人全血DNA的提取实验步骤

人全血DNA的提取实验步骤

取2ml抗凝血于无菌15ml离心管

↓3000r/min 离心5min

弃上清，加入适量生理盐水

↓上下颠倒混匀

3000r/min 离心5min

↓

弃上清，加入约5倍体积的无菌ddH2O

↓上下颠倒混匀

室温静置5分钟，4000r/min 离心10min

↓

弃上清，加入约5倍体积的无菌ddH2O重悬白细胞沉淀

↓上下颠倒混匀

4000r/min 离心10min

↓

弃上清，加入STE至2毫升

↓上下颠倒混匀

再加10%SDS 200μl和10mg/ml 蛋白酶K 20μl 混匀

↓置56℃水浴震荡3h

取出观察白细胞消化情况（无可见沉淀），冷却至室温

↓

加入等体积饱和酚，缓慢摇动20min

↓4000r/min 离心10min

小心吸出上清转于另一无菌15ml离心管中

↓

加入等体积氯仿：异戊醇（24：1）缓慢摇动20min

↓4000r/min 离心10min

小心吸出上清转于另一无菌15ml离心管中

↓

向上清中加入1/10体积的3M NaAC（pH5.2），混匀

↓

再加入2倍体积的无水乙醇，缓慢摇动即可见DNA丝状体

↓

用无菌吸管吸出DNA丝状体移至装有1ml70%乙醇的Epp管内

↓

12000r/min 离心3~5min，弃上清。沉淀用1ml 70%乙醇洗涤1~2次

↓

12000 r/min 离心3~5min，弃上清。

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室温风干或DNA风干机抽干

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用100μl TE溶解DNA 沉淀