a single rect al formulation)w as used at a dose of 50mg per rabbit.T he plasma concentration of diclofenac sodium w ere determined using U V spectrophotometry,and pharmacokinetic analysis w as carried out by using softw are 3p97.The results show ed t hat the main pharmacokinetic parameters w ere as follow s:elimination half -life (t 1/2k )w as (5.1?1.2)h,the peak plasma concent ration (C max )w as (126.3?2.4)L g /mL ,t he time to C m ax (T m ax )w as (1.8?0.5)h,the area under the curve (A UC )w as (20.4?1.3)mg/(L #h),and t he concent rations -time data w ere best described by a one -com -partment open model w ith first order absorption.The data could be used for the applica -tion of diclofenac sodium t o be made of suppository rectally.
Key words:suppository of defervescence f or animal;diclof enac sodium;pharmacokinet ics
062Development of Taste Bud in Barbell of C hinese Sturgeon
CHAI y i Colleg e of Animal S cience ,Yangtz e Univ er sity ,Jing zh ou,H ubei 434025,China;H uaz hong A g ricultural
Univ er sity Fisher y Colleg e,W uhan ,H u bei 430070,China;K ey L aborator y of Fre sh w ater F ish Ge rmp la sm
Resourc es and Biotech nology ,M inistry of Ag riculture ,Yangtz e Riv er Re se arch I nstitu te ,Chinese
Ac ademy of Fish ery S ciences ,J ing z hou ,H ube i 434000,China
XIE Cong-xin (H uaz hon g A gr ic ultur al Univ e rsity Fisher y Colleg e ,W uh an,H u bei 430070,China)
WEI Qi -w ei K
ey L abor atory of F reshw ater Fish Ger mp lasm Resourc es and Biotechn olog y ,the M inistry of A gr ic ultur e of
P RC,Yang tz e Riv er R esearch I nstitute ,Ch inese A cad emy of Fisher y Sc ienc es,Jingz hou,H u bei 434000,China
Abstract:Histological st udies w ere carried out on the tast e bud in barbell of rost ral of Chinese st urgeon,A cip enser sinensis .It show ed that taste bud developed at 15days after hat ch.The number and height and w idth of t aste bud increased w ith proceeding develop -ment.The developing af ter 40days after hat ch w as slow.At 50days after hatch,taste bud in barbell centralized in one side w hich is not close to vent er of rostral.It is adaptive t o its feeding requirement.
Key words:taste bud;ontogeny;A cip enser sinensis ;histology
065Availab ility of Th ree Different Inorganic Phosphoru s S ources in Hemibarbus maculatus Bleeker
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条件治病菌之粪肠球菌研究报告观察
仅限学习使用个人资料整理 条件致病菌肠球菌）。对于肠球摘要：肠球菌不像大多数的乳酸菌一样，它不被认为是“安全可靠” 1．概述 链球菌属是一群触酶试验阴性、呈链状排列的革兰阳性球菌。该菌属种类繁多，目前临床上仍沿用Lancefield血清学方法进行分群（A、B、C、D、F、G等18个群），或根据溶血现象（β溶血、α溶血或草绿色溶血、γ溶血或不溶血）进行分类。化脓性链球菌是临床上最重要的链球菌，属A群、β溶血的链球菌。 2. 标本类型 血液、尿液、痰、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。 3. 鉴定 3.1 形态与染色革兰阳性球菌，固体培养基上呈单个或成双排列，较少呈链状排列，肉汤培养基中呈长链状排列，肺炎链球菌呈矛头状，成双或链状排列。 3.2 培养特性在血琼脂平板上菌落可出现三种溶血反应：α溶血周围有灰绿色的狭窄溶血环；β溶血周围有明显较大的完全透明环；γ溶血（不溶血性）无异常变化。肺炎链球菌菌落中央呈脐窝状、表面光滑、灰色、扁平，周围有草绿色α溶血环。 3.3 生化反应触酶试验阴性，对各种碳水化合物的分解因菌种而异，链球菌不被胆汁溶解。肺炎链球菌胆盐溶菌试验阳性，Optochin试验敏感（抑菌环＞14mm）。 3.4 鉴别要点 3.4.1 本菌属特征革兰阳性球菌，单个、成双或链状排列，菌落较小，可出现β溶血、α溶血或不溶血，触酶试验阴性。 3.4.2 根据溶血及关键性试验，对链球菌进行推测性鉴定分群。 A群链球菌（化脓性链球菌）：β溶血，杆菌肽敏感。 B群链球菌（无乳链球菌）：β溶血，CAMP试验阳性，马尿酸钠试验阳性。 C群链球菌（似马链球菌、兽疫链球菌和马链球菌等）：马尿酸钠、6.5%氯化钠耐盐试验均为阴性，血清学分型、杆菌肽耐药（抑菌试验阴性）。 D群肠球菌（粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌等）：胆汁七叶苷、6.5%氯化钠耐盐试验均为阳性，45℃生长。现归属于肠球菌属。 C、F及G群链球菌的鉴定常需用血清学方法。 非β溶血链球菌的鉴别见表1。 表1 非β溶血链球菌的鉴别 菌名Optochin试验胆汁溶菌试验胆汁七叶苷试验 肺炎链球菌+ + - 牛链球菌- - + 其他草绿色链球菌群- - - 3.5 操作步骤 3.5.1 涂片、染色观察菌落特征，挑取可疑菌落，涂片染色镜检。 3.5.2 触酶试验参见《触酶试验标准操作规程》。 3.5.3 鉴定从血琼脂平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。 4. 药敏 参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100-S20最新版本文件。 5. 质量控制 参见《质量管理程序》。 6. 检验结果解释与分析 6.1 草绿色链球菌是人体正常菌群的一部分，通常是不致病的，只有当草绿色链球菌出 耐万古霉素肠球菌感染防治专家共识 耐万古霉素肠球菌感染防治专家委员会 肠球菌广泛分布在自然界，常栖居人、动物的肠道和女性泌尿生殖系统，是人类的正常菌群之一。近年来，由于抗菌药物的广泛应用，使原本就对β一内酰胺类、氨基糖苷类抗菌药物具有内在抗药性的肠球菌耐药性进一步扩大，逐渐形成了多重耐药菌。在我国，耐万古霉素肠球菌(vancomycin resistant enterococci，VRE)感染的发生率呈逐年上升趋势，VRE已成为医院感染的重要病原菌之一[1，2]，它的产生对临床微生物学和流行病学提出了新的挑战。为了进一步规范并优化VRE感染患者的预防和治疗，《中华实验和临床感染病杂志(电子版)》编辑部与《医学参考报·感染病学频道》编辑部组织国内部分专家，结合多年经验对相关资料进行整理分析，形成了《耐万古霉素肠球菌感染防治专家共识》(以下简称《共识》)。本《共识》依据的循证医学证据等级见表1。 一、相关概念 1.肠球菌(enteroeoccus)：肠球菌为革兰阳性球菌，多数菌种为短链状排列，一般无芽胞、尢荚膜，最适生长温度37℃，最适pH值4.7～7.6。在需氧革兰阳性球菌中，肠球菌是仅次于葡萄球菌的重要院内感染致病菌，可引起泌尿道感染、腹腔感染、盆腔炎和心内膜炎，严重时可导致脓毒症，病死率达21.0％～27.5％[3]。在分离的肠球菌菌种分布中，粪肠球菌占绝大多数，其次为屎肠球菌。 2.天然耐药(natural resistance)：天然耐药又称固有性耐药，指细菌对某种抗菌药物具有天然的耐药性，通常由染色体基因决定，并会子代相传。肠球菌与其他临床上重要的革兰阳性菌相比，具有更强的天然耐药性，存在对头孢菌素类、部分氟喹诺酮类、氨基糖苷类等多种抗菌药物天然耐药。 3.获得性耐药(acquired drug resistance)：获得性耐药指细菌在接触抗菌药物后，改变代谢途径，使其自身具有抵抗抗菌药物而不被杀灭的能力，可由质粒将耐药基因转移到染色体，继而代代相传。肠球菌在大量广谱抗菌药物使用的前提下，出现了对β一内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、红霉素、氯霉素、利福平等药物的获得性耐药，其耐药机制各不相同。 4.耐万古霉素肠球菌：肠球菌在使用糖肽类抗菌药物(万古霉素)治疗过程中，其自身代谢和结构发生改变，使细菌对糖肽类(万古霉素)抗菌药物敏感性下降，甚至出现敏感性完全丧失，即为临床的VRE感染。 5.细菌定植：各种微生物(细菌)在人体中不同部位定居和不断生长、繁殖后代，但不产生临床症状，并不引起机体致病。这种现象通常称为“细菌定植”。定植的微生物必须依靠人体不断供给营养物质才能生长和繁殖，才能进而对人体产生影响(如导致感染)。 6.去污染(decontamination)：去污染是人为地将机体的正常菌群或已定植的细菌，部分或全部去除的一种防止感染措施，一般可分为全部去污染和选择性去污染两个类型。 (1)全部去污染为了防止手术后感染，在术前常常先给患者施用各种强力的广谱抗菌药物，试图在“绝对无菌”条件下进行手术，以保证手术成功。(2)选择性去污染选择性去污染就是采用窄谱抗菌药物，有针对性地去除某一类细菌。 二、耐万占霉素肠球菌的耐药机制 肠球菌在使用万古霉素治疗时，通过合成低亲和力的粘肽前体，使细菌的粘肽链末端成分发生改变，D-丙氨酰-D-乳酸(D-Ala-D-Lac)或D-丙氨酸-D-丝氨酸(D-Ala-D-Ser)代替了D-丙氨酸-D-丙氨酸 (D-Ala-D-Ala)，改变了万古霉素的作用位点，消除了与万古霉素结合的靶位，导致VRE的产生。VRE可分为VanA、VanB、VanC、VanD、VanE、和VanG不同表型和基因型，不同分型决定了对万古霉素和替考拉宁的不同耐药性[4,5]，见表2。VRE耐药基因可以转移给金黄色葡萄球菌等其他阳性菌。 三、耐万古霉素肠球菌的流行现状及传播方式 1988年，英国首次报道了VRE的出现，短短十几年内，VRE先后在澳大利亚、比利时、加拿大、丹麦、德国、瑞士和美国均有报道[6,7]。从1989年至1993年，美国疾病预防控制中心报道院内感染VRE病例从0．3％迅速上升至7.9％，而ICU的情况则从0.4％升至13.6％，1996年升至17.9％，2004年更是增加到31.3％[8]。在国内，2004年至2005年，我国大陆尚未报道VRE的发生，而2006年至2007年，通过卫生部全国细菌耐药监测网(Mohnarin)监测发现，粪肠球菌、屎肠球菌和其它肠球菌中分别有1.3％、3.2％和4.9％对万古霉素耐药，有1.6％、3.6％和5.7％对替考拉宁耐药，高于对万古霉素的耐药率[9]。在最新公布的2008年中国CHINET细菌耐药性监测3207例肠球菌中，分离出VRE粪肠球菌6例(均为VanA型)，屎肠球菌43例(37例VanA 型，6例VanB型)[10]。常见分离出VRE的部位包括尿、伤口、血、导管等。 VRE可通过患者之间传播，也可通过医护人员将耐药菌传给其他患者，污染的环境、医疗器械、各种用具均可传播VRE[11]。 四、VRE感染发生相关的危险因素 目前常见的VRE感染发生相关的危险因素包括[12,13]： 1.严重疾病，长期住ICU病房的患者； 2.严重免疫抑制，如肿瘤患者； 3.外科胸腹腔大手术后的患者； 4.侵袭性操作，留置中心静脉导管的患者； a)形态特征和生物学特性 参照YC/T 142进行描述 1)播种期 种子播种的日期。以“年月日”表示，格式为“YYYYMMDD” 2)成苗期 烟苗达到能够移栽时的日期。以“年月日”表示，格式为“YYYYMMDD”。 3)苗龄 播种至烟苗成苗的天数。单位为d。 4)移栽期 烟苗进行大田移栽的日期。以“年月日”表示，格式为“YYYYMMDD”。 5)现蕾期 观察群体50%植株现蕾的日期。以“年月日”表示，格式为“YYYYMMDD”。 6)中心花开放期 观察群体50%植株中心花开放的日期。以“年月日”表示，格式为“YYYYMMDD”。 7)移栽至现蕾天数 移栽期至现蕾期的天数。单位为d。 8)移栽至中心花开放天数 移栽期至中心花开放期的天数。单位为d。 9)蒴果成熟期 观察群体50%植株蒴果成熟的日期。以“年月日”表示，格式为“YYYYMMDD”。 10)全生育期 播种期至蒴果成熟期的总天数。单位为d。 11)株型 现蕾期植株生长形态（见图1）。 1 橄榄形 2 筒形 3 塔形 1 2 3 图1 株型 12)株高 自垄背或地表至第一青果柄基部的高度。单位为cm 。 13) 茎围 株高1／3处茎的周长。单位为cm 。 14) 节距 株高1／3处测量上下各5个叶位（共10个节距）的平均长度。单位为cm 。 15) 叶数 植株基部至中心花以下第五花枝处着生叶片数。单位为片。 16) 叶长 植株中部最大叶，自茎叶连接处至叶尖的直线长度（见图2）。单位为cm 。 图2 叶长、叶宽及叶柄 17) 叶宽 植株中部最大叶，与主脉垂直的叶面最宽处的长度（见图2）。单位为cm 。 18) 叶柄 叶柄与茎连接处至叶基部的长度（见图2）。单位为cm 。 19) 叶形 根据叶片的长宽比例（或称叶形指数），以及叶片最宽处的位置确定（见图3）。 1 宽椭圆 2 椭圆 3 长椭圆 4 宽卵圆 5 卵圆 6 长卵圆 7 心脏形 8 披针形 叶长 叶长 肠球菌检测 致病性检测耐药性检测肠球菌鉴定 1.07肠球菌为革兰阳性（G+）球菌，广泛分布于自然环境及人和动物消化道内。20世纪80年代以来，肠球菌严重感染的发生率和病死率明显升高，并且由于肠球菌的固有耐药和获得性耐药，使许多常用抗菌药物在治疗肠球菌感染时失败。因此，从分子水平对肠球菌致病因子、肠球菌引起的感染机制与治疗的研究显得尤为重要。 细菌分类学上，肠球菌属早期并不存在，现今的一些菌种本归属于链球菌属,1989年，依据Facklam和Collins的分类，肠球菌属内包括十二个种及一个变异株，它们是：粪肠球菌（E.faecalis）屎肠球菌（E.faecium) 鸟肠球菌(E.avium)酪黄肠球菌(E.casseliflavus) 坚忍肠球菌(E.durans)鸡肠球菌E.galinarum) 芒地肠球菌(E.mundii)恶臭肠球菌(E.maladoratum) 希拉肠球菌(E.hirae)孤立肠球菌（E.solitarius） 棉子糖肠球菌(E.raffinosus)假鸟肠球菌(E.pseudoavium) 粪肠球变异株(E.faecalis var)。 肠球菌属包括粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌、类鸟肠球菌、棉子糖肠球菌等21个种。 鉴定 形态与染色革兰阳性球菌，单个、成双或短链排列。 培养特性在血琼脂平板上35℃培养18～24小时，形成较小、灰白色，有溶血或溶血环的菌落。在康凯琼脂平板上形成较小、干燥、粉红色菌落。 生化反应触酶试验阴性，分解甘露醇，胆汁七叶苷试验阳性，在含6.5%NaCl肉汤中生长，多数菌株PYR试验阳性，对杆菌肽耐药。 操作步骤 涂片、染色观察菌落特征，挑取可疑菌落，涂片染色镜检。 触酶试验参见《触酶试验标准操作规程》。 鉴定从血琼脂平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。 科标生物检测中心从事饲料、土壤肥料、微生物及生物制剂、化妆品及日化用品、木材及木制品、其他生物材料等生物相关产品的性能测试、成分分析以及配方研发等工作。09 第三节肠球菌属 广泛分布在自然界，常栖居人、动物得肠道与女性生殖道，就是引起医院内感染得重要病原菌。 一、分类： 链球菌科，具有D群链球菌得D抗原，过去就是属于链球菌属得D 群，但种系分类法用DNA杂交研究发现，证实粪肠球菌与屎肠球菌不同于链球菌属细菌，与链球菌同源程度低，所以现将其从链球菌属中划分出来，命名为肠球菌属。由16SrRNA序列分析与核酸杂交等，证实有19种肠球菌，分成5群，临床标本分离得多属于群2。 二、临床意义： 最多见于尿路感染，多与尿路器械操作、留置导尿、尿路结构异常有关，就是重要得医院感染病原菌。腹腔与盆腔创伤时肠球菌也就是常见细菌。肠球菌引起得菌血症常发生于有严重基础疾病得老年人、长期住院接受抗生素治疗得免疫功能低下得患者。近年来不断上升得肠球菌感染率与广泛使用抗生素出现得耐药性有关。 三、微生物特性： G+球菌，单个、成双或短链状排列，琼脂平板上生长得细菌呈球杆状，液体培养基中呈卵圆形、链状排列。无芽胞与荚膜，个别菌种有稀疏鞭毛。 兼性厌氧菌，最适温度35℃，大多数菌株在10℃与45℃均能生长。所有菌株在含6、5%NaCl肉汤中能生长，在40%胆汁培养基中能分解七叶苷。 多数菌种具有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-β-萘基酰胺（PYR），氧化酶（-），触酶（-）但某些菌株触酶可出现弱（+）。当粪肠球菌培养于含血得培养基中，可合成细胞色素氧化酶或触酶或两者皆有。 含D群链球菌D抗原。 与链球菌得显著区别： 能在高盐（6、5%NaCl）、高碱（pH9、6）、高胆汁（40%）培养基、10℃与45℃均能生长、对许多抗菌药物表现天然耐药 四、微生物检查： （一）检验程序：图6-3 （二）标本采集： 血、尿、创伤标本等，标本1h内接种完毕。 （三）标本直接检查： G染色镜检 （四）分离培养与鉴定： BAP 若标本中含G-杆菌，可用选择鉴别培养基： ①叠氮胆汁七叶苷琼脂——可抑制G-菌生长，肠球菌分解七叶苷为黑色菌落； ②哥伦比亚多黏菌素-萘啶酸琼脂（CAN）与苯乙基乙醇琼脂（PEA）。35℃、24h形成灰白色、不透明、表面光滑、直径0、5~1mm大小得圆形菌落，羊血平板上为α溶血或不溶血，粪肠球菌得某些菌株在马 欧李花期生物学特性观察 一、目的意义： 二、花期是果树的重要物候期，对了解品种的特征习性和授粉与结果具有重要的意义。 三、研究材料：农大欧李资源圃保存的各种欧李种质 四、研究内容： 参考资料： （一）果树开花规律一般分为六期：全树5％的花开放为初花期；25％以上的花开放为盛花始期；50％的花开放为盛花期；75％的花开放为盛花末期；全树花开并有部分开始落花为经花期；全树5％的花开始正常落花瓣至全树花瓣脱落则为谢花期。 树种不同，开花早晚不同。北方区域内的大部分果树均于春季开花，梅、杏、李、桃开花早；梨、苹果等次之；葡萄、山楂、柿子、枣等最晚，人工调节或棚栽果树另当别论。 同品种、同一地点栽植的果树，开花早晚亦有差别。其原因是树体内贮藏营养水平与果枝类型、树势造成的。同时，不同年份间开花也有区别，与花前当地积温有关。 果树开花，一般在午前开花，如苹果、山楂、梨、桃等，但枣树开花习性却为昼开型和夜开型。猕猴桃花期短而集中，一般都集中在清晨4－8时开放，以5时左右为最佳。 果树因树种、品种间的差异性，开始持续时间与外界条件都有区别，单株苹果花期约5－15天，桃约5－11天，梨约6－15天，枣约2个月。花序、单花的持续时间也各不相同。一般情况，树体营养水平高，开花齐，时间长；树体营养水平低的弱树、老树，花开不整齐、持续时间短。 参考资料（二） 欧李花芽萌动到开花应该分为11个时期：1萌动期2大花蕾膨大期3小花蕾分离期4单花蕾分离期5花萼露心期6花朵膨大期7初花期8盛花初期9盛花中期（10盛花末期11落花 期 1萌动期（此时不是叶芽，而是花芽的萌动，表明着欧李的地上部器官已开始感知气温的变化，节位上的褐色花芽有白点出现，实际上为原来包裹很紧的褐色鳞片稍稍松开，露出白色的花萼，大约在2月下旬即开始）----2大花蕾膨大期（萌动期开始后，花蕾则开始膨大，约一个月的时期内，即从2月下旬到了3月下旬，分布在叶芽周边的2-4个大花蕾在不断地膨大，首先是花蕾外部的褐色鳞片被内部生长着的大花蕾撑开，褐色鳞片被推到花蕾的下层，逐渐显露出各个品种大花蕾固有的色泽，此时中间的叶芽可以看到白色生长点开始膨大，即叶芽的鳞片开始松动）----3小花蕾分离期（此期约需10天时间，到4月初完成，大花蕾的不断膨大实际上为小花蕾不断生长的结果，因此，大花蕾生长到一定大小时，每个大花蕾中分离出2-3个小花蕾，每个小花蕾中实际包含着2-4个单花蕾，此时叶芽已清晰可见，）----4单花蕾分离期（此期约需10天左右的时间，约在4月上旬。此时小花蕾中的单花蕾不断膨大，开始出现一个个单花蕾，单花蕾内部的花瓣、花药等器官开始生长，使单花蕾不断膨大，最后膨大到2毫米，使每个节位上的单花蕾逐渐显露出来，每个节位上的花朵数基部固定下来，并显露出每个品种花蕾固有的色泽，此时叶芽已开始转绿，花叶同出的9号品种叶芽与花蕾大小差不多，而先花后叶的品种如01-01等品种，花蕾大于叶芽的两倍。此时也是观察早花品种还是迟花品种的时期，早花品种此时的单花蕾已很大，一般在2毫米以上，迟花品种的单花蕾一般较小，在2毫米以下如S-D）----5花萼露心期（此时单花蕾内部的花瓣、花药等器官生长加快，花药也清晰可见，使单花蕾的花萼顶部被花朵撑开，即花萼露心期，每个品种内部的花瓣色泽开始出现，4月4日观察到）----6花朵膨大期（气球期）(此时，花萼内部的花瓣进一步膨大，花萼下退，花柄伸长到5-10毫米，花瓣露出到5毫米，并膨大成气球状，约需3-5天时间，最早在4月10日观察到---7初花期（气球期1-2天后，温度在12度时，花朵开始展开，第一朵花展开后即为初花期，但要注意近地面的花一般先开，不能算，起码是地上部20厘米以上的花开才能算----8盛花初期（1-2天后，开花数量由5%进入到25%）----9盛花中期（1-2天后，开花由25%进入到75%）----10盛花末期（1-2天后由75%进入到100%）---11落花期（从初花开始，7天后花瓣开始凋落，此时幼果可以看到，毛樱桃的果实已到黄豆大,最早开始的是早开花品种，约在4月20-24日，最晚的为S-D、99-02、4号和Y14-26（厕所旁，到4月28日花瓣仍在树上），大果园为S-D\Y11-06、Y03-09，4号，到4月29日，Y11-06\Y03-09\4号、S-D的花瓣仍在树上，S-D的花瓣后期转红，很好看，可做观赏）2、同一品种不同枝条类型和同一枝条上开花时间顺序 选早花（03-25、J-2\01-01）、中花、晚花（S-D、晚花、4号）品种各1-2个，观察基生枝和上位枝上的开花时间 第一章生物学特性 一、对环境条件的要求 （一）气候条件 1、温度 核桃适宜生长在年均温度8－16℃，极端最低温度不低于-20℃，极端最高温度在38度以下，无霜期170天以上地区。 2、水分 核桃对于干燥空气环境适应性强、但对土壤水分变化较为敏感。缺水，使树体生长弱，大量落果、落叶。土壤水分过多，会造成通气不良，影响地上部的生长发育，甚至死亡。因此，核桃耐早、怕涝，但不能缺水。 3、光照 核桃喜光，宜生长在全年日照大于2000小时的地区和区域。 4、风 核桃一年生枝髓心较大，抗风力较弱，幼树易抽条。 （二）、土壤条件 1、土壤质地 土壤以疏松壤土最好。质地黏重、砂石含量多的土壤不适宜核桃生长。 2、土壤酸碱性 适宜核桃生长的土壤PH值范围6.5-8.3,核桃不耐酸碱，土壤含盐量应在0.2%。 3、土层厚度 核桃属深根树种，土层厚度在1m以上且地下水位在3m 以下时生长良好。 （三）、地势 核桃可在土层深厚且有水浇条件的坡地、丘陵山地、平地等栽植。坡度以不大于25°为宜，避免宜积水的低洼地种植。 二、核桃主要器官与发育 一、根 核桃根系分为主根、侧根和须根。其主根发达，侧根伸展较远，须根广泛。幼树时根比茎生长快，主根比水平根生长快，三年生以后侧根数量逐渐增多，水平根生长加快。所以群众说核桃是“先坐下来，再站起来”。成年核桃树主根深可达3m多，而水平根可延伸至树冠边缘甚远。核桃根系的垂直分布主要在0—60㎝的土层中，其中20-40㎝深的土层中最多。因此，施肥深度范围多在20—40㎝、范围为冠下及边缘。 根的生长周期一般在发芽前3—4周新根的形成数量和延长生长增加，至新梢快速生长开始前减缓。在新梢生长停止和果实生长减缓时，根生长又开始加速，直至落叶又降至 肠球菌-病菌简介 肠球菌 肠球菌为院内感染的重要病原菌，不仅可引起尿路感染、皮肤软组织感染，还可引起危及生命的腹腔感染、败血症、心骨膜炎和脑膜炎，由于其固有耐药性，所致感染治疗困难。本文就肠球菌的生物学特性、所致感染的临床表现、肠球菌在院内感染中的地位、致病性、耐药性及所致感染的治疗作一综述。 肠球菌（Enterococcus）属链球菌科，是人类和动物肠道正常菌群的一部分，通常在引起腹腔和盆腔感染所分离的混合菌丝中发现，既往认为肠球菌是对人类无害的共栖菌，但近年研究已证实了肠球菌的致菌力。在需氧革兰阳性球菌中，它是仅次于葡萄球菌的重要院内感染致病菌[1]，肠球菌亦可引起院外感染。肠球菌不仅可引起尿路感染、皮肤软组织感染，还可引起危及生命的腹腔感染、败血症、心内膜炎和脑膜炎等[2]。 肠球菌-生物学特性及分类 肠球菌为圆形或椭圆形、呈链状排列的革兰阳性球菌，无芽胞，无鞭毛，为需氧或兼性厌氧菌。本菌对营养要求 肠球菌 较高，在含有血清的培养基上生长良好。在血平板上经37℃培养18小时后，可形成灰白色、不透明、表面光滑、直径0.5～1mm大小的圆形菌落，不同的菌株表现为不同的溶血现象。与同科链球菌的显著不同在于本菌在生化反应上能耐受高盐和胆汁培养基，并对许多抗菌药物表现为固有耐药。 根据其利用糖类的特征可将肠球菌分为3组[3，4]：第一组以鸟肠球菌（E.avium）为代表； 第二组以粪肠球菌(E.faecalis)等；包括尿肠球菌(E.faecium)等；第三组以坚韧肠球菌(E.durans)为代表。其中对人类致病者主要为粪肠球菌和尿肠球菌[3，5]。在临床分离菌中粪肠球菌占85%～95%、尿肠球菌占5%～10%，其余少数为坚韧肠球菌和其他肠球菌。 肠球菌-临床表现 尿路感染为粪肠球菌所致感染中最为常见的，绝大部分为院内感染。据报道16%的院内尿路感染由肠球菌引起， 肠球菌 仅次于大肠杆菌居第2位[1]。其发生多与留置导尿管、其他器械操作和尿路结构异常有关[3]。一般表现为膀胱炎、肾盂肾炎，少数表现为肾周围脓肿等。 腹腔、盆腔感染[4～6]在肠球菌感染中居第2位。腹腔、盆腔感染中肠球菌的检出率为7.6%，低于大肠杆菌（19.7%）和脆弱拟杆菌（10.7%）居第3位，常系与后两者之一的混合感染。由于在这些部位肠球菌为正常寄殖菌之一，其致病作用较难评价[14]。但抗感染治疗若不覆盖肠球菌并寻其清除，有时会无效。 败血症[7，8] 在肠球菌感染中居第3位。院内感染败血症中肠球菌所致者占8%，低于凝固酶阴性葡萄球菌（26%）和金黄色葡萄球菌（16%）居第3位，其中87%为粪肠球菌、9%为尿肠球菌、4%为坚韧肠球菌。入侵途径多为中心静脉导管、腹腔、盆腔化脓性感染、泌尿生殖道感染、烧伤创面感染等，相关危险因素为肿瘤，中性粒细胞减少，肾功能不全，糖尿病，应用肾上腺皮质激素，对肠球菌无抗菌活性的广谱抗生素如头孢菌素，外科手术、烧伤、多发性创伤，重症监护室及新生儿监护室等。病死率12.6%～57%。 心内膜炎[7，9] 约5%～20%的心内膜炎由肠球菌引起，为引起心内膜炎的第3位病原菌，其中93%为粪肠球菌、 肠球菌 文件页码：1/3 1．概述 链球菌属是一群触酶试验阴性、呈链状排列的革兰阳性球菌。该菌属种类繁多，目前临床上仍沿用Lancefield血清学方法进行分群（A、B、C、D、F、G等18个群），或根据溶血现象（β溶血、α溶血或草绿色溶血、γ溶血或不溶血）进行分类。化脓性链球菌是临床上最重要的链球菌，属A群、β溶血的链球菌。 2. 标本类型 血液、尿液、痰、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。 3. 鉴定 3.1 形态与染色革兰阳性球菌，固体培养基上呈单个或成双排列，较少呈链状排列，肉汤培养基中呈长链状排列，肺炎链球菌呈矛头状，成双或链状排列。 3.2 培养特性在血琼脂平板上菌落可出现三种溶血反应：α溶血周围有灰绿色的狭窄溶血环；β溶血周围有明显较大的完全透明环；γ溶血（不溶血性）无异常变化。肺炎链球菌菌落中央呈脐窝状、表面光滑、灰色、扁平，周围有草绿色α溶血环。 3.3 生化反应触酶试验阴性，对各种碳水化合物的分解因菌种而异，链球菌不被胆汁溶解。肺炎链球菌胆盐溶菌试验阳性，Optochin试验敏感（抑菌环＞14mm）。 3.4 鉴别要点 3.4.1 本菌属特征革兰阳性球菌，单个、成双或链状排列，菌落较小，可出现β溶血、α溶血或不溶血，触酶试验阴性。 3.4.2 根据溶血及关键性试验，对链球菌进行推测性鉴定分群。 A群链球菌（化脓性链球菌）：β溶血，杆菌肽敏感。 B群链球菌（无乳链球菌）：β溶血，CAMP试验阳性，马尿酸钠试验阳性。 C群链球菌（似马链球菌、兽疫链球菌和马链球菌等）：马尿酸钠、6.5%氯化钠耐盐试验均为阴性，血清学分型、杆菌肽耐药（抑菌试验阴性）。 D群肠球菌（粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌等）：胆汁七叶苷、6.5%氯化钠耐盐试验均为阳性，45℃生长。现归属于肠球菌属。 C、F及G群链球菌的鉴定常需用血清学方法。 非β溶血链球菌的鉴别见表1。 表1 非β溶血链球菌的鉴别 菌名Optochin试验胆汁溶菌试验胆汁七叶苷试验 肺炎链球菌+ + - 牛链球菌- - + 其他草绿色链球菌群- - - 3.5 操作步骤 3.5.1 涂片、染色观察菌落特征，挑取可疑菌落，涂片染色镜检。 3.5.2 触酶试验参见《触酶试验标准操作规程》。 3.5.3 鉴定从血琼脂平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。 4. 药敏 参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100-S20最新版本文件。 5. 质量控制 参见《质量管理程序》。 粪肠球菌所致尿路感染治疗方法是什么? 粪肠球菌感染是属于比较常见的一种人体疾病，患有粪肠球菌尿路感染会容易影响到身体的健康，同时还会容易导致人体盆腔内感染等，而治疗粪肠球菌的尿路感染方法有很多种，可以先通过注射药物的方式进行治疗，可以注射抗炎类药物，或者是服用抗炎类药物进行治疗。 ★病因 肠球菌属中对人类致病者主要为粪肠球菌，少数为屎肠球菌、坚忍肠球菌等。肠球菌属为人类肠道正常菌群，在外界环境中亦存在。该类菌可致院内，也可致院外感染，广谱抗菌药，尤其是头孢菌素类等的应用，留置导尿，血液及腹膜透析等均为导致肠球菌院内感染的危险因素。 1、尿路感染粪肠球菌所致感染中最为常见，院内尿路感染 多发生于留置导尿管或其他器械应用的患者，多表现为下、上尿路感染，少数为前列腺炎和肾周脓肿，在院外单纯性尿路感染中肠球菌所致者相对少见。 2、败血症和心内膜炎尿路、腹腔、盆腔感染、烧伤后伤口感染等均可成为败血症的入侵病灶，肠球菌约可占感染性心内膜炎病原菌的5%～15%，主要为粪肠球菌，少数为屎肠球菌、鸟肠球菌(E.avium)、坚忍肠球菌等。 3、腹腔、盆腔感染较大肠杆菌和厌氧脆弱类杆菌引起者为少见，常系与上述细菌的混合感染。 4、其他少见情况下肠球菌可致伤口感染、蜂窝织炎、脑膜炎，极少致呼吸道感染。由粪肠球菌、屎肠球菌引起的早产儿败血症和脑膜炎有少数病例报道。 ★治疗 肠球菌感染的抗菌治疗肠球菌对多种抗生素或抗菌药耐药，仅对青霉素、氨苄西林呈中度敏感，哌拉西林等亦可对其具中等抗菌活性，因此可选用上述药物，严重感染败血症、心内膜炎、脑膜炎时需与氨基糖甙类抗生素联合应用。万古霉素对肠球菌有良好杀菌作用，因此根据病情，也可选用青霉素类与万古霉素的联合应用，青霉素类的剂量宜大。心内膜炎等的疗程宜长，以避免复发。 櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏櫏40 50kg 喷雾；稻飞虱可用25%噻嗪酮·异丙威150g 或80%烯啶·吡蚜酮10g 加水50kg 喷雾；稻纵卷叶螟可用20%氯虫苯甲酰胺（康宽）10g 或40%速灭抗（丙溴磷）乳油120mL 加水60kg 喷雾；稻秆潜蝇可用48%乐斯本乳油100mL 或20%丁硫克百威（好年冬）乳油50mL 对水50kg 喷雾。 参考文献： ［1］马均，吕世华，徐富贤，等.杂交中稻超高产强化栽培技术 ［J ］.四川农业科技，2010（5）：17. ［2］杨文钰，屠乃美.作物栽培学各论南方本［M ］.北京：中国 农业出版社，2011. （责任编辑：刘新永） 收稿日期：2012－06－01 作者简介：林永华，男，1969年生，工程师。 锥栗优良品种— ——油榛生物学特性观察林永华 （福建省建瓯市林业局353100） 摘 要：在多年建立的示范基地，对油榛进行形态特征与生物学特性的观察，阐述其形态特征、 主要营养成分、开花结果习性及物候期。关键词：锥栗；优良品种；特征特性 Observation on biological characteristics of a fine cultivar of Castanea henryi Youzhen LIN Yong-hua （Jian ’ou Forestry Bureau ，Fujian Province 353100） Abstract ：This paper introduced biological and morpho logical characteristics ，essential nutrients ，the habits of flowering and fruiting and phenological period of a fine cultivar of Castanea henryi cv．Youzhen according to the observation and records for many years in the demonstration base of Castanea henryi ．Key words ：Castanea henryi ；superior cultivar ；characteristics 锥栗俗称榛子，系壳斗科、栗属的落叶乔木， 树体高大，经济价值高，含淀粉4.2%、蛋白质7.6%及多种维生素和无机盐。油榛是从现有栽培品种中筛选出来的优良品种，随着锥栗栽培技术水平的提高，农户的栽培效益显著提高，推进了油榛种植面积的不断扩大，已成为锥栗主产区农村经济发展的支柱产业。 为了推进锥栗产业的可持续发展，提高锥栗产 量和效益，8年来建立了优良品种— ——油榛示范基地，并进行油榛特征特性的观察和研究。现将其主 要特征特性总结如下。 1形态特征 油榛树体高大，属喜光与深根性果树，根系庞大，较耐干旱和瘠薄，树干比较通直，生长速度快，年长高1.0 1.5m ，其芽有花芽、叶芽和隐芽，着生于枝干的不同位置，其花芽着生于结果枝的顶端和上部。油榛叶片为单叶互生，长披针形，当叶片充分长大后，托叶便自行脱落。叶基圆形或楔形，先端渐尖或长尾状渐尖，叶缘具刺芒状锯齿。叶色淡绿、绿或浓绿。典型油榛的叶片背面光滑无毛。成年树树高12m 以下，平均树高8.9m 、树冠8.7m 、主枝数3个，树形半球形。平均叶长15.8cm 、宽5.3cm ，披针椭圆形。雄花序长15cm 。球苞较大、近球形，横径5.75 6.76cm 、纵径5.53 6.72cm ；苞梗长1.05 1.26cm ；刺束较 屎肠球菌 开放分类：健康生活细菌 屎肠球菌属肠球菌属，是人及动物肠道中正常菌群的一部分，肠球菌为圆形或椭圆形、呈链状排列的革兰阳性球菌，无芽胞，无鞭毛，为需氧或兼性厌氧菌。 摘要 目录 1简介 2耐药特征 3耐药性分析 4溶血素形成过程 5生物学特性 6对抗生素耐药性分析 7应用研究 8潜在危害性 屎肠球菌- 简介 屎肠球菌图册 屎肠球菌是动物肠道正常菌群中的菌类，因其能产生乳酸，所以归属于乳酸菌类。屎肠球菌是一种益生菌，对维持动物肠道菌群生态平衡起到重要作用，特别是在幼龄动物的肠道保健和疾病的防疫和治疗上有突出的表现。许多企业将其制成微生态饲料添加剂，但是屎肠球菌的抗逆性较差，在生产加工中不能有效的保持其活性，对屎肠球菌的利用产生了很大的问题。 屎肠球菌，革兰氏阳性，椭圆形或球杆状，无芽孢，无鞭毛。生长温度为30℃～40℃，适宜pH为5.0～7.5。最适生长温度为35～38℃。屎肠球菌是兼性厌氧的乳酸菌，和大多数的乳酸菌一样，其耐酸性耐高温性等抗逆性能差，但是相对于严格厌氧、培养和保存条件都苛刻的双歧杆菌、乳杆菌来说，屎肠球菌更是便于生产和使用的首选菌种。常规的乳酸菌必须在动物肠道的特定部位才能产生功效，天然乳酸菌不耐饲料制粒时的高温、胃酸及胆盐的侵蚀。 经饲料制粒后大多数乳酸菌会死亡，在胃里大约30min后也会死亡殆尽，安全到达肠道发挥作用的活菌数非常低，也无法吸附在肠粘膜的适当位置，随着粪便排出体外。屎肠球菌代谢可以产生有机酸、过氧化氢细菌素等物质，这些物质具有抑制病原菌和腐败菌，提高免疫力、改善畜产品品质等生理功效。 其中代谢产生的细菌素可有效治疗养殖场中常见的顽固疾病，如对葡萄球菌、梭状芽孢杆菌、沙门氏菌和志贺氏菌有拮抗作用，并且不留有药残。代谢产生大量乳酸，可以显著降低动物肠道pH，保持肠道的酸性环境，抑制病原菌的生长，对致病菌痢疾杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、弯曲杆菌、葡萄球菌等致病菌有拮抗作用。过氧化氢能抑制和杀死革兰氏阴性菌和过氧化氢阳性菌如假单胞菌属、大肠杆菌类、沙门氏菌属。 屎肠球菌- 耐药特征 了解粪肠球菌和屎肠球菌在临床标本中的分布及对常用抗菌药物的耐药性，比较不同标本中两种肠球菌的耐药性，为临床治疗提供参考。方法常规法进行菌种鉴定，纸片扩散法进行药物敏感试验。结果420株肠球菌属，来源于尿液、脓液分泌物、痰液，分别占43％、20％、14％位居各类标本中的前3位，粪肠球菌对青霉素、氨苄西林和哌拉西林／他唑巴坦的耐药率分别为23．0％、17．6％和21．2％，明显低于屎肠球菌对这3种抗菌药物的耐药率（90．0％、87．0％和87．7％），而屎肠球菌对氯霉素和四环素的耐药率分别为7．9％和24．6％，明显低于粪肠球菌对这两种抗菌药物的耐药率（43．8％和74．4％），两种肠球菌中，未发现万古霉素耐药株；尿液标本中粪肠球菌对呋喃妥因的耐药率明显低于屎肠球菌。结论临床标本中，肠球菌属在尿液中的分布最高；粪肠球菌和屎肠球菌的耐药谱明显不同，在治疗时，应根据不同的菌种选择用药，由于肠球菌属对万古霉素的耐药率极低，在重症感染时，可选用万古霉素进行治疗。 屎肠球菌- 耐药性分析 屎肠球菌图册 一、材料和方法 1、标本来源 2004年1月至2007年12月本院住院患者的临床标本中分离出的144株粪肠球菌和121株屎肠球菌(多次分离的重复株以第一次计算)，其中尿80株、痰75株、分泌物27株、血25株、引流液17株、胆汁14株、脓液10株、导管9株、腹水8株。 2、医院感染的诊断标准按照卫生部医政司医院感染监控小组制定的医院感染的诊断标准。 3、细菌培养鉴定和药敏试验按常规的方法对住院患者的各种临床标本进行细菌的培养分离，用VITEK2全自动微生物鉴定仪及配套试剂进行细菌的鉴定及药敏试验；鉴定卡GP、药敏卡AST-353。 抗肠球菌感染药物的合理选择 第二军医大学长海医院药学部朱全刚胡晋红 https://www.360docs.net/doc/0f17571885.html,/ 肠球菌原本是人体肠道中的正常寄居菌,但近年来，随着免疫抑制剂及抗菌药物的广泛使用，肠球菌已成为重要的条件致病菌，可引起人体多种组织脏器的严重感染，感染发生率正在逐年上升。更值得关注的是，从临床标本分离的肠球菌属细菌中，有许多为多重耐药菌株，特别是氨基糖苷类高水平耐药肠球菌以及耐万古霉素肠球菌的出现，给临床治疗带来了很大的困难。了解和认识肠球菌检测结果的临床意义、肠球菌感染治疗的抗生素选择与临床应用，对提高临床肠球菌感染治疗效果将非常重要。 解读肠球菌检测结果的临床意义 肠球菌可分离于痰、尿、胆汁、血液等多种标本中，主要有粪肠球菌和屎肠球菌两种。根据美国临床和实验室标准化研究所（CLSI）颁布的《抗菌药物敏感性试验执行标准》（2009年1月，第19版）规定，药敏试验的结果按敏感、中介、耐药和不敏感分类报告（见表1）。 下载 (98.27 KB) 2010-5-10 20:45 对于肠球菌属，药敏试验报告的药物通常分A、B、C和U组。A组为首选并常规报告的药物，包括氨苄西林和青霉素。B组为首选但有选择性报告的药物，包括达托霉素、利奈唑胺、奎奴普丁/达福普汀及万古霉素。此类药物通常用于对A组过敏、耐受或无效的病例。C组为替代性或补充性报告的药物，包括庆大霉素和链霉素，除非对庆大霉素和链霉素高水平耐药。U组为仅用于泌尿道感染的替代药物，包括环丙沙星、左氧氟沙星、诺氟沙星、呋喃妥因和四环素。 通常情况下，对青霉素敏感非产β内酰胺酶的肠球菌，可预报其对氨苄西林、阿莫西林、氨苄西林/舒巴坦、阿莫西林/克拉维酸、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦敏感。但对氨苄西林敏感肠球菌不能推定其对青霉素敏感，如需要青霉素药敏结果，则必须对青霉素进行试验。对四环素敏感菌株也被认为对多西环素和米诺环素敏感，但对四环素中介或耐药的某些株可以对多西环素、米诺环素敏感。磷霉素仅用于尿道分离粪肠球菌，红霉素、氯霉素不是泌尿道分离株常规报告药物。 因产β内酰胺酶导致的对氨苄西林或青霉素耐药的肠球菌，用常规纸片法或稀释法无法可靠地检测出来，所以对血和脑脊液分离株推荐用头孢硝噻酚β内酰胺酶试验。β内酰胺酶试验阳性，提示肠球菌对青霉素耐药，同时也对酰胺基、羧基-和脲基青霉素耐药。 抗肠球菌感染药物概况及临床选择 抗肠球菌感染的药物有多种（见表2），临床医师应根据抗生素应用的临床指征和实验室分离株的耐药情况合理选用抗生素,控制细菌耐药性增长,延长抗生素使用寿命。对肠球菌感染的治疗, 需要结合肠球菌的最新流行病学资料及耐药特点来选择相应的治疗方案（见表3）。 条件致病菌肠球菌 摘要：肠球菌不像大多数的乳酸菌一样，它不被认为是“安全可靠”（GRAS）。对于肠球菌的安全评价仍存有争议。虽然肠球菌被认为是“积极“或在奶酪技术中有用，但它的隔离种群已经作为对人类的条件致病菌出现。因此，这些细菌对发酵乳制品是否有益处于似是而非的地位，以为它存在有潜在的危险。本篇综述是概述了肠球菌的积极的和消极的两种特性，并举例说明这个菌的具有争议的特性。根据食品安全评价准则，我们提出对于每个潜在的技术应变逐个进行评估，并且建议肠球菌在发酵食品中使用前进行个别研究。 1.简介 肠球菌最初列为D群链球菌，这种分类可以追溯到由兰斯菲尔德建立的计划。1984年，肠球菌给予了新的位置被列为肠球菌属，在经过DNA-DNA和DNA-RNA杂交的研究后证明它与链球菌属有较远的关系(Schleifer and Kilpper-Balz, 1984)。到目前为止32种已被提议列入肠球菌属（2005年10月26号)。肠球菌种适宜在6.5％氯化钠，40％胆汁盐且pH值在9.6，并可以在60°C的环境下生存30分钟。大多数品种也可以在10℃至45℃之间生长(Moellering,1992;Flahautet al.,1996)。粪肠球菌和屎肠球菌都是人类消化道微生物自然存在的菌种，在胃肠道中因为个体差异其含量差异变化很大（在每克消化系统内容物中含有102和108）。肠球菌通常从食品、植物、水和土壤中分离，可能由于它的来源是粪便使得他们的天性在恶劣环境中比较耐受(Giraffa,2002)。在牛奶和奶酪制品中通常会找到粪肠球菌、屎肠球菌和少量的坚忍肠球菌，偶然也会发现小肠肠球菌和铅黄肠球菌。不同于其他乳酸菌，肠球菌不能被认为是“一般认为安全”（GRAS），并且它在水中检测是作为粪便污染物的指标的(Godfree et al.,1997)。一般认为对于肠球菌的安全评价程序是一个模棱两可的状况。一方面，肠球菌在作为奶酪技术中作为发酵培养物被认为是由积极作用的(Giraffa,2003)；另一方面，它们被认为是新兴的人类病原体(Moellering,1992)。这篇综述主要是根据现有知识总结了肠球菌的积极和消极的性状，来强调这种菌属的争议性。食品安全准则着重强调了对抗生素耐药性和毒力的因素，这样使我们建议在发酵食品中使用肠球菌前应对这几项进行研究。 2．分类和鉴定 由于肠球菌的表型多样性，这使得肠球菌种的生理测试鉴定一直存在问题(Devriese et al.,1993;Park et al.,1999)。此外，物种鉴定的常规实验往往需要很长的培养时间(Facklam et al.,2002)。使用16S和23S rDNA基因的基因型鉴定方法更加的准确，虽然它们还不能区分所有肠球菌的物种（例如鹑鸡肠球菌和铅黄肠球菌有99.8%的16S rDNA的同源性）。这种方法已经成功的在应用：1）rRNA基因间隔区的特异PCR扩增技术(Naimi et al.,1997)，ddl和van基因(Satake et al.,1997;Kariyama et al.,2000)，ace 基因(Duh et al.,2001)，sodA 基因(Jackson et al.,2004)，2）转录调控基因Ef0027的扩增(Liu et al.,2005)，3）ddl 基因(Ozawa et al.,2000)，cpn60 基因(Goh et al.,2000)和atpA 基因(Naser et al.,2005)的测序，和4）利用5‘端引物（GTG）的细菌基因组重复序列PCR技术(Svec et al.,2005)。 有许多人试图区分从人分离的菌株和从食物分离的菌株,大部分主要关注的DNA指纹图谱。这些研究使用了多种分子分型方法，如扩增rDNA限制性分析（ARDRA）(Ulrich and Muller,1998)，脉冲场凝胶电泳（PFGE）的DNA宏观限制模式(Deschee-maeker et al.,1997;Gambarotto et al.,2001;Vancanneyt et al.,2002)，随机扩增多态性DNA（RAPD）- PCR检测(Cocconcelli et al.,1995;Descheemaeker et al.,1997;Andrighetto et al.,2001;Cosentino et al.,2004;Martin et al.,2005)和扩增片段长度多态性（AFLP）技术(Antonishyn et al.,2000;Willems et al.,2000;Vancanneyt et al.,2002)。脉冲场凝胶电泳（PFGE）已成功地用于表现临床和食品株之间的差异，以及从家禽和住院患者分离的菌株链球菌属检验
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