单宁酶酶活力检测方法
单宁酶酶活力的检测
1引用文件
2范围
本标准适用于微生物发酵产单宁酶制剂酶活力检测
3.术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。
3.1酶活性单位定义
在30℃、pH值为5.0的条件下，每分钟降解没食子酸丙酯（PG）溶液解释放1μmol没食子酸所需的酶量定义为一个酶活力单位（U）。
4.原理
酶活力的测定采用保玉心的绕丹宁法，该法以没食子酸丙酯（PG）作为反应的底物，单宁酶分解PG产生的没食子酸可与绕丹宁在碱性条件下形成红色复合物，该复合物在520nm处有最大吸收，据此可通过测定A520的变化量来计算生成的没食子酸的量，从而计算酶活力。
5.试剂和材料
本标准中所有试剂，在没有注明其它要求时，均指分析纯试剂和符合GB/T6682中规定的二级水。
5.10.1mol/L的磷酸氢二钠：
准确称取十二水合磷酸氢二钠35.814g，加入800ml水溶解，溶解后定容至1000ml。
5.20.05mol/L的柠檬酸：
准确称取一水合柠檬酸10.507g，加入800ml水溶解，溶解后定容至1000ml。
5.1和5.2两者混匀，互调pH为5.0.
5.30.5mol/l的KOH溶液：
准确称取KOH28.055g，加入800ml水溶解，溶解后定容至1000ml。
5.40.667%（W/V）罗丹宁溶液（甲醇绕丹宁）：
准确称取罗丹宁0.667g，加入80ml甲醇溶解，溶解后用甲醇定容至100ml。
5.5没食子酸标准溶液，浓度为10mmol/l
称取没食子酸0.18813g，加磷酸-柠檬酸缓冲溶液溶解，定容至100ml。
5.6没食子酸丙酯（PG）溶液，浓度为10.0mmol/L
称取没食子酸丙酯0.2122g，再加入80ml缓冲液，磁力搅拌加热，直至完全溶解，冷却，调节pH 至5.0，并用缓冲液定容至100ml。使用前适当摇匀，4℃冷藏保存。
6.仪器和设备
6.1实验室用样品粉碎机或碾钵。
6.2分析天平：感量0.001g。
6.3pH计：精确至0.01。
6.4离心机：最大离心加速度不小于2000g
6.5磁力搅拌器：附加热功能。
6.6涡旋混匀器
6.7恒温水浴锅：温度控制范围在30—60℃之间，精度为0.1℃。
6.8秒表：每小时误差不超过5s。
6.9分光光度计：能检测350—800nm的吸光度范围。
6.10移液器：精度为1μl。
6.11冰箱
7.测定步骤
7.1没食子酸标准曲线绘制
用pH5.0的磷酸氢二钠-柠檬酸（0.1-0.05M）缓冲液配制不同浓度的没食子酸标准溶液，从40-240μmol/L 配制9个不同浓度梯度。分别取0.5ml的没食子酸标准溶液与0.3ml甲醇绕丹宁（5.4）溶液（0.667%W/V）混合，加入到所有试管中，30℃水浴5min，然后将4.2ml（0.5M）的KOH溶液加入至所有试管中，30℃保温10min。以缓冲液代替标准溶液作空白对照，于520nm处测定吸光值（A520）。
以浓度（m mol/L）为横坐标，A520为纵坐标绘制标准曲线。
没食子酸浓度（mmol/L）0.040.060.080.10.120.140.160.20.24吸光值（OD）0.1160.1580.2210.2580.3290.3850.4370.5450.649标准曲线例如，Y=2.7162X+0.0027R2=0.9995
7.2试样溶液的制备
7.2.1固体产品
称取1g样品于三角瓶中，加入50mL缓冲液，磁力搅拌30min，4000rpm离心30min，取上清用缓冲液稀释至待测酶液中单宁酶活力0.029-0.05U/ml之间，吸光值范围为0.2-0.35。
7.2.2液体产品
液体样品可以直接用缓冲液稀释至待测酶液中单宁酶活力0.029-0.05U/ml之间，吸光值范围为0.2-0.35。
7.3测定步骤
（1）反应开始前，将10mM PG溶液和待测酶液于30℃水浴中保温5-10min；
蔚蓝生物集团研发中心文件编号:VLAND/YF-JC-YB-055（2）取4支洁净的试管，1支为空白管、3支测试管。向各管中加入0.25mlPG溶液，然后向测定管中分别加入0.25ml待测酶液，30℃水浴下反应5min；
（3）向所有试管中加入0.3ml甲醇绕丹宁（5.4）溶液（0.667%，W/V），保温5min；
（4）向所有试管中加入4.2ml KOH溶液（0.5M），向空白管中加入0.25ml酶液，在30℃条件下放置10min 后，以空白管归零，于520nm处测定各管溶液吸光值。
9.试样酶活的计算
(△A520-C0)
X D=（*0.5*n）/0.25/t
K
式中：
X D—试样稀释液中单宁酶的活力，U/ml；
△A520—酶反应液的吸光度-酶空白样的吸光度；
K—标准曲线的斜率；
C O—标准曲线的截距；
1/0.25—换算成1ml酶液；
t—酶解反应时间，5min；
0.5—0.5ml酶液
n—试样的稀释倍数。
10.重复性
每个试样应取二份平行样进行分析测定，相对误差不超过8.0%，二者的平均值为最终的酶活力测定值。
单宁酶
摘要 单宁酶是一种水解酶，能水解没食子酸单宁中的酯键和缩酚酸键，生成没食子酸和其他化合物。在酶制剂工业发达的国家，如日本、美国，单宁酶的基础理论和应用研究工作开展得较早，并已在茶饮业中取得了较好的经济效益。随着国民经济的不断发展，人们生活水平的不断提高，单宁酶得到了更广泛的应用。人们已在皮革业、饲料业、化妆品业等方面开发了单宁酶的多种用途。中国是个茶叶大国，而且可开发资源丰富，单宁酶的应用前景十分广阔。 单宁酶的性质 国外对单宁酶性质的研究相对较多，也较深入，为今后的应用研究提供了有价值的参考。单宁酶的酶学性质 来源于不同菌种的单宁酶动力学性质稍有区别。Yamada H. 等报道的黄曲霉单宁酶活性稳定pH值范围最窄，为5. 0～5. 5另据韩国的Chae Soo-Kyu 等报道的曲霉菌种AN-11单宁酶活性稳定的pH值为5. 0～6. 5其他菌种单宁酶活性稳定pH 范围大都在3.0～8.0之间，最适pH值为4～6，热稳定范围在70～80 ℃以下，最适反应温度为35～ 60 ℃。日本科学家Hdeaki Yamada等就底物浓度对黄曲霉的影响进行了研究，测出Km (以单宁为底物) 为0.5×10-4 mol/L; Km (以葡萄糖212没食子酸为底物) 为1.4×10-4mol/L；Km (以没食子酸甲酯为底物) 为8.6×10-4mol/L。经6mol/L盐酸胍处理后，单宁酶将发生不可逆失活，各种金属离子以及EDTA 对酶活性影响报道结论不一。 单宁酶的物理化学性质 纯单宁酶在紫外光区280nm 处，有一个最大吸收峰，在浓度为10% ，比色皿为1 cm×1 cm 条件下，吸光系数a为11.8，260nm处吸光度与280nm处吸光度之比为0. 51。 Sadaak i Iibuchi，Chae Soo-Kyu分别用凝胶过滤法测定出它们各自选育的菌种单宁酶相对分子质量都为200 000。O sao A dachi等分别用沉降法和电泳法测定黄曲霉单宁酶相对分子质量，分别是194 000和192 000。Chantal等测出黑曲霉LCF8单宁酶相对分子质量为186 000，其等电点在4左右。Chantal和Chae Soo-Kyu在对各自提纯的酶进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析时发现，单宁酶分子由2种亚基组成，但这个结果与Kengi Aoki对酵母单宁酶结构分析的结果有所不同。后者用同样的方法，只得到一条电泳蛋白带。 O sao A dachi等进一步研究了黄曲霉单宁酶的其他结构特性，其分子中氮含量为12.9% (凯氏定氮法)，用二硝基氟苯法测氨基末端，有2个DNP-氨基酸产物，分别为DNP-丙氨酸与DNP-精氨酸,这一结果进一步指明黄曲霉单宁酶为2种亚基组成。单宁酶另一重要特征是，它为一种糖蛋白，而不同来源的单宁酶糖含量有差异。例如，黄曲霉单宁酶糖基占总相对分子质量的25% ，糖基为甘露糖。Chantal从黑曲霉中提取的单宁酶，其糖基含量高达43% ，而酵母单宁酶糖基含量为62%。Parthasarathy N. 等探明其选育的黑曲霉单宁酶碳水化合物为
Q_HYSBT003-2019猪用配合饲料
Q/ HYSBT 河源双胞胎饲料有限公司企业标准 Q/ HYSBT 002-2019 代替Q/HYSBT 003-2016 猪用配合饲料 河源双胞胎饲料有限公司发布
前言 本标准按GB/T1.1－2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则》进行编制。本标准与Q/HYSBT003-2016标准相比较，主要变化如下： ------修改了试验方法中产品水分、粗蛋白质、粗纤维、赖氨酸的仲裁方法； ------修改卫生指标仲裁方法； ------修改了仔猪饲喂阶段； ------修改了产品出厂检验项目。 本标准由河源双胞胎饲料有限公司提出并起草。 本标准主要起草人：谢正军、赵应潮、曾祥建。 本标准历次发布版本情况； ---- Q/HYSBT003-2014。 ---- Q/HYSBT003-2016。
猪配合饲料 1.范围 本标准规定了猪配合饲料的产品分类、要求、试验方法、检验规则、标签、包装、运输、贮存和保质期。 本标准适用于本公司用饲料级玉米、豆粕、鱼粉、预混料等原料，经粉碎、混合、膨化、制粒、冷却等工艺，生产、销售的猪配合饲料。 2.规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 5917. 1-2008 饲料粉碎粒度测定两层筛筛分法 GB/T 5918-2008 饲料产品混合均匀度的测定 GB/T 6432-2018饲料中粗蛋白测定凯氏定氮法 GB/T 6434-2006 饲料中粗纤维的含量测定过滤法 GB/T 6435-2014 饲料中水分的测定 GB/T 6436-2018 饲料中钙的测定 GB/T 6437-2018 饲料中总磷的测定分光光度法 GB/T 6438-2007 饲料中粗灰分的测定 GB/T 6439-2007 饲料中水溶性氯化物的测定 GB/T 14699. 1-2005 饲料采样 GB/T 18246-2000 饲料中氨基酸的测定 GB/T 18823-2010 饲料检测结果判定的允许误差 GB 10648 饲料标签 GB 13078 饲料卫生标准 GB/T 18868-2002 饲料中水分、粗蛋白质、粗纤维、粗脂肪、赖氨酸、蛋氨酸快速检测近红外光谱法。 JJF1070-2005 定量包装商品净含量计量检验规则 GB/T 16764-2006 配合饲料企业卫生规范 GB 13078-2017 饲料卫生标准饲料中赭曲霉毒素 A 和玉米赤霉烯酮的允许量 GB 13078-2017 配合饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的允许量 GB/T18634-2009 饲用植酸酶活性的测定分光光度法 GB/T5915-2008 仔猪、生长育肥猪配合饲料 国家质量技术监督检验检疫总局第75号令定量包装商品计量监督管理办法 中华人民共和国农业部公告第2625号《饲料添加剂安全使用规范》 中华人民共和国农业部2014年1号令《饲料质量安全管理规范》 中华人民共和国农业部公告第168号《饲料药物添加剂使用规范》
SOD酶活性测定方法
SOD酶活性测定 所需药品： （1）0.1mol/l pH7.8的磷酸钠缓冲液： A液：0.1mol/l磷酸氢二钠液 B液：0.1mol/l磷酸二氢钠液 1毫升B+10.76毫升A （2）0.026mol/l蛋氨酸液（Met）：现用现配 称取0.3879克蛋氨酸，用1号液定容至100毫升。 （3）75*10-5mol/l氯化硝基四氮唑蓝（NBT）液：现用现配 称取0.1533克NBT，先用少量蒸馏水溶解，然后定容至250毫升。 （4）1umol/lEDTA-2钠和2*10-5mol/l核黄素混合液 （5）0.05mol/l pH7.8的磷酸钠缓冲液 （6）石英砂 实验步骤： 1.酶液制备：称取0.5克鲜叶，放入研钵中，加入3毫升5号液和少量石英砂，于冰浴中研成匀浆。然后用5号液定容至8毫升，于0～4℃、13000g时离心15分钟，上清液即为酶提取液。酶液可在低于0℃下的环境中保存。 2.按下表加入试剂： 试剂摇匀后，迅速遮光处理1号杯，其余杯在25℃、光强为4000勒克司的条件下照光处理15分钟，然后立即遮光。接着在560nm下，以1号杯作为空白测定其余杯中溶液的光密度。假定2、3号杯中溶液抑制NBT光还原的相对百分率为100%，然后按下式分别计算其余杯中溶液抑制NBT光还原的相对百分率。 M/N=100/X M——2、3号杯中溶液的光密度的平均值 N——其余杯中溶液的光密度值 X——其余杯中溶液抑制NBT光还原的相对百分率 然后以酶液量为横坐标，以其余杯中溶液抑制NBT光还原的相对百分率（X）为纵坐标制作曲线，根据线性好的曲线所得出的函数关系计算抑制NBT光还原的相对百分率为50%时所加入的酶液量，以该酶液量作为1个酶活单位。 结果计算：SOD活力按下式计算： A=V*1000*60/（B*W*T）
酶联免疫法检测试剂注册技术审查指导原则
附件1 酶联免疫法检测试剂注册技术审查指导原则 一、前言 本指导原则主要针对酶联免疫类检测试剂的主要原材料、生产工艺及反应体系、产品质量控制等环节提出指导性技术要求。 本指导原则系对酶联免疫法检测试剂的一般要求，申请人应依据产品特性确定其中的具体内容是否适用，若不适用，需详细阐述其理由及相应的科学依据。 本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制订的，随着法规和标准的不断完善、科学技术的不断发展，其相关内容也将进行适时的调整。 二、适用范围 本指导原则适用于有关病原微生物检测的第三类体外诊断试剂的注册技术审查。其他酶联免疫法检测试剂（如作为二类管理的体外诊断试剂）可参考本指导原则执行。 三、基本要求 （一）基本原则 1.研制、生产用的各种原料、辅料等应制定其相应的质量标准，并应符合有关法规的要求。
2.试剂生产企业应具备相应的专业技术人员、仪器设备以及适宜的生产环境，获得《医疗器械生产许可证》；同时，应按照《体外诊断试剂生产实施细则（试行）》的要求建立相应的质量管理体系，形成文件和记录，加以实施并保持有效运行；还应通过《体外诊断试剂生产企业质量管理体系考核评定标准（试行）》的考核。企业应对试剂的使用范围做出明确规定，并经国家药品监督管理部门批准。 3.诊断试剂的研制应当按照科学、规范的原则，各反应条件的选择和确定应符合基本的科学原理。 4.试剂在研制、生产过程中所用的各种材料及工艺，应充分考虑可能涉及的安全性方面的事宜。 5.生产和质量控制的总体目标：保证试剂使用安全、质量稳定、工艺可控、检测有效。 （二）原材料质量控制 1.主要生物原料 与产品质量最密切相关的生物原料主要包括各种天然抗原、重组抗原、单克隆抗体、多克隆抗体以及多肽类、激素类等生物原科。这类原料可用于包被酶标反应板、标记相关酶（如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等）、中和反应用抗原或抗体、制备校准品（标准品）等。使用前应按照工艺要求对这类生物原料进行质量检验，以保证其达到规定的质量标准。主要生物原料若为企业自己生产，其工艺必须相对稳定；若购买，其供应商要求相对固定，不能随意变更供应商，如果主要原料（包括工艺）或其供应商有变更，应依据国家相关法规的要求进行变更申请。 主要生物原料的常规检验项目一般包括： （1）外观 肉眼观察，大部分生物原料为澄清均一的液体，不含异物、浑浊或摇不散的沉淀或颗粒；或者为白色粉末，不含其他颜色的杂质；特殊生
酶联免疫检测技术的应用
酶联免疫检测技术的应用 真菌毒素的检测：黄曲霉毒素 B 1 、M 1 以及T-2 毒素，脱氧雪腐镰刀菌烯醇(呕吐毒素DON )，二乙酰草镰刀菌烯醇(DAS )，玉米赤霉烯酮，赫曲霉毒素A ( OA )。 农药的检测：主要有除草剂与杀虫剂两大类，例如杀暝松( FN )、甲氟磷酸异已酶( SOMAN )、草不绿( Alachor)、西维因( Carbaryl )、多菌灵及克菌丹( Captan )等。 其他类的检测：盐酸克伦特罗，河豚毒素，植物毒素如罌粟硷、吗啡、藻类毒素，苯并( a)芘，抗生素，激素类以及一些营养物质和食品添加剂如麸蛋白( Gliaclin )，酱油蛋白( Soy protein )，花生蛋白(Peanut protein )，牛乳清蛋白( Borine Whey Protein )等。 随着食品工业的发展，对分析检测的要求越来越高，从而也使ELISA 方法将更趋完善。一方面为提高ELISA方法的灵敏度和特异性，制备单克隆抗体的技术的发展，将和ELISA 法互相结合，从而使食品卫生分析达到DNA分子结构水平，促使食品工业的健康发展。 1 放射免疫分析(RIA) 放射免疫法(Radioimmunoassay,RIA)优点是特异性强、灵敏度高、精确、简便易行。它包括以标记抗原(Antigen,Ag)为特点的放射免疫分析(Radioimmunoassay,RIA)和以标记抗体(Antibody,Ab)为特点的免疫放射分析(Immunoradiometric assay,IRMA)。前者以液相竞争结合法居多，既测大分子抗原又测小分子抗原；后者以固相法测大分子抗原为主。 最早建立的农药免疫法中，RIA占了很大比重，建立了狄氏剂、艾氏剂、2,4-D 和2,4，5-T、对硫磷和百草枯等农药的放射免疫法。但由于进行RIA需使用昂贵的计数器，存在放射性防护和废物处理等问题，其应用受到较大限制。1982年后发表的农药免疫分析文章，主要是酶免疫分析法。 2 酶免疫法(EIA) 酶免疫法(Enzyme Immunoassay,EIA)是将抗原、抗体的特异性免疫反应和酶的高效催化作用有机结合起来的一种免疫分析方法。酶免疫法的检测原理与放射免疫法类似，通过测定结合于固相的酶的活力来测定被测定物的量。用作标记物的酶有辣根过氧化物酶(HorseradishPeroxidase,HRP)和碱性磷酸酶(AlkalinePhosphatase)。酶标试剂制备容易、稳定、价廉。酶免疫分析的灵敏度接近放射免疫技术，而可借助于简单的仪器作定量测定，是目前农药监测中应用最广泛的免疫分析技术。 EIA法包括酶联免疫吸附分析法(Enzyme-Linked Immunosorbent
单宁酶酶活力检测方法
单宁酶酶活力的检测 1引用文件 2范围 本标准适用于微生物发酵产单宁酶制剂酶活力检测 3.术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1酶活性单位定义 在30℃、pH值为5.0的条件下，每分钟降解没食子酸丙酯（PG）溶液解释放1μmol没食子酸所需的酶量定义为一个酶活力单位（U）。 4.原理 酶活力的测定采用保玉心的绕丹宁法，该法以没食子酸丙酯（PG）作为反应的底物，单宁酶分解PG产生的没食子酸可与绕丹宁在碱性条件下形成红色复合物，该复合物在520nm处有最大吸收，据此可通过测定A520的变化量来计算生成的没食子酸的量，从而计算酶活力。 5.试剂和材料 本标准中所有试剂，在没有注明其它要求时，均指分析纯试剂和符合GB/T6682中规定的二级水。 5.10.1mol/L的磷酸氢二钠： 准确称取十二水合磷酸氢二钠35.814g，加入800ml水溶解，溶解后定容至1000ml。 5.20.05mol/L的柠檬酸： 准确称取一水合柠檬酸10.507g，加入800ml水溶解，溶解后定容至1000ml。 5.1和5.2两者混匀，互调pH为5.0. 5.30.5mol/l的KOH溶液： 准确称取KOH28.055g，加入800ml水溶解，溶解后定容至1000ml。 5.40.667%（W/V）罗丹宁溶液（甲醇绕丹宁）： 准确称取罗丹宁0.667g，加入80ml甲醇溶解，溶解后用甲醇定容至100ml。 5.5没食子酸标准溶液，浓度为10mmol/l 称取没食子酸0.18813g，加磷酸-柠檬酸缓冲溶液溶解，定容至100ml。 5.6没食子酸丙酯（PG）溶液，浓度为10.0mmol/L
植酸酶活性测定方法的研究进展
中国饲料2010年第20期 植酸酶广泛存在于动物、植物和微生物中，能将植酸分解为肌醇和无机磷的一类磷酸单脂水解酶。文章介绍了植酸酶活性的测定方法，除了以前的传统方法外，近10多年植酸酶活性检测出现了许多新的方法，如近红外光谱法、琼脂平板法、酶联免疫吸附法、生物传感器法、高效液相色谱法等，这些新方法为植酸酶活性测定开辟了新的检测途径。 1植酸酶活性测定方法的发展及意义 1.1植酸酶活性测定方法的发展植酸酶发现至今已经有100余年，植酸酶的研究已经取得了丰硕的成果。回顾植酸酶活性的测定方法：1925年Fiske-SubbaRow法，即钼黄法，因由Fiske和SubbaRow两人发现，所以早期钼黄法也叫Fiske-SubbaRow法；1943年Holman等发现了硫酸亚铁-钼蓝法，曾在国外许多国家发展为植酸酶测定的标准方法，至今还在许多研究中采用（Fu等，2008；Huang等，2008）；1981年Heinonen和Lahti 建立了丙酮-磷钼酸铵法。植酸酶活性的测定方法除了这些传统的方法外，近10多年来随着科学技术和检测手段的提高，植酸酶活性分析检测及标准化方面出现了许多新的方法，并颁布了新的标准，如近红外光谱法（NIR）、琼脂平板法、酶联免疫吸附法（ELISA）、生物传感器法、反相高效液相色谱法（RP-HPLC）等。 1.2植酸酶活性测定意义植酸酶没有特定光吸收波和鉴定试剂，所以植酸酶的分析和活性测定比较困难（Lasztity等，1990）。动、植物植酸酶的提取、分离纯化，微生物植酸酶菌株的筛选，基因工程植酸酶表达产物等研究中都需要测定植酸酶活性。随着植酸酶在饲料中的广泛应用，饲料管理部门、饲料质检机构、科研部门以及生产企业均面临植酸酶定量测定的工作。目前存在着植酸酶酶活单位混乱、检测手段落后，测定结果误差大等一些问题，所以规范植酸酶酶活性定义和检测方法势在必行。 植酸酶活性的定义方法主要有以下几种：（1）酶活定义为每分钟从一定浓度的植酸钠溶液中释放1μmol的无机磷为一个酶活单位。（2）酶活定义为每分钟从一定浓度的植酸钠溶液中释放1 nmol的无机磷为一个酶活单位。（3）酶活定义为每秒钟从一定浓度的植酸钠溶液中释放1nmol 的无机磷为一个酶活单位。（4）酶活定义为每小时从一定浓度的植酸钠溶液中释放1mg的无机磷为一个酶活单位。这四种定义中第一种的酶活单位最大，国外采用此种单位较多，我们称之为国际单位；第二种酶活单位是第一种的1000倍；第三种为第一种酶活单位的17倍；第四种与第一种酶活单位大小相近。 目前，植酸酶活性单位大多用FTU（fytase u-nit）表示。植酸酶样品在植酸钠浓度为5.0mmol/L、温度37℃、pH值5.50的条件下，每分钟从植酸钠中释放1μmol无机磷，即为一个植酸酶活性单位，以U表示。1994年该标准被AOAC（美国公定 植酸酶活性测定方法的研究进展 陕西理工学院陈琛 [摘要]本文综述了植酸酶的分析测定方法，包括传统的分光光度法及近年来新发展起来的近红外光谱法、琼脂平板法、酶联免疫吸附法、生物传感器法、反相高效液相色谱法等。 [关键词]植酸酶；测定方法；活性 [中图分类号]S816.17[文献标识码]A[文章编号]1004-3314（2010）20-0016-03 [Abstract]This article gave a review on determination methods of phytase activity.These methods include traditional spectrophotometry，near infrared spectroscopy，enzyme-linked immunosorbent assay，agar plate assay，biosensor method re-versed-phase high performance liquid chromatography. [Key words]phytase；method for determining enzyme activity；activity 16
酶联免疫吸附试验方法类型及反应原理
酶联免疫吸附试验方法类型及反应原理 ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体；②酶标记的抗原或抗体；③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。 （一）双抗体夹心法 双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法，操作步骤如下： （1）将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。 （2）加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时问，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。 （3）加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量成正相关。 （4）加底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。 根据同样原理，将大分子抗原分别制备固医学教丨育网整理相抗原和酶标抗原结合物，即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。 （二）双位点一步法 在双抗体夹心法测定抗原时，如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体，则在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步。这种双位点一步法不但简化了操作，缩短了反应时间，如应用高亲和力的单克隆抗体，测定的敏感性和特异性也显著提高。单克隆抗体的应用使测定抗原的ELISA提高到新水平。 在一步法测定中，应注意钩状效应（hookeffect），类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。当标本中待测抗原浓度相当高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再医学教丨育网整理形成夹心复合物，所得结果将低于实际含量。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果。 （三）间接法测抗体 间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。操作步骤如下： （1）将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原：洗涤除去未结合的抗原及杂质。
单宁酶
单宁酶及其在茶饮料中的应用 【摘要】单宁酶可水解没食子酸单宁中的酯键和缩酚羧键，主要由曲霉属等微生物发酵生产。单宁酶防止冷混浊、提高提取率、保持色泽和减轻苦涩味的作用在茶饮料工业中有广泛的应用。 【关键词】单宁酶；茶饮料；应用 单宁酶又称单宁酯酰水解酶（EC3.1.1.20），它可以水解没食子酸单宁中的酯键和缩酚羧键，生成没食子酸和葡萄糖，可广泛应用于制革、酿酒、医药、饮料等领域。 1单宁酶的性质和生产 1.1单宁酶的来源和性质 单宁酶除存在于富含单宁的植物中外，还广泛存在于微生物中。能够产生单宁酶的微生物来源十分丰富，主要是真菌类的曲霉属、青霉属和根霉属，尤其是曲霉属中的黑曲霉、米曲霉和黄曲霉；此外，酵母菌、寄生内座壳菌、巴斯德菌、茄形镰刀菌和绿色木霉等也可产生单宁酶。 单宁酶是一种糖蛋白，不同来源的单宁酶其分子量和糖链的含量有所差异，酶蛋白由2-8个单体聚合而成，糖基含量由12%到62%不等。不同来源的单宁酶温度和pH稳定性不同：最适温度较高的50-60℃，一般在30-40℃之间，热稳定范围在60-70℃以下；来源于真菌和植物的单宁酶的最适pH一般为4.0-6.0，pH稳定性范围一般是3.0-7.0之间，细菌单宁酶的最适pH一般偏中性[2]。金属离子对单宁酶活性的影响也有所不同：Libuchi S等[3]发现许多离子对单宁酶无活化作用，但Zn2+和Ca2+可抑制酶活，另外EDTA溶液会使酶完全失活，而Aoki K[4]等发现EDTA对酶活无明显影响。Rajakumar G S等[5]发现Cu2+，Zn2+，Fe2+，Mg2+均对酶活力有显著影响。郭鲁宏等[6]研究发现除了Mn2+，Zn2+抑制酶活之外，其它金属离子对酶活均无明显的激活或抑制作用。Kar B 等[7][41]研究表明Mg2+、Hg+可提高单宁酶活力， Ba2+、Ca2+、Zn2+、Hg+、Ag+会抑制酶活力，Fe3+、Co2+完全抑制酶活。 1.2单宁酶的发酵生产 单宁酶是一种诱导酶，可由微生物在单宁酸存在的条件下诱导产生的，目前对单宁酶发酵生产研究的重点多集中在曲霉和青霉上，常通过诱变育种选育和改良生产菌株以及通过优
微生物植酸酶在体外条件下活性的测定_石宝明
微生物植酸酶在体外条件下活性的测定 东北农业大学动物营养研究所 石宝明 单安山 由于添加无机磷导致粪便中磷的排出量增 多,污染水源和土壤,同时磷酸氢钙还易导致氟中 毒和其他重金属中毒,因此在饲料中添加植酸酶 代替直接添加无机磷日益受到重视。植酸酶的应 用效果,关键在于其在消化道中的活性。自然界 有许多不同的植酸酶来源,通过遗传工程技术,利 用微生物(黑曲霉—A spe rgillus nige r)发酵工程技 术生产饲用植酸酶,已成功地应用于猪和家禽中。 本试验是应用这种微生物植酸酶,以玉米、豆饼、 麦麸为植酸磷载体,模拟畜禽胃肠消化道环境,在 体外条件下测定微生物植酸酶的活性。 1 材料与方法 1.1 试验材料 微生物植酸酶,由德国BASF公司提供。 1.2 试验设计 1.2.1 时间与微生物植酸酶的活性 准确称取玉米、豆饼、麦麸各4g,固定温度为40℃,加入pH为5.5的乙酸溶液10mL和0.1g植酸酶,振荡混匀,在催化时间分别为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11h后,加入4mol/L盐酸3mL中止反应,然后置烘干箱中烘干,烘干后用TC A法测植酸磷含量,计算出植酸磷降解率。 1.2.2 温度与微生物植酸酶的活性 准确称取玉米、豆饼、麦麸各4g,加入pH5.5的乙酸溶液10mL和0.1g植酸酶,振荡混匀,在催化温度分别为25、30、35、40、45、50、55、60、65、70℃下,反应4h后加入4mol/L盐酸3mL中止反应,然后置烘干箱中烘干,烘干后用TC A法测植酸磷含量,计算出植酸磷降解率。 1.2.3 pH与微生物植酸酶的活性 准确称取玉米、豆饼、麦麸各4g,固定温度40℃,加入0.1g 植酸酶,振荡混匀,然后分别加入pH为2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0的乙酸溶 液10mL,反应4h后加入4mol/L盐酸3mL中止反应,然后置干燥箱中烘干,烘干后用TCA法测植酸磷含量,计算出植酸磷降解率。 1.3 计算方法 植酸磷降解率(%)=(催化前载体中植酸磷含量-不同催化条件下植酸磷含量)/催化前载体中植酸磷含量×100。 2 试验结果 2.1 时间与微生物植酸酶的活性 微生物植酸酶在不同催化时间下,对饲料中植酸磷的降解率见图1。 图1 不同催化时间对微生物植酸酶活性的影响 从图1可以看出,微生物植酸酶对植酸磷的降解率随着催化时间的增加而增加,在4h后为80%,在5～6h后基本完全降解。 2.2 温度与微生物植酸酶的活性 微生物植酸酶在不同温度下,对饲料中植酸磷的降解率见图2。 图2 不同温度对微生物植酸酶活性的影响 从图2中可以看出,微生物植酸酶的活性,随着温度(25～70℃范围内)的增加而增强。在pH — 23 — 2000年第15期 中国饲料DOI:10.15906/https://www.360docs.net/doc/3f11810825.html, https://www.360docs.net/doc/3f11810825.html,11-2975/s.2000.15.012
酶联免疫分析法
酶联免疫分析法 生工121 徐娜 酶联免疫分析法是目前分析化学领域中的前沿课题，它是一种特殊的试剂分析方法，是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术，特别是在食品和饲料中有毒有害物质的检测应用极为广泛。 酶联免疫分析法是把抗原抗体的免疫反应和酶的高效催化作用原理有机地结合起来的一种检测技术。该技术的原理主要有三点：第一、抗原或抗体能结合到固相载体的表面仍具有其免役活性；第二、抗体或抗原与酶结合所形成的结合物仍保持免疫活性和酶的活性；第三，结合物与相应的抗原或抗体反应后，结合的酶仍能催化底物生成有色物质，而颜色的深浅可定量抗体或抗原的含量。 酶联免疫法在医药、食品加工业、农牧渔业等领域有着广泛的应用：如乙型肝炎、莱姆病，急性心肌梗死的早期诊断，定量检测内毒素，HIV抗体初筛，SARS 病毒的快速检测；检测食品中的病毒，残留农药，微生物及其其它成分；检测香蕉有关病毒，小麦黄花叶病毒，检测水产品中氯霉素的残留量，禽脑脊髓抗体等。 一、医学临床中的应用 医学中，检测各种抗原和抗体，为临床疾病的辅助诊断和早期诊断提供了特异性、敏感性强的试验基础。 1、乙型肝炎、原发性肝癌的血清学检测：用血清学方法检测肝炎病毒的抗原或抗体，一直受到各级医疗卫生机构检验科室的高度重视。尤其是对乙型肝炎，甲型肝炎，丙型肝炎的血清学检测，更因为试剂盒的推出而得到广泛开展。上述各种肝炎病毒抗原或抗体的检测方法，绝大部分都是酶联免疫分析法。 2、简化莱姆病的诊断：由于在作出博氏疏螺旋体感染诊断前要进行双重测试，因此莱姆病的测试可能花费很长时间。采用由关键的疏螺旋体抗原决定簇构成的重组蛋白开发出一种新的酶联免疫测定方法。该测试比最常用的商业全细胞酶联免疫测定法特异，而敏感性相同，并且在20分钟就会产生结果。 3、急性心肌梗死的早期诊断：急性心肌梗死为一多发病，病情严重。目前对此病的策略是尽早的确诊并迅速积极的治疗。约有四分之一或更多的患者，在初诊时心电图并不显示典型心肌梗死心电图异常，无Q波。心肌坏死时释放出的Mb可直接快速血液循环。Mb是最早出现的心肌梗死生化标志物，但它在血中滞留时间短。为此，刘宏伟等研制出只需30分钟的酶联免疫快速法，为早期诊断心肌梗死提供了依据。 4、定量检测内毒素：临床上，细菌感染的患者常发生内毒素血症，死亡率高达20%——30%，检测标本中的LPS对早期诊断和防治有重要意义。用优化后的双抗体夹心法检测LPS敏感性为50ng/L,特异性与准确性均高于仪器比浊法和试验定性法。此为内毒素血症提供了一种简便，快速，准确，特异性的诊断参考。 5、快速检测SARS病毒：SARS病毒引起传染性非典型肺炎，发病快，传染性强。2003年4月，北京基因组研究所与军事医学科学院研制出诊断非典的酶联免疫分析法检测试剂，为控制疫情蔓延提供了新的诊断手段。 二、在食品分析中的应用 1、检测食品中的毒素：采用辣根过氧化氢酶标记高亲和力的黄曲霉素B1抗体，建立了直接竞争抑制酶联免疫快速筛选法。该法检测B1抗体的线性范围
酶联免疫法
酶联免疫吸附试验（又称酵素免疫分析法，Enzyme-linked immunoassay，简称ELISA）利用抗原抗体之间专一性键结之特性，对检体进行检测；由于结合于固体承载物(一般为塑胶孔盘)上之抗原或抗体仍可具有免疫活性，因此设计其键结机制后，配合酵素呈色反应，即可显示特定抗原或抗体是否存在，并可利用呈色之深浅进行定量分析。根据待测样品与键结机制的不同，ELISA可设计出各种不同类型的检测方式，主要以三明治法（sandwich）、间接法（indirect）、以及竞争法（Competitive）三种为主，以下为各种方法之介绍. 三明治法 常用于检测大分子抗原，一般之操作步骤为: 1.将具有专一性之抗体固著（coating）于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体 2.加入待测检体，检体中若含有待测之抗原，则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专 一性键结 3.洗去多余待测检体，加入另一种对抗原专一之一次抗体，与待测抗原进行键结 4.洗去多余未键结一次抗体，加入带有酵素之二次抗体，与一次抗体键结 5.洗去多余未键结二次抗体，加入酵素受质使酵素呈色，以肉眼或仪器读取呈色 结果 三明治法分别以两种抗体对检体中的抗原进行两次专一性辨认，因此专一性相当高，但此待测抗原必须是多价抗原，如此才可获得两种以上的专一性抗体，以分别进行夹心；而且此法需要足够的表位空间以进行抗原抗体的夹心，所以并不适用于半抗原或小分子抗原等分子量较小之标的。 间接法 间接法常用于检测抗体，一般之操作步骤为： 1.将已知之抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余之抗原 2.加入待测检体，检体中若含有待测之一次抗体，则其会与塑胶孔盘上的抗原进 行专一性键结 3.洗去多余待测检体，加入带有酵素之二次抗体，与待测之一次抗体键结 4.洗去多余未键结二次抗体，加入酵素受质使酵素呈色，藉仪器（ELISA reader） 测定塑胶盘中的吸光值（OD值），以评估有色终产物的含量即可测量待测抗原 的含量。 竞争法 竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原，其操作步骤为： 1.将具有专一性之抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体 2.加入待测检体，使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结 3.加入带有酵素之抗原，此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结，由于 塑胶孔盘上固著的抗体数量有限，因此当检体中抗原的量越多，则带有酵素之
单宁酶活性检测试剂盒说明书 微量法
单宁酶活性检测试剂盒说明书微量法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 货号：BC4075 规格：100T/48S 产品内容： 提取液：液体100mL×2瓶，4℃保存。 试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入2mL无水乙醇混匀溶解。 标准品：粉剂×1瓶，4℃保存。5mg没食子酸丙酯，临用前加入1.178mL无水乙醇充分混匀溶解，配成20μmol/mL的标准溶液。 产品说明： 单宁酶全称是单宁酯酰水解酶(Tannase，EC 3.1.1.20)，存在于富含单宁的植物，也广泛存在于微生物中，可以水解酯键和缩酚羧键，生成没食子酸和葡萄糖。 使用没食子酸丙酯（PG）作为单宁酶酶促反应的底物，其在270nn下有特征吸收峰，根据其反应前后吸光度的变化来计算单宁酶活力。 自备实验用品及仪器： 紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器、乙醇、冰和蒸馏水。 操作步骤： 一、样本处理： （1）组织：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。10000rpm4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。 （2）细胞或微生物样品的制备：先收集细胞或微生物样品到离心管内，弃上清，按照每500万细胞或微生物加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次）。10000rpm，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤： （1）紫外分光光度计/酶标仪预热30min，波长调至270nm。蒸馏水调零。 （2）将20μmol/mL的标准溶液用提取液稀释为0.05μmol/mL的标准溶液，测定其在270nm下的吸光度，记为A标准。 （3）吸取0.02mL样品于1.5mLEP管中作为对照管，沸水浴5min,冷却至常温。 （4）加样表：在1.5mLEP管中分别加入 试剂名称（μL）测定管对照管 提取液170170 试剂一1010 样品2020（已灭活）40℃水浴反应10min后马上沸水浴5min，冷却后常温10000rpm离心10min，取上清。 在微量石英比色皿/96孔UV板中分别加入下列试剂： 上清液1010 提取液190190充分混匀后测定270nm下的吸光度，分别记为A测定管、A对照管，计算ΔA=A对照管-A测定管。 三、单宁酶活力计算： 1、按蛋白浓度计算： 单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟减少1nmol PG的酶量定义为一个酶活性单位。 单宁酶（U/mg prot）=ΔA÷（A标准÷C标准）×1000×F×V酶促÷（V样品×Cpr）÷T =1000×ΔA÷A标准÷Cpr 2、按样本鲜重计算： 单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟减少1nmol PG的酶量定义为一个酶活性单位。 单宁酶（U/g鲜重）=ΔA÷（A标准÷C标准）×1000×F×V酶促÷（V样品×W÷V提取）÷T =1000×ΔA÷A标准÷W 3、按细胞或微生物个数计算： 单位的定义：每104个细胞或微生物在反应体系中每分钟减少1nmol PG的酶量定义为一个酶活性单位。 单宁酶（U/104cell）=ΔA÷（A标准÷C标准）×1000×F×V酶促÷（V样品×500÷V提取）÷T
植酸酶活力的测定方法及应注意问题(精)
科技信息 植酸酶是催化植酸及植酸盐水解成肌醇与磷酸的一类酶的总称 [1]。植酸酶是一种胞外酶 [2], 广泛存在于自然界中, 植物、动物、微生物均可产生植酸酶。植酸酶的活性因来源不同而有差异。 植酸酶能将肌醇六磷酸 (植酸分解成为肌醇和磷酸。植酸酶可以专一性地水解植酸中的磷酯键, 使磷酸游离出来, 植酸酶将植酸分子上的 磷酸基团逐个切下, 形成中间产物肌醇五磷酸、肌醇四磷酸、肌醇三磷酸、肌醇二磷酸、肌醇一磷酸、终产物为肌醇和磷酸 [3] 。植酸酶的作用机理见图 1。 图 1植酸酶的作用机理 1. 植酸酶酶活力测定的意义酶活力也称酶活性, 是指酶催化一定化学反应的能力, 用在一定条件下, 酶所催化某一反应的速率表示。酶活性是研究酶的特性, 分离纯化以及酶制剂生产和应用时的一项不可缺少的指标。 酶活力单位是以酶活力为根据而定义的。国际生化协会酶委员会规定, 1min 内将1μmol 的底物转化为产物的酶量定为 1个单位,称为标准单位, 同时规定了酶作用的条件。因标准单位在实际应用时不够方便, 故在生产上往往根据不同的酶, 制定各自不同的酶活力单位。在测定酶活力时, 对反应温度、 pH 、底物浓度、作用时间都有统一规定, 以便同类产品互相比较。但是酶活力单位并不能直接反映酶的绝对数量, 只不过是一种相对比较的依据 [4]。 植酸酶活性的定义为:在最适宜条件下, 每分钟从一定浓度的植酸钠溶液中释放1μmol 的无机磷所需要的酶量为一个酶活力单位。确定植酸酶的酶活, 可以提高实验的标准性和效率。
2. 植酸酶活力测定的原理及方法 酶活力测定的原理都是利用酶水解植酸钠形成无机磷,然后测定无机磷的释放量。 植酸酶活性的测定方法较多 , 但至今尚没有被世界普遍公认的植酸酶的定量分析方法。方法包括:钒 -钼酸铵法、硫酸亚铁 -钼蓝法、 Vc-钼蓝法、丙酮 -磷钼酸铵法、微板法和微量比色法等 [5]。可根据实验需要选择不同的方法。 2.1钒 -钼酸铵法 该方法是利用植酸酶可以水解植酸磷释放出无机磷的原理。通过加入酸性钼-钒试剂使水解反应停止 , 同时与水解释放出来的无机磷产生颜色反应 , 形成黄色的钒钼磷络合物 , 在 415nm 波长下测定磷的含量。以标准植酸酶为参照物 , 间接计算被测样品中植酸酶的含量。本法于 1994年列入 AOAC, 我国也已将此法的测定结果作为审批商品植酸酶注册许可证和验收进口产品的法定商检依据。 2.2硫酸亚铁 -钼蓝法 该方法利用植酸酶可以水解植酸磷释放无机磷的原理 , 通过加入三盐酸使水解反应停止 , 然后加入钼酸铵及 FeSO 4·7H 20的混合液使溶液显色 , 在 720nm 波长下测定其吸收值 , 以标准酶为参照物 , 间接计算被测样品中植酸酶的含量。 2.3Vc-钼蓝法 该方法是利用植酸酶可以水解植酸磷释放无机磷的原理 , 通过加入三氯乙酸使反应停止 , 然后加入钼酸铵与 Vc 的混合液 , 使溶液显色 , 在 820nm 波长下测定吸光度 , 再以标准磷溶液的吸光度及磷溶液浓度对应的酶活单位建立直线回归方程 , 最后以待测样品吸光度代入方程 , 计算出酶活性。 2.4丙酮 -磷钼酸铵法
植物五种酶活性检测方法
植物五种酶活性检测方法(总 2页) -CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1 -CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除
选择茶树不同品种，每个茶枝接种5头叶蝉，按不同的时间点 (0h/6h/12h/18h/24h/36h/48h/72h/96h)取样，每个样品重复三次，测定 PPO/POD/PAL/CAT/LOX 五种酶活。 1、多酚化酶（Polyphenoloxidase，PPO）活性的测定 适量茶鲜叶（3g）,料液比1:2，加入内含5%PVP（w/v）经遇冷的pH为7.2的柠檬酸-磷酸盐缓冲液（0.1mol/L）,冰浴研磨，隔夜浸提12h，于4℃、9000r/min离心35min，取上清液，过滤得到初酶液。 取200ml初酶液，加入0.1mol/L柠檬酸-磷酸盐缓冲液(pH5.6)200uL,混合反应液1.2ml（0.1mol/L柠檬酸-磷酸盐缓冲液：0.1脯氨酸：1%邻苯二酚 =10:2:3），反应30min（37℃恒温水浴锅），6mol尿素1.2ml终止反应， 460nm波长测吸光度。对照为不加邻苯二酚的反应混合液。 酶活性单位：本实验条件下，以邻苯二酚反应液在460nm处吸光度值每分钟增加0.01为一个活性单位。 2、苯丙氨酸解氨酶（Phenylalanineammonialyase，PAL）活性的测定 称取新鲜样品0.5g于预冷研钵中，加入6ml 0.1mol/L（pH8.8）硼酸钠-硼酸缓冲液，加入适量的石英砂，冰浴研磨后转入离心管中。混匀后在4℃冰箱中浸提4h。4℃10000r/min离心20min，取上清液即为酶提取液。 取酶提取液0.2ml，加入由硼酸钠缓冲液配制的0.1mol/L L-苯丙氨酸，2.8ml蒸馏水，摇匀，在40℃水浴上反应30min，冰浴中终止反应，测定OD290值，以相同体积缓冲液代替酶液进行同样的反应为对照。PAL的酶活性以每小时在290nm处吸光度变化0.01OD为一个活力单位。 3、脂氧合酶(linoleate:oxygen oxidoreductase，LOX)活性的测定 取0.2g新鲜样品，加7ml经4℃预冷的1mol/L（pH7.6）的tris-HCL缓冲液冰浴上研磨。4℃、12000r/min离心25min,上层清液即为LOX酶提取液。 Lox酶活性单位以每分钟在234nm处吸光度变化0.01OD作为一个活力单位。 4、过氧化物酶（PDA）的活性测定（愈创木酚法）
抗链球菌溶血素“O”IgG IgM抗体检测试剂盒(酶联免疫法)产品技术要求limi
抗链球菌溶血素“O”IgG/IgM抗体检测试剂盒（酶联免疫法） 适用范围：用于体外定性检测人血清中的抗链球菌溶血素“O”IgG/IgM抗体水平。 1. 产品型号/规格及其划分说明 1.1 产品规格 48人份/盒 1.2 组成及成分 表1. 抗链球菌溶血素“O”IgG/IgM抗体检测试剂盒（酶联免疫法）组成成分
2．性能指标 2.1 外观 2.1.1 试剂盒各组份齐全、完整。标识应清晰、易识别。液体试剂透明、无渗漏、无沉淀或絮状悬浮物。 2.1.2 抗原包被板包装袋应密封性好，无破损、无漏气现象。 2.2 净含量 各液体组份的净含量不少于标示值。 2.3 临界值 2.3.1 对ASO IgG临界值阳性参考品（A值为0.35）检测，检测次数≥20，结果的阳性率应≥95%。 2.3.2 对ASO IgG临界值阴性参考品（A值为0.15）检测，检测次数≥20，结果的阴性率应≥95%。 2.3.3 对ASO IgM临界值阳性参考品（A值为0.35）检测，检测次数≥20，结果的阳性率应≥95%。 2.3.4 对ASO IgM临界值阴性参考品（A值为0.15）检测，检测次数≥20，结果的阴性率应≥95%。
2.4 S/CO值重复性 2.4.1 对ASO IgG重复性参考品（A值为0.60）检测20次，变异系数CV≤15%。 2.4.2 对ASO IgM重复性参考品（A值为0.60）检测20次，变异系数CV≤15%。 2.5 批间差 抽取三个批次的试剂盒，每个批次80人份，按2.3项临界值的要求检测，各浓度反应结果应一致。 2.6 效期稳定性 试剂盒在规定的贮存条件下保存至有效期末或超过有效期二周内进行检测，检测结果应符合2.3、2.4项的要求。
的酶制剂标准大全
史上最全的酶制剂标准大全 北京卫诺恩生物技术有限公司技术部王合亮 为满足广大酶制剂相关工作者工作中对酶制剂相关标准的需求，卫诺恩技术部特别整理了酶制剂相关的国家标准、行业标准、轻工行业标准、地方标准、企业标准，特汇编如下，时间截至2015年9月的所有国内酶制剂相关标准，方便大家检索。 目录 中华人民共和国国家标准生物催化剂酶制剂分类导则GBT 20370-2006 中国人民共和国国家标准食品加工用酶制剂企业良好生产规范GBT 23531-2009 中华人民共和国国家标准食品安全国家标准食品工业用酶制剂GB 25594-2010 中华人民共和国农业行业标准饲料用酶制剂通则NY/T 722-2003 中华人民共和国轻工行业标准工业酶制剂通用检验规则和标志、包装、运输、贮存QB/T 1804一1993 浙江省地方标准饲料添加剂饲料用复合酶制剂DB33/T 459—2003 中华人民共和国轻工行业标准工业酶制剂通用试验方法QB/T 1803一1993 进出口标准进出口食品添加剂检验规程第12部分：酶制剂SNT 2360.12-2009 中华人民共和国国家标准饲用植酸酶活性的测定分光光度法GB/T 18634-2009 中国人民共和国地方标准饲料添加剂葡萄糖氧化酶的测定DB13/T 1444-2011 中国人民共和国国家标准饲料添加剂木聚糖酶活力的测定分光光度法GBT 23874-2009 中华人民共和国国家标准α-淀粉酶制剂GBT 24401-2009 中华人民共和国国家标准食品添加剂α-淀粉酶制剂GB 8275-2009 中华人民共和国轻工行业标准食品添加剂真菌α-淀粉酶QB2526一2001 中华人民共和国轻工行业标准耐高温α一淀粉酶制剂QB/T 2306一1997 中华人民共和国国家标准粮油检验谷物及其制品中α-淀粉酶活性的测定比色法GBT 5521-2008 中华人民共和国国家标准谷物和谷物产品α-淀粉酶活性的测定比色法GB/T 5521-89 中华人民共和国国家标准小麦粉破损淀粉测定法α-淀粉酶法GB/T 9826-88 中华人民共和国国家标准蜂蜜中淀粉酶值的测定方法分光光度法GB/T 18932.16-2003 中华人民共和国国家标准食品添加剂糖化酶制剂GB 8276-2006 中华人民共和国行业标准食品添加剂果胶酶制剂QB 1502-92 中国人民共和国国家标准饲用纤维素酶活性的测定滤纸法GBT 23881-2009 中华人民共和国农业行业标准饲料添加剂纤维素酶活力的测定分光光度法NY/T 912-2004 中华人民共和国轻工行业标准纤维素酶制剂QB 2583-2003 中国人民共和国国家标准脂肪酶制剂GBT 23535-2009 中华人民共和国国家标准粮油检验粮食、油料的脂肪酶活动度的测定GBT 5523-2008 中国人民共和国国家标准饲料添加剂酸性、中性蛋白酶活力的测定分光光度法GB/T 28715-2012 中国人民共和国国家标准蛋白酶制剂GBT 23527-2009 中华人民共和国轻工行业标准洗涤剂用碱性蛋白酶制剂QB 1806一1993 中华人民共和国轻工行业标准工业用蛋白酶制剂QB 1805.3-93