猪瘟与高致病性蓝耳病混合感染的诊治——毕业论文
毕业设计（论文）
设计(论文)题目：一例猪瘟与高致病性蓝耳病混合感染的诊治学生姓名：高修歌指导教师：张淼
二级学院：动物科学与技术学院专业：动物医学
班级： 09级（2）班学号： 0910101099
提交日期：年月日答辩日期：年月日
目录
摘要..............................................................................II Abstract........................................................................III 前言 (1)
一、材料与方法 (2)
1.1材料 (2)
1.1.1主要试剂 (2)
1.1.2主要仪器 (2)
1.2发病情况 (2)
1.3病理剖检 (3)
1.4细菌学检测 (3)
1.5血清学检测 (3)
1.5.1猪瘟抗体ELISA检测方法 (3)
1.5.2猪蓝耳病抗体及猪伪狂犬病抗体ELISA检测方法 (4)
1.6病原检测 (5)
1.6.1DNA提取 (5)
1.6.2RNA提取 (5)
1.6.3反转录 (5)
1.6.4PCR检测 (6)
二、结果与分析 (7)
2.1病理变化 (7)
2.2细菌学检测结果 (7)
2.3血清学检测结果 (8)
2.4病原学检测结果 (9)
2.5治疗措施及转归情况 (10)
三、讨论与分析 (10)
参考文献 (13)
致谢 (15)
一例猪瘟与高致病性蓝耳病混合感染的诊治
摘要
本文详细报告了一起猪瘟与高致病性蓝耳病混合感染的诊治情况。江苏某规模化养猪场发生了一起以仔猪和保育猪呼吸困难，腹部和末端发红，精神沉郁，少食或不食，腹泻，呕吐及妊娠母猪流产和木乃伊胎显著增加为临床症状，绝大多数发病猪从发病到死亡不超过5天。死前出现划水样神经症状，呼吸急促，消瘦，高热稽留为特征的疾病，经流行病学调查、临床观察、病理剖检与实验室检测，诊断为猪瘟与猪高致病性蓝耳病混合感染，通过综合性治疗与预防措施取得了良好的效果，为目前规模化猪场猪瘟与猪高致病性蓝耳病混合感染的诊断与治疗提供了可行性建议。
关键词：高致病性蓝耳病；猪瘟；混合感染；诊治；仔猪
金陵科技学院讨论与分析
金陵科技学院学士学位论文Abstract
A case of classical swine fever and the highly
pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome disease diagnosis and treatment of mixed
infection
Abstract
In this paper, a detailed report of the classical swine fever with mixed infection with the highly pathogenic Porcine reproductive and respiratory syndrome disease diagnosis and treatment. A large-scale pig farms in Jiangsu occurred in piglets and conservation of pigs, difficulty breathing, abdominal and redness at the end, spirit is depressed, eat less or don't eat, diarrhea, vomiting and reproductive failure in female pigs and mummy foetus pregnancy are associated with a significantly increased as the clinical symptoms, the vast majority of pig disease from onset to death for no more than 5 days. Died zoned water neural symptoms, shortness of breath, angular, of diseases characterized by high fever continued, the epidemiological investigation, clinical observation, pathological autopsy and laboratory tests, a diagnosis of swine fever and mixed infection of highly pathogenic Porcine reproductive and respiratory syndrome disease, through comprehensive treatment and prevention measures have achieved good effect, for the large-scale pig farms swine fever and mixed infection of highly pathogenic Porcine reproductive and respiratory syndrome disease diagnosis and therapy provides a feasible Suggestions.
Key words:highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome disease; classical swine fever; mixed infection; diagnosis and treatment; piglet
前言
近年来，随着我国养猪业的高速发展，加之畜禽商品贸易流通频繁，猪病的种类越来越多，疾病也越来越复杂，防控难度不断加大[1,2]。对全国养猪业的健康生产造成了巨大威胁，尤其是散养户，中小型规模化养猪场，受猪病影响生产经济效益损失惨重，大型规模化猪场也同样受到疾病困扰，生猪养殖压力巨大[3]。而猪场发病又多以混合感染，继发感染为主，单一发病很少，据张荣连[4]可知猪场80%以上发病都以两种或多种病原的混合感染或继发感染形式出现。在众多的混合感染中，既有病毒混合感染、细菌混合感染，还有病毒细菌与寄生虫的混合感染[6]。而病毒病的混合感染居多且危害严重，临床上以蓝耳病毒与猪瘟病毒、蓝耳病毒与圆环病毒、猪瘟病毒与伪狂犬病毒、蓝耳病毒与伪狂犬病毒混合感染常见[1,2,3,4,5]。这几种病毒病均为免疫抑制性疾病，感染后导致猪只抵抗力下降，处于亚健康状态，使多种病毒、细菌、寄生虫等病原体趁虚而入，导致疾病症状复杂，疫苗免疫失败或药物治疗不佳[4]，并出以下综合征：猪呼吸道疾病综合征（PRDC）、猪断奶后多系统衰竭综合征（PMWS）、猪皮炎肾病综合征（PDNS）[1,2,3]及06年夏季出现在我国的“高热病”[6]，导致猪群发病率和死亡率明显升高[1]，故猪病的防控形势依然严峻。
猪瘟(Classical Swine Fever，CSF）是我国乃至全球养猪业最重要的传染病之一[7]，早期叫做猪霍乱、烂肠瘟，在欧洲称它为“古典猪瘟”以与非洲猪瘟相区分。它是由猪瘟病毒（CSFV）引起的猪的一种急性、热性、高度接触性传染病[8]，严重影响我国及世界各国养猪业的发展，造成巨大的经济损失。为此，国际兽医局（OIE）将此病列为A类法定传染病之一，也是我国法定的一类动物传染病[8]。近年来我国出现了温和型猪瘟、非典型猪瘟、隐性猪瘟及免疫后发病的情况，临床症状与病理变化均不明显，持续感染及先天免疫耐受现象频发，免疫失败现象增加，与其他疾病的混合感染现象普遍[9]。这些新的现象出现，意味着猪瘟的防控愈加发杂，要想全面消灭控制该病尚需广大兽医工作者不懈努力。
蓝耳病（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS）是猪繁殖与呼吸综合症的俗称，而高致病性蓝耳病（HP-PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合症病毒（PRRSV）变异株引起的一种急性高致死性传染病[8]。据杨晓花[10]等报道，仔猪发病率可达100%、死亡率可达50%以上，母猪流产率可达30%以上，育肥猪也能发病死亡,因此对养猪业健康生产构成严重威胁。加上PRRSV的感染可导致猪只的免疫抑制，使其免疫系统功能下降，在一些诱发因子的刺激下易引起继发感染
和混合感染，致使猪病临床症状更加复杂，诊断难度增加，防治效果较差[11]。据田克恭[12]报道我国目前绝大部分猪场均为蓝耳病阳性猪场，对我国养猪业造成的经济损失巨大，因此蓝耳病的防控依然是近期我国猪病防控的热点，可见在生产中预防蓝耳病的发生和传播意义重大。猪瘟与高致病蓝耳病的混合感染是临床上常见的一种现象，目前，我国很多猪场都存在这两种病原体混合感染的情况，已有几十篇关于此病的报道。据王隆柏[13] 等在2011年对102个规模化猪场猪瘟、猪蓝耳病、猪伪狂犬病原的检测结果可知，猪瘟与蓝耳病的混合感染猪场有31个，占猪场总数的30.4%；马慧玲[14]等在2012年对126个猪场发病情况调查分析，猪瘟与蓝耳病的混合感染占到15.44%，曲建议[15]的研究表明，在我国猪瘟与蓝耳病混合感染还呈上升趋势，给养猪业蒙上一层阴影。面对如此严峻的形势，对于猪瘟与蓝耳病混合感染的快速诊断与确切治疗就显得意义重大，是我们广大兽医工作者应该认真研究的课题方向。
本文详细报道了江苏省某规模化养猪场发生的一起猪瘟与高致病性蓝耳病混合感染的诊治过程，通过综合性的治疗和防控措施取得了良好的效果，为目前规模化猪场猪瘟与高致病性蓝耳病等混合感染病例的诊断与治疗提供了一定参考。
一、材料与方法
1.1材料
1.1.1主要试剂
猪蓝耳病抗体ELISA检测试剂盒，猪伪狂犬抗体ELISA检测试剂盒，猪瘟抗体ELISA检测试剂盒购自IDEXX公司。Trizol Reagent、反转录酶和Taq酶分别购自Invitrogen、Promega和TaKaRa公司。
1.1.2主要仪器
3K15高速冷冻离心机（德国Sigma公司）；7500实时荧光定量PCR仪（ABI 公司）；JS2380A自动凝胶图像分析仪（上海培清科技公司）；LDZM型立式智能压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）；JA2003型电子天平（上海良平仪器仪表有限公司）；HG101-1型电热鼓风干燥箱（南京电器三厂）；DK-8D型电热恒温水槽（上海一恒科技有限公司）；JN303-4型电热恒温培养箱（南京市江宁电器仪器厂）；QB296型梯度PCR仪（英国Quanta Biotech公司）；HYQ-2121A型涡旋混匀器（苏州捷美电子有限公司）；紫外分光光度计（Eppendorf公司）。1.2发病情况
该发病猪场位于江苏南通，发病期间基础母猪450头，主要是断奶前后（21日龄断奶）后哺乳仔猪和保育猪呼吸困难，腹部和末端发红，精神沉郁，少食或不食，腹泻，呕吐，绝大多数发病猪从发病到死亡不超过5天。死前出现划水样神经症状，呼吸急促，消瘦，高热稽留。发病率30%，死亡率接近55%。妊娠母猪流产和木乃伊胎显著增加。母猪猪蓝耳病疫苗，猪瘟疫苗和猪伪狂犬疫苗分别于产前60天，产前30天和产前20天免疫。
1.3病理剖检
选择3头典型症状的仔猪进行病理剖检，并记录结果。
1.4细菌学检测
采集心包积液、肺和腹股沟淋巴结,按实验室常规方法进行涂片,采用革兰氏染色的方法，按《兽医微生物实验指导》所述步骤进行染色，并用普通光学显微镜在400倍放大倍数下镜检。具体操作步骤如下：
（1）涂片：取一洁净载玻片，在载玻片上滴一小滴水，用无菌镊无菌操作挑取少许病变组织于水滴中，轻轻涂抹在载玻片上，室温自然干燥，火焰固定。（2）初染：草酸铵结晶紫染色液，1-2分钟左右.水洗：倾去染液，用自来水的细水流由载玻片上端流下无色为止。
（3）煤染：革兰氏典液染色1-3分钟，水洗。
（4）脱水：酒精脱水30秒-1分钟，水洗。
（5）复染：石碳酸复红染10-20秒，水洗。
（6）镜检：待标本片完全干燥后，先用低倍镜和高倍镜观察，再用油镜观察。
革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。
1.5血清学检测
对采集的22份血清样本，采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测猪瘟（CSF）、猪蓝耳病(PRRS)、猪伪狂犬病（PR）血清抗体。猪瘟抗体检测方法按照美国IDEXX公司试剂盒说明书严格操作，猪蓝耳病抗体与猪伪狂犬病抗体检测方法按照武汉科前动物生物制品有限责任公司的试剂盒严格操作。具体方法如下：
1.5.1猪瘟抗体ELISA检测方法
（1）洗涤液配制: 去离子水将浓缩洗涤液按1：10稀释，即为工作洗涤液。各试剂盒中的试剂均单独稀释并作好标记，用于对应的试剂和盒上，不混用。
（2）样本稀释: 用样本稀释液将待检血清样本按1：40稀释，混匀。
（3）加样反应：取猪瘟及口蹄疫抗体检测试剂盒里的预包被板，每块板子设置阴性对照2孔，阳性对照及空白对照各1孔，剩余孔为样品检测孔。阴性对照孔、阳性对照孔及空白对照孔每孔分别加入阴性对照品、阳性对照品和样品稀释液
3
100μL，样本检测孔每孔加已稀释血清样本100μL。37℃避光反应30min后，甩去孔内液体，洗板机洗涤3次，拍干。
（4）加酶反应：除空白对照孔外，每孔加酶结合物50μL。37℃避光反应30分钟后，甩去孔内液体，如上洗涤，拍干。
（5）显色反应：每孔先加底物液A50μL、再加底物液B50μL，混匀，室温避光显色10min，混匀，37℃避光显色10min。
（6）终止反应：加终止液50μL，终止反应
（7）酶标仪检测结果：以空白对照调零，酶标仪450nm处读取OD值。
（8）结果判定：首先对阴阳性对照进行判定：阴性对照呈无色或浅黄色，阳性对照呈明显黄色，表示试验有效。结果所有板子阴性对照呈无色，阳性对照均为明显黄色，说明所有检测猪瘟抗体ELISA试剂盒有效。有效待检孔OD值大于阴性对照OD值平均值的2.1倍者判为阳性。如阴性对照A值的平均值低于0.08时按
0.08计算。
1.5.2猪蓝耳病抗体及猪伪狂犬病抗体ELISA检测方法
（1）洗涤液配制：取出各试剂盒浓缩的洗涤液恢复至室温，之后于37℃水中加热10min，摇动使沉淀的盐溶解，然后用去离子水作20倍稀释。各试剂盒中的试剂均单独稀释并作好标记，用于对应的试剂和盒上，不混用。
（2）样品稀释：待检血清用样品稀释液1：40稀释，阳性和阴性对照用样品稀释液1：4稀释。
（3）加样反应：取PRRSV及PRV检测板，用各自稀释好的洗涤液洗板2次（200μL 孔）每次静置2min后倒掉，再在干净吸水纸上拍干。取稀释好的待检样品100μL 加入到检测板中；阴性对照和阳性对照各设2孔，每孔100μL；轻轻振匀孔中样品，置37℃温育30min。甩掉板孔中的溶液，用洗涤液洗板3次，200μL/孔，每次静置3分钟倒掉，再在干净吸水纸上拍干。
（4）加酶反应：每孔加羊抗猪酶标二抗100μL，置37℃温育30min。洗涤5次, 方法同3。
（5）显色反应：每孔先加底物液A50μL、再加底物液B50μL，混匀，室温避光显色10min。
（6）终止反应：每孔加终止液50μL，10min内测定结果。
（7）酶标仪检测结果：以空白对照调零，酶标仪630nm处读取OD值。
（8）PRRS结果判定：试验成立的条件是阳性对照孔平均OD630值大于或等于
1.0，阴性对照孔平均OD630值必须小于0.3。样品OD630值大于0.42，判为阳性；样品OD630值在0.38到0.42之间，判为可疑；样品OD630值小于0.38，判为阴性。
(9) PR结果判定：试验成立的条件是阳性对照孔OD630值应≥0.8，阴性对照孔OD630值平均值必须低于0.3。样品孔OD630值大于0.33，判为阳性；样品孔OD630值小于0.30，判为阴性, 样品OD630值在0.30到0.33之间，判为可疑。
1.6病原检测
1.6.1 DNA的提取
分别采集三头仔猪肺脏、腹股沟淋巴结及脾脏混合匀浆，采用天净沙系列柱式动物DNAOUT提取试剂盒按说明书提取DNA。具体操作步骤如下：取阴阳性样品及匀浆液各400μL，加入12.5μL蛋白酶K和50μL、浓度为10%的SDS溶液，混匀，56℃作用30min；依次加入200μL氯仿和200μL苯酚，剧烈振荡15s，室温放置5min；4℃，12000转离心10min；取上清，加入等体积的氯仿混匀，室温放置5min；4℃，12000转离心10min；取上清加入2倍体积的无水乙醇和1／10体积、浓度为3M的乙酸钠溶液，-20℃放置30min；4℃，12000转离心10min；弃上清，加入75%的乙醇1000μL洗涤；4℃，7500转离心5min；弃上清，干燥10min；加入15μL双蒸水溶解沉淀并作为模板进行PCR 扩增。
1.6.2 RNA的提取步骤
分别采集三头仔猪肺脏、腹股沟淋巴结及脾脏混合匀浆，采用天净沙系列RNA提取试剂盒按说明书提取RNA。具体操作步骤如下：
（1）取阴阳性对照记血清200μL，加入1mL Trizol-A充分混匀，用匀浆仪剧烈振荡涡旋。
（2）室温放置5min，使核酸蛋白复合物完全分离。
（3）加入200μL氯仿充分混匀，用手指将贴壁上的杂质弹起涡旋后，冷浴5min。4℃，12000 r/min离心10min（此时液体分三层）
（4）取上层上清，加入等体积异丙醇，充分混匀。
（5）室温放置15-20min或-20℃保存（可过夜），让RNA沉淀下来。4℃，12000r/min离心10min，弃掉上清液。
（6）加入1mL 75％无水乙醇洗涤沉淀一次。4℃，7600-8000r/min离心5min。（7）弃掉上清液，此步注意不要吸出沉淀。超净台中风干15-20min.
（8）用DEPC水(15μL)溶解，放在4℃备用。
1.6.3 反转录
5
取所提RNA进行反转录。
反转录体系：
病毒RNA 4 μL
5×Reverse transcriptase Buffer 4μL
oligodT 1μL
RNase Inhibitor 0.5μL
AMV Reverse Tanscriptase 1μL
DEPC水7.5μL
总体积20μL
反转录反应条件：
65℃10min
42℃1h
95℃5min
立即使用或或-20℃冻存备用。
1.6.4 PCR检测
根据GenBank登录的CSFV, PRRSV-N基因以及PRVgE核苷酸序列,由Primer5.0软件设计PCR引物，由上海英骏生物公司合成，其他PCR参数见表1。
表1 PCR分析引物序列及循环参数
Table1 Primer and cycle parameter used for PCR
基因Genes
引物序列
Primer sequence(5′-3′)
片段大
小
Fragment
size/bp
退火温度
Annealine
temperature/
℃
延生
时间
（S）
循环
圈数
Cycles
CSFV F:5`GTCACAGCACTTAA TGTGGTC 3`
R: 5` CACTTACCTA TGGGGTAGTGTG 3`
512 56 60 30
PRRSV
F:AGCAGGATCCATGCCAAGTAACAACGGCAAGCAG
R: TAACCTCGAGTCATGCTGAGGGTGATGCTGTG
372 63 60 30
PRVgE F: CCCTGGACGCGAACGGCACGATG
R:GGGTGGCACGCGGTCTCGAAGCA850 68 60 35
扩增完后1%琼脂糖凝胶电泳观察结果。
二、结果与分析
2.1病理变化
剖检三头发病猪，主要病理变化为：肺水肿，间质性和出血性肺炎，心包积液。肠壁变薄，腹股沟淋巴结被膜下出血，肾灰色，水肿，详细见图1、2、3。
图1 腹股沟淋巴结被膜下出血图 2 肾水肿，表面有少量出血点
图 3 间质性肺炎
2.2细菌学检测结果
将无菌采取3头病猪的心包积液、肝、脾、肺、肾、腹股沟淋巴结,革兰氏染色后，置显微镜400X放大倍数下镜检，未观察到病原菌，详见下图4。
图4 革兰氏染色图片
A：心包积液；B：肺脏；C：腹股沟淋巴结
2.3血清学检测结果
采集剖检的三头仔猪以及与这批发病猪对应的母猪和公猪血清，IDEXX抗体检测试剂盒按说明书进行猪瘟，猪蓝耳病病毒抗体以及猪伪狂犬GI和GB抗体。检测结果见表2。由表2可以看出母猪猪瘟的抗体阳性率较低，只有44.4%，发病仔猪猪瘟抗体阳性率为66.7%。猪蓝耳病病毒抗体阳性率母猪为100%，但发病仔猪抗体阳性率为0，几乎没有保护率。猪伪狂犬野毒（GI）抗体阳性率为0，疫苗抗体（GB）为100%，说明该猪场没有猪伪狂犬野毒感染，且猪伪狂犬疫苗免疫保护率较好。
表2 血清学检测结果
母猪公猪发病仔猪
阳性数阳性率阳性数阳性率阳性数阳性率
猪瘟抗体8/18 44.4% 2/2 100% 2/3 66.7% 猪蓝耳病病毒抗体18/18 100% 2/2 100% 0/3 0 猪伪狂犬GI抗体0/18 0 0/2 0 0/3 0 猪伪狂犬GB抗体18/18 100% 2/2 100% 3/3 100% A/B: 阳性数/检测数
2.4病原学检测结果
猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒和猪蓝耳病毒的PCR或RT-PCR结果见图5、图6。
图5 猪瘟病毒RT-PCR检测结果
M: marker; 1-3:样品; +: 阳性对照; —: 阴性对照
Fig 5 Electrophoresis results of CSFV RT-PCR products
M: marker; 1-3: samples; +: positive control; -: negative control Array
图6 猪蓝耳病病毒RT-PCR检测结果
M: marker; 1-3:样品; +: 阳性对照; —: 阴性对照
Fig 6 Electrophoresis results of PRRSV RT-PCR product
M: marker; 1-3: samples; +: positive control; -: negative control
9
2.5治疗措施及转归情况
根据临床症状、病理剖检、实验室检测结果与猪场免疫程序，可判定该病例为猪瘟与蓝耳病病毒混合感染。制定以下治疗措施：
（1）无害化处理：对严重发病猪实施扑杀后深埋，深埋坑内和表面撒上生石灰。（2）隔离消毒：将发病的保育舍和产房封闭化管理。全场猪舍聚维酮碘1:500气雾消毒，引沟和粪沟3%烧碱溶液消毒，猪舍外环境用3%烧碱溶液气雾消毒。猪舍内前7天每两天消毒一次，7天后每周消毒两次，猪舍外前7天每三天消毒一次，7天后每周消毒一次。
（3) 猪瘟脾淋苗紧急接种：具体方案为全场母猪和公猪肌肉注射4头份；70日龄以内仔猪肌肉注射1.5头份，70日龄以上肌肉注射2头份，新生仔猪超前免疫1头份，35日龄后二免。10天内已经免疫过猪瘟疫苗的不免。
（4) 仔猪蓝耳病活疫苗紧急免疫。在猪瘟疫苗免疫后1周，14日龄以内的仔猪于14日龄时肌肉注射1头份，56日龄时二免。14日龄-56日龄的仔猪肌肉注射2头份。母猪于产后7天补免一次。
（5) 全群保健：每吨饲料拌料黄芪多糖1000g+电解多维1000g+强力霉素150g,连用7天。
实施上述措施，两种疫苗全部按计划免疫后病情得到控制。
三、讨论与分析
通过以上发病情况、临床症状、病理剖检做出初步诊断，然后经实验室检测结果最终确诊为猪瘟与高致病性蓝耳病的混合感染。
由于目前猪病疫情严重，混合感染病例复杂多样，表现为发病情况多样、病原多样、症状多变、病理变化多样，因此混合感染的确诊必须将流行病学调查、临床诊断与实验室快速检测紧密结合，才能做出符合客观实际的诊断，为疾病防控提供科学依据[16,17]。而对于该混合感染病例的诊治，不同专家学者也给出了确切的治疗方案。如：潘宗海[18]等对一起猪瘟与保育仔猪蓝耳病与猪瘟混合感染的诊治中，主要是在饲料和饮水中添加电解多维和黄芪多糖，以提高猪群免疫力降低应激；对未发病仔猪用猪瘟单苗和勃林格殷格翰公司的茵格发PRRS弱毒疫苗进行普免，并调整免疫接种程序；饲料中添加替米考星、氟苯尼考等抗生素防止细菌的继发感染；对病死猪进行无害化处理。汤国祥[19]等强调发病猪的淘汰，刚发病或症状轻微猪的隔离，未发病猪的紧急免疫接种，并采用金霉素、阿莫西林、支原净拌料防止继发感染。易利群[20]等则采用中西医结合的治疗方法治疗28例
猪病混合感染，治愈率达93.1%。赵丽华[21]等采用肌肉注射“复方黄芪多糖III 号”注射液及抗猪瘟高免血清，共治疗猪瘟与蓝耳病混合感染158头，治愈122头，治愈率达70.9%。虽然方法各异，但总之一点就是要采取综合性的防控措施[18-21]，不只从疫苗接种和药物治疗出发，还要考虑到免疫接种的合理性。据刘海珍[22]等报道，首次免疫和加强免疫使用高致病性猪蓝耳病灭活疫苗，抗体保护率仅有30%–40%，而首次免疫使用高致病性猪蓝耳病活疫苗，加强免疫采用高致病性蓝耳病灭火疫苗或活疫苗，抗体保护率可达80%以上，效率大大提高。据臧鹏伟[23]等报道，在猪瘟与猪蓝耳病的免疫顺序方面，先免疫高致病性蓝耳病疫苗再免疫猪瘟疫苗，两者间隔一周以上，免疫效果较好。闫学军[24]等报道，母源抗体的半衰期约为14天，猪场一般将初次免疫确定在20日龄左右，但这种方法不能保证猪瘟抗体保持高水平，规模化猪场应根据初生仔猪母源抗体水平的变化规律制定疫苗首免日龄。国外对猪瘟和蓝耳病的防治方面，据Graham SP[25]等的报道，通过应急接种Riemser?C株疫苗，可以在一天到一天半的时间内控制感染，保护机体，迅速抑制病毒的传播；据Gómez-Laguna J[26]等的报道，猪繁殖与呼吸综合征(蓝耳病)病毒(PRRSV)能够削弱猪肺泡巨噬细胞的功能，损害猪肺免疫系统，随着高致病性PRRSV的出现，有必要对猪蓝耳病的免疫发病机制做详细研究，以指导开发更为有效的疫苗。疫苗的正确使用是目前防控猪病的重要手段之一，作为猪场管理者或兽医人员必须重视免疫接种的合理性和有效性。
除此之外，更为重要的是猪场病原的净化，环境卫生的控制及严格的饲养管理，任何一个环节的滞后都将导致疾病的发生和生产效益的损失。据国内外报道，已有多种净化方法供广大科技人员参考。王朝军[27]等报道,SEW技术（一种隔离式早期断奶技术）虽不能彻底切断母源性疾病，但它操作相对简单，因此适合商品猪生产，能够减少疾病侵害，明显改善猪群健康状况，详细操作见王朝军等人报道。据闫之春[28]报道，病原净化是大型猪场最经济的疾病控制方法，主要途径为：后备母猪的培育，部分清群，全清群，检测—剔除，群体封闭，加药早起隔离断奶，在其实施病原净化的案例中，均取得了良好的效果。陈顺友[29]已发明关于猪病净化技术专利——净化猪病60系统小单元的养殖方法(专利号:200810047289.7) ,该方法已在很多猪场得到应用，得到了很好地猪病净化和养殖效果。对于猪瘟的净化措施，我国已有很好地研究与应用，王琴[30]已建立了猪瘟净化新模式，适合我国国情，在目前猪病流行状态下，采用该方法在规模化猪场和部分区域开展猪瘟净化是完全可行的。在净化好病原的同时，做好饲养管理和环境卫生的控制也是必不可少的。主要从以下几方面着手：坚持自繁自养，最好全进全出，如需引种必须做好严格的检疫与隔离工作[1,3,4,14]；做好生物安全工作，重视病死猪的无害化处理，杜绝人员、饲料、车辆将病原引入猪场[9,15]；
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重视日常消毒工作，畜舍、养殖小区、通道等的消毒[1,3,4,14]；改善硬件设施和猪舍环境，减少猪群应激[15,18,19]；重视猪只的营养健康水平，严禁饲喂霉变饲料[1,3,18]；建立可追溯的养殖档案[31]，便于问题的解决。
目前猪病混合感染的情况在依然严峻，想要彻底达到消灭猪病的目的，尚需广大兽医工作者不懈努力，找准方向，研究适合我国国情猪病防控的技术与方法。同时还需要广大从事养殖的朋友强化“养重于防，防重于治，养防结合”的理念，在生产实践中严格遵循，不断探索，不断实践，最终形成具体有效的操作方案，使我国的养殖业达到健康发展的标准，让养殖户轻松养殖，让人民放心吃肉。
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金陵科技学院致谢
致谢
本毕业论文是在张淼老师和华利忠博士两位导师的严格要求和悉心指导下完成的。我的指导老师张淼博士，学术造诣深厚，逻辑思维缜密，治学严谨，和蔼可亲。他在百忙之中关心我的毕业设计工作进展，在论文撰写过程给予我详细指导，这让我感动不已。导师华利忠博士学识渊博、治学严谨、一丝不苟、崇尚实干和献身科学的风范值得我学习和效仿，以及在生活上给予我无私关怀和无微不至的照顾，让我倍感温馨与感动，感谢他们对我的培养与指导！
同时感谢江苏省农业科学院兽医研究所副所长邵国青研究员对毕业设计工作的指导与帮助，感谢江苏省农业科学院重大疫病防治研究室的刘茂军副研究员、韦艳娜老师、张旭老师、甘源老师、徐飞扬老师、周静老师在实验工作上的大力支持与帮助，实验的顺利完成得益于他们平日里大公无私的指导和帮助，是他们教会我常规实验室仪器的操作，保证了实验的正常顺利进行。在此表示衷心的感谢，谢谢你们，让我圆满完成毕业论文设计工作！
时光荏苒，岁月如梭。转眼间，四年美好大学生活即将画上句号，值此毕业论文即将完成之际，向四年来教育我关心我的动科院全体领导老师致以诚挚谢意，是你们让我满载而归！向四年来陪伴我支持我的所有同学和朋友表示最美好的祝愿，祝福大家前程似锦！同时，我要深深感谢我亲爱的家人，是他们无私的奉献和鼓励，让我能够顺利完成四年本科的学习。感谢他们一直以来的辛勤付出，衷心的祝愿我的家人身体健康，万事如意！
再次对长期以来关心支持帮助我的领导老师同学朋友表示衷心地感谢，谢谢你们！
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