lncRNA研究策略之：RNA Pull Down实验技术
【实验技巧】lncRNA研究策略之：RNA Pull Down实验技术
lncRNA研究策略之：RNA Pull Down实验技术
RNA pull-down是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验手段之一。RNA pull-down使用体外转录法标记生物素RNA探针，然后与胞浆蛋白提取液孵育，形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链亲和素标记的磁珠结合，从而与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后，通过Western Blot实验检测特定的RNA结合蛋白是否与RNA相互作用。
1) lncRNA筛选：
通过lncRNA芯片或RNA测序等方法对多对疾病模型和对照样本组织进行lncRNA表达谱分析；通过生物信息学的方法筛选出具有表达差异的lncRNA，构建共表达网络，预测lncRNA的靶基因；
通过PCR或Northern Blot技术对候选lncRNA验证，确定其表达差异。
2) lncRNA确定：
通过5' RACE获取lncRNA 5'全长，3' RACE获取lncRNA3'全长，最终拿到完整的lncRNA序列。
3) 表达分析：
细胞水平表达：在细胞水平进行检测表达差异。
组织分布：检测不同组织、不同阶段表达特性。
表达水平动力学变化：比较不同处理条件下，如药物处理、诱导处理下，表达水平差异。
4) 功能研究：
功能获得性研究：构建lncRNA过表达载体:原则上是将全长lncRNA定向克隆到表达载体上实现lncRNA的过表达。然而有些lncRNA很大或全长尚未分离，这时将视lncRNA在基因组上的定位采取不同的研究策略。
功能缺失性研究：可通过siRNA、shRNA、反义核酸等方法沉默lncRNA，干预lncRNA后检测其对疾病相关基因表达的影响和对细胞表型如增值、凋亡、侵袭、转移等的影响；
采用RNA pull down、RNA-RIP(RNA Binding Protein Immunoprecipitation)、
ChIRP-seq(Chromatin Isolation by RNA Purification)等方法检测与lncRNA结合的DNA、RNA、蛋白质。
采用lncRNA芯片分析技术结合mRNA对lncRNA功能进行预测，研究lncRNA trans和cis作用机制。
采用配体指数级富集系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment，SELEX)，设计一种RNA配体，与癌症相关的lincRNA结合达到抑制肿瘤细胞的生长和转移。
采用快速预测RNA与蛋白质相互作用与结构域（catRAPID）在线算法来预测RNA与蛋白质的相互作用，该算法根据RNA和蛋白质的二级结构、氢键和分子作用力来评估它们之间的相互作用的倾向。
采用非编码RNA沉默和定位分析（c-KLAN）技术对lncRNA进行功能缺失（Loss-of-function）研究和细胞定位，该技术是在基于核糖核酸内切酶制备的小干扰RNA（esiRNA）和荧光原位杂交（FISH）2种现有的研究方法的基础上建立起来的。
5) 表达调控：将lncRNA表达与其他领域相结合，解释lncRNA调控机理。
DNA甲基化：可通过检测相应基因甲基化差异与lncRNA结合分析。
转录因子：研究lncRNA与转录因子的调控机制。
染色质重塑：lncRNA表观调控。
一.质粒转化、涂板、摇菌
1.取JM109感受态细菌80μl，加入1.5mlEP管中，用10μl枪头沾取质粒加入上述EP管中，混匀。
2.冰上静置30min。
3.42℃热休克90-120s。
4.迅速移至冰上静置2min。
5.在超净台内，于上述EP管中加入50μlLB培养基（Amp－），37℃，160rpm摇床，增菌0.5-1h。
6.菌液4,000rpm离心10min，弃大部分上清，将沉淀重悬，菌液全部加入LB平板（Amp+）上，涂布均匀，37℃倒置培养（过夜12-15h）。
7.将37℃培养（12-16h）平板取出，于无菌操作台中挑取单克隆放入内含5mlLB培养基（Amp+）的15ml离心管中，于37℃、250rpm摇床增菌过夜18H,看菌液是否浑浊。菌液浑浊后进行质粒中提。
二.质粒中提（TIANGEN，DP107-02）
1.柱平衡：向吸附柱CP3中（吸附柱放入收集管中）加入500μl的平衡液BL，12,000rpm离心1min，尽量吸除上清。
2.取1.5ml过夜培养的菌液，加入离心管中，使用常规台式离心机，12,000rpm离心1min，尽量吸除上清。
3.向留有菌体沉淀的离心管中加入250μl溶液P1使用移液器彻底细菌沉淀。
4.向离心管中加入250μl溶液P2，温和的上下翻转6-8次使菌体充分裂解。
5.向离心管中加入350μl溶液P3，立即温和的上下翻转6-8次，充分混匀，此时将出现白色絮状沉淀，12,000rpm，离心10min，此时在离心管底部形成沉淀。
6.将上一步收集的上清液用移液器转移到吸附柱CP3中，12,000rpm，离心30-60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中。
7.向吸附柱CP3中加入500μl去蛋白液PD，12,000rpm离心，离心30-60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3重新放回收集管中。
8.向吸附柱CP3中加入600μl去蛋白液PW，12,000rpm离心，离心30-60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3重新放回收集管中。重复一次。
9.将吸附柱CP3重新放回收集管中，12000rpm离心2min。
10.将吸附柱CP3置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位滴加50μl洗脱缓冲液EB，室温放置2min，12,000rpm离心2min，将质粒溶液收集到离心管中，放冰盒，测浓度。
三.质粒线性化：
本实验使用的酶为Biolabs的重组酶KpnⅠ。
酶切后进行跑胶。
四.琼脂糖凝胶电泳
1.配胶。成分：琼脂糖粉、TBE、ⅠH2O，少量EB。
2.TBE与H2O混合加入放好琼脂糖粉的锥形瓶中，摇匀，放入微波炉加热1-2min。
3.滴加少量EB，于锥形瓶中摇匀。
4.倒入胶板中，插入梳子，待琼脂糖凝固。
5.小心拔掉梳子，取10μl样品加入1μl的10×LoadingBuffer缓缓加入点样孔，并在最右边的点样孔加5μlDNAmaker。
6.接通电源。
7.电泳完毕，关闭电源。从胶模中取出琼脂糖凝胶，于紫外灯下切下目的条带。
五.胶回收（TIANGEN，DP214-02）
1.向吸附柱CB2中加入500μl平衡液BL，12,000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
2.将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下放入干净的离心管中，称取重量。
3.向胶块中加入等倍体积溶液PC，50℃水浴放置10min左右，其间不断的上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解。
4.将上一步所得溶液加入一个吸附柱CB2中12,000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB2放入收集管中。
5.向吸附柱CB2中加入600μl漂洗液PW，12,000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB2放入收集管中。
6.重复操作步骤⑤。
7.将吸附柱CB2放入收集管中，12,000rpm离心2min，尽量除去漂洗液。将吸附柱置于室温放置数分钟，彻底晾干。
8.将吸附柱CB2放入一个干净的离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加适量的洗脱缓冲液EB，室温放置2min，12,000rpm离心2min，收集DNA溶液。
六.转录以及生物素标记：
1.取无RNA酶管，按下表操作：
2.取出孵育好的EP管，加入2μl的DNaseⅠ，37℃孵育15min以除去体系中的DNA。
3.取出上述操作的EP管，加入2μl0.2MEDTA（pH=8.0）终止反应。
4.取1μgBiotin标记的RNA，加入适量StructureBuffer,使得RNA形成二级结构。然后将RNA95℃加热2min，冰浴3min，室温静置30min。
5.磁珠准备：使用RIPWashBuffer500μl冲洗磁珠3次。
6.用50μlRIPWashBuffer重悬磁珠，然后将其加入到生物素标记并变性的RNA中，4℃过夜。
7.过夜的混合物3000rpm离心1min，去上清。
8.RIPWashBuffer冲洗3次，切记将液体沿壁加入或者滴加，上下缓慢翻转混匀，切勿用移液器吹打。
9.往磁珠-RNA混合物中加入细胞裂解液，裂解液中加入适量RNase抑制剂，室温放置1h。
10.将孵育好的磁珠-RNA-蛋白混合物低速离心，上清回收，使用RIPWashBuffer冲洗3次，1次1ml。
11.于样品中加5×SDS上样缓冲液，95℃变性10min，跑SDS-PAGE凝胶。
12.考染：取出SDS-PAGE凝胶于考马斯亮蓝染色液中，摇床过夜。次日用考马斯亮蓝脱色液脱色1~2h，中间更换几次脱色液至条带清晰，背景低为止。
13.将目的条带切下送测序(质谱检测)。
问题1：RNA降解
可能原因：
1）无核酸酶的环境被破坏
2）体外转录的RNA探针降解
解决办法：
1）清洗和使用新开的离心管和试剂等
2）RNA探针合成后，电泳检测其长度和浓度
问题2：RNA结合蛋白的亲和力不够：
可能原因：
1）结合缓冲环境没有优化
2）裂解不完全
3）磁珠用量不足
4）RNA探针用量不足
解决办法：
1）优化孵育时间、温度、盐浓度等条件
2）增加裂解液和蛋白上样量的比例
3）增加裂解液
4）增加磁珠用量
5）增加探针用量
6）确定生物素和链霉亲和素效率
问题3：RNA结合蛋白没有结合
可能原因：
1）靶蛋白量不足
2）缓冲体系不对
3）RNA探针和蛋白的亲和力本来就低
解决办法：
1）增加上样蛋白量
2）应用低盐体系
3）加入交联试剂
问题4：结合的非特异性高
可能原因：
1）缓冲环境没有优化
2）缓冲环境严谨性低
3）样品没有裂解完全和裂解体系没有优化
解决方法：
1）优化孵育时间温度盐浓度等条件
2）使用严谨性高的缓冲体系
3）调低RNA探针和样品的比例
4）提高裂解液的量
问题5：WB信噪比高
可能原因：
1）阳性信号率低
2）一抗效率低
3）蛋白没有充分溶解
解决方法：
1）增加二抗的量
2）用敏感度的化学发光液
3）用细胞裂解液预孵一抗
4）增加样品的量
5）确定有没有其他可能的结合情况
6）增加裂解液用量
lncRNA作用机制
lncRNA 在肿瘤中的研究现状 长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA)是一类转录本长度超过200nt、不编码蛋白的RNA，这类RNA起初被认为是基因组转录的“噪音”，随着2007年Hotair功能的被发掘，lncRNA的功能渐渐明晰。据计算，约有93%的转录本为lncRNA1，lncRNA通常位于细胞核和细胞质。但是lncRNA的基因转录水平一般低于蛋白质编码基因，序列保守性差，承受的进化压力小，但promoter序列通常比较保守。lncRNA与小分子RNA相比，序列更长、空间结构也较为复杂，参与表达调控的机制也更具有多样性和复杂性。尽管目前只有一小部分lncRNA的功能有相关报道，但可以明确的是lncRNA参与发育、分化、代谢等多方面的调控。lncRNA能在表观遗传2、转录3及转录后4水平调控基因表达，参与X染色体沉默、基因组印记以及染色质修饰、转录激活与抑制、核内运输等多种重要的调控过程，与人类疾病的发生、发展和防治都有着密切联系。 研究表明，lncRNA的异常表达与肿瘤的诊断、复发及转移相关5。lncRNA 以外泌体的形式分泌到细胞外，体液中的lncRNA具有作为生物标志物的潜能，指示肿瘤的进展与恶性程度，指导个性化治疗。PCA3是一个前列腺癌特异表达lncRNA，在前列腺癌患者尿液中异常升高，已经用于临床前列腺癌诊断6。血浆中稳定存在的lncRNA也有作为生物标志物的潜能，比如胃癌患者血浆中lncRNA H19显著升高7。在临床，相同癌症患者接受相同的治疗方式，但往往会表现出不同的临床后果，lncRNA的差异表达是造成这一现象的原因之一8。癌组织中lncRNA的异常表达通常与转移及预后较差相关。在胰腺癌中lncRNA HULC表达异常升高，其异常高表达与肿瘤体积、高级别的淋巴结转移与血管浸
个人课题研究的方法与策略
个人课题研究的方法与策略（转发） 一、对个人课题的认识 1．个人课题的定义 个人课题是以教师个人为研究主体的课题，相对于过去国家级、省、市区级课题及学校课题在内的“集体课题”不同。个人课题研究主体就是教师个人，而非集体。 2．个人课题与集体课题的区别 集体课题群策群力，人多智慧大，能解决重大问题，支撑办学目标，形成办学特色等；但集体课题协调困难，缺乏针对性。关键是对教师个人专业成长没有太多作用(评职称作用不大)，因而参与程度不高，而个人课题由个人承担，具有灵活性，有利于行动研究；特别是课题源于教师个人的教育教学实际问题，具有很强的针对性、实用性，对教师专业化成长极为有利。 二、研究的方法与策略 1．选题要“小”，切口要“巧”。 适合自己“个人课题”选题要注意三点： 一是选题具有针对性。针对自己教育教学的实际问题，来源于自己的教育教学实践。 二是切口要小巧。一个小问题、一个现象、一个学生、一种方法、一次活动等，均可成为“个人课题”。 我今年研究的个人课题是《基于自主性教学范式的个案研究》，去年研究的个人课题是《探究性教学范式的个案研究》，两个课题都是个案，因为根据本人的实际情况，理论专业知识不很精深，因而选择课题一定要小，要从小的角度、从身边教学中去发现，寻找研究的内容。 三是内容要适合自己。题目再好，但如果不是自己专长，不是自己喜爱，也难以研究。 自主性教学与探究性教学都是当前新课改理念集中强调的观点，是相对于当前教学中传统教学方式的一种革命。因此，本人觉得研究这样的课题，确实是身边教学中普遍存在而又令人困扰的难题，如何在教学中将这两种新的学习方式让学生真正学会乃至真正转变，尤其是在地理教学中实现转变，肯定会是一个大的突破。 2．弄懂课题研究的方向。 课题的界定在课题研究中相当重要。弄懂课题主要关键词，也就是抓住课题研究的方向，对结题至关重要。 《基于自主性学习的教学范式的个案研究》关键词在“自主性学习的教学范式”与“个案”二者的结合，因为本人研究的学科领域是地理教学，因而在课题界定中，不仅要阐明自主性学习、基于自主性学习的教学、基于自主性学习的教学模式三者之间的逻辑关系，更主要突出说明个案研究是在地理教学中的个案研究，不在其他领域，这样研究的方向就明确了。 探究性教学强调的是在教学过程中，学生学习的过程不仅是一个接受知识的过程，也是一个发现问题、分析问题、解决问题的过程。而现在单指利用探究性教学的范式，在地理教学中引导学生发现问题、分析问题、解决问题的范畴。 “探究式教学范式的个案研究”就是指课堂教学中，在地理课堂教学过程中利用探究式教学范式所组织的教学，在此过程中形成的个案的研究。 依据一：探究性学习理论。美国著名科学家，芝加哥大学教授施瓦布提出“学生的学习过程与科学家的研究过程本质上是一致的，即学生在学习过程中去发现问题、解决问题，并在探究过程中获取知识，培养能力特别是创新能力”，“探究性学习”强调科学概念、科学方法、科学态度三者的综合和对科学研究过程的理解，其基本思想是让学生“重在发现”和“重新组合”知识的过程中学习，充分发展学生的好奇心，培养学生探究科学的兴趣和能力。 依据二：教育学、心理学相关的认知理论。 教学中，学生对知识的感知过程是一个由浅及深，由易而难的过程，探究性学生以接受性学习为基础，帮助学生体验知识获得的过程，体验科学研究的过程和方法，促进学生对知识的意义建构和迁移，提高学生综合能力和科学素养。 基于自主性学习的教学，是作为一种教学活动而存在。在教学活动中，教师依据一定的教
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一文参透：l n c r n a研究思路、模式和数据 库应用
一文参透：lncRNA研究思路、模式和数据库应用... 作者：解螺旋.老谈 导语当很多小伙伴还徘徊在miRNA时，lncRNA已经横空出世，还没得来得及反应过来lncRNA到底是怎么回事时，circRNA又开始崭露头角了。科研就是这样，你落后一步，便步步落后，跟娶媳妇生孩子是一样一样的。说回正题，应部分解螺旋粉丝的要求，今天老谈帮大家整体梳理了曾经红极一时、目前热度不减的IncRNA的研究思路和模式以及相关工具，希望能对那些想在IncRNA研究上有所作为的小伙伴能助上一臂之力。lncRNA研究思路IncRNA参与了X染色体沉默、基因组印记以及染色质修饰、转录激活、转录干扰、核内运输等多种重要的调控过程。很多人看到lncRNA的热度还没有过去，经常会问老谈如果没有相关的工作基础，如何开始lncRNA的研究?今天我们就褪去虚伪外衣，研究的大方向是这样子的： 1. 寻找到lncRNA分子 2. lncRNA分子表型研究 3. lncRNA 通过何种机制调节表型？ 老谈将这些研究方向及实验手段按层次的方式绘成流程图，如下所示：首先，是样本的准备与收集。高质量的样本是实验结果具有可靠性的前提。
其次，是lncRNA检测。可以先通过芯片的方式高通量筛选到目的基因，然后通过q-PCR或Northern blot的方法验证所得到的芯片结果。 再次，其研究方向根据研究目的而定。如果是研究生物标志物，那么可以通过收集更多的临床样本，研究lncRNA对疾病的指示作用。如果是研究其功能，则是研究其细胞表型、分子表型及机制。 小伙伴们是不是觉得这和miRNA的总体研究思路相似呢？这时可以根据各自的实验平台条件选择相应的研究。值得注意的是，lncRNA的功能研究并不像miRNA一样通过3’UTR影响翻译套路，总的来说lncRNA机制研究套路还不成熟。对于很多科研工作者而言，lncRNA分子的获得及其细胞表型的获得并非难事，关键在于如何进行下一步研究，这时候就要涉及到对功能研究的定位。归纳如下：lncRNA的功能分为3方面: 1. 通过修饰染色体参与表观调节； 2. 通过与转录因子的相互作用参与转录调节； 3. 通过影响mRNA处理过程参与转录后调节。在以上3个方向的研究中，其中转录后调节相对简单，大家在选择lncRNA的时候，可以对其序列做一下分析，看看自己研究的lncRNA是作为miRNA的sources还是sinks？
网络环境下信息技术学科教学策略探究
网络环境下信息技术学科教学策略探究
多媒体网络教学环境下小学信息技术课教学策略浅探 ——平顶山市新华区新新街小学郭英豪【内容摘要】 信息技术教育要适应新课程的要求，适应社会的要求，这就要求教师具有先进的教学理念、正确的方法，以此来引导学生有效利用资源，培养学生自主学习能力、实践能力、创新能力。充分利用现代教育技术构造一个网络环境下的自主学习方式充分地体现了这一点，它在理论依据的依托下给出了网络环境下自主学习的方式以及利用网络学习的途径，并以实践中的教学实例加以说明，它在信息技术教学中有着非常实用的价值，同时极大地促进了信息技术教学，给学习提供了更广阔的学习空间。 【关键字】 现代教育技术;多媒体；网络;自主学习 【正文】 随着社会的发展，生活中信息、网络的应用无所不在，同时新课程的改革促进了信息技术的运用，那么如何更好地利用好现有的网络环境高效地学习信息技术，培养学生良好的信息素养，把信息技术作为支持终身学习和合作学习的手段，为适应信息社会的学习、工作和生活打下必要的基础，这是我们每个老师都应思考的新问题。为此我们在日常工作中结合网络环境及信息学科的特点做了如下的尝试： 一、网络环境下信息技术学科的特点： 学校里学生所处的网络环境主要包括多媒体网络教室环境、校园网环境和Internet环境等。网络环境下的信息技术学科教学有着它的独特的一面：它肯有：工具性、实践性、交互性、多媒体化、信息化和网络化以及六创造性等特点 基于以上特点，如何在网络环境下更好进行信息技术课的教学，利用网络环境开展学生自主性学习，让学生自主唤醒和激发主动参与的意识，训练掌握认知策略，发挥选择性、能动性、积极性和创造性。 二.网络环境下自主学习的方式 （一）基于游戏的自主学习方式 基于游戏的自主学习方式，是针对相对低的年级的学生在教师指导下，以游
课题研究的方法和策略
课题研究的方法和策略 课题名称就是课题的名字。这看起来是个小问题，但实际上很多人写课题名称时，往往写的不准确、不恰当，从而影响整个课题的形象与质量。这就是平常人们所说的“只会生孩子，不会起名字”。那么，如何给课题起名称呢？ 名称要准确、规范。 准确就是课题的名称要把课题研究的问题是什么，研究的对象是什么交待清楚，比如我们现在有一个课题名称叫“佛山市教育现代化进程研究”，这里面研究对象就是佛山市，研究的问题就是教育现代化问题。有时候还要把研究方法写出来，比如鸿业小学的“小学生心理健康教育实验研究”，这里面研究的对象是小学生，而不是中学生或者大学生，研究的问题的心理健康教育，研究的主要方法是实验研究，这就说的很清楚，别人一看就知道这个课题是研究什么。而有些课题名称则起的不是很准确，比如，“学科教学中德育渗透的研究”这个名称，就没有把研究的对象、问题说清楚，你是中学生或者说是小学生、大学生，是所有的学科或者是单指语文、数学等。再比如，“集中识字口语突破”这个名称，我想，别人只看题目，就无法看出研究的是什么问题，好象是语文，又好象是英语，是中学或者是小学，是小学高年级或者是小学低年级更没办法看出来。后来我看了一下内容，知道是小学英语教学方面研究，我想能不能改为“集中识字口语突破”小学英语教学模式研究。总之，课题的名称一定要和研究的内容相一致，不能太大，也不能太小，要准确地把你研究的对象、问题概括出来。 规范就是所用的词语、句型要规范、科学，似是而非的词不能用，口号式、结论式的句型不要用。因为我们是在进行科学研究，要用科学的、规范的语言去表述我们的思想和观点。这里有一个课题名称叫“培养学生自主学习能力，提高课堂教学效率”，这个题目如果是一篇经验性论文，或者是一个研究报告，我觉得不错，但作为课题的名称，我认为不是很好，因为课题就是我们要解决的问题，这个问题正在探讨，正开始研究，不能有结论性的口气。 研究的目的、意义也就是为什么要研究、研究它有什么价值。这一般可以先从现实需要方面去论述，指出现实当中存在这个问题，需要去研究，去解决，本课题的研究有什么实际作用，然后，再写课题的理论和学术价值。这些都要写得具体一点，有针对性一点，不能漫无边际地空喊口号。不要都写成是坚持党教育方针、实施素质教育、提高教育教学质量等一般性的口号。主要内容包括：⑴研究的有关背景(课题的提出)：即根据什么、受什么启发而搞这项研究。⑵通过分析本地（校）的教育教学实际，指出为什么要研究该课题，研究的价值，要解决的问题。 课题研究的指导思想。指导思想就是在宏观上应坚持什么方向，符合什么要求等，这个方向或要求可以是哲学、政治理论，也可以是政府的教育发展规划，也可以是有关研究问题的指导性意见等。对于范围比较大，时间又很长的课题来讲，大家在总的方面，有了一个比较明确的指导思想，就可以避免出现理论研究中的一些方向性错误。 小学教育科研工作，大都来源于实际工作中遇到的问题，找出产生这些问题的原因，并进一步找到解决问题的办法，是我们开展课题研究的最终目的。选择适当的符合课题研究工作需要的科研方法，是课题研究成败的关键。教育科学研究方法有许多种，如观察法、
浅谈小学信息技术教学策略的探究
浅谈小学信息技术教学策略的探究 维新学校党万金 一、游戏入门，自觉学习 “兴趣是最好的老师”是学生学习的原动力，是开发智力的催化剂，能激发学生的创造性思维。小学生年龄小，好动、好奇心强，往往坐不住，而对于单调的学习感到厌烦，经过充分考虑、分析学生学习的实际情况，适当地把信息技术课程的学习寓于游戏之中，能激发学生学习的兴趣，使学生在浓厚的兴趣中学习新知识，掌握新技能。 例如：学习指法是非常枯燥的，我在教学中就采取游戏引入的方法，先让学生玩《金山打字通》，比赛谁的成绩好或者与老师比赛。学生在“青蛙过河”等游戏的实践中发现，要取得好成绩就必须练习好指法。还准备一些计算游戏、拼图、简易加法、赛车等游戏，这些富有童趣的游戏，深深地吸引着学生，学生在忘情地玩游戏的过程中不知不觉地把指法练熟了，懂得了平常课堂中很难理解的回车键、空白键、上档键、光标键、退格键的作用与使用。由于游戏中巧妙地设置一些障碍和关卡，迫使学生去理解键盘上的一些键的功能与使用，这样他们就在无形中学会了键盘的使用，也培养了他们敏锐的观察力及其应变能力等。这样，既保持了学生学习信息技术的热情，还可以促使学生自觉去学习信息技术知识。他们在玩中学，学得有趣、投入，其乐无穷。如果强行让他们去学习理论知识，背熟键盘字母排列、键盘功能，学习效果不见得会很好，同时学生也没有更大的学习兴趣。 通过教学实践，我认为正确地引导小学生玩电脑游戏是利多弊少。使我体会到：“电脑游戏是通往电脑世界的捷径”这句话的真正含义。但电脑游戏的取材和活动时间必须要严格控制，要选择优秀的适合学生的游戏，更要强调趣味、益智、学习的功能。 二、激发兴趣，创新思维 学习兴趣是学生基于自己的学习需要而表现出来的一种认识行为，它在学生的学习中具有重要的作用。“没有兴趣的强制性学习，将会扼杀学生探求真理的欲望。”尤其是小学生，他们的年龄、心理特征都决定了他们做事往往从兴趣出发，对于那些单调、枯燥的练习和难以理解的理论知识，教师就要特别注意教学方法的选择，以保持和提高学生的学习兴趣。 1．形象教学法 建构主义强调创设有利于学习者意义建构的情境并使学习者进入情境十分必要，特别是我们面对的是以具体形象思维为主的小学生，更要注意运用形象法教学，使他们在轻松愉快的教学氛围中，主动地学习知识。 如：在教学《认识计算机》一课时，由于小学生初次接触计算机，大都怀有一种既畏惧又好奇的心理，很想知道计算机可以用来干什么，更想切身体会一下操作计算机的乐趣。“儿童学习任何事情的最合适的动机是当他们兴致高、心里想做的时候。”我抓住这一契机，提出：“你见过计算机吗？”、“计算机有什么作用呢？”，学生们纷纷举手，各抒己见。然后利用教学演示光盘，向学生展示了一个色彩缤纷的电脑世界，通过观看，学生不由自主地产生了“人们可以利用计算机进行画图、制作动画、编辑声音等工作，它的作用真大”的想法。这时，学生学习兴趣倍增，教学气氛活跃，从而顺利进入了新课的学习。 2．比喻教学法 对于小学生来说，计算机教学中的一些概念的名词术语最难被他们接受，适当采用一些形象生动的比喻，对学生学习计算机极为重要。不仅有助于提高他们听课的兴趣，而且还
lncRNA研究方案
1 lncRNA 研究技术手册 一、lncRNA 概述 lncRNA (Long noncoding RNAs,lncRNAs)长链非编码RNA ，起初被认为是基因组转录的不具有生物学功能的“噪音”，是RNA 聚合酶II 转录的副产物。然而，近年来的研究表明，lncRNA 参与了X 染色体沉默，基因组印记以及染色质修饰，转录激活，转录干扰，核内运输等多种重要的调控过程，lncRNA 的这些调控作用也开始引起人们广泛的关注。随着研究的推进，各类lncRNA 的大量发现，lncRNA 的研究将是RNA 基因组研究非常吸引人的一个方向，使人们逐渐认识到基因组存在人类知之甚少的“暗物质”。 lncRNA 的功能分为3方面： 1）通过修饰染色体参与表观调节-与mRNA 相互作用； 2）通过与转录因子的相互作用参与转录调节-与蛋白（转录因子）相互作用； 3）通过影响mRNA 处理过程参与转录后调节-ceRNA 作用模式。 三种lncRNA 机制作用方式，1和2主要发生于细胞核，3则发生在胞质。从研究难度来说，1>2>3：1）的RNA interaction 与array 并无成熟的研究模式；2）需要RIP 和RNA pull-down ，实验执行难度大风险高；3）转录后调节的研究方法-ceRNA 作用模式可行性及阳性率较高，是目前研究最热门的lncRNA 作用方式。 lncRNA 的ceRNA 作用模式：lncRNA 作为竞争性内源RNA(competing endogenousRNA ，ceRNA)，与microRNA 结合，在细胞中起到microRNA 海绵的作用。从而降低microRNA 的活性，间接上调microRNA 相关靶基因的表达。 图：lncRNA 的ceRNA 作用模式
研究思路和方法
课题研究的基本方法主要有: ⑴观察法.⑵调查法.⑶测验法.⑷行动研究法.⑸文献法⑹经验总结法.⑺个案研究法.⑻案例研究法. ⑼实验法(在一个课题研究过程中，根据不同的研究目的和要求，往往会用到两种以上方法) 教育课题研究的基本方法主要有以下几种： 一、观察法 1．观察法：为了了解事实真相，从而发现某种现象的本质和规律。 2．观察法的步骤：观察法的实施分为以下三个步骤，步骤之一就是进行观察研究的设计，此步骤可分为如下几个方面： （1）作大略调查和试探性观察。 这一步工作的目的不在于搜集材料，而在于掌握基本情况，以便能正确地计划整个观察过程。例如：要观察某一教师的教学工作，便应当预先到学校大致了解这位教师的工作情况，学生的情况，有关的环境和条件等等。这可以通过跟教师和学校领导人谈话，查阅一些有关的材料，如教案、教学日记、学生作业等，以及听课等方式进行。 （2）确定观察的目的和中心。 根据研究任务和研究对象的特点，考虑弄清楚什么问题，需要什么材料和条件，然后作明确的规定。如果这规定不明确，观察便不能集中，结果就不能深入。观察不能有几个中心，范围不能太广，全部观察要围绕一个中心进行。如果必须要观察几个中心，那就采取小组观察，分工合作。 （3）确定观察对象 一是确定拟观察的的总体范围； 二是确定拟观察的个案对象； 三是确定拟观察的具体项目。比如，要研究新分配到小学任教的中师或大专毕业生在课余时间进行业务、文化进修的情况，那么，拟观察总体就是教师工作年限达一年或两年的新教师。在这一总体范围内，再定下具体观察哪几所小学，哪几个教研组中的哪些教师。具体观察名单确定以后，再把拟观察的时间、场合、具体观察项目确定下来。 （4）制定观察计划 观察计划除了明确规定观察的目的、中心、范围，以及要了解什么问题、搜集什么材料之外，还应当安排观察过程：观察次数、密度、每次观察持续的时间，如何保证观察现象的常态等。 （5）策划和准备观察手段观察手段一般包括两种：
LncRNA研究思路
LncRNA研究思路 lncRNA参与了X染色体沉默，基因组印记以及染色质修饰，转录激活，转录干扰，核内运输等多种重要的调控过程，很多人看到lncRNA的热点还没有过去，经常会问老谈如果没有相关的工作基础，如何开始lncRNA的研究?今天我们就褪去虚伪假衣，研究的大方向是这样子的： 1. 寻找到lncRNA分子 2. lncRNA分子表型研究 3. lncRNA通过何种机制调节表型？ 老谈将这些研究方向及实验手段按层次的方式绘成流程图，如下所示： 首先，是样本的准备与收集，高质量的样本是实验结果具有可靠性的前提。 其次，是lncRNA检测，可以先通过芯片的方式高通量筛选到目的基因，然后通过q-PCR或Northernblot的方法验证所得到的芯片结果。 再次，其研究方向根据研究目的而定。如果是研究生物标志物，那么可以通过收集更多的临床样本，研究lncRNA对疾病的指示作用。如果是研究其功能，则是研究其细胞表型，分子表型及机制。 小伙伴们是不是觉得这和miRNA的总体研究思路相似呢？这时可以根据各自的实验平台条件选择相应的研究。值得注意的是，lncRNA的功能研究并不像miRNA一样通过3’UTR影响翻译套路，总的来说lncRNA机制研究套路还不成熟。对于很多科研工作者，lncRNA分子的获得及其细胞表型的获得并非难事，关键在于如何进一步进行研究，这时候就要涉及到对功能研究的定位。归纳如下：
lncRNA的功能分为3方面: 1. 是通过修饰染色体参与表观调节； 2. 通过与转录因子的相互作用参与转录调节； 3. 通过影响mRNA处理过程参与转录后调节。 在以上3个方向的研究中，其中转录后调节相对简单，大家在选择lncRNA的时候，可以对其序列做一下分析，看看自己研究的lncRNA是作为miRNA的sources还是sinks？ 另外两方面的调节机制均涉及RNA-蛋白质的相互作用。在没有目的蛋白的时候，此时不得不使用先进技术，用于检测RNA-蛋白质相互作用的实验手段如下： RNA-蛋白质相互作用的检测手段有nRIP，CLIP；lncRNA由于其长片段核苷酸序列，碱基之间相互作用，通常二级结构，可通过RNase足迹等实验手段进行探讨；在染色体结构修饰作用中，还会涉及RNA-RNA的相互作用，可通过CHIRP等实验手段来研究。 由于上述实验手段比较难得，lncRNA的机制研究相对还是比较困难。那我们该怎样进行lncRNA研究呢？咱换个思路，不要将lncRNA作为一个调节分子，而是把lncRNA当做和mRNA 一样的分子来研究，尽管很少表达蛋白。在体外，可以通过分子干扰手段，进行分子及表型研究；在体内，也是如此。两者通过各种组合，那就等着发5分的文章吧。
优品课件之高一通用技术《技术试验及其方法》2学案苏教版
高一通用技术《技术试验及其方法》2学案苏教版 高一通用技术《技术试验及其方法》2学案苏教版 技术试验及其方法教材：普通高中课程标准实验教科书通用技术（必修1）文档内容：技术试验及其方法章节：第二章技术世界中的设计第三节技术试验及其方法课时：第1课时作者：林xx（xx中学） 一、教学目标 1. 知识与技能目标 (1)知道什么是技术试验，了解技术试验的重要性。 (2)了解技术试验的五种常用方法和广泛应用。 2. 过程与方法目标 (1)在对具体技术试验案例思考、分析的过程中认识到技术试验的重要性。 (2)在对具体案例的思考、分析、实践的过程中理解常用的技术试验方法。 (3)在具体技术试验方法应用案例的分析过程中，学会针对简单的试验选择正确的试验方法。 3. 情感态度和价值观目标 (1)感受技术试验的魅力。 (2)增强对技术的兴趣、热情和创新意识。 (3)认识技术试验的内在价值和作用。 二、教学重点了解五种常用的技术试验方法。 三、教学难点针对简单的试验选择正确的试验方法。 四、教学方法谈话法. 教材分析本节课是第二章“技术世界中的设计”第三节“技术试验及其方法”的第一课时，学习内容包括“什么是技术试验”、“技术试验方法”。这部分内容有两个方面要求：一是要知道什么是技术试验，了解技术试验的重要性。二是了解技术试验的五种常用方法和应用。技术试验是技术设计的重要思想方法，它贯穿于设计过程的始终，是全书的重点之一。是技术设计过程中的一个重要环节，也是技术探究、解决技术问题的一个重要方法。技术试验在技术发明、技术革新、技术推广过程中的作用不可忽视。通过启发、思考、引导、活动、交流等教学过程，让学生明白技术试验的重要性和作用，了解技术试验的五种常用方法和广泛应用的基础上，才能针对简单的具体试验案例选择正确的试验方法，才能形成基本的技术试验素养，为下节课技术试验的实施和教材第三章测试和评估的学习打下基础。 2. 设计理念“技术试验及其方法”是技术设计的重 要思想方法，是后面内容学习的基础 (1)注意要让学生明白技术试验和科学试验的区别在于出发点和结果不相同。 (2)技术试验的概念要
lncRNA研究策略与技术
lncRNA研究策略与技术
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lncRNA研究策略与技术 研究背景： 长链非编码RNA(long noncoding RNA，lncRNA)是一类不编码蛋白的RNA分子，长度在200 bp 以上，起初被认为是RNA聚合酶II转录的副产物，不具有生物学功能；近期的研究表明lncRNA具有保守的二级结构，可以与蛋白、DNA和RNA相互作用，参与多种生物学过程的调控，尤其在肿瘤当中发挥了重要的调控角色，如染色质修饰、转录激活和抑制、转录后调解以及作为miRNA的诱导分子干扰基因的表达等，图1所示。随着高通量测序技术的发展，越来越多的lncRNA被注释，但是绝大多数的lncRNA的功能仍然不清楚，因此lncRNA的研究是一片非常广阔的未知领域，具有极大的研究价值和意义。 图1. lncRNA参与肿瘤生物学调控，红色线状图表示lncRNA。 A.染色质重组 B.转录激活和抑制 C.蛋白抑制 D.转录后修饰 E.诱导分子 锐博生物提供研究思路： 差异lncRNA筛选的研究方法：
案例解读： 案例(一)RNA seq发现lincRNA 1. 2011年，Rinn研究小组对24种组织样本进行RNA测序发现了8000多个人的lincRNA 图2. A.利用RNA-seq预测lincRNA的流程图 B.多个参考数据库找到的lincRNA的数量及 交集及用软件组装的结果 2. lincRNA的表达具有组织特异性 图3. lincRNA和mRNA在不同组织当中的表达情况
教育技术学教学优化策略探究
教育技术学教学优化策略探究 摘要：教育技术学是目前我国很多高校普遍开设的一门基础性课程，很多学校都对这门课程给予了很高的重视，对于这门课程的教学应该秉承以实践为宗旨的教学理念，在课程教学过程中结合学生的专业特点，着力培养学生的动手实践能力和理论应用能力，对课程进行合理化安排，将学生的主观能动性充分发挥出来，提高学生在课程教育过程中的参与程度，这样不但学生的专业知识能够得以扎实地掌握，同时学生的知识应用能力与实践操作能力也能得到充分的锻炼。 关键词：教育技术学；教学策略；优化 教育技术学是目前我国高等师范类院校为学生开设的公共必修课程，其教学主旨是让学生通过对这门课程的学习，掌握当代教育技术的基本知识和基本技能，并对当代教育技术的应用在社会发展和经济建设中举足轻重的地位和至关重要的作用有一个清醒的认识。另外，在教学过程中，我们也要对学生的理论应用能力和动手操作能力进行着重的培养，让学生能够独立地使用相关的教学设备开展教学工作和进行教学研究。 在教育技术学的教学过程中，教师首先应该让学生明确自己在教学过程中的主体地位，将学生的主观能动性充分
地发挥出 来。其次，在课程内容的安排上也要以学生的实际情况为基本的出发点，进行有针对性的教学。再次，要在教学过程中有所侧重，给予学生的实践能力培养以充分的重视，通过实际的教学行动让学生明白实践性对教育技术学这门课程来说是极为重要的。 一、合理安排教学内容，针对性与实效性并重 目前，我国师范类的高校所开设的专业很多，各专业之间课程内容差别也比较大，教育技术学作为一门公共性的课程在课程内容的安排上要根据不同专业的学生适当地调整教学内容，符合各专业学生的学习特性，例如，在文科类的专业课程内容安排中，由 于这类专业比较侧重于形象教学，因此在课程安排上我们就要对学生在文字、声音以及视频素材的使用能力上进行重点培养；而 在诸如化学、物理以及数学等理科类专业的课程安排上，我们就要着重对学生的抽象思维能力进行培养，在课程内容选择上可以选择一些较为抽象的计算机语言编程的内容为主要教学内容，借以培养学生的抽象思维的能力；而在小学教育专业的课程安排上我们应该将抽象思维能力的培养和形象思维的培养同步起来。在课程内容的选取上我们要遵从“优中取优、精益求精、彰显特点、突出侧重”的原则，
教师有效教学方法与策略研究开题报告.pdf
《教师有效教学方法与策略研究》开题报告 一、课题研究的背景 有效教学的理念源于20世纪上半叶西方的教学科学化运动，在美国实用主义哲学和行 为主义心理学影响的教学效能核定运动后，引起了世界各国教学学者的关注。20世纪以前在西方教育理论中占主导地位的教学观是“教学是艺术”。但随着20世纪以来科学思潮的影响，以及心理学特别是行为科学的发展，人们意识到，教学也是科学。即教学不仅有科学的基础，而且还可以用科学的方法来研究。从产生至今，有效教学就一直是教学研究的焦点之一，但有效教学研究的历史表明，有效教学是一个动态发展的概念，其内涵一直随着教学价值观、教学的理论基础以及教学研究的变化而不断扩展、变化。所以，课堂有效教学的研究 是教育科研一直永恒的主题。 当前有效教学大体有四种取向：一是科学主义（以加涅的“设计教学思想”为代表）；二是建构主义（以杜威的“参与者知识观”为代表）；三是多元智能（以“加德纳的理论” 为代表）。四是最优化理论（以巴班斯基的理论为代表）。这四个理论就是我们进行课题研究 的理论支撑，也是新课程所倡导的教学理念。 二、课题研究的意义 实施新课程以来，基础教育教学领域又一次开始关注在新课程理念下如何实现有效教学 的研究。从近几年的新课程教师培训和教学指导中发现，很多新课程教师在有效备课、有效教学、有效评价等方面存在许多问题。为此，本课题研究的目的在于给处在迷茫中的新课程 教师提供一种有效课堂教学的行动方案和有效指导，探索适应新课程理念的有效教学方法， 通过研究建构适应新课程理念的有效课堂教学理论与方法体系，全面提高教育教学质量，有力促进新课程改革进程。所以，在新课程背景下开展本课题研究，具有十分重要的现实意义： 1、转变教师的教学理念。研究有效教学策略，建构有效教学课堂新模式，提高课堂教学 的效率与效益。 2、转变学生学习方式。用热情和兴趣点燃智慧，让学生以饱满的精神状态积极参与课堂 教学活动，实行师生互动的探究式改革，学会并自觉地在已有的经验基础上建构自己的知识 框架和理论体系； 3、建构有效教学评价指标和管理体系。掌握有效教学的评价标准，而且能够灵活地根据 具体的教学内容调整评价标准，科学地将定量与定性、过程与结果有机地结合起来，全面地评价学生的学习成绩和教师的工作实绩。
lncRNA芯片结果分析思路与方法
博医工具|史上最全lncRNA芯片结果分析方法 面对lncRNA芯片检测结果报告中的复杂数据，我们该如何从中获取自己想要的信息？今天，百替生物将我们自己的工作经验分享给大家。 芯片分析的大体思路，从以下几个方面考虑： 1.我们最常看到的是聚类分析结果，通常是以热图的形式展现：
实验数据质量评估，预处理及均一化处理等等。提供我们一份包含检测结果的表格， 从这份表格中我们可以看出，芯片分析的结果包括lncRNA和mRNA，分别做差异表达lncRNA和mRNA基因的筛选。芯片公司再根据这份初步的数据，对差异表达lncRNA及mRNA 的筛选：根据客户提供样本量的大小与分布或实验目的，应用倍数法、多重假设检验等手段，对两条件或多条件下的表达差异的lncRNA和mRNA分别进行计算和筛选。实现以下三种分析结果： （1）表达模式聚类分析：针对芯片结果进行样本及差异表达lncRNA和mRNA的聚类，寻找属于同
一表达趋势的基因或样本。 （2）GO和pathway显著性富集分析：差异基因，应用数据库进行功能富集分析，挖掘具有统计学意义的差异表达基因的功能类别。显著性P值越小，则它随机聚集差异表达基因的概率越小，其功能相关性的非随机性就越小，该功能模块有较大的可能与疾病（或药物作用）相关。 （3）蛋白互作网络分析：研究与指定蛋白质相互作用的其他蛋白质的信息，以使研究人员能够更加深入地认清相关蛋白质的功能，更清楚地理解其调控机制。 呈现给我们的数据将会有以下几种类型： 2.差异lncRNA的重注释 lncRNA芯片注释不完善，需要将筛选出来的lncRNA进行重注释。同时会对芯片所检测的mRNA信息进行注释。 3.lncRNA作用机制的分析 （1）lncRNA cis作用机制研究：对于感兴趣的差异表达lncRNAs，搜索其上下游100K范围内的所有编码基因，这些在基因组上临近、且表达模式上共表达的基因很可能被该lncRNAs 所调控。 （2）lncRNA trans作用机制研究：计算LncRNAs 共表达的编码基因，集合与转录因子/染色质调控复合物的靶基因集合的交集，利用超几何分布计算该交集的富集程度，得到与lncRNAs 显著相关的转录因子，从而识别可能与lncRNAs 联合发挥调控作用的转录因子/染色质调控因子。
计算机网络安全技术与防范策略探究
计算机网络安全技术与防范策略探究 摘要：本文对计算机网络安全的问题进行了分析, 对于防范的措施不仅要防范病毒、黑客、垃圾邮件, 还要提高自身对网络安全的意识, 对于网络的漏洞要及时地 查找并且修补, 对于数据进行加密等, 进一步提高网络安全性, 降低因为网络安全带给人们生活的危害。 关键词：计算机网络安全技术网络安全防范 21世纪是计算机网络发展的时代, 计算机的崛起迅速地在社会发展中占领了 一席之地, 网络为人们的生活、学习带来了更多的便利。但同时计算机网络系统 给用户也带来了越来越多的安全隐患, 比如计算机中的个人信息、重要文件容易 受到计算机黑客的攻击和窃取，有时一些黑客还会攻击计算机系统进而使一个地 区陷入网络恐慌之中，给社会的稳定和正常运行带来不利影响，对用户的正常生 活也造成了极大的困扰。因此，越来越多的人开始重视网络安全问题，对计算机 网络安全技术进行分析并找出防范策略更显必要。 一、计算机网络安全问题的风险 1.潜在风险。人们在日常的工作和学习中往往会将很多资料存储在计算机磁 盘中，而且文件的数量也会日益增多，计算机使用者大多数做不到将每一份资料 都进行云备份。这样一来，一旦计算机发生诸如瘫痪、无法正常运行等问题就可 能导致文件的丢失，进而给人的工作带来影响。另外，随着社会的不断发展，计 算机技术也在不断地更新，旧一代的计算机都会面临着自然淘汰等问题。而一些 不法分子就会对旧计算机进行回收，通过一些途径找出计算机上残存的资料，也 可能导致个人资料的泄漏。 2.计算机病毒危害。计算机病毒其实就是一组计算机的指令或者程序代码, 一 种在原来的程序中插入能够破坏计算机功能或者数据信息的程序, 是目前为止广 大用户最头疼的问题之一。 因为计算机病毒具有隐蔽性、潜伏性、破坏性和传染性, 而且种类繁多, 危害 巨大, 传播的速度又快又广, 是网络安全的一大隐患。计算机病毒的破坏力强, 而且很难清除干净, 是计算机网络安全的“头号”隐患, 一旦被这些病毒侵害, 后果将不堪设想。 3.网络黑客攻击。网络黑客是指攻击者通过网络对用户的网络进行非法访问、破坏, 黑客可以偷窥别人的隐私, 也可以对用户的信息进行篡改或者破坏等, 因此黑客动机的不确定性对用户的利益安全有着重要的影响。 二、计算机网络安全防范的策略 1.提高计算机网络安全意识。对于计算机网络安全的管理来说, 首要应当建立 健全计算机安全管理机构, 明确分工, 坚决实施网络安全标准, 全方位提高计算机网络的管理能力, 有效地保障网络安全。对于个人用户来说, 做好重要数据信息数据 的加密工作至关重要, 而且要定期进行杀毒、升级, 不让病毒和黑客有机可乘。 因此，只有提升了网络安全管理和个人用户的意识, 采取有效的防范措施, 才 能防患于未然, 保障计算机网络的安全环境。 2.计算机病毒的防范。计算机在运行的时候，安全隐患无时无刻不在计算机 身边游走，计算机本身在运行的过程中也会存在一定的风险。为了预防计算机病毒, 必须采取相关的措施。因为计算机病毒无孔不入，其强有力的破坏性必须采 取更强大的配置来解决, 可以安装配置全方位的防毒软件, 如金山毒霸、360安全 卫士、卡巴斯基、瑞星杀毒等软件, 通过不定期的自动升级、杀毒, 来保障计算机
lncRNA研究策略之：RNA Pull Down实验技术
【实验技巧】lncRNA研究策略之：RNA Pull Down实验技术 lncRNA研究策略之：RNA Pull Down实验技术 RNA pull-down是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验手段之一。RNA pull-down使用体外转录法标记生物素RNA探针，然后与胞浆蛋白提取液孵育，形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链亲和素标记的磁珠结合，从而与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后，通过Western Blot实验检测特定的RNA结合蛋白是否与RNA相互作用。 1) lncRNA筛选： 通过lncRNA芯片或RNA测序等方法对多对疾病模型和对照样本组织进行lncRNA表达谱分析；通过生物信息学的方法筛选出具有表达差异的lncRNA，构建共表达网络，预测lncRNA的靶基因； 通过PCR或Northern Blot技术对候选lncRNA验证，确定其表达差异。 2) lncRNA确定： 通过5' RACE获取lncRNA 5'全长，3' RACE获取lncRNA3'全长，最终拿到完整的lncRNA序列。 3) 表达分析： 细胞水平表达：在细胞水平进行检测表达差异。 组织分布：检测不同组织、不同阶段表达特性。 表达水平动力学变化：比较不同处理条件下，如药物处理、诱导处理下，表达水平差异。 4) 功能研究： 功能获得性研究：构建lncRNA过表达载体:原则上是将全长lncRNA定向克隆到表达载体上实现lncRNA的过表达。然而有些lncRNA很大或全长尚未分离，这时将视lncRNA在基因组上的定位采取不同的研究策略。 功能缺失性研究：可通过siRNA、shRNA、反义核酸等方法沉默lncRNA，干预lncRNA后检测其对疾病相关基因表达的影响和对细胞表型如增值、凋亡、侵袭、转移等的影响； 采用RNA pull down、RNA-RIP(RNA Binding Protein Immunoprecipitation)、 ChIRP-seq(Chromatin Isolation by RNA Purification)等方法检测与lncRNA结合的DNA、RNA、蛋白质。 采用lncRNA芯片分析技术结合mRNA对lncRNA功能进行预测，研究lncRNA trans和cis作用机制。 采用配体指数级富集系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment，SELEX)，设计一种RNA配体，与癌症相关的lincRNA结合达到抑制肿瘤细胞的生长和转移。
网络环境下信息技术学科教学策略探究
多媒体网络教学环境下小学信息技术课教学策略浅探 ——平顶山市新华区新新街小学郭英豪【内容摘要】 信息技术教育要适应新课程的要求，适应社会的要求，这就要求教师具有先进的教学理念、正确的方法，以此来引导学生有效利用资源，培养学生自主学习能力、实践能力、创新能力。充分利用现代教育技术构造一个网络环境下的自主学习方式充分地体现了这一点，它在理论依据的依托下给出了网络环境下自主学习的方式以及利用网络学习的途径，并以实践中的教学实例加以说明，它在信息技术教学中有着非常实用的价值，同时极大地促进了信息技术教学，给学习提供了更广阔的学习空间。 【关键字】 现代教育技术;多媒体；网络;自主学习 【正文】 随着社会的发展，生活中信息、网络的应用无所不在，同时新课程的改革促进了信息技术的运用，那么如何更好地利用好现有的网络环境高效地学习信息技术，培养学生良好的信息素养，把信息技术作为支持终身学习和合作学习的手段，为适应信息社会的学习、工作和生活打下必要的基础，这是我们每个老师都应思考的新问题。为此我们在日常工作中结合网络环境及信息学科的特点做了如下的尝试： 一、网络环境下信息技术学科的特点： 学校里学生所处的网络环境主要包括多媒体网络教室环境、校园网环境和Internet环境等。网络环境下的信息技术学科教学有着它的独特的一面：它肯有：工具性、实践性、交互性、多媒体化、信息化和网络化以及六创造性等特点 基于以上特点，如何在网络环境下更好进行信息技术课的教学，利用网络环境开展学生自主性学习，让学生自主唤醒和激发主动参与的意识，训练掌握认知策略，发挥选择性、能动性、积极性和创造性。 二.网络环境下自主学习的方式 （一）基于游戏的自主学习方式 基于游戏的自主学习方式，是针对相对低的年级的学生在教师指导下，以游
课题研究方式与策略
课题研究的方法与策略 大新庄小学王苹苹 确定研究课题或取得批准立项课题后，怎样开展课题研究？这是教育工作者特别是中小学教师，经常提到的一个重要问题。课题研究做法多样，课题研究常用方法有哪些呢？下面我们来看看寻得到的可以通用的一些方法！ 一、观察法 教育研究中的观察法，是指带着明确的目的，用自己的感官和辅助工具去直接地、有针对性地了解正在发生、发展和变化着的教育现象的一种研究方法。 观察法的操作步骤如下： 1．明确观察目的 2．选定观察对象 3．制订观察计划 4．实施观察并记录 5．整理观察记录 6．分析观察资料 7．撰写观察报告 二、调查法 教育研究中的调查法，是指在科学方法论和教育理论指导下，围绕一定的教育问题，运用问卷、访谈、测量等方式，有计划、有目的地搜集有关事实材料，从而作出科学分析并提出具体工作建议的一种
研究方法。 三、实验法 教育研究中的实验法（简称教育实验），是指研究者根据研究目标，按照理论假设的定向，主动操作自变量，控制无关变量，以观测被试因变量情况，从而揭示教育现象的因果关系，探索教育规律的一种研究方法。 教育实验作为一种重要的教育科学研究方法，以揭示因果关系为直接目标，以条件控制为基本特征，以重复验证为检验手段。 其实课题研究的方式方法众多，以上也只是冰山一角。而方式方法再多，最重要的还是实际的应用。适合自己的才是正确的，适合实际的才是有效的！所以我们在课题的研究上不能过分的迷信权威，要找到既适合自己又能起到作用的方法！ 我们来具体的看一看以上的方式方法怎样的实施！ 1、观察法 为了了解事实真相，从而发现某种现象的本质和规律观察法的步骤：观察法的实施分为以下三个步骤,步骤之一就是进行观察研究的设计,此步骤可分为如下几个方面： 1.1 作大略调查和试探性观察。 这一步工作的目的不在于搜集材料，而在于掌握基本情况，以便能正确地计划整个观察过程。例如：要观察某一教师的教学工作，便应当预先到学校大致了解这位教师的工作情况，学生的情况，有关的环境和条件等等。这可以通过跟教师和学校领导人谈话，查阅一些有