小麦麸皮木瓜蛋白酶法提取工艺研究_徐忠
第23卷第6期
2007年12月
哈尔滨商业大学学报(自然科学版)
Journal of Harbin U ni v ersity of Comm erce (Natural Sciences Edition)
V o.l 23N o .6D ec .2007
收稿日期:2007-03-07.
基金项目:哈尔滨市科技局科学技术研究项目(2005AFXX J 025).作者简介:徐 忠(1964-),男,教授,博士,研究方向:粮油加工技术.
小麦麸皮木瓜蛋白酶法提取工艺研究
徐 忠,薄 凯
(哈尔滨商业大学食品工程学院,哈尔滨150076)
摘 要:采用木瓜蛋白酶提取麦麸中的蛋白质,以蛋白提取率为指标,研究了温度、p H 值、固液比、酶用量、提取时间对蛋白提取率的影响.用正交实验确定木瓜蛋白酶提取麦麸蛋白较适宜的条件为固液比为1B 10,提取时间为2.5h ,温度为55e ,p H 值为7.0,酶与底物比为0.6%,提取率最高达到44.34%.关键词:小麦麸皮;蛋白质;提取
中图分类号:TS201.2 文献标识码:A
文章编号:1672-0946(2007)06-0729-04
Extracting of wheat bran protein w ith enzy m es
XU Zhong ,BO K ai
(Schoo l o f F ood Eng i neeri ng ,H arb i n U niversit y of Comm erce ,H arb i n 150076,Ch i na)
Abst ract :The w heat bran protein is extracted w ith papa i n .The effect of te m perature ,pH va l u e ,so li d to liqu i d rati o ,enzy m e concentrati o n and reacti v e ti m e on the extracti o n con tent
is stud i e d .The opti m u m extracti n g conditi o n obta i n ed by o rthogonal test i s :te m perature is 55e ,p H value is 7.0,so li d to li q u i d ratio is 1/10,enzym e concentrati o n is 0.6%and reac -ti v e ti m e is 2.5hours ,and the prote i n extracti o n content is up to 44.34%.K ey w ords :wheat bran ;prote i n ;ex tracti o n
小麦作为世界性的农作物之一,其麸皮质量分数为小麦的15%左右,但实际生产中,由于面粉品
质的要求,得到的麸皮可高达小麦称重的30%.世界年加工麸皮量约2~3亿,t 我国麸皮年产量约7000~8000万t 左右,这些麸皮国内基本上直接应用于饲料及酿造工业,很少用于深加工和再利用,经济价值不高.然而麸皮中除了含有纤维素、淀粉等成分外,麸皮中含蛋白质15%左右成分,因此提取这些功能性成分对提高麸皮的进一步开发
应用及提高附加值具有重要的意义[1-3]
.
蛋白酶提取植物蛋白是利用蛋白酶对植物蛋白的降解和修饰作用,使其变成可溶的小分子蛋白或者肽类被提取出来,可提高蛋白的消化率,酶解反应条件温和,不易引起变旋现象,副产物少.近年
来国内关于米糠酶水解的报道较多
[4,5]
,有关麦麸
蛋白碱法提取工艺研究已有报道[6]
,而麦麸蛋白
酶法提取水解工艺研究还未见详细报道[7]
,本文探讨了木瓜蛋白酶对小麦麸皮的水解工艺,对小麦麸皮的开发利用提供参考.
1 实验材料与方法
1.1 实验材料与仪器
小麦麸皮:哈尔滨市正阳河酱油厂;
木瓜蛋白酶(Papa i n Papaya):北京奥博星生物技术责任有限公司,活力单位40360u /g .
氢氧化钠,盐酸,磷酸氢二钠,磷酸二氢钠,硫酸等均为分析纯试剂.
酸度计 P H C-2型 上海精密科学仪器有限公司水浴恒温振荡器SHZ-A
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721E 分光光度仪上海精密科学仪器有限公司
1.2 实验方法
1)工艺
麦麸y 加水y 调pH 值y 加酶y 反应一定时间y 灭酶y 离心y 收集清夜y 测定蛋白质含量.
2)蛋白质的测定:凯氏定氮法.
3)蛋白质提取率:清液中总蛋白质含量/反应体系中总蛋白质含量.
2 结果与讨论
2.1 温度对木瓜蛋白酶提取率的影响
取麦麸2g ,在35、40、45、50、55、60、65e 条件下分别用木瓜蛋白酶进行酶解,其中p H 值为
7.0,酶与底物比值[E ]/[S ]=1%,固液比为1B 10,酶解时间为2h .酶解后2000r/m i n 离心,取上清液1mL ,以固液比1B 5进行稀释,测定提取率.不同温度下木瓜蛋白酶对于麸皮蛋白提取率测定结果如图1所示
.
图1 温度对木瓜蛋白酶提取率的影响
温度对酶促反应速率的影响表现在2个方面:一方面是当温度升高时,与一般化学反应一样,反应速率加快;另一方面由于酶是蛋白质,随着温度升高,使酶蛋白逐渐变性而失活,引起酶反应速率下降.酶所表现的最适温度是这两种的综合结果.
从图1中可以看出,从35~40e 之间木瓜蛋白酶对于水解麦麸蛋白活力提升不太明显,从40~45e 之间酶活力迅速上升,到50e 时候达到最大值,随着酶解温度继续上升,酶活力有下降的趋势.
2.2 p H 值对于木瓜蛋白酶提取率的影响取麦麸2g ,用木瓜蛋白酶分别在pH 值为6.4、6.6、6.8、7.0、7.2、7.4、7.6的缓冲溶液进行酶解反应,其中温度为50e ,酶与底物比值[E ]/[S ]=1%,固液比为1B 10,酶解时间为2h .酶解后2000r /m i n 离心,取上清液1mL ,以固液比1B 5比例稀释,测定提取率.在不同p H 值之下,木瓜蛋白酶对于麸皮蛋白提取率测定结果,如图2所示.
图2 pH 值对于木瓜蛋白酶提取率的影响
酶的活力受到环境p H 值的影响,在一定pH 值条件下,酶表现出最大活力,高于或者低于此pH 值,酶活力下降,各种酶在一定条件下都有其特定的最适p H 值,因此最适p H 值是酶的特性之一.从图2可以看出pH 值对木瓜蛋白酶提取麸皮蛋白的影响在 6.4到6.8之间上升幅度较大,到了p H 值为7.0附近达到最大值,从pH 值为中性到碱性之间提取率开始下降,因此就木瓜蛋白酶提取
麦麸蛋白pH 值选择在中性为最佳选择.2.3 木瓜蛋白酶酶用量对提取率的影响
取麦麸2g ,用木瓜蛋白酶分别在酶与底物比值为0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%、1.2%条件下进行酶解,其中温度为50e ,p H 值为7.0,固液比为1B 10,酶解时间为2h .酶解后2000r /m in 离心,取上清液1mL ,以固液比1B 5比例稀释,测定提取率.实验结果如图3.
由图3可以看出在温度为50e ,p H 值为7.0,以1B 10的固液比,酶解时间为2h 时,当木瓜蛋白
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酶酶用量在0.2%到0.8%之间变化时提取率有较大幅度的提升,从0.8以后变化幅度开始放慢,酶促反应趋于平和,从酶用量单因素试验来看,最佳酶用量应该是为0.8%.
图3木瓜蛋白酶酶用量对提取率的影响
2.4酶解时间对木瓜蛋白酶提取麦麸蛋白的影响
取麦麸2g,用木瓜蛋白酶分别作用0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5h,其中温度为50e,p H值为7,酶与底物比值[E]/[S]=1%,固液比为1B10.酶解后2000r/m i n离心,取上清液1mL,以固液比1B5比例稀释,测定提取率.图4为木瓜蛋白酶提取麸皮蛋白酶解时间的实验结果.从图4可以看出,随着木瓜蛋白酶酶解的进行,从0.5~2h之间提取率明显上升,到2h达到最大值,过了2h之后,提取率开始呈现下降的趋势,因此从木瓜蛋白酶酶解时间单因素来看,最佳作用时间是2h .
图4木瓜蛋白酶酶解时间对于提取率的影响
2.5固液比对木瓜蛋白酶提取率的影响
取麦麸2g,用木瓜蛋白酶分别在固液比为1B4、1B6、1B8、1B10、1B12、1B14、1B16、1B18的条件下进行酶解,其中温度为50e,pH值为7.0,酶与底物比值[E]/[S]=1%,固液比为1B10,酶解时间为2h.酶解后2000r/m in离心,取上清液1mL,以固液比1B5比例稀释,测定提取率,结果如图5所示.
图5固液比对木瓜蛋白酶提取率的影响
由图5可以看出,对于麦麸蛋白提取,木瓜蛋白酶在固液比为1B10的条件下提取率最高,继续增加固液比,提取率下降.
2.6木瓜蛋白酶提取麦麸蛋白正交试验结果
本研究的目的是通过正交试验,以麦麸蛋白提取率为指标,找出木瓜蛋白酶提取麦麸蛋白的最佳工艺参数组合以得到最高的麦麸蛋白得率,木瓜蛋白酶提取麦麸蛋白各因素水平的选取见表1,木瓜蛋白酶提取麦麸蛋白正交结果见表2所示.
表1木瓜蛋白酶正交试验因素水平表因素
水平
A
酶用量
(([E]/[S])%)
B
酶解时间/h
C
温度/e
D
pH值
10.62456.8
20.8 2.5507.0
31.03557.2
表2木瓜蛋白酶提取麦麸蛋白正交试验结果试验号
试验方案
A B C D提取率/%
10.6245 6.836.83
20.62.5507.037.77
30.63557.241.61
40.82507.234.53
50.82.555 6.843.44
60.83457.037.96
71.02557.037.14
81.02.5457.236.95
91.0350 6.837.42
K1116.2108.5111.7112.9E=343.65 K2115.9118.2109.7117.7
K3111.5117.0122.2113.1
k138.7436.1737.2539.23
k
2
38.6439.3936.5737.62
k337.1739.0040.7337.70
r1.5673.2204.156 1.607
最佳条件A1B2C3D2
主次顺序C B D A
通过正交试验结果可知,木瓜蛋白酶提取麦麸蛋白的各个因素中以温度的影响最大,其次为酶解时间、p H值和酶用量.木瓜蛋白酶提取麸皮蛋白的
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第6期徐忠,等:小麦麸皮木瓜蛋白酶法提取工艺研究
最佳工艺条件为:温度为55e,pH值为7.0,酶用量0.6%,以1B10的固液比,酶解时间为2.5h 时,麦麸蛋白的提取率为44.34%.
3结语
由正交实验得到木瓜蛋白酶提取麸皮蛋白的最佳工艺条件为:以1B10的固液比,在温度为55 e,pH值为7.0,酶用量(酶与底物比)0.6%,酶解时间2.5h,麦麸蛋白的平均提取率为44.34%.
参考文献:
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粮食与食品工业,2006(1):19-22.
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[4]王雪非,于国萍,徐国华.不同酶类提取米糠蛋白的研究
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(上接716页)
级:由低压级压缩机2排出的过热蒸气经低压级油分离器分离后进入板式换热器6进行冷凝换热,冷凝下来的液体流进贮液器,由贮液器引出的R22液体经过过滤干燥器除去杂质和水分,经电磁膨胀阀后到液体调节站9,从液体调节站9出来的液体在回热器11中和低温低压气体换热进一步被冷却,节流后进入冷风机13吸热蒸发,蒸发后产生的低压低温R22蒸气,经回热器11回到气体调节站10,再被低压级压缩机2吸入.高压级:由高压级压缩机1排出的过热蒸气经高压级油分离器分离后进入水冷式冷凝器4进行冷凝换热,冷凝下来的液体流进贮液器,由贮液器引出的R22液体经过过滤干燥器除去杂质和水分,经电磁膨胀阀后到液体调节站9,从液体调节站出来的液体经过节流进入板式换热器蒸发吸热,吸热后气体通过气体调节站被高压级压缩机1吸入.此时液体和气体调节站管线连接如图5所示.
4结语
本设计要求冷风机的蒸发器必须耐低温低压且气密性必须良好;在双级压缩制冷循环和复叠式制冷循环系统中应设置油分离器;低温条件下,冷冻油一般很难回到压缩机,系统运行时,应时刻注意系统的回油情况,采取各种措施保证冷冻油回到压缩机;另外在复叠制冷循环系统中,应采用聚酯类合成冷冻机油(Po l y o l E ster简称POE),防止低温下润滑油凝固或脱蜡.
该低温制冷实验装置通过设计的调节站可以进行单级、双级和复叠制冷循环实验,同时依托不同的制冷循环,装置内部不但可以进行食品贮藏保鲜、低温冷冻实验,还可以进一步进行低温温度场的测定与研究、低温下风机的结霜厚度对产冷量的影响的研究以及在低温下对刚性材料的刚度和强度的研究.
参考文献:
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-11411281
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#哈尔滨商业大学学报(自然科学版)第23卷
木瓜蛋白酶活力测定方法
木瓜蛋白酶活力测定方法 分别精密量取酪蛋白溶液5ml，置3支具塞试管中，置40℃水浴中保温10分钟，各精密加入供试品溶液2ml，摇匀，置40℃水浴中，开始记时，准确反应1小时，立即精密加入三氯醋酸溶液5ml，强力振摇混匀，置40℃水浴中放置30~40分钟，使沉淀的蛋白质完全凝固，滤过，滤液作为供试品溶液。精密量取酪蛋白溶液5ml置另一具试管，于40℃水浴中保温1小时，精密加入三氯醋酸溶液5ml，强力振摇混匀，精密加入供试品溶液2ml，置40℃水浴中放置30~40分钟，滤过，滤液作为空白溶液。照分光光度法（中国药典2000年版二部附录IV A），以0.1mol/L 盐酸溶液为空白，在275nm的波长处测定空白溶液、供试品溶液和对照品溶液的吸收度，按下式计算： 效价（单位/mg）=A/As＊Cs＊12/2＊稀释倍数/W 式中A为供试品溶液的吸收度减去空白溶液的吸收度： As为酪氨酸对照品溶液的吸收度： Cs为酪氨酸对照品溶液的浓度， ug/ml W为供试品重量，mg; 在上述条件下，释放1ug的酪氨酸的酶量为一个活力单位。 试剂酪蛋白溶液：取酪蛋白1g，加0.05mol/L磷酸氢二钠溶液50ml,置沸水浴中煮30分钟，时时搅拌，冷至室温，加0.05mol/L枸椽酸溶液调节PH至6.0±0.1，并迅速搅拌，防止酪蛋白沉淀，用水稀释至100ml（临用新配）。酶稀释液：取无水磷酸氢二钠3.55g，加水400ml溶解，加乙二胺四醋酸二钠1.1g和盐酸半胱氨酸2.74g，振摇溶解，用1mol/L盐酸或1mol/L氢氧化钠溶液调节PH6.5±0.1，用水稀释至500ml,混匀（临用新配）三氯醋酸溶液:取三氯醋酸17.99g，加醋酸钠29.94g和冰醋酸18.9ml，加适量水溶解后，加水使成1000ml，摇匀。 酶活力测定对照品溶液的制备:精密称取已105℃干燥至恒重的酪氨酸对照品适量，用0.1mol/L盐酸溶液制成每1ml中约含40ug的溶液。供试品溶液的制备:取本品适量（约相当于木瓜酶活力120万单位），精密称定，加酶稀释液振摇，制成每1ml中含200~300单位的溶液，摇匀。 淀粉酶活力测定 实验技术 2008-05-27 18:01:29 阅读213 评论0字号：大中小 一、目的 淀粉是葡萄糖以α-1,4糖苷键及α-1，6 糖苷键连结的高分子多糖，是人类和动物的重要食物，也是食品、发酵、酿造、医药、 纺织工业的基本原料。 淀粉酶是加水分解淀粉的酶的总称，淀粉酶对淀粉的分解作用是工业上利用淀粉的依 据，也是生物体利用淀粉进行代谢的初级反应。小麦成熟期如遇阴雨天气，有的品种会发生
木瓜蛋白酶提取实验记录
木瓜蛋白酶实验记录 2016.11.3 实验前准备： 所需试剂的配制： 饱和硫酸铵：取150ml蒸馏水，放入冰桶中，不断加入硫酸铵固体，直至沉淀不能溶解，过滤取滤液，保存在4℃冰箱中。 酶保护剂：准确称量1.21g的半胱氨酸于100ml蒸馏水中，调节PH 至9.0，溶解半胱氨酸，再加入0.1871g的EDTA，定容至250ml，转入棕色瓶中。 预实验：确定实验的可行性 酶液提取： ①用薄的不锈钢刀片沿未成熟的番木瓜的纵线将果皮割破，深度为2~3mm，根据果实大小的不同，每个果实可以5~10条刀口。 ②将木瓜放于一个大烧杯中，使木瓜乳汁流入大烧杯中。 ③收集5ml乳汁加入95ml蒸馏水水，匀速轻柔搅拌1h，得浆液。 ④浆液用8层纱布进行过滤,将所得液分装到离心管中，用离心机在3500r/min的条件下，离心15min。 ⑤收集上清液至一洁净的试管中，既得木瓜蛋白酶原液，-20℃存取10ml酶原液。 ⑥分装木瓜蛋白酶原液，加入2ml酶保护剂（0.04mol/L的半胱氨酸和0.002mol/L的EDTA），混匀后如下表加入试剂。
对静置的酶液继续处理
2016．11.4 试剂配制 考马斯亮蓝G-250染液（0.01%）：称取0.1g考马斯亮蓝G-250固体粉末，溶于50mL 95%乙醇中（95%乙醇取实验室无水乙醇47.5mL加2.5mL蒸馏水）再加入86% 磷酸100mL，倒入1000mL容量瓶加蒸馏水定容至1000mL。静置1h后，取棕色试剂瓶用乙醇清洗干净用滤纸过滤溶液后封存。 重提木瓜蛋白酶 实验设置对照 一组开始即加入酶保护剂编号酶B*、一组加硫酸铵之前才加酶保编号酶*。 ①用薄的不锈钢刀片沿未成熟的番木瓜的纵线将果皮割破，深度为2~3mm，根据果实大小的不同，每个果实可以5~10条刀口。 ②将木瓜放于一个大烧杯中，使木瓜乳汁流入大烧杯中。 ③收集10ml乳汁加入190ml蒸馏水水，匀速轻柔搅拌1h，得浆液。 ④浆液用8层纱布进行过滤,将所得液分装到离心管中，用离心机在3500r/min的条件下，离心15min。 ⑤收集上清液至一洁净的试管中，既得木瓜蛋白酶原液，-20℃存取
黄姜皂素在甾体激素药物合成中的应用_向纪明
甾体激素是指含有甾体母核结构的激素，主要包含性激素和肾上腺皮质激素。它是一类维持生命、保持正常生活、促进性器官发育、维持生殖的重要生物活性物质，在调节机体物质代谢、细胞发育分化、皮肤疾病治疗、性功能及免疫调节以及维持生命保持正常生活方面具有极其重要的作用［１］。甾体激素是在研究哺乳动物内分泌系统时发现的内源性物质，很少剂量就会产生明显作用，当体内甾体激素水平低下或缺乏时，会产生非常痛苦的症候群，甚至危及生命［２］。早期用动物腺体粗提物作为甾体激素替补药物，挽救了无数生命，但此方法来源有限，价格昂贵。由于甾体结构较复杂，目前采用全合成的方法较困难，通常以具有甾体母核结构的天然产物为原料采用半合成的方法制取。近代以相关植物提取的皂素为原料，通过半合成得到一系列甾体激素药物，甾体激素药物的发现及成功合成是近半个世纪来医药工业发展最引人注目的成果之一。２０１１年甾体激素药物销售额突破２８０亿美元，约占世界医药总销售额的６％，成为产量仅次于抗生素的第二大类药物。我国为甾体激素原料药生产大国，甾体药物年产量占世界总产量的１／３左右，皮质激素原料药生产能力和实际产量均居世界第一。特别是随着甾体激素药物生产技术的不断更新，其应用领域的不断扩大，市场应用前景更加广阔［３］。 世界上皂素含量较高的植物资源不多而且分布范围较窄，主要分布在我国和墨西哥，主要有黄姜、穿地龙、葫芦芭等。其中黄姜的薯蓣皂素含量最高，是 甾体激素药物合成的最主要的药源植物，在我国的陕南及湖北广泛种植，是黄姜的主要种植基地，目前世界上三分之二以上的甾体激素药物是以薯蓣皂素作基础原料生产的。薯蓣皂素是以糖苷（薯蓣皂苷）的形式存在于黄姜中，薯蓣皂素主要由薯蓣皂苷与一个葡萄糖和两个鼠李糖形成的苷，在酶及酸性条件下水解，糖基脱掉而转化为薯蓣皂素。薯蓣皂素（Ｄｉｏｓ－ｇｅｎｉｎ）学名为薯蓣皂苷元或黄姜皂素，黄姜中的含量约为３．３％￣４．９％，白色或微黄的结晶性粉末，熔点：２０４￣２０７℃，不溶于水，溶于常用有机溶剂及醋酸中，可利用石油醚、汽油、甲醇、乙醇、丙酮及氯仿等有机溶剂将它萃取出来，是合成甾体激素药物的基础原料和起始中间体。以黄姜皂素为起始原料经过结构改造、化学半合成，可以合成雄性激素、同化激素、雌性激素、孕激素、皮质激素等３００种以上激素类药物，因此黄姜皂素亦有“药用黄金”的美誉［４］。黄姜皂素是生产甾体激素药物最理想的基础原料，所以黄姜皂素在甾体激素药物生产中具有十分重要的地位 。 收稿日期：2014-03-28 基金项目：陕西省教育厅科研项目（11JK0585）；安康学院高层次人才引进项目（AYQDZR201108） 作者简介：向纪明，男，陕西旬阳人，安康学院化学化工系教授，博士，主要从事有机化学教学与研究。 摘要：甾体激素药物因具有很强的抗感染、抗病毒和抗休克等药理作用，广泛用于治疗风湿病、心血管病、 癌症、皮肤病等，是一类重要药物中间体。本文综述了利用黄姜皂素为原料合成甾体激素药物雄性激素、雌性激素、孕激素和肾上腺类皮质激素的进展，对临床上广泛应用的甾体激素药物如睾丸素、雌二醇、黄体酮、炔诺酮、可的松、氢化可的松、地塞米松及布地奈德等的合成路线进行了描述，以期为资源的进一步开发提供思路。 关键词：黄姜皂素；甾体药物；合成；进展中图分类号：Ｏ６２９．２；Ｒ９７９．９ 文献标识码：Ａ文章编号：１６７４－００９２（２０１４）０３－０００１－０５ 黄姜皂素在甾体激素药物合成中的应用 向纪明 （安康学院化学化工系，陕西安康７２５０００） ２０１４年６月第２６卷第３期 安康学院学报 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｋａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｊｕｎｅ．２０１４Ｖｏｌ．２６Ｎｏ．３ 薯蓣皂苷薯蓣皂苷元（黄姜皂素）
黄姜皂素提取新工艺研究_潘鹤林
2011 年 4 月 Journal of Chemical Engineering of Chinese Universities Apr. 2011文章编号：1003-9015(2011)02-0296-06 黄姜皂素提取新工艺研究 潘鹤林, 陈晨, 商利容 (华东理工大学化工学院, 上海 200237) 摘要：以酒精为溶剂提取黄姜干粉中的皂苷，皂苷经水解、过滤、中和、干燥、石油醚抽提、结晶、重结晶得到纯 度较高的黄姜皂素。实验中采用热提取和高压均质提取两工艺。研究了热提取工艺中溶剂用量、料液比、温度、时间 和次数等对皂素收率的影响：溶剂为95%(v)的酒精，料液比为5:1，提取温度为60℃，提取3次，提取时间分别为2 h、 1 h、0.5 h时，皂素收率可达2.45%。在此基础上，为提高提取效率，也考察了高压均质提取工艺过程，60 MPa压力 下均质提取可达到与热提取同等效果。热提取和高压均质提取工艺因预先分离了皂苷、淀粉和纤维素等，因此大大降 低了酸解工艺的处理量，使得皂苷酸解耗酸量和废水量较传统工艺大幅下降，且皂素收率有所提高。 关键词：黄姜皂素；溶剂；热提取；高压均质提取 中图分类号：TQ028.9；TQ467.8；文献标识码：A Research on New Extraction Process for Diosgenin PAN He-lin, CHEN Chen, SHANG Li-rong (College of Chemical Engineering, East China University of Science & Technology, Shanghai 200237, China) Abstract: The dioscin was extracted from dried yam powder with alcohol in this study. After hydrolysis, filtration, neutralization, dehydration drying, extraction with petroleum ether and recrystallization, high purity diosgenin was obtained. Experiments were carried out by method of hot extraction and high pressure homogeniser extraction, respectively. Results of hot extraction process show that, after three times extraction for 2 h-1 h-0.5 h, the yield of diosgenin can reach 2.45% by using 95%(v) alcohol as solvent, liquid-solid ratio 5:1 and temperature 60℃. High pressure homogeniser extraction process was also studied to increase extraction efficiency. The result shows that the effect of high pressure homogeniser extraction with pressure 60 MPa is equal to that of hot extraction. Because active ingredient dioscin was beforehand separated from starch and cellulose, treatment capacity of hydrolyzing process reduced. Acid consumption and waste water in hot extraction and high pressure homogeniser extraction decrease dramatically in comparison with the traditional process, and the yield of diosgenin increases. Key words: diosgenin; solvent; hot extraction; high pressure homogeniser extraction 1引言 黄姜皂素又名薯蓣皂苷元(Diosgenin)，化学名为△5-异螺旋甾烯-3β-醇，是一种重要的精细化工中间体，在医药、农药、保健品等领域应用广泛[1~7]。黄姜皂素是甾体类化合物，化学合成过程线路长且不经济，工业上采用从植物原料黄姜中提取的方法生产。黄姜被誉为“药用黄金”，其所含皂素可用作多种甾体药物的生产原料，为我国特有品种，根茎含有黄姜皂素及45% ~ 50% 淀粉，40% ~ 50% 的纤维素，还含有黄色素、单宁等，其中黄姜皂素含量约为2.5%，居世界薯蓣属植物之冠，因此黄姜是一种经济效益高、开发潜力大的药用植物资源。 目前国内大多皂素厂都采用预发酵-酸水解工艺生产黄姜皂素，传统生产工艺皂素收率低、污染严重，据统计，每生产1 t皂素所产生的废水高达500~1 000 m3[4]，严重阻碍了皂素生产的可持续发展。本研究 收稿日期：2010-01-23；修订日期：2010-06-18。 作者简介：潘鹤林(1965-)，男，江苏扬州人，华东理工大学副教授，硕士。通讯联系人：潘鹤林，E-mail：panhl@https://www.360docs.net/doc/652859368.html,
木瓜蛋白酶在美白护肤中的应用
南宁东恒华道生物科技有限责任公司——专业酶制剂生产厂家 销售热线4000-0771-80 木瓜蛋白酶在美白护肤中的应用美白产品在行业中的现状 人体到了25岁以后，身体的新陈代谢功能减慢，黑色素无法正常排解，而在角质层沉积形成斑点，形成黄褐斑、黑斑和色斑等。统计资料显示，13亿人口的中国，祛斑美容产品每年的市场份额已超过100亿元,年利润在千万元以上。国内美白、祛斑类产品已成为护肤品中的主流产品之一，而美白护肤产品绝大多数属于化学试剂或植物提取物，效果有限而且副作用明显，严重影响了用户的持续使用和行业的发展。 美白产品在行业中存在的问题 美白是全世界的难题，有一些不良商家为了使护肤品达到良好的美白效果，在护肤品中添加一些金属元素如汞、铅等。添加汞后，汞化合物会破坏表皮层的酵素活动，使黑色素无法形成。铅的氧化物具有一定遮盖作用，也可用于美白。如果化妆品中添加了砷、汞、铅，长期使用对人体造成的损害最大。在SK—II 之后，又有4大著名化妆品品牌(迪奥、雅诗兰黛、兰蔻、倩碧)的6款粉饼产品被香港媒体披露含有重金属铬和钕。消费者不仅感到恐惧，也对化妆品的安全性产生怀疑。 木瓜蛋白酶在行业中的应用 木瓜酶是从番木瓜水果中提取而得含有多种生物酶的美白去斑生物产品，主要作用为嫩肤及美白去斑。其生物机理学： 第一，木瓜酶作用于人体皮肤老化角质层，促使其分解退化、去除，达到嫩肤效果及促进细胞生长的效果，且木瓜酶水解物在皮肤表层形成一层氨基酸衍生物薄膜，使肌肤保持润湿与光滑； 第二，木瓜酶易于与形成色斑的黑色素中的铜离子形成络合物，减少黑色素的形成和去除色斑的黑色素，且木瓜酶水解的三钛物质可直接抑制形成黑色素的络氨酸活性，消除自由基作用，从而达到美白去斑的效果。 归结起来，木瓜酶通过去除老化皮肤角质层及与色斑中铜离子快速反应，抑制形成黑色素的络氨酸活性和去除氧化自由基，达到嫩肤美白去斑的功效。 1
木瓜蛋白酶的提取
木瓜蛋白酶的提取、分离纯化及其生物学研究综述及实验方法 13生物技术第二大组第二小组 组员：王玓玥（组长）、王子贺、王思瑶、王宇涛、王守鑫、谭国栋一、研究背景： 在经济飞速发展的今天，人们的生活水平已远远不只在于吃饱穿暖，食品的安全和营养问题受到人们越来越多的关注，绿色健康的生活也成为大家共同的追求，木瓜蛋白酶以它自身耐热及特殊结构等特点被广泛的用于食品行业，如何分离纯化得到高纯度低成本的木瓜蛋白酶则是人们现在研究的重点，本小组便也以此为研究主题展开实验。 二、木瓜蛋白酶基本介绍：木瓜蛋白酶，又称木瓜酶，是一 种蛋白水解酶。木瓜蛋白酶是番木瓜中含有的一种低特异性蛋白水解酶，广泛地存在于番木瓜的根、茎、叶和果实内，其中在未成熟的乳汁中含量最丰富。木瓜蛋白酶的活性中心含半胱氨酸，属于巯基蛋白酶，它具有酶活高、热稳定性好、天然卫生安全等特点，这种蛋白水解酶，分子量为23406，由一种单肽链组成，含有212个氨基酸残基。至少有三个氨基酸残基存在于酶的活性中心部位，他们分别是Cys25、His159和Asp158，当Cys25被氧化剂氧化或与金属离子结合时，酶的活力被抑制，而还原剂半胱氨酸（或亚硫酸盐）或EDTA能恢复酶的活力木瓜蛋白酶是一种在酸性、中性、碱性环境下均能分解蛋白质的蛋白酶。它的外观
为白色至浅黄色的粉末，微有吸湿性；木瓜蛋白酶溶于水和甘油，水溶液为无色或淡黄色，有时呈乳白色；几乎不溶于乙醇、氯仿和乙醚等有机溶剂。木瓜蛋白酶是一种含巯基(-SH)肽链内切酶，具有蛋白酶和酯酶 的活性，有较广泛的特异性，对动植物蛋白、多肽、酯、酰胺等有较强的水解能力，但几乎不能分解蛋白胨。木瓜蛋白酶的最适合PH值6～7(一般3～9.5皆可)，在中性或偏酸性时亦有作用，等电点（pI）为8.75；木瓜蛋白酶的最适合温度55～65℃(一般10～85℃皆可)，耐热性强，在90℃时也不会完全失活；受氧化剂抑制，还原性物质激活。。另外六个半胱氨酸残基形成了三对二硫键,且都不在活性部位。纯木瓜蛋白酶制品可含有：（1）木瓜蛋白酶，分子量21000，约占可溶性蛋白质的10%；（2）木瓜凝乳蛋白酶，分子量26000，约占可溶性蛋白质的45%；（3）
酶辅助水蒸气蒸馏提取迷迭香精油工艺的研究
Hans Journal of Chemical Engineering and Technology 化学工程与技术, 2019, 9(6), 497-502 Published Online November 2019 in Hans. https://www.360docs.net/doc/652859368.html,/journal/hjcet https://https://www.360docs.net/doc/652859368.html,/10.12677/hjcet.2019.96070 Study on the Extraction of Rosemary Volatile Oil by Enzyme-Assisted Steam Distillation Na Liu, Danyang Yuan, Xiuli Chen, Huiji Li, Xiaowen Yang, Haijie Sun* The College of Chemistry and Chemical Engineering, Zhengzhou Normal University, Zhengzhou Henan Received: Nov. 5th, 2019; accepted: Nov. 19th, 2019; published: Nov. 26th, 2019 Abstract The optimum extraction process of volatile oil from rosemary was studied by cellulase assisted steam distillation using the single factor variable controlling method. The best enzymatic assisted extraction conditions of volatile oil from rosemary are the enzyme dosage of 5 mg/g, hydrolysis temperature of 30?C, hydrolysis time of 3.5 h, ratio of material to liquid of 1:8, extraction time of 2.5 h, and the highest extraction rate of 1.357%. Cellulase can effectively destroy the cell wall and is beneficial to the release of volatile oil from rosemary. The hydrolysis conditions are mild, the operation is simple, and it is beneficial to industrial production. Keywords Rosemary, Volatile Oil, Cellulase, Extraction 酶辅助水蒸气蒸馏提取迷迭香 精油工艺的研究 刘娜，院丹阳，陈秀丽，李会吉，杨晓文，孙海杰* 郑州师范学院，化学化工学院，河南郑州 收稿日期：2019年11月5日；录用日期：2019年11月19日；发布日期：2019年11月26日 摘要 本文采用纤维素酶辅助的水蒸气蒸馏的提取方法，通过控制单因素变量法，探讨迷迭香中精油的最佳提*通讯作者。
木瓜蛋白酶酶活力检测方法
木瓜蛋白酶酶活力检测方法 南宁庞博生物工程有限公司企业标准 Q/NPB 01-2019 食品添加剂木瓜蛋白酶制剂 1、范围 本标准规定了食品添加剂木瓜蛋白酶制剂的原辅料要求、技术要求、试验方法、检验规则、标志、包装、运输、贮存。 本标准适用于以木瓜果乳汁为原料，添加葡萄糖，经浸泡提取、过滤、浓缩、干燥、调配粉碎、包装等工艺制成的食品添加剂木瓜蛋白酶制剂。 2、规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 191-2019 包装储运图示标志 GB/T 601-2002 化学试剂标准滴定溶液的制备 GB/T 602-2002 化学试剂杂质测定用标准溶液的制备 GB/T 603-2002 化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备 GB 2760 食品添加剂使用卫生标准 GB/T 4789.2-2019 食品卫生微生物检验菌落总数的测定 GB/T 4789.3-2019 食品卫生微生物检验大肠菌群计数 GB/T 4789.4-2019 食品卫生微生物检验沙门氏菌检测 GB/T 4789.6-2019 食品卫生微生物检验致泻大肠埃希氏菌检测 GB/T 4789.10-2019 食品卫生微生物检验金黄色葡萄球菌检验 GB/T 5009.3-2019 食品中水分的测定 GB/T 5009.74-2019 食品添加剂中重金属限量试验 GB/T 5009.75-2019 食品添加剂中铅的测定 GB/T 5009.76-2019 食品添加剂中砷的测定 GB 5749-2019 生活饮用水卫生标准 GB/T 6682-2019 分析实验室用水规格和试验方法 GB 7718 预包装食品标签通则 GB/T 8170-2019 数值修约规则与极限数值的表示和判定 GB/T 20880-2019 食用葡萄糖 JJF 1070 定量包装商品净含量检验规则 NY/T 691-2019 番木瓜
迷迭香天然抗氧化剂产业化项目可行性研究报告正文
第一章总论 一、项目提出的背景及必要性 1.1.1. 本项目是国家确保食品安全的战略性项目 化学合成抗氧剂作为食品添加剂，是世界在20世纪及之前的普遍选择。由于化学合成抗氧化剂对人体肝、脾、肺等器官均有较大的毒、副作用，在二十世纪中期，曾造成影响较大的中毒事件，世界卫生组织（FAO/WHO）、欧共体儿童保护组织（HACSG）、英国生物工业协会（BIBRA）等一些机构和组织对化学合成抗氧化剂的安全性问题进行了广泛的研究。研究表明，化学合成抗氧化剂对人体肝、脾、肺等器官均有较大的毒、副作用。一直延续到2010年的麦当劳“麦乐鸡事件”就是使用化学合成抗氧化剂导致食品安全问题的延续。但由于世界性市场大流通的需要,人们一时找不到没有毒副作用的抗氧化剂来取代它们，为此，各国相关机构对现行抗氧化剂进行了严格、细致的毒理学研究和评价，制定了详细的使用标准，来减少化学合成抗氧化剂对人的毒副作用。但世界各国及相关机构，出于对人类健康的关注，均希望找到一种对人类没有毒副作用的天然抗氧化剂来确保食品安全。 从植物中提取的天然植物成分，由于其安全、无毒或基本无毒，受到了人们的广泛欢迎，成为研究开发的热点。从20世纪以来，国外相继研究开发了从茶叶、山嵛菜、西红柿、葡萄籽、甘草、烤烟及迷迭香等植物中提取对人体无毒害的天然抗氧化剂。这一发现也导致目前北欧国家禁止使用化学合成抗氧化剂，发达国家--欧盟、美国、日本等严格限制使用对人体有毒、副作用的化学合成抗氧化剂，而寻求并鼓励推广天然抗氧化剂，同时还限制或禁止使用了化学合成抗氧化剂的食品进口。 研究发现，在众多的天然抗氧化剂中，迷迭香天然抗氧化剂，不仅具有很好的抗氧化性，而且对人体还有很好的保健作用，更难得目前只有迷迭香天然抗氧化剂具有高效、稳定、耐高温的特点，这一发现，推动了世界各国对迷迭香天然抗氧化剂的研究开发。迷迭香抗氧化剂成为世界发达国家竞相开发的目标。 在此背景下，党和国家领导从食品安全的战略出发，由中国科学院于二十世纪八十年代末，从美国引进并在全国试验种植迷迭香。试验结果我省滇中地区是最适合种植的地区之一，且精油和抗氧剂的含量高于原产地。 1997年迷迭香抗氧化剂被列为我国抗氧化剂增补品种，2009年被正式列为抗氧
黄姜皂素生态生产新工艺的研究
黄姜皂素生态生产新工艺的研究 发表时间：2019-09-03T16:47:40.917Z 来源：《科学与技术》2019年第07期作者：孙艳娟[导读] 皂素纯度及收率均高于传统工艺，整个工艺流程几乎无酸水排放，达到真正的清洁生产。 摘要：黄姜皂素行业特点薯蓣皂素是合成甾体激素药物的基础原料，目前国内市场需求量大。传统水解工艺优缺点：工艺简单，成本低廉，但是原材料消耗大，能源消耗大，污水排放量大，对环境污染大；传统的提取薯蓣皂苷元的方法是直接将盾叶薯蓣根茎用酸水解成苷元，然后用有机溶剂提取薯蓣皂苷元。其缺点是废酸水排放大，对水体的危害非常严重。新工艺采用提取方法得高含量薯蓣皂苷，皂苷用少量酸水解成苷元，酸水用量以浓酸计低于传统工艺的1/50。皂素纯度及收率均高于传统工艺，整个工艺流程几乎无酸水排放，达到真正的清洁生产。关键词：黄姜皂素传统水解工艺薯蓣皂苷元新工艺清洁生产 一、黄姜皂素行业特点 1、黄姜皂素含量比较高，且具有良好的栽培性状，野生资源濒临枯竭，基本转向人工栽培； 2、据资料显示，黄姜的种植面积由10年前的1000万亩上升到4000万亩，扩大了4倍； 3、黄姜主要种植面积集中在湖北、陕西两省，约占全国70%，加工量占全国50%； 4、国内薯蓣皂素生产厂家急剧膨胀，其中陕西加工厂集中在汉江流域，许多生产厂家对污水没有经过任何处理，直接排放，对南水北调中线水源区水质污染十分严重； 5、皂素项目目前有猛增趋势，但皂素生产存在有严重的技术问题，对环境的污染十分不利。 二、传统工艺三废污染情况及急需解决的难点 1、工业废水直接流入渠道，江河，湖泊污染地表水，如果毒性较大会导致水生动植物的死亡甚至绝迹； 2、工业废水还可能渗透到地下水，污染地下水； 3、如果周边居民采用被污染的地表水或地下水作为生活用水，会危害身体健康，重者死亡； 4、工业废水渗入土壤，造成土壤污染。影响植物和土壤中微生物的生长。 5、有些工业废水还带有难闻的恶臭，污染空气。 6、工业废水中的有毒有害物质会被动植物的摄食和吸收作用残留在体内，而后通过食物链到达人体内，对人体造成危害。 四、目前的生产解决途径 1、少用酸，少用水减少被水解物料量提取皂苷后水解利用物理、化学和生物的方法对废水进行处理，使废水净化，减少污染，以至达到废水回收、复用，充分利用水资源 2、不用酸，以生物活性酶解替代酸水解 五、新工艺流程
木瓜蛋白酶
发酵工程与设备课程论文 题目木瓜蛋白酶 班别学号 姓名 成绩
木瓜蛋白酶 摘要：木瓜蛋白酶是一种能分解蛋白质的蛋白酶。先了解木瓜蛋白酶的制备及保存，接着分析它的化学修饰和酶活力的影响。最后，木瓜蛋白酶的固定化及方法以及它在各个行业的应用。Abstract: Papain is a protease that breaks down proteins.To understand the preparation and preservation of papain and then analyzed its chemical modification and enzyme activities.Finally, the immobilized papain and the method and its application in various industries 关键字：木瓜蛋白酶化学修饰酶活力固定化行业的应用Keywords:papain Chemical modification enzyme immobilization industry applications 木瓜蛋白酶是一种在酸性、中性、碱性环境下均能分解蛋白质的蛋白酶。它的外观为白色至浅黄色的粉末，微有吸湿性。它是利用未成熟的番木瓜果实中的乳汁，采用现代生物工程技术提炼而成的纯天然生物酶制品。它是一种含疏基肽链内切酶，具有蛋白酶和酯酶的活性，有较广泛的特异性，对动植物蛋白、多肽、酯、酰胺等有较强的水解能力，同时，还具有合成功能，能把蛋白水解物合成为类蛋白质。溶于水和甘油，水溶液无色或淡黄色，有时呈乳白色；几乎不溶于乙醇、氯仿和乙醚等有机溶剂。 作为植物来源的蛋白酶来说，此酶研究进展的最快。此酶主要是以内肽酶的形态起作用。活性的产生，而半胱氨酸残基是不可缺少的，所以是硫基蛋白酶的一种，底物的特异性不太严格，分子量为23400，氨基酸残基数212。 一、木瓜蛋白酶的制备及保存 木瓜蛋白酶的制备是将未成熟番木瓜果实割取乳液去杂，在室温下，入半胱氨酸溶液在研钵中充分磨匀，静置后取上清液即
木瓜蛋白酶的提取纯化实验报告
木瓜蛋白酶的分离纯化 一、目的 （1）它是利用未成熟的番木瓜（Carica papaya）果实中的乳汁中提取粗酶液，并进一步纯化，获得高纯度的木瓜蛋白酶。 （2）通过此次试验，熟悉掌握木瓜蛋白酶分离纯化的基本步骤和原理，了解离心分离，萃取等实验技术。 二、原理 木瓜蛋白酶（ Papain ）是一种巯基蛋白酶，它分解比胰脏蛋白水解酶更多、更广泛的蛋白底物。它也具有脂酶活力。其分子量约为 23000 左右。在 25 ℃ , pH6.2 时， 1 分钟生成1umol酪氨酸的酶量为 1 单位。木瓜蛋白酶是单条肽链，有 211 氨基酸残基折叠成两部分形成裂缝，酶分子只有 1 个巯基，对酶活力是必需的，激活剂有半胱氨酸，硫化物，亚硫酸盐和 EDTA ；抑制剂有巯基试剂，包括重金属和羧基试剂和过氧化氢。 酪蛋白是一种蛋白质，它被木瓜蛋白酶降解生成的酪氨酸在紫外光区275nm 处有吸收峰，根据测定 275nm 处的吸收值，可以判定木瓜蛋白酶的酶活力。吸收值的大小与酪氨酸含量的多少有关，吸收值大说明酪氨酸含量高，也就是说木瓜蛋白酶分解的酪蛋白多，酶活力高。 三、实验材料
番木瓜汁；PEG (聚乙二醇，分子量为6000)； (NH4)2SO4；三氯乙酸(TCA)；酪氨酸；考马斯亮蓝 四、仪器设备 （ 1 ）离心机 4000-1000rpm （冷冻式或非冷冻式） （ 2 ） 752 紫外分光光度计 （ 3 ）水浴箱 （ 4 ）冰箱 （ 5 ）榨汁机 五、玻璃器皿（以组为单位） 试管（ 6 ）， 100 mL 烧杯（ 2 ），吸管（ 1 ）、玻棒（ 1 ），试剂瓶（ 1000 mL 、 500 mL 、 250 mL 等），移液管或移液器 5mL(1) 、 1mL(2) 、 0.5mL （ 1 ），漏斗（ 3 ），滤纸（ 3-6 ）等 六、实验试剂配制及实验步骤 （一）酪氨酸的标准曲线
迷迭香生产工艺规程
XXXXXXXXX有限公司生产工艺规程 1 目的：建立迷迭香生产工艺规程，用于指导现场生产。 2 范围：迷迭香生产过程。 3 职责：生产部、生产车间、质保部。 4 制定依据：《药品生产质量管理规范》（2010修订版） 《云南省中药材标准》2005年版。 5 产品概述： 5.1 产品基本信息 5.1.1产品名称：迷迭香。 5.1.2规格：统 5.1.3性状：本品老茎呈圆柱形；幼枝四棱形，密被白色细绒毛，直径0.1～0.5cm，表面暗灰色，外皮易脱落，脱落处显灰黄色；质硬，断面纤维性，黄色。叶丛生于枝上，线形，长1～2.5cm，宽1～2mm，表面绿色，下面密被白色绒毛，全缘，革质。气香特异，味微辛辣。 5.1.4企业内部代码 5.1.5性味与归经：辛，温，无毒。 5.1.6功能与主治：祛风解表，健脾和胃，理气止痛。用于外感头痛，头风痛，饮食积滞，脘腹胀痛。 5.1.7用法与用量：10～15g。 5.1.8贮藏：置阴凉干燥处。 5.1.9包装规格：3g/袋；5g/袋；10g/袋；30g/罐；40g/罐；50g/罐；0.5kg/袋；1kg/袋；10kg/袋；15kg/袋；18kg/袋；20kg/袋；25kg/袋；30kg/袋；50kg/袋。
5.1.10贮存期限：36个月 5.2 生产批量：5-10000kg 5.3 辅料：无 5.4 生产环境：一般生产区 6 工艺流程图： 6.1 迷迭香生产工艺流程图： 6.2 生产操作过程与工艺条件： 6.2.1领料 6.2.1.1饮片车间根据批准的批生产指令，按照“生产过程物料管理程序”，凭填写品名、编码、领料量、数量的指令单到原料库领取迷迭香原料。 6.2.1.2领料过程中必须核对原料品名、编码、件数、数量、合格标志等内容。 6.2.2净制： 6.2.2.1取原料，置于不锈钢挑选台上，按照《净制岗位标准操作规程》手工挑选，除去杂质。将净迷迭香置净料袋或周转箱。 6.2.2.2净制结束后,称量,标明品名、批号、总件数、总数量。将净制后的迷迭香运至车间中转间，及时清场并填写生产记录。
黄姜中皂素的提取及含量分析
微型化学实验专辑 广西师范大学学报 JOU RNAL O F GUAN GX INORM AL UN I V ER S IT Y 2000年6月黄姜中皂素的提取及含量分析 马敬中 陈长水 江 洪 李雪刚 (华中农业大学理学系,湖北武汉430070) 摘 要:黄姜干片经酸水解后的残渣用CHC l3提取皂素.提取液用分光光度法对皂素进行含量分析. 关键词:黄姜;皂素提取;分光光度法 0 前言 ,是制备甾体激素药物的重要原料[1].由于甾体化合物难以由化学方法合成,所以该原料主要来源只能从富含皂素的植物如黄姜、黄山药等的地下茎中提取.其提取方法与含量分析方法各异[2—6].我们采用微型化的操作技术,建立了提取微量皂素和含量分析的新方法.新方法不仅缩短了分析时间,提高了准确度,而且适用于少量样品的提取分析.本实验内容可供大学有关专业高年级学生作为天然有机提取和分析的综合实验内容. 1 实验部分 111 仪器与药品 10mL,20mL圆底烧瓶,微型回流水冷凝管,索氏提取器,微型布氏漏斗、抽滤瓶,110mL移液管; 10mL,25mL容量瓶各数只,分液漏斗,蒸馏头,直型水冷凝管,恒温水浴,电子天平,722型分光光度计,酒精灯等加热装置. 黄姜干片,浓H2SO4,2m o l L稀H2SO4,CHC l3,乙酸酐,活性炭,1‰皂素的CHC l3标准溶液,饱和N aHCO3溶液,饱和N aC l溶液,无水硫酸镁. 112 实验步骤 11211 黄姜中皂素的提取 称取黄姜干片110g,用研钵捣碎,加入10mL圆底烧瓶中,加入6mL2m o l L稀H2SO4,酒精灯加热回流约4h,放冷,用布氏漏斗减压过滤,用清水洗3～5次,抽干,盖上干滤纸用小烧杯底压干,滤渣转移至一干净滤纸上,包成比微型索氏提取器内径略小的圆柱状包,置于索氏提取器内.在20mL干净圆底烧瓶中加入011～012g活性炭和10mL CHC l3,安装好装置,回流30～40m in,放冷,减压过滤,滤液转入25mL容量瓶用3～4mL CHC l3洗活性炭及抽滤瓶,并入25mL容量瓶中,CHC l3稀释至刻度备用. 11212 标准吸光度测定 显色剂配制,取冰箱中预冷的乙酸酐与浓H2SO4,按体积比10∶1混合均匀,再置冰箱中冷至0°左右备用. 用移液管移取0102,0105,0110,0120,0150,110mL的皂素标准溶液,分别加入6个10mL容量瓶,并标号,每瓶中加入4mL左右CHC l3. 每个容量瓶中加入4mL左右显色剂,摇均匀,用CHC l3稀释至刻度,塞上塞子,置50°C恒温水浴 基金项目:国家自然科学基金课题
木瓜蛋白酶中英文对照
Papain Papain [9001-73-4] Papain is a purified proteolytic substance derived from Carica papaya Linné(Fam.caricaceae).papain,when assayed directed herein, contains not less than 6000 units per mg. Papain of a higher digestive power may be reduced to the official standard by admixture with papain of lower activity ,lactose,or other suitable diluents. One USP Unit of papain is the activity that releases the of 1μg of tyrosine from a specified casein substance under the conditions of the Assay， using the enzyme concentration that liberates 40μg of tyrosine per mL of test solution. Packaging and storage－Preserve in tight,light-resistant containers in a cool place. USP reference standards (11)—USP papain RS. pH<791>:between 4.8 and 6.2 in a solution (1 in 50). Loss on drying <731>—Dry it in a vacuum oven at 60℃ for 4 hours : it losses not more than 7.0% of its weight. Assay (casein digestive power)— Dibasic sodium phosphate.,0.05M—dissolve 7.1g of anhydrous dibasic sodium phosphate in water to make 1000mL.add 1 drop of toluene as a preservative. Citric acid,0.05M—dissolve 10.5g of citric acid monohydrate in water to make 1000mL. Add 1 drop on toluene as a preservative. Casein substrate—Disperse 1 g of Hammersten-type casein in 50 mL on 0.05M Dibasic sodium phosphate. Place in a boiling water bath for 30 minutes with occasional stirring.Cool to room temperature ,and add 0.05 M Citric acid to adjust to a pH of 6.0±0.1.stir the solution rapidly and continuously during the addition of the 0.05M Citric acid to prevent precipitation of the casein. Dilute with water to 100 mL .prepare fresh daily. Buffer solution (Phosphate-Cysteine Disodium ethylenediaminetetraacetate Buffer)
木瓜汁中提取木瓜蛋白酶--实验设计
木瓜汁中提取木瓜蛋白酶 一、粗酶制备（冻存、调整浓度） 1.蛋白质浓度（考xx蓝法） 二、纯化和固定化 1.双水相（PEG/磷酸盐）萃取，再过阳离子纯化； 2.粗酶直接亲和磁珠纯化和固定化（咪唑梯度洗，电泳看效果）； 3.先双水相，取PEG相（上清）用亲和磁珠纯化和固定化； 三、纯度 1.快速蛋白质液相色谱； 2.非变性碱性蛋白质电泳； 四、酶活性 1.水解酪蛋白活性（固定化率和活力回收率、固定化酶的温度、pH等、重复使用）； 2.水解IgG检测特异性； 五、载体/相表征 亲和磁珠：TEM、粒径、电势、磁滞回线、红外； 双水相： 一、xx木瓜制备粗酶[1,2] 1.新鲜的木瓜用去离子水洗干净，再用不锈钢刀在果实上做了4到6个纵向2-3mm深的切口，让分泌出的乳胶顺着果实向下滴入冰浴的烧杯中。-20 ℃存放。（或者10mL汁液加90mL pH 6.0的PBS，搅拌15min，4℃9000×g离心取上清（除去不溶物），最后测定并调整上清中的蛋白质的浓度。）
2.将解冻后的乳胶与40mM半胱氨酸按3:1(w/v)的比例混合，用6MHCl将悬浮液调整为pH 5.6，在4 ℃搅拌15 min，过滤并用6 M NaOH将滤液pH调整为9.0，4 ℃ 9000×g离心取上清（除去不溶物），最后测定上清中的蛋白质含量，然后用水/PBS调节。可省略。 3. [1]NitsawangS,Hatti- KaulR,KanasawudP.PurificationofpapainfromCaricapapayalatex:Aqueoustwo-phaseextractionversustwo-stepsaltprecipitation[J].Enzyme & Microbial Technology, 2006, 39(5):1103-1107. [2] Rocha M V, Giacomo M D, Beltramino S, et al. A sustainable affinity partitioningprocess to recover papain from Carica papaya, latex using alginate as macro-ligand[J].Separation & Purification Technology, 2016, 168:168-176.