CAR-T细胞制备整理

文献来源一：

“Clinical Application of Sleeping Beauty and Artificial Antigen Presenting Cells to Genetically Modify T Cells from Peripheral and Umbilical Cord Blood”作者：M. Helen Huls 1.

1、制备：

1）采集样本后，制备分离，首先用PBS进行外周血等体积，脐血四倍体积稀释。

2）将稀释后的血，50ml的量加到装有12ml分离液的50ml离心管中,400g离心30-40min. 3）收集白膜层单个核细胞到新的50ml离心管当中，加入PBS定容到50ml，450g离心10min. 4）去除上清，重悬细胞沉淀用50ml完全培养基，然后400g,离心10min.

5）去上清，细胞继续用完全培养基重悬，然后胎盼蓝细胞计数。

6）MNC细胞用于电穿孔核转染载体或者冻存备用。

2、预处理

A、如使用冷冻保存的MNC，在37度条件下迅速解冻细胞进行全面的电穿孔(2 x 10^8+20%，以计算细胞损失在离心及2h孵育过程中)。如使用新分离制备MNC，则按照2.3操作进行。

B、温和地重悬细胞并且转移到适当大小的离心管中，离心管中预先添加的完全的无酚RPMI 培养液。200g离心10min，去上清。

C、用PF-RPMI重悬MNC，取样进行细胞计数，按10^6/ml的密度接种到合适的培养容器中。

D、在37度条件下，5%CO2,孵育2h。

E、将MNC转移到无菌的离心管中，200g旋转5分钟，去上清，然后用PF-RPMI温和的重悬细胞沉淀。

F、计数细胞，并且定容，细胞要求为2*10^8.

G、将细胞悬液转移到无菌50ml的离心管上，200 g旋转10min。

H、去上清，温和的重悬细胞。

3、电穿孔细胞

4、人工抗原递呈细胞介导的刺激CAR-T细胞

电穿孔转染后的细胞（表达CAR），在无菌容器中γ辅射处理后的aAPC细胞按1：2与CAR+细胞在完全培养基中混合，添加IL-21(30ng/ml),分装至T75培养瓶或者培养袋中，接种量为10^6/ml，细胞进行培养。

5、CAR-T细胞的培养

半量换液，补充添加IL-21,维持细胞密度为10^6/ml.

文献来源二：

“特异性人工抗原提呈细胞体外激活CD 19 嵌合抗原受体T T 细胞的构建”作者：彭耀军

制备：

1）慢病毒载体的构建；

2）慢病毒包装及转染；

3）CD19CAR结构及CAR-T细胞制备：采用Ficoll淋巴细胞分离液分离获得健康人外周血单核细胞（PBMC），在24孔板中培养，同时加入CD3/CD28抗体偶联磁珠（Invitrogen公司）刺激PBMC，24 h及48 h后加入CD19CAR病毒感染2次，病毒感染时加入IL-2（300 U/ml），

CAR-T 细胞扩增至第6 或7 天后检测CAR基因表达及用于后续实验。

大规模细胞培养技术

大规模细胞培养技术简介大规模培养技术应用简介通过大规模体外培养技术培养哺乳类动物细胞是生产生物制品的有效方法。上世纪60-70 年代，就已创立了可用于大规模培养动物细胞的微载体培养系统和中空纤维细胞培养技术。近十数年来，由于人类对生长激素、干扰素、单克隆抗体、疫苗及白细胞介素等生物制品的需求猛增，以传统的生物化学技术从动物组织获取生物制品已远远不能满足这一需求。随着细胞培养的原理与方法日臻完善，动物细胞大规模培养技术趋于成熟。所谓动物细胞大规模培养技术( large-scale culture technology )是指在人工条件下(设定ph、温度、溶氧等) ，在细胞培养工厂 (Cosmo Cat.No. 1101-400 or 1101-800 )或生物反应器( bioreactor )中高密度大量培养动物细胞用于生产生物制品的技术。目前可大规模培养的动物细胞有鸡胚、猪肾、猴肾、地鼠肾等多种原代细胞及人二倍体细胞、cho(中华仓鼠卵巢) 细胞、BHK-21( 仓鼠肾细胞)、Vero 细胞(非洲绿猴肾传代细胞，是贴壁依赖的成纤维细胞)等，并已成功生产了包括狂犬病疫苗、口蹄疫疫苗、甲型肝炎疫苗、乙型肝炎疫苗、红细胞生成素、单克隆抗体等产品。在过去几十年来，该技术经有了很大发展，从使用转瓶(roller bottle) 、CellCube 等贴壁细胞培养，发展为一次性细胞培养工厂( Made by Cosmo )或生物反应器 (Bioreactor )进行大规模细胞培养。第一代细胞培养技术核心问题是难以产业化或者说是规模化生产：一是在工艺生产时不能大规模制备产品；二是非批量生产容易导致产品质量的不均一性；三是难以对同批生产进行生产和质量控制。随着生物技术的发展，迫切需要大规模的细胞培养，特别是培养表达特异性蛋白的哺乳动物细胞，以便获得大量有用的细胞表达产物。采用玻璃瓶静置或旋转瓶的培养方法，已不能满足所需细胞数量及其分泌产物。因而必须为工业化生产开创一种新的技术方法。自70 年代以来，细胞培养用生物

有关细胞器的归纳总结

高三生物有关细胞器的归纳总结 1．只存在于植物细胞中的细胞器：叶绿体；动、植物细胞中形态相同、功能可能不同的细胞器：高尔基体；根尖分生区没有的细胞器：叶绿体、中心体、液泡。 2．原核细胞中具有的细胞器：核糖体；真核细胞中细胞器的质量大小：叶绿体＞线粒体＞核糖体。 3．有关膜结构的细胞器：双层膜、线粒体、叶绿体（核膜）；无膜结构：核糖体、中心体，其余为单层膜结构。 4．具有核酸的细胞器：线粒体、叶绿体、核糖体；能自我复制的细胞器：线粒体、叶绿体、中心体（染色体） 5．有“能量转换器之称”的细胞器：线粒体、叶绿体；产生ATP的场所：线粒体、叶绿体、细胞质基质。 6．能形成水的细胞器：叶绿体、线粒体、核糖体。 7．与主动运输有关的细胞器：核糖体（载体合成）、线粒体（提供能量）。 8．参与细胞分裂的细胞器：核糖体（间期蛋白质的合成）、中心体（动物）、高尔基体（植物）、线粒体。 9．将质膜与核膜连成一体的细胞器：内质网。 10．泪腺细胞分泌泪液，泪液中有溶菌酶，与此生理功能有关的细胞器：核糖体、内质网、高尔基体、线粒体。 11．含有色素的细胞器：叶绿体、有色体、液泡。有色体和叶绿体中均含有叶黄素和胡萝卜素，液泡的细胞液中含有花青素等色素。 12．与脂类及多糖合成有关的细胞器：内质网（三）细胞增殖：（直核生物）分裂方式：无丝分裂、有丝分裂、减数分裂无丝分裂：真核细胞分裂的一种方式过程：核的缢裂，接着是细胞的缢裂（分裂过程中不出现纺錘体和染色体（形态）而得名。例蛙的红细胞。近年来发现动物的上皮组织，肌组织和肝细胞等，植物各器官的薄壁组织表皮，生长点和胚乳等，血胞中都发现有无丝分裂，细菌：二分裂。（不属无丝分裂） 1．植物细胞有丝分裂各期特点间期：染色体复制。a. 染色体数目不变；b. 出现染色单体；c. DNA数目加倍。扩展：分裂间期又可分为G1、S、G2三个时期。 G1期：DNA复制前期，主要进行DNA蛋白质和酶的合成。 S期：DNA复制期。 G2期：DNA复制后期，为分裂期（M期）作准备，主要是RNA，微管蛋白和其它物质的合成。分裂期：前期：a. 染色质→染色体，b. 核膜消失、核仁解体， c. 出现纺锤丝，形成纺锤体。中期：a. 染色体在纺锤丝牵引下移向细胞中央， b. 每条染色体的着丝点排列在细胞中央的赤道板上。后期：a. 着丝点分裂为二，染色单体→染色体（数目加倍） b. 染色体平均分成两组，在纺锤丝牵引下移向细胞两极。末期：a. 染色体→染色质，b. 核膜、核仁重新出现， c. 纺锤体消失， d. 出现细胞板，扩展形成细胞壁。重点内容可按以下口诀记忆：

细胞培养技术个人总结

总结---细胞培养一．基本理论概论原代培养: 也叫初代培养，指直接从体内取出的细胞、组织和器官进行的第一次的培养。传代培养：将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶即称为传代或传代培养。细胞系：原代培养物成功传代后，则称之为细胞系。(如细胞系的生存期有限，则称之为有限细胞系；已获无限繁殖能力能持续生存的细胞系，称连续细胞系或无限细胞系。) 细胞株：通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物称为细胞株。培养类型：细胞培养，组织培养，器官培养。细胞生长的方式：贴附生长，悬浮生长培养细胞的形态（形态不一定，环境改变形态可能改变）：成纤维性型细胞，上皮型细胞（单层膜样生长），游走性细胞（游散生长，常有伪足跟突起）二．培养过程及要点（切记无菌操作）（一）工作环境的处理 1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 % 酒精擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % 酒精擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。 2. 实验用品以70 %酒精擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在台面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。 3. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。吸管口切勿碰到容器瓶口 4. 工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。操作过程中，应避免引起aerosol 之产生，小心毒性药品，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖锐针头之伤害等。 5. 定期检测下列项目： CO2 钢瓶之CO2 压力。CO2 培养箱之CO2 浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)。无菌操作台内之airflow 压力，定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜，预滤网(300 小时/预滤网，3000 小时/HEPA)。 6. 水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750)，定期更换水槽的水。（二）试验用玻璃塑料用品清洗及其消毒灭菌清洗：（1）玻璃器皿的清洗（酸液由重铬酸钾，浓硫酸，蒸馏水配置）浸泡—刷洗—浸酸—冲洗（2）胶塞的清洗刚买回的常含滑石粉等杂质，先用自来水冲洗后再按常规方法处理。2%NaoH或洗衣粉煮沸10-20分钟---1%稀Hcl浸泡30分钟或蒸馏水冲洗后再煮沸10-20分钟—晾干备用（3）塑料制品的清洗 2%NaoH浸泡过夜—自来水冲洗--5%稀Hcl浸泡30分钟—自来水和蒸馏水冲干备用。

细胞生物学知识点总结

细胞生物学知识点总结导读：细胞生物学知识点总结细胞通讯的方式（1）细胞通过分泌化学信号进行细胞间通讯，这是多细胞生物普遍采用的通讯方式。（2）细胞间接触依赖性的通讯，指细胞间直接接触，通过与质膜结合的信号分子影响其它细胞。（3）动物相邻细胞间形成间隙连接以及植物细胞间通过胞间连丝使细胞间相互沟通，通过交换小分子来实现代谢耦联或电耦联。细胞分泌化学信号可长距离或短距离发挥作用，其作用方式分为：（1）内分泌，由内分泌细胞分泌信号分子到血液中，通过血液循环运送到体内各个部位，作用于靶细胞。（2）旁分泌，细胞通过分泌局部化学介质到细胞外液中，经过局部扩散作用于邻近靶细胞。在多细胞生物中调节发育的许多生长因子往往是通过旁分泌起作用的。此外，旁分泌方式对创伤或感染组织刺激细胞增殖以恢复功能也具有重要意义。（3）自分泌，细胞对自身分泌的物质产生反应。自分泌信号常存在于病理条件下，如肿细胞合成并释放生长因子刺激自身，导致肿瘤细胞的'持续增殖。（4）通过化学突触传递神经信号，当神经元接受刺激后，神经信号以动作电位的形式沿轴突快速传递至神经末梢，电压门控的Ca2+

通道将电信号转换为化学信号。通过胞外信号介导的细胞通讯步骤（1）产生信号的细胞合成并释放信号分子。（2）运送信号分子至靶细胞。（3）信号分子与靶细胞受体特异性结合并导致受体激活。（4）活化受体启动胞内一种或多种信号转导途径。（5）引发细胞功能、代谢或发育的改变。（6）信号的解除并导致细胞反应终止。核被膜所具有的功能一方面，核被膜构成了核、质之间的天然选择性屏障，将细胞分成核与质两大结构与功能区域，使得DNA复制、RNA转录与加工在核内进行，而蛋白质翻译则局限在细胞质中。这样既避免了核质问彼此相互干扰，使细胞的生命活动秩序更加井然，同时还能保护核内的DNA分子免受损伤。另一方面，核被膜调控细胞核内外的物质交换和信息交流。核被膜并不是完全封闭的，核质之间进行着频繁的物质交换与信息交流。这些物质交换与信息交流主要是通过核被膜上的核孔复合体进行的。核被膜的结构组成及特点（1）核被膜由内外两层平行但不连续的单位膜构成。面向核质的一层膜被称作内（层）核膜，而面向胞质的另一层膜称为外（层）核膜。两层膜厚度相同，约为7。5 nm。两层膜之间有20～40nm的

培养基制备的基本方法和注意事项

培养基制备的基本方法和注意事项 1.培养基配方的选定同一种培养基的配方在不同着作中常会有某些差别。因此，除所用的是标准方法，应严格按其规定进行配制外．一般均应尽量收集有关资料．加以比较核对．再依据自己的使用目的加以选用，记录其来源。 2 ．培养基的制备记录每次制备培养基均应有记录，包括培养推各称，配方及其来源．和各种成份的牌号。最终pH 值、消毒的温度和时间制各的日期和制备者等，记录应复制一份，原记录保存备查，复制记录随制好的培养基一同存放、以防发生混乱。 3.培养基成分的称取培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱．最好一次完成，不要中断。可将配方置于傍侧，每称完一种成分即在配方上做出记号，并将所需称取的药品一次取齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。完全称取完毕后．还应进行一次检查。 4.培养基各成份的混合和溶化培养基所用化学药品均应是化学纯的。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁混入培养基中，使细菌不易生长。最好使用不锈钢锅加热溶化．也可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动，以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即不能使用，应重新制备。待大部分固体成分溶化后，再用较小火力使所有成分完全溶化．迄至煮沸。如为琼脂培养基，应先用一部分水将琼脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后将两溶液充分混合。在加热溶化过程中，因蒸发而丢失的水分，最后必须加以补足。 5.培养塞pH 的初步调整培养基各成分完全溶解后，应进行pH 的初步调正，因培养基在加热消毒过程中、pH 会有所变化，例如，牛肉浸液约可降低.而肠浸液pH 却会有显着的升高。因此，对这个步骤，操作者应随时注意探索经验、以期能掌握培养基的最终pH ，保证培养基的质量。 pH 调正后，还应将培养基煮沸数分钟，以利培养基沉淀物的析出。

细胞培养常见问题及其解决

细胞培养常见问题及其解决 1. 如何选用特殊细胞系培养基？培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始。 2. 何时须更换培养基？视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。 3. 可否使用与原先培养条件不同之培养基？不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。 4 可否使用与原先培养条件不同之血清种类？不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。 5 何谓FBS, FCS, CS, HS ? FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思，两者都是指胎牛血清，FCS 乃错误的使用字眼，请不要再使用。CS (calf serum) 则是指小牛血清。HS (horseserum) 则是指马血清。 6 培养细胞时应使用5 % 或10% CO2？或根本没有影响？一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统，而培养基中NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度。当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g 时，细胞培养时应使用10 % CO2；当培养基中NaHCO3 为每公升1.5 g 时，则应使用5 % CO2 培养细胞。 7.Hank's 平衡盐溶液(HBS)要在空气中使用，不需要CO2培养箱。原因是什么？Hank's 平衡盐溶液(HBS)和Earle's平衡盐溶液(EBS)有什么本质的功能差别？ HBS和EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平,在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高。碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡，以维持溶液的PH值。Eagles液在空气水平的CO2 中，溶液会变碱，Hanks液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织，需要用Eagles 液，。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用Hanks液就可以了。 8. 细胞之接种密度为何？

细胞培养技术原理及应用

细胞培养技术原理及应用研究进展姓名：赵鹏学号：158033038 专业：流行病与卫生统计学摘要：细胞培养是指将采集体内组织的细胞模拟体内生长环境，放置在无菌、一定营养条件、适宜的温度及酸碱度下，使其生长、繁殖，并维持其结构和功能的一种技术，已成为生物、医学研究及应用广泛采用的技术方法。文章对细胞培养技术的应用作一综述。关键词：细胞培养；应用；研究进展细胞是构成机体的基本单位，是生命活动的基本单位。一切有机体（除病毒）都是由细胞组成的。细胞具有独立的、有序的自控代谢体系。因此，对细胞的深入研究是揭开生命奥秘、征服疾病的关键。细胞培养是指将采集体内组织的细胞模拟体内生长环境，放置在无菌、一定营养条件、适宜的温度及酸碱度下，使其生长、繁殖，并维持其结构和功能的一种技术。细胞培养技术的优点是可以直接观察活细胞的形态结构、生命活动及其变化；提供大量生物性状相似的试验对象，特别是研究大型动物（奶牛）时具有耗资少的优点。但模拟体内环境仍与实际有很大的差异，因此利用细胞培养技术的试验结果不可以轻易做出与体内等同的结论。动物组织（细胞）培养开始于20世纪初，现已成为生物、医学研究及应用广泛采用的技术方法[1 ]。随着细胞培养技术的不断发展，现在也广泛应用于动物生产研究。20 世纪60 年代，该技术应用于水产动物的病毒分离和纯化，对于鱼类疾病的防治具有重要作用。近年来研究发现单一种子细胞难以完成构建复杂组织的需要，因此产生了联合培养细胞技术。联合培养下的细胞之间存在着精细的相互调控关系，因而更符合仿生学的原理且更有利于种子细胞的增殖与分化，为复杂的细胞诱导分化以及体外组织构建提供了新思路、新方法[2 ]。 1 细胞培养细胞培养是将活体组织或细胞从试验动物体内取出，放在模拟体内生存环境的体外环境（无菌、适温、营养丰富）中，使高体细胞生长、发育的一种方法。按照培养的结构成分不同，将其分为组织培养、细胞培养及器官培养等。根据细胞是否在支持物上生长，将其分为贴壁型和悬浮型。一般来说，圆形细胞如淋巴细胞属于悬浮型，而胞体梭型（成纤维型细胞）、扁平不规则（上皮型细胞）等属于贴壁型，贴壁型细胞必需贴附在支持物表面生长。细胞培养开始于1906 年，Harrison 用蛙新鲜淋巴液培养蛙胚神经组织4 周，首次成功地利用体外培养液培养神经元，标志着组织细胞的体外培养模式的基本建立。随着细胞培养技术的不断发展和完善，20 世纪50 年代进入繁盛阶段，细胞培养逐渐被基础研究与应用领域所应用，特别是在医学领域得到迅速的发展。目前，细胞培养技术已经涉及到生物学、农业、环境保护等领域[ 3 ]。目前，在细胞培养过程中，只能根据离体细胞的特点和培养条件，提供满足其生长和发育的一些基本生理条件。必须在无菌条件下进行，细胞感染微生物后，会因被夺营养物质而导致细胞生长缓慢或停滞，甚至死亡。需要提供适宜的温度和pH，一般哺乳动物细胞培养的温度控制在37 ℃，鱼类的温度要低一些。温度过高或过低时，均不利于细胞生长甚至会导致细胞死亡。动物细胞最适宜pH一般控制在7.2~7.4，在此范围细胞生长活跃，增殖速度快，如果过低或过高性，细胞会因为细胞膜受损而死亡。细胞离体培养技术的关键是细胞培养液的设计，理想的细胞培养液可以同时解决细胞离体培养所需要的pH、渗透压、营养物质、调节物质的全部需要。细胞培养液中需含有细胞增殖、生长所需要的各种营养物质。如提供能量的物质（N源、C源）、代谢调节控制的物质（无机盐、维生素、激素）。另外，在细胞培养过程中需要提供一定量的气体（O2和CO2）。CO2具有调节pH和缓冲的作用，一般提供5% CO2。

医用细胞生物学知识点

医用细胞生物学知识点细胞生物学 (cell biology )：细胞生物学是以细胞为研究对象，经历了从显微水平到亚显微和分子水平的发展过程，成为今天在分子层次上研究细胞精细结构和生命活动规律的学科。医学细胞生物学 (medical cell biology)：医学细胞生物学以揭示人体各种细胞在生理和病理过程中的生命活动规律为目的，期望能对人体各种疾病的发病机制予以深入阐明，为疾病的诊断、治疗和预防提供理论依据和策略。对细胞概念理解的五个角度： ①细胞是构成有机体的基本单位； ②细胞是代谢与功能的基本单位； ③ 细胞是有机体生长与发育的基础； ④细胞是遗传的基本单位； ⑤没有细胞就没有完整的生命。生物界划分的三个类型：原核细胞、古核细胞和真核细胞。原核细胞与真核细胞的比较： p13 表 2-1 生物大分子：是由有机小分子构成的，大约有 3000种，分子量从 10000到 1000000。核酸 (nucleic acid ) 的基本单位 :核苷酸。核苷酸：核苷的戊糖羟基与磷酸形成酯键，即成为核苷酸。 DNA 分子的双螺旋结构模型( p18图 2-8)：DNA 分子由两条相互平行而方向相反的多核苷酸链组成，即一条链中磷酸二酯键连接的核苷酸方向是 5'→3'，另一条是 3'→ 5'，两条链围绕着同一个中心轴以右手方向盘绕成双螺旋结构。基因组：细胞或生物体的一套完整的单倍体遗传物质称为基因组。动物细胞内含有的主要 RNA 种类及功能： p20 表 2-3 核酶 (ribozyme ) :核酶是具有酶活性的 RNA 分子。蛋白质 ( protein )的基本单位：氨基酸。肽键：肽键是一个氨基酸分子上的羧基与另一个氨基酸分子上的氨基经脱水缩合而成的化学键。肽 (peptide) ：氨基通过肽键而连接成的化合物称为肽。蛋白质分子的二级结构： α -螺旋， β-片层。酶 (enzyme)：酶是由生物体细胞产生的具有催化剂作用的蛋白质。酶的特性：高催化效率，高度专一性，高度不稳定性。光学显微镜的种类：普通光学显微镜，荧光显微镜，相差显微镜，暗视野显微镜，共聚焦激光扫描显微镜。细胞培养：细胞培养是指细胞在体外的培养技术，即无菌条件下，从机体中取出组织或细胞，模拟机体内正常生理状态下生存的基本条件，让它在培养器皿中继续生存、生长和繁殖的方法。细胞膜 (cell membrane ):细胞膜是包围在细胞质表面的一层薄膜，又称质膜 ( plasma membrane ) 生物膜 ( biomembrane ):目前把质膜和细胞内膜系统总称为生物膜。细胞膜的组成：主要由脂类、蛋白质和糖类组成磷脂 (phospholipid)可分为两类：甘油磷脂由于磷脂分子具有亲水头和疏水尾，故称为膜蛋白可分为三种基本类型：膜内在蛋白蛋白 (lipid anchored protein) 。细胞外被 ( cell coat )：在大多数真核细胞表面有富含糖类的周缘区，称为细胞外被或糖萼。细胞外被的基本功能：保护细胞抵御各种物理、化学性损伤，如消化道、呼吸道等上皮细胞的细胞外被有助于润滑、防止机械损伤，保护黏膜上皮不受消化酶的作用。 1． 2． 3． 4． 5． 6． 7． 8． 9． 10． 11 ． 12 ． 13 ． 14 ． 15 ． 16 ． 17 ． 18 ． 19． 20． 21 ． 22 ． 23 ． 24 ． 25 ． 26． 27． 28． (phosphoglycerides )和鞘磷脂 (sphingomyelin,SM) 。两亲性分子或兼性分子。 intrinsic protein )、膜外在蛋白 (extrinsic

细胞培养常见问题及解答课稿

细胞培养常见问题及解答 1、如何选用培养基？培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的首选是AIM V培养基（SFM）。 2、为什么要热灭活血清？加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在进行免疫学研究、培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。 3、L－谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？ L－谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L－谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L－谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有最终确定。L－谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。 4、GlutaMAX-I是什么？培养细胞如何利用GlutaMAX-I？这个二肽有多稳定？ GlutaMAX-I二肽是L－谷氨酰胺的衍生物，将其不稳定的α－氨基用L－丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L－谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常稳定，即使在121磅灭菌20分钟，GlutaMAX-I二肽溶液有最小的降解，如果在相同条件下，L－谷氨酰胺几乎完全降解。 5、为什么培养基中可以省去加酚红？酚红在培养基中被用来作为PH值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用（特别是雌激素）。为避免固醇类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。 6、如何用台盼兰计数活细胞？用无血清培养基把细胞悬液稀释到200－2000个/毫升，在0.1毫升的细胞中加入0.1毫升的0.4％的台盼兰溶液。轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色的细胞是死细胞。 7、如何消除组织培养的污染？

完整版浙科版高中生物必修一整理归纳

第一章：细胞的分子组成 1. 生物以细胞为基本结构单位和功能单位，如果要进行生命活动，前提条件是保证细胞的完整性。病毒无细胞结构，但也要在细胞内才能表现出生命活性。 2. C 、H 、O N 在生物体内含量达 96.3%，其中C 是生物体核心元素， 0是活细胞中含量最多的元素。 3. 水是活细胞中含量最多的化合物，蛋白质是干细胞中含量最多的化合物。 4. 无机盐对维持血浆正常浓度、酸碱平衡和神经肌肉兴奋性非常重要。哺乳动物血液中CaT 含量过低会导致抽搐。Mg + 是叶绿素的必需成分。卩￡+ 是血红蛋白的主要成分 a.主要能源物质：葡萄糖 b.动物细胞储能物质是糖元；植物细胞则是淀粉 c.直接能源物质：ATP e.最终能源物质：光能 7. 植物细胞特有糖类：果糖、纤维素、麦芽糖、淀粉动物细胞特有糖类：乳糖、糖元动物细胞和植物细胞都有的糖类：核糖、脱氧核糖、葡萄糖 8. 磷脂是细胞内各种膜结构的重要成分。 9. 蛋白质的基本单位是氨基酸。每种氨基酸分子至少含有一个氨基和一个羧基，并且一个氨基和一个羧基连接在同一碳原子上。R 基的不同决定了氨基酸的种类不同。 10. 两个氨基酸发生脱水缩合形成二肽，形成肽键，见下图： H I H^—（f —COOH

11. 氨基：-NH2；羧基：-COOH 肽键：-CO-NH- 12. 不同的蛋白质差别在于组成它们的氨基酸的种类、数量和排列顺序、多肽链的空间结构不同。 13. 假设有m个氨基酸脱水缩合形成n条链，则： ①肽键数=失去的水分子数=氨基酸总数-肽链条数=m-n ； ②至少有n个氨基，n个羧基游离； ③蛋白质分子量=氨基酸平均分子量x总数-18 x（m-n） 14.核酸分两种，核糖核酸（RNA和脱氧核糖核酸（DNA。单体为核苷酸，脱氧核糖核苷酸（DNA的单体）以及核糖核苷酸（RNA勺单体）。第二章：细胞概述 1. 胡克第一次看到了细胞，但他看到的只是死细胞的细胞壁，主要化学成分是纤维素。 2. 生物体的增大，不是由于细胞体积的增大，而是由于细胞细胞数目的增多。细胞为什么那么小的原因在于：a.细胞核能够控制的范围有限； b.细胞体积越小，则表面积与体积之比就相对较大，有利于细胞与外界发生物质交换。 3. 根据细胞核有无核膜包被，可分为真核细胞和原核细胞。原核细胞主要是细菌，如蓝细菌（蓝藻）、放线菌、乳酸菌、大肠杆菌等。真核细胞包括植物、动物和真菌（霉菌、食用菌、酵母菌）等。 4. 质膜在结构上具有流动性，在功能上具有选择透性。 5. 质膜最基本的结构是脂双层，也称为单位膜，主要是磷脂分子。质膜中还有膜蛋白, 也具有流动性。细胞识别、免疫等功能主要由糖蛋白完成。 6. 细胞壁主要化学成分是纤维素，细胞壁是全透性的，物质可以随意进出细胞壁。 7. 叶绿体：双层膜，含少量DNA。光合作用的细胞器，只存在于能进行光合作用的细胞中，如洋葱根细胞中一般没有叶绿体。 &线粒体：需氧呼吸主要场所；含少量DNA。双层膜，内膜向内折叠形成嵴。 9. 核糖体：合成蛋白质的细胞器，无膜，由RNA和蛋白质组成，来源于核仁。 10. 中心体：无膜，与动物细胞有丝分裂有关。 11. 液泡：单层膜。含有色素，使植物的花和果实有颜色。液泡中的细胞液含有无机盐类、糖类、氨基酸

(完整版)细胞生物学知识点整理

细胞生物学：研究细胞基本生命活动规律的科学，它从不同层次(显微、亚显微和分子水平)上研究细胞结构与功能，细胞增殖、分化、衰老与凋亡，细胞信号转导，细胞基因表达与调控，细胞起源与分化等。细胞分化：其本质是细胞内基因选择性表达功能蛋白质的过程。细胞质膜 ( plasma membrane )：又称细胞膜，指围绕在细胞最外层，由脂质和蛋白质组成的生物膜。内膜：形成各种细胞器的膜。生物膜( biomembrane )：质膜和内膜的总称。细胞外被：也叫糖萼，由质膜表面寡糖链形成。膜骨架：质膜下起支撑作用的网络结构。细胞表面：由细胞外被、质膜和表层胞质溶胶构成。脂筏模型(lipid rafts model) ：即在生物膜上胆固醇等富集而形成有序脂相,如同脂筏一样载着各种蛋白。脂筏是质膜上富含胆固醇和鞘磷脂的微结构域。被动运输指通过简单扩散或协助扩散实现物质由高浓度到低浓度方向的跨膜运输。水孔蛋白(aquporins ；AQPs) ：或称水分子通道，是一类具有选择性、高效转运水分的膜通道蛋白。不具有“水泵”功能，通过减小水分跨膜运动的阻力而使细胞间的水分迁移速度加快。协助扩散：也称促进扩散( facilitated diffusion )：各种极性分子和无机离子顺着浓度梯度或电化学梯度的跨膜运输。通道蛋白：跨膜亲水性通道，允许特定离子顺浓度梯度通过，又称离子通道。配体门通道：受体与细胞外的配体结合，引起通道构象改变，“门”打开，又称离子通道型受体。协同运输：靠间接提供能量完成主动运输，所需能量来自膜两侧离子的浓度梯度。动物细胞中常常利用膜两侧Na+ 浓度梯度来驱动。植物细胞和细菌常利用H+ 浓度梯度来驱动。分为：同向协同和反向协同。膜泡运输：真核细胞通过胞吞作用( endocytosis )和胞吐作用( exocytosis )完成大分子与颗粒性物质的跨膜运输。胞吐作用：包含内容物的囊泡移至细胞表面，与质膜融，将物质排出细胞之外底物水平的磷酸化：由相关酶将底物分子上的磷酸基团直接转移到ADP 分子生成ATP 的过程。氧化磷酸化：在呼吸链上与电子传递相耦联，ADP 被磷酸化生成ATP 的过程。半自主性细胞器：自身含有遗传表达系统，但编码的遗传信息十分有限，其RNA 转录、蛋白质翻译、自身构建和功能发挥等必须依赖核基因组编码的遗传信息。细胞内膜系统：是指细胞内在结构、功能及发生上相关的、由膜包被的细胞器或细胞结构。包括内质网、高尔基体、溶酶体和分泌泡等。粗面内质网：多为扁囊状，在ER 膜的外表面附有大量的核糖体，普遍存在于分泌蛋白质的细胞中。光面内质网：ER 膜上无颗粒(核糖体) ，ER 的成分不是扁囊，而常为小管小囊，它们连接成网，广泛存在于能合成类固醇的细胞中。次级溶酶体：是正在进行或完成消化作用的溶酶体，分为自噬溶酶体和异噬溶酶体。残体：又称后溶酶体( post-lysosome )，已失去酶活性，仅留未消化的残渣，可排出细胞，也可能留在细胞内逐年增多，如表皮细胞的老年斑，肝细胞的脂褐质。细胞内蛋白质分选：除线粒体和植物叶绿体中能合成少量蛋白质外，绝大多数的蛋白质均在细胞质基质中的核糖体上开始合成然后运至细胞的特定部位，这一过程称蛋白质的定向转运或蛋白质分选。信号序列：引导蛋白质定向转移的线性序列，通常15-60 个氨基酸残基，对所引导的蛋白质没有特异性要求。信号斑：存在于完成折叠的蛋白质中，构成信号斑的信号序列之间可以不相邻，折叠在一起构成蛋白质分选的信号。翻译后转运：在细胞质基质游离核糖体上完成多肽链的合成，然后转运至膜围绕的细胞器或成为基质可溶性驻留蛋白和支架蛋白。共翻译转运：蛋白质合成在游离核糖体上起始后，由信号肽引导转移至糙面内质网，然后新生肽链边合成边转入糙面内质网，经高尔基体加工包装转运溶酶体、细胞质膜或分泌到细胞外。分子伴侣：细胞中的某些蛋白质分子，可以识别正在合成的多肽或部分折叠的多肽，并与多肽的某些部位结合，从而帮助这些多肽转运、折叠、或装配。这类分子本身并不参与最终产物的形成。细胞信号转导：指细胞外因子通过与受体(膜受体或核受体)结合，引发细胞内的一系列生物化学反应以及蛋白间相互作用，直至细胞生理反应所需基因开始表达、各种生物学效应形成的过程。双信使系统：在磷脂酰肌醇信号通路中胞外信号分子与细胞表面G 蛋白耦联型受体结合，激活质膜上的磷脂酶C( PLC-

培养基母液的配制方法

培养基母液的配制方法一、实验目的 1.了解无菌操作 2.掌握培养基母液的配制方法二、实验原理配制培养及时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。三、实验器材和药品器材：电子天平、烧杯、容量瓶、细口瓶、药勺、玻璃棒、电炉。药品：NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、 MgSO4·7H2O、KH2PO4、KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、 ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、 CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、FeSO4·7H2O、 Na2-EDTA·2H2O、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇(维生素B6)、盐酸硫胺素 (维生素B1)、甘氨酸。四、实验步骤 1、大量元素母液的配制

各成分按照表1培养基浓度含量扩大10倍用天平称取，用蒸馏水分别溶解，按顺序逐步混合。后用蒸馏水定容到 1000ml的容量瓶中，即为10倍的大量元素母液。到入细口瓶，贴好标签保存于冰箱中。配制培养基时，每配1L培养基取此液100ml。表1 MS培养基大量元素母液制备注意： (1) 配制大量元素母液时，某些无机成分如Ca2+、SO42－、Mg 2+和H2PO4一等在一起可能发生化学反应，产生沉淀物。为避免此现象发生，母液配制时要用纯度高的重蒸馏水溶解，药品采用等级较高的分析纯，各种化学药品必须先以少量重蒸馏水使其充分溶解后才能混合，混合时应注意先后顺序。特别应将Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4一等离子错开混合，速度宜慢，边搅拌边混合。

细胞培养时存在的生物安全问题简析

龙源期刊网 https://www.360docs.net/doc/714408090.html, 细胞培养时存在的生物安全问题简析作者：胡燕玲高习文来源：《现代畜牧科技》2018年第07期摘要：动物细胞培养技术在生物技术和生物医药的相关研究领域中的应用非常广泛。随着动物细胞培养在各个领域应用的内涵逐渐的深入，随之也产生了相应的生物安全问题，也就是生产中常说的生物健康和环境因素之间的风险性问题，而且此问题已经受到相关领域专业人士的广泛关注。现主要分析动物细胞培养过程中存在的生物安全问题，并且针对具体的问题及其风险进行评估，以及更深入的探讨和研究，以期为生物健康和环保提供更加可靠的理论基础和相关的技术支持。关键词：动物细胞培养；生物安全；危险评估中图分类号：R446.11+3 文献标识码：B 文章编号：2095-9737（2018）07-0018-01 1 概述目前，通常是通过动物细胞进行培养，以作为培养基质提供给病毒疫苗的生产所用，此外，许多生物药品的生产过程中也不能缺少动物细胞的培养。随着动物细胞培养的不断深入应用，相应的生物安全问题随机出现，愈来愈受到关注。然而，实际生产中如果想将风险在最大程度上加以控制，就需要采取比较全面的风险评估再进行确定，还要考虑细胞培养操作的类型以及细胞培养潜在的生物危害等情况。 2 动物细胞培养过程中存在的生物安全问题 2.1 细胞培养的特点实际生产中针对动物细胞培养过程的风险进行评估时，必须考虑的因素就是细胞培养的本质特征，主要体现在物种来源、细胞或组织类型以及培养类型三个不同的方面。 2.2 遗传修饰获得的特征实际生产中，在实验室遗传修饰获得的重组细胞与其非重组类似物相比较，通常对生物健康和环境破坏的能力要更强一些。所以在实际评估动物细胞培养风险时，还必须确定重组细胞获得的遗传修饰特征，将其对评估的影响考虑在内。

各种细胞器地结构和功能

考点名称：各种细胞器的结构和功能细胞器之间的分工 1．双层膜结构的细胞器——线粒体和叶绿体名称线粒体叶绿体形态短棒状、圆球状椭球形、球形分布动植物细胞植物叶肉细胞和幼茎皮层细胞成分与有氧呼吸有关的酶、少量DNA、RNA与光合作用有关的酶、少量DNA、RNA和光合色素功能有氧呼吸的主要场所，是细胞的“动力车间” 光合作用的场所，是植物细胞的“养料制造车间”和“能量转换站” 相同点 ①具有双层膜结构；②含有少量DNA和RNA；③具有能量转换功能；④有液态的基质 2．单层膜结构细胞器——高尔基体、内质网、液泡和溶酶体内质网高尔基体液泡溶酶体分布动、植物细胞动、植物细胞植物细胞动、植物细胞形态网状囊状泡状囊状功能蛋白质合成和加工以及脂质合成的“车间” ①动物：对来自内质网的蛋白质加工、分类和包装；②植物：与植物细胞壁的形成有关 ①调节细胞内的环境；②使植物细胞保持坚挺 ①分解衰老、损伤的细胞器；②吞噬并杀死入侵的病毒或病菌 3．无膜结构细胞器一一核糖体和中心体核糖体中心体分布①附着在内质网上或核外膜；②游离存细胞质基质中；③线粒体和叶绿体中中也有少量动物细胞和低等植物细胞结构组成蛋白质、RNA、酶两个相互垂直的中心粒功能①附着在内质网上的核糖体合成分泌蛋白；②游离的与细胞有丝分裂有关——形成纺锤体，

核糖体合成的是胞内蛋白牵引染色体向细胞两极运动易错点拨： 1、在动植物细胞中，有细胞壁的细胞是植物细胞，没有细胞壁的细胞是动物细胞。 2、在动植物细胞中，有叶绿体的细胞是植物细胞，没有叶绿体的细胞不一定是动物细胞，如植物的根细胞不进行光合作用，没有叶绿体。 3、在动植物细胞中，有大液泡的细胞是植物细胞，没有大液泡的细胞不一定是动物细胞，植物的未成熟细胞也没有大液泡，如根尖分生区细胞。 4、在动植物细胞中，有中心体的细胞可能是动物或低等植物的细胞，没有中心体的细胞是高等植物细胞，中心体不能作为鉴别动物细胞和植物细胞的依据，但可以用作鉴别高等动物细胞和高等植物细胞的依据。 5、辨析动、植物细胞的区别项目高等植物细胞低等植物细胞动物细胞细胞壁有有无叶绿体部分有部分有无中心体无有有液泡成熟的植物细胞有大液泡，幼嫩的植物细胞无液泡或有小液泡无例下列哪种细胞器不能作为鉴定一个细胞属于动物细胞还是高等植物细胞的依据（）A．核糖体B．叶绿体C．液泡D．中心体思路点拨叶绿体、液泡存在于植物细胞中，中心体存在于动物细胞和低等植物细胞中，核糖体和线粒体则广泛分布于动植物细胞中。答案A 知识拓展： 1、线粒体和叶绿体的数量随细胞的新陈代谢强度的变化而变化。在代谢旺盛的细胞中它们的数量会因复制而增多；在代谢减弱的细胞中它们的数量会减少。其数量的增减与细胞的分裂不同步。 2、各种细胞器并不是在每个细胞中都同时存在。 ①并不是所有的植物细胞都有叶绿体或大液泡，如植物根尖分生区细胞中无叶绿体和大液泡 ②并非所有动物细胞都有线粒体，如蛔虫和哺乳动物成熟的红细胞中无线粒体。 3、能进行光合作用（或有氧呼吸）的细胞不一定都含有叶绿体（或线粒体），如蓝藻可以进行光合作用和有氧呼吸，但无叶绿体和线粒体。例下列关于真核细胞结构的叙述，不正确的是() A．线粒体是细胞内物质氧化和能量转换的主要扬所 B．高尔基体是细胞内蛋白质合成、加工和运输的场所 C．中心体与动物细胞的有丝分裂有关

医学细胞生物学知识点归纳

线粒体： 1.呼吸链（电子传递链）Respiratory chain一系列能够可逆地接受和释放H+和e-的化学物质所组成的酶体系在线粒体内膜上有序地排列成互相关联的链状。 2.化学渗透假说（氧化磷酸化偶联机制）：线粒体内膜上的呼吸链起质子泵的作用，利用高能电子传递过程中释放的能量将H+泵出内膜外，造成内膜内外的一个H+梯度（严格地讲是离子的电化学梯度），A TP合酶再利用这个电化学梯度来合成A TP。 3.电子载体:在电子传递过程中与释放的电子结合并将电子传递下去的物质称为电子载体。参与传递的电子载体有四种∶黄素蛋白、细胞色素、铁硫蛋白和辅酶Q，在这四类电子载体中，除了辅酶Q以外，接受和提供电子的氧化还原中心都是与蛋白相连的辅基。 4.阈值效应：突变所产生的效应取决于该细胞中野生型和突变型线粒体DNA的比例，只有突变型DNA达到一定数量（阈值）才足以引起细胞的功能障碍，这种现象称为阈值效应。 5.导向序列：将游离核糖体上合成的蛋白质的N-端信号称为导向信号，或导向序列，由于这一段序列是氨基酸组成的肽，所以又称为转运肽。 6.信号序列：将膜结合核糖体上合成的蛋白质的N-端的序列称为信号序列，将组成该序列的肽称为信号肽。 7.共翻译转运：膜结合核糖体上合成的蛋白质通过定位信号，一边翻译，一边进入内质网，由于这种转运定位是在蛋白质翻译的同时进行的，故称为共翻译转运。 8.蛋白质分选：在膜结合核糖体上合成的蛋白质通过信号肽，经过连续的膜系统转运分选才能到达最终的目的地，这一过程又称为蛋白质分选。核糖体： 1.原核生物mRNA中与核糖体16S rRNA结合的序列称为SD序列(SD sequence) 。 2.核酶：将具有酶功能的RNA称为核酶。 3.N-端规则(N-end rule): 每一种蛋白质都有寿命特征，称为半衰期(half-life)。研究发现多肽链N-端特异的氨基酸与半衰期相关，称为N-端规则。 4.泛素介导途径：蛋白酶体对蛋白质的降解通过泛素(ubiquitin)介导,故称为泛素降解途径。蛋白酶体对蛋白质的降解作用分为两个过程:一是对被降解的蛋白质进行标记,由泛素完成;二是蛋白酶解作用,由蛋白酶体催化。细胞核： 1.核内膜：有特有的蛋白成份（如核纤层蛋白B受体），膜的内表面有一层网络状纤维蛋白质，即核纤层（nuclear lamina），可支持核膜。核外膜：靠向细胞质的一层，是内质网的一部分，胞质面附有核糖体核周隙：内、外膜之间有宽20~40nm的腔隙，与粗面内质网腔相通核孔复合体：内、外膜融合处，物质运输的通道核纤层：内核膜内表面的纤维网络，支持核膜，并与染色质、核骨架相连。 2.核孔复合体：是细胞核内外膜融合形成的小孔，直径约为70 nm，是细胞核与细胞质间物质交换的通道。 3.核孔蛋白：参与构成核孔的蛋白质，可能在经核孔的主动运输中发挥作用。核运输受体：参与物质通过核孔的主动运输。核周蛋白: 是一类与核孔选择性运输有关的蛋白家族，相当于受体蛋白。 5.输入蛋白：核定位信号的受体蛋白, 存在于胞质溶胶中, 可与核定位信号结合, 帮助核蛋白进入细胞核。输出蛋白：存在于细胞核中识别并与输出信号结合的蛋白质, 帮助核内物质通过核孔复合