免疫学实验作业

免疫学实验作业

1、实验饲养兔子的方法

?兔子是草食性的，所以要提供无限量的禾科干草。饲料里也可以加一些麦片或磨牙的饲料。

?为了营养均衡，不要只喂饲料，在兔子6个月大以后尝试吃一点新鲜无污染蔬菜，例：空心菜，芹菜，青江菜，番薯叶，红萝卜，等等。具体的量要根据兔子的身体状况决定，但最好不要过量。因兔子排毒功能较差，要注意最好不含农药，应彻底清洗干净，洗好之后放在通风处晾干1～2小时后（不要曝晒在太兔阳下），再将剩余的水用厨房纸巾拭干。(不湿，否则会拉肚子，一拉肚子就很难医)。

?需要注意的是：蔬菜和水果不一样，水果不建议给兔子吃。因为水果对于兔子的肠胃和牙齿都是一种负担。如果非要供给，请不要超过1天1-2汤匙。

?养兔必需的用品：倒挂式带滚珠的水壶、食具、兔厕所、磨牙棒、草架、兔笼。

?什么动物都离不开水，兔子也一样，给兔子喝的水一定要是干净的白开水。

?不要以为自己老给兔子吃蔬菜都没见怎样，其实那只是你的运气好，如果兔子长期吃蔬菜，蔬菜腐烂会堆积在肠里，容易得肠炎而死。应该是：1-6个月－适量苜蓿干草+无限量提摩西干草+幼兔粮+白开水；6个月以上－无限量提摩西干草+成兔粮+白开水+少量蔬菜水果（蔬菜必须是不带水分的），粮只要给一小把给它吃就好（家里如果没有草，可以去买无糖的燕麦来暂时代替下，那是人吃的，在超市都有得卖）。

?兔子的居住环境要卫生、干燥、通风的，如果环境潮湿、不卫生，容易滋生细菌，造成兔子得皮肤病。

?建议幼兔一买回来，给它们喂球虫药预防球虫病，球虫病发于急性，很多幼兔死于球虫，其次是拉稀。

?如果幼兔居住的笼子是狗笼，应在笼子里面加一块木板给它垫脚，不垫脚久了会得脚皮炎，脚皮炎是很难治好的。

?如果兔子吃蔬菜导致拉稀，要及时给它服用1片乳酶生，要是家里没有乳酶生，还可以喂乳酸菌片、益生菌。

⑴笼养的兔子每天要保持1小时以上的活动时间，它的尿液粪便要每天清理，如不清理，堆积久了会产生氮气。

⑵幼兔不要给它洗澡，兔子是很爱干净的，它每天都会自己舔毛，不建议给它洗澡，但在不得以要洗澡的情况下，要选在天气好，有太阳的时候洗，还要应该避免水进入它的耳朵，要是不注意，它就会得中耳炎，还不能给它用人用的像沐浴露、肥皂之类的东西，洗澡后要马上把它弄干，不然会感冒。

⑶兔子是没有饱感的，要控制它的食量，免得撑死。

⑷兔子不能吃太多的淀粉，淀粉对兔子很不好。

⑸养兔必备药：乳酶生（预防和治疗拉稀）球虫药（预防球虫病）。

⑹抓兔子时千万不能抓兔子的耳朵，耳朵是兔子的重要器官，兔子没有汗腺，必须用耳朵散热，兔子的耳朵不是长来让人抓的，如果把兔耳抓伤造成神经受伤，将造成兔子的耳朵直不起来、无法转动，正确的抓兔子方法应该是：用一只手拖住兔兔的背，用另一只手抬着兔兔的屁股让兔兔的腿和肚子都朝前。

2、实验兔子的处理方法

?兔子的抓取

家兔比较驯服，不会咬人，但脚爪较尖，应避免家兔在挣扎时抓伤皮肤。常用的抓取方法是先轻轻打开笼门，随后手伸人笼内，用一只手抓住兔的颈部皮毛，将兔提起，用另一只手托住其臀，或用手抓住背部皮肤提起来。

?皮下注射

注射时用左手拇指及食指轻轻捏起皮肤，右手持注射器将针头刺入，固定后即可进行注射。

?静脉注射

兔子一般采用外耳缘静脉，因其表浅易固定。注射部位除毛，用75%酒精消毒，手指轻弹兔耳朵，使静脉充盈，左手食指和中指夹住静脉的近心端，拇指绷紧静脉的远心端，无名指及小指垫在下面，右手持注射器，尽量从静脉的远端刺入血管，移动拇指于针头以上固定，放开食指、中指，将药液注入，然后拔出针头，用手压迫针眼片刻以止血。

?兔子的抽血

①耳缘静脉采血：将兔固定，拔去耳缘静脉局部的被毛，消毒，用手指轻弹

兔耳，使静脉扩张，或用刀片沿血管方向割破一小切口血液就流出。

②耳中央动脉采血：在兔耳中央有一条较粗的、颜色较鲜艳的中央动脉。用左手固定兔耳，右手持注射器，，在中央动脉的末端沿着与动脉平行的向心方向刺入动脉可见血液进入针管。

③心脏采血：使家兔仰卧，穿刺部位在第三肋间左缘3mm处，，针头刺入心脏后，持针手可感觉到兔心脏有节律大的跳动。如果还抽不到血，可以前后调节针头的位置，不能将针头在胸腔内左右摆动，以防弄伤兔的心肺。

3、通过免疫学实验要学到的技能。

①学会兔子的抓取与固定的技能。

②学会兔子的耳静脉采血的技能。

③学会给兔子耳静脉注射药品的技能。

④掌握弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂的制备方法。

⑤学习利用可溶性抗原，通过免疫动物制备抗血清的方法。

⑥了解免疫血清制备、分离免疫血清的方法

⑦学会免疫球蛋白的提取与纯化。

⑧掌握冷酒精法提取免疫血清中IgG的原理和方法。

⑨了解免疫斑点实验的原理和操作过程。

⑩了解酶联免疫吸附试验的方法，掌握酶联免疫吸附试验的方法，检测待定的抗体。

4、实验动物技术

5、饲养动物实验室具备的条件

6、实验动物的分类及其特征、用途

?分类

依据实验动物遗传基因纯合的程度,常把实验动物划分为近交系(inbred strain)、突变系(mutant strain)、杂交一代(hybrid F1)和封闭群(closed colony)四大类群。

?特征

①:是遗传限定的动物(genetically defined animal)。从遗传学角度看，实验动物必须是经人工培育，遗传背景明确或来源清楚。在人工控制的条件下，实验动物经

过连续的近亲繁殖，可以达到遗传基因几乎完全的纯合，而这点在野生动物则是无法做到的。

②:对其携带的微生物、寄生虫实行人工控制。所有的实验动物，在繁育过程中，都对其微生物和寄生虫进行严格的监控。

?用途

实验动物培育的目的主要是用于科学实验。因此，在育种方向上不同于经济动物那样，偏重于经济价值，也不同于观赏动物注重于观赏价值。而是利用遗传学原理，培育出多种用于各种科学研究的品系动物、免疫缺陷型动物、人类疾病动物模型等。在微生物控制方面，则培育出各种无菌动物、悉生动物（gnotobiotes animal ）及科学研究需要的无特殊病原体动物等等。

7、悉生动物

悉生动物（Gnotobiotic Animals）也称已知菌动物或已知菌丛动物（Anima with Known Bacterial Flora），是指用与无菌动物相同的方法取得饲养（剖腹取胎，在隔离器内饲养）、但明确的物体内所给予的已知微生物的动物，即凡含有已知的单菌（Monoxenie）、双菌（Dixenie）、三菌（Trixenie）或多菌（Polyxenie）的动物。一般是将1～3种已知的微生物人工接种于无菌动物体内定居，无菌动物接种一种已各菌就是单菌动物，以此类推。由于此种动物和无菌动物一样是放在无菌隔离器内饲养的，因此选用此种动物作实验准确性是很高的，可排除动物体内带有的各种不明确的微生物对实验结果的干扰，常用于研究微生物和宿主动物之间的关系，并可按研究目的来选择某种微生物。

悉生动物是使特定的微生物定居于无菌动物的动物，可以说是一种动物与微生物的复合体，也饲养于隔离器中，饲养方法与无菌动物相同。由于这种动物是有菌的，所以隔离器内也有这种微生物的存在。

8、弗氏不完全佐剂的制备

（1）称取羊毛脂10g，逐滴加入石蜡油40ml，充分研磨使得羊毛脂与石蜡混合均

（2）将佐剂制好后加入抗原使得佐剂与抗原体积比为1：1，然后研磨大约半小时后形成均一性的乳白色粘稠的乳状液，取一滴滴于冷水面上看是否能散开，如果包得不太好，就用超声波，使得乳状液不散开为止。