脉络宁注射液中聚山梨酯80的含量测定与安全性分析
[5] 陈新谦,金有豫,汤光.新编药物学[M ].16版.北京:人民卫生出版社,2007:93.
[6] Dailly E,Le Floch R,Deslandes G,et a l .Influence of glomeru -lar filtration rate on the clearance of vancomycin adm inister ed
by continu ou s in fus ion in burn patients [J ].In t J Antimicrob Agents ,2008,31(6):537-539.
[收稿日期]2010-07-26
[作者简介]吴晓燕,女,硕士,电话:025-********,E -mail:xiaoyan wj 86@https://www.360docs.net/doc/6e4696442.html, [通讯作者]狄留庆,男,教授,电话:025-********,E -m ail:diliuqing 928@https://www.360docs.net/doc/6e4696442.html,
脉络宁注射液中聚山梨酯80的含量测定与安全性分析
吴晓燕1,郭青2,狄留庆1
(1.南京中医药大学,江苏南京210029;2.江苏省食品药品检验所,江苏南京210008)
[摘要] 目的:测定了79批脉络宁注射液中聚山梨酯80的含量,并对其安全性作出分析。方法:采用Ag ilent G F -250柱(250mm @9.4mm,4L m)色谱柱,以20mmol #L -1醋酸铵溶液-乙腈(90B 1)为流动相,流速0.6mL #min -1;柱温30e ;EL SD 漂移管温度110e ;空气流速2.3L #min -1。结果:聚山梨酯80含量在8.0~11.1g #L -1,均值为9.2g #L -1(RSD 为8.2%,n 为79)。结论:测得的数据与本制剂中聚山梨酯80的工艺规定的加入量基本相符,但静脉滴注质量浓度达0.4g #L -1,参照注射液中聚山梨酯80的滴注浓度不应高于0.1g #L -1的有关要求,在临床应用时可能存在风险。[关键词] 聚山梨酯80;安全性;脉络宁注射液
[中图分类号]R 969.3,R 927.2 [文献标识码]A [文章编号]1001-5213(2011)07-0554-03
Quantitative analysis and safty assessment of tween 80in Mailuoning injection
WU Xiao -yan 1,GUO Qing 2,DI Liu -qing 1(1.Nanjing U niversity of Chinese M edicine,N anjing ,210029,China;2.
Jiang su Instiute for Fo od and Drug Co ntr ol,N anjing ,210008,China)
ABSTRAC T:OBJECTIV E T o evaluate the safet y of use of M ailuoning Injection,the reliable and accurate SEC -EL SD method was used to assay T ween 80in 79batches of M ailuo ning I njection fr om 23pr opvinces.METHODS T he chr omato gr aphic ana-l y sis wer e carr ied o n a Ag ilent GF -250column(250mm @9.4mm,4L m),the mo bile phase consisted of 20mmol #L -1animon-i um acetate and acetonitr ile(90B 10),and EL SD was used as a det ecto r.T he flow was 0.6mL #min -1,and the column tempera -tur e w as set at 30e .T he air flo w w as 2.3L #min -1,and the temper atur e of dr ift t ube w as 110e .RESULTS T he r esults show ed that T ween 80fell in the range of 8.0-11.1mg #mL -1,w ith averag e value o f 9.2mg #mL -1(RSD =8.2%,n =79).C ONCLUSION T he results basically co mply w ith the required concentr atio n of T w een 80by the pro cedure.H ow ever,the co ncentrat ion of intrav eno us dr ip reaches to 0.4mg mL -1in M ailuo ning Injection,therefo re,it ex ists po tential r iskiness in use based o n t he r equest t hat T ween 80sho uld not ex ceed 0.1mg #mL -1in injection w hen used for intrav eno us drip.KEY WORDS:tween 80;safety ;M ailuoning injection;SEC -EL SD
脉络宁注射液由牛膝、玄参、石斛、金银花组成,具有清热养阴、活血化淤的作用,用于血栓闭塞性脉管炎、静脉血栓形成、动脉硬化性闭塞症、脑血栓形成及后遗症等病,其临床主要不良反应为皮肤瘙痒、皮疹、头痛、心悸、罕见呼吸困难、过敏性休克等。大量研究证实,以聚山梨酯80为增溶剂的中药注射剂,其含量的高低与不良反应的发生和程度存在相关性[1]
。为评价其安全性,对从全国23个省抽取的79批脉络宁注射液中聚山梨酯80进行了分子排阻-蒸发光散射法(SEC -ELSD)测定[2-3],为进一步改进脉络宁注射液的生产工艺和质量标准,指导临床合理用药提供参考。
1 材料
Shimadzu LC )10ADvp 高效液相仪(日本);Al-l tech ELSD 2000检测器(瑞士);聚山梨酯80对照品(购自Sigma -ALDRICH,USA,批号038K 0090);脉络宁注射液79批样品由各相应省食品药品监督管理局或药检所从全国23个省份抽取,脉络宁注射液聚山梨酯80阴性对照液及生产用聚山梨酯80(上海申宇);乙腈为色谱纯;其他试剂为分析纯。2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱为Agilent GF -250柱(250mm @9.4mm ,4L m );柱温:30e ;流动相:20mm ol #L
-1
醋酸铵溶液-乙腈(90B 10);流速:0.6m L
#min -1;ELSD 空气流速:2.3L #min -1;ELSD 漂移管温度:110e ;进样量:10L L 。2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液 取聚山梨酯80对照品,精密称定,加水配制成质量浓度约为3g #L -1的溶液。2.2.2 供试品溶液及阴性对照液 将79批脉络宁注射液及分别精密吸取5m L,置15m L 量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀制得供试品溶液。同法制备不含聚山梨酯80的阴性对照液。2.3 方法学验证
2.3.1 线性关系考察 取浓度为3.0315g #L -1
和3.0950g #L -1的对照品溶液,分别进样5,8,10,15,20,25L L,测定。以进样量(L g )的对数值为横坐标,峰面积的对数值为纵坐标,计算线性回归方程。结果,聚山梨酯80双对数线性回归方程为Y =1.795X +7.914,r =0.9990(n =6),线性范围15.16~77.38L g 。
2.3.2 精密度试验 取同一对照品溶液连续进样,按上述色谱条件进行测定,连续进样5次,每次10L L 。结果,聚山梨酯80峰面积的RSD 为2.29%。2.3.3 稳定性试验 取同一份对照品溶液,分别在0,2.5,5,12,19,38.5,41,45,50,55,62h 进样,依法测定。结果,聚山梨酯80峰面积RSD 为1.71%,在62h 内稳定。
2.3.4 专属性试验 取不含聚山梨酯80的脉络宁注射液阴性对照液,进样,结果见图1,阴性样品中未出现聚山梨酯80色谱峰,表明方法具有专属性。2.3.5 重复性试验 取批号为20090335样品,按供试品制备方法平行制备6份,按上述色谱条件测定。结果,聚山梨酯80的平均含量为11.4320g #L -1,RSD 为0.61%(n =6)
。
图1 H PLC -E LSD 色谱图
a.对照品;
b.样品;
c.聚山梨酯80阴性;1,2-聚山梨酯80Fig 1 H PLC -ELS D chromatogram s
a.reference sub stan ce;
b.sam ple;
c.negative s am ple w ithout T w een 80;1,2-tw een 80;
2.3.6 准确性试验
(1)样品中聚山梨酯80的峰数和峰位确认:聚山梨酯80为脂肪酸共聚物,不同厂家生产的聚山梨酯80脂肪酸的组分和纯度会不同,为避免投料用的聚
山梨酯80辅料与实验中聚山梨酯80对照品在纯度
上不同造成色谱峰的漏检,有必要对二者进行峰数和峰位的确认。取厂方投料用聚山梨酯80辅料,同法制备,进样分析,结果见图2,聚山梨酯80出现2个峰,峰数和峰位均与Sigm a 公司购买的聚山梨酯80对照品一致。
(2)回收率试验:取重复性项下样品,精密吸取2.5mL,置15m L 量瓶中,分别按照低、中、高的梯度精密加入质量浓度为3.2622g #L -1
的聚山梨酯80对照品溶液6,8,10m L,每个梯度3份,加水至刻度摇匀,依法测定。结果,聚山梨酯80平均回收率为100.04%,RSD 为1.97%(n =9)。
图2 聚山梨酯80的H PLC -E LSD 对比图a.聚山梨酯80辅料;b.聚山梨酯80对照品
Fig 2 T he H PLC -ELSD chromatogr ams of a contras t betw een tw een 80reference sub stance and su pplem entary m aterial
a.tw een 80supplementary material;
b.tw een 80referen ce sub stan ce
2.3.7 定量限试验 取质量浓度为0.5020g #L -1的聚山梨酯80对照品溶液,进样10L L,连续进样3针,结果平均S/N =10.37,此时的进样量为4.868L g,聚山梨酯80的定量限为4.868L g 。
2.4 样品含量测定 取供试品溶液10L L 、对照品溶液5,10,20L L,分别进样,以进样量对数值为横坐标,峰面积双对数值为纵坐标,以外标三点法对数线性方程计算含量。结果见表1,79批样品的聚山梨酯80含量在8.0~11.1g #L -1
,均值为9.2g #
L -1,RSD 为8.2%(n =79)。3 讨论
按照我国药品不良反应检测中心制定的ADR 判断标准,脉络宁注射液ADR 病例在所列举的17种中药注射液中排名第五[4]。聚山梨酯80广泛用作中药注射剂的增溶剂,但有很强的破裂细胞膜的作用而引起刺激性、溶血性和致敏性(组胺释放),且
聚山梨酯80作为一个聚合物本身纯度波动很大,其中不饱和脂肪酸易氧化降解产生有毒成分。聚山梨酯80静脉注射会引起急性超敏反应、外周神经毒性、抑制P -糖蛋白活性、内在肿瘤效应等[5-6]。因而,聚山梨酯80是一种潜在不安全性的辅料,其使用必须有严格的限制条件,否则会给人的健康造成很大伤害。从79批样品的测定数据看,脉络宁注射液中聚山梨酯80的加入量基本符合工艺的规定量,但有一定的波动性(RSD 为8.2%)。
表1聚山梨酯80含量测定结果(n=79)
T ab1T he results o f T w een80contained in M ailuoning inject ion(n=79)
批号含量/g#L-1批号含量/g#L-1批号含量/g#L-1批号含量/g#L-1 200903279.81962008102610.0787200812358.8556200902028.8463 200903288.97142008060438.3286200809138.5048200902069.3305 200901228.6885200812159.47882008090910.0739200812348.3864 200902539.4191200811019.8127200810248.5495200812329.2712 200810408.4263200810109.8941200903268.77842008111169.0216 200812339.0650200810248.55062009033510.6319200903179.7818 200812348.59552009021310.5017200903489.2975200903078.8228 200902459.7001200810018.5174200810178.2103200902189.1860 200902199.4866200808139.7598200902219.1141200903098.8684 200811258.9927200812028.1207200812428.83892009021910.3560 200810238.3624200903218.3374200810058.3247200808209.2767 200809259.0433200812289.6820200812399.97062008093510.8916 200902387.9843200903179.3356200809269.0842200812239.2371 200901168.8002200811448.4653200903299.06812009034210.5604 2008104510.9272200811479.6375200903319.4195200903149.4291 200810449.1167200812298.0227200903019.2491200903369.1706 200810168.7506200811298.6827200811378.96982008112510.8110 200811238.9398200903248.44962007122538.6126200812458.6528 2009024511.0573200811479.1350200903208.77002008121411.1366 2009024210.4416200812188.6022200812359.6588
豚鼠和Beag le犬的最低阳性剂量分别为30 mg#kg-1和0.8mg#kg-1[5],按照一次10~20mL(1 ~2支),加入5%葡萄糖注射液或氯化钠注射液250~500mL中滴注,体质量为70kg人体的一次用量则为1.14~3.17mg#kg-1,因此本制剂中聚山梨酯80可能处于阳性剂量范围之内(鼠、犬、人以及人与人之间的敏感度不同)。注射剂中聚山梨酯80的滴注浓度应限制在0.1g#L-1[7],本制剂的滴注浓度为0.4g#L-1,每次最大用量0.2g,提示聚山梨酯80的使用浓度偏高。该浓度是否与脉络宁注射液临床不良反应存在相关性值得关注,建议临床使用时缓慢滴注,对聚山梨酯80过敏者严格控制使用。
含有聚山梨酯80的鱼腥草注射液其用量与不良反应的产生和程度存在相关性,无论植物提取的鲜鱼腥草油还是干鱼腥草油,只要加入10g#L-1的聚山梨酯80,马上就会起阳性反应。鱼腥草注射液中聚山梨酯80的工艺加入量为5g#L-1,而脉络宁注射液中聚山梨酯80含量是鱼腥草注射液的2倍,因此,脉络宁注射液可能存在着风险性,建议对脉络宁注射液工艺中聚山梨酯80的加入量进一步研究,在保证澄明度的前提下,筛选其最小加入量,同时在脉络宁注射液质量标准中增加对聚山梨酯80的限量检查项,制定适宜的含量上限。
70个中药注射剂标准中辅料使用情况的统计分析结果表明,凡注明添加了增溶剂的24个品种都使用了聚山梨酯80[8]。建议国家制定注射级聚山梨酯80质量标准,增加质量控制项目,如二氧六环、环氧六环、2-氯乙醇、乙二醇和二甘醇的检查,油酸的含量测定,严格色泽检查的限度等,以减少聚山梨酯80对中药注射液不良反应的影响。
参考文献:
[1]吴毅,梁成罡,沈连忠,等.鱼腥草注射液临床不良反应的原因
研究(?)[J].药物分析杂志,2007,27(5):782.
[2]吴毅,梁成罡,金少鸿,等.SEC-ELSD法测定中药注射液中聚
山梨酯80的含量[J].药物分析杂志,2008,28(1):12-15.
[3]Nair LM,Stephens NV,Vin cen t S,et al.Determ ination of
polysorbate80in parenteral formu lations by hig h-performan ce
liquid ch romatography and evaporative lig ht scatterin g detec-
tion[J].J Chromatog r A,2003,1012(1):81-86.
[4]李艳,李江华,梁志雄,等.17种中药注射剂不良反应分析[J].
广东药学学报,2008,24(2):166-168.
[5]吴毅,金少鸿.药用辅料吐温80的药理、药动学及分析方法研
究进展[J].中国药事,2008,22(8):717-720.
[6]王庆利,彭健.吐温80的安全性研究进展[J].毒理学杂志,
2006,20(4);262-264.
[7]UKPAR.0.1%w/w polys orb ate80in mater for injection[S].
PL10673/0026.
[8]谭瑾,宋民宪,傅超美,等.中药注射剂标准中辅料的使用及合
格指标的统计[J].华西药学杂志,2008,23(3):376.
[收稿日期]2010-02-06