IP技术初级实验手册
IP技术初级实验手册
IP技术初级实验手册 (1)
前言: (1)
模拟器的使用: (1)
实验1：路由器直连telnet (13)
实验2：帧中继和静态路由 (17)
实验3：配置Vtp, Vlan, Trunk (21)
实验4：单臂路由，不同Vlan间通信 (27)
实验5：配置RIP协议 (33)
实验6：配置单区域OSPF协议 (38)
实验7：配置NAT , ACL访问控制列表 (45)
实验8：配置PPP，DHCP (51)
实验9：综合实验 (58)
前言:
此手册作为初级实验参考，试验环境为dynamips，CCNA-LAB。对于设备提示信息和输入命令，以不同颜色标注。显示的报告需要关注的地方以高亮方式标注，过长的报告则以省略符表示。除了接口名称以简写方式，其余命令没有简略。由于时间仓促，难免出现错误。此文档权限设定为允许添加批注，如果有发现错误的地方，请以批注的方式添加进文档，发邮件回馈给本人，我将及时修改。
模拟器的使用:
1.Dynamips模拟器介绍
Dynamip s是一款Cisco路由器模拟器，可以模拟2600，3600，3700，和7200硬件平台，并且可以运行思科公司标准的IOS镜像文件(.bin格式文件)。通过软件的方式模拟使用真实环境中的设备, 它虽然不能替代真实的路由器，但是可以让大家熟悉Cisco的设备以及配置命令,通过配置模拟实验更好的理解技术原理。Dynamips对于交换机的模拟是在路由器中插一块16口的网络模块，使其具备交换功能，利用这个模块我们可以在路由器上进行一些交换的试验。但有很多交换机的特性在这个模块上是不能完全实现的，在试验中可能会遇到一些问题。
2.实验环境的搭建
使用Dynamips模拟器需要下载一个Cisco的IOS镜像，并且自己构建一个网络拓扑图。我们已经将一个Cisco的3640路由器IOS和一个全连通的网络拓扑压缩打包为一个文件，方便大家使用。如图1所示，CCNA-LAB文件为初级实验压缩包，共有2台路由器和2台交换机，CCNP-LAB文件为中级实验压缩包，共有5台路由器和4台交换机。
图1
由于是使用PC模拟多台路由器或者交换机，因此对于PC的配置要求较高。初级实验环境要求PC的CPU主频≥1.5GHz，内存≥512M，硬盘预留空间≥600M。中级实验环境要求PC的CPU主频≥1.7GHz，内存≥1G，硬盘预留空间≥1.3G。解压缩CCNA-LAB文件后，文件目录如图2所示。
图2
运行模拟器前需要安WinPcap程序。进入ethreal文件夹下，如图3所示。双击安装WinPcap_3_0.exe，弹出窗口，如图4所示。
图3
双击安装WinPcap_3_0.exe，弹出窗口，如图4所示。
图4 弹出提示对话框，如图5所示。
图5 按照提示完成安装，如图6所示。
图6
完成WinPcap安装后，退回到CCNA-LAB文件夹下，如图7所示。
图7
双击Router.bat脚本文件即是运行路由器，双击Switch.bat脚本文件即是运行交换机，如图8所示。
图8
依次双击各个脚本文件就将依次开启各个设备。由于每运行一个脚本时，Dynamips模拟器会解压缩并加载一次IOS镜像文件，因此建议每次开启两台设备，等模拟器解压缩并加载完成后，再开启其它设备。(注意：如果需要用到帧中继网络，必须先运行Router1.bat，因为路由器R1加载帧中继脚本)。
3.设置idle-pc值
在运行LAB的时候可能会导致系统的CPU高居100％，这是因为dynamips不知道虚拟路由器什么时候应该处于空闲状态，什么时候应该处于使用状态。Idle-pc测试分析正在运行的镜像文件，在IOS中寻找一个空闲循环周期。应用之后，dynamips在空闲循环周期的时候偶尔”休眠”虚拟路由器，当然这不会降低虚拟路由器的实际处理能力，却可以大幅度的降低主机的CPU消耗。如何应用Idle-pc呢？在模拟器关闭状态下，右键编辑.bat脚本文件。如图9所示。
图9
脚本文件中会有一项关于idle-pc的设置，如图10中所示：--idle-pc=0x60fe8088。
图10
模拟器根据IOS计算出几个可用的idle-pc值，分别代入各个值，运行所有设备，选取一个CPU占用率最低的值即可。此过程比较麻烦，且不同的IOS适用的值不相同，因此推荐初级LAB使用idle-pc值0x60fe8088，中级LAB使用idle-pc值0x604c8878。将idle-pc值代入所有设备的.bat脚本文件，保存后双击启动设备即可，如果本来没有idle-pc项的，一定要填入。
4.配置T elnet客户端
模拟器设备启动后，连接设备需要使用telnet客户端。客户端软件有很多种，最方便实用的是SecureCRT软件。安装SecrueCRT后，双击运行SecrueCRT.exe，弹出窗口如图11所示。
图11
在SecureCRT运行窗口中，为能够分页式查看各设备，点击在标签中连接，如图11所示。弹出新建会话向导，选择连接类型为telnet，如图12所示，点击下一步。
图12
在主机名选项中填入地址127.0.0.1，端口选项中填入3001，如图13所示。由于是用PC模拟路由器，因此主机名填写的是本地环回地址，连接路由器R1就填入端口号为3001，路由器R2的端口号为3002，依次类推。交换机SW1的端口号为3007，SW2的端口号为3008。端口号在.bat脚本文件中可以修改，但不推荐修改端口号。
图13
在会话名称中填入R1，此项填入的是连接设备名，方便自己查看，如图14所示。
图14
描述信息可以按自己的需要填写，一般不填。各选项填写完后，单击完成，与路由器R1的会话就建立完。如图15所示。
图15
按之前建立会话步骤，同样建立与路由器R2，交换机SW1、SW2的会话。如图16所示。
图16
分别点击连接会话即可以加载登入设备，如图17所示。
图17
会话的属性可以在选项栏中会话选项中修改，如图18所示。
图18
点击会话选项后，进行会话属性的修改。我们一般常用的是修改连接会话的外观属性，将颜色方案修改为传统，将字体设置为Courier New，并设置为粗体，当然这些按照自己的需求设置即可，如图19所示。
图19
修改了会话属性后，重新连接会话，所修改属性即已改变，如图20所示。
图20
加载完镜像文件后，弹出提示报告，询问是否初始化配置，输入n，不初始化，然后敲击回车键即可进入用户模式。提示符为Router> ，输入enable后回车即可进入全局模式，提示符为Router#,输入configure termina l后回车即可进入配置模式,提示符为Router(config)#，如下所示。
Router>enable
Router#configure terminal
Router(config)#
切换会话窗口有快捷键，Ctrl+Tab组合键是按顺序依次切换窗口，Alt+数字键的组合是直接切换到会话窗口，比如Alt+2是直接切换到第二个会话窗口。
5.拓扑图的使用
在CCNA-LAB文件夹下有一个CCNA-拓扑.jpg的文件，如图21所示。
图21
打开拓扑图后，我们可以看到一张路由器以及交换机的全连通拓扑，如图22所示。图中有各个连接接口的标识，我们可以按照此图，根据自己的需求设计出我们需要的拓扑图。在实验过程中如果有不确定的端口，也可以根据此图查找。
图22
实验1：路由器直连telnet
【实验目的】：
在本实验中，要求路由器R1与R2以串口S1/1直接连接，R1可以远程telnet到R2的S1/1接口，远程登陆不需要用户名，密码为cisco。R2的全局配置模式密码为cisco，明文方式。
?实验拓扑如图所示，路由器R1和R2以各自的S1/1口直连，直连所在网段12.12.12.0/30。
?R1的S1/1口地址为12.12.12.1/30，R2的S1/1口地址为12.12.12.2/30。
【实验拓扑】：
【实验过程】：
第一步：模版化初始配置。
1．模版化配置R1，并将路由器的名称设置为R1。
Would you like to enter the initial configuration dialog? [yes/no]:n Router>enable
Router#configure terminal
Router(config)#hostname R1
R1(config)#no ip domain-lookup
R1(config)#line console 0
R1(config-line)#exec-timeout 0 0
R1(config-line)#logging synchronous
R1(config-line)#exit
R1(config)#
2．同理配置R2，并将路由器的名称设置为R2。
Would you like to enter the initial configuration dialog? [yes/no]:n Router>enable
Router#configure terminal
Router(config)#hostname R2
R2(config)#no ip domain-lookup
R2(config)#line console 0
R2(config-line)#exec-timeout 0 0
R2(config-line)#logging synchronous
R2(config-line)#exit
R2(config)#
第二步：配置R1和R2的接口IP地址，并且激活各自S1/1口。
1．给R1的S1/1口配置IP地址12.12.12.1,掩码255.255.255.252，并且激活S1/1口。
R1(config)#interface serial 1/1
R1(config-if)#ip address 12.12.12.1 255.255.255.252
R1(config-if)#no shutdown
R1(config-if)#exit
R1(config)#
2．给R2的S1/1口配置IP地址12.12.12.2,掩码255.255.255.252，并且激活S1/1口。
R2(config)#interface serial 1/1
R2(config-if)#ip address 12.12.12.2 255.255.255.252
R2(config-if)#no shutdown
R2(config-if)#exit
R2(config)#
第三步：使用ping命令验证R1和R2之间连通性，但R1不能telnet到R2。
R1#ping 12.12.12.2
Type escape sequence to abort.
Sending 5, 100-byte ICMP Echos to 12.12.12.2, timeout is 2 seconds:
!!!!!
Success rate is 100 percent (5/5), round-trip min/avg/max = 16/49/64 ms R1#telnet 12.12.12.2
Trying 12.12.12.2 ... Open
Password required, but none set
[Connection to 12.12.12.2 closed by foreign host]
R1#
第四步：配置R2的远程登陆VTY线路，telnet密码为cisco。
R2(config)#line vty 0 4
R2(config-line)#password cisco
R2(config-line)#exit
R2(config)#
第五步：从R1远程登陆到R2的S1/1口，telnet密码为cisco。
1．从R1远程telnet到R2，但登入R2后不能进入全局模式。
R1#telnet 12.12.12.2
Trying 12.12.12.2 ... Open
User Access Verification
Password:cisco
R2>
R2>enable
% No password set
R2>exit
[Connection to 12.12.12.2 closed by foreign host]
R1#
2．配置R2的全局模式密码，密码为cisco，明文方式。
R2(config)#enable password cisco
R2(config)#exit
R2#show running-config
Building configuration...
!
hostname R1
!
boot-start-marker
boot-end-marker
!
enable password cisco
......
R2#
3．从R1远程登陆到R2的S1/1口，登入R2可以进入全局模式，密码为cisco，并显示远程登陆的用户线路号。
R1#telnet 12.12.12.2
Trying 12.12.12.2 ... Open
User Access Verification
Password:cisco
R2>enable
Password:cisco
R2#
R2#show users
Line User Host(s) Idle Location
0 con 0 idle 00:05:25
*130 vty 0 idle 00:00:00 12.12.12.1
Interface User Mode Idle Peer Address
R2#
第六步：在R2将远程登入的R1清除，远程登陆到R2的R1将会自动退回到R1的全局模式。
1．在R2上清除线路130。
R2#clear line 130
[confirm]
[OK]
R2#show users
Line User Host(s) Idle Location
* 0 con 0 idle 00:00:00
Interface User Mode Idle Peer Address R2#
2．在R1上查看，已登入R2的R1自动退回到R1本机。
R1#telnet 12.12.12.2
Trying 12.12.12.2 ... Open
.....
R2#
R2#
[Connection to 192.168.1.2 closed by foreign host]
R1#
实验2：帧中继和静态路由
【实验目的】：
在本实验中，要求路由器R1与R2以帧中继连接，R1通过静态路由学习到R2的Loopback0口网段路由，R2通过静态路由学习到R1的Loopback0口网段路由，且R1和R2的Loopback0口可以互相ping通。
?实验拓扑如图所示，路由器R1的 Loopback0口地址为1.1.1.1/32，R2的 Loopback0口地址为
2.2.2.2/32。
?R1和R2以各自的S1/0口连帧中继，帧中继所在网段为12.12.12.0/30。
?R1的S1/0口地址为12.12.12.1/30，R2的S1/0口地址为12.12.12.2/30。
?R1封装DLCI号102，R2封装DLCI号201。
【实验拓扑】：
【实验过程】：
第一步：模版化初始配置R1和R2。
1．模版化配置R1，并将路由器的名称设置为R1。
Router>enable
Router#configure terminal
Router(config)#no ip domain-lookup
Router(config)#line console 0
Router(config-line)#exec-timeout 0 0
Router(config-line)#logging synchronous
Router(config-line)#exit
Router(config)#line vty 0 4
Router(config-line)#exec-timeout 0 0
Router(config-line)#logging synchronous
Router(config-line)#exit
Router(config)#hostname R1
R1(config)#
2．模版化配置R2，并将路由器的名称设置为R2。
Router>enable
Router#configure terminal
Router(config)#no ip domain-lookup
Router(config)#line console 0
Router(config-line)#exec-timeout 0 0
Router(config-line)#logging synchronous
Router(config-line)#exit
Router(config)#line vty 0 4
Router(config-line)#privilege level 15
Router(config-line)#no login
Router(config-line)#exec-timeout 0 0
Router(config-line)#logging synchronous
Router(config-line)#exit
Router(config)#hostname R2
R2(config)#
第二步：配置路由器R1和R2的Loopback口IP地址。
1．R1的Loopback0口地址为1.1.1.1/32。
R1(config)#interface loopback 0
R1(config-if)#ip address 1.1.1.1 255.255.255.255
R1(config-if)#exit
R1(config)#
2．R2的Loopback0口地址为2.2.2.2/32。
R2(config)#interface loopback 0
R2(config-if)#ip address 2.2.2.2 255.255.255.255
R2(config-if)#exit
R2(config)#
第三步：配置路由器R1和R2的帧中继连接以及接口IP地址。
1．R1的S1/0口IP地址为12.12.12.1/30，封装帧中继。
R1(config)#interface serial 1/0
R1(config-if)#ip address 12.12.12.1 255.255.255.252
R1(config-if)#encapsulation frame-relay
R1(config-if)#no frame-relay inverse-arp
R1(config-if)#frame-relay map ip 12.12.12.2 102 broadcast R1(config-if)#no shutdown
R1(config-if)#exit
R1(config)#
2．R2的S1/0口IP地址为12.12.12.2/30，封装帧中继。
R2(config)#interface serial 1/0
R2(config-if)#ip address 12.12.12.2 255.255.255.252
R2(config-if)#encapsulation frame-relay
R2(config-if)#no frame-relay inverse-arp
R2(config-if)#frame-relay map ip 12.12.12.1 201 broadcast R2(config-if)#no shutdown
R2(config-if)#exit
R2(config)#
3．测试R1和R2帧中继直连ping通。
R1#ping 12.12.12.2
Type escape sequence to abort.
Sending 5, 100-byte ICMP Echos to 12.12.12.2, timeout is 2 seconds:
!!!!!
Success rate is 100 percent (5/5), round-trip min/avg/max = 16/45/88 ms
R1#
第四步：配置路由器R1到R2的Loopback0口的静态路由，并查看路由表。
R1(config)#ip route 2.2.2.2 255.255.255.255 s1/0
R1(config)#exit
R1#show ip route
Codes: C - connected, S - static, R - RIP, M - mobile, B - BGP
D - EIGRP, EX - EIGRP external, O - OSPF, IA - OSPF inter area
N1 - OSPF NSSA external type 1, N2 - OSPF NSSA external type 2
E1 - OSPF external type 1, E2 - OSPF external type 2
i - IS-IS, su - IS-IS summary, L1 - IS-IS level-1, L2 - IS-IS level-2
ia - IS-IS inter area, * - candidate default, U - per-user static route o - ODR, P - periodic downloaded static route
Gateway of last resort is not set
1.0.0.0/32 is subnetted, 1 subnets
C 1.1.1.1 is directly connected, Loopback0
2.0.0.0/32 is subnetted, 1 subnets
S 2.2.2.2 is directly connected, Serial1/0
12.0.0.0/30 is subnetted, 1 subnets
C 12.12.12.0 is directly connected, Serial1/0
R1#
第五步：测试R1到R2的Loopback0口是否可达。
1．R1上ping不通2.2.2.2，添加到2.2.2.2的帧中继封装后可以ping通。
R1#ping 2.2.2.2
Type escape sequence to abort.
Sending 5, 100-byte ICMP Echos to 2.2.2.2, timeout is 2 seconds: .....
Success rate is 0 percent (0/1)
R1#configure terminal
R1(config)#interface serial 1/0
R1(config-if)#frame-relay map ip 2.2.2.2 102 broadcast
R1(config-if)#exit
R1(config)#exit
R1#ping 2.2.2.2
Type escape sequence to abort.
Sending 5, 100-byte ICMP Echos to 2.2.2.2, timeout is 2 seconds:
!!!!!
Success rate is 100 percent (5/5), round-trip min/avg/max = 52/64/80 ms R1#
2．以R1的Loopback0口为源ping不通2.2.2.2。
R1#ping 2.2.2.2 source loopback 0
Type escape sequence to abort.
Sending 5, 100-byte ICMP Echos to 2.2.2.2, timeout is 2 seconds:
Packet sent with a source address of 1.1.1.1
.....
Success rate is 0 percent (0/5)
R1#
3．添加R2到R1的Loopback0口的回向路由，以及到R1的Loopback0的帧中继封装。
R2(config)#ip route 1.1.1.1 255.255.255.255 s1/0
R2(config)#interface serial 1/0
R2(config-if)#frame-relay map ip 1.1.1.1 201 broadcast
R2(config-if)#exit
R2(config)#
4．测试R1和R2的loopback0口互相可达。
R1#ping 2.2.2.2 source loopback 0
Type escape sequence to abort.
Sending 5, 100-byte ICMP Echos to 2.2.2.2, timeout is 2 seconds:
Packet sent with a source address of 1.1.1.1
!!!!!
Success rate is 100 percent (5/5), round-trip min/avg/max = 20/64/120 ms R1#
TjpgDec技术手册
TjpgDec技术手册 -------R0.01b版 前言 相信大家对FATFS文件系统都不陌生了，2012年FATFS的作者推出了JPG/JPEG图片的解码函数库TJpgDec的R0.01b版，使用方法和FATFS文件系统的使用一样，仅仅调用2个简单的库函数就能完成对JPG/JPEG图片的解码，而且输出的数据格式为RGB888或RGB565。 本文档是根据ChaN的专用网页提供的英文版技术手册翻译而来，因个人水平有限以及时间仓促，错误之处在所难免。本文档原始版权归TJpgDec的作者所有，本人只是做了一下翻译的工作，把这篇文档献给所有嵌入式开发人员，希望能够帮到你们。 嵌入式奋勇前进 2013-10-20
一．前言： TJpgDec是一款为小型嵌入式系统服务的高效且完善的JPEG图片解码模块。它占用内存极少，因此可以移植入像AVR,8051，PIC,Z80，Cortex-M0等等小型单片机中。 二．特点： ?库函数是按照ANSI-C规范编写的，所以应用平台不受 约束。 ?易于使用的主模式操作方式。 ?完全可重入的架构。 ?非常小的内存占用： o RAM仅占用3KB，而不受图片大小的影响。 o ROM 占用3.5-8.5KB，主要用于存储代码和const 常量。 ?输出格式: o输出图片比例: 1/1, 1/2, 1/4 ，1/8 可选 o输出像素格式: RGB888/RGB565（可预设） 三．应用程序接口： 共有2个应用程序接口函数，用于分析和解码JPEG图片（译者注：移植TJpgDec时需要在主程序中调用这两个库函数） ?jd_prepare –为解码一个JPEG图片做准备 ?jd_decomp –解码JPEG图片 四．I/O接口函数： TJpgDec需要用户自定义2个I/O接口函数，用于输入JPEG数据和输出解码后得到的像素数据。 ?Input funciotn - 从输入的数据流中读取JPEG的数据 ?Output function –把解码后得到的像素数据发送到输出设备 五．备注说明： TJpgDec应用模块是一款可用于教育和研发的开源软件。你完全可以根据自己的项目需要或者商业产品的需要，自由更改本软件，而不用担负任何个人责任。 六．ChaN的个人网页：（即TjpgDec库函数下载地址）https://www.360docs.net/doc/2a18412431.html,/fsw/tjpg/00index.html 注：其他信息，如各版本信息，在此不作翻译了。
建筑试验员技术操作手册
目录 第一章、施工现场实验员工作管理 (1) 一、委托制度 (1) 二、标准养护室测试检查记录 (1) 三、工地实验管理 (1) 四、见证管理 (6) 第二章、水泥与钢筋材料试验 (10) 第一节、水泥 (10) 第二节、钢筋 (14) 第三章、其它原材料试验 (20) 第一节、砂子 (20) 第二节、石子 (24) 第四章、混凝土性能试验 (24) 第一节、普通砼 (27) 第二节、抗渗抗冻砼 (32) 第三节、泵送砼 (33) 第四节、大体积砼 (34) 第五章、建筑砂浆 (34) 一、砌筑砂浆 (35) 第六章、土工试验分析 (37)
第一节、土工试验概述 (37) 第二节、土工的工程分类 (37) 第三节、土的基本物理指标 (37) 第四节、含水率试验 (38) 第五节、密度试验 (39) 第六节、回填土试验 (43) 第七节、灰土 (44) 第八节、压实系数 (44) 第一章施工现场试验工作管理 、委托制度 1．凡送试各种原材料检验的单位，必须认真填写试验委托单。试验委托单要写明编号、试验名称、委托单位、取样地点、试件数量、产地、用于工程的部位、送样日期、需用日期和要求试验项目、需用试验报告份数及其他必须注明的内容。委托单必须有工地技术负责人和送试人签名或盖章。 2．各种配合比试验委托必须填写委托单。委托单要写明使用工程名称和部位、强度等级、各种原材料的产地、鉴定情况及掺合料、外加剂等。必须根据工程进度提前提出申请。 3．混凝土和砂浆试验报告、配合比申请单、工程部位等由委托单位填写。试验室负责填写收样日期、试验编号、试验结果，办理签字盖章手续 4．试样要和委托单对号无误 、标准养护室测试检查制度 1．标准养护室要设置混凝土养护架，砂浆和水泥试件养护箱。养护温度和湿度采用自动控制装置和喷淋式控制。 2?标准养护室的温度应保持在20 C 士2 C，相对湿度在90 %以上。记录温湿度分别用温度记录仪和湿度计。 3．进入标准养护室的试件应根据编号、龄期，并按顺序连续摆放进行养护。试件要摆放整齐，出入养护室要按编号、龄期有条不紊地进行。
施工工艺(建筑工程技术指导手册)
建筑工程技术指导手册 1 总则 1.1农村危房改造重建要以保证困难农户重建房屋质量，保护困难农户生命财产安全，改善困难农户居住条件为基本原则，贯彻执行国家法律、法规及相关的标准规范。 1.2服从村庄、集镇、建制镇总体规划和建设规划，注重将农房改造重建与村庄整治、人居环境改善相结合。 1.3农村危房改造重建，要因地制宜采用合格的建筑材料，鼓励应用节能环保型的新技术、新材料、新工艺。 1.4本指导手册主要用于农村困难农户翻建新建二层（含二层）以下的自用住宅及附属用房。 2房屋选址 2.1新建房屋选址要符合规划要求。符合规划的建房户应尽量利用原宅基地恢复建设。有条件的地方，择址新建的房屋应与生态建设紧密结合，不占或少占耕地。 2.2房屋选址应选择稳定基岩，坚硬土，开阔平坦、密实、硬度均匀稳定的有利地段建房。避开活动断层和可能发生滑坡、山崩、地陷、非岩质的陡坡，突出的山嘴，孤立的山包地段，避开饱和砂层、软弱土层、软硬不均的土层和容易发生砂土液化的地段。 2.3选择向阳、通风良好的地段，避开风口和窝风地段。 2.4拟建房屋不能占压地下管线，应与各类电力线路保持安全距离（其中1千伏以下不小于4米，4千伏以下不小于6米），否则必须报告电力线路管理部门采取安全防护措施。 3房屋的建筑设计 3.1房屋建筑设计应围绕使用功能兼顾周围环境，鼓励建房人员采用本地区农房设计通用图集及新技术建设农房。 3.2房屋建筑设计体现以整体环境为中心的设计理念，兼顾农村地方特色，做好房屋外部环境的整体空间布局，处理好户外交往空间，要在保护、节约耕地
的前提下做到以实用为主，采取多种单元类型，系列化拼接，注意房屋建筑节能措施的实施和使用节能建材。 3.3房屋功能布局要做到生产功能与生活功能区分，实行人畜分离，采用科学合理的农村房屋家居功能模式。 3.4在建筑结构设计中要使用成熟的节能体系和节能环保建材；计算各结点承载力；确定窗墙比；提高门窗保温隔热性能和气密性；合理选择朝向；综合利用新能源、可再生能源。 3.5对主要持力层范围内存在软弱粘性土层的地基，应设置钢筋混凝土圈梁或进行地基加固处理。 3.6 在抗震设防地区，要充分考虑抗震设防要求；在雷区应考虑防雷设防要求。 4基础工程 4.1基础地基选择 4.1.1 基础持力层应落在中硬土以上地质均匀的老土层上，基础埋深不少于500毫米。 4.1.2 当基础地基出现软硬不均时，对软土部分进行处理，挖成台阶型，使地基持力层土质相对均匀一致。 4.1.3 当基础持力层落在斜面岩层上时，基槽应挖成台阶型并应有镶固，防止基础滑移。 4.1.4 在坡顶建房，基础应距边坡一定距离，具体视地质情况定。当边坡角大于45°、坡高h大于8米时，应请专业技术人员进行边坡稳定性验算，防止圆弧滑动。对于稳定的边坡，基础底面外边缘线至坡顶水平距离L不得小于2.5米。如所建房屋临近边坡底部，在确保边坡安全稳定的情况下，也应与边坡保持一定距离。 4.2毛石基础施工 4.2.1 砌筑毛石基础的第一皮石块时，基底应用高强度等级的砌筑砂浆找平坐浆，石块大面向下，并选择比较方正的石块砌在各转角处。 4.2.2 应根据石块自然形状交错位置，尽量使石块间缝隙最小，然后将砂浆填在空隙中，并且铁钎插捣密实。严禁采取先放小石块后灌浆的放法。 4.2.3 基础最上一皮石块，宜选用较大的毛石砌筑。基础的第一皮及转角处、交接处和洞口处，应选用较大平毛石砌筑。 4.2.4 毛石基础的转角及交接处应同时砌筑。如不能同时砌筑又必须留槎
细胞培养实验技术手册
实验记录 24/2/2014 一、细胞培养 一、培养基的配制 a. RPMI 1640 1×（with L-glutamine）类培养基组分：RPMI ，10%FBS（胎牛血清），双抗生素（penicillin，盘尼西林（青霉素），streptomycin，链霉素）； 配制方法：500 ml RPMI(一瓶) + 50 ml FBS + 5 ml 双抗生素 b. DMEM 1×类培养基组分：DEMI，10% FBS，双抗生素； 配制方法：500 ml DMEM(一瓶) + 50 ml FBS + 5 ml 双抗生素 二、培养细胞RNA的提取 1.从培养箱中拿出6孔板（每孔培养2 ml），吸出培养液； 2.PBS清洗；用大枪管吸取PBS加入每个培养孔中（枪头不要触碰培养板，防止交叉污染），用1 ml枪吹匀清洗（把培养板倾斜，吸溶液指最高处打出）。重复以上操作一次。 3. 每孔中加1 ml Trizol ，吸出放-80℃冰箱冷冻。 三、培养细胞DNA的提取 1.从培养箱中拿出6孔板（每孔培养2 ml），吸出培养液； 2.PBS清洗；用大枪管吸取PBS加入每个培养孔中（枪头不要触碰培养板，防止交叉污染），用1 ml枪吹匀清洗（把培养板倾斜，吸溶液至最高处打出）。重复以上操作一次。 3. 向培养板中加酶消化（时间较长，放进培养箱，看到有白色悬浮后取出），取出加DMEM类培养基； 4. 吸出至1.5 ml 离心管，3600 rpm，4 min离心； 5. 吸出上清（不要触及沉淀），加PBS 1ml清洗，3600 rpm，4 min离心； 四、常用细胞系（人） 名称细胞类型来源核型培养液 A431 上皮型表皮细胞肿瘤非整倍体（76，XX）DMEM+10%FBS HeLa 上皮样宫颈癌非整倍体（81-83，XX）MEM+NEAA 10%FBS Hep G2 上皮样肝细胞癌非整倍体（55，XY）MEM+NEAA 10%FBS MEM：极限必需培养液（Eagle）；NEAA：非必需氨基酸；DMEM：Dulbecco’s MEM改良培养液；RPMI：Roswell Park Memorial 研究所；BrdU：5-溴脱氧尿苷；APRI：腺苷磷酸核糖转移酶 实验室除snu系列与国产7721用1640培养基，其它用DMEM培养基。 五、原代培养----肝细胞 1.切除乳鼠肝脏组织放进小烧杯中，用PBS或培养液漂洗2-3次，去除血污； 2.加少量培养液，用剪子把组织剪碎，1 平方mm左右，再用吸管吹打； 3.加含10%小牛血清的1640培养液，制成均匀的细胞悬液，移入培养瓶，将组织块放在培养瓶底部，采用薄层营养液培养法，盖上瓶盖。 4.换液，只将旧的培养液吸弃，换上新的培养基。 六、传代培养 1.显微镜观察是否需要传代 细胞生长良好：上清液清亮，无悬浮物，折光性好，均质而透明，胞膜完整，胞内颗粒少，无空泡和脂滴。细胞生长不良：悬浮物多，发差增大，胞膜不完整，胞质中颗粒多，出现空泡和脂滴。
实验室化学技术手册-麻省理工
警示：这些材料所叙述的实验可能是危险的，因此需要高标准的安全训练、特殊的设备和装置，并在合适的人员监管下才能进行。对于履行这样的安全程序和措施，你负有全部的责任和义务，并独自承担其风险。对于所提供的任何材料的内容或其执行情况，MIT 将不负任何责任和义务，不承担任何风险。法律提示 麻省理工学院化学系 实验室手册 5.301 化学实验技术 Katherine J Franz和Kevin M Shea编写 Rich L Danheiser和Timonthy M Swager教授协助编写 J Haseltine, Kevin M Shea和Sarah A Tabacco修改 IAP 2004
目录 1．简介 1.1. 概述 3 1.2. 教材 4 1.3. 导读 5 1.4. 等级 6 1.5. 日程安排 7 1.6. 怎样使用本手册 8 1.7. 实验室介绍 9 2. 转移和萃取技术 2.1. CC：“乙酯的轻松之旅” 14 2.2. EE：酸、碱及其互变 17 3. 重结晶纯化固体 3.1. CC：怎样对樟脑球进行重结晶？ 19 3.2. EE：单晶培养 21 4. 蒸馏纯化液体 4.1. CC：“桃子是怎样进入香蕉的？” 24 4.2. EE：高海拔下应该怎么操作? 26 5. 快速柱色谱纯化法 5.1. CC：“外观可能是欺骗性的” 28 5.2. EE：设定速度 30 6. 蛋白质鉴定和误差分析 6.1. CC：“牛的心脏里有什么呢？” 32 6.2. EE：“我心坚如磐石” 35 7. 原创性研究介绍 7.1. Mn(salen)配合物催化烯烃的环氧化反应 37 1
防水工程技术手册
防水工程技术手册（2015版－1） 设计工程部
目录： 第一部分：总说明 第二部分： 第一节：屋面露台防水部分（设计要求）——————————————————第05页第二节：屋面露台防水部分（施工要求）——————————————————第10页第三节：墙面防水部分（设计要求）————————————————————第20页第四节：墙面防水部分（施工要求）————————————————————第24页第五节：厨卫防水部分（设计要求）————————————————————第29页第六节：厨卫防水部分（施工要求）————————————————————第29页第七节：门窗及幕墙防水部分（设计要求）—————————————————第30页第八节：门窗及幕墙防水部分（施工要求）—————————————————第32页第九节：地下室防水部分（设计要求）———————————————————第33页第十节：地下室防水部分（施工要求）———————————————————第37页第三部分：具体案例分析
第一节：常见案例分析——————————————————————————第38页第二节：特殊案例分析——————————————————————————第47页第四部分：相关项目实施大样 第一节：常见部位大样——————————————————————————第50页第二节：特殊部位大样——————————————————————————第56页第三节：施工流程大样——————————————————————————第58页 第一部分：总说明 1总说明 防水工程的设计及施工应遵循“防、排、截、堵相结合，刚柔相济、因地制宜，综合治理的原则”，做到先排后防，即首先不能有积水，要将水在短时
实验技术手册(细胞免疫方面)
单克隆抗体的制备 1975年，K?hler和Milstein创立了杂交瘤技术制备单克隆抗体，单克隆抗体具有特异性高，灵敏度高，重复性好，可供应量大，检测时间短以及能够查出混合物中的少量成分等优点。 1试验材料 1.1试验动物和细胞 雌性6～8周龄BALB/c小鼠 SP2/0骨髓瘤细胞 1.2主要实验试剂 HRP标记羊抗小鼠IgG、福氏完全佐剂（FCA）、福氏不完全佐剂（FIA）、聚乙二醇（PEG）、二甲基亚砜（DMSO）、降植烷、TMB底物、HAT(50×)、HT(50×)、三抗溶液（100×）小鼠单抗Ig类和亚类鉴定用ELISA试剂盒均为SIGMA公司； DMEM粉、特级胎牛血清（FBS）均为GIBCO公司； 牛血清白蛋白（BSA） 1.3主要实验仪器和耗材 CO2细胞培养箱（Thermo和上海新苗医疗器械制造有限公司WJ-160B-Ⅲ） 酶联检测仪（BIO-RAD Model 680） 血球计数板（上海求精生化试剂仪器有限公司） pH计（Sartorius赛多利斯科学仪器） APL高压灭菌锅（CL-32L） 生物安全柜(ESCO北京五州东方科技发展有限公司) 三恒电泳仪（JY600C） 数显恒温磁力搅拌器（78HW-1，杭州仪表电机有限公司） 电子分析天平（Sartorius赛多利斯科学仪器） 分光光度计（WPA Biowav eⅡ+） 进口液氮罐（Thermo） Protein A柱 恒温水浴锅（HH-2金坛市科兴仪器厂） 微型台式真空泵（GL-80ZB型，海门市） 电热恒温培养箱（DHP-9032上海天恒医疗器械） 低速离心机 (L-550长沙湘仪离心机仪器有限公司) 高速冷冻离心机（SIGMA 2-16PK） 倒置显微镜（Nikon TS100） 超低温冰箱(Thermo) 96孔酶标板（） 96孔、24孔细胞培养板、T25培养瓶、35mm培养皿、60mm培养皿、100mm培养皿、冻存管0.22μm过滤器(PALL) 2主要试剂配制 2.1常规试剂配制 PBS（或PB）（0.02mol/L，pH7.4）： A液（0.2 mol/L Na2HPO4）：Na2HPO4·12H2O 71.64g,加蒸馏水至1000ml；
EtherCAT技术手册
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公司工程技术资料管理手册
榆林神华能源有限责任公司 工程技术资料治理方法 (试行） 第一章总则 第一条为规范矿、土、安工程技术资料（以下简称资料）治理，提高工程质量治理水平，统一资料验收标准，建立完整、准确、规范的工程档案，依照《中华人民共和国建筑法》、《建设工程质量治理条例》、《建设工程文件归档整理规范》及国家、地点和神华集团现行有关法律、法范、规范、标准和规定，结合公司实际情况，制定本方法。 第二条本方法适用于榆林神华能源有限责任公司新建、改建、扩建的矿、土、安三类工程及其配套工程资料的编制、治理。参与工程建设的有关单位均应执行本方法。 第三条本方法与国家、地点及神华集团公司现行的法律、法规、规范、标准及规定相抵触的，执行国家、地点及神华集团公司的相关要求。 第二章参建方责任 第四条资料形成责任单位应对资料内容的真实性、完整性、有效性负责；由多方形成的资料，要各负其责。
第五条参与工程建设的有关单位应将资料的收集和整理纳入工程建设治理的各个环节及有关人员的职责范围。 第六条建设单位对工程预备时期、竣工验收时期形成的资料进行收集、整理和立卷，同时组织、监督和检查其他参与工程建设有关单位的资料形成、积存和立卷工作，并负责工程档案的归档。 第七条监理单位应按施工进度对施工资料的收集、整理及资料的完整性、准确性进行检查和审核。 第八条施工单位负责资料的收集、整理和立卷归档工作。 施工单位应建立健全内部工程技术资料治理体系，实行企业技术负责人负责制。工程项目的资料收集整理应由专人负责。施工单位资料员应在项目部技术负责人的指导下，负责资料督促收集、整理归档工作。资料员应严格按照《建筑工程资料归档规范》的要求，切实履行岗位职责，认真做好工程资料收集整理、立卷归档工作，不得代替他人编写工程施工资料。 实行总承包的工程项目，总承包单位负责汇总整理各分包单位的资料，并编制全部资料。分包单位应对各自分包项目的资料进行收集整理。在分包工程验收合格后，将施工资料及时移交总承包单位。
蛋白质组技术实验手册
第一部分组织和细胞蛋白样品的制备 1 材料和方法 1.1 材料 1.1.1 组织和细胞的来源： 1.1.2 仪器设备 机械组织匀浆器 低温高速离心机(>40,000 g) 超速离心机 超生细胞破碎仪 超纯水装置 1.1.3 试剂 三氯醋酸(TCA) 丙酮 二硫苏糖醇(DTT) 尿素 CHAPS PMSF EDTA 乙醇 磷酸 考马斯亮蓝R350 抑肽素A 亮肽素 ●试剂纯度均应是分析纯或以上。
1.1.4 溶液配制 (1)PBS： NaCl 8 g, KCl 0.2 g, Na2HPO4 1.44 g, KH2PO4，溶于800 ml水中，用HCl调pH至7.4，用纯水定容至1 L； (2)EDTA 储存液： 18.61 g Na2EDTA·2H2O，溶于70 ml纯水中，用10 mol/L NaOH调节pH值至8.0 (约 需2 g NaOH颗粒)，定容为100 ml。可高压灭菌后分装备用； (3)亮肽素储存液(50 μg/ml，100×) 10 mg/ml溶于水，-75℃保存；使用时配成50 μg/ml储液，-20℃保存； (4)抑肽素储存液(70 μg/ml，100×) 1 mg/ml溶于甲醇，-75℃保存；使用时配成70 μg/ml储液，-20℃保存； (5)PMSF储存液(10 mM, 100×): 17.4 mg PMSF，溶于1ml异丙醇中，-20℃保存。 (6)DTT 储存液(1 M): 0.31 g DTT溶于2 ml H2O中，-20℃保存(DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处 理，可过滤除菌)。 (7)裂解液: Lysis buffer A (9 M urea, 4% w/v CHAPS, 1% w/v DTT, 0.5% CA and a cocktail of protease inhibitors) Final concentration Amount 9 M 10.8 g Urea (FW 60.06, Sigma, >99.5%) 4% (w/v) 0.8 g CHAPS (FW 614.89, Sigma, >98% Ultrapure H2O to 20 ml prepare fresh or store in aliquots at –20℃ A cocktail of protease inhibitors DTT(FW 154.25, Promega) 1% 13 μL/200 μL Lysis buffer (15.5×stock), -20℃
Western Blot 实验实用技术手册总结
Western Blot 实验技术手册 Western Blot是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳将蛋白根据分子量大小分开，然后转移到固相载体（杂交膜）上，然后通过抗原抗体反应检测杂交膜上的靶蛋白是否存在，从而检测到靶蛋白在待检测样本中的表达情况。目前Western Blot已经是蛋白检测的最常用和成熟的技术之一. 一、Western Blot基本操作流程图 细胞/组织蛋白提取 ↓蛋白定量、蛋白变性 上样、电泳 ↓ 一转膜 ↓ 封闭 ↓ 孵育一抗 ↓洗膜 孵育二抗 ↓洗膜 底物孵育 ↓ 曝光或显色 二.Western Blot操作步骤 1.蛋白提取、处理 蛋白提取的质量直接决定着WB结果的好坏，因此，根据样本类型和检测类型选择合适的蛋白制备方法是至关重要的。使用适当的裂解液裂解贴壁细胞、悬浮细胞或者组织样品. 对于贴壁培养的细胞，经预冷的PBS漂洗2次，裂解液中加入蛋白酶和磷酸酶抑制剂，然后吸净PBS，加入预冷的裂解液，最后用细胞刮子刮取贴壁细胞，将细胞及裂解液温和地转移至预冷的微量离心管中，4℃离心12,000 rpm，20 min（根椐细胞种类不同调整离心力），轻轻吸取上清，转移至新预冷的微量离心管中置于冰上，即为蛋白样本，弃沉淀. 对于组织样品，用灭菌的预冷的工具分离目的组织，尽量置于冰上以防蛋白酶水解，将组织块放在圆底的微量离心管或Eppendorf管中，加入液氮冻结组织于冰上均质研磨，长期可保存于-80°C，每约5 mg加入约300 μl 预冷的裂解液lysis buffer，冰浴匀浆后置于4℃摇
动2小时，裂解液体积与组织样本量有适当比例，（最终的蛋白浓度至少达到0.1 mg/ml, 理想的蛋白浓度应为1-5 mg/ml).，4℃离心12,000 rpm，20 min，轻轻吸取上清，转移至新预冷的微量离心管中置于冰上，即为蛋白样本，弃沉淀 提取蛋白后进行蛋白的定量，蛋白的快速定量方法主要蛋白本身的发色基团，或者与其他显色剂反应产生的紫外吸收来进行定量.目前常用的主要有直接紫外吸收法，Bradford法、和Lorry法或BCA法，一般推荐用BCA法. BCA测定方法如下: A．酶标板操作 2、根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA工 作液，充分混匀； 3、各孔加入200μL BCA工作液； 4、把酶标板放在振荡器上振荡30sec，37℃放置30分钟，然后在562nm下比色测定。以蛋 白含量（μg）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线； 5、稀释待测样品至合适浓度，使样品稀释液总体积为20μL，加入BCA工作液200μL，充 分混匀，37℃放置30分钟后，以标准曲线0号管做参比，在562nm波长下比色，记录吸光值； 6、根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量（μg），除以样品稀释 液总体积（20μL），乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度（单位：μg/ul）。 三、样品处理 一般的抗体只能识别抗原蛋白中的部份序列结构（表位），因此，为使抗体能够达到结合该表位而需要将蛋白样本进行变性，使之打开折叠的空间结构，蛋白变性一般使用含阳离子变性去污剂如SDS的上样buffer （loading buffer），并于95-100°C 煮沸5分钟，对于多次跨膜蛋白，可以于70°C 加热5-10分钟，标准的上样buffer称为2X Laemmli buffer，上样时与样本混合后变性上样即可，为了减少样品的稀释比例，也可制备4 X或6 X的上样缓冲液，如果上样buffer称为2X Laemmli buffer，上样时与样本1：1混合后变性上样即可. SDS的阴离子环绕蛋白肽键使之带负电荷，蛋白分子量不同，结合的SDS数量不同，所带负电荷也不同，电泳迁移速度不同，因此SDS-PAGE电泳可将不同分子量的蛋白分离开。 四、PAGE电泳分离蛋白和转膜、封闭 1）、电泳 聚丙酰胺凝胶PAGE电泳根椐蛋白分子量进行分离蛋白，PAGE胶是由两种化合物聚合而成的，即丙烯酰胺（acr）和N,N-甲叉双丙烯酰胺(Bis).，聚合需加入过硫酸铵及DMAP 或TEMED，凝胶为中性、水溶性、三维网状结构。凝胶的孔径取决于总丙烯酰胺的百分含量（%T)）和交联度（%C），T%=(a+b)/m*100%; 和C%=a/(a+b)*100%,其中: a=双体(bis)的重量;b=单体(arc)的重量;m=溶液的体积(ml) 。丙烯酰胺总量增加，则孔径减小，5%C 构成最小的孔径，任何的%C增加或降低，孔径都增加，凝胶的百分浓度组成需两个参数，
施工技术资料整理大全.pdf
施工技术资料整理大全 为了使工程建设施工期间，施工技术资料的填写统一、规范，对各种表格的填报及注意事项加以说明。 一、该“格式”中未列但实际施工中又必须使用的表格，可由施工单位自制，但须报经业主、监理代表处批准。对各类表格表头部门、主体部分填写要求说明如下： 1、表头部分填写： （1）项目名称或建设项目：指安阳至新乡高速公路改建工程。 （2）合同号：指标段号。 （3）工程部位：指桩号、层数、墩台号、孔号等。 （4）工程名称：指单位工程名称或分部工程名称。 （5）施工单位：指该合同段施工单位的全称或规范简称。 （6）监理单位： 2、签字部分填写： （1）试验、检验：填试验者或检验者本人姓名。 （2）计算、记录：计算结果者或记录数据者本人姓名。 （3）复核和审核：应由复核和审核人员分别签字，复核和审核人员不能为同一个人，且不能和试验（检验）、计算（记录）为同一个人。 （4）日期：填试验或检验当天日期。 （5）试验单位：指试验者所属，经交通行政主管部门批准具有试验室临时资质的单位全称，并加盖与该全称相符的公章。
（6）试样编号：指对试样进行分类编号和试验台帐对应便于查阅。 （7）取样地点：指取样的具体位置。 （8）试样说明：指试样的类型及特征。 3、表中主体部的填写： （1）应将试验、检测数据如实填在规定的格内或栏内。其中各项检测结果的计算及数据应符合有效数字的规定，测试结果应符合试验规程规定的精度或允许差的要求。计量单位要与表中规定的保持一致。 （2）如填写有误，应重新填写，不得涂改。 二、工程报验单及工程检验认可书 1、工程报验单应由施工单位在每道工序完工后，下道工序开始前，经自检合格后填写，并报监理认可。监理抽检合格后签署意见，并准许下道工序开始施工。工程报验单中“现场监理一栏”由现场旁站监理填写检验结果；“项目监理工程师意见”一栏由项目监理工程师写明是否允许进入下道工序施工。 2、报验频率： （1）路基土石方（包括清表、填前碾压）施工，应按施工段分层报验。 （2）排水工程、砌筑工程，应按施工段分工序报验。 （3）涵洞施工，应按不同工程部位分工序报验，实际施工中若有一道工序须分段、分项施工的（如基础砼的浇筑等），应按施工批次分别报验。涵洞盖板预制（包括其它小型预制件），应按浇筑批次分工序分别报验，若有一个批次的涵洞盖板用于不同涵洞施工的，应分别报验。
实验室工作手册
河南农业职业学院 实验室工作手册 学年第学期 年月日至年月日 实验室名称 所属部门 实验实习指导教师 系部负责人签字 审阅日期：年月日 目录 一、实验室技术人员职责 二、实验室学期工作计划 三、实验项目开出情况记录 四、实验情况统计 五、其他工作情况记录 六、实验室建设情况记录 七、设备运行维护记录 八、承担其他任务情况 九、学期工作总结 十、实验室工作评价
一、实验室技术人员职责 1、认真执行实验室工作条例。学习、研究课程教学大纲和实验指导书。掌握有关实验的基本原理与技术知识，不断提高实验理论水平和实验技术水平。 2、与实验指导教师密切配合完成教学和科研实验任务。认真做好教学实验的准备工作，参加实验预做，写出预做实验报告，参与指导学生实验，不断提高实验教学质量。 3、负责实验所需仪器设备、材料的准备工作。每次实验前负责将实验所需仪器设备、实验器材、低值易耗品等准备齐全、摆放整齐；实验后负责检查清点回收。 4、在实验过程中，应指导学生认真执行操作规程，发现有不遵守操作规程者应进行劝告，不听劝告者可令其停止实验。 5、搞好仪器设备管理，负责对仪器设备的清点、检修、保养。做好帐卡登记，保证帐、卡、物一致。对确实需要报废的仪器设备，应及时上报处理。 6、做好实验室的清洁卫生，防电、防水、防火、防盗，发现隐患及时报告 7、认真做好实验室基本信息的收集整理和实验室工作档案管理。 8、严格执行实验室的各项规章制度，完成学院、系（部）安排的各项任务。 9、实验室专职技术人员实行坐班工作制。在实验过程中，不得脱离岗位。 10、实验专职技术人员应认真填写《实验室工作手册》，详细记载各项工作的情况，期末将《实验室工作手册》交所属部门。 二、实验室学期工作计划
基因工程实验技术手册
基因工程实验技术（2013修订版） 西北农林科技大学 生物化学与分子生物学系 2013.12
基因工程实验技术 （2013修订版） 目录 实验一、小麦GAPDH总RNA提取 实验二、RT-PCR扩增目的基因cDNA（小麦GAPDH截短体）实验三、核酸琼脂糖电泳分析 实验四、质粒的提取 实验五、表达载体和目的片段的酶切 实验六、载体和外源DNA的连接 实验七、感受态细胞的制备及转化 实验八、重组质粒筛选、鉴定及转化 实验九、目的基因诱导表达 实验十、Western Blotting检测 附录1DNA的纯化与回收 附录2培养基制备和细菌培养 附录3小麦3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）信息 附录4表达载体pGEX4T-1图谱 附录5标准分子量图
小麦GAPDH截短体的重组与表达实验流程图 小麦幼苗 总RNA提取 RT-PCR扩增 GAPDH截短体基因 片段胶回收 表达载体构建 表达菌株转化 诱导表达 Western杂交
小麦GAPDH截短体的重组与表达 1小麦总RNA提取 （Trizol法） 1.1材料 小麦幼苗 1.2仪器设备 高速冷冻离心机、低温冰箱、核酸电泳设备、液氮罐、研钵、剪刀、镊子等 1.3试剂配制及器具处理 ①0.1％的DEPC H2O（DEPC：焦碳酸二乙酯） ②器具处理：试剂瓶、量筒、研钵、大小枪头和1.5ml和0.2ml的EP管等用纱布包裹，在0.1％的DEPC H2O中浸泡过夜（37℃），高压灭菌，80℃烘干备用。剪刀、镊子和药匙等160℃烘烤6h以上。 ③无RNA酶灭菌水（DEPC H2O）：用将高温烘烤的玻璃瓶（180℃×2h）装蒸馏水，然后加入0.1%的DEPC（体积/体积），处理过夜后高压灭菌。 ④Trizol ⑤75%乙醇：用新打开的无水乙醇和DEPC处理过的水配制75%乙醇（用高温灭菌器皿配制），然后装入高温烘烤的玻璃瓶中，存放于低温冰箱。 ⑥氯仿(最好用新的)。 ⑦异丙醇(最好用新的)。 1.4操作步骤 1.4.1Trizol法提取总RNA ①先在研钵中加入液氮，再将小麦叶片剪成小段在液氮中磨成粉末，用液氮预冷的药匙取50～100mg组织粉末加入已盛有1ml的Trizol液的EP管中（注意研磨粉末总体积不能超过所用Trizol体积的10%），充分混合均匀。 ②室温放置5min，然后加入200μL的氯仿，盖紧EP管并剧烈摇荡15秒钟。 ③12000rpm离心10min，取上层水相于一新的EP管中（千万不要将中间的沉淀层和下层液混入，否则重新离心分离），加入500μL异丙醇，温和颠倒混匀。室温放置10min，12000rpm离心10min。 ④小心地弃去上清液，加入1ml的75%乙醇，涡旋混匀，4℃下12000rpm离心5min。 ⑤重复步骤④。 ⑥弃去上清液（尽量将残余液体除去），室温或真空干燥5～10min（注意不要干燥过分，否则会降低RNA的溶解度）。用30μL DEPC处理过的水将RNA溶解，必要时可55℃～60℃水浴10min。RNA可进行mRNA分离，或贮存于70%乙醇并保存于-70℃。 [注意] ①整个操作要带口罩及一次性手套，并尽可能在低温下操作。
市政工程施工技术手册汇编
市政工程 施 工 技 术 手 册 汇 编 甘肃星利达房地产开发有限公司 二0一五年 一、沥青砼面层施工 一、铺洒沥青下封层 在准备好的干燥水泥稳定粒料基层上，采用沥青洒布机喷洒一层约1～1.3L/m2的均匀热沥青，沥青采用AH-70，沥青喷洒时应保持沥青温度在150～170℃之间。 二、铺筑沥青面层试铺路段 沥青各面层施工开工前，均需先做试铺路段。通过合格的沥青混合料组成设计，拟定试铺路段铺筑方案，试铺路段宜选在正线直线段，长度不少于200m。
试铺路段施工分为试拌和试铺两个阶段： 根据各种机械的施工能力和相匹配的原则，确定合宜的施工机械，按生产能力决定机械数量与组合方式。 通过试拌决定： 拌和楼的操作方式：如上料速度、拌和数量与拌和时间、拌和温度等。 验证沥青混合料的配合比设计，决定正式生产用的矿料配合比和油石比。 通过试铺决定：摊铺机的操作方式：摊铺温度、摊铺速度、初步振实的方法和强度、自动找平方式等。 压实机具的选择、组合、压实顺序、碾压温度、碾压速度及遍数，振动压路机对下管网影响程度等。 施工缝处理方法。 各种沥青面层的松铺系数：确定施工产量及作业段的长度，修订施工组织计划。全面检查材料及施工质量是否符合要求。 试铺段的铺筑。严格按《公路沥青路面施工技术规范》JTJ032-94及《公路改性沥青路面施工技术规范》JTJ036-98规范操作。在试铺段的铺筑过程中，工程技术人员应全过程参加，检查施工工艺、技术措施是否符合要求，测温、观色、取样，并记录试验与检测结果，检查各种技术指标情况，对出现的问题提出改进意见。各层度铺，必须力争一次铺筑成功，使试铺面层成为正式路面的组成部分，避免材料浪费。试铺段的质量检查频率应比正常时增加一倍。 三、沥青混凝土面层 1、施工前的准备工作 （一）沥青混凝土拌和站 本工程因沥青混凝土面积较小，经过成本核算分析自建沥青混凝土拌和站，成本较高。经过对市场调查分析，可采用购买商品沥青混凝土进行施工。（二）沥青混凝土施工机械的配备 在沥青混凝土路面层的施工中，起了保证机械化施工的连续性，沥青混凝土拌和设备、沥青混凝土运输车辆、沥青混凝土摊铺机的合理配备是一个关键，而面层成型的质量又于沥青混凝土拌和设备与沥青混凝土的摊铺设备的合理配置密切相关。通过计算综合考虑，拟定本项目路面面层施工机械：一台装载机，两
计算机网络实验手册2016版.
计算机网络实验指导书 海南大学信息科学技术学院信息安全系 二零一六年十月 编辑：谭毓银温德志CCIE#45288 校审：王隆娟，邢琳
目录 实验 1 常见网络设备和测试命令介绍与及双绞线制作 (1) 实验 2 Packet Track 模拟器介绍及基本操作 (26) 实验 3 IP地址分类及子网划分 (42) 实验 4 交换机的基本配置与管理 (61) 实验 5 交换机VLAN配置 (70) 实验 6 路由器的基本配置及静态路由配置 (75) 实验7 路由器RIP动态路由配置 (82) 实验8 静态NAT配置 (89)
实验1：常见网络设备和测试命令介绍及双绞线制作 实验目的：了解常见的网络设备及其特点； 了解常用网络测试命令及使用； 掌握双绞线的制作与测试； 实验器材：集线器（HUB）、交换机（SWITCH）、路由器（ROUTER）； 双绞线、同轴电缆、光纤、测线仪、压线钳、非屏蔽双绞； RJ-45水晶头。 实验内容： 1 常见的网络设备 1.1 集线器简介 集线器的英文称为“Hub”。“Hub”是“中心”的意思，集线器的主要功能是对接收到的信号进行再生整形放大，以扩大网络的传输距离，同时把所有节点集中在以它为中心的节点上。它工作于OSI(开放系统互联参考模型)参考模型第一层，即“物理层”。集线器与网卡、网线等传输介质一样，属于局域网中的基础设备，采用CSMA/CD（一种检测协议）访问方式。 集线器属于纯硬件网络底层设备，基本上不具有类似于交换机的"智能记忆"能力和"学习"能力。它也不具备交换机所具有的MAC地址表，所以它发送数据时都是没有针对性的，而是采用广播方式发送。也就是说当它要向某节点发送数据时，不是直接把数据发送到目的节点，而是把数据包发送到与集线器相连的所有节点，如图1所示。 图1-1 集线器部署图
公路项目总工程师手册
第一章概论 一、项目总工程师的职责 项目总工程师是项目经理部的技术负责人，是对全体工程技术人员进行指导、协调和组织管理的领导人员，并主持工程项目的日常技术工作。项目总工程师不仅要具备技术业务、技术管理、科技开发等工程师的基本能力，更要强调对工程项目及工程技术人员的协调、组织管理的领导能力。 项目总工程师要运用自己的专业技术知识和实践经验，解决工程项目中的日常技术问题和施工难题，搞好工程技术管理的日常业务工作，并指导技术人员搞技术创新和科技开发工作。 项目总工程师是一个技术性的行政职务，是具有工程师或高级工程师技术职称，是在项目经理领导下的分管项目技术管理工作的负责人。主要工作职责如下： 1、对项目的施工技术管理工作全面负责。贯彻执行国家有关技术政策、法规和现行施工技术规范、规程、质量标准以及承包合同要求，并监督实施执行情况。 2、组织技术人员熟悉合同文件， 领会设计意图和掌握具体技术细节，主持设计技术交底和会审签认，对现场情况进行调查核对，如有出入应按规定及时上报监理。 3、在项目经理主持下，组织编制实施性施工组织设计，施工技术方案，识别和编制关键工序、特殊工序控制清单，并制定关键工序、特殊工序控制计划。 4、组织编制关键工序、特殊工序专项施工技术方案和工艺措施，并在施工前组织有关技术人员进行全面的施工技术交底。 5、督促指导施工技术人员严格按设计图纸、施工规范和操作规程组织施工，负责技术把关控制。 6、负责研究解决施工过程中的工程技术难题。 7、领导试验检测和施工测量工作，负责对试验、测量在施工过程中发生重大技术问题时的决策或报告。 8、负责技术质量事故的调查与处理以及审核签发变更设计报告。 9、主持制定本项目的科技开发和“四新”推广项目，并组织实施。制定项目技术交流、职工培训、年度培训计划和主持有关部门开展QC小组攻关活动。 10、主持交竣工技术文件资料的分类、汇总及编制，参加交竣工验收。组织做好施工技术总结，督促技术人员撰写专题论文和施工工法，并负责审核、修改、签认后向上级推荐、申报。 11、主持对项目技术人员日常工作的检查、指导和考核。 二、项目总工程师的地位和作用 1、项目经理部领导班子的主要成员 项目经理部的领导班子是对项目履行领导职务、决定工程项目生产经营活动的集体决策机构。企业法明确规定经理（厂长）处于中心地位，而项目总工程师是全面负责项目技术工作的主要领导者，其工作范围涉及工程项目施工的各个层面、各个环节和全过程，其工作成效与工程的质量、安全、进度和经济效益有直接关系，因此，项目总工程师理应处于项目经理部决策层的主要成员地位。 科学技术是第一生产力，这在理论上和实践中已被社会所公认，依靠科技进步促进企业发展、振兴企业经济已成为企业经营者的共识，项目总工程师作为项目科技进步的主要推动者，对