幽门螺杆菌检测法比较及药敏试验
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幽门螺旋杆菌的检查方法有哪些
幽门螺旋杆菌的检查方法有哪些 幽门螺杆菌，是一种单极、多鞭毛、末端钝圆、螺旋形弯曲的细菌。长2.5～4.0μm，宽0.5～1.0μm。在胃粘膜上皮细胞表面常呈典型的螺旋状或弧形。在固体培养基上生长时，除典型的形态外，有时可出现杆状或圆球状。幽门螺杆菌是微需氧菌，环境氧要求5～8%，在大气或绝对厌氧环境下不能生长。 自1983年通过胃镜取活检标本分离培养成功以来，对Hp感染的诊断已发展出了许多方法，包括有细菌学、病理学、血清学、同位素示踪、分子生物学等。幽门螺旋杆菌感染的检查方法很多，主要包括细菌的直接检查、尿毒酶活性测定、免疫学检测及聚合酶链反应等方法。 但总的讲来，从标本采集角度看，可以分为侵袭性和非侵袭性两大类。 目前幽门螺杆菌的诊断检测方法包括侵入性和非侵入性两大类。侵入性方法需通过内镜获取活组织进行检测，非侵入性方法则不需进行内镜检查。 细菌的直接检查 是指通过胃镜检查钳取胃粘膜(多为胃窦粘膜)作直接涂片、染色，组织切片染色及细菌培养来检测幽门螺旋杆菌。其中胃粘膜细菌培养是诊断幽门螺旋杆菌最可靠的方法，可作为验证其他诊断性试验的“金标准”，同时又能进行药敏试验，指导临床选用药物。 尿毒酶检查 因为幽门螺旋杆菌是人胃内唯一能够产生大量尿毒酶的细菌，故可通过检测尿毒酶来诊断幽门螺旋杆菌感染。尿毒酶分解胃内尿毒生成氨和二氧化碳，使尿素浓度降低、氨浓度升高。基于此原理已发展了多种检测方法：①胃活检组织尿毒酶试验;②呼吸试验;③胃液尿素或尿素氮测定;④15N-尿素试验。 免疫学检测 目前已有多种免疫学检测方法，通过测定血清中的幽门螺旋杆菌抗体来检测幽门螺旋杆菌感染，包括补体结合试验、凝集试验、被动血凝测定、免疫印迹技术和酶联合吸附测定(ELISA)等。 抗体检测 幽门螺旋杆菌抗体检测是利用胶体金技术定性检测人血清、血浆或全血中抗胃幽门螺旋杆菌抗体。在检测条中硝酸纤维薄膜的测试区包被有胃幽门螺旋杆菌抗原，1质控区标有胃幽门螺旋杆菌特异性单克隆抗体。在样品端的玻璃纤维纸上固定有胃幽门螺旋杆菌抗原胶体
药敏试验方法
一、纸片扩散法 该法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成浓度梯度。同时，纸片周围抑菌浓度范围内的菌株不能生长，二抑菌范围外的菌株则可以生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈，不同的抑菌药物的抑菌圈直径因受药物在琼脂中扩散速度的影响而可能不同，抑菌圈的大小可以反映测试菌对药物的敏感程度，并与该药物对测试菌的MIC呈负相关。 二、稀释法 稀释法药敏试验可用于定量测试抗菌药物对某一细菌的体外活性，分为琼脂稀释法和肉汤稀释法。实验时，抗菌药物的浓度通常经过倍比（lg2）稀释，能抑制待测菌肉眼可见生长的最低药物浓度成为最小抑菌浓度（MIC），一个特定抗菌药物的测试浓度范围应该包含能够检测细菌的解释性折点（敏感、中介和耐药）的浓度，同时也应该包含质控参考菌株的MIC. 2.1 琼脂稀释法首先制备含抗菌药物的琼脂稀释平板。再接种待测菌株，然后是结果判读。 2.2 肉汤稀释法 三、抗生素浓度梯度法 四、自动化仪器法 一、实验材料 普通营养琼脂培养基：可去生化试剂店购买，做不同细菌的药敏试验可选择不同的培养基，如做大肠杆菌的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦糠凯培养基。做沙门氏菌可选择血清培养基。 药敏试纸：购买或自制（详见实验准备）
细菌：待做药敏试验的细菌 仪器：接种环、酒精灯、打孔器、牛津杯、移液器、滴头 二、实验准备 2.1 药敏片的准备：购买或自制 2.1.1 制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。 2.1.2 抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6个月。 2.2 药液的制备（用于商品药的试验）：按商品药的使用治疗量的比例配制药液；如商品药百病消按其说明量治疗量0.01%饮水，可按这个比例配制药液，可取10毫克加入10毫升的水中混匀。此稀释液即为用于做药敏试验的药液。 三、实验操作方法 3.1 药敏片法 3.1.1 在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。（另：可挑取待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。要求涂布均匀致密） 3.1.2 将镊子于酒精灯火焰灭菌后略停，取药敏片贴到平皿培养基表面。为了使药敏片与培养基紧密相贴，可用镊子轻按几下药敏片。为了使能准确的观察结果，要求药敏片能有规律的分布于平皿培养基上；一般可在平皿中央贴一片，外周可等距离贴若干片（外周一般可贴七片），每种药敏片的名称要记住。 3.1.3 将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时后，观察效果。 3.2 牛津杯法 3.2.1 在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二点划线至平皿的1/2，
幽门螺杆菌,HP检测方法
什么是幽门螺旋杆菌 幽门螺杆菌：Helicobacter pylori，简称Hp。是一种螺旋状、革兰阴性、微需氧性细菌。感染部位主要在胃及十二指肠球部。世界卫生组织和美国国立卫生研究院经过多年的分析研究，目前正式将幽门螺杆菌（HP）列为胃癌的首要致癌因子。 是慢性活动性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤和胃癌的主要致病因素。是由巴里·马歇尔(Barry J. Marshall)和罗宾·沃伦(J. Robin Warren)2人发现（由此二人获得2005年的诺贝尔生理学或医学奖）。 幽门螺旋杆菌的危害 幽门螺杆菌在全球自然人群的感染率超过50%, 世界上几乎没有一种慢性传染病会使全球超过半数的人口受到感染，且发展中国家高于发达国家。我国属发展中国家，幽门螺杆菌感染率高。目前，已经确认幽门螺杆菌与胃肠道疾病中的4种疾病密切相关：(1) 慢性胃炎；(2)消化性溃疡病；(3) 胃癌； (4)胃粘膜相关性淋巴样组织样(MALT)恶性淋巴瘤。1994年世界卫生组织/国际癌症研究机构（WHO/IARC）已经把幽门螺杆菌列为胃癌的头号致癌因子。 感染幽门螺旋杆菌有哪些常见症状 幽门螺杆菌感染不仅引起胃窦炎，也可引起胃底、体炎，临床表现无特征性，常见上腹部疼痛，饱胀不适、嗳气、反酸、
食欲减退等上消化道症状，有些病人还可出现反复发作性剧烈腹痛、上消化道少量出血等。消化性溃疡的发生、发展、愈合及复发过程中，Hp起着十分重要的作用。80%以上的胃溃疡和90%以上的十二指肠溃疡是由幽门螺旋杆菌引起的。 口臭 幽门螺杆菌是引起口臭的最直接病菌之一，由于幽门螺杆菌可以在牙菌斑中生存，在口腔内发生感染后，会直接产生有臭味的碳化物，引起口臭。 泛酸 幽门螺杆菌会诱发胃泌素疯狂分泌，导致胃酸过多，身体最直接的反应就是泛酸和烧心。 腹部不适 胃疼是溃疡病的最典型症状，它显示了胃和十二指肠粘膜正在被消化；常见上腹部疼痛、饱胀不适、嗳气等上消化道症状。
药敏试验方法
药敏试验方法： 默认分类 2009-05-06 22:37 阅读285 评论0 字号：大中小 K-B法： 1 从孵育了16-24小时的琼脂平板上（血平板），挑出单个菌落，直接用生理盐水制成0.5麦氏单 位。 2 在15分钟内，用无菌棉拭子蘸取调好的菌液，在液面上方管壁处旋转并用力挤压几次，以从中挤 出过多的菌液。 3 用棉拭子在无菌的M-H培养基表面化线接种，再重复操作两次，每次将平板转动60度，每次接 种都应保证接种物均匀分布，最后用棉拭子涂抹平板的边缘。 4 将确定好的药敏纸片分贴到平板表面。每个纸片都应压一下，以保证与平板表面完全接触。每个 纸片中心间距24mm。纸片一旦与平板接触，不应再移动。 5 贴完纸片后，应在15分钟内放入35度孵箱。嗜血杆菌属，链球菌属放入3%-5%的CO2烛缸。 6 孵育24小时以后，测量各药敏纸片抑菌圈直径，与NCCLS手册比较，作出结果判断。 说明：细菌药敏结果的判断以NCCLS为标准，所以药敏试验的每一步都应严格按照NCCLS操作，否则将失去意义。链球菌、奈瑟菌属、流感嗜血杆菌、除铜绿假单孢菌和不动杆菌外的假单孢菌属不用K- B法. 肺炎链球菌胶乳凝集测定法 1 在一干净玻片上分别滴两滴生理盐水。 2 从冰箱取出鉴定试剂(Slidex pneumo-kit)于室温。 ·3 在其中一滴生理盐水上滴加R1试剂，在另外一滴上滴加R2试剂，用搅拌棒混匀。 4 轻轻晃动玻片2分钟，观察结果。 5 2分钟内，如R1出现凝集为阳性；如R1和R2均未出现凝集为阴性。 注：R3为阳性对照。 药敏纸片的选择 1、革兰阴性杆菌（肠杆菌科）
头孢噻肟（CTX）头孢唑林（CZ）头孢他定（CAZ） 氨苄西林（AM）哌拉西林（PIP）阿米卡星（AN） 头孢噻吩（CF）环丙沙星（CIP）头孢呋辛（CXM） 庆大霉素（GM）头孢噻肟/棒酸（CTX/CA） 头孢他定/克拉维酸（CAZ/CA）羧苄青霉素（CB） 奥格门丁（AMX/CA）哌拉西林/三唑巴坦（PIP/TZ）亚安培南头孢匹肟（FEP）头孢克罗（CEC） 2、铜绿假单孢菌/不动杆菌 妥布霉素（TM）阿米卡星（AN）安曲南（AZT） 头孢哌酮（CFP）哌拉西林（PIP）头孢匹肟 头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP）头孢他定（CAZ） 左旋氧氟沙星（OFL）亚安培南哌拉西林/三唑巴坦 3、金黄色葡萄球菌 苯唑西林（OX）青霉素G（P）头孢唑林（CZ）阿米卡星（AN）红霉素（E）头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP） 万古霉素奥格门丁（AMX/CA）哌拉西林/三唑巴坦 头孢噻吩（CF） 4 、肠球菌 氨苄西林（AM）万古霉素环丙沙星（CIP） 庆大霉素（GM）红霉素（E）氧氟沙星（OFL） 5、除肺炎链球菌外链球菌 氨苄西林（AM）头孢噻肟（CTX）万古霉素 红霉素（E）氧氟沙星（OFL）克林霉素(CM) 肺炎克雷伯菌产酸克雷伯菌和大肠杆菌ESBLs的检测
药敏试验操作方法
药敏试验操作方法 药敏试验根据美国临床标准委员会（NCCLS）推荐的K-B琼脂法进行，药敏纸片选择中国生物制品鉴定所药敏纸片，试验所选择药物必须包括下列抗生素：氨苄西林（AMP），阿莫西林/克拉维酸（AMC），头孢噻吩（CFT），头孢噻肟（CTX），庆大霉素（GEN），萘啶酸（NAL），诺氟沙星（NOR），四环素（TBT），利福平（RFA），复方新喏明（SMZ）。 1 操作方法： (1)将待检菌接种于普通营养琼脂平板，37℃培养16～18小时，然后挑取普通营养琼脂平板上的纯培养菌落，悬于3ml生理盐水中，混匀后与菌液比浊管比浊。以有黑字的白纸为背景，调整浊度与比浊管（0.5麦氏单位）相同。 (2)用无菌棉拭子蘸取菌液，在管壁上挤压去掉多余菌液。用棉拭子涂布整个M-H培养基表面，反复几次，每次将平板旋转60度，最后沿周边绕两圈，保证涂均匀。 (3)待平板上的水分被琼脂完全吸收后再贴纸片。用无菌镊子取药敏纸片贴在平板表面，纸片一贴就不可再拿起。每个平板贴5张纸片，每张纸片间距不少于24mm，纸片中心距平皿边缘不少于15mm。在菌接种后15分钟内贴完纸片。 (4)将平板反转，孵育18～24小时后取出，用游标卡尺测量抑菌圈直径，从平板背面测量最接近的整数毫米数并记录（附表5）。抑菌环的边缘以肉眼见不到细菌明显生长为限。有的菌株可出现蔓延生长，进入抑菌环，磺胺药在抑菌环内出现轻微生长，这些都不作为抑菌环的边缘。结果判断依据鉴定所药敏纸片判定标准。 2 注意事项： (1)制备MH琼脂平板应用直径90mm平皿，在水平的实验台上倾注。琼脂厚为4±0.5mm（约25-30ml培养基），琼脂凝固后塑料包装放4℃保存，在5日内用完，使用前应在37℃培养箱烤干平皿表面水滴。倾注平皿前应用pH计测pH值是否正确(pH应为7.3)。pH过低会导致氨基糖苷类，大环内酯类失效，而青霉素活力增强。 (2) 药敏纸片长期储存应于－20℃，日常使用的小量纸片可放在4℃，但应至于含干燥剂的密封容器内。使用时从低温取出后,放置平衡到室温后才可打开，用完后应立即将纸片放回冰箱内的密封容器内。过期纸片不能使用, 应弃去。 (3) 不稳定药物如亚胺培南, 头孢克洛, 克拉维酸复合药等, 应冷冻保存, 最好在-40 ℃以下。 (4) 保证质控菌株不变异的简便方法，将新得到的冻干菌株接种含血的M-H平板复活。然后每株细菌接种10支高层琼脂管，放置冰箱保存。每月取出一支，传出细菌供常规用。待用剩至最后一支，可传种在M-H平板上，再接种一批高层琼脂管备用。如此可保证原始菌种永不接触抗菌素。
改良银盐染色法在幽门螺旋杆菌(HP)临床检验中的应用价值探讨
改良银盐染色法在幽门螺旋杆菌（HP）临床检验中的应用价值探讨 目的介绍我院对传统银盐染色法的改良方法及在幽门螺旋杆菌临床检验中的应用效果与价值。方法对我院收治的417例患者采用我院改良银盐染色法进行幽门螺旋杆菌的检验，同时与快速尿素酶试验和14C-尿素呼气试验两种检验方法进行对比。结果我院改良银盐染色法对幽门螺旋杆菌的阳性检出率、敏感度以及特异度均显著高于其他两种方法，比较均有统计学意义（P＜0.05）。结论我院改良银盐染色法在幽门螺旋杆菌临床检验中不仅阳性检出率、敏感度、特异度均令人满意，而且较传统银盐染色法在操作流程方面更为合理简便，建议在临床进一步推广使用。 标签：幽门螺旋杆菌；检验；银盐染色法；改良 幽门螺旋杆菌（Helicobacter pylori，Hp）为一种微需氧的革兰阴性螺旋状细菌，其不仅是慢性活动性胃炎与消化性溃疡的重要致病菌，而且也是萎缩性胃炎与肠上皮化生等癌前病变的促成因子之一，故国际卫生组织（WHO）已将其列为第一类致癌因子，并建议临床应加强对Hp的检验工作[1]。但就其检验方法来看，银盐染色法（Warthin-Sharry，W-S）可谓是目前应用最为普遍同时效果也最为满意的检验方法之一，但基于该方法在操作方面的复杂性，以至于在不同区域不同医疗机构中的具体开展流程时常存在有不同程度的差别，且多数均又存在不尽相同的不完善之处[2]。近些年内，我院在传统W-S法基础上进行了一定改良工作并在临床实践中获得了颇为满意的效果，现报道如下。 1资料与方法 1.1一般资料选择于2012年5月～2014年6月因表现有不同程度消化系统症状并在我院接受胃镜检查的417例患者作为本研究对象，其中包括男255例，女162例；年龄18～71岁，平均（40.8±15.6）岁。所有患者均排除近1个月内有使用过任何抑酸药物及抗Hp药物者以及近1 w内有出现急性消化道出血者。 1.2方法所有患者均在接受检查前保持12 h以上的空腹，准备妥当后即在电子胃镜辅助下于距幽门3 cm处取胃黏膜3块待检。其中2块分别常规采用快速尿素酶试验（RUT法）与14C-尿素呼气试验（14C-UBT法）进行檢验[3]。另1块则采用我院改良W-S法进行检验，具体方法为：首先对标本采用0.14 mol/L 的甲醛水溶液进行固定处理，石蜡包埋切片（以4 um厚度为宜），接着采用二甲苯脱石蜡，之后再进行脱苯处理，采用各级乙醇过度到蒸馏水的程序进行刷洗，最后再将样本在避光条件下置于维持温度在60℃浓度为0.06 mol/L的AgNO3水溶液中进行1 h的侵染处理，完成染色后再次进行双蒸馏水刷洗，接着将样本置于显影液中进行显影，若在2～4 min内观察到有出现组织变为棕褐色时即可结束显影，同时倾倒出显影液，并用自来水对切片适当涮洗，最后再将切片脱水处理至透明，采用光学树脂封固后即可供医生阅片诊断。 1.3阳性标准RUT法中若标本在试剂中放置30 min内变为红色即认为是阳
常见抗真菌药物比较
常见抗真菌药物比较 表1，常见抗真菌药物抗菌谱比较 1、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、棘白菌素、多烯类抗菌谱摘自于第39版桑福德抗微生物治疗指南，咪康唑、丙烯胺类抗菌谱搞自于产品说明 2、-无活性；±可能有活性；+有活性，三线治疗（至少临床有效）；++有活性，二线用药（临床作用稍差）；+++有活性，一线用药（临床常常
有效）； 3、棘白菌素类、伏立康唑、多烯类尿中浓度很低；
胃肠道反应： 特比奈芬>咪康唑>两性霉素B >两性霉素B脂质体>伊曲康唑>伏立康唑、氟康唑>米卡芬净、卡泊芬净肝功能不良反应： 两性霉素B >两性霉素B脂质体>卡泊芬净、米卡芬净>伊曲康唑>伏立康唑>氟康唑 米卡芬净说明书中黑框警告：有严重肝损害的报道，有导致肝脏肿瘤的潜在风险。 肾功能不良反应： 两性霉素B >两性霉素B脂质体>伊曲康唑>伏立康唑>氟康唑>卡泊芬净、米卡芬净
与细菌感染性比较，侵袭性真菌感染发病隐匿、不易诊断，抗真菌治疗目标性差，合理使用抗真菌药物已经成为临床严峻的挑战。临床医师需要加强对侵袭性真菌感染的关注，掌握不同类别抗真菌药物特点，合理使用。 临床可供使用的治疗侵袭性真菌感染的药物有如下几类，各自特点不同，需要注意选择。 两性霉素B及其脂类制剂 两性霉素B是最早应用于临床的治疗侵袭性新型真菌感染药物，其普通制剂为去氧胆酸盐，不良反应明显。近年来开发的两性霉素B脂制剂安全性明显提高，成为临床重要的侵袭性真菌感染治疗药物。这些制剂包括两性霉素B脂质复合体、两性霉素B胶质分散体、两性霉素B脂质体。 该类制剂特点为：①药物易分布于网状内皮组织，肝、脾和肺组织中，减少肾组织浓度，低血钾少见，肾毒性均低于普通制剂。②临床可应用较高剂量，一般3~6mg/(kg.d)，滴速相对快。③长程用于艾滋病病人，对曲霉菌、隐球菌、念珠菌的耐受性好。④脂类制剂的剂量为常规制剂的3～5倍时,治疗念珠菌菌血症和隐球菌脑膜炎的疗效与常规制剂相仿。 三唑类抗真菌药物 此类药物包括氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑等，氟康唑已在临床应用多年，主要对酵母样菌具有抗菌活性，对曲霉缺乏抗菌作用。由于长期应用，部分真菌已产生耐药性，临床必须加以关注。 伊曲康唑对深部真菌与浅表真菌都有抗菌作用，对皮肤癣菌、酵母菌、曲霉菌属、组织胞浆菌属、巴西副球孢子菌、申克孢子丝菌、着色真菌属、枝孢霉属、皮炎芽生菌以及各种其他的酵母菌和真菌感染有效。目前已有胶囊、口服液和静脉注射三种剂型。胶囊吸收较差，以羟丙基环糊精为助溶剂的口服液，生物利用度可达55%。伊曲康唑脂溶性强，在肺、肾脏、肝脏、骨骼、胃、脾脏和肌肉中的药物浓度比血浆浓度高2~3倍。主要在肝脏中代谢，主要代谢产物为有活性的羟基伊曲康唑，平均终末半衰期为33ｈ。口服液与注射液可应用于侵袭性真菌感染，如曲霉病、芽生菌病、组织胞浆菌病、球孢子菌病，亦用于AIDS患者隐球菌病的长程治疗和中性粒细胞减少症患者真菌感染的预防与治疗。常见不良反应为胃肠道不适，如厌食、恶心、腹痛和便秘。较少见的副作用包括头痛、可逆性肝酶升高、月经紊乱、头晕和过敏反应。 伏立康唑是从氟康唑衍生的三唑类抗真菌药，抗菌谱广、抗菌作用强。对念珠菌属、新型隐球菌和毛孢子菌均有良好的抑制活性；对一些霉菌，以及荚膜组织胞浆菌等都有抑制作用，对足放线病菌属、镰刀菌属也具有抗菌活性。本品口服后迅速吸收，血浆达峰时间为1~2h，生物利用度高达96％，蛋白结合率58%，食物可影响本品的吸收，因此应在进食后1~2h服用。给予负荷剂量后，24h内其血药浓度接近稳态浓度。在组
特殊细菌药敏试验规范化操作系列
特殊细菌药敏试验的规范化操作 一、目前我国细菌药敏试验现状 20年以来，我国在卫生部和各地临床检验中心和检验学会的共同努力下引进CLSI药敏系列标准，使全国微生物实验室能在同一标准下进行质量控制活动。当前，微生物实验室对常见临床分离细菌的药物敏感试验的水平已有了显著的提高，但对特殊细菌的药敏试验的各个环节的规范操作还不能得到普及，对目前还无折点的细菌能否做药敏试验，以及如何判断细菌的药物敏感和耐药，仍然概念模糊，有待进一步规范和普及。 目前常见错误做法： （一）铜绿假单孢菌的药敏判断标准用于其他非发酵细菌；嗜血杆菌的标准用于卡他莫拉菌等的错误做法时有发生。 （二）借用同属细菌敏感标准 （三）借用同类抗生素的敏感标准 二、各菌属的药物敏感性报告及试验方法的CLSI药敏标准 （一）“嗜麦芽”菌属药敏报告标准 1.CLSI对“嗜麦芽”纸片药敏判断标准 药物名称纸片含量ug/片耐药 R 中介I 敏感S 米诺环素30 ≤1415-18 ≥19 左氧氟沙星 5 ≤1314-16 ≥17 复方新诺明 1.25/23.75 ≤1011-15 ≥16 2.CLSI对“嗜麦芽”稀释法判断标准 药物名称S I R 替卡西林/棒酸≤16/232/2-64/2 128/2 头孢他定≤816 ≥32 米诺环素≤48 ≥16 左氟沙星 2 4 ≥8 复方新诺明≤2/38- 4/76 氯霉素≤816 ≥32（二）无折点细菌的药物敏感试验报告 1. 其他药物的敏感性报告: CLSI推荐的药物可以报告MIC值和敏感度（S、I、R），临床需要的其他药物的药敏试验报告可以直接报告MIC值但不报告S、I、R。 2. 不要用认为相近细菌的折点代替报告S、I、R，这会误导医生用药。
药敏试验方法1
药敏试验方法： K-B法： 1 从孵育了16-24小时的琼脂平板上（血平板），挑出单个菌落，直接用生理盐水制成0.5麦氏单位。 2 在15分钟内，用无菌棉拭子蘸取调好的菌液，在液面上方管壁处旋转并用力挤压几次，以从中挤出过多的菌液。 3 用棉拭子在无菌的M-H培养基表面化线接种，再重复操作两次，每次将平板转动60度，每次接种都应保证接种物均匀分布，最后用棉拭子涂抹平板的边缘。 4 将确定好的药敏纸片分贴到平板表面。每个纸片都应压一下，以保证与平板表面完全接触。每个纸片中心间距24mm。纸片一旦与平板接触，不应再移动。 5 贴完纸片后，应在15分钟内放入35度孵箱。嗜血杆菌属，链球菌属放入3%-5%的CO2烛缸。 6 孵育24小时以后，测量各药敏纸片抑菌圈直径，与NCCLS手册比较，作出结果判断。 说明：细菌药敏结果的判断以NCCLS为标准，所以药敏试验的每一步都应严格按照NCCLS操作，否则将失去意义。链球菌、奈瑟菌属、流感嗜血杆菌、除铜绿假单孢菌和不动杆菌外的假单孢菌属不用K-B法. 肺炎链球菌胶乳凝集测定法 1 在一干净玻片上分别滴两滴生理盐水。 2 从冰箱取出鉴定试剂(Slidexpneumo-kit)于室温。 3 在其中一滴生理盐水上滴加R1试剂，在另外一滴上滴加R2试剂，用搅拌棒混匀。 4 轻轻晃动玻片2分钟，观察结果。 5 2分钟内，如R1出现凝集为阳性；如R1和R2均未出现凝集为阴性。 注：R3为阳性对照。 药敏纸片的选择 1、革兰阴性杆菌（肠杆菌科） 头孢噻肟（CTX）头孢唑林（CZ）头孢他定（CAZ） 氨苄西林（AM）哌拉西林（PIP）阿米卡星（AN） 头孢噻吩（CF）环丙沙星（CIP）头孢呋辛（CXM） 庆大霉素（GM）头孢噻肟/棒酸（CTX/CA） 头孢他定/克拉维酸（CAZ/CA）羧苄青霉素（CB） 奥格门丁（AMX/CA）哌拉西林/三唑巴坦（PIP/TZ） 亚安培南头孢匹肟（FEP）头孢克罗（CEC） 2、铜绿假单孢菌/不动杆菌 妥布霉素（TM）阿米卡星（AN）安曲南（AZT） 头孢哌酮（CFP）哌拉西林（PIP）头孢匹肟 头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP）头孢他定（CAZ） 左旋氧氟沙星（OFL）亚安培南哌拉西林/三唑巴坦 3、金黄色葡萄球菌 苯唑西林（OX）青霉素G（P）头孢唑林（CZ）阿米卡星（AN） 红霉素（E）头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP） 万古霉素奥格门丁（AMX/CA）哌拉西林/三唑巴坦 头孢噻吩（CF） 4 、肠球菌 氨苄西林（AM）万古霉素环丙沙星（CIP） 庆大霉素（GM）红霉素（E）氧氟沙星（OFL） 5、除肺炎链球菌外链球菌 氨苄西林（AM）头孢噻肟（CTX）万古霉素
药敏试验在幽门螺杆菌补救治疗中的应用价值
龙源期刊网 https://www.360docs.net/doc/4d8229516.html, 药敏试验在幽门螺杆菌补救治疗中的应用价值 作者：蔡文超冯晓峰孙卫东郑永志 来源：《中外医学研究》2017年第10期 【摘要】目的：研究幽门螺杆菌药敏试验在幽门螺杆菌补救治疗中的应用价值。方法： 选取笔者所在医院门诊自2014年1月-2015年12月经标准方案初治失败的Hp阳性患者114例，按随机数字表法分为研究组和对照组，各57例，对照组采用含铋剂的四联方案：雷贝拉唑10 mg+阿莫西林1000 mg+左氧氟沙星200 mg+枸橼酸铋钾220 mg，2次/d，14 d为一疗 程。研究组根据药敏结果选择两种抗生素（剂量采用指南标准剂量）加用雷贝拉唑10 mg，2次/d，14 d为一疗程。分析药敏情况；治疗结束后4周行14C尿素呼气试验评估疗效，比较两组根除率，观察患者的主要症状改善情况及不良反应发生情况。结果：研究组阿莫西林胶囊、左氧氟沙星片、呋喃唑酮片、甲硝唑片、克拉霉素、四环素的敏感率分别为77.2%、22.1%、86.0%、24.6%、15.8%、82.5%。研究组的Hp根除率为94.7%（54/57），明显高于对照组的33.3%（19/57），差异有统计学意义（P0.05）；研究组上腹痛改善有效率为94.7%，明显高于对照组的29.8%，差异有统计学意义（P0.05）。结论：幽门螺杆菌药物敏感试验在补救治疗中是安全有效的，使选择的抗生素更有针对性，提高了根除率，改善了临床症状，为幽门螺杆菌的药敏试验的临床应用提供了依据。 【关键词】幽门螺杆菌；根除；铋剂；药敏试验 doi：10.14033/https://www.360docs.net/doc/4d8229516.html,ki.cfmr.2017.10.027 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2017）10-0056-02 幽门螺杆菌（helicobacter pylori，Hp）是一种寄生于人体胃黏膜组织的致病微生物，属革兰氏阴性菌，是消化系统许多疾病的重要致病原。我国幽门螺杆菌的感染率总体上仍然很高，成人感染率达40%～60%，尽管有多种根除方案，由于耐药的日益严重，初治的失败率超过了30%[1-2]。这些患者承受了更大的痛苦。幽门螺杆菌药物敏感试验可以更加有针对性的选择药物，在理论上看可以有效根除，有学者对此作出有益的探索[3]。第四次全国幽门螺杆菌感染 处理共识报告中指出，对于治疗失败后的患者在有条件时，可以进行药物敏感试验，但作用可能有限[4]。那么，药敏试验对于临床应用的价值如何？为此，本研究选取笔者所在医院门诊 自2014年1月-2015年12月经标准方案初治失败的Hp阳性患者114例，完成了幽门螺杆菌药敏试验在补救治疗中的应用价值的研究，取得了较为理想的疗效，现报告如下。 1 资料与方法 1.1 一般资料
药敏试验程序及步骤
药敏试验程序及步骤 微生物标本的采集 通常有血液、脑脊液、尿液、伤口的脓液、胸水腹水、粪便、痰液及泌尿生殖系统的分泌物。1）采集的一般原则： a早期采集 b 无菌采集注意对局部及周围皮肤的消毒，渎道底部采集的标本（外通道）正常菌群 寄生部位采集的标本应明确目的菌，采用选择培养基。 C 不同菌不同采集方法 D 采集适量标本，量不应过少，注意采集不同时间不同部位标本，要全面有特征 E 安全采集 2）标本处理 2h送到检验处，部分菌应保温于一定环境中保存注意安全尤其对烈性传染病。有时可以直接用抽取标本的注射器 如尸检组织、支气管洗液、心包液、痰、尿等标本要保存于4℃环境中，脑脊液保存于25℃ 3）各部位标本的采集及注意事项 A 血液 皮肤消毒采血部位采血量采血次数采血时间不同动物有所不同血液应马上送检室温保存不可冷藏。 配置的培养基血液和肉汤比为1：5～1：10 血液中常见的病原体引起的疾病有葡萄球菌菌血症，肠球菌菌血症、革兰隐性杆菌、厌氧菌菌血症真菌血症。 B 脑脊液 采集脑脊液一般用腰椎穿刺术获得。采集后立即送检，一般不要超过1h，避免凝固和混入血液一般取3～5ml 35度保温送检不可至于冰箱保存做病毒检查时应放置冰块4度保存72h
常见细菌性脑膜炎如流行性脑脊髓膜炎肺炎球菌脑膜炎，链球菌脑膜炎等 真菌性脑膜炎常见隐球菌脑膜炎假丝酵母菌脑膜炎等特别是免疫功能低下和恶性疾病患者易并发。如AIDS 恶性肿瘤严重糖尿病等 流行性乙型脑炎是一种人兽共患病肠道病毒可见多种病毒引起脑膜炎和肺炎 c 脓液标本的采集 首先用无菌生理盐水清洗脓液及病灶的杂菌，在采集标本，用针和注射器抽吸采取，再移入无菌容器立即送检也可用拭子在伤口深部采集渗出物，对于皮肤或下表皮的散播性感染，应采集病灶出边缘而非中央处的感染组织送检。脓肿标本以无菌注射器抽取为好，也可用排液法取得，先用70的酒精擦拭病灶部位，袋干燥后用以无菌刀切开排脓，以无菌拭子采取，不能及时送检可放冰箱冷藏，厌氧菌培养的标本只能放于室温下。厌氧菌感染的脓液常有腐臭味，采集和运送要注意不要接触空气，可直接针筒送检或置于厌氧运送培养基送检。 外伤性创伤感染以葡萄球菌和链球菌多见，放线菌，结核分枝杆菌，大肠埃希菌，铜绿假单胞杆菌也常见。深部感染极易引起破伤风和气性坏死感染。 烧伤创面最常见革兰阴性杆菌感染和革兰阳性球菌感染 急性化脓性骨关节炎常由金黄色葡萄球菌感染溶血性链球菌肺炎链球菌感染所致慢性化脓性骨关节炎慢性骨髓炎常由结合分支杆菌感染所致。 放线菌感染可发生在免疫功能下降时或由于拔牙口腔粘膜损伤一起的感染。 d痰液标本的采集 自然咳痰法和支气管镜采集法对呼吸道感染诊断有重要意义，细菌性肺炎为下呼吸道感染最常见的类型。支原体肺炎常以不典型肺炎表现。真菌性肺炎和病毒性肺炎也常见。 E 粪便标本的采集 用药前自然排便采集脓血粘液部分2～3g，粪便表面采样，液体便取絮状物1～2ml置于无菌容器内送检。 细菌性痢疾细菌真菌病毒引起的胃肠炎细菌性食物中毒致病性大肠埃希菌的肠道感染幽门螺杆菌感染导致消化性溃疡，主要部位是十二指肠球部。 F 尿液标本采集 采集清洁中段尿最好早晨取样，先清洗尿道口。必要时导尿或膀胱穿刺留尿样本采集容器要求清洁无菌、密封、加盖、防渗透、广口、容积大于50ml。主要主要经尿道口上行感染，极少数血道感染，可反映肾脏，膀胱，尿道，前列腺等处的炎症变化。
药敏试验在幽门螺杆菌补救治疗中的应用价值
药敏试验在幽门螺杆菌补救治疗中的应用价值目的：研究幽门螺杆菌药敏试验在幽门螺杆菌补救治疗中的应用价值。方 法：选取笔者所在医院门诊自2014年1月-2015年12月经标准方案初治失败的Hp阳性患者114例，按随机数字表法分为研究组和对照组，各57例，对照组采用含铋剂的四联方案：雷贝拉唑10 mg+阿莫西林1000 mg+左氧氟沙星200 mg+枸橼酸铋钾220 mg，2次/d，14 d为一疗程。研究组根据药敏结果选择两种抗生素（剂量采用指南标准剂量）加用雷贝拉唑10 mg，2次/d，14 d为一疗程。分析药敏情况；治疗结束后4周行14C尿素呼气试验评估疗效，比较两組根除率，观察患者的主要症状改善情况及不良反应发生情况。结果：研究组阿莫西林胶囊、左氧氟沙星片、呋喃唑酮片、甲硝唑片、克拉霉素、四环素的敏感率分别为77.2%、22.1%、86.0%、24.6%、15.8%、82.5%。研究组的Hp根除率为94.7%（54/57），明显高于对照组的33.3%（19/57），差异有统计学意义（P＜0.05）；研究组反酸改善有效率为98.2%，对照组有效率为96.5%，差异无统计学意义（P>0.05）；研究组上腹痛改善有效率为94.7%，明显高于对照组的29.8%，差异有统计学意义（P＜0.05）；研究组的不良反应发生率为7.0%，对照组为8.8%，差异无统计学意义（P>0.05）。结论：幽门螺杆菌药物敏感试验在补救治疗中是安全有效的，使选择的抗生素更有针对性，提高了根除率，改善了临床症状，为幽门螺杆菌的药敏试验的临床应用提供了依据。 标签：幽门螺杆菌；根除；铋剂；药敏试验 幽门螺杆菌（helicobacter pylori，Hp）是一种寄生于人体胃黏膜组织的致病微生物，属革兰氏阴性菌，是消化系统许多疾病的重要致病原。我国幽门螺杆菌的感染率总体上仍然很高，成人感染率达40%～60%，尽管有多种根除方案，由于耐药的日益严重，初治的失败率超过了30%[1-2]。这些患者承受了更大的痛苦。幽门螺杆菌药物敏感试验可以更加有针对性的选择药物，在理论上看可以有效根除，有学者对此作出有益的探索[3]。第四次全国幽门螺杆菌感染处理共识报告中指出，对于治疗失败后的患者在有条件时，可以进行药物敏感试验，但作用可能有限[4]。那么，药敏试验对于临床应用的价值如何？为此，本研究选取笔者所在医院门诊自2014年1月-2015年12月经标准方案初治失败的Hp阳性患者114例，完成了幽门螺杆菌药敏试验在补救治疗中的应用价值的研究，取得了较为理想的疗效，现报告如下。 1 资料与方法 1.1 一般资料 选取2014年1月-2015年12月在笔者所在医院门诊符合第四次全国幽门螺杆菌感染处理共识报告需要根除幽门螺杆菌且经标准方案初治失败的患者114例纳入本研究，采用完全随机、对照的临床研究方法将其按1∶1分为研究组和对照组。两组患者性别、年龄及临床症状等方面差异无统计学意义（P>0.05）。该项临床研究经医院伦理委员会审核通过。
幽门螺杆菌的检测方法
检测幽门螺杆菌方法 1. 抽血采样检测：即采用抽血的方法检测血清中幽门螺杆菌的抗体水平。因为受到幽门螺杆菌感染后，可在人体内产生相应的抗体，使检测结果呈现阳性，但是一般需要数月半载才呈阳性，因而幽门螺杆菌感染初期作该项检测时，检测结果常常会出现假阴性，从而使患者失去治疗的最佳时机。此外，由于幽门螺杆菌即使被根除．但该抗体下降缓慢，患者往往需要1—2年才能转阴，这样必然使治愈者长期呈现假阳性而接受着多余的治疗。 2．胃镜采样检测：可在患者需做胃镜检查时采样，在活检采样时一起作显微镜检查．检测是否有幽门螺杆菌，。如果为阳性，即可确诊幽门螺杆菌感染阳性。为了给患者制定合适的治疗方案，有时还可加做细菌培养和药物敏感试验。胃镜采样还存在下列问题：患者需要经受插镜之苦，若幽门螺杆菌呈灶性分布易导致漏诊(漏诊率达10％左右)。但凭借医生丰富的操作经验和正确采样，可降低其漏诊率。 3．呼气采样检测：该项检查灵敏度高．检出率和符合率也很高，患者无痛苦．是近年来最受人们欢迎的一种检测幽门螺杆菌的方法。具体方法可分为两种：14C呼气试验和13C呼气试验。其中14C呼气试验费用较低，但由于该项检查存在放射线危害，儿童、孕妇、哺乳妇女和年迈体弱者应慎用：对同一患者来说，也宜避免反复多次采用该种方法检测。13C呼气试验则无放射性，对人体无损害，而且检出率和符合率更高(接近100％)，各种年龄的患者都可采用该法，检查前受检者需空腹三个小时，在采样过程中，受检查者在半小时内服一颗胶囊，并先后呼三口气留取样本，就能十分准确地检测出是否存在幽门螺杆菌感染，13C呼气试验已被公认为目前检测幽门螺杆菌的最佳方法。 呼气试验 呼气试验，又名14C或13C尿素呼气试验，是一种敏感性高、特异性强、快速、简单、安全、廉价的Hp诊断方法，其准确率达95%以上，被国内外专家一致推荐为诊断Hp的金标准，在临床上已被广泛应用。 一、原理 Hp可产生高活性的尿素酶。当病人服用14C标记的尿素后，如患者的胃内存在Hp感染，胃中的尿素酶可将尿素分解为氨和14C标记的CO2，14C标记的CO2通过血液经呼气排出，定时收集呼出的气体，通过分析呼气中14C标记的CO2的含量即可判断患者是否存在幽门螺杆菌感染。 二、适用人群 1．临床怀疑有幽门螺杆菌感染的患者 2．急慢性胃炎和胃、十二指肠溃疡、黏膜相关性淋巴组织淋巴瘤患者 3．预防胃癌或有胃癌家族史者 4．幽门螺杆菌根除治疗后疗效评价和复发诊断 5．幽门螺杆感染的流行病学调查与筛选 三、检测方法 （一）病人准备：受检者必须停用抗生素和铋剂30天，停用质子泵抑制剂二周。检查前禁食6小时以上。
酵母样真菌药敏试验
一、目的： 指导实验人员准确完成酵母样真菌药敏试验（微量稀释法）。 二、适用范围： 怀疑酵母样真菌感染患者 三、检验原理： ATB FUNGUS 3试条包括16对杯状凹cupules。第一对不含任何抗真菌剂。用作阳性生长对照。另外的15对包含不同稀释度的5种抗真菌剂。用于测定最小抑菌浓度（MIC）和（或）区分临床敏感性。 将准备好的待测酵母样真菌的悬浮液转移到培养基中，并接种到试条上。孵育后，我们可以通过肉眼判读，或者应用A TB仪器或miniAPI判读杯状凹中液体的生长情况。获得MIC(两性霉素B[AMB])，氟康唑[FCA],伊曲康唑[ITR],伏立康唑[VRC],5-氟胞嘧啶[5FC]),将菌株分为敏感、中介或耐药。 四、职责：生物梅里埃 实验人员准确完成酵母样真菌药敏试验（微量稀释法） 试剂厂家： 规格：25测试／盒 内含物：-25个独立包装的A TB FUNGUS 3 试条，包括干燥剂 -25个孵育盖 -25安瓿A TB F2培养基 -25张结果记录单 -一份说明书 五、储存条件及有效期： 在包装盒上指示的有效期前，试条和培养基应在2-8℃下存放。 有效期为12个月。 六、工作程序： (一)试验的准备： 1、从包装中取出试条 2、在试条延长翼上记录下被测酵母菌株的编号 （二）接种物的准备： 1、打开一个API?0.85%氯化钠培养基安瓿（或API培养悬液） 2、采集不超过4天的菌落，制备成浊度相当于2 McFarland的悬浮液 3、用McFarland试剂盒的标准浊度管比较，或使用ATB比浊仪DENSIMAT 4、此菌悬液必须在准备后立即使用 5、使用一移液管转移20ul此悬浮液到一A TB F2培养基的安瓿中 （三）试验条的接种： 手工接种： 1、用ATB电子移液管混匀A TB F2培养基，避免产生气泡 2、使用ATB电子移液管在每个杯状凹中加入135ul的ATB F2 培养基（大约3*104酵母菌/毫升或4*103酵母菌/杯状凹）
药敏试验实验报告
药敏试验： 用药敏实验进行药物敏感度的测定，以便准确有效的利用药物进行治疗。目前，临床微生物实验室进行药敏试验的方法主要有纸片扩散法，稀释法（包括琼脂和肉汤稀释法），抗生素浓度梯度法（E-test 法），和自动化仪器等。 体外抗菌药物敏感性试验简称药敏试验（AST），是指在体外测定药物抑菌或杀菌能力的试验。 根据美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)近期推荐的标准，对非苛氧菌（肠杆菌科细菌、铜绿假单胞菌、和其他非肠科杆菌、葡萄球菌属细菌、肠球菌属细菌）和苛氧菌（嗜血杆菌属细菌、淋病奈瑟菌、肺炎链球菌和其他链球菌）选择常规药敏试验的首选药物（A 组抗生素）或临床使用的主要抗生素（B组抗生素）进行药敏试验。 抗菌药对细菌性传染病的控制起到了非常重要的作用，但由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗菌药，很多致病性细菌产生了耐药性，使得抗菌药对细菌性疾病的控制效果越来越差，不但造成药物浪费，而且还延误病情，给养殖户造成了很大的经济损失。 随着新型致病菌的不断出现，抗菌药的防治效果越来越差。并且各种致病菌对不同的抗菌药物的敏感性不同，同一细菌的不同菌株对不同抗菌药物的敏感性也有差异。长期以来，各种致病菌耐药性的产生使各种常用抗菌药物往往失去药效，以及不能很好的掌握药物对细菌的敏感度，所以一个正确的结果，可供临床医师选用抗菌药物的参考，并提高疗效。农业部动物检疫所青岛易邦生物工程有限公司动物
疫病诊疗中心总结出几套适合基层进行药敏试验的操作方法，现简单介绍如下。 纸片扩散法 该法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成浓度梯度。同时，纸片周围抑菌浓度范围内的菌株不能生长，而抑菌范围外的菌株则可以生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈，不同的抑菌药物的抑菌圈直径因受药物在琼脂中扩散速度的影响而可能不同，抑菌圈的大小可以反映测试菌对药物的敏感程度，并与该药物对测试菌的MIC呈负相关。 稀释法 稀释法药敏试验可用于定量测试抗菌药物对某一细菌的体外活性，分为琼脂稀释法和肉汤稀释法。实验时，抗菌药物的浓度通常经过倍比（lg2）稀释，能抑制待测菌肉眼可见生长的最低药物浓度成为最小抑菌浓度（MIC），一个特定抗菌药物的测试浓度范围应该包含能够检测细菌的解释性折点（敏感、中介和耐药）的浓度，同时也应该包含质控参考菌株的MIC.
细菌分离培养及药敏试验方法及步骤(内容充实)
细菌分离培养方法及操作步骤 无菌取血液或脏器、淋巴结划线接种于鲜血琼脂平板或血清琼脂平面培养基、普通肉汤培养基，37℃恒温培养24 h，观察其生长特性。目前细菌分离培养的常用方法有平板划线分离法、加热分离法和实验动物分离法。 平板划线接种法 这是目前临床上最常用的分离接种方法。它可以从被检病料中通过划线可使细菌分离、分散生长而形成单个菌落（有利于从含有多种细菌的标本中分离出目的菌），以便挑选可疑菌落作纯培养加以鉴定。具体操作： 1、右手持接种环，在酒精灯上火焰灭菌； 图1 病料采集图2 接种环灭菌 2、待接种环冷却后，挑取被检料少许，左手持琼脂平板，以食指为支点，用拇指和无名指将平皿揭开一空隙。大约20℃时，迅速
地将接种环轻轻地涂布在培养基的边缘。 3、在涂布处来回移动作曲线形划线接种。（注意：划线时，以腕力使接种环在琼脂平板表面划动，尽量不要划破培养基，划的线条要密，但不能重复旧线，以免培养物形成菌苔。） 图3 平板划线接种法 4、划线完毕，合上平皿盖，将琼脂平板倒置，放入37℃温箱内培养18－24小时。 注意：分离培养用的平板培养基应表面干燥，可于临用前置37℃孵育箱内30分钟，这样表面即干燥有利于分离培养，又使培养基预温，对培养某些较娇弱的细菌有利。
细菌药敏试验方法操作步骤 药敏试验是抗菌药使用以前必不可少的一个基本环节，一个正确的药敏结果能够科学的指导养殖户用药，减少抗菌素使用的盲目性，从而减少养殖户损失。在临床实际生产中具备重要意义。 1、在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。 图4 接种环划线 2、以无菌操作将灭菌的不锈钢小管（外径为4毫米、孔径与孔距均为3毫米，管的两端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培
三种常用检测幽门螺杆菌方法的比较分析
三种常用检测幽门螺杆菌方法的比较分析 发表时间：2018-09-13T14:29:36.373Z 来源：《中国结合医学杂志》2018年4期作者：龙湘英 [导读] 目的：探究采用三种常规检测幽门螺杆菌方法（血清法、胃粘膜病例活检法、尿素片呼气试验）的效果和价值。 湘潭市红十字仁和医院检验科湖南湘潭 411100 【摘要】目的：探究采用三种常规检测幽门螺杆菌方法（血清法、胃粘膜病例活检法、尿素片呼气试验）的效果和价值。方法：择取32例有消化系统症状检测者（检查时间：2015年9月至2016年9月），为患者进行三种常用检测幽门螺杆菌方法，对比具体的效果。结果：32例有消化系统症状的检测者，诊断为幽门螺旋杆菌感染者为28例（幽门螺旋杆菌感染发生率为87.50%）。阳性率从低到高分别为：黏膜慢性炎症（34.26%）、慢性萎缩性胃炎（38.55%）、胃癌（38.12%）、胃溃疡（70.89%）、十二指肠溃疡（88.97%）。三种检测方法对比：（1）在特异性上，尿素片呼气试验（94%）＞血清法（90%）＞胃粘膜病例活检法（72%）；（2）在灵敏度上，尿素片呼气试验（99%）＞胃黏膜病理活检法（96%）＞血清法（83%）；（3）在效率上，尿素片呼气试验（98%）＞血清法（95%）＞胃粘膜病例活检法（90%）；（4）在阳性预测率上，尿素片呼气试验（99%）＞血清法（97%）＞胃粘膜病例活检法（94%）；（5）在阴性预测值上，尿素片呼气试验（96%）＞胃黏膜病理活检法（76%）＞血清法（57%）。结论：为了保证对临床针对提供准确的依据，需要采用三种方法结合进行幽门螺杆菌的诊断，如果结果呈现两种阳性则为阳性，三种阳性则为根除，但是避免以尿素酶法作为治疗后进行检测的指标，在取材中需要采用多处。 【关键词】幽门螺杆菌；血清法；胃粘膜病例活检法；尿素片呼气试验 幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，HP）是一种分布在胃部和十二指肠区域内的一种细菌界、变形菌门、ε-变形菌纲、弯曲菌目、弯曲菌科、螺杆菌属、幽门螺杆菌。幽门螺旋杆菌有芽胞，并且现阶段已经成为诊断慢性胃炎、消化性溃疡等疾病的主要因素，机体消化系统的平稳性受到破坏，导致幽门螺杆菌大量的滋生，影响机体的健康[1]。现阶段，检测幽门螺杆菌的方式有很多，本文选择32例检测者探究血清法、胃粘膜病例活检法、尿素片呼气试验的检测价值。 1.资料和方法 1.1临床资料 择取32例检测者（检查时间：2015年9月至2016年9月），为患者进行三种常用检测幽门螺杆菌方法。32例检测者中，女性患者11例（34.37%），男性患者21例（65.63%）；年龄最小21岁，年龄最大为65岁，平均年龄为（35.69±9.65）岁。 1.2检测方法 血清法：（1）采用间接酶联免疫吸附测定（ELISA）法进行血清学检测；（2）超声用数拾株已确定的菌液粉碎药盒；（3）离心；（4）蛋白定量，等量混合作为抗原。（5）邻苯二胺（C6H8N2）作为底物进行显色，通过光密度的大小进行结果的判定。 胃粘膜病例活检法：培养胃粘膜活检标本，如培养出幽门螺杆菌即可诊断为幽门螺杆菌感染。 尿素片呼气试验：利用内源性尿素酶，可分解胃内及核素标记的尿素的特点，生成二氧化碳和氨气，二氧化碳被吸收后经人体肺呼出，收集呼气样本，分析人体呼气中的14C或13C，诊断幽门螺杆菌。 1.3统计学分析 对32例检测者采用病例观察实验的方式，分析三种检测方法测得的相关数据。 2.结果 幽门螺旋杆菌感染率：32例有消化系统症状的检测者，诊断为幽门螺旋杆菌感染者为28例（幽门螺旋杆菌感染发生率为87.50%）。阳性率从低到高分别为：黏膜慢性炎症（34.26%）、慢性萎缩性胃炎（38.55%）、胃癌（38.12%）、胃溃疡（70.89%）、十二指肠溃疡（88.97%）。 三种检测方法对比：（1）在特异性上，尿素片呼气试验（94%）＞血清法（90%）＞胃粘膜病例活检法（72%）；（2）在灵敏度上，尿素片呼气试验（99%）＞胃黏膜病理活检法（96%）＞血清法（83%）；（3）在效率上，尿素片呼气试验（98%）＞血清法（95%）＞胃粘膜病例活检法（90%）；（4）在阳性预测率上，尿素片呼气试验（99%）＞血清法（97%）＞胃粘膜病例活检法（94%）；（5）在阴性预测值上，尿素片呼气试验（96%）＞胃黏膜病理活检法（76%）＞血清法（57%）。 表1 对比三种检测方法 {n（％）} 3.讨论 临床上，幽门螺杆菌感染的检测分为侵入性检测（Invasive tests）和非侵入性检测（Noninvasive tests）。侵入性检测指通过胃镜的活检标本再进行检测的方法，缺点在于有一定创伤性和活检部位的局限性；优势在于可明确有无胃癌、消化性溃疡、胃炎等重要疾病。非侵入性检测指不经胃镜活检的检测方式，优势在于无创且避免活检部位的局限性。 经过本文的研究，发现在本次实验中采用尿素片呼气实验的检验效果最好，且该种检验方式具有无创的特点，可以进行反复检测。尿素片呼气实验（Urea tablet exhalation test）被认为是检验幽门螺旋杆菌的金标准，相对比而言，患者只需只要轻松吹口气，即可精确准确诊断患者胃内的幽门螺杆菌情况，不仅无创伤、安全、卫生，更具有方便、快捷、准确等突出优点，可以很好的反应患者全胃的感染情况[2]。胃粘膜病例活检法（Gastric mucosa biopsy）的检查方法特异性虽然好，但是会受到菌体分布情况的影响，还会被革兰阴性杆菌干扰