微生物传感器测定维生素B12的研究
紫外可见分光光度法测定维生素B12含量
紫外可见分光光度法测定维生素B12含量 作者:作者：靳月琴郭丽敏宋建荣杨金香刘海林陈文斌作者单位：长治医学院化学综合实验室(046000) 【摘要】目的：探讨维生素B12片剂中维生素B12的含量测定方法。方法：紫外可见分光光度法。样品以标准曲线法为测定含量依据，在361 nm的波长处测定吸光度。结果：维生素B12在5 μg/mL～100 μg/mL浓度范围线性关系良好。回归方程 Y=0.0193X+0.048,r=0.9937。结论：测定的5个不同批号样品其含量均在标示范围之内,该方法简便、准确、灵敏度高。 【关键词】紫外可见分光光度法；维生素B12片剂；含量测定 The Content Measurement of V-B12 by UV-Vis Jin Yueqin,Guo Limin，Shong Jianrong,et al. Department of Chemistry Complex Laboratory of Changzhi Medical College Abstract Objective：The measurement method of V-B12 content in tablet is established.Methods：UV-Vis The absorption is measured at 361 nm according to calibration carve method.Results：The linear range is in 5 μg/mL～100 μg/mL and the regression equation is Y=0.0193X+0.048,r=0.9937.Conclusion：The measurement is done in 5 kind of lot number and the result indicate that the V-B12 content in tablet corresponds with standard range. This method is simple, accurate and high sensitivity. Key words UV-Vis；V-B12 tablet；Content measurement 维生素B12是含钴的有机药物，为深红色结晶，又称为红色维生素B12或氰钴胺，是唯一含有主要矿物质的维生素。测定维生素B12片剂含量的传统方法是运用紫外可见分光光度计，以吸光系数法为测定含量依据，但是该方法对仪器精密度要求较高。标准曲线法是紫外可见分光光度法中最经典的方法，若认定一台仪器，固定其工作状态和测定条件，则该方法可消除因仪器而产生的一些误差，且操作简便易行［1］。本文利用紫外可见分光光度计，建立了维生素B12片剂含量测定的标准曲线法，并利用该方法对山西亨瑞达制药有限公司生产的维生素B12片剂的5个不同批号进行了V-B12的含量测定，方法准确、简便、重复性好。 1 仪器与试药 1.1 仪器 754型紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）。
微生物传感器20111134010025
微生物传感器的研发与应用 摘要：本文介绍了微生物传感器的结构组成，工作原理及分类，总结了该传感器在发酵工业、生物工程、医学等领域的应用，并对其今后的发展进行了展望。 关键词：微生物传感器；结构；原理；应用； 1.前言 生物传感器是一门集微电子学、生物技术等学科为一体的高新技术。由分 子识别元件和与之结合的信号转换器件两部分组成的分析工具。前者可以是生 物体成分（酶、抗原等）或生物体本身（细胞、细胞器、组织），它们能特异 地识别各种被测物质并与之反应；后者主要有电化学电极、离子敏场效应晶体 管（ISFET ）、热敏电阻器等，其功能为将敏感元件感知的生物化学信号转变 为可测量的电信号。 2.微生物传感器： 微生物传感器是生物传感器的一个重要分支。1975年Divies制成了第一 支微生物传感器，由此开辟了生物传感器发展的又一新领域。 在不损坏微生物机能情况下，将微生物固定在载体上制作出微生物传感器，达到对被分析物进行检测的目的。 3.微生物传感器的组成和原理： 3.1固定化微生物：微生物利用被检测物质进行呼吸或代谢，在此过程中， 消耗溶液中的溶解氧或产生一些电活性物质。 3.2换能器：燃料电池、光敏二极管、离子敏场效应管、气体敏感膜电极等 物质检测溶解氧和电活性物质的变化。 3.3信号输出装置：信号输出。 4.微生物传感器的分类：
根据微生物作用的生理特点分为： 1.呼吸活性测定性微生物传感器：由固定化需氧性细菌膜和氧电极组合而成。 它是以细菌呼吸活性物质为基础测定被测物的。试液中的有机物受到细菌细胞的同化作用，细菌细胞呼吸加强，扩散到电极表面上氧的量减少，电流减小。当有机物由试液向细菌膜扩散速度达到恒定时，产生一个恒定电流，此电流与试液中的有机物浓度存在定量关系，据此可测定有关有机物。 2.代谢活性型微生物传感器：固定化的厌氧菌膜和相应的电化学传感元件组合 而成。它是以细菌代谢活性物质为基础测定被测物的。此类细菌摄取有机物产生各种代谢产物，若代谢产物是氢、甲酸或各种还原型辅酶等，则可用电流法测定；若代谢产物是二氧化碳、有机酸（氢离子）等，则可用电位法测定。根据测定的电流或电位便可得到有机物浓度的信息。 5.微生物传感器的优势： 微生物传感器的稳定性较好，使用寿命也较长且价廉。微生物细胞中的酶因为仍处于它的自然环境中，这就增加了稳定性和活性，还免除了花费昂贵的酶纯化和辅助因素再生的步骤。另外，传感器的生物学成分可通过浸入生长基使之再生。因而有可能长时间地保持其生物催化活性，延长传感器的有效使用期限。微生物传感器的应用范围十分广泛。现已应用于发酵工业、环境监测、临床医学、食品检验等领域。 6.微生物传感器在发展中面临的问题： 一是多酶体系的存在，有可能对复杂样品产生非特异性响应。二是维持细胞活性是一个精细的过程。然而常常由于缺乏足够的经验而导致细胞过旱的死亡。微生物传感器的工作寿命因而受到影响。三是以全细胞为敏感元件的微生物电极，测定受到多种因素的影响，如细胞的通透性、酶的诱导活性、细胞内相关酶的活性状态等，因而微生物电极测定的精度和重复性一般比酶电极的要差。四是微生物固定化方法也需要进一步完善。首先，要尽可能保证细胞的活性；其次，细胞与基础膜结合要牢固，以避免细胞的流失；另外，微生物膜的长期保存问题也有待进一步的改进，否则难以实现大规模的商品化。五是生物
微生物传感器及其应用
微生物传感器及其应用 作者：赵蔚 上海交通大学生命学院研究生 学号：1080809077 摘要 本文介绍了微生物传感器的结构组成，工作原理及分类，总结了该传感器在发酵工业、生物工程、医学等领域的应用，并对其今后的发展进行了展望。 关键词 微生物传感器；结构；原理；应用 生物传感器是一门集微电子学、材料科学、生物技术等学科为一体的高新技术。它由分子识别元件(感受器)和与之结合的信号转换器件(换能器)两部分组成的分析工具或系统。前者可以是生物体成分(酶、抗原、抗体、激素、DNA)或生物体本身(细胞、细胞器、组织)，它们能特异地识别各种被测物质并与之反应；后者主要有电化学电极、离子敏场效应晶体管(ISFET )、热敏电阻器、光电管、光纤、压电晶体等，其功能为将敏感元件感知的生物化学信号转变为可测量的电信号。 微生物传感器是生物传感器的一个重要分支。1975年Divies制成了第一支微生物传感器。由此开辟了生物传感器发展的又一新领域。与最早问世的酶电极相比较，微生物传感器的稳定性较好，使用寿命也较长且价廉。微生物细胞中的酶因为仍处于它的自然环境中，这就增加了稳定性和活性，还免除了花费昂贵的酶纯化和辅助因素再生的步骤。另外，传感器的生物学成分可通过浸入生长基使之再生。因而有可能长时间地保持其生物催化活性，延长传感器的有效使用期限。微生物传感器的应用范围十分广泛。现已应用于发酵工业、环境监测、临床医学、食品检验等领域。微生物传感器具有广泛的发展前景。 结构和组成 微生物传感器由固定化微生物、换能器和信号输出装置组成，利用固定化微生物代谢消耗溶液中的溶解氧或产生一些电活性物质并放出光或热的原理实现待测物质的定量测定。其中最主要的部分是固定化微生物和换能器，这两部分对
维生素b12测定
2 方法与结果 2.1 测定波长的选择 维生素B12吸收光谱上有三个吸收峰：278 nm、361 nm、550 nm。维生素B12在361 nm的吸收峰干扰因素少，吸收又最强，中国药典规定以361 nm处吸收峰的比吸光系数 E1%1 cm值（207）为计算含量依据［2］。本实验选择361 nm为测定波长，以标准曲线法为计算含量依据。 2.2 溶液的制备 2.2.1 对照品溶液的制备［3］：精密称定对照品维生素B12 0.0025 g，置于25 mL 容量瓶中，加水至刻度，摇匀。将溶解后的溶液放置冰箱中冷藏备用。 2.2.2 供试品溶液的制备：维生素B12片剂为糖衣片，取本品50片，除去糖衣，使其呈现粉红色，研细，精密称定研磨样品，约相当于维生素B12 1.25 mg(每片的标示量为25.0 μg),置50 mL容量瓶中，加水35 mL，充分振摇30 min使其溶解，加水稀释至刻度，密塞，再用力振摇10 min，静置，取上清液，用0.8 μm的微孔滤膜滤过，滤液放置冰箱中冷藏备用。 2.3 线性关系 标准曲线的绘制：精取2.2.1项下的储备液，用水分别按1.5、2、4、6、8、10、15、20倍稀释，摇匀。在361 nm波长处测定吸光度，结果见表1。 表1 100 μg/mL标准品稀释倍数测定结果（略） 以吸光度A与质量浓度c绘制标准曲线，得回归方程Y=0.0193X+0.048,r=0.9937。结果表明维生素B12对照品溶液在5.00 μg/mL～100.00 μg/mL范围内质量浓度与吸收程度呈良好的线性关系。见图1。 2.4 精密度试验 精取浓度为100 μg/mL的对照品溶液在361 nm连续测定5次，测得维生素B12的平均吸光度为2.087，RSD为0.7%（n=5）。RSD数值较小，说明该方法精密度好。 2.5 稳定性试验 取同一供试品溶液，在冰箱中冷藏2 h、4 h、8 h、12 h、24 h后，按2.7项下含量测定法测定，结果见表2，计算得平均吸光度为0.468，RSD为0.99%（n=5）。结果表明供试品溶液在冷藏温度下24 h内基本稳定。 表2 供试品溶液冷藏温度下24 h内测定值（略） 2.6 重复性试验 精取同一批号样品，分别按2.2.2项的方法制备一式5份的供试品溶液，按2.7项下含
维生素B12注射液含量测定
《维生素B12注射液含量测定》项目教学设计方案 《维生素B12注射液含量测定》
项目教学案例：维生素B12注射液含量测定 一项目任务：维生素B12注射液含量测定 1 适用专业：中专药剂、检验专业 2 适用岗位： QC人员 3 学习时间：2课时 二教学设计的指导思想 在基础化学相关章节的学习中，学生已掌握了溶液的浓度及其计算、紫外-可见分光光度法、注射液含量计算等理论知识，具备了一定的实验操作技能，掌握了配制一定浓度的溶液、使用紫外-可见分光光度计测定溶液的吸收值等实验方法。但是他们对化学知识在职业岗位中的意义及应用方法缺乏正确的认识。我们选择该课题作为载体，通过项目教学法，培养学生将知识和技能与实际工作联系起来的思维习惯，以提高他们综合运用化学知识与技能完成实际工作的能力。采用以具体工作任务引领的项目教学,以职场实际操作为依据,满足相应职业资格要求，使学生在校期间就能掌握今后检验工作的方法、程序及要领，毕业后到企业工作能尽快进入岗位角色。 三项目教学目标： 根据学以致用的现代化学教育理念，职业教育以能力为本位、促进学生综合职业能力和发展能力的形成的改革方向，结合一线技能型人才的培养目标以及本课程的特点和优势，特制订以下目标。 1.知识与技能目标： 1）学会查阅所需检验药品的质量标准；
2）按照操作规程准确地配制一定浓度的溶液； 3）能够熟练地使用紫外-可见分光光度计测定物质溶液的浓度并进行含量测定的结果计算； 2.过程与方法目标： 1）注重对学生专业实作技能的培养，培养学生严谨、规范的操作；2）能运用理论知识解释操作过程； 3）使学生掌握工作思路与方法，培养学生观察、动手、发现和解决问题的能力以及独立与协作工作的能力； 3.情感与价值观目标： 1)学会自觉地以医药行业标准规范自己的工作行为； 2)培养学生认真负责的工作态度，科学、严谨的的工作作风，树立质量第一的原则； 四教学重点和难点 项目教学中以项目贯穿整个教学过程，因此项目是整个教学过程的主线，是能力形成的载体，是学生实践活动的对象，学生通过项目获得知识，提高技能，因此项目的选取与确定是关键。由于学生缺乏综合运用化学知识与技能完成实际工作的能力，对具体的项目往往不知如何下手，因此工作项目的分解也成为难点。 重点：（1）将工作项目分解为具体的工作任务； （2）分组完成各项工作。 难点：工作项目的分解。 五教学方法
维生素B12注射液的定性鉴别及含量测定2
实验十一 维生素B 12注射液的定性鉴别及含 量测定 实验者：李丽贝 合作者：倪佳琴 一、实验目的 1.1掌握722G 型分光光度计的操作方法 1.2熟悉定性鉴别及定量测定方法 二、实验原理 维生素B 12注射液为含钴的有机药物，为粉红色至红色的澄明液体，用于治疗贫血等疾病。维生素B 12在278±1mm 、361±1mm 与550±1mm 波长处最大吸收，根据其吸收光谱的形状和最大吸收波长下吸光度比值，可进行定性鉴定。测量最大吸收波长下吸光度，可算出供试品浓度。 三、实验仪器与试剂 仪器 722G 型分光光度计，玻璃洗手池，容量瓶（10ml ），吸量管（1ml ） 试剂 维生素B 12注射液（1ml ：0.5mg ） 四 、操作步骤 4.1定性鉴别 根据中国药典（1995年版）规定，取含量测定项下的溶液，在361±1nm 与550±1nm 处测得的吸光光度比值应为3.15~3.45，即为合格。 4.2定量分析 精密量取本品适量，加水定量稀释成1ml 含维生素B 1225ug 的溶液，在361±1nm 处测得吸光度，维生素B 12的吸光系数（E 1%1cm ）按207计算，即得可求得样品的含量 五、实验结果 1. （1）定性鉴别（吸光度比值） 结果=3.357 (规定为3.15~3.45) 1% E 1cm 1% E 1cm 361nm 361nm = A 361nm A 550nm
（2）定量分析（吸光系数法） A/E1%1cm x1/100x稀释因子 标示量%= x100% =90.821 标示量（g/ml） (规定为90.0~110.0) 六、实验体会 这个实验要求我们能正确使用分光光度计，所以还得提前捉摸一下，在这个实验过程中出现了与实际不符合的情况，应该是由于我们的操作失误，又因为数据与数据之间相差很小，所以更加需要细心，在老师的帮助下，顺利的得到了较为准确的数据，体会到自己仍应该更用心地去学习。 七、附加资料 主要功能 1.促进红细胞的发育和成熟，使肌体造血机能处于正常状态，预防恶性贫血；维护神经系统健康 2.以辅酶的形式存在，可以增加叶酸的利用率，促进碳水化合物、脂肪和蛋白质的代谢； 3.具有活化氨基酸的作用和促进核酸的生物合成，可促进蛋白质的合成，它对婴幼儿的生长发育有重要作用。 4.代谢脂肪酸，使脂肪、碳水化合物、蛋白质被身体适当运用 5.消除烦躁不安，集中注意力，增强记忆及平衡感 6.是神经系统功能健全不可缺少的维生素，参与神经组织中一种脂蛋白的形成， 一是提高叶酸利用率，与叶酸一起合成甲硫氨酸（由高半胱氨酸合成）和胆碱，产生嘌呤和嘧啶的过程中合成氰钴胺申基先驱物质如甲基钴胺和辅酶B12，参与许多重要化合物的甲基化过程。维生素B12缺乏时，从甲基四氢叶酸上转移甲基基团的活动减少，使叶酸变成不能利用的形式，导致叶酸缺乏症。 二是维护神经髓鞘的代谢与功能。缺乏维生素B12时，可引起神经障碍、脊髓变性，并可引起严重的精神症状。维生素B12缺乏可导致周围神经炎。小孩缺乏维生素B12的早期表现是情绪异常、表情呆滞、反应迟钝，最后导致贫血。 三是促进红细胞的发育和成熟。将甲基丙二酰辅酶A转化成琥珀酰辅酶A，参与三羧酸循环，其中琥珀酰辅酶A与血红素的合成有关。
食物中维生素B12的测定方法
食物中维生素B6 的测定方法 微生物法 1.原理 维生素B6在酸性介质中对热比较稳定，但在碱性介质中对热不稳定。测量维生素B6比较经典的方法是"微生物法"它的优点是：1.特异性高、精密度好、操作简单（不需要特殊设备，易于推广，样品不需要进行一系列的提纯步骤）、准确度高。它的缺点是：耗时长、必须经常保存菌种、试剂较贵。 2.适用范围 GB/T 17407-1998，适用于药物、食物及饲料的检测 3.仪器 电热恒温培养箱 电热手提式压力蒸汽消毒器 液体快速混合器 离心机 722光栅分光光度计 硬质玻璃试管 4.试剂 （1）0.22mol/L硫酸：于2000ml烧杯中加入700ml水，加入12.32ml H2SO4，用水稀释至1000ml。 （2）0.5mol/L硫酸：于2000ml烧杯中加入700ml水，加入28ml H2SO4，用水稀释至1000ml。（3）10mol/L氢氧化钠：溶200g NaOH于水中，稀释至500ml。 （4）0.1mol/L氢氧化钠：取10ml 10mol/L NaOH，用水稀释至1000ml。 （5）溴甲酚绿：0.04%溶液，称取0.1g溴甲酚绿于研钵中，加1.4ml0.1mol/LNaOH研磨，加少许水继续研磨，直至完全溶解，用水稀释到250ml。 （6）培养基：称取吡哆醇Y培养基5.3g，溶解于100ml蒸馏水中。 （7）100ug/ml吡哆醇标准储备液：称取122mg盐酸吡哆醇标准溶于1L25%乙醇中，保存于4℃冰箱中，稳定1个月。 （8）1ug/ml吡哆醇标准中间液：，取1ml吡哆醇标准储备液，稀释至100ml。 （9）琼脂培养基：吡哆醇Y培养基5.3g，琼脂1.2g，稀释至100ml。 （10）1.5MOL/l生理盐水：取9gNaCl溶于1000ml水中。 5.菌种的制备与保存 5.1储备菌种的制备与保存：以卡尔斯伯酵母菌A TCC No.9080简称SC?纯菌种接入2个或多个琼脂培养基管中，在30±0.5℃恒温箱中培养18-20小时，取出后置于冰箱中保存，至多不超过两星期。保存两周以上的菌种，不能立即用作制备接种用的种子液，一定要在使用前每天移种一次，连续2~3天，方可使用，否则生长不好。 5.2种子培养液的制备：加0.5ml 50ng/ml的VB6标准应用液于尖管中，加入5ml基本培养基，塞好棉塞，于压力蒸汽消毒器内（高压锅）151b压力下消毒10min，取出，置于冰箱中，此管可保留数星期之久。 6.操作步骤 整个步骤要避光 （1）样品制备：取样0.5~10g（VB6含量不超过10ng）放入100ml三角瓶中，加0.22mol/LH2SO472ml。放入高压蒸汽锅121℃下水解5个小时，取出，于水中冷却，用10mol/LNaOH和0.5mol/LH2SO4调PH值至4.5，用溴甲酚绿做指示剂。（指示剂由黄-黄绿色），将三角瓶内的溶液转移到100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至100ml，滤纸过滤，保存
微生食物中维生素B12的测定方法
微生食物中维生素B12的测定方法 微生物测定法 1.原理 维生素B12对于Lactobacillus leichmannii （ATCC 7830）的正常生长是必需的，在一定生长条件下，Lactobacillus leichmannii的生长与繁殖速度和溶液中维生素B12的含量成一定的线性关系，利用浊度法或光密度法测定细菌生长和繁殖的强度可间接地测定食物样品中维生素B12的含量。本方法最低检出限0.001ng。 2.适用范围 本方法参考"Official Methods of Analysis of the Association of official Analytical Chemists"、"Methods of Vitamin Analysis"以及 "Methods of the Microbiological Analysis of Selected Nutrients"。本方法适用于测定食物及饲料中的维生素B12含量。 3.试剂 本试验所用水均为蒸馏水，所用试剂均需分析纯试剂。 3.1 甲苯 3.2 柠檬酸（C6H8O7·3H2O） 3.3 磷酸氢二钠（Na2HPO4） 3.4 焦亚硫酸钠（Na2S2O5） 3.5 抗坏血酸（生化试剂） 3.6 无水葡萄糖 3.7 无水乙酸钠 3.8 L-胱氨酸（生化试剂） 3.9 D,L-色氨酸（生化试剂） 3.10 10mol/L氢氧化钠溶液：称取200g氢氧化钠溶于适量水中，定容至500ml。 3.11 （1+4）乙醇溶液：200ml无水乙醇与800ml水充分混匀。 3.12 酸解酪蛋白：称取50g不含维生素的酪蛋白于500ml烧杯中，加200 ml 3 mol/L盐酸，121℃高压水解6小时。将水解物转移至蒸发皿内，在沸水浴上蒸发至膏状。加200ml水使之溶解后再蒸发至膏状，如此反复3次，以去除盐酸。以溴酚蓝作外指示剂，用10mol/L氢氧化钠调节pH至3.5。加20g活性炭，振摇，过滤，如果滤液不呈淡黄色或无色，可用活性炭重复处理。滤液加水稀释至500ml，加少许甲苯于冰箱中保存。（该试剂也可从Difco 公司购得，产品号为No.0288-15-6。）
微生物传感器在环境检测中的应用
环境污染物对人类健康带来了很大风险，有一些微生物传感器被用来检测有有机和无机毒性，并被广泛应用于工业中。重金属是废水中主要的有毒物质，非生物降解性金属离子在活着的生物体中积累，会导致许多疾病的出现。有机毒性是另一种对人体有害的主要环境污染物。关于一种低成本、简单快捷、监控重金属的工具的构想，微生物传感器可以列入考虑之中。此外还有许多传感器的环保应用途径，如对食物的判断。微生物传感器由于其承包地、稳定和反应快速等优点已被广泛应用于许多行业领域。 微生物传感器是一种结合了生物识别元件与信号传感器的检测分析装置，这种装置将微生物固定在换能器上，然后对目标物进行检测。信号传感器是用来将分析物的反应转换成可测量的与分析物的浓度成比例的信号。随着纳米技术的发展，纳米材料已被用于开发更可靠和有选择性的生物传感器，而且在产生更高灵敏度的换能器方面也有了巨大进展。微生物传感器已成为环境监控最有效的一种方法。 微生物传感器主要分为两种：光学微生物传感器和微生物燃料电池传感器。前者的使用可以产生变化多样的光学性能如吸附、荧光、柔光或折射率。这些都与分析物浓度一致;后者通过微生物分解代谢将有机机基质转化为电能，让微生物燃料电池在微生物传感器中作为传感器工作成为可能。光学微生物传感器又分为荧光微生物传感器、发光微生物传感器和比色微生物传感器。微生物传感器还有一个比较有前途的应用，就是应用于法医鉴定。可以对一件物品的物理特性进行判断，这是为了将其从同类物品中区分开来。 艾驰商城是国内最专业的MRO工业品网购平台，正品现货、优势价格、迅捷配送，是一站式采购的工业品商城！具有10年工业用品电子商务领域研究，以强大的信息通道建设的优势，以及依托线下贸易交易市场在工业用品行业上游供应链的整合能力，为广大的用户提供了传感器、图尔克传感器、变频器、断路器、继电器、PLC、工控机、仪器仪表、气缸、五金工具、伺服电机、劳保用品等一系列自动化的工控产品。 如需进一步了解图尔克、奥托尼克斯、科瑞、山武、倍加福、邦纳、亚德客、施克等各类传感器的选型，报价，采购，参数，图片，批发信息，请关注艾驰商城https://www.360docs.net/doc/128968166.html,/
维生素B12的定性定量检测
实验七 维生素B12的定性定量检测 实验目的和要求 1. 掌握紫外可见分光光度计的结构及基本操作； 2. 掌握吸收曲线的绘制； 3. 掌握利用分光光度法进行定性鉴别及定量检测的方法。 实验原理 维生素B12的水溶液在278土1nm 、3611土1nm 、550土1nm 三个波长处有较强吸收峰，壁纸根据其吸收光谱的形装和吸收峰的吸光度比值，可对维生素B12进行定性鉴别；采用吸光系数法，测量其在最大吸收波长的吸光度值，可计算样品中维生素B12的含量。 实验仪器与试剂 1.V-1100D 型分光光度计 2.维生素B12注射液 3.10ml 容量瓶1个 4.500ul 加样器 5.1cm 玻璃比色皿2个 6.500ul 加样器吸头 实验步骤 1、溶液配制 用加样器移取维生素B12注射液500ul ，转移至10ml 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。 2、吸光度、透射比及吸收曲线的绘制 用1cm 比色皿，以蒸馏水作为参比溶液，测定所配置的维生素B12溶液在下列各个波长处的吸光度、透射比；在坐标纸上以测定的吸光度为纵坐标，波长为横坐标制图，绘制吸收曲线，并根据吸收曲线确定定性、定量分析。 波长 355nm 356nm 357nm 358nm 359nm 360nm 361nm 362nm 363nm 吸光度 0.513 0.516 0.518 0.514 0.498 0.477 0.449 0.439 0.413 波长 542nm 544nm 546nm 547nm 548nm 549nm 550nm 551nm 552nm 吸光度 0.161 0.162 0.160 0.158 0.159 0.157 0.155 0.152 0.148 四、实验数据处理 1、定性鉴别 根据中国药典规定，维生素B12的水溶液在3611土1nm 、550土1nm 波长的吸光的比值在3.15~3.45之间，表明样品为维生素B12，即为合格药品。 E E nm cm nm cm %1) 544(1%1)357(1= A A nm nm ) 544()357(= 162 .0518 .0=3.20 因此该药为合格药品。 2、定量检测 根据浓度25ug/ml 维生素B12的注射液在3611土1nm 、550土1nm 波长的吸光的比值，按照下列计算的维生素B12注射液含量，结果在90.0%~110.0%之间，表明维生素B12注射液含量合格；其中207维生素B12为在波长的吸收系数，20为稀释因子（稀释倍数）。
维生素B12和叶酸检测临床意义
维生素B12和叶酸检测临床意义 一、维生素 B12 维生素 B12是正常代谢、DNA 合成和红血球再生必需的。维生素B12缺乏，会引起营养性贫血和巨红细胞性贫血。导致维生素B12缺乏的原因，包括：饮食缺乏肉类和细菌产物、酒精中毒，消化或吸收过程（恶性贫血形式）结构 / 功能的损坏。吸收障碍是造成维生素B12缺乏的主因，主要成因是胰缺乏、胃萎缩或胃切除、肠道损坏、肠内维生素B12结合蛋白缺失（内因子）、产生内因子自身抗体或其他相关原因。 如维生素B12缺乏症得不到治疗，就会导致巨红细胞性贫血，维生素B12缺乏还会引起不可逆转的中枢神经系统退化。在识别维生素B12或叶酸缺乏——特别是在巨红细胞性贫血的鉴别诊断中，维生素B12或叶酸有重要的诊断意义。 二、叶酸 叶酸缺乏，会引起营养性贫血和巨红细胞性贫血。导致叶酸缺乏的原因，包括：食物中的水果、蔬菜和其他食物含叶酸量匮乏，慢性酒精中毒，成瘾性药物，老人或社会经济地位低下的人群等等。另外，孕妇怀孕期间血清叶酸水平低，易导致胎儿神经管发育缺失。其中，人体叶酸缺乏的最主要原因是饮食缺乏和吸收不良。叶酸是正常代谢、DNA合成和红细胞生成所必需的。叶酸缺乏得不到有效治疗，会导致巨红细胞性贫血。 由于叶酸或B12缺乏，均会导致巨红细胞性贫血，因此
建议同时测定叶酸或B12浓度，以正确判定贫血的成因。 标本采集和存放 使用一次性黄色真空采血管，最好在晨起空腹状态，采集肘静脉3～5ml，立即送达中心实验室。分离后的血清标本，在2-8℃下可稳定 2 天， -20℃下可稳定2个月。只可冰冻一次。避光保存。 叶酸是广泛分布的水溶性B族维生素，是体内各种代谢途径中一碳单位转移酶的辅助因子，叶酸既是碳供体又是碳受体，对于核酸和线粒体蛋白质合成、氨基酸代谢以及其他涉及一碳单位转移的细胞过程，叶酸是必需的。 维生素B12又名钴胺素，是甲基丙二酰辅酶A转化为琥珀酰CoA的辅助因子。另外，B12也是同型半胱氨酸合成甲硫氨酸的辅助因子，参与鞘磷脂的形成，并且它与叶酸一起，均为DNA合成必需的物质。 血清叶酸和维生素B12水平检测对于多种疾病的诊断、治疗及预后都有重大的提示意义，具体情况总结如下： 1、叶酸、维生素B12是DNA合成的必需辅酶,二者缺乏或代谢紊乱时，DNA合成发生障碍，影响造血细胞在骨髓的增殖，具体表现为血细胞巨幼样变，对巨幼细胞性贫血的诊断是不可缺少的诊断依据。同时检测叶酸、维生素B12可以对不同类型的贫血以及骨髓增生异常综合症提供鉴别诊断。 2、骨髓增生异常综合症患者血清叶酸、维生素B12含量显著高于正常人，提示MDS患者对叶酸、维生素B12利用异常。经过有效治疗，患者病情好转时发现叶酸、维生素B12含量明显下降，说明血清叶酸、维生素B12检测具有提示MDS
维生素B12(Vitamin B12)测定试剂盒(电化学发光免疫分析法)产品技术要求
维生素B12(Vitamin B12)测定试剂盒（电化学发光免疫分析法） 组成： 试剂盒由预处理试剂1（PT1）、预处理试剂2（PT2）、磁分离试剂（M）、试剂a（Ra）、试剂b（Rb）和定标品（Vitamin B12-Cal）（选配）组成。组成及含量见下表： 预期用途：本试剂盒用于体外定量测定人体血清样本中维生素B12（Vitamin B12）的含量。 2.1 外观 2.1.1 试剂盒各组分应齐全、完整、液体无渗漏； 2.1.2 磁分离试剂摇匀后应为棕色含固体微粒的均匀悬浊液，无明显凝集、无絮状物； 2.1.3 其它液体组分应澄清，无异物，沉淀物或絮状物； 2.1.4 包装标签应清晰、无磨损、易识别。 2.2 空白限 应不大于36.9pmol/L。 2.3 准确度 用B12国际标准品（03/178）进行检测，其测量结果的相对偏差应在±10%范围内。 2.4 线性
在[50.0，1476.0]pmol/L范围内，线性相关系数（r）应不小于0.9900。 2.5 精密度 2.5.1 重复性 在试剂盒的线性范围内，检测高、低两个水平的样品，检测结果的变异系数（CV）应不大于8%。 2.5.2 批间差 在试剂盒的线性范围内，用3个批号试剂盒分别检测高、低两个水平的样品，检测结果的变异系数（CV）应不大于15%。 2.6 效期末稳定性 本产品效期为15个月，试剂盒在2～8℃下保存至有效期末进行检测，检测结果应符合2.1、2.2、2.3、2.4、2.5.1的要求。 2.7 溯源性 依据GB/T 21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》的要求提供维生素B12（Vitamin B12）定标品的来源、赋值过程以及测量不确定度等内容，定标品溯源至B12国际标准品 （03/178）。
生物传感器
生物传感器 生物传感器(biosensor)对生物物质敏感并将其浓度转换为电信号进行检测的仪器。是由固定化的生物敏感材料作识别元件（包括酶、抗体、抗原、微生物、细胞、组织、核酸等生物活性物质）与适当的理化换能器（如氧电极、光敏管、场效应管、压电晶体等等）及信号放大装置构成的分析工具或系统。生物传感器具有接受器与转换器的功能。 目录 简介 解释 定义分类 生物研究 结构原理 应用领域 应用实例 简介 生物传感器（biosensor）对生物物质敏感并将其浓度转换为电信号进行检测的仪器。是由固定化的生物敏感材料作识别元件（包括酶、抗体、抗原、微生物、细胞、组织、核酸等生物活性物质）与适当的理化换能
结构 器（如氧电极、光敏管、场效应管、压电晶体等等）及信号放大装置构成的分析工具或系统。生物传感器具有接受器与转换器的功能。对生物物质敏感并将其浓度转换为电信号进行检测的仪器。各种生物传感器有以下共同的结构：包括一种或数种相关生物活性材料（生物膜）及能把生物活性表达的信号转换为电信号的物理或化学换能器（传感器），二者组合在一起，用现代微电子和自动化仪表技术进行生物信号的再加工，构成各种可以使用的生物传感器分析装置、仪器和系统[1]。 1967年S.J.乌普迪克等制出了第一个生物传感器葡萄糖传感器。将葡萄糖氧化酶包含在聚丙烯酰胺胶体中加以固化，再将此胶体膜固定在隔膜氧电极的尖端上，便制成了葡萄糖传感器。当改用其他的酶或微生物等固化膜，便可制得检测其对应物的其他传感器。固定感受膜的方法有直接化学结合法；高分子载体法；高分子膜结合法。现已发展了第二代生物传感器（微生物、免疫、酶免疫和细胞器传感器），研制和开发第三代生物传感器，将系统生物技术和电子技术结合起来的场效应生物传感器，90年代开启了微流控技术，生物传感器的微流控芯片集成为药物筛选与基因诊断等提供了新的技术前景。由于酶膜、线粒体电子传递系统粒子膜、微生物膜、抗原膜、抗体膜对生物物质的分子结构具有选择性识别功能，只对特定反应起催化活化作用，因此生物传感器具有非常高的选择性。缺点是生物固化膜不稳定。生物传感器涉及的是生物物质，主要用于临床诊断检查、治疗时实施监控、发酵工业、食品工业、环境和机器人等方面。 生物传感器是用生物活性材料（酶、蛋白质、DNA、抗体、抗原、生物膜等）与物理化学换能器有机结合的一门交叉学科，是发展生物技术必不可少的一种先进的检测方法与监控方法，也是物质分子水平的快速、微量分析方法。在未来21世纪知识经济发展中，生物传感器技术必将是介于信息和生物技术之间的新增长点，在国民经济中的临床诊断、工业控制、食品和药物分析（包括生物药物研究开发）、环境保护以及生物技术、生物芯片等研究中有着广泛的应用前景。[2] 解释 传感器是一种可以获取并处理信息的特殊装置，如人体的感觉器官就是一套完美的传
维生素B12中国药典
《中国药典》2015版第二部第1235-1236页 维生素B12 Weishengsu B12 Vitamin B12 C63H88CoN14O14P 1355.38 本品为Coα-[α-(5,6-二甲基苯并咪唑基）]-Coβ氰钴酰胺。按干燥品计算，含C63H88CoN14O14P不得少于96.0%。 【性状】本品为深红色结晶或结晶性粉末；无臭；引湿性强 本品在水或乙醇中略深，在丙酮、三氯甲烷或乙醚中不溶。 【鉴别】（1）取本品约1mg，加硫酸氢钾约50mg，置坩埚中，灼烧至熔融，放冷，加水3ml，煮沸使溶解，加酚酞指示液1滴，滴加氢氧化钠试液至显淡红色后，加醋酸钠0.5g、稀醋酸0.5ml与0,2%1-亚硝基-2-萘酚-3,6-二磺酸钠溶液0.5ml，即显红色或橙红色；加盐酸0.5ml，煮沸1分钟，颜色不消失。 （2）取含量测定项下的供试品溶液，照紫外-可见分光光度法（通则0404）测定，在278nm、361nm与550nm的波长处有最大吸收。361nm波长处的吸光度与278nm波长处的吸光度的比值应为1.70~1.88。361nm波长处的吸光度与550nm波长处的吸光度的比值应为3.15~3.45。 （3）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集449图）一致。 【检查】溶液的澄清度取本品20mg，加水10ml溶解后，溶液应澄清有关物质避光操作，溶液临用新制。取本品，加流动相溶液并稀释成每1ml中约含1mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取1ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；另取本品约25mg，置25ml量瓶中，加水10ml使溶解，加0.1%氯胺T溶液5ml与0.05mol/L盐酸溶液0.5ml，用水稀释至刻度，摇匀，放置5分钟，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液；再精密量取对照溶液1ml，置10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为灵敏度溶液。照高效液相色谱发（通则0512）试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.028mol/L磷酸氢二钠溶液（用磷酸调节pH值至3.5）（26:74）为流动相，检测波长为361nm。系统适用性溶液中应出现维生素B12峰与一个降解产物峰（相对保留时间约为1.4），二者的分离度应大于2.5，灵敏度溶液中主峰的信噪比应大于3,。精密量取供试品溶液与对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的2倍（2.0%）。 假维生素B12取本品1.0mg，置分液漏斗中，加水20ml使溶解，加甲酚-四氯化碳(1:1)5ml，充分振摇1分钟；分取下层溶液，置另一分液漏斗中，加硫酸溶液（1→7）5ml，充分振摇，上层溶液应无色；如显色，与同体积的对照液[取高锰酸钾滴定液（0.02mol/L）0.15ml，加水至250ml]比较，不得更深。 干燥失重取本品约50mg，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过12.0%（通则0831）。 【含量测定】避光操作。取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释成每1ml中约含25μg的溶液，作为供试品溶液，照紫外-可见分光光度法（通则0401），在361nm的波长处测定吸光度，按C63H88CoN14O14P的吸收系数（E1%1cm）为207计算，即得。
微生物传感器测定水中BOD的研究进展
收稿日期:2010 04 06;修订日期:2010 05 01 基金项目:国家建设部科技项目(05 K2 6),青岛理工大学博士基金项目(C2007 006)。 作者简介:张国伟(1984 ),女,硕士在读,从事环境微生物学研究工作。 监测技术 do:i 10.3969/.j issn .1674 6732.2010.05.005 微生物传感器测定水中BOD 的研究进展 张国伟,李 捷,刘泽浩,李永强 (青岛理工大学环境与市政工程学院,山东 青岛 266033) 摘 要:详细介绍了BOD 微生物传感器的构造、基本工作原理以及微生物膜的制备和固定化技术;分析了近年来B OD 微生物传感器的发展情况及其使用过程中的存在问题。根据BOD 传感器的研究现状提出今后的研究方向和工作重点。关键词:BOD 生物传感器;微生物固定化技术;微生物膜 中图分类号:X 853 文献标识码:A 文章编号:1674 6732(2010) 05 0015 04 St udy on the M icrobial Sensor D eter m ini n g BOD inW ater Z HANG Guo w e,i LI Jie ,LI U Ze hao ,LI Yong qiang (Institute o f Env ir onm ent &M un icipa l Eng ineeri n g ,Q ingdao Techno log ica l U niversity ,Q i n gdao ,Shandong 266033,Ch i n a) AB STRACT :The structure ,wo rk i ng pri nc i ple and m icrob i a l i m m obilization m ethods of BOD m icrobia l sensors were introduced .Based on the curren t deve lop m ent of BOD m i crob ial senso r ,the proble m s ex isted i n w orki ng process was d i scussed .A cco rd i ng t o t he current study status o f BOD biosenso rs ,w e a l so suggested t he po ssi b l e research directi on and the key po i nts i n future wo rk .K EY W ORDS :BOD b i o senso r ;m icrob i a l i m m ob ili zati on ;b i ofil m s 生化需氧量(BOD)是环境监测最基本的水质污染指标之一,现在测定B OD 的标准方法是5日生化需氧量法,即样品在20!1?的条件下培养5d ,测定样品培养前后的溶解氧,两者之差即为5日生化需氧量。此方法存在着耗时耗力、易受干扰、结果重复性差等缺点,而且对操作人员的技术要求较高。为此,各国环境科学工作者开展了快速测定BOD 方法的研究,焦点集中在缩短测定时间上,1977年,KARUBE 等首先研发出基于微生物传感器法的BOD 测定仪[1] ,在其后的几十年间,BOD 快速测定仪的研究取得了长足的发展。 1 B OD 微生物传感器及其工作原理1.1 BOD 微生物传感器的组成 生物传感器由生物识别元件和物理换能器组成,它可以将被测物浓度与可测量的物理化学信号关联起来。生物识别元件(微生物膜)是生物传感器的核心部分,很大程度上决定了B OD 传感器的性能和测定的准确性。B OD 传感器的换能器的主要作用是将微生物降解水中有机物产生的变化转化成可以定量表示的信号输出。B OD 传感器的换 能器大致有溶解氧(DO )电极、光纤换能器、压电晶体(SP QC )系统 [2] ,以及以生物燃料电池(M FC) 构建的换能器等,目前应用最广泛的换能器是C lark 溶解氧探针。 1.2 BOD 微生物传感器的工作原理 BOD 微生物传感器一般是由固定化的微生物膜与氧电极紧密结合而组成。当传感器处于氧饱和的磷酸盐缓冲溶液中时,微生物处于内源呼吸阶段,其呼吸活性是恒定的,当溶解氧扩散进入氧电极表面的速率达到恒定时,BOD 电极输出的电流达到稳定。当含有一定浓度缓冲液的BOD 标样(或水样)加入时,水样中溶解性可生化降解的有机物被微生物作为营养源所利用,同时微生物呼吸活性加强,消耗溶液中的溶解氧,相应其扩散进入电极表面的速率减小,输出电流值降低,并在几分钟内达到新的稳定态,上述两种稳定电流值之差, 15 第2卷 第5期2010年10月环 境 监 控 与 预 警Env iron m enta lM onito ri ng and F ore w arn i ng V o.l 2,N o .5 O ctober 2010
12维生素B12的吸收曲线绘制及注射液的含量测定
新乡医学院分析化学实验课教案首页 授课教师姓名及职称： 新乡医学院化学教研室年月日
实验维生素B12的吸收曲线绘制及注射液的含量测定 一、实验目的 1. 掌握分光光度计的使用方法； 2. 掌握注射剂含量的测定和计算方法； 3. 熟悉测绘吸收曲线的一般方法。 二、实验原理 维生素B12是含Co的有机化合物，其注射液为粉红色至红色的澄明液体。要测定B12注射液的含量，可以用紫外－可见分光光度法测定，用此法进行含量测定，必须知道B12的λmax，λmax可以通过绘制吸收曲线来得到。 吸收曲线：将不同波长的单色光依次通过被分析的物质，分别测得不同波长下的吸光度，以波长为横坐标，以吸光度为纵坐标所描绘的曲线。吸光度最大时对应的波长为λmax，在λmax处测吸光度。B12在278，361，550nm处有最大吸收，在λmax处测得A，根据吸光系数法可以求出注射液中B12的含量。 吸光系数法：A=Ecl E为207。 实验中要求测361nm处的A，相应的吸光系数%1 1cm 三、仪器与试剂 752型紫外－可见分光光度计，10mL容量瓶，5mL吸量管；0.1g·L-1维生素B12水溶液，维生素B12注射液(市售品)。 四、实验步骤 1．752型分光光度计的使用 （1）开启电源开关，使仪器预热20分钟。 （2）用波长选择旋钮设置所需的分析波长。 （3）将装参比溶液的比色皿置于光路，打开样品室盖，调节T旋钮，使显示器指针指在“0.00％”。 （4）将装参比溶液的比色皿置于光路，关闭样品室盖，调节A旋钮，使显示器指针指在“100.00％”。 （5) 重复操作(3)和(4)，直至仪器显示稳定。 （6）将装参比溶液的比色皿置于光路，关闭样品室盖，进行测定，在显示器上读出A。 （7）仪器使用完毕，关闭电源，拔下电源插头。取出比色皿，洗净、晾干。复原仪器，盖上防尘罩。 2．吸收曲线的绘制 将0.1g·L-1维生素B12溶液置于1cm比色皿中，以蒸馏水为空白溶液，在不同波长(340nm~580nm之间，其中从350nm~370nm和540~560nm每间隔5nm测量一次，其余每间隔20nm测量一次吸光度)下测量相应的吸光度。然后以波长为横坐标，吸光度为纵坐标绘出吸收曲线。从吸收曲线上得到最大吸收波长，从而选择测定维生素B12的适宜波长。