焦油紫染色

1.焦油紫染色液500ml：Buffer A：冰醋酸4.6ml,加水至400ml；BufferB：无水乙酸钠

2.72g，加水至100ml。328ml Buffer A与72ml Buffer B 混合后用冰乙酸调pH 至4.0。上述溶液加1g焦油紫，充分混匀，静置1周待用。

焦油紫染色步骤

1.大鼠系列层面脑片（离前囟距离为1.60到-4.80mm），每个隔360μm.取一张。

2.脑片贴在明胶玻片上，37℃烤箱24小时。然后进行染色。

3.75%酒精 5min。

4.85%酒精 5min。

5.95%酒精I 5min。

6.95%酒精II 5min。

7.100%酒I 5min。

8.100%酒精II 8min。

9.95%酒精3min。

10.85%酒精3min。

11.75%酒精3min。

12.50%酒精3min。

13.ddH2O过一下。

14.CV染色液（摇晃）5-10min，视着色深浅而定。

15.75%酒精过一下。

16.85%酒精过一下。

17.95%酒精过一下。

18.100%酒精I过一下。

19.100%酒精II过一下。

20.1:1乙醇/二甲苯5min。

21.二甲苯I 5min。

22.二甲苯II 5min。

23.封片

纤维素染色液(Gram甲紫法)

纤维素染色液(Gram 甲紫法) 简介：病理的内源性沉着物是色素沉着物的一部分，组织细胞经过一定的病理变化，形成不同形状特点的沉着物质，这种聚合形成的特殊蛋白，经染色后能够显示纤维素蛋白。纤维素是存在于血液内的纤维蛋白分子聚合形成的特殊蛋白质，又称为纤维蛋白，这种蛋白以弯曲细丝纤维素的形式存在于组织内，大多数呈网状结构，有时会呈粗大的纤维素网，陈旧的可凝集呈无定型的块状。 Leagene 纤维素染色液(Gram 甲紫法)主要由Gram 伊红染色液、甲紫染色液、Gram 碘液组成，是一种简便、廉价的纤维素染色液，染色后纤维素呈蓝色。组成：操作步骤(仅供参考)： 1、常规石蜡切片，常规脱蜡至水。 2、入Gram 伊红染色液，染色，稍水洗。 3、入甲紫染色液，染色，稍水洗。 4、入Gram 碘液，染色。 5、倾去Gram ，用吸水纸吸干。 6、取苯胺和二甲苯等量混合作为分化液，分化。 7、更换新的二甲苯清洗组织。中性树胶封固。染色结果：纤维素蓝色背景红色注意事项： 1、 Gram 伊红染色液染色后，经过水洗时务必使组织上有足够的红色。 2、苯胺和二甲苯等量混合分化时，注意轻轻摇动，以使组织脱色均匀。编号名称 DG0078 3×50ml Storage 试剂(A): Gram 伊红染色液 50ml RT 避光试剂(B): 甲紫染色液 50ml RT 避光试剂(C): Gram 碘液 50ml RT 避光使用说明书 1份

3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。有效期：3个月有效。相关：编号名称 DC0032 Masson三色染色液 DF0111 中性福尔马林固定液(10%) DH0006 苏木素伊红(HE)染色液 IH0305 柠檬酸钠抗原修复液(50×) NR0001 DEPC处理水(0.1%) PW0040 Western blot一抗稀释液 TC1243 甘油三脂(TG)检测试剂盒(GPO-PAP单试剂比色法)

HE染色和尼氏染色

HE染色 .HE染色简介: 苏木精一伊红染色法（hematoxylin-eosin staining ），简称HE染色法，石蜡切片技术里常用的染色法之一。苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。由于组织或细胞的不同成分对苏木精的亲和力不同及染色性质不一样。经苏木精染色后，细胞核及钙盐粘液等呈蓝色，可用盐酸酒精分化和弱碱性溶液显蓝, 如处理适宜，可使细胞核着清楚的深蓝色，胞浆等其它成分脱色。再利用胞浆染料伊红染胞浆，使胞浆的各种不同成分又呈现出深浅不同的粉红色。故各种组织或细胞成分与病变的一般形态结构特点均可显示出来。 .实验步骤: 1.脱蜡: 将石蜡切片在65C烘箱中烘烤40-60分钟，后用二甲苯（I）、（n）浸泡，各 15min ；2.水化：无水酒精（100%乙醇）2min,下行至90%、80%、70%酒精各2min,蒸馏水（I）、 (U)各2min； 3.染色: 石蜡画圈，用滴管滴加苏木素在脑片上，放湿盒40s；（苏木素需要回收） 4.流水浸洗: 把玻片装入玻片铁架子里，在1L烧杯里用自来水对玻片进行流水浸洗；（脑片不要对着水流直接冲） 5.1%盐酸酒精分化: 快速提拉2-3下，用时3-5s左右; 6.流水浸洗: 自来水洗3次，每次20min ； 7.伊红染色: 时间15min ； 8.流水浸洗; 9.脱水:

先在通风橱外的70%酒精浸没，时长2-3S,以颜色适宜为准，再放入通风橱中脱水，70%、80%、90%2-3s, 100%酉精I、n 1min，二甲苯I、n 2min； 10.封片: 上述处理好的玻片，取中性树胶滴入载玻片的组织上，取盖玻片从一端逐步盖下去，避免发生气泡三.结果的判断: 3.1实验结果: 细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色。细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。胶原纤维呈淡粉红色，弹力纤维呈亮粉红色，红血球呈橘红色，蛋白性液体呈粉红色。着色情况与组织或细胞的种类有关，也随其生活周期及病理变化而改变。例如，细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱，当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。胶原纤维在老化和出现透明变性时，伊红着色由浅变深。 3.2 HE染色评定标准: (1)切片完整，厚度4-6微米，厚薄均匀，无皱褶无刀痕; (2)染色核浆分明，红蓝适度，透明洁净，封裱美观。四?注意事项: 1?染色之前一定要了解清楚所用的染色液的配制方法，不同的染色液染色后的处理是不一样的。 2?染色过程中所用的时间以及酒精梯度脱水的选择要根据染色时的室内温度、染液的新鲜程度及实验室的实际情况等灵活掌握。在室温高、切片、染色液又是新配制的，染色时间就要短，反之时间就长。

龙胆紫

中文名称龙胆紫英文名称Basic Violet 3 中文别名结晶紫；甲基紫；碱性紫 3 CAS RN 548-62-9 EINECS号208-953-6 分子式C25H30ClN3 分子量407.9851 危险品标志风险术语安全术语物化性质熔点215°C 水溶性 16 g/L (25°C) 用途用作生物染色剂龙胆紫近年来国外医学家对紫药水（龙胆紫）进行了细致的研究，结果发现它有极强的致癌性。英国药理学家通过动物的反复实验证实，紫药水中的龙胆紫是阳离子碱性染料。这种碱性染料是一种致癌物质，为潜在的致癌剂。药理学家在报告实验的过程中说："试实验者将紫药水分批分期地涂抹在小白鼠的皮肤上，让小白鼠系统地全身吸收紫药水，最后发现这些小白鼠全部诱发癌症，其发癌率高达100%"。紫药水是由龙胆紫和水配成的1%~2%的溶液，又叫龙胆紫溶液、甲紫溶液。是一种常用的皮肤、粘膜消毒防腐剂。由于杀菌力强，对组织没有刺激性，还有收敛作用，临床中常用它治疗面疮、皮肤感染、皮肤癣症、溃疡、擦伤、刀伤、口腔溃疡、粘膜感染、鹅口疮、口唇疱疹、舌炎、烫伤、烧伤等。它还可以口服，其片剂内服可治疗蛲虫病。它与百部浸膏合在一起制成的膏剂，挤入肛门内，也可治疗蛲虫病。为了保障人民的生命安全，英国卫生部门对紫药水的使用范围和包装说明作了新规定。通告中将紫药水的使用范围缩小到只能用于局部未破损的皮肤，而严禁内服，严禁涂抹于口腔、肛门、尿路等粘膜处或破损的皮肤

伤口上，以防诱发癌症。【癌症的诱发需要长期及大面积的涂抹，局部的损伤致癌性不大，国内还未发现有人因涂抹药水而致癌，但用量需谨慎】编辑本段医学应用龙胆紫，其1～2%溶液俗称紫药水，是人们所熟悉的外用药。龙胆紫为一种碱性阳离子染料，因其阳离子能与细菌蛋白质的羧基结合，影响其代谢而产生抑菌作用。它能抑制革兰氏阳性菌，特别是葡萄球菌、白喉杆菌，对白色念珠菌也有较好的抗菌作用。它杀菌力强，对组织没有刺激性，也没有毒性和副作用。外用可治疗皮肤与粘膜的创伤感染及溃疡、小的烫伤、口唇疱疹、溃疡性咽喉炎、鹅口疮、霉菌性阴道炎、外阴炎等。以1～2%水溶液或酒精溶液外涂于患处皮肤，就可以防止细菌感染和局部组织液的外渗。它也能与坏死组织结合形成保护膜，起到收敛作用，内服可治蛲虫病。龙胆紫于外用治疗时，如果伤口已经化脓，就不应再抹了。因为龙胆紫能使伤口表面结上一层痂，看起来干燥清洁，但干燥的硬症下面细菌还在繁殖。在痂皮保护下，细菌可能继续蔓延，向深部侵入反而使病情加重。因此，化脓伤口不要用龙胆紫，而应请医生清洗创口，采取综合治疗措施。使用龙胆紫应注意，对贮存过久而析出多量沉淀，紫色溶液变淡时，即不宜再用。编辑本段龙胆紫染色龙胆紫染色的蒜苗尖高中生物学课本在描述染色质时指出：染色质(体)容易被碱性染料染成深色。实验中对染色质(体)进行染色，须使用龙胆紫溶液或醋酸洋红溶液等碱性染色剂，这些染色剂是以龙胆紫或醋酸洋红溶解于醋酸溶液中制得，配制后的龙胆紫溶液pH值约小于7(呈酸性)。那么为什么把龙胆紫溶液称为碱性染色剂呢? 作为染色剂必须具备两个条件：一是具有颜色；二是要与被染组织间有亲和力。染料的颜色和它与组织间的亲和力是由染料本身的分子结构决定的，产生颜色的发色基团和与组织间产生亲和力的助色基团共同决定了染色剂的染色性质。作为染料物质，除了有发色基团外，还需要有一种使化合物发生电离作用的助色基团。如染料化合物中往往由硝基(-NO2)、偶氮基(-N=N-)、乙烯基等形成了发色基团，而由-OH、-SO3H、-COOH等酸性基团和-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2等碱性基团构成了助色基团。它们的存在使染料物质离子化，极性增强，促进染料与组织间发生作用，产生染色效果。我们把助色基团中具有酸性或碱性基团的染料分别称为酸性或碱性染色剂。如硝基是一种发色基团，当苯环中的3个氢原子被3个硝基取代后就成为三硝基苯的黄色化合物。三硝基苯不是染料，仅有一个发色基团，它不溶解于水，也不

尼氏染色步骤

小鼠脑冰冻切片后，想做尼氏染色，用焦油紫，具体步骤是什么？焦油紫的溶液该如何配制？焦油紫染液的配制：焦油紫/0.1g 蒸馏水/99ml 1%冰醋酸1ml 冰冻切片氯仿中1分钟；无水酒精中1分钟； 95%酒精、70%酒精各1分钟，蒸馏水洗片刻；进入焦油紫染液染色30分钟（37度温箱中染色10分钟），蒸馏水洗涤； 95%酒精分色；常规脱水、透明、封片。尼氏体呈紫色，细胞核呈淡紫色，胶质细胞呈淡紫色。 mickeyzq wrote: 焦油紫染液的配制：焦油紫/0.1g 蒸馏水/99ml 1%冰醋酸1ml 冰冻切片氯仿中1分钟；无水酒精中1分钟； 95%酒精、70%酒精各1分钟，蒸馏水洗片刻；进入焦油紫染液染色30分钟（37度温箱中染色10分钟），蒸馏水洗涤； 95%酒精分色；常规脱水、透明、封片。

尼氏体呈紫色，细胞核呈淡紫色，胶质细胞呈淡紫色。你的没有经过复染，对比也可以这么鲜明啊我用的是1％的甲苯胺蓝，具体步骤是：常规石蜡切片，二甲苯透明，酒精梯度复水，入1％甲苯胺蓝室温下染3min，自来水冲洗，95％酒精分化，0.5％伊红复染1s，水洗，透明封片，但是结果不好，伊红复染后颜色很深，原来的蓝色被覆盖的很严重，不知道该怎么改进换焦油紫看看,焦油紫着色比较深. （二）神经细胞尼氏体染色正常的神经细胞都含有一定数量的尼氏化，它们主要分布于神经细胞的浆中，形状有大有小，如三角形，有的为椭圆形。这些物质能被大部分的蓝色染料所染色，这些染料如焦油坚牢紫（Cresyl fast violet）亚甲蓝（methylene blue）甲苯胺蓝（toluidine blue）硫董（thionin）等钭其染为蓝色。但是，当神经细胞受伤后，胞质内的尼氏体更可发生变化，严重的可消失。焦油坚牢紫显示尼氏体焦油坚牢紫1g 蒸馏水100ml *作方法： 1、切片脱蜡至水 2、用焦油坚牢紫水溶液浸染20-30分钟 3、水洗 4、用95%酒精分化 5、无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶结果：神经细胞单位：紫-蓝色细胞核：紫-蓝色尼氏体：紫-深蓝色注意：1、应用酒精分化切片，要迅速，防止过度分化，将切片上的颜色全部脱掉。神经纤维染色使用说明： 1. 样品处理 a) 对于石蜡切片：二甲苯中脱蜡5-10分钟，共三次。注：脱蜡不充分会导致染色不均匀。无水乙醇5分钟。 90%乙醇2分钟。 70%乙醇2分钟。蒸馏水2分钟 2. 尼氏(Nissl)染色对于上述处理好的样品：

常用染色液配方

实验室常用染色液配方 1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液 A液：美蓝(Methylene blue) 0.3 克95%酒精毫升 B液：氢氧化钾(KOH) 0.01 克蒸馏水100 毫升分别配制A液和B液，然后混合即成。 2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液 A液：碱性复红(Basic fuchsin) 0.3 克95%酒精10.O 毫升 B液：石炭酸(苯酚) 5.0 克蒸馏水95 毫升将碱性复红溶于95%酒精中，配成A液。将石炭酸溶于蒸馏水中，配成B液。将两者混合即成。 3、结晶紫染色液(Huclker改订)A液：结晶紫(Crystai violet) 2.5 克95%酒精25.0 毫升 B液：草酸铵(NH4)2C2O4H2O 1.0 克蒸馏水100 毫升将结晶紫研细后，加入95%酒精，使之溶解，配成A液。将草酸铵溶于蒸馏水，配成B液。两液混合即成。 4、路戈氏(LugoI)碘液(革氏鉴别染色用)碘1.0克碘化钾2.0克蒸馏水300毫升先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，溶时可稍加热，最后加足蒸馏水量。 5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(Safranin O) 2.0克蒸馏水100毫升 6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malachite green) 5.0克蒸馏水100毫升先将孔雀绿研细，加少许95%酒精溶解，再加蒸馏水。 7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigrosin) 10.0克蒸馏水100毫升福尔马林(40%甲醛) 0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟，加入福尔马林作为防腐剂，用玻璃棉过滤。 8、刚果红染色液刚果红(Congo red) 2.0克蒸馏水100毫升 9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3) 5.0毫升蒸馏水95.0 10、乳酸石碳酸棉蓝染色液（真菌制片，短期保存）石炭酸10.0克甘油20.0毫升乳酸(比重l.21) 10.0毫升棉蓝0.02克蒸馏水10.0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化，加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，溶解即成。 11动物组织石蜡切片染色方法苏木精-伊红(HE)染色：二甲苯Ⅰ, Ⅱ各10 min，依次进入无水乙醇、950 mL/L, 900 mL/L, 800 mL/L及700 mL/L的酒精各5 min，蒸馏水洗；入苏木精染液10 min，盐酸酒精分色4 s，自来水洗10 min；依次入700 mL/L, 800 mL/L及900 mL/L酒精各5 min，入伊红染液染色 10 min；入950 mL/L及无水乙醇Ⅰ, Ⅱ各5 min, 以二甲苯透明，中性树脂封片. 一、常用染色液的配制 ⒈碘-碘化钾（I2-KI）溶液能将淀粉染成蓝紫色，蛋白质染成黄色，也是植物组织化学测定的重要试剂。配方：碘化钾2g ；蒸馏水300ml ；碘1g 先将碘化钾溶于少量蒸馏水中，待全溶解后再加碘，振荡溶解后稀释至300mL，保存在棕色玻璃瓶内。用时可将其稀释2-10倍，这样染色不致过深，效果更佳。 ⒉苏丹Ⅲ（sudanⅢ或Ⅳ）能使木栓化、角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成红色或淡红色，是著名的脂肪染色剂。配方：（1）苏丹III或苏丹Ⅳ干粉0.1g ；95％酒精10ml ；过滤后再加入10ml甘油（2）先将0.1g苏丹III或IV溶解在50ml丙酮中，再加入70%酒精50ml。（3）苏丹III 70%乙醇的饱和溶液。 ⒊1％醋酸洋红（aceto carmine）酸性染料，适用于压碎涂抹制片，能使染色体染成深红色，细胞质成浅红色。

病理学技术—特殊染色最最全总结

结缔组织染色法 Mallory三色染色法蓝色：胶原和网状纤维淡蓝色：软骨、粘液、淀粉样变物质红色：神经胶原纤维、肌纤维、酸性颗粒橘红色：髓鞘、红细胞图表 A 染色，显示胶原纤维，A组排列规则 . Masson三色染色法绿色：胶原纤维红色：肌纤维橘红色：红细胞图表 B Mssson三色法图表 C 三色染色胃癌组织中血管平滑肌 . 显示胶原、网状和弹性纤维的三联染色法红色：胶原纤维黑色：网状纤维绿色：弹性纤维淡黄色：肌肉、红细胞

二、胶原纤维染色法 . Van Gieson（）苦味酸-酸性品红法鲜红色：胶原纤维黄色：肌纤维、细胞质、红细胞蓝褐色：胞核图表 E 2.胶原纤维，Van Gieson.)苦味酸-酸性品红法图心肌梗塞 myocardial infarction：心肌梗塞后2个月，van Gieson 染色, 坏死心肌被染成红色的纤维组织所代替，黄色区域为残留的心肌纤维。天狼星红（Sirius red）苦味酸染色法(参照上图)

黄色：其他三、网状纤维染色 Gordon-Sweets银氨染色法（梅花开枝图，金色阳光伴树枝）

黄棕色：胶原纤维淡红色：细胞质（红液复染）图表 F 3.Gordon-Sweets氢氧化银氨液浸染法 Gomori氏银氨液配制法图表 G Gomori氏银氨液配制法四、弹性纤维染色 Gomori醛复红染色法 *甲醛生理盐水液固定的染色效果最佳图表 H 醛复红染色法五、显示弹性、胶原纤维的双重组合染色法蓝绿色：弹性纤维红色：胶原纤维黄色：背景

六、肌肉组织染色 △横纹肌组织染色 Mallory磷钨酸苏木精染色法（PTAH）蓝色：胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、纤维蛋白、横纹肌黄色或枚红色：胶原纤维、网状纤维软骨基质、骨微紫色：粗弹性纤维（有时）紫蓝色或棕黄色：缺血缺氧早期病变的心肌图表 J .磷钨酸苏木素法图表 K .磷钨酸苏木素染色液 △早期心肌病变组织染色染色法（1974年）

几种常用的染色方法

几种常用的染色方法 1．美蓝染色法??? 在已干燥、固定好的抹片上，滴加适量的美蓝染色液，经1—2min，水洗，沥去多余的水分，吸干或烘干，镜检。 2．革兰氏染色法?? （1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色液，经1—2min，水洗。（2）加革兰氏碘溶液于抹片上媒染，作用1—3min，水洗。（3）加95％酒精于抹片上脱色，约30s---1min，水洗。（4）加碱性复红液（或沙黄或稀释石炭酸复红液）复染10---30s，水洗。（5）吸干或烘干，镜检。革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。3．抗酸性染色法（1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加较多量的石炭酸复红染色液，在玻片下以酒精灯火焰缓缓加热，至发生蒸汽即止，维持微微发生蒸汽，经3—5min，水洗。（2）用3％盐酸酒精脱色，直至标本无色脱出为止，充分水洗。（3）用美蓝染色液复染约1min，水洗。（4）吸干或烘干，镜检。抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌呈蓝色。以下方法也可：即在干燥、固定好的抹片上，滴加石炭酸复红染色1min，水洗，用1％美蓝染色液复染约20s，水洗。对光观察，标本务必全呈蓝色，在火焰上烘干、镜检。抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌和背景呈蓝色。 4．瑞氏染色法（1）抹片自然干燥后，滴加瑞氏染色液于其上，为了避免很快变干，染色液可

稍多加些，或看情况补充滴加，经1—3min，加约与染液等量的中性蒸馏水或PBS 液，轻轻晃动玻片，使与染液混匀，约3min左右，直接用水冲洗（不可先将染液倾去），吸干或烘干、镜检。细菌染成蓝色，组织、细胞等物呈其它颜色。（2）另一方法? 抹片自然干燥后，按涂抹点大小，盖上一块略大的清洁滤纸片，在其上轻轻滴加染色液，至略浸过滤纸，并看情况进行补滴，维持不使变干；染色3--5min，直接用水冲洗，吸干或烘干、镜检。此法使染色液经滤纸过滤，可大大避免沉渣粘附于抹片上影响镜检观察。 5．姬姆萨染色法（1）于5ml新煮过的中性蒸馏水中滴加5—10滴姬姆萨氏染色液原液，即稀释成为常用的姬姆萨氏染色液。（2）抹片经甲醇固定干燥后，在其上滴加足量的染色液或将抹片浸入盛有染色液的染色缸中，染色30min，或者染色数小时至24h，取出水洗，吸干或烘干、镜检。细菌呈蓝青色，组织、细胞等呈其它颜色。视野常呈淡红色。 6．克利特氏荚膜染色法（1）染色液配制 ①美蓝溶液? 美蓝1g，95％酒精10ml，蒸馏水100ml。将美蓝溶于酒精内，再加蒸馏水混合。 ?②碱性复红溶液? 碱性复红0.03g，95％酒精1ml，蒸馏水99ml。将碱性复红溶于酒精内，再加蒸馏水混合。（2）染色法 ①涂片经火焰固定后，滴加美蓝溶液，将玻片至火焰上面加热至发生蒸汽为止。 ②水洗，以碱性复红溶液复染15—30s。 ?③水洗后、吸干、镜检。 ④染色后，菌体呈蓝色，荚膜呈红色。 ?7.结晶紫福尔马林荚膜染色法

淀粉样物质染色液(甲紫法)操作步骤及注意事项

淀粉样物质染色液(甲紫法)操作步骤及注意事项货号：G1536 有效期：6个月有效。产品内容： 2×50mL Storage 试剂(A):甲基紫染色液50mL RT避光试剂(B):酸性分化液50mL RT 产品说明：淀粉样物质是一种无固定形状的细胞外嗜酸性物质，可存在于不同的组织、器官导致的疾病称为淀粉样变。淀粉样物质主要是由蛋白质构成，该蛋白大部分排列成反向的β-折叠层结构。在电子显微镜下，淀粉样物质呈原纤维排列，病例材料中为大量细胞外的、不分支的细丝，大多随机排列。用于识别淀粉样物质的组织学方法有甲紫染色、刚果红染色、偏振光显微镜观察等。目前研究发现传统的甲紫染色法灵敏度低、特异性差，经典的而且有效的方法是刚果红染色，1922年Bennhold发现了刚果红可以用于活体内淀粉样物质的鉴别，并应用到组织切片，后来经过Highman改良，染色效果更好。淀粉样物质染色液(甲紫法)主要由甲紫染色液、酸性分化液组成，是经Jurgens改良的一种异染色液，其染色原理是蛋白样物质中的酸性黏多糖与甲紫起异色反应。其优点是简便省时，其缺点是染色后的切片难以保存。自备材料： 10%中性福尔马林固定液、甘油明胶操作步骤(仅供参考)： 1、常规固定，常采用10%中性福尔马林，常规脱水包埋，切片厚度4μm，常规脱蜡至水。

2、入甲基紫染色液3min，无需水洗，滴加酸性分化液分化，直至无染色液脱出。 3、稍水洗，甘油明胶封固。染色结果: 淀粉样物质红色至紫红色细胞核、细胞质、结缔组织蓝色至深浅不一的紫蓝色注意事项： 1、切片脱蜡应尽量干净，否则影响染色效果。 2、尽量采用浸染，如果滴染，应置于湿盒防止溶液挥发。 3、酸性分化液应密闭保存，分化步骤很重要。 4、染片不能经乙醇脱水，否则易出现无法上色的问题。 5、粘液物质甲紫染色时也会呈异染颗性红色，应注意鉴别。 6、在镜下观察异染性反应时，应注意把蓝色滤光片移去。 7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

尼氏染色液(亚甲蓝法)操作步骤及注意事项

尼氏染色液(亚甲蓝法)操作步骤及注意事项货号：G1434 规格：3×50ml 保存：室温，避光，6个月。产品内容：规格 3×50ml Storage 名称试剂(A):Methylene Blue Stain50ml RT避光试剂(B):Nissl Differentiation50ml RT 试剂(C):Ammonium Molybdate Solution50ml RT 产品简介：尼氏体(Nissl body)或称尼氏小体是分布于神经细胞胞质内的三角形或椭圆形小块状物质，能被碱性染料如硫堇、亚甲蓝、甲苯胺蓝和焦油紫等染料染成紫蓝色。尼氏染色液(Nissl Stain，亚甲蓝法)主要优点是操作简便、染色稳定、适用范围广，可以用于石蜡组织切片的尼氏物质、神经元等的染色，尼氏体的存在和消失是神经细胞是否受损的重要指标，当发生脑炎、脑缺血、轴突反应等情况时，尼氏体会发生溶解甚至消失。操作步骤(仅供参考)： 1、新鲜组织固定于20%甲醛液中，常规脱水包埋。 2、切片厚5μm，常规脱蜡至水。 3、Methylene Blue Stain滴染10min。 4、入Nissl Differentiation分化，在显微镜下观察至尼氏体清晰为止。

5、入Ammonium Molybdate Solution处理切片数分钟。 6、蒸馏水冲洗。 7、常规脱水透明，中性树胶封固。染色结果：尼氏小体蓝色背景红色或粉红色注意事项： 1、尼氏体离体后容易溶解，所以组织取出后应立即固定，否则难以着色。 2、组织固定起着非常重要的作用，固定可采用乙醇、Carnoy固定液或中性福尔马林溶液。 3、本染色试剂盒对石蜡组织切片的尼氏染色效果较好。 4、石蜡切片厚度7～10μm或25μm(皮质神经元密度的评估要用25μm厚的切片)。

高中生物常用的染色剂染色机理

普知--关于遗传物质被碱性染料染色~ 碱性液染色后能保持几年。洋红溶液出现浑浊时要过滤后再用1．2龙胆紫C笛HIN具有金属光泽的暗绿色粉末。能溶于水、三氯甲烷和醇；难溶于醚。加热至275℃分解。其1％一2％溶液俗称紫药水，是人们所熟悉的外用药。 2染色剂的配制 2．1配方1醋酸一洋红染液取100mL45％冰醋酸，煮沸后徐徐加入洋红1g，搅拌均匀后加入1颗锈铁钉，煮沸10min，冷却后过滤，贮存在棕色瓶内。 2．2配方2龙胆紫染液，取龙胆紫1～2g，溶解在100mL2％乙酸溶液中，直到溶液成深紫色为止(实验过程中视具体情况溶液可适当稀释)。保存在棕色瓶内。 3染料的作用机理 3．1碱性染料染色试剂的酸碱性与溶液的酸碱性不是一回事。染色试剂的酸碱性，其划分依据在于染料分子电离后的有色成分是阳离子还是阴离子，如果着色的基团是阳离子的为碱性染料，着色的基团是阴离子的为酸性染料 3_2染色机理龙胆紫能不能染DNA?还是只是把染色质上的蛋白质染色?或是DNA和蛋白质都被染色?上文提到，碱性染料的着色基团是阳离子，着色基团可以与细胞中的带负电荷部分牢固地结合。DNA是酸性物质，可电离出H，其余的部分就带上了负电荷。因此，带负电荷部分就能和碱性染料电离出的着色阳离子通过电荷问的引力作用牢固结合，而被染上颜色。有的染色作用随溶液中的pH值而变动。细胞的主要成分是蛋白质，它含有氨基和羧基，在酸性溶液中，当溶液的pH值小于该蛋白质的等电点时，则蛋白质带正电荷，易被酸性染料染色；在碱性溶液中，当溶液的DH值大于该蛋白质的等电点时，则蛋白质带负电荷。容易被碱性染料染色。所以，可以得出结论：碱性染料使染色体着色，使DNA和蛋白质都被染色。只不过这2种物质被染色的机理是不同的。 4碱性染料用酸配制的原因龙胆紫和洋红都溶于水和酒精。而做实验用的龙胆紫和洋红溶液。却都是用醋酸溶液配制的。这又是为什么呢?原因有2个：1)是为了染色物能方便地进入细胞内，又不会发生细胞膨胀。因为水和酒精这2种溶剂进入细胞的速度是很快的，容易引起细胞膨胀破裂。2)因为像洋红这种碱性染色剂溶于碱性溶液时，能使细胞质和细胞核都染色，只是细胞核较浓些，溶于酸性溶液(如醋酸)时，对染色质有高度的亲合力，对细胞质着色很浅。在煮沸的45％醋酸中加洋红使之饱和，再加入微量的铁离子，配制成的醋酸洋红溶液就能将核或染色体染成红色。如果用1％龙胆紫溶液对根尖进行染色，细胞核内都被

几种常用的染色方法精编版

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几种常用的染色方法 1．美蓝染色法在已干燥、固定好的抹片上，滴加适量的美蓝染色液，经1—2min，水洗，沥去多余的水分，吸干或烘干，镜检。 2．革兰氏染色法（1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色液，经1—2min，水洗。（2）加革兰氏碘溶液于抹片上媒染，作用1—3min，水洗。（3）加95％酒精于抹片上脱色，约30s---1min，水洗。（4）加碱性复红液（或沙黄或稀释石炭酸复红液）复染10---30s，水洗。（5）吸干或烘干，镜检。革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。3．抗酸性染色法（1）在已干燥、固定好的抹片上，滴加较多量的石炭酸复红染色液，在玻片下以酒精灯火焰缓缓加热，至发生蒸汽即止，维持微微发生蒸汽，经3—5min，水洗。（2）用3％盐酸酒精脱色，直至标本无色脱出为止，充分水洗。（3）用美蓝染色液复染约1min，水洗。（4）吸干或烘干，镜检。抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌呈蓝色。以下方法也可：即在干燥、固定好的抹片上，滴加石炭酸复红染色1min，水洗，用1％美蓝染色液复染约20s，水洗。对光观察，标本务必全呈蓝色，在火焰上烘干、镜检。抗酸性细菌呈红色，非抗酸性细菌和背景呈蓝色。 4．瑞氏染色法

（1）抹片自然干燥后，滴加瑞氏染色液于其上，为了避免很快变干，染色液可稍多加些，或看情况补充滴加，经1—3min，加约与染液等量的中性蒸馏水或PBS液，轻轻晃动玻片，使与染液混匀，约3min左右，直接用水冲洗（不可先将染液倾去），吸干或烘干、镜检。细菌染成蓝色，组织、细胞等物呈其它颜色。（2）另一方法抹片自然干燥后，按涂抹点大小，盖上一块略大的清洁滤纸片，在其上轻轻滴加染色液，至略浸过滤纸，并看情况进行补滴，维持不使变干；染色3--5min，直接用水冲洗，吸干或烘干、镜检。此法使染色液经滤纸过滤，可大大避免沉渣粘附于抹片上影响镜检观察。 5．姬姆萨染色法（1）于5ml新煮过的中性蒸馏水中滴加5—10滴姬姆萨氏染色液原液，即稀释成为常用的姬姆萨氏染色液。（2）抹片经甲醇固定干燥后，在其上滴加足量的染色液或将抹片浸入盛有染色液的染色缸中，染色30min，或者染色数小时至24h，取出水洗，吸干或烘干、镜检。细菌呈蓝青色，组织、细胞等呈其它颜色。视野常呈淡红色。 6．克利特氏荚膜染色法（1）染色液配制 ①美蓝溶液美蓝1g，95％酒精10ml，蒸馏水100ml。将美蓝溶于酒精内，再加蒸馏水混合。 ②碱性复红溶液碱性复红0.03g，95％酒精1ml，蒸馏水99ml。将碱性复红溶于酒精内，再加蒸馏水混合。（2）染色法 ①涂片经火焰固定后，滴加美蓝溶液，将玻片至火焰上面加热至发生蒸汽为止。 ②水洗，以碱性复红溶液复染15—30s。 ③水洗后、吸干、镜检。

常用染色液的配制

附录二：常用固定液和染色液的配制常用染色液的配制 1. 番红水液番红0.1g溶入蒸馏水,定溶至100ml。 2. 番红酒液番红0.5g或1g溶入50%酒精,定溶至100ml。 3. 固绿染液固绿0.1g溶入95%酒精，定溶至100ml。 4. 碘-碘化钾染液碘化钾溶入100ml蒸馏水，再加入1g碘，溶解后即可使用。 5. 苏丹Ⅲ（或Ⅳ）染液将0.1g苏丹Ⅲ或Ⅳ溶解在50ml丙酮中，再加入70%酒精50ml。6.改良苯酚品红染液原液A：将3g碱性品红溶入100ml 70%酒精，此液可长期保存。原液B：将10mlA液加入到90ml 5%苯酚水溶液中。原液C：将55mlB液加入到6ml的冰醋酸和6ml的38%的甲醛中。染色液：取C液20ml，加45%冰醋酸80ml，充分混匀，再加入1g 山梨醇，放置14天后使用，可保存3年。 7. 间苯三酚染液将5g间苯三酚溶入100ml 95%酒精（若溶液呈黄色，即为失效）。 8. 中性红染液

将0.1g中性红溶入100ml蒸馏水，用时稀释10倍。 9. 钌红染液将5~10mg钌红溶入25~50ml蒸馏水，现用现配。 10.龙胆紫染液将0.2g龙胆紫溶入100ml蒸馏水。现常用结晶紫代替。必要时可将医用紫药水稀释5倍后代用。 11.铁醋酸洋红染液先将100ml 45%醋酸水溶液置入200ml的锥形瓶中煮沸，移去火苗，然后慢慢地分多次加入1g洋红粉末（切记不可一次倒入）。待全部倒入后，再煮沸1~2min，并悬入一生锈的小铁钉于染液中，过1min 后取出，使染色剂略含铁质，以增加染色性能。静置12h后过滤于棕色瓶中备用（置于避光处）。 12.苏木精染液苏木精的配方很多，常用的有如下3种：配方Ⅰ：苏木精水溶液 0.5g苏木精溶入100ml煮沸的蒸馏水中，静置24h后可使用。配方Ⅱ：代氏苏木精（Delarfield’s haematoxylin）甲液：苏木精1g + 无水酒精6ml 乙液：硫酸铝铵（铵矾）10g + 蒸馏水100ml 丙液：甘油25ml + 甲醇25ml 分别配制甲、乙两液，将甲液一滴滴地加入乙液中，充分搅拌后，放入广口瓶中用纱布蒙住瓶口，置于温暖和光线充足处7~10天，再加

常用染色剂的配方

常用染色剂的配方常用染色剂的配方（一）天然染料 1、苏木精（Hematoxylin）苏木精是从南美的苏木（Haematoxylon campechianum）干枝中用乙醚浸制出来的一种色素，是最常用的染料之一。苏木精不能直接染色，必须暴露在通气的地方，使他变成氧化苏木精（又叫苏木素）后才能使用，这叫做“成熟”。苏木精的“成熟”过程需时较长，配置后时间愈久，染色力愈强。被染材料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。所以在配制苏木精染剂时都要用媒染剂。常用的媒染剂有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体，易溶于酒精，微溶于水和甘油，是染细胞核的优良材料，他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。分化时组织所染的颜色因处理的情况而异，用酸性溶液（如盐酸—酒精）分化后呈红色，水洗后仍恢复青蓝色，用碱性溶液（如氨水）分化后呈蓝色，水洗后呈蓝黑色。 2、洋红（Carmine）洋红又叫胭脂红或卡红。一种热带产的雌性胭脂虫干燥后，磨成粉末，提取出胭脂红，再用明矾处理，除去其中杂质，就制成洋红。单纯的洋红不能染色，要经酸性或碱性溶液溶解后才能染色。常用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸，碱性溶液有氨水、硼砂等。洋红使细胞核的优良染料，染色的标本不易褪色。用作切片或组织块染都适宜，尤其适宜于小型材料的整体染色。用洋红配成的溶液染色后能保持几年。洋红溶液出现浑浊时要过滤后再用。 3、靛蓝洋红（Indigo carmine）是由木蓝（Indigofera）提出的靛蓝（Indigo）加上亚硫酸钠而成。为蓝色酸性染料，作为细胞质的染色剂。常与苦味酸合成苦味酸靛蓝洋红（picro-indigo-carmine），呈绿色，可与碱性品红作对比染色。 4、地衣红（Orcein）是由地衣（Lecanora parella）中取得的染料，可在酸性或碱性溶液中染色。植物细胞学中应用较多，尤其对于某些植物的染色体染色，效果比醋酸洋红更好。配制方法与洋红相似，通常也多溶入醋酸中（2.2％）染色。现在已多用其人工合成染料。（二）人工染料人工染料，即苯胺染料或煤焦油染料，种类很多，应用极广。它的缺点是经日光照射容易褪色，苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。在制片中注意掌握酸碱度，并避免日光直射，也能经几年不褪色。 1、酸性品红（Acid fuchsin）酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容于水，略溶于酒精（0.3%）。是良好的细胞制染色剂，在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。它跟甲基绿同染，能显示线粒体。组织切片在染色前先浸在带酸性的水中，可增强它的染色

病理技术卫生考试常考固定液与特殊染色总结

单纯固定液甲醛：能固定类脂和脂类，但必须冷冻切。也可固定高尔基体、线粒。是糖的保护剂。体除去甲醛色素的方法：Verocay法，乙醇配氨水；Schride法。重铬酸钾Zenker，Helly，Maximov，Regaud。苦味酸：易燃易爆，强酸，糖类；可以软化皮肤，易于切片。不宜用火棉胶包埋。70%乙醇中加浓氨水去除固定产生的黄色。三氯醋酸：SUSa液的主要成分，使蛋白沉淀，良好的脱钙剂。升汞：针状结晶，组织收缩明显。不能固定类脂和糖类。可固定蛋白，固定后需用碘液脱汞乙醇：固定兼有脱水作用，糖原的固定，纤维蛋白和弹性纤维固定。浓度80-95%。醋酸：固定染色体，清楚的显示细胞核，但组织膨胀明显，尤其对于胶原纤维和纤维蛋白。铬酸避光保存。不能固定脂肪。固定后流水冲洗大于24h。饿酸延长固定时间，脆性增加，对染色不力。1%高锰酸钾脱碘，固定后流水冲洗12-24h。丙酮：酶组织化学。丙酮对组织块的收缩作用强于乙醇，对糖原无固定作用。异丙醇：是乙醇良好的替代品，组织收缩小，硬化作用较弱；不能再用于火棉胶的包埋。叔丁醇：脱水后可不经透明，直接浸蜡。电镜标本中常用作中间脱水剂。环氧己烷：不引起组织收缩和硬化，常用于植物标本制作，价格贵。四氢呋喃：既是脱水剂，又可以作为封片溶媒。环己酮：代替乙醇作脱水剂和随后的浸蜡和包埋。混合固定液 B-5固定液：固定淋巴组织，配方无水醋酸钠-升汞-甲醛，染色前脱汞处理； Muller液：媒染和硬化神经组织，需常更换液体，固定作用缓慢。 Bouin液：结缔组织比较差。不适宜长期固定（12-24h）。固定后组织被染成黄色需用70%-80%乙醇洗涤。

常用染色剂

常用染色剂实验室常用染料性能介绍及常用药品试剂和培养基的配制生物标本常用染料性能简介（一）天然染料(Natural Dyestuff) 1、苏木精苏木精是从南美的苏木（热带豆科植物）干枝中用乙醚浸制出来的一种色素，是最常用的染料之一。苏木精不能直接染色，必须暴露在通气的地方，使他变成氧化苏木精（又叫苏木素）后才能使用，这叫做“成熟”。苏木精的“成熟”过程需时较长，配置后时间愈久，染色力愈强。被染材料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。所以在配制苏木精染剂时都要用媒染剂。常用的媒染剂有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体，易溶于酒精，微溶于水和甘油，是染细胞核的优良材料，他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。分化时组织所染的颜色因处理的情况而异，用酸性溶液（如盐酸—酒精）分化后呈红色，水洗后仍恢复青蓝色，用碱性溶液（如氨水）分化后呈蓝色，水洗后呈蓝黑色。 2、洋红洋红又叫胭脂红或卡红。一种热带产的雌性胭脂虫干燥后，磨成粉末，提取出虫红，再用明矾处理，除去其中杂质，就制成洋红。单纯的洋红不能染色，要经酸性或碱性溶液溶解后才能染色。常用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸，碱性溶液有氨水、硼砂等。洋红使细胞核的优良染料，染色的标本不易褪色。用作切片或组织块染都适宜，尤其适宜于小型材料的整体染色。用洋红配成的溶液染色后能保持几年。洋红溶液出现浑浊时要过滤后再用。（二）人工染料(Synthetic dyestuff) 人工染料，即苯胺染料或煤焦油染料，种类很多，应用极广。它的缺点是经日光照射容易褪色，苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。在制片中注意掌握酸碱度，并避免日光直射，也能经几年不褪色。 1、酸性品红酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容于水，略溶于酒精（0.3%）。他是良好的细胞制染色剂，在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。他跟甲基绿同染，能显示线粒体。组织切片在染色前先浸在带酸性的水中，可增强它的染色力。酸性品红容易跟碱起作用，所以染色过度，易在自来水中褪色。 2、刚果红刚果红是酸性染料，呈枣红色粉末状，能溶于水和酒精，遇酸呈蓝色。他能作染料，也用作指示剂。他在植物制片中常作为苏木精或其他细胞染料的衬垫剂。他用来染细胞质时，能把胶制或纤维素染成红色。在动物组织制片中用来染神经轴、弹性纤维、胚胎材料等。刚果红可

HE染色和尼氏染色

HE染色一．HE染色简介：苏木精—伊红染色法( hematoxylin-eosin staining ) ，简称HE染色法，石蜡切片技术里常用的染色法之一。苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。由于组织或细胞的不同成分对苏木精的亲和力不同及染色性质不一样。经苏木精染色后，细胞核及钙盐粘液等呈蓝色，可用盐酸酒精分化和弱碱性溶液显蓝，如处理适宜，可使细胞核着清楚的深蓝色，胞浆等其它成分脱色。再利用胞浆染料伊红染胞浆，使胞浆的各种不同成分又呈现出深浅不同的粉红色。故各种组织或细胞成分与病变的一般形态结构特点均可显示出来。二．实验步骤： 1.脱蜡：将石蜡切片在65℃烘箱中烘烤40-60分钟，后用二甲苯（Ⅰ）、（Ⅱ）浸泡，各15min；2.水化：无水酒精（100%乙醇）2min，下行至90%、80%、70%酒精各2min，蒸馏水（Ⅰ）、（Ⅱ）各2min； 3．染色：石蜡画圈，用滴管滴加苏木素在脑片上，放湿盒40s；（苏木素需要回收） 4.流水浸洗：把玻片装入玻片铁架子里，在1L烧杯里用自来水对玻片进行流水浸洗；（脑片不要对着水流直接冲） 5.1%盐酸酒精分化：快速提拉2-3下，用时3-5s左右； 6.流水浸洗：自来水洗3次，每次20min； 7.伊红染色：时间15min；

8.流水浸洗； 9.脱水：先在通风橱外的70%酒精浸没，时长2-3s，以颜色适宜为准，再放入通风橱中脱水，70%、80%、90%2-3s，100%酒精Ⅰ、Ⅱ1min，二甲苯Ⅰ、Ⅱ2min；10．封片：上述处理好的玻片，取中性树胶滴入载玻片的组织上，取盖玻片从一端逐步盖下去，避免发生气泡三．结果的判断： 3.1实验结果：细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色。细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。胶原纤维呈淡粉红色，弹力纤维呈亮粉红色，红血球呈橘红色，蛋白性液体呈粉红色。着色情况与组织或细胞的种类有关，也随其生活周期及病理变化而改变。例如，细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱，当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。胶原纤维在老化和出现透明变性时，伊红着色由浅变深。 3.2 HE染色评定标准：（1）切片完整，厚度4-6微米，厚薄均匀，无皱褶无刀痕；（2）染色核浆分明，红蓝适度，透明洁净，封裱美观。四．注意事项： 1．染色之前一定要了解清楚所用的染色液的配制方法，不同的染色液染色后的处理是不一样的。 2．染色过程中所用的时间以及酒精梯度脱水的选择要根据染色时的室内温度、染液的新鲜程度及实验室的实际情况等灵活掌握。在室温高、切片、染色液又是新配制的，染色时间就要短，反之时间就长。

几种常用的染色方法修订稿

几种常用的染色方法 WEIHUA system office room 【WEIHUA 16H-WEIHUA WEIHUA8Q8-

稍多加些，或看情况补充滴加，经1—3min，加约与染液等量的中性蒸馏水或PBS液，轻轻晃动玻片，使与染液混匀，约3min左右，直接用水冲洗（不可先将染液倾去），吸干或烘干、镜检。细菌染成蓝色，组织、细胞等物呈其它颜色。（2）另一方法? 抹片自然干燥后，按涂抹点大小，盖上一块略大的清洁滤纸片，在其上轻轻滴加染色液，至略浸过滤纸，并看情况进行补滴，维持不使变干；染色3--5min，直接用水冲洗，吸干或烘干、镜检。此法使染色液经滤纸过滤，可大大避免沉渣粘附于抹片上影响镜检观察。 5．姬姆萨染色法（1）于5ml新煮过的中性蒸馏水中滴加5—10滴姬姆萨氏染色液原液，即稀释成为常用的姬姆萨氏染色液。（2）抹片经甲醇固定干燥后，在其上滴加足量的染色液或将抹片浸入盛有染色液的染色缸中，染色30min，或者染色数小时至24h，取出水洗，吸干或烘干、镜检。细菌呈蓝青色，组织、细胞等呈其它颜色。视野常呈淡红色。 6．克利特氏荚膜染色法（1）染色液配制 ①美蓝溶液? 美蓝1g，95％酒精10ml，蒸馏水100ml。将美蓝溶于酒精内，再加蒸馏水混合。 ?②碱性复红溶液? 碱性复红0.03g，95％酒精1ml，蒸馏水99ml。将碱性复红溶于酒精内，再加蒸馏水混合。（2）染色法 ①涂片经火焰固定后，滴加美蓝溶液，将玻片至火焰上面加热至发生蒸汽为止。 ②水洗，以碱性复红溶液复染15—30s。 ?③水洗后、吸干、镜检。 ④染色后，菌体呈蓝色，荚膜呈红色。