荧光定量仪PCR
Qubit3.0 Fluorometer荧光定量仪PCR
技术原理：
Qubit 3.0荧光定量仪结合Qubit定量试剂盒，采用专门研制的荧光染料，对生物分子进行精确定量，包括DNA，RNA，和Protein。
特定荧光染料选择性地特异性靶分子结合，发射荧光信号
1、荧光染料不会接结合杂质，如游离核苷酸
2、基于荧光检测技术，高于传统紫外光分光光度法三个数量级
3、最少仅需1ul的样品
4、可检测低浓度样品（10pg/ul dsDNA)
更高的特异性意味更高的准确度
仪器特点：
高特异性：选择性定量，区分dsDNA，Oligos，RNA，MicroRNA，or Protein
高准确率：高于紫外分光光度法高灵敏度：可检测低浓度样品操作简单：仅需微量样品，1ul
大触摸屏操作，双核操作系统，迅速计算样品浓度，存储1000个结果
Qubit荧光定量仪比较：
Original Qubit Qubit 2.0Qubit 3.0
上样量1- 20 μL 样品1- 20 μL 样品1- 20 μL 样品
分析模式DNA, RNA, protein
DNA,RNA,microRNA,protein,
IonSphere,MyQubit,Fluorometer
DNA, RNA, microRNA,
protein, MyQubit, Ion Sphere,
Fluorometer
显示曲
线
2-点标准曲线2-点标准曲线2-点标准曲线
存储储存20个样品结果浓度计算器浓度计算器
用户界
面
菜单导航“a ll or none”数据管理先进的数据管理
存储能直接与电脑连接储存200个样品数据储存1000个样品数据
力
数据传输U盘
U盘或直接与PC连接
屏幕 3.5”触摸屏 5.7”触摸屏
操作系统安卓双核系统智能手机式管理
自检内部自检
操作语
言
6 种操作语言
XX生物科技公司ABI7500荧光定量PCR仪标准操作规程
1.目的 规范ABI 7500荧光定量PCR仪操作，保证安全操作，延长仪器寿命 2.范围 适用于ABI 7500荧光定量PCR仪 3.职责 操作人负责本规程实施，部门负责人监督实施。 4.规程 4.1 实验程序运行： 4.1.1首先打开电脑，进入操作系统后，打开ABI 7500荧光定量PCR仪电源。双击桌面上7500 software V2.0.6。弹出Login对话框，默认的User Name为GUEST，点击Login as GUEST，点击OK运行软件。 4.1.2进入界面，选择Advanced Setup。 4.1.3点击Experiment Properties。在Experiment Name栏输入实验名称。 4.1.4点击Plate Setup，点击Define Targets as Samples。设定Target Name的Reporter 为FAM。
4.1.5点击Assign Targets and Samples。设定96孔板。 4.1.5点击Run Method。设定反应程序。 4.1.6点击Reaction Setup设定反应体系。
4.1.7点击Run菜单，点击START RUN。开始运行PCR反应。 4.1.8点击Analysis开始分析实验数据。点击Amplification Plot，可以看到扩增曲线。点击Plate Layout的View Well Table可以看到CT值。 4.2 ABI7500荧光定量PCR仪使用及维护注意事项 4.2.1 实验室的环境： a.电源：UPS或稳压器。 b.通风：仪器的通风应该没有阻挡。 c.温度：实验室应该配有空调。 d.湿度：20-80%。 e.空间：易于操作，安全。 4.2.2 关闭并打开计算机和仪器电源开关: 如果主机和计算机一直在开机使用，每周应该进行一次以下操作：关闭主机电源开关，关闭计算机，然后重新打开计算机和仪器电源开关。 4.2.3 使用不脱毛的布块擦拭仪器表面:重要！切勿使用有机溶剂清洁ABI7500荧光定量PCR仪。每周一次。 4.2.4 执行背景校正（Background calibration）:使用背景校正板。每月一次。 4.2.5 执行纯荧光校正（Pure Dye Calibration）:使用纯荧光反应板。每半年一次。
第1包实时荧光定量PCR仪参数
第1包：实时荧光定量PCR仪参数 1仪器性能 1.1检测模式：HybProbe杂交探针、SimplProbe单探针、染料模式、水解探针、 分子信标、蝎型探针、高分辨率熔解曲线（HRM）等 1.2线性范围：1-1010个拷贝 1.3检测灵敏度：可检测单拷贝基因 1.4模块规格：支持96孔模块与384孔模块 1.5★模块互换：用户可自行更换并升级至384模块，自行手动更换后无需校准 1.6重复性：样品检测C V≤0.15% (50nmol/l荧光浓度) 1.7精密度：≤1.5倍拷贝数差异，置信度≥99.8% 2硬件配置 2.1温控系统 2.1.1★温控模块：采用新型半导体温控模块。 2.1.2★模块设计：所有样本对应的温控模块一体化成型。 2.1.3★温控模块平均温控速率> 6.5 ℃/s 2.1.4样本平均温控速率> 4.5℃/s 2.1.5温度准确性：≤0.1 ℃（37-99 ℃） 2.1.6★温度均一性(Tm)：±0.1 ℃（37-99 ℃） 2.1.7熔解曲线温度分辨率≤ 0.02 ℃ 2.1.8★高分辨率熔解曲线反应时间：<10分钟 2.1.9反应体积：96孔板为10-100ul，384孔板为5-20ul 2.1.10反应时间：40个循环反应：≤60分钟(96孔标准检测) ；≤40分钟(384孔 标准检测) 2.2光学系统 2.2.1光源：新型固态光源 2.2.2★单个光源寿命：> 10000小时 2.2.3检测通道数≥6通道 2.2.4★检测系统：冷CCD
2.2.5所有样本同时激发并采集数据，孔间无时间差 2.2.6光路设计： 2.2.6.1激发滤光片与检测滤光片可自由组合，提供至少20种不同的组合的 检测模式 2.2.6.2采用有效消除光学边缘效应的技术设计 2.2.6.3全固定光路设计，激发光源与检测系统在工作中无需移动，保证系 统稳定性 3软件 3.1颜色补偿功能：具备 3.2软件：具有定性定量（绝对定量、相对定量）、自动报告熔解温度、自动报告 基因分型结果、高分辨率熔解曲线分析等功能，配套的运行和结果分析软件，能 够针对观察到的扩增情况随时增加循环数目，实时动态监测，扩增和检测同时进 行 3.3数据导出：Excel ,TXT, PDF, XML, GIF, PNG, BMP, JPEG 4试剂 4.1配套耗材：开放平台，可使用市面上国产或进口的各品牌试剂及第三方提供的8 连板、96孔板和384孔板 4.2支持的荧光染料种类：包括但不限于FAM?、SYBR?、Fluorescein、SYPRO? Orange、VIC?、JOE?、TET?、HEX?、TAMRA?、Texas Red?、Alexa Fluor 633、 LC Cyan 500、Fluo 3、ResoLight、EvaGreen、LC Green、Cy3、Cy5、Yellow555、 LC Red610、ROX、SYPRO Ruby、LC Red640、Snarf 1、Acid Fuchsin、Cy5.5、 LC Red670、LC Red705等 5仪器配置 5.1主机，配套96孔和384孔模块 5.2除标配外，另配光源寿命> 10000小时的原厂新型固态光源一个 5.3操作手册（中英文版本） 5.4软件安装光盘
实时荧光定量PCR仪采购要求
荧光定量PCR系统采购要求 一、技术参数要求： 1仪器性能 1.1检测指标：成功区分起始模板为1000和2000个拷贝的浓度差，置信 度>99.8%； 1.2检测模式：染料模式、水解探针、简单探针、分子信标、高分辨率熔解 曲线（HRM）等； 1.3线性范围：2-500个拷贝； 1.4检测灵敏度：可检测单拷贝基因； 1.5检测紧密度：≤1.5倍拷贝数差异，置信度≥99.8%； 1.6反应时间（40个循环）：≤40分钟； 1.7荧光染料校正，无需ROX等被动染料校正。 2硬件配置 2.1 温控系统： 2.1.1温控模块：银质半导体温控模块； 2.1.2 控温范围：40-98℃； ★2.1.3模块平均温控速率：≥6.8 ℃/s； 2.1.4样本平均温控速率：≤6.0℃/s； 2.1.5温度准确性: ±0.25 ℃； ★2.1.6温度均一性（Tm）: ±0.2℃； 2.1.7熔解曲线温度分辨率：0.04 ℃； 2.1.8 梯度PCR功能：可用于梯度PCR实验； 2.1.9 样本容量：96孔板； 2.2光学系统 ★2.2.1光源：高强度白色固态光源； 2.2.2 激发波长：390-710 nm，连续不间断； 2.2.3激发/检测通道数量：4通道；
2.2.4：光路边缘效应：96孔重复实验，Ct值的SD值<0.2； ★2.2.5检测系统： CCD 2.3控制系统 2.3.1控制界面：含有内置触控屏，可脱机运行； 2.3.2支持通过USB控制仪器运行程序和存储数据； 2.3.3数据接收方式：与PC连接后，电脑直接同步获取数据； 2.4 分析软件功能 2.4.1 支持的荧光染料种类开放：包括但不限于FAM?、SYBR?、Fluorescein、 SYPRO? Orange、VIC?、JOE?、TET?、HEX?、TAMRA?、Texas Red?、Alexa Fluor 633、ResoLight、EvaGreen、LC Green等。 2.4.2分析模式：具有定性定量（绝对定量、相对定量）、自动报告熔解温度、 自动报告基因分型结果、高分辨率熔解曲线、阴阳性判读等功能，实时 动态监测运行，扩增和检测同时进行。 2.4.3 数据导出：TXT表单、GIF、 PNG。 2.4.4 数据兼容性：支持生成MIQE国际标准对应的RDML通用数据格式。 3试剂耗材 开放平台，可使用市面上国产或进口的各品牌试剂及第三方提供的96孔板。 二、配件、备件要求：配备操作电脑一台。 三、商务要求 1 质保期：仪器安装调试合格之日起一年； 2 交货时间：合同签订后60天； 3售后服务响应要求：有专职工程师，提供维修服务和技术支持。4小时响应，24小时解决问题。
荧光定量PCR仪使用说明
7500荧光定量PCR 仪使用说明 注意事项： 实验过程必须戴干净的一次性乳胶手套进行操作。 PCR 反应所用的96孔板、8联管或单管必须为ABI7500专用，凸盖PCR 管禁止使用。 使用8联管两侧需用空管支撑，使用单管四角需用空管支撑，以防止板槽受力不均。 实验数据用光盘刻录，禁止U 盘拷取，数据可暂存于本机电脑硬盘中，各实验室D 盘中有指定文件夹，中心外部人员数据存于FUWU 文件夹下的子文件夹中。 操作步骤 开机 放入反应板 注：关闭仪器托盘时，应按一个角度推压托盘的右侧。 按压此处 ！ 待电脑启动稳定后，按压7500仪器电源按扭，等待仪器启动（约30 s ）。 当仪器只显示Power 状态指示灯时，方可按压托盘以打开它。
（以下过程按字母顺序a →q 进行操作） 创建反应板文件 双击电脑桌面上SDS 软件图标 打开SDS 软件； a. 从 Assay 下拉列表中选择反应板类型 c. 单击Next 反应板文件类型有以下几种： 1. Relative Quantification (ddCt) Plate （相对定量） 2. Absolute Quantification (Standard Curve)（绝对定量，标准曲线） 3. Allelic Discrimination （等位基因鉴别） 4. Plus/Minus （阳性/ 阴性实验） d. 选择要添加到反应板文件的探针（引物），单击Add 添加选中探针 e. 如果在列表中未列出所需探针，请单击New Detector 创建新探针 f. 单击Next b. 为反应板文件命名
荧光定量PCR仪操作指引eppendorf
目录： 1 安全预防法 2 安装 2.1 交货包装 2.2 仪器的安装 2.3 功能性单元 2.3.1 Mastercycler ep realplex 2.4 启动 2.4.1 realplex模块与热模块之间的连接 2.4.2 Mastercycler ep realplex 与计算机之间的连接2.4.3 与其它部件的连接 2.4.4 realplex软件的安装 2.4.4.1 安装主程序 2.4.4.2 数据恢复 2.4.4.3 开始realplex软件的运行 3. 操作 3.1 管理者登陆 3.2 登陆 3.3 用户变更 3.4 系统配置 3.4.1 对使用者的管理 3.4.1.1 新用户建立 3.4.1.2 编辑用户 3.4.1.3删除用户 3.4.2 用户层 3.4.3 循环仪 3.4.4 realplex 模块 3.4.5 系统层 3.4.5.1 特性 3.4.5.2 登陆出错信息 3.4.5.3 用户登陆 3.4.5.4 软件更新 3.5 检测项目管理 3.5.1 建立检测项目 3.5.2 打开检测项目 3.5.3 保存检测项目 3.5.4 保存模板文件 3.5.5 模板文件的使用 3.5.6 复制检测项目 3.5.7 检测项目的输出 3.5.8 检测项目的输入
建立文件夹3.5.9 3.5.10 删除检测项目和文件夹 3.6 探针管理 3.7 染料管理 3.8 校准 3.8.1 背景校准 3.8.2 颜色校准 3.8.2.1 使用商业的校准工具包进行的颜色校准3.8.2.2 客户特有的染料的校准 3.9 数据库管理 3.9.1 当前数据库的自动保存 3.9.2 当前数据库的保存 3.9.3 输入数据库 3.9.4 数据库的归档 4 编程（检测项目的建立） 4.1 建立一个新的检测项目 4.2 建立板布局 4.2.1 染料的确定 4.2.2 参考染料的选择 4.2.3 样本容积输入 4.2.4 探针类型的确定 4.2.5 背景的确定 4.2.6 样品类型的定义 4.2.6.1 标准 4.2.6.2 阳性对照 4.2.6.3 阴性对照 4.2.6.4 未知样品 4.2.7 复制和标准系列的自动建立 4.2.8 定量的样品类型 4.2.9 相对定量的样品类型 4.2.9.1 多plex分析例子 4.2.9.2 单plex分析的例子 4.2.10 熔点分析中的样品类型 4.2.11 终点测定中的样品类型 4.2.12 +/-检测项目中的样品类型 4.2.13 基因辨识中的样品类型 4.2.12 样品的复制与剪切 4.2.15 删除样品 4.2.16 几个样品的归组 4.2.17 子检测项目的测定 4.2.18 板布局的删除 4.2.19 完整检测项目的板布局编辑 4.3 pcr程序的建立 4.3.1 用模板程序建立一个pcr程序
各款荧光定量PCR仪的性能比较
各款荧光定量PCR仪的性能比较 本人从事荧光定量PCR检测试剂的开发工作，用过市场上主流的多款荧光定量PCR仪，如ABI5700，ABI7700，ABI7000，ABI7300，ABI7500，MJ opticon，MJ opticon2，bio-rad ICycler，LightCycler1.5，roter-gene3000，Stratagene Mx3000P，line-gene等等。这种仪器各有各的特点，但都存在不足之处。 ABI公司的荧光定量PCR仪产品比较多，成系列，但目前而言ABI5700和ABI7700不能实时在线地检测荧光，因而已经退出历史舞台，尤其是ABI7700，不但很贵，而且采用苹果机电脑，使用很不方便。ABI7000目前也已经淘汰，我用的这台仪器老出问题，曲线极不光滑，但同样的反应体系在国产机杭州博日line-gene上曲线非常好，在ABI7500上曲线也很光滑，所以，本人估计是ABI7000设计上有不足之处。而且卤钨灯特别容易坏，在南方，我们实验室平均5个月换一个，配件容易坏，后续使用成本就会高一些。 现在市场上的ABI7300就是ABI7000的简单升级版，硬件设计上几乎没有改变，只是换过几个性能更好的配件，软件有所升级。 另外我个人感觉ABI7900（ABI公司第二代产品）有些华而不实，价格应该是所有荧光定量PCR仪中最贵的，硬件上跟ABI7700差不了太多，但性能指标还不如ABI7500（ABI公司第三代产品），硬件设计上也不如ABI7500合理。所以这个型号的仪器，谁买了，用的时候会不呼上当。 ABI7500是ABI公司最成功的产品，各方面性能都不错，虽然加热模块还是有一些边缘效应，但使用中央的孔位效果可以得到保证，在96孔板使用中间的48个孔位，结果都能得到保证。 总的来说，ABI公司在荧光定量领域上还是做出很多贡献的，其仪器在科研上还是可以用的，但由于硬件设计上的缺陷，需要额外的ROX染料进行校正，并且占用了一个检测通道。国内的试剂厂商都不加ROX染料，科研用户一般也不使用，所以其检测的准确性和重复性还是很难保证的，尤其浓度较低的模板进行检测时效果不佳，偏差会很大。 罗氏Roche的LightCycler以运行速度快而著称，在国内市场占有率最高，其设计保证了临床诊断的准确性，又充分考虑了科研功能。但本人最初使用时老出问题，有时候阳性
荧光定量PCR仪技术及其在医学中的应用
荧光定量PCR仪技术及其在医学中的应用 1 概述 荧光定量多聚酶链式反应是一种新的核酸定量技术。该技术将荧光能量传递技术(fluorescence resonance energy transfer，FRET)应用于常规多聚酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)仪中，从而进行定量检测。FRET即是通过受体发色团之间偶极一偶极相互作用，能量从供体发色团转移至受体发色团，转移效率与曲个发色团之间距离的6次幂倒数成比例。与普通定量PCR相比，荧光定量PCR仪具有可实时监测、准确性高、效率高等优点，本文综述目前国内外几种荧光定量PCR仪技术及应用。 2 荧光定量PCR 方法 2.1 TagMan TagMan技术是利用Tag酶5 外切酶活性，即Tag酶具有天然的5 、一3 核酸外切酶活性，能够裂解双链DNA5 端核苷酸，释放出单个或寡核苷酸，裂解的最佳底物是被置换了的具有又样结构的单链DNA，水解作用发生于结合了置换部位的磷酸二酯键处。基于Tag 酶的这种活性，设汁合成一个能与PCR产物杂交的探针，该探针的5 端标记一个荧光分子.3 端标记另一个荧光分子。其中3 端荧光分子能够吸收5 端荧光分子发出的荧光，因此，正常情况下该探针检测不到3 端荧光分子的荧光信号，但当溶液中有PCR 产物(模板)时，该针与模板退火，即产生了适合于核酸外切酶活性的底物，从而激活Tag酶5 外切酶活性，将探针5 端连接的荧光分子从探针上切割下来，破坏了两荧光分子间的FRET，从而发出荧光，切割的荧光分子数与PCR产物的数量成正比。因此，根据PCR反应液的荧光强度即可计算出初始模板的量。其主要不足是： 2.2 Molecular beacon 分子信标技术(molecular beacon)也是在同一探针的两末端分别标记荧光分子和淬灭分子，与Tag Man探针不同的是，该探针5 和3 末端自向形成8个碱基左右的发卡结构，此时荧光分子和淬灭分子邻近，因此不会产生荧光。当溶液中有特异模板时，该探针与模板杂交，从而破坏了探针的发卡结构，于是溶液便产生了荧光。荧光的强度与溶液中模板的量成正比。因此可用于PCR定量分析。该方法的特点是采用非荧光染料作为淬灭分子，荧光本底低其不足之处是：(1)杂交时探针不能完全与模板结合，稳定性差;(2)探针合成时标记较复杂 近来，基于Molecular beacon的原理，人们对其进行改进，使用了一种发卡式引物(sunrise primer).此法能将所有扩增产物均标记上荧光分子，因此荧光信号响应快。但无法区分特异和非特异扩增是致命不足为了克服不足，人们义对其进行改进，发明了一种称为蝎状引物(scorpion primer)的荧光定馈PCR技术。该技术在引物与Molecular beacon探针之间连接一个间隔臂，使PCR延伸反应时不能够延伸至Molecular beacon分了这样，非特异扩增产物便无荧光信号，但当有物异扩增产物时，即可与Molecular beacon进行分了内杂交，产生荧光信号既解决了非特异问题，又保留了响应快的特点。但仍存在杂交时，探针不能完全与模板匹
实时荧光定量PCR仪技术参数
实时荧光定量PCR仪技术参数 主要用途： 用于基因表达分析研究，对转基因植物的评价和目的基因的定量分析，进行SNP单核苷酸多态性和突变位点的分析检测。 1.工作条件 1.1电源：AC 200-240 V，50－60HZ 1.2温度：15－32℃ 1.3湿度：20-80%(32℃时) 2.主要技术参数 *2.1加热方式：采用半导体加热方式，并结合银质散热模块 *2.2最大升温速度：≥4.8 ℃/s 2.3最大降温速度: 2. 5℃/s(升降温速率连续可调) *2.4控温误差:≤0.1 ℃ *2.5温度均一性:±0.1 ℃ * 2.6扩增速度:35循环反应:96孔检测≤60分钟；384孔≤40分钟 *2.7孔间检测的重复性:CV≤0.15% (50nmol/l荧光浓度) 2.8样本容量：96孔板为10－100ul，384孔板为3－20ul *2.9光源：高强度白色固态光源（寿命不低于20000小时） 2.10激发波长：5通道 *2.11检测通道：6通道 *2.12光学检测系统：冷CCD *2.13灵敏度：可检测单拷贝基因
2.14动力学范围：1-1010个拷贝，10个数量级。 *2.15样品通量：96个样本/次，可自行更换模块，更换后无需校准。 2.16检测模式：至少支持以下各种模式：HybProbe杂交探针、SimplProbe单探针、Taqman 水解探针、荧光染料（SYBR Green I）2.17高分辨率熔解曲线HRM：支持，并提供不少于150篇文献目录2.18 颜色补偿功能：具备 2.19软件：具有定性定量（绝对定量、相对定量）、自动报告熔解温度、自动报告基因分型结果、高分辨率熔解曲线分析等功能，配套的运行和结果分析软件，能够针对观察到的扩增情况随时增加循环数目，实时动态监测，扩增和检测同时进行 *2.20校正：无需ROX染料校正 2.21试剂支持：开放平台，可使用国产或进口的各品牌试剂。 *2.22装机指标：区分1000拷贝和2000拷贝模板浓度的差异。 2.23维护：日常免维护，机器移动后无需校正光路系统。 2.24 扩展性：具备LIMS（实验室信息管理系统）接口，可以实现远程控制并可以结合自动装载微孔板的工作站。 *2.25 临床认证：提供有效期内的SFDA注册证 三．仪器配置： 3.1 96-wells主机一台，96孔模块一个 3.2 操作手册 3.3 软件安装光盘 3.4 控制单元：设备配套原装进口电脑一套
abi7500fast荧光定量pcr仪操作规程
ABI 7500 FAST荧光定量PCR仪简明操作规程 1.双击桌面图标，或从 Start >All Programs > Applied Biosystems > 7500 Software > 7500 开启软件。进入主界面 后选择Advanced Setup 。 2.默认进入 Setup 下的Experiment Properties 界面 2.1输入实验名称（Experiment Name） 2.2确认仪器型号 2.3在实验类型中，选择 Quantitation-Comparative CT (△△CT) 2.4选择试剂种类 2.5确认运行模式 3.进入 Setup 下的Plate Setup 界面，编辑基因（Target）及样 本（Sample）； 3.1在“define targets and samples”界面中设置基因 3.2在“assign targets and samples”中进行样品板的排布。 4.在“Select relative quantitation setting”中设置内参基因 及对照样本。 5.进入 Run Method 界面，设定反应条件及反应体积。 6.点击“save”按钮，文件储存成 Experiment Document Single Files （*.eds）格式，然后在 Run 界面按下按钮，反应即开始进行。
7.实验结束后，点击界面右上角的 Analyze 按钮，软件将会显示 实验结果： 7.1在扩增图中（见上图），可通过更改Plot Settings 来改变扩 增图的显示方式。如果想查看阈值线或基线，请将Threshold 及Baseline 打勾。 7.2查看相对表达量结果时，利用Plot Settings 选项，可以以不 同方式显示相对表达量的结果。 7.3对于 SYBR Green 法实验，可以在Melt Curve 界面中查看熔 解曲线。 7.4检测 QC Summary 结果，可以快速查看实验中是否有反应孔存 在异常情况。黄色三角形中的数字1 代表有一种异常情况，2 代表有两种异常情况，以次类推。详细信息及解决方案可以在Flag Details 中看到。 8. 分析之后的结果，可以利用菜单中的File>Export 功能，导出 Excel 格式的结果。若想存储图片结果，可直接在图片上单击鼠标右键，选择Save as，存成JPEG格式的图片。 使用注意事项 1.本设备必须使用规格为100 uL的八连管或者96孔反应板； 2.加样操作时请戴手套，保持八连管或者96孔反应板盖部清洁， 以免影响荧光读取；
7300荧光定量PCR仪标准操作规程
一、仪器操作 1、开计算机开主机电源双击ABI Prism 7300 SDS 软件。 2、在New Document Wizard 窗口中选择Assay 等 3、设定完成后按下Next ，选择Detector 按下Add 将Detector 加入Plate Document 按下Next。如要设定新Detector 则按下New Detector 选择新Detector。 4、选定Plate Document 中放样品的Wells后选定适当的Detector，击Detector 列中的Use 框从Task 栏中选择种类：Unknown、 NTC 或Standard。 5、输入样品名称可从View 列中选择Well Ins pector。 同名称者，软件即视为重复样品，会自动计算平均值及标准偏差。 6、若此Plate Document 常用，可将其存成Template。从File menu 下选Save As，输入文件名并存成SDS Templates (*.sdt) 格式。 7、若不存成Template，则先存下此Plate Document从File 下选Save As，并将档案种类存 成SDS Document (*.sds)格式。 8、检查PCR 条件，将样品盘放入机器中，并准备收集data。 在Plate Document 上击Instrument，进入PCR 设定窗口。 若要更改温度及时间，可击Add Cycle, Add Hold 或Add Step； 若为S YBR 的反应，则击Add Dissociation； 收集讯号可在Results 下击Amplification Plot，收集过程中可同步观察Amplification Plot。 9、再存一次后，按下Start 即开始进行PCR 及讯号之收集。 10、结果分析：收集data，检视Amplification Plot或其它data。 若data 已分析完成，在Amplification Plot 中Threshold 为綠色线；红色线表示未分析。 输出或列印结果：若data有问题时，可检视S pectra或Component data，设定baseline 及threshold，重新分析。 二、注意事项: 1. 在ABI 7300 上可使用96 well plate 或单一的PCR tube，当使用单管的tube 时可直接上机或配合tray/retainer 一起使用。 2. 管子及盖子上请勿标记任何记号，以免墨色脱落，沾到PCR block 上增加背景值。 3. 定期以棉花棒沾超纯水清洁PCR block 以增加侦测灵敏度。 4. 为确保机器侦测的灵敏度，每月重新run 一次background plate