DCIK细胞治疗注意事项

细胞实验室

1．适应症

DCIK细胞技术是一种广谱抗肿瘤技术，除了T细胞淋巴瘤以外，其他恶性肿瘤均可使用。

2．治疗时机选择

2．1 常规化疗患者

患者在接受完常规治疗后。一般是在化疗后7—30天内进行肿瘤免疫细胞治疗。采血后第14、16天回输（采血当日为第一天），在回输第二次前采下一次治疗所需的血液。

2．2 21天化疗一次患者

在化疗前1天采血，在14、16天回输（采血当日为第一天），然后在下一次化疗前1天采血，第14、16天回输，按照此规律循环进行采血回输。

2．3 手术后不做化疗的患者

患者在手术后15-30天内采血，第14、16天回输。在第二次回输前采下一次治疗的血液。

2．4 手术后做化疗的患者

同常规化疗患者或21天一次化疗的患者。

2．5 康复期患者

是指结束所有治疗后的患者。可以按照规定疗程进行DCIK治疗。

3. 治疗疗程

原则上每个患者必须最少完成2个疗程才能收到疗效，单独做一两次很难体验到疗效。1个疗程采血2次回输4次（时间为32天）。

注意：如果患者条件允许，可以多做几个疗程，做DCIK的次数越多，效果越好。

4．采血对象

采血量一般为每次100毫升，特殊情况可以减少到60毫升。

4.1 自体采血

采取患者自身血液进行治疗。这是首选的方法，好处是副作用小，缺点是对患者自身体质有要求。

4.2 异体采血

选用患者的直系亲属作为采血对象，最好是患者的孩子，其次为患者的兄弟姐妹。

4.3 患者体质要求

4．3．1 血常规

1．白细胞计数3.2以上；

2．血红蛋白100克以上；

3．单核细胞计数0.1以上

4．3．2 其他实验室检测

1．肝肾功能：胆红素不能超过正常值。其他肝功能超过不严重者不妨碍采血。肾功能不全者禁止采血。

2．凝血时间正常

3．输血前四项：除了乙肝患者可以采血外供应自体使用外（严禁乙肝患者采血供应异体患者），其他患有丙肝、艾滋、梅毒患者禁止采血。

4．3．3 其他体质要求

1．能够正常饮食；

2．无其他影响健康的重大疾病

5、常见副作用及其处理

发热、肌肉酸痛、嗜睡、乏力是比较常见的反应，在回输前最好和给患者解释一下，避免不必要的误会。

5．1 发热

5．1．1特点：比较常见的副作用，在异体供血中较容易出现发热现象，多为回输后1-3小时开始发热，热度一般不会超过39度，时间持续不会超过12小时。患者表现为寒战、怕冷、抽搐等症状。

5．1．2 原因：是一种免疫反应，DCIK进入体内杀伤肿瘤细胞产生大量细胞碎片，导致肥大细胞出现超级反应释放致热因子。所以发热一种免疫反应，而且是一种好的免疫反应，证明DCIK细胞对肿瘤细胞敏感。而且发热的患者在疗效反应上要比其他患者好。

5．1．3 处理：一般使用退热药物和物理方法退热即可，尽量不

要使用肾上腺皮质激素。可以选用布洛芬、阿司匹林等退热药物。5．2肌肉酸痛、嗜睡、乏力

这也是一种免疫反应，类似感冒样的免疫反应，不需要特殊处理，嘱咐患者多饮水注意休息即可。一般在12—24小时候或自然缓解。5．3皮疹

是对白蛋白过敏的原因，发生率非常罕见。会在全身或局部产生类似药物过敏样的皮疹。处理使用抗组胺药物即可。

B细胞杂交实验报告

苏州大学实验报告院、系医学部年级专业姓名学号课程名称医学免疫学实验成绩指导老师葛彦同组实验者实验日期 2020/6/3

六、思考题 1.阐述脾脏细胞和骨髓瘤细胞融合后的五种状态，以及在HAT选择性培养基里生存与否的原理。 1)五种状态：未融合的B细胞；未融合的骨髓瘤细胞；B细胞融合B细胞；骨髓瘤细胞融合骨髓瘤细胞；B细胞融合骨髓瘤细胞。 2)生存与否的原因 B细胞无法在体外长期大量生存，故未融合的B细胞和B细胞相互融合都无法在HAT选择性培养基生存；骨髓瘤细胞和骨髓瘤同核融合细胞在HAT培养液中时，DNA合成的主要途径被A阻断，由于缺乏HGPRT或/及TK，不能利用培养基中的H及T，无法完成DNA的合成； B细胞和骨髓瘤细胞的异核融合体即杂交瘤细胞，既从B细胞获得了HGPRT和TK，从而利用培养液中的H和T合成DNA，又从骨髓瘤细胞获得了无限增殖的能力，因此，只有杂交瘤细胞能在HAT选择培养液中生存下来。 2.现需要利用杂交瘤技术制备鼠抗人CD3单克隆抗体，请设计一个实验计划，阐述各阶段的实验方案和过程，以及所需的实验材料 1)实验材料人CD3抗原、小鼠、小鼠骨髓瘤细胞、细胞融合剂、PBS、HAT培养液、120目钢丝筛网、玻璃平板、96孔细胞培养板、温控离心机。 2)实验方案和过程 a)将人CD3抗原注入小鼠体内，进行几周加强免疫； b)取小鼠脾脏处死小鼠，固定于解剖架上打开腹腔，取出脾脏。置于120目的钢丝网中，将网移入盛有生理盐水的平皿中，轻轻压磨，使其成为单个细胞悬液，吸取细胞悬液，与骨髓瘤细胞SP2/0按比例混合，离心后弃上清； c)用HAT培养基培养纯化，得到杂交瘤细胞，使其产生抗人CD3单克隆抗体。

细胞房注意事项和管理范文

细胞房注意事项和管理

员清洗回收培养器皿；检查培养液母液、血清、酒精等公用试剂的储备情况；至少每天倾倒细胞房垃圾、换垃圾袋；检查培养箱内水量是否足够。 4. 值日周结束前需完成的事情：星期五全方位打扫细胞房。包括拖地，擦桌子、柜子、清洁和整理抽屉，擦超净台、冰箱及桌上的仪器，给水浴锅加水或换水，洗细胞房专用的实验服和拖鞋，紫外消毒细胞房。更换培养箱内无菌水、检查硫酸铜溶液是否需要更换（一个月更换一次）！ 5. 每2周清洁一次培养箱：先将培养箱中的物品取出暂存于超净台内，对于比较敏感的细胞能够暂存于其它细胞房的培养箱；将培养箱内的不锈钢板取出，包括4块横板和左右2块立着的架子，用酒精棉球清洁钢板和培养箱内壁；打开培养箱清洁内壁时动作要迅速，避免长时间敞开门使得大量不洁净空气进入，缩短过滤器的寿命；用紫外灯照射培养箱内部15min，手提紫外灯放入培养箱前要用酒精棉擦拭干净。 .6.9培养箱使用注意事项 1. 从培养箱取放物品前，用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。 * 培养箱中的空气是经过过滤的洁净空气。长时间敞开或频繁开关培养箱，容易造成污染。 2. 培养瓶皿放入培养箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精

实验样品采集运输保存方法

1.R N A实验样品采集、保存方法使用范围及样品量类别：Microarray Service；Sequencing Service; PCR Array& PCR Service 样本量：样本样本量哺乳动物培养细胞样品（悬浮细胞）1*107个哺乳动物培养细胞样品（贴壁细胞）15cm2 植物组织样品100mg-1g，根据植物不同部位的组织决定组织需要量，尽可能多些，但不必超过1g 动物组织样品新鲜组织样品 A. 使用RNAlater试剂取新鲜组织（注：动物死亡后尽快在10min内取材），组织块以PBS或生理盐水清洗干净，所用组织必须切至厚度在一下，然后放入装有5倍体积RNAlater的离心管（或冻存管）中。 4度孵育过夜，此时样品管需要横置以便组织块充分接触到RNAlater，然后转入-20中保存，样品在-20不会冻结，但溶液中可能会有一些晶体出现，这并不影响后续的RNA抽提。 B. 使用Trizol试剂取新鲜组织（1min以内），组织块以PBS或生理盐水清洗干净，每50-100mg组织加入1ml Trizol溶液匀浆裂解组织样品，最好冰上进行操作。

匀浆的裂解液4度短期保存（1month），-20或者-70度长期保存。冻存组织生物体死亡后尽快（10min以内）切取新鲜组织，并以PBS或生理盐水清洗干净切成小块；培养液倒入离心管中，离心沉淀细胞，弃去上清液。细胞沉淀（1*107个）中加入1ml Trizol裂解液反复吸打几次后，目视可见细胞层溶液完全 -70保存贴壁细胞从培养容器中吸出并弃去培养液培养瓶直接加入Trizol试剂，Trizol用量与细胞贴壁面积有关，15cm2细胞贴壁面积加入1mlTrizol。反复吸打几次后，目视可见细胞层溶解完全。 -70度保存。植物组织样品准确取得所需新鲜组织后，如有必要可用PBS清洗干净，将所用组织切碎，装入冻存管中或者用锡箔包裹好。立即投入液氮中保存。 2.血液类样品采集、保存方法适用范围及样品量全血/血细胞：Microarray Service；Sequencing Service; PCR Array& PCR Service 血清/血浆：Microarray Service；PCR Array& PCR Service

化学实验室基本操作中的注意事项

化学实验室基本操作中的注意事项中学化学实验基本操作中的高考考点较多，为便于系统复习和认真掌握化学实验操作，现总结八点注意事项，以期对同学们有所帮助。一、注意事“先后”顺序 1．组装仪器顺序：先零后整，由低到高，由左到右，先里后外，拆装置与之顺序相反。 2．加热器试管时，先均匀加热，后局部加热。 3．制取气体时，先检查装置的气密性，后装入药品。 4．使用容量瓶、分液漏斗、滴定管前先检查是否漏水，后洗涤干净。 5．用排液法收集气体时，先移导管后撤酒精灯。 6．用石蕊试纸、淀粉碘化钾试纸、醋酸铅试纸气体性质时，要先用蒸馏水将试纸润湿。再将试纸靠近气体检验。而用pH试纸时，要先用玻璃棒蘸取待测液少许滴到放在表面皿中央的干燥pH试纸上，再与标准比色卡比较。 7．中和滴定实验时，用蒸馏水洗净的滴定管、移液管要先用待盛液洗涤2~3次后，再盛装试液。注入滴定管中的液体液面开始在“零”刻度或“零”刻度以下。 8．点燃可燃性气体时，应先验纯后点燃。净化气体时，应先净化后干燥。

9．焰色反应试验中，每做一次，铂丝都应当先蘸取浓盐酸放在火焰上灼烧至无色后再做下一次。 10．配制一定物质的量溶液时，溶解或稀释后溶液应冷却再移入容量瓶。 11．气体在热固体表面时，应先将气体干燥后反应。 12．硫酸沾到皮肤上，先迅速用干布擦去，再用水冲洗，千万不得先用水冲洗；碱液沾到皮肤上，立即用较多水冲洗，再涂上硼酸溶液。二、注意“数据”归类 1．托盘天平的准确度为0.1g；在测定晶体中结晶水含量时，为保证加热过程中使结晶水全部失去，实验中需加热、称量、再加热、再称量，直到最后两次称量不超过0.1g。 2．滴定管的准确度为0.01mL。 3．酒精灯内酒精的量不能少于容积的1/3，也不能多于2/3。4．试管在加热时，所盛液体不能超过试管容积的1/3；且要与桌面成45°角。用试管夹夹试管时应夹在离管口1/3处。 5．烧杯、烧瓶加热时，盛液体量均在容积的1/3~2/3处，蒸发皿加热液体时，盛液体量不宜超过容积的2/3。 6．液体取用时，若没有说明用量，一般取1~2mL。 7．配制一定的物质的量浓度溶液时，烧杯、玻璃棒要洗2~3次，用烧杯往容量瓶中加蒸馏水时，一般加到距离刻度线和1~2mL处，再用胶头滴管定容。

细胞融合实验报告

姓名班级 13级生命基地班学号同组者：科目细胞生物学实验实验题目动物细胞融合【实验题目】动物细胞融合【实验目的】 1.了解动物细胞融合的常用方法。 2.学习化学融合的基本操作过程。 3.观察动物细胞融合过程中细胞的行为与变化。【实验材料与用品】 1、材料鸡血红细胞 2、试剂 50%PEG、GKN溶液、Alsever’s细胞保存液、0.85%氯化钠溶液。 3、器材倒置显微镜、离心机、载玻片、盖玻片、离心管、废液缸、滴管等。【实验原理】细胞融合是指在自发或者诱导条件下，两个或两个以上细胞合并为双核或者多核细胞的过程。目前人们已经发现有很多方法可以诱导细胞融合，包括：病毒诱导融合、化学诱导融和和电激诱导融合。 1、病毒诱导融合仙台病毒、牛痘病毒、新城鸡瘟病毒和疱疹病毒等可以介导细胞的融时也可介导细胞与细胞的融合。用紫外线灭活后，这些病毒即可诱导细胞发生融合。 2、化学诱导融合很多化学试剂能够诱导细胞融合，如聚乙二醇(PEG)、二甲基亚砜、山梨醇、甘油、溶血性卵磷脂、磷脂酰丝氨酸等。这些物质能够改变细胞膜脂质分子的排列，在去除这些物质之后，细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。在恢复过程中想接触的细胞由于接口处脂质双分子层的相互亲和与表面张力，细胞膜融合，胞质流通，发生融合。化学诱导方法，操作方便，诱导融合的概率比较高，效果稳定，适用于动、植物细胞，但对细胞具有一定的毒性。PEG 是广泛使用的化学融合剂。 3、电激诱导融合

姓名班级 13级生命基地班学号同组者：科目细胞生物学实验实验题目动物细胞融合包括电诱导、激光诱导等。其中，电诱导是先使细胞在电场中极化成为偶极子，沿电力线排布成串，再利用高强度、短时程的电脉冲击破细胞膜，细胞膜的脂质分子发生重排，由于表面张力的作用，两细胞发生融合。电诱导方法具有融合过程易控制、融合概率高、无毒性、作用机制明确、可重复性高等优点。【实验步骤】在本次实验中采用的是化学诱导融合的方法，利用PEG使鸡血红细胞发生融合。具体实验步骤如下： 1、取鸡血2ml+2mlAlsever液，再加入6mlAlsever液，混匀后制悬液（4℃保存）【老师已做好，可直接使用】 2、取（1）中悬液1ml+4ml的0.85%的NaCl溶液，进行以下三次离心处理： ①在1200r/min下离心5min，去掉上清液，再加入0.85%的NaCl溶液至5ml； ②1000-1200r/min下离心5min，去掉上清液，再加入0.85%的NaCl溶液至5ml； ③1000-1200r/min下离心7min 【因时间关系此次实验只离心一次】 3、将离心后的沉降血球（去上清后约0.1-0.2ml）加入GKN至1-2ml，使之成为10%的细胞悬液； 4、取上述10%的血球悬液1ml,加入3mlGKN液，使每毫升含血球15000000个； 5、分别取（4）1ml+0.5ml50%PEG，（4）0.5ml+0.5ml50%PEG，（4）0.5ml+1.0ml50%PEG，混匀滴片，编号分别为①②③号溶液。在常温下2-3min后，显微镜下观察。【实验结果】 1、实验中可观察到两个和多个细胞发生质膜融合现象,可看到不同融合状态的细胞： ①两细胞的细胞膜相互接触、粘连； ②接触部分的细胞膜崩解，两细胞的细胞质相同，形成一个细胞质的通道，呈现哑铃状； ③通道扩大，两个细胞连成一体，呈现一个长椭圆形细胞； ④细胞融合完成形成含有双核或者多核的细胞，呈圆形。比较典型的细胞融合时的形态如下图：

细胞房注意事项和管理

细胞房注意事项与管理一、常规操作 1、穿着专用实验服。自己的白大衣或厚外套,可脱在门外的衣帽架上。 2、穿着专用拖鞋。先在入室间换下自己的鞋子,穿着绿色拖鞋进入缓冲间;再在缓冲间换红色拖鞋。尽量避免在缓冲间走动、停留。３、细胞房最多可4个人同时使用。尽量避免在内长时间逗留、交谈。 4. 离开细胞房前,要保证不使用的仪器及时关闭并拔下插头(离心机、水浴锅、日光灯),超净台开启紫外灯照射2h后关闭。二、值日生工作职责 1、每周值日生时间从周一开始,至周日结束。 2、值日周开始时需做的事情:配制消毒用的７5%的酒精,制作酒精棉球,给细胞房内添加足够的9５％工业乙醇供酒精灯使用。＊ 75％的酒精可用750ｍl９5%的酒精加去离子水至950ｍl配制而成。 3、值日周内每天需做的事情:开大紫外灯消毒细胞房15-3０miｎ后才能投入一天的使用,晚上开启紫外灯灭菌,第二天及时关闭;检查灭菌物品的储备情况,以便及时补充;及时安排人员清洗回收培养器皿;检查培养液母液、血清、酒精等公用试剂的储备情况;至少每天倾倒细胞房垃圾、换垃圾袋;检查培养箱内水量就是否足够。 4. 值日周结束前需完成的事情:星期五全方位打扫细胞房。包括拖地,擦桌子、柜子、清洁与整理抽屉,擦超净台、冰箱及桌上的仪器,给水浴锅加水或换水,洗细胞房专用的实验服与拖鞋,紫外消毒细胞房。更换培养箱内无菌水、检查硫酸铜溶液就是否需要更换(一个月更换一次)！ 5. 每２周清洁一次培养箱:先将培养箱中的物品取出暂存于超净台内,对于比较敏感的细胞可以暂存于其她细胞房的培养箱;将培养箱内的不锈钢板取出,包括4块横板与左右2块立着的架子,用酒精棉球清洁钢板与培养箱内壁;打开培养箱清洁内壁时动作要迅速,避免长时间敞开门使得大量不洁净空气进入,缩短过滤器的寿命;用紫外灯照射培养箱内部15min,手提紫外灯放入培养箱前要用酒精棉擦拭干净。２０１4、6、９

血样样本的采集和处理

血液样本的采集和处理血液样本的采集和处理 (1) CD4+和CD8+ T淋巴细胞样品的采集和处理 (4) 血液样本的采集和处理一、血清样品的采集和处理 1、用一次性注射器（或真空采血管）抽取一定量静脉血，室温下自然放置1～2h，待血液凝固、血块收缩后再用3000r/min离心15min，吸出血清于血清管内备用。 2、如用滤纸片采样，则手指或耳垂局部严格进行消毒，在刺破皮肤后，迅速把滤纸片沾上，切勿让血液滴落在其他物体表面造成污染。采血后要待血样干燥后再包装送检。二、抗凝血样品采集和处理 1、用加有抗凝剂的真空采血管（或一次性注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管），反复轻摇，分离血浆和血细胞备用。 2、应根据实验要求选用适当的抗凝剂，如CD4+ /CD 8+T淋巴细胞测定可选用K3EDTA或肝素或枸橼酸钠，HIV病毒分离、核酸定性/定量检测可选取K3EDTA或枸橼酸纳。 3、用于核酸定性检测时，采集的抗凝全血应在4～8h内分离PBMC和血浆，否则应在24～48h内分离血浆和血细胞。

三、采集样品注意事项 1、采集样品原则上应按临床采血技术规范操作（试剂盒说明书有特殊要求除外）。 2、采集样品时应注意安全，建议采用真空采血管及蝶形针具（有条件者可用持针器），以避免直接接触血液；直接接触HIV感染者/艾滋病（AIDS）病人血液/体液的操作，应戴双层手套。四、样品的保存 1、用于抗体检测的血清或血浆样品，应存放于-20℃以下，短期（一周）内进行检测的样品可存放于2-8℃。 2、用于抗原和核酸检测的血浆和血细胞样品应冻存于-20℃以下，进行病毒RNA检测的样品如需存放3个月以上应置于-80℃。 3、用于CD4+/CD8+T淋巴细胞测定的样品不能长期存放，样品采集时间超过48h则不可检测。五、样品的运送 1、实验室间传递的样品应为血清和血浆，除特殊情况外一般不运送全血。 (1) 第一层容器：装样品，要求防渗漏。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免破碎。随样品应附有送检单，送检单应与样品分开放置。 (2) 第二层容器：要求耐受性好，防渗漏，容纳和保护第一层

化学实验操作注意事项

化学实验操作的注意事项 ?化学实验操作应遵循的七个原则： 1.“从下往上”原则。 2.“从左到右”原则。装配复杂装置应遵循从左到右顺序。如上装置装配顺序为：发生装置→集气瓶→烧杯。 3.先“塞”后“定”原则。 4.“固体先放”原则。 5.“液体后加”原则。 6.先验气密性(装入药口前进行)原则。 7.后点酒精灯(所有装置装完后再点酒精灯)原则。 ?化学实验中的“七个关系” （1）先后关系 ①向试管中装人固体粉末时，先将试管倾斜，把盛药品的药匙送至试管底部，然后让试管直立，使药品全部落到试管底；向试管中放入块状固体时，先把试管横放，用镊子把药品放在试管口，然后将试管慢慢竖立起来使固体缓慢落到试管底。 ②用胶头滴管吸取少量液体时，先在滴瓶外面挤压胶头排出滴管内的空气，然后再伸入滴瓶内松手吸取液体。 ③用托盘天平称量药品时，先游码归零，再调节平衡，然后称量。 ④给玻璃仪器加热时，先把仪器外壁擦干，然后再加热。 ⑤给试管中的药品加热时，先使试管均匀受热，然后对盛放药品的部位固定加热。（2）左右关系 ①用托盘天平称量药品时，药品放在左盘，砝码放在右盘。 ②连接实验装置时，应按从左到右(或自下而上)的顺序进行，拆除时顺序相反。 ③橡胶塞和橡胶管与玻璃管连接时，左手拿橡胶塞或橡胶管，右手拿玻璃管(玻璃管一端用水润湿)；给容器塞橡胶塞时，左手拿容器，右手拿塞子。（3）上下关系 ①给试管中的固体加热时，试管口应略向下倾斜；给试管中的液体加热时，试管口应向上倾斜(与桌面大约成45。角)。 ②用试管夹夹持试管时，应从试管底部向上套，夹在试管的中上部。 ③手拿试剂瓶倾斜液体试剂时，应让标签向上对着手心。（4）正倒关系 ①取试剂瓶里的药品时，拿下瓶塞，倒放在桌上。 ②用胶头滴管取完液体时，胶头滴管应该正放 (保持胶头向上)，而不能倒放或平放。（5）多少关系

鸡血细胞的体外融合

鸡血细胞的体外融合【实验目的】 1．掌握聚乙二醇（PEG ）诱导体外细胞融合的基本原理。 2．通过PEG 体外诱导鸡血细胞之间的融合实验，初步掌握细胞融合的基本方法。【实验原理】细胞融合(cell fusion ）又称体细胞杂交，是指用人工方法使两个或两个以上的体细胞融合成异核体细胞，随后，异核体同步进入有丝分裂，核膜崩溃，来自两个亲本细胞的基因组合在一起形成只含有一个细胞核的杂种细胞(hybrid cell ）。细胞融合技术是研究细胞遗传、基因定位、细胞免疫、病毒和肿瘤的重要手段。显微镜下的细胞融合过程融合过程中两个细胞膜的变化过程

依据融合过程采用的助融剂的不同，细胞融合可分为：（1）病毒诱导的细胞融合，如：仙台病毒（hemagglutinating virus of Japan，HVJ）；（2）化学因子诱导的细胞融合，如：聚乙二醇（polyethyleneglycol，PEG）；（3）电场诱导的细胞融合；（4）激光诱导的细胞融合。 PEG是乙二醇的多聚化合物，存在一系列不同分子质量的多聚体。PEG可改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处脂类分子发生疏散和重组，引起细胞融合。该方法应用分子质量为400—6000的PEG溶液引起细胞的聚集和粘连，产生高频率的细胞融合。融合的频率和活力与所用PEG的分子质量、浓度、作用时间、细胞的生理状态与密度等有关。【方法与步骤】 1. 鸡血细胞的获得：从家鸡的翼根静脉用注射器采血，注入试管后，迅速加入肝素（100U 肝素/ 5ml全血）混合，制成抗凝全血。 2. 鸡血细胞储备液的制备：在抗凝全血的试管中，加入4倍体积的0.85 %NaCl溶液，制成红细胞储备液，置于4℃冰箱内可供一周内使用。 3. 鸡血细胞悬液的制备：取鸡血细胞储备液1ml，加入4ml 0.85 %NaCl溶液，混匀后，1200rpm离心5min，弃去上清液，再加入5ml 0.85 %NaCl溶液按上述条件离心一次。最后，弃去上清液，加入10ml的GKN 溶液制成鸡血细胞悬液。 4. 计数：取0.5ml鸡血细胞悬液，加3.5ml的GKN溶液进行稀释，在血细胞计数板上计数。若细胞浓度过大，用GKN溶液稀释至1X107个/ml左右。 5. 鸡血细胞的收集：吸取1ml鸡血细胞悬液放入离心管中，加入4mlHanks液混匀，1000rpm离心5min。弃去上清液，用手指轻弹离心管底部，使沉淀的血细胞团块松散。 6. PEG诱导细胞融合：吸取0.5ml 37℃的50%PEG4000溶液，慢慢沿着离心管壁逐滴加入，边加边轻摇离心管，使PEG与细胞混匀，然后在37℃水浴中静置2min。

细胞房管理规章制度

细胞房管理规章制度细胞房是进行各种细胞培养的净化级实验室，所有进入实验室的人员都必须遵守实验室有关的规章制度。第一章总则第一条细胞房主要由团队内相关科研人员使用，原则上不对外开放，其他人员如确实需使用细胞房必须预先征得实验室负责人和细胞房负责人同意。第二条新养细胞的同学，需先跟随由负责人指定的人员学习，同时学习并熟记细胞房管理条例，最后通过细胞操作考核后，方可进入细胞房进行实验。严禁未经许可擅自进入细胞房或使用相关设备。第三条细胞房正常使用过程中，进出实验室的器械和样品需通过传递窗，严禁随身带入。实验用品应尽量一次带入，严禁将和实验无关的物品带入实验室，在细胞房内不得进行微生物等其它易污染物的培养，禁止从事任何高危生化实验。第二章条例第一条常规操作穿着专用隔离服，实验人员必须在细胞房缓冲间内更换细胞房专用隔离服并戴上口罩，严禁不穿隔离服或直接穿着普通实验室实验服进入细胞房。穿着专用拖鞋。在准备间换下自己的鞋子，尽量避免在缓冲间走动、停留。细胞房最多可4个人同时使用。实验过程中严禁喧哗，闲聊，反复进出培养室。离开细胞房时应在缓冲室填写使用登记。第二条培养箱使用规则 1.从培养箱取放物品前，用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。注：培养箱中的空气是经过过滤的洁净空气。长时间敞开或频繁开关培养箱，容易造成污染。 2.从培养箱拿取细胞时轻拿轻放，动作迅速，随手关紧培养箱门。未经允许，禁止翻看、移动他人细胞或样品，如有特殊需要的，请联系实验室负责人协调。更换隔离服、戴口罩更换拖鞋进入细胞房

3.培养瓶/皿放入培养箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。 4.普通培养中的细胞，若非实验特殊需要，每瓶/板细胞每天只需要观察生长状态一次，2人以上共用的细胞，可约好时间一起观察。注：频繁将细胞拿出观察，容易给培养箱造成污染，同时也会影响细胞生长条件的恒定。第三条显微镜使用规则 1.倒置相差显微镜使用前，用酒精棉从中间至周围擦拭载物台。 2.短时间内需再次使用显微镜时，为避免频繁开关显微镜电源，可不必关闭显微镜电源，但须将亮度旋钮调到最低；较长时间不需使用或离开细胞房时，须按规定关闭显微镜电源。第四条超净台相关操作规则 1.超净台使用遵循预约原则。在细胞房入口处预约，细胞房内填写使用登记。 a ：无预约者若有必要在他人预约时段内使用，需先征得预约者的同意，否则应无条件让出工作台，以免耽误他人实验。 b ：预约内容请包括：预约时间、姓名、使用日期、使用时间段、实验内容。 2.使用前、后需用酒精棉球擦拭工作区消毒，所有物品放入超净台内使用前均应消毒，超净台内严禁堆放过多物品影响风路平衡，不同超净台内物品严禁频繁交换使用。 3.点燃酒精灯前需检查瓶中酒精是否足够，液面应占瓶高1/3-2/3。注：消毒用75%的酒精，酒精灯用95%以上的酒精，向喷壶或灯内添加酒精时请留意。 4.超净台中应摆放废液缸，用于暂时存放废弃物，实验结束后将废液缸带走，废液垃圾倒入水池并同时用水冲释，固体垃圾倒入垃圾桶中注：液缸应及时处理，严禁长时间放置，以免留有大量培养液滋生细菌。 5. 细胞实验后任何含有细胞培养污物的培养瓶，离心管，移液管等必须及时带出细胞房。第五条器具的清洗规则预约超净台检查酒精灯酒精消毒（超净台+实验物品）使用超净台酒精消毒超净台带走废品

细胞样品收集注意事项

细胞样品收集方法一、蛋白以T75培养瓶为例 1.把培养上清彻底转移至50或15ml离心管中，用PBS洗涤1-2次（PBS 需彻底吸干，洗液时把板倾斜），每次洗涤时，均需把PBS转移到同一个 50或15ml离心管，每培养瓶细胞准备一个离心管，切勿混淆； 2.每培养瓶加入300ul RIPA裂解液（加入裂解液时，一定用放平，是细胞与裂解液充分接触）, 把上述离心管离心（水平转角离心机，1000RPM, 8min）,彻底移除上清，加入300ul RIPA裂解液，吹打12下后，把裂解液转移至同一培养瓶中，则培养瓶中合并有200ul，盖好盖子，用封口膜封口后置于-80℃保存；注意做好标记！（如果用PBS洗涤后，细胞未飘起，则把600ul RIPA裂解液直接加入培养瓶）备注：给你提供的RIPA裂解液用EP管装，每管990ul，同时提供PMSF,使用时每管加入10ul PMSF,混匀再使用。操作要快，做好一瓶，放好一瓶！强烈建议一瓶一瓶的做。表一培养器皿RIPA裂解液用量备注 6孔板150-300ul 根据细胞的密度适当调整用量，Trizol 的最少用量为1ml 35mm培养皿150-300ul 根据细胞的密度适当调整用量，Trizol 的最少用量为1ml 60mm培养皿300-600ul 根据细胞的密度适当调整用量，Trizol 的最少用量为1ml 100mm培养皿600-1200ul 根据细胞的密度适当调整用量，Trizol 的最少用量为1ml T25培养瓶300-600ul 根据细胞的密度适当调整用量，Trizol 的最少用量为1ml

T75培养瓶600-1000ul 根据细胞的密度适当调整用量，Trizol 的最少用量为1ml

初中化学实验操作与注意事项完整版

类仪器名称别试管 (平口、翻可口、具支) 直接坩埚加 (坩埚钳、热泥三角、三脚架) 蒸发皿燃烧匙烧杯隔网可烧瓶：可分为圆加底烧瓶、平热底烧瓶和蒸馏烧瓶。注意圆底烧瓶与蒸馏烧瓶的区别。锥形瓶不集气瓶能加热滴瓶试剂瓶化学实验常用仪器一、常用仪器的名称、用途、使用注意事项主要用途使用方法和注意事项用来盛放或溶解少①可直接加热，用试管夹夹在距试管口1/3 量药品、常温或加热处。情况下进行少量试②放在试管内的液体，不加热时不超过剂反应的容器，可用试管容积的l/2，加热时不超过l/3。于制取或收集少量③加热后不能骤冷，防止炸裂。气体。④加热时试管口不应对着任何人；给固体加热时，试管要横放，管口略向下倾斜。主要用于固体物质一般为瓷质。把坩埚放在三脚架上的泥三的高温灼烧。角上直接加热。取、放坩埚时应用坩埚钳。定量实验时应在干燥器中冷却。蒸发或浓缩溶液或可直接加热，但不能骤冷。结晶。盛液量不应超过蒸发皿容积的 2/3，结晶时，近干时可停止加热。取、放蒸发皿应使用坩埚钳。加热后的蒸发皿要放在石棉网上冷却。少量固体燃烧的反应器。用作配制溶液和较加热时应放置在石棉网上，使受热均匀。大量剂量的反应容溶解物质用玻璃棒搅拌时，不能触及杯器，在常温或加热时壁或杯底，反应液量不超过容积的2/3，加使用。（水浴加热）热时不超过1/2。须注意常用规格的选用（如配100mL 溶液）。用于试剂量较大而圆底烧瓶和蒸馏烧瓶可用于加热，加热又有液体物质参加时要垫石棉网，也可用于其他热浴（如反应的容器，可用于水浴加热等）。装配气体发生装置。液体加入量不要超过烧瓶容积的2/3, 加蒸馏烧瓶用于蒸馏热时不少于烧瓶容积的1/3，蒸馏时温度以分离互溶的沸点计水银球应放在支管口处并加碎瓷片防不同的物质。暴沸。中和滴定反应器及液体不超过容积的1/3，中和滴定时应蒸馏接受器。用右手振荡，（且只振荡不搅拌）。收集或贮存少量气瓶口磨砂，用磨砂玻片涂凡士林封盖。燃体及气体间的反应，烧时有固体生成时，瓶底应加少量水或安全瓶、量气装置。铺少量细砂，不能加热，盛不同密度的气体放置时瓶口方向不同。须防止倒吸。盛少量液体药品。见光易变质的试剂装入棕色瓶，带有玻璃塞的试剂瓶不可装强碱性试剂；滴管不能互换，倾倒液体时标签向手心，滴瓶不存放强挥发性腐蚀性试剂（浓溴水、浓硝酸等）。广口：盛固体药品棕色瓶盛见光易变质药品；盛碱液时应橡

PEG促细胞融合实验报告

题目：PEG促细胞融合一．实验目的: 1.掌握细胞融合的方法 2.学习使用PEG促进细胞融合的方法和步骤二．实验原理 1.细胞融合：在自然条件下或用人工方法（生物的、物理的、化学的）使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的过程。由于体外培养的细胞很少会发生自发融合融合频率大约在10?4-10?6之间，因此要采用生物、化学或物理的方法人为地促使细胞融合。 2.促进细胞融合的方法 a)生物方法：病毒（Sendai virus，Newcastle disease virus，Vaceine virus） b)化学方法：聚乙二醇、盐类融合剂、二甲亚砜（DMSO）、甘油-醋酸酯、油酸盐、脂质、Ca2+配合物等。PEG相对分子质量在200-6000均可用作细胞融合剂。普遍认为聚乙二醇分子能改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用，从而使细胞发生融合。在众多的化学试剂中，PEG应用最为广泛，因PEG液比病毒更易制备和控制、活性稳定、使用方便、而且促进细胞融合的能力更强。 c)物理方法：电融合:电处理融合法是20世纪80年代发展起来的细胞融合技术，是融合率大为提高。电脉冲作用时引起膜结构局部扰乱，出现小孔洞。而相对的脂双层间分子在范德华力作用下，形成脂分子桥。由于连接处的细胞膜表面曲率大，处于高张力状态，在热力学上是不稳定的，所以最终导致两细胞逐渐融合成一个圆形的大球状细胞。与ⅣG法比较，电融合法融合率高：重复性强：诱导仅发生在质膜接触部位，对细胞或原生质体伤害小：融合是在同步状态下进行，活细胞数目多；装置精巧，方法简单，可在显微镜下观察或录象融合过程：免去PEG诱导后的洗涤过程，诱导过程可控制性强。三．实验材料及设备 1.实验材料： a)50%PEG混合液

细胞房注意事项和管理

细胞房注意事项和管理一、常规操作 1. 穿着专用实验服。自己的白大衣或厚外套，可脱在门外的衣帽架上。 2. 穿着专用拖鞋。先在入室间换下自己的鞋子，穿着绿色拖鞋进入缓冲间；再在缓冲间换红色拖鞋。尽量避免在缓冲间走动、停留。 3. 细胞房最多可4个人同时使用。尽量避免在内长时间逗留、交谈。 4．离开细胞房前，要保证不使用的仪器及时关闭并拔下插头（离心机、水浴锅、日光灯），超净台开启紫外灯照射2h后关闭。二、值日生工作职责 1. 每周值日生时间从周一开始，至周日结束。 2. 值日周开始时需做的事情：配制消毒用的75%的酒精，制作酒精棉球，给细胞房内添加足够的95%工业乙醇供酒精灯使用。 * 75%的酒精可用750ml95%的酒精加去离子水至950ml配制而成。 3. 值日周内每天需做的事情：开大紫外灯消毒细胞房15-30min后才能投入一天的使用，晚上开启紫外灯灭菌，第二天及时关闭；检查灭菌物品的储备情况，以便及时补充；及时安排人员清洗回收培养器皿；检查培养液母液、血清、酒精等公用试剂的储备情况；至少每天倾倒细胞房垃圾、换垃圾袋；检查培养箱内水量是否足够。 4. 值日周结束前需完成的事情：星期五全方位打扫细胞房。包括拖地，擦桌子、柜子、清洁和整理抽屉，擦超净台、冰箱及桌上的仪器，给水浴锅加水或换水，洗细胞房专用的实验服和拖鞋，紫外消毒细胞房。更换培养箱内无菌水、检查硫酸铜溶液是否需要更换（一个月更换一次）！

5. 每2周清洁一次培养箱：先将培养箱中的物品取出暂存于超净台内，对于比较敏感的细胞可以暂存于其他细胞房的培养箱；将培养箱内的不锈钢板取出，包括4块横板和左右2块立着的架子，用酒精棉球清洁钢板和培养箱内壁；打开培养箱清洁内壁时动作要迅速，避免长时间敞开门使得大量不洁净空气进入，缩短过滤器的寿命；用紫外灯照射培养箱内部15min，手提紫外灯放入培养箱前要用酒精棉擦拭干净。 2014.6.9培养箱使用注意事项 1. 从培养箱取放物品前，用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。 * 培养箱中的空气是经过过滤的洁净空气。长时间敞开或频繁开关培养箱，容易造成污染。 2. 培养瓶皿放入培养箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。 3. 2-3人共用一层培养箱，按预定位置摆放培养器皿，方便查找，以免长时间敞开培养箱。普通培养中的细胞，若非实验需要，每瓶/板细胞每天只需要观察生长状态一次，2人以上共用的细胞，可约好时间一起观察。 * 频繁将细胞拿出观察，容易给培养箱造成污染，同时也会影响细胞生长条件的恒定。超净台操作规则 1. 超净台使用前用紫外灯照射15分钟灭菌，使用前、后需用酒精棉球擦拭工作区消毒，所有物品放入超净台前均应用酒精喷拭表面消毒。

流式检测上机前细胞处理流程与注意事项

流式检测细胞周期与凋亡样品处理流程 1.胰蛋白酶消化法收集细胞，做成单细胞悬液 2.1000r/min离心5min，收集沉淀。 3.沉淀用PBS洗2次，1000r/min离心5min，收集沉淀。 4.细胞沉淀用4℃预冷的70%的冰乙醇1ml重悬，4℃过夜。即可送检。备注：1.每个细胞样品细胞量需达到106（细胞沉淀要打散，避免细胞聚集），细胞量少可能测不出结果，或结果不太准确。 2.样品可在-20℃保存一个月流式检测细胞DNA倍体样品处理流程 1.胰蛋白酶消化法收集细胞，做成单细胞悬液 2.1000r/min离心5min，收集沉淀。 3. 沉淀用PBS洗2次，加入相应种属的淋巴细胞或鸡红细胞做为内参，内参与预检测细胞的比例为1：3 4. 1000r/min离心5min，收集沉淀。 5. 细胞沉淀用4℃预冷的70%的冰乙醇1ml重悬，4℃过夜。即可送检。备注：1.每个细胞样品细胞量需达到106（细胞沉淀要打散，避免细胞聚集），细胞量少可能测不出结果，或结果不太准确。 2.样品可在-20℃保存一个月检测胞内蛋白上机前细胞处理流程 1.收集实验处理好的细胞，用PBS洗2次，2%多聚甲醛固定15min。 2.离心弃掉多聚甲醛，再用70%的冰乙醇固定过夜（4℃）。 3.离心弃掉乙醇，PBS洗一遍，加破膜剂0.5%TritonX-100 50ul/106个细胞 15min。 4.直接在0.5%TritonX-100中加一抗室温孵育30min，离心，用PBS洗一次，加荧光标记二抗（需进口二抗,国内的效价比较低效果不好），总体系为100ul，总体系中应含0.25%（体积分数）的TritonX-100，室温孵育30min。 5.也可以直接加FITC直标的一抗。 6.离心，用PBS洗一次，用2%的多聚甲醛固定，4℃存放待测。备注：1. 市面上的多聚甲醛多为4%的，可用PBS稀释。如果用两步标记，应做不加一抗，只加二抗的对照管

细胞复苏步骤和注意事项

细胞复苏步骤注意事项：【材料】 1. 常规细胞培养仪器设备恒温水浴振荡器。 2. 培养液（DMEM）胎牛血清（CBS）二甲基亚砜（DMSO）【操作程序】 1. 细胞实验室进行常规消毒，紫外照射40min以上。 2. 培养液（DMEM）、0.25％胰蛋白酶（Trypsin）恒温水浴箱370C预热20min，备用。 3. 二甲基亚砜（DMSO)在40C冰箱中冷藏30min，备用。 4. 从液氮保存罐中取出冻存管，立即放入400C水浴中，快速摇晃，直至冻存液完全融化。 5. 将细胞悬液移入15ml离心管，缓慢加入4ml培养液，离心（1000r/min，5min）。 6. 用培养液悬液混悬沉淀细胞，调整细胞浓度，方培养箱中培养。 7. 记录复苏日期。【注意事项】 1. 取细胞的过程中注意带好防冻手套，护目镜。此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。 2. 冻存液的问题：冻存液的配置已是常识，在这里不作详述，但二甲基亚砜（DMSO）对细胞不是完全无毒副作用，在常温下，二甲基亚砜对细胞的毒副作较大，因此，必须在1-2min 内使冻存液完全融化。如果复苏温度太慢，会造成细胞的损伤，二甲基亚砜（DMSO）最好选择进口产品。 3. 离心前须加入少量培养液。细胞解冻后二甲基亚砜浓度较高，注意加入少量培养液可稀释其浓度，以减少对细胞的损伤。 4. 离心问题：目前主要有两种见解。一种是解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养，第二天换液。因为离心的目的是两个，去除DMSO，去除死细胞，这个是标准流程，但对一般人来说，把握不好离心转速和时间，转的不够活细胞沉底的少，细胞就全被扔掉了，转过了活细胞会受压过大，死亡。此外在操作过程中容易污染，所以不推荐。另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜（DMSO），DMSO对细胞有一定的毒副作用，所以须将离心后的液体前倒净，且一定倒干净。我在试验中按照常规的离心分装的方法进行复苏，结果无有异常。 5. 细胞贴壁少的问题：教科书中说明冻存细胞解冻时1ml细胞液要加10ml－15m培养液，而在我的试验中的经验总结为培养基越少细胞越容易贴附。 6. 复苏细胞分装的问题：试验中我的经验总结为复苏1管细胞一般可分装到1-2只培养瓶中，分装过多，细胞浓度过低，不利于细胞的贴壁。 7. 加培养基的量放入问题：这个量的多少的把握主要涉及到的问题是DMSO的浓度，从如果你加培养基的太少，那么DMSO的浓度就会比较大，就会影响细胞生长，从以前的资料来看，DMSO的浓度在小于0.5%的时候对一般细胞没有什么影响，还有一个说法是1％。所以如果你的冻存液的浓度是10％DMSO的话那么加10ml以上的培养基就恰好稀释到了无害浓度。一、原理在不加任何条件下直接冻存细胞时，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等，能引起细胞死亡。如向培养液加入保护剂，可使冰点降低。在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞。贮存在－130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。

有机化学实验操作要求规范

实用标准文案有机化学实验操作规范

实用标准文案目录《有机化学实验》操作规范 (1) 一、有机化学实验教学目的和要求 (1) 二、使用标准磨口玻璃仪器注意事项 (1) 三、仪器的装配 (1) 四、加热 (2) 五、回流 (2) 六、分液漏斗 (3) 七、搅拌装置 (4) 八、干燥 (4) 九、蒸馏 (5) 十、减压蒸馏 (7) 十一、水蒸气蒸馏 (9) 十二、分馏 (10) 十三、重结晶 (11) 十四、有机化合物的合成 (13)

实用标准文案《有机化学实验》操作规范一、有机化学实验教学目的和要求通过有机化学实验，加深学生对有机化学基本理论与概念的理解；增强运用有机化学理论解决实验问题的能力。要求掌握： 1、本规范内所拟订的各项有机化学实验的基本技能； 2、正确选择有机化合物的合成、分离和提纯的方法； 3、养成实事求是的科学态度，良好的科学素养和工作习惯。二、使用标准磨口玻璃仪器注意事项 1、标准口塞应保持清洁 2、使用前在磨砂口塞表面涂以少量真空油脂或凡士林，以增强磨砂接口的密合性，同时也便于接口的装拆。 3、用后应立即拆卸洗净。否则，对接处常会粘牢，以至拆卸困难。 4、能正确说出各仪器的名称三、仪器的装配 1、在装配仪器时，所选用的玻璃仪器和配件都要干净。否则会影响产物的产量和质量 2、一般根据热源的高低来确定待加热仪器和其他仪器的高度。 3、仪器安装应先选好主要仪器的位置，按先下后上，从左到右顺序安装，做到正确、整齐、稳妥、端正，其轴线应与实验台边沿平行。在拆卸时应先移走热源，后停冷凝水，再拆装置，拆卸顺序与安装相反，其顺序是由右至左，先上后下。 4、其他注意事项

生物等效性实验生物样品处理注意事项(严)知识讲解

生物等效性实验生物样品处理注意事项(严)

生物等效性实验生物样品处理注意事项一、样品采集后的的处理和贮存鉴于生物样本的特点，为了避免样品中被测药物发生分解或产生其他化学变化，取样后最好立即进行分析测定，但实际工作中几乎无法做到，常需将收集到的样品冷藏、冰冻，临用前再融化并放至室温后使用。在样本冷冻贮藏前，需及时进行处理。 1.1血液样本处理注意事项 1.1.1. 在肌肉注射或静脉输含有葡萄糖或电解质(含钾、钠、氯离子)的液体时，建议3小时以后采集静脉血样本进行这些项目的检验，以防止上述检验项目因输液引起的假性升高。 1.1.2保定非麻醉状态的动物时应尽量避免用力挤压动物头颈和胸腹，以免引起血液淤滞，局部组织缺氧，造成血液某些成分的改变，特别是测定乳酸，血液含氧量等指标时。 1.1.3血液中红细胞内外成分有很大差异，溶血可造成红细胞内的物质向细胞外转移，如K+、Mg2＋和某些酶类(LD、AST、ALT、ACP)；另外，溶血还可干扰某些化学项目(TBil、DBil、TC等)的测定，严重影响结果的准确性，血样本应防止溶血。引起溶血的原因有：注射器采血时抽吸力太大；血液与抗凝剂比例失调；混匀样本时过度振荡；注射器或采血容器带水或容器污染；全血放置时间长或突然受冷或受热；注射器中的血沫注入采血容器；真空采血时如未

采满至相应刻度，残存负压造成红细胞破裂；不拔针头直接注入采血容器；样本离心时离心力过大等。为避免溶血，取血时应注意： ①、抽拉注射器时应尽量避免注射器内产生大量真空； ②、添加抗凝剂后的容器在除必要干燥流程后应及时密封； ③、混匀样本时避免用力过度，切勿产生泡沫； ④、避免重复使用注射器、针头、采血管、毛细玻璃管等一次性用品，手术刀片和剪刀等器材取材时尽量洗去残留血液； ⑤、采血时的室温应控制在22℃至25℃，采取的血液容器在需要放入冰盒时，切勿紧贴冰袋，冰水； ⑥、当注射器内因吸入空气产生血沫时，注意弃掉血沫，在将血液注入采血容器时勿将血沫一并注入； ⑦、使用真空采血管需抽取负压时切勿过量； ⑧、将血液注入采血容器时要除去针头，轻柔推入； ⑨、离心带有血细胞的血样时，按照规格设定离心参数； 1.1.4. 正确选择采集管。通常情况下多采用血清为样本(不抗凝)，部分检测项目需注意样本属性为血清或血浆，两者不可替代。一些特殊检验项目需要使用抗凝剂时，应注意选择合适的抗凝剂并注意抗凝剂与血液的比例，以防止样本凝血或红细胞形态的改变；抗凝血样本采集后立即轻轻摇匀至少上下颠倒8次，以防凝血发生。 1.1.5. 多项化验采血顺序：血培养瓶(厌氧瓶优先)→蓝帽管→黑帽管→红/黄帽管→绿帽管→紫帽管→灰帽管→其他。