植物酸性磷酸酶(ACP)提取液

植物酸性磷酸酶(ACP)提取液
植物酸性磷酸酶(ACP)提取液

植物酸性磷酸酶(ACP)提取液

简介:

酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)分布极广泛,遍布各种组织,主要存在于细胞的溶酶体内,所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内,各种动物中的酸性磷酸酶各有不同,酸性磷酸酶的适宜pH 为4.5~5.5。酸性磷酸酶是一个蛋白家族,哺乳动物中其分子量从18kD 到100kD 不等,该酶分为两类,一类为酒石酸盐敏感型,一类为氟离子敏感型。溶酶体中的酸性磷酸酶为酒石酸盐敏感型,而红细胞和巨噬细胞中的酸性磷酸酶为氟离子敏感型。

Leagene 植物酸性磷酸酶(ACP)提取液主要用于裂解植物组织,提取植物中的酸性磷酸酶。该试剂仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。组成:

自备材料:

1、蒸馏水

2、离心管或试管

3、匀浆器或研钵

4、低温离心机

操作步骤(仅供参考):

1、取适量的植物组织称重,清洗干净,切碎。

2、加入植物酸性磷酸酶(ACP)提取液,充分捣碎或研磨。

3、静置,用纱布或滤纸过滤。

4、离心,留取上清液并测量体积,冻存,用于酸性磷酸酶的检测或其他用途。计算:

组织或植物粗酶液获得率(ml)=上清液体积(ml)/组织或植物质量×100%

注意事项:

1、待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂,同时需避免反复冻融。

编号

名称CS0361

CS0361Storage 植物酸性磷酸酶(ACP)提取液

100ml 500ml RT 使用说明书1份

2、所测样本的值高于标准曲线的上限,应用植物酸性磷酸酶(ACP)提取液稀释样品后重新

测定。

3、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期:12个月有效。

相关:

编号名称

CC0007磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)

CS0001ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)

DC0032Masson三色染色液

DF0135多聚甲醛溶液(4%PFA)

NR0001DEPC处理水(0.1%)

PS0013RIPA裂解液(强)

TC1167尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)

组织及血液酸性磷酸酶(ACP)活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法

组织及血液酸性磷酸酶(ACP)活性检测试剂盒说明书可见分光光度法 注意:正式测定前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 货号:BC2130 规格:50T/24S 产品内容: 提取液:液体30mL×1瓶,4℃保存。 试剂一:液体10mL×1瓶,4℃避光保存。 试剂二:液体10mL×1瓶,4℃避光保存。 试剂三:液体30mL×1瓶,4℃避光保存,变成蓝绿色不能使用。 标准品:液体1mL×1支,2μmol/mL酚标准液,4℃保存。临用前蒸馏水稀释至0.5μmol/mL备用。产品说明: ACP在酸性条件下催化磷酸单酯水解称无机磷酸,常见于巨噬细胞的溶酶体内。ACP常用于前列腺癌的辅助诊断。 在酸性环境中,ACP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚,苯酚与4-氨基安替比林和铁氰化钾反应生成红色亚醌衍生物,在510nm有特征光吸收;通过测定510nm吸光度增加速率,来计算ACP活性。 试验中所需的仪器和试剂: 可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、冰和蒸馏水。 操作步骤: 一、粗酶液提取: 称取约0.1g组织,加提取液1mL充分研磨,4℃、10000rpm离心10min,取上清液待测。血液可直接用于测定,如果浓度高的话,用提取液稀释。 二、测定步骤: 1.分光光度计预热30min以上,调节波长到510nm,蒸馏水调零。 2.试剂一置于37℃水浴中预热30min以上。

试剂名称(μL)测定管对照管空白管标准管蒸馏水--100- 0.5μmol/mL标准品---100 上清液100--- 试剂一200200200200 试剂二200200200200 混匀后置于37℃水浴中保温15min 试剂三600600600600 上清液-100--混匀后于510nm测定吸光度,分别记为A测定管、A对照管、A空白管、A标准管。 三、ACP活性计算: 1.按蛋白浓度计算 活性单位定义:37℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol酚为一个酶活力单位。 ACP(U/mg prot)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样]÷(Cpr×V样)÷T =0.033×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr 2.按样本鲜重计算 活性单位定义:37℃中每克组织每分钟催化产生1μmol酚为一个酶活力单位。 ACP(U/g鲜重)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样]÷(W÷V提取×V样)÷T =0.033×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W 3.按血液体积计算 活性单位定义:37℃中每毫升血液每分钟催化产生1μmol酚为一个酶活力单位。 ACP(U/mL)=[C标准品×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)×V样]÷V样÷T =0.033×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管) C标准品:标准品浓度,0.5μmol/mL;V样:加入反应体系中上清液体积,0.1mL; T:反应时间,15min;V提取:加入提取液体积,1mL; W:样本鲜重,g。

植物根系酸性磷酸酶活性测定

植物根系酸性磷酸酶活性测定 1原理 该方法以对硝基苯磷酸二钠(即P-NPP)为底物,该底物在土壤酸性磷酸酶的催化 下水解生成黄色的对硝基苯酚(即p-NP),该黄色溶液在410nm处有最大吸收光值,根_ 据对硝基苯酚的生成数量与黄色溶液的吸光度呈正比来进行定量分析,以此来反映土壤 酸性磷酸酶的活性。酶活性是以单位时间内单位重量鲜根或单株根系水解p-NPP生成的 对硝基苯酚(p-NP)的量来表示(⑷h-1 g-1鲜根或口 g -1/i株)。 2?测定方法 1)称取(1.2 ±.1) g鲜根,加入8mL 0.2mol/L醋酸钠缓冲液(pH 5.8),然后进行冰浴研磨,双层纱布过滤,12000 r/min离心15min,静置。 2)取上清液1mL于15mL离心管中,加入 2mL 0.05mol/L对硝基苯磷酸二钠(醋酸钠缓冲液配制),摇匀后加盖,于 37C水浴30min。 3)水浴后加入 2mL 0.5mol/L CaCI 2及2mL 2mol/L NaOH 以终止反应,摇匀。 4) 2500r/min离心5min,取上清液于15mL离心管中,4000r/min下再离心5min。 5)取上清液在410nm波长比色,并记录吸光值 A410。 3?标准曲线的制作 1 )取13支15mL离心管,按顺序编号,并按表 1加入试剂 表1对硝基苯酚标准曲线配制表

2)混匀后,在2500r/min下离心5min ,再在4000r/min下离心5min以0号作为对照, 在410nm波长下测光吸收值,并记录光吸收值A410。 3)以吸光值为横坐标、对硝基苯酚的含量为纵坐标计算直线回归方程y=a+bx及相关系数R,即对硝基苯酚含量n( mol) a b A410。 4?计算方法 根系酸性磷酸酶活性是以单位时间内单位重量鲜根或单株根系水解p-NPP生成的对 硝基苯酚(p-NP)的量来表示(° h-1 g-1鲜根或口 g心株)。 即根系酸性磷酸酶活性(g h 1 g 1鲜根)n M 稀释倍数/(W t) 式中:n—标准曲线上查得样品中对硝基苯酚的浓度(卩mo); M —对硝基苯酚的相对分子质量(139.11g/mol); t —反应时间(h); W—样品鲜重(g)。 稀释倍数一8 a.醋酸盐缓冲液(pH=5.0 ) A: 0.2mol/L 醋酸溶液(11.5mL,稀释至1000mL ) B: 0.2mol/L 醋酸钠溶液(16.4g C z H s O z Na 或27.2g C z H s O z Na - 3出0 定容至1000mL ) 14.8ml A + 35.2ml B 混合即得

实验三+酸性磷酸酶的组织器官定位

实验三植物体内酸性磷酸酶的组织定位 一、实验目的 1、掌握植物体内酸性磷酸酶的金属盐―铅法染色进行组织定位的原理与技术。 2、掌握制作徒手切片的技术。 二、实验原理 酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)广泛分布于机体各种组织细胞内,主要存在于细胞的溶酶体内,常作为溶酶体的标志酶,此外,还存在于内质网和胞质内。在核酸和蛋白质代谢活动增加时,酸性磷酸酶活性增强。酸性磷酸酶还参与酯类代谢。因此,它在疾病、免疫反应和细胞损伤与修复过程中具有一定生物学意义。 酸性磷酸酶金属盐―铅法,其基本原理是在酸性环境下,底物β―甘油磷酸钠被酸性磷酸酶水解,释放出磷酸,磷酸遇铅离子则生成磷酸铅沉淀,最后与硫化铵作用形成棕褐色硫化铅沉淀。 三、实验材料、试剂和仪器 1、实验材料:甘蓝叶片与小白菜叶片。 2、实验试剂:丙酮、β―甘油磷酸钠溶液、2%硫化铵等。 3、实验用品:刀片、镊子、培养皿、托盘等。 四、实验步骤 1、甘蓝叶脉染色 (1)徒手切片的制作:在切片时,用左手的拇指与食指、中指夹住甘蓝叶脉,右手平稳地拿住刀片。然后,在材料的切面上均匀地滴上清水,以保持材料湿润。将刀口向内对着材料,并使刀片与材料切口基本上保持平行,自左前方向右后方均匀地拉切。当切到一定数量后,可在培养皿内挑选透明的薄片用于材料染色。 (2)将一部分材料薄片铺在载玻片上,滴加蒸馏水铺平材料,加入1滴冰的丙酮溶液,固定15min。固定完成后,用蒸馏水水洗,一边滴加蒸馏水,一边用吸水纸吸,反复2-3次。用滴管慢慢的将切片挑起来,放置在含有10ml的底物溶液中,37℃保温1h。将切片用蒸馏水水洗2~3次后,放置在含有2% 的硫化铵溶液中1-2min,蒸馏水水洗2-3次。将染色的切片盖上盖玻片,制作成临时玻片。显微镜下观察,拍照记录染色结果。 (3)将另一部分切片放置蒸馏水中加热用作空白对照。其余操作同上。 2、小白菜根系染色 (1)将小白菜的根系蒸馏水洗净后,用刀切开,一半用于组织染色,另一半放在蒸馏水中加热煮死,作为空白对照。 (2)将根系放置在含有冰的丙酮溶液中固定15min,用蒸馏水水洗2~3次。固定完

2.1土壤酸性磷酸酶活性测定

土壤酸性磷酸酶活性测定 土壤有机磷转化受多种因子制约,尤其是磷酸酶的参与,可加速有机磷的脱磷速度。在pH 4-9 的土壤中均有磷酸酶。积累的磷酸酶对土壤磷素的有效性具有重要作用。研究证明,磷酸酶与土壤碳、氮含量呈正相关,与有效磷含量及pH也有关。磷酸酶活性是评价土壤磷素生物转化方向的强度的指标。 磷酸苯二钠比色法 1.试剂配制 (1)0.5%磷酸苯二钠(用缓冲液配制)。 (2)pH5醋酸盐缓冲液。 a.醋酸盐缓冲液(pH=5.0) A:0.2mol/L 醋酸溶液(11.5mL,稀释至1000mL) B:0.2mol/L 醋酸钠溶液(16.4g C2H3O2Na 或27.2g C2H3O2Na·3H2O 定容至1000mL) 14.8ml A + 35.2ml B混合即得 (3)氯代二溴对苯醌亚胺试剂:取0.125g 2,6-二溴苯醌氯酰亚胺,用10ml 96%乙醇溶解,贮于棕色瓶中,存放在冰箱里。保存的黄色溶液未变褐色之前均可使用。 (4)酚的标准溶液: 酚原液——取1g重蒸酚溶于蒸馏水中,稀释至1L,贮于棕色瓶中。 酚工作液——取10ml 酚原液稀释至1L(每毫升含0.01mg酚)。 (5)甲苯。 (6)0.3%硫酸铝溶液。 标准曲线绘制:取1、3、5、7、9、11、13ml 酚工作液,置于50ml容量瓶中,每瓶加入5ml 缓冲液和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂,显色后稀释至刻度,30min后比色测定。以吸光度为横坐标,浓度为纵坐标(mg)绘成标准曲线。 2.操作步骤 称5g风干土置于200ml三角瓶中,加2.5ml 甲苯,轻摇15min后,加入20ml 0.5%磷酸苯二钠(用醋酸盐缓冲液配制),仔细摇匀后放入恒温箱,在37℃下培养24h后于培养液中加100ml 0.3%硫酸铝溶液并过滤。 吸取3ml 滤液于50ml 容量瓶中,然后按绘制标准曲线所述方法显色。用硼酸缓冲液时,呈现蓝色,在分光光度计上于660nm 处比色。 3.结果计算 磷酸酶活性,以24h后1g土壤中释出的酚的毫克数表示。 酚(mg)=a*8 式中a—从标准曲线上查得的酚毫克数 8—换算成1g 土的系数

土壤酸性磷酸酶活性测定

2.1土壤酸性磷酸酶活性测定 土壤酸性磷酸酶活性测定 土壤有机磷转化受多种因子制约,尤其是磷酸酶的参与,可加速有机磷的脱磷速度。在pH 4-9 的土壤中均有磷酸酶。积累的磷酸酶对土壤磷素的有效性具有重要作用。研究证明,磷酸酶与土壤碳、氮含量呈正相关,与有效磷含量及pH也有关。磷酸酶活性是评价土壤磷素生物转化方向的强度的指标。 磷酸苯二钠比色法 1.试剂配制 (1)0.5%磷酸苯二钠(用缓冲液配制)。 (2)pH5醋酸盐缓冲液。 a.醋酸盐缓冲液(pH=5.0) A:0.2mol/L 醋酸溶液(11.5mL,稀释至1000mL) B:0.2mol/L 醋酸钠溶液(16.4g C2H3O2Na 或27.2g C2H3O2Na·3H2O 定容至1000mL) 14.8ml A + 35.2ml B混合即得 (3)氯代二溴对苯醌亚胺试剂:取0.125g 2,6-二溴苯醌氯酰亚胺,用10ml 96%乙醇溶解,贮于棕色瓶中,存放在冰箱里。保存的黄色溶液未变褐色之前均可使用。 (4)酚的标准溶液: 酚原液——取1g重蒸酚溶于蒸馏水中,稀释至1L,贮于棕色瓶中。 酚工作液——取10ml 酚原液稀释至1L(每毫升含0.01mg酚)。 (5)甲苯。 (6)0.3%硫酸铝溶液。 标准曲线绘制:取1、3、5、7、9、11、13ml 酚工作液,置于50ml容量瓶中,每瓶加入5ml 缓冲液和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂,显色后稀释至刻度,30min后比色测定。以吸光度为横坐标,浓度为纵坐标(mg)绘成标准曲线。 2.操作步骤 称5g风干土置于200ml三角瓶中,加2.5ml 甲苯,轻摇15min后,加入20ml 0.5%磷酸苯二钠(用醋酸盐缓冲液配制),仔细摇匀后放入恒温箱,在37℃下培养24h后于培养液中加100ml 0.3%硫酸铝溶液并过滤。 吸取3ml 滤液于50ml 容量瓶中,然后按绘制标准曲线所述方法显色。用硼酸缓冲液时,呈现蓝色,在分光光度计上于660nm 处比色。 3.结果计算 磷酸酶活性,以24h后1g土壤中释出的酚的毫克数表示。 酚(mg)=a*8 式中a—从标准曲线上查得的酚毫克数 8—换算成1g 土的系数 1 / 1

酸性磷酸酶活性测定方法

实验九酸性磷酸(酯)酶活性测定1.目的要求 掌握酸性磷酸(酯)酶活性测定的原理和方法。 2.方法原理 酸性磷酸(酯)酶是一种存在于生物体内水解有机磷酸酯键的酶。以对硝基酚磷酸钠作为底物,在酸性磷酸酯酶的作用下,在碱性条件下水解生成黄色的对硝基酚,可用分光光度计进行比色测定。它们在各类种子中普遍存在,且含量较多,在萌发前期,随着种子的萌发进程活性增加,通常酸性磷酸酶活性与种子活力呈正比。 3.主要实验仪器及材料 干种子或吸胀种子、电子天平、分光光度计、恒温水浴箱、带塞刻度试管、小烧杯、研钵、塑料管、剪刀。 4.掌握要点 掌握常用的测定酸性磷酸(酯)酶活性的方法——对硝基酚磷酸钠法。 5.实验内容 (1)酶液提取。称取1g样品,用5mL研磨缓冲液在研钵中冰浴研磨成浆,再用5mL 研磨缓冲液冲洗,转移至离心管中,在20000rpm下离心10min。吸出上清液,即为酶粗提液。可放在冰箱中储存备用。 (2)活力测定。取酶液0.1—1mL(视酶含量多少而定),加水至1mL,然后加入缓冲液1mL和对硝基酚磷酸钠溶液0.1mL。空白对照用1mL研磨缓冲液代替酶制剂。充分混匀后,放在30℃恒温箱中保温10min,时而摇动。10min后,加入1m0.5mol/LNaOH溶液,充分混合,终止反应,并使对硝基酚呈黄色。在400nm波长下测吸光度A。 (3)计算酶活性,以每毫克种子每分钟水解底物的nmol数表示。 酶活性nmol/min.mg= ) ( ) ( 试样的 g W V V A ? ? ? min 10 1 1.3 019 .0 式中0.019为pH=14时,对硝基酚的μmol吸光系数,即对硝基酚的浓度为1mol/L时,其A=0.019; 3.1为0.0031×1000,反应混合液的体积为3.1,将μmol化为nmol乘上1000; V为酶制剂总体积; V1为每次用酶体积。

从酶的专一性看植酸酶与酸性磷酸酶的关系

从酶的专一性看植酸酶与酸性磷酸酶的关系 摘要:迄今为止的资料表明,大多数植酸酶与酸性磷酸酶的关系密切。通过测定Km,即可判断只有以植酸(盐)为最适底物的酶(包括酸性磷酸酶)才是严格意义上的植酸酶。 关键词:酶的专一性;植酸酶;酸性磷酸酶 Discussion on relationship between phytase and acid phosphatase by specificity of enzyme Abstracts:It is proved that the close relationship between phytase and acid phosphatase. By detection ofKm of the enzymes, the phytase can be distinguished strictly from the enzymes ( including acid phosphatase) using phytic acid or salts ofphytic acid as the op- timum substrate only. Keywords:specificity of enzyme; phytase; acid phosphatase 迄今为止,除了从极个别生物中发现了中性植酸 酶[1-2]和碱性植酸酶[3]外,因生产需要而发现的其余 的植酸酶均为在酸性条件下起作用的植酸酶,而且主 要是微生物来源的植酸酶[3-4]。 目前,世界公认的植酸酶主要是3-植酸酶(EC. 3111318)和6-植酸酶(EC. 31113126)。真菌和大多数 细菌的植酸酶属于3-植酸酶,而大肠杆菌的属于6-植 酸酶。这两种植酸酶降解六磷酸肌醇的方式不同[5]。 从目前的情况看,微生物来源的植酸酶的最适pH值 范围较宽,一般在pH值215~610之间[3]。随着研究 的深入,不同的学者发现,有的植酸酶具有酸性磷酸酶 活性,有的酸性磷酸酶具有植酸酶活性,有的则说植酸 酶是一类特殊的酸性磷酸酶[6]。但是前人已经较广泛 地研究了酸性磷酸酶,它在酶表中的位置编号是 EC3111312[7],我们可以看出它显然与植酸酶是有所不 同的!那么,在这些意见中哪个更加妥当?在这里如 何准确判断一种酶是叫植酸酶还是酸性磷酸酶为宜 呢? 1测定Km可以帮助判断一个酶是植酸酶还是酸性 磷酸酶 生化基础理论告诉我们[8],酶的催化作用显出高 度专一性。当酶只能催化一种底物发生一定的反应 时,显出绝对专一性,而当酶催化某一类物质发生一定 的反应时,则显出相对专一性。在这里酶对其底物及 所催化的反应性质或类型都是有所要求的。当酶有若 干种物质可作为其底物时,酶对它们的亲和力一般是

酸性磷酸酶的临床意义

酸性磷酸酶的临床意义 酸性磷酸酶是一种广泛存在于人体组织内的一种物质,主要存在于细胞和体液里面,血液里面的酸性磷酸酶,主要来源于前列腺,来源于血小板,白细胞等,其中在前列腺里面,含量是最丰富的。在日常的医疗检查当中,通过对酸性磷酸酶的检查,能够取得前列腺癌的辅助诊断的作用,另外对于血液病、骨类疾病也有一定的诊断的作用和效果。 ★临床意义 正常人血清中的酸性磷酸酶来源于骨、肝、肾、脾、胰等组织,故不论男女老幼,其含量大致相同。而前列腺患者以及出现肝炎、甲状旁腺机能亢进、红血球病变等疾病时,血清中酸性磷酸酶的活力都会升高。为了鉴别血清中增加的酸性磷酸酶是来自前列腺还是来自其他器官,必须加以区别。为此可进一步采用某些抑制剂进行选择性抑制作用。例如:乙醇和酒石酸对前列腺酸性磷酸酶有显着的抑制作用,而对红血球酸性磷酸酶的抑制作用较弱。

ACP测定主要用于前列腺癌的辅助诊断。 (1)前列腺癌:尤其是转移癌ACP明显升高。PAP对前列腺癌的诊断较ACP敏感,二者对晚期前列腺的诊断、疗效观察及预后监测价值更大。 (2)血液病:粒细胞白血病、高雪病、尼曼匹克病、原发性血小板减少性紫癜、溶血性贫血等ACP活性亦增高。 (3)非恶性前列腺疾病:前列腺炎、前列腺肥大、前列腺梗死等ACP活性也增高。 (4)骨疾病:变形性骨炎、成骨不全、软骨病、骨肉瘤、多发性骨髓瘤及某些非前列腺恶性肿瘤的骨转移,ACP活性也可升高。 (5)其他:甲状腺功能亢进,急、慢性肾炎、尿潴留等ACP

活性可增高。 正常男性血清中酸性磷酸酶1/3~1/2来自于前列腺,女性血清中的酸性磷酸酶主要来自肝脏、红细胞和血小板。酸性磷酸酶有20种同工酶,临床测定的同工酶大致为两大类:一类是前列腺酸性磷酸酶;另一类是非前列腺酸性磷酸酶。酸性磷酸酶测定主要用于前列腺癌的辅助诊断。

酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒(Folin-酚比色法)

酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒(Folin-酚比色法) 简介: 酸性磷酸酶(acid phosphatase ,ACP)分布极广泛,遍布各种组织,主要存在于细胞的溶酶体内,所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内,各种动物中的酸性磷酸酶各有不同,酸性磷酸酶的适宜pH 为4.5~5.5。酸性磷酸酶是一个蛋白家族。 Leagen 酸性磷酸酶(ACP)检测试剂盒(Folin-酚比色法)(Acid Phosphatase Colorimetric Assay Kit)检测原理是以磷酸苯二钠作为底物,在酶促反应的最适条件下采用每隔一定时间测定产物生成量的方法,通过Folin-酚(又称福林酚)显色,于分光光度计680nm 处检测吸光度,以酶促反应时间为横坐标以产物生成量为纵坐标绘制进程曲线。曲线的起始部分在某一段时间内呈直线。该试剂盒主要用于组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的酸性磷酸酯酶活性。该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。 组成: 自备材料: 1、 蒸馏水 2、 离心管或试管 3、 水浴锅 4、 比色杯 5、 分光光度计 操作步骤(仅供参考): 1、 准备样品: ①血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定, 编号 名称 TE0029 50T Storage 试剂(A): Phenol(10mM) 1ml 4℃ 避光 试剂(B): 样品稀释液 100ml RT 试剂(C): ACP assay buffer 15ml -20℃ 避光 试剂(D): ACP 终止液 100ml RT 试剂(E): Folin-酚显色液 15ml 4℃ 避光 使用说明书 1份

土壤酸性磷酸酶(Solid-acid phosphatase,S-ACP)活性测定试剂盒

货号:MS2900 规格:100管/96样土壤酸性磷酸酶(Solid-acid phosphatase,S-ACP)活性测定试剂盒 微量法 注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义: 土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷矿化的酶,其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性,是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响,根据最适pH范围,通常分为酸性、中性和碱性三种类型。 测定原理: 酸性环境中,S-ACP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠,通过测定酚的生成量即可计算出S-ACP活性。 自备实验用品及仪器: 可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水、乙醇和甲苯。 试剂组成和配制: 试剂一:液体×1瓶,4℃避光保存。 试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。用前加100mL蒸馏水充分溶解。 试剂三:液体×1瓶,4℃保存。 试剂四:粉剂×1支,4℃避光保存。临用前加576 μL无水乙醇(自备),24 μL蒸馏水充分溶解。(变褐色后不能再使用) 标准品:液体×1支,0.5μmol/mL苯酚标准液,4℃保存。 粗酶液提取: 称取风干混匀土壤约0.1g,加入50μL甲苯(自备),轻摇15min;加0.4 mL试剂一并且摇匀后,置于37℃恒温培养箱,开始计时,催化反应24h;到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀,以终止酶催化的反应。8000g,25℃离心10min,取上清液置于冰上待测。 测定步骤: 1. 分光光度计/酶标仪预热30 min以上,调节波长到660 nm,蒸馏水调零。 2. 空白管:取微量玻璃比色皿/酶标板,加入10μL蒸馏水,20μL试剂三,4μL试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水166μL,混匀后25℃静置30 min,于660 nm测定吸光度,记为A 空白管。 3. 标准管:取微量玻璃比色皿/酶标板,加入10μL标准液,20μL试剂三,4μL试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水166μL,混匀后25℃静置30 min,于660 nm测定吸光度,记为A 标准管。 4. 测定管:取微量玻璃比色皿/酶标板,加入10μL上清液,20μL试剂三,4μL试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水166μL,混匀后25℃静置30 min,于660 nm测定吸光度,记为A 测定管。 注意:空白管和标准管只需测定一次。 S-ACP活性计算公式: 第1页,共2页

药用植物学 第一章(植物的细胞)

药用植物学(重点) 药用植物:具有防治疾病、保健作用的植物。 药用植物学:交叉学科——植物学Botany与(中)药学利用植物学的基本原理和实验方法来研究和应用药用植物的一门科学。 生药学(重点) 生药:指来源于天然的、未经加工或只经简单加工的植物、动物和矿物类药材。从广义上说,生药包括一切来源于天然的中药材、草药、民族药和提制化学药物的原料药材,兼有生货原药之意。 生药学:研究生药的名称、来源、鉴定、活性成分、采制、加工、品质评价及开发利用的科学。 (拓展阅读) ①川药:川贝母、川牛膝、丹参。 ②广药:广防己、何首乌、鸡血藤、肉桂。 ③云药:三七、重楼、茯苓。 ④贵药:天麻、黄精、杜仲。 ⑤怀药:地黄、怀牛膝、山药、菊花。(四大怀药河南怀庆) ⑥浙药:浙贝母、白术、元胡、温郁金、玄参、杭白菊、延胡索、麦冬。(浙八味) 中药材生产质量管理规范》(GAP,Good Agriculture Practice) 第一章植物的细胞 本章重点 1 模式植物细胞的构造及其细胞器的功能 2细胞壁的层次及其所包含的结构 3细胞壁的特化种类及其鉴定方法 4质体的种类及其区别 5细胞后含物的种类及其鉴定方法 【第一节植物细胞的形态和基本结构】 模式细胞:将各种植物细胞的主要形态特征都集中在一个细胞里加以说明,这个细胞称模式细胞或典型的植物细胞。 显微结构:在显微镜下观察到的结构。计量单位: m(10-6m) 超微结构(亚显微结构):在电子显微镜下观察到的结构。计量单位:?(10-10m )

一、原生质体:是细胞内有生命物质的总称。包括细胞膜、细胞质、细胞器、细胞核几部分。细胞的一切代谢活动都在这里进行。 原生质:是组成原生质体的物质基础。最主要的成分是蛋白质和核酸。其物理性质为无色半透明、具有弹性、有折光性的半流动的亲水胶体。 一细胞质:原生质体的基本组成部分,半透明, 半流动的基质。 二细胞核:遗传物质储存和复制场所,细胞遗 传和细胞代谢的控制中心。 1、核膜(双层),膜上有核孔 2、核液,由蛋白质、RNA和多种酶组成 3、核仁,蛋白质和RNA组成,制造细胞内核 糖体亚单位的场所。 4、染色质,储存复制,传递遗传信息。不同植 物其数目、形状和大小各异,同一植物相对稳 定,可作为植物分类鉴定的重要依据之一。 三细胞器 1 质体:与糖类的合成和贮藏密切相关的细胞器,植物细胞特有。(叶绿体、有色体、白色体) ①白色体:不含色素的无色的质体,包括合成淀粉的造粉体、合成脂肪的造油体和合成储藏蛋白质的造蛋白体。主要存在于幼嫩器官中。积累代谢产物。 ②叶绿体:由叶绿体膜、类囊体和基质组成。叶绿体中,叶绿素占绝对优势,还含有少量的类胡萝卜素,主要分布在叶片(叶肉细胞)中。属于半自主性细胞器。是光合作用的场所。 ③有色体:主要含有黄色或橙色的类胡萝卜素,使许多植物的花、老叶、果实和根呈黄色、橙色或红色。 2 液泡:是植物特有的结构,一层液泡膜包围, 充满细胞液, 液泡占据成熟细胞的大部分体积。主要成分:水,还含有盐、糖、可溶性性质、晶体以及色素等。维持细胞的膨压;细胞代谢产物的贮藏场所。 3 线粒体:双层膜包被,内膜向腔折叠呈片状或搁板状突起(嵴)。半自主细胞器(可自主复制部分遗传物质,环状DNA)。有氧呼吸的场所,细胞的动力工厂。 4 内质网:细胞质中,由膜构成的网状管道系统,管道以各种形态延伸或扩展成为管状、泡状、囊状或片状结构。形成细胞中的膜系统。分为粗糙内质网(与蛋白质的合成有关)和光滑内质网(与糖元、类脂、激素的合成和分泌有关)。

抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)检测试剂盒(PNP比色法)

抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)检测试剂盒(PNP微板法) 简介: 酸酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)分布极广泛,遍布各种组织,主要存在于细胞的溶酶体内,所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内,各种动物中的酸性磷酸酶各有不同,酸性磷酸酶的适宜pH为4.5~5.5。存在于正常人肺泡巨噬细胞和白血病人脾脏的抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistnt acid phosphatase,TRAP)均在细胞滤泡中,并不是释放入血液,血液中的TRAP绝大多数来源于破骨细胞,因此可以通过测量血液中的TRAP了解破骨细胞的功能状态,几乎被认为是是机体破骨活性的唯一血液指标。TRAP一种糖基化的含金属蛋白酶,在破骨细胞(osteoclast)和破软骨细胞(chondroclast)中高表达,在活化的巨噬细胞和神经元中也有表达。 Leagene抗酒石酸酸性磷酸酶检测试剂盒(Tartrate Resistnt Acid Phosphatase Colorimetric Assay Kit)检测原理是利用Para-nitrophenyl phosphate(pNPP)为一种常用的磷酸酶显色底物,在酸性条件下,可在酸性磷酸酶的作用下生成p-nitrophenol。在碱性条件下p-nitrophenol呈黄色,产物黄色越深,说明酸性磷酸酶活性越高,反之则酶活性越低,通过分光光度比色法(酶标仪)测定吸光度,据此通过比色分析就可以计算出酸性磷酸酶活性水平。在适量的酒石酸存在的情况下进行酸性磷酸酶的活性检测,检测得到的酸性磷酸酶的活性就是抗酒石酸酸性磷酸酶的活性。该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的抗酒石酸酸性磷酸酯酶活性。该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。 组成: 自备材料: 1、96孔板 2、水浴锅或恒温箱 3、酶标仪编号 名称TE0043 120T Storage 试剂(A): ACP Assay buffer15ml 4℃ 试剂(B): pNPP 2支-20℃避光试剂(C): T artrate Solution 1ml 4℃ 试剂(D): p-nitrophenol(10mM) 0.1ml -20℃避光使用说明书1份

组织及血液酸性磷酸酶(ACP)活性测定试剂盒说明书

货号:MS2001 规格:100管/48样组织及血液酸性磷酸酶(ACP)活性测定试剂盒说明书 微量法 注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义: ACP在酸性条件下催化磷酸单酯水解称无机磷酸,常见于巨噬细胞的溶酶体内。ACP常用于前列腺癌的辅助诊断。 测定原理: 在酸性环境中,ACP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚,苯酚与4-氨基安替和铁氰化钾反应生成红色亚醌衍生物,在510nm有特征光吸收;通过测定510nm吸光度增加速率,来计算ACP活性。 自备实验用品及仪器: 可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器和蒸馏水。 试剂组成和配制: 试剂一:液体×1瓶,4℃保存。 试剂二:液体×1瓶,4℃避光保存。 试剂三:液体×1瓶,4℃避光保存。 试剂四:液体×1瓶,4℃避光保存,变成蓝绿色不能使用。 标准品:液体×1支,2μmol/mL酚标准液,4℃保存。 粗酶液提取: 1.组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加 入1mL试剂一)进行冰浴匀浆,4℃、8000g离心10min,取上清液待测。 2.细菌或细胞:按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建 议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。 3.血液可直接测定,或者适当稀释后测定。 测定方法: 1.分光光度计/酶标仪预热30 min,调节波长到510 nm,蒸馏水调零。 2. 试剂二置于37 o C水浴中预热30 min。 3. 空白管:取EP管,加入4μL蒸馏水,40μL试剂二,40μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四120μL,混匀后于510 nm测定吸光度,记为A空白管。 4. 标准管:取EP管,加入4μL标准品,40μL试剂二,40μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四120μL,混匀后于510nm测定吸光度,记为A标准管。 5. 对照管:取EP管,加入4μL上清液,40μL蒸馏水,40μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四120μL,混匀后于510nm测定吸光度,记为A测定管。 6. 测定管:取EP管,加入4μL上清液,40μL试剂二,40μL试剂三,混匀后置于37℃水浴中保温15min;加入试剂四120μL,混匀后于510nm测定吸光度,记为A测定管。 第1页,共2页

土壤酸性磷酸酶(Solid-acid phosphatase,S-ACP)活性测定试剂盒使用说明

土壤酸性磷酸酶活性测定试剂盒使用说明 微量法货号:BC0145 规格:100T/96S 产品内容: 试剂一:液体×1瓶,4℃避光保存。 试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。用前加100mL蒸馏水充分溶解。 试剂三:液体×1瓶,4℃保存。 试剂四:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前加576μL无水乙醇(自备),24μL蒸馏水充分溶解。(变褐色后不能再使用) 标准品:液体×1瓶,0.5μmol/mL苯酚标准液,4℃保存。 产品说明: 土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷矿化的酶,其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性,是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响,根据最适pH范围,通常分为酸性、中性和碱性三种类型。 酸性环境中,S-ACP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠,通过测定酚的生成量即可计算出S-ACP活性。 试验中所需的仪器和试剂: 紫外分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水、乙醇和甲苯。

操作步骤: 一、粗酶液提取: 称取风干混匀土壤约0.1g,加入0.05mL甲苯(自备),轻摇15min;加0.4mL试剂一并且摇匀后,置于37℃恒温培养箱,开始计时,催化反应24h;到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀,以终止酶催化的反应。10000rpm室温离心10min,取上清液置于冰上待测。 二、测定步骤: 1.分光光度计预热30min以上,调节波长到660nm,蒸馏水调零。 2.空白管:取微量玻璃比色皿/酶标板,加入10μL蒸馏水,20μL试剂三,4μL试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水166μL,混匀后室温静置30min,于660nm测定吸光度,记为A空白管。 3.标准管:取微量玻璃比色皿/酶标板,加入10μL标准液,20μL试剂三,4μL试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水166μL,混匀后室温静置30min,于660nm测定吸光度,记为A标准管。 4.测定管:取微量玻璃比色皿/酶标板,加入10μL上清液,20μL试剂三,4μL试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水166μL,混匀后室温静置30min,于660nm测定吸光度,记为A测定管。 注意:空白管和标准管只需要测定一次。 三、S-ACP活性计算: A.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下: 活性单位定义:37℃中每克土壤每天释放1nmol酚为1个酶活单位。 S-ACP(nmol/d/g)=[C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×V总÷W÷T

磷酸酶的测定方法

磷酸酶测定(磷酸苯二钠比色法): 土壤磷酸酶是植物根系与微生物的分泌产物。磷酸酶与土壤P素转化密切相关,是土壤P素肥力的指标。 1、试剂配制 (1)甲苯 (2)磷酸苯二钠:称取6.75g磷酸苯二钠(C6H5PO4Na2.2H2O)溶于水,并稀释至1L(1毫升含25mg酚) (3)缓冲液 (4)pH9.0硼酸盐缓冲液 缓冲溶液配制: (1)酸性磷酸酶:醋酸盐缓冲液(pH=5.0) A:0.2M醋酸钠溶液:16.4g 无水醋酸钠(C2H3O2Na)溶于1000mL蒸馏水中,或是27.2g三水醋酸钠(C2H3O2Na.3H2O)溶于1000mL水中。 B:0.2M醋酸溶液:11.55mL醋酸定容于1000mL 醋酸盐缓冲液(pH=5.0):7mLA+3mLB混合即得 (2)碱性磷酸酶:硼酸盐缓冲液(pH10.0) 硼砂-氢氧化钠缓冲液(pH10.0): A:硼砂液:19.072g硼砂溶于1000mL蒸馏水中 B:氢氧化钠溶液:4g氢氧化钠溶于1000mL蒸馏水中 50mLA+43mLB加水稀释至200mL,混匀即得 (3)硼酸盐缓冲液(pH9.0) A:0.05M硼砂溶液:19.07g硼砂(Na2B4O710H2O)溶于1000mL蒸馏水中 B:0.2M硼酸溶液:12.37g硼酸(H3BO3)溶于1000mL蒸馏水中 硼酸盐缓冲液(pH9.0):80mLA+20mLB混匀即得 (4)中性磷酸酶:柠檬酸盐缓冲液(pH7.0) A:0.1M柠檬酸溶液:21.01g柠檬酸. H2O(或是19.21gC6H8O7)溶于1000mL 蒸馏水中 B:0.2M磷酸氢二钠:35.61g磷酸氢二钠.2 H2O(53.63g磷酸氢二钠.7 H2O或是71.7g磷酸氢二钠.12 H2O)溶于1000mL蒸馏水中 柠檬酸盐缓冲液(pH7.0):3.63mLA+16.37mLB混匀即得 (5)2.5%铁氰化钾 (6)0.5%的4-氨基安替吡啉溶液 (7)酚原液:2克酚溶液蒸馏水定容致1升(2mg/mL),溶液在暗色中稳定。(8)酚工作液:取2.5mL原液稀释至100mL(0.05mg酚/mL) 2、操作步骤:

抗酒石酸酸性磷酸酶检测试剂盒(PNP比色法)

抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)检测试剂盒(PNP比色法)简介: 酸酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)分布极广泛,遍布各种组织,主要存在于细胞的溶酶体内,所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内,各种动物中的酸性磷酸酶各有不同,酸性磷酸酶适宜pH。存在于正常人肺泡巨噬细胞和白血病人脾脏的抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-resistnt acid phosphatase,TRAP)均在细胞滤泡中,并不是释放入血液,血液中的TRAP绝大多数来源于破骨细胞,因此可以通过测量血液中的TRAP了解破骨细胞的功能状态,几乎被认为是是机体破骨活性的唯一血液指标。TRAP一种糖基化的含金属蛋白酶,在破骨细胞(osteoclast)和破软骨细胞(chondroclast)中高表达,在活化的巨噬细胞和神经元中也有表达。 Leagene抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)检测试剂盒(PNP比色法)(Tartrate Resistnt Acid Phosphatase Colorimetric Assay Kit)检测原理是利用Para-nitrophenyl phosphate(pNPP)为一种常用的磷酸酶显色底物,在酸性条件下,可在酸性磷酸酶的作用下生成p-nitrophenol。在碱性条件下p-nitrophenol呈黄色,产物黄色越深,说明酸性磷酸酶活性越高,反之则酶活性越低,通过分光光度计测定吸光度,据此通过比色分析就可以计算出酸性磷酸酶活性水平。在适量的酒石酸存在的情况下进行酸性磷酸酶的活性检测,检测得到的酸性磷酸酶的活性就是抗酒石酸酸性磷酸酶的活性。该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清、尿液等样品中内源性的抗酒石酸酸性磷酸酯酶活性。该试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。 组成: 自备材料: 1、比色杯 2、水浴锅或恒温箱 3、分光光度计编号 名称TE0045 60T Storage 试剂(A): ACP Assay buffer50ml 4℃ 试剂(B): pNPP 2支-20℃避光试剂(C): T artrate Solution 2ml 4℃ 试剂(D): p-nitrophenol(10mM) 0.2ml -20℃避光试剂(E): Stopping Solution 80ml RT 使用说明书1份

植物酸性磷酸酶(ACP)提取液

植物酸性磷酸酶(ACP)提取液 简介: 酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)分布极广泛,遍布各种组织,主要存在于细胞的溶酶体内,所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内,各种动物中的酸性磷酸酶各有不同,酸性磷酸酶的适宜pH 为4.5~5.5。酸性磷酸酶是一个蛋白家族,哺乳动物中其分子量从18kD 到100kD 不等,该酶分为两类,一类为酒石酸盐敏感型,一类为氟离子敏感型。溶酶体中的酸性磷酸酶为酒石酸盐敏感型,而红细胞和巨噬细胞中的酸性磷酸酶为氟离子敏感型。 Leagene 植物酸性磷酸酶(ACP)提取液主要用于裂解植物组织,提取植物中的酸性磷酸酶。该试剂仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。组成: 自备材料: 1、蒸馏水 2、离心管或试管 3、匀浆器或研钵 4、低温离心机 操作步骤(仅供参考): 1、取适量的植物组织称重,清洗干净,切碎。 2、加入植物酸性磷酸酶(ACP)提取液,充分捣碎或研磨。 3、静置,用纱布或滤纸过滤。 4、离心,留取上清液并测量体积,冻存,用于酸性磷酸酶的检测或其他用途。计算: 组织或植物粗酶液获得率(ml)=上清液体积(ml)/组织或植物质量×100% 注意事项: 1、待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂,同时需避免反复冻融。 编号 名称CS0361 CS0361Storage 植物酸性磷酸酶(ACP)提取液 100ml 500ml RT 使用说明书1份

2、所测样本的值高于标准曲线的上限,应用植物酸性磷酸酶(ACP)提取液稀释样品后重新 测定。 3、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期:12个月有效。 相关: 编号名称 CC0007磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁) CS0001ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer) DC0032Masson三色染色液 DF0135多聚甲醛溶液(4%PFA) NR0001DEPC处理水(0.1%) PS0013RIPA裂解液(强) TC1167尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)

土壤酸性磷酸酶(soil acid phosphatase)活性测定试剂盒(分光光度法)使用说明

土壤酸性磷酸酶(soil acid phosphatase)活性测定试剂盒(分光光度法)使用说明 货号:BC0140 规格:50T/48S 产品简介: 土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷矿化的酶,其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性,是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响,根据最适pH范围,通常分为酸性、中性和碱性三种类型。酸性环境中,S-ACP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠,通过测定酚的生成量即可计算出S-ACP活性。 产品内容: 试剂一:液体×1瓶,4℃避光保存。 试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。用前加50mL蒸馏水充分溶解。 试剂三:液体×1瓶,4℃保存。 试剂四:粉剂×1支,4℃避光保存。临用前加1152μL无水乙醇(自备),48μL蒸馏水充分溶解。(变褐色后不能再使用) 标准品:液体×1支,0.5μmol/mL苯酚标准液,4℃保存。 操作步骤: 一、粗酶液提取: 称取风干混匀土壤约0.1g,加入0.05mL甲苯(自备),轻摇15min;加0.4mL试剂一

并且摇匀后,置于37℃恒温培养箱,开始计时,催化反应24h;到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀,以终止酶催化的反应。8000rpm,25℃离心10min,取上清液置于冰上待测。 二、测定步骤: 1.分光光度计预热30min以上,调节波长到660nm,蒸馏水调零。 2.空白管:取1mL玻璃比色皿,加入50μL蒸馏水,100μL试剂三,20μL 试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水830μL,混匀后室温静置30min,于660nm 测定吸光度,记为A空白管。 3.标准管:取1mL玻璃比色皿,加入50μL标准液,100μL试剂三,20μL 试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水830μL,混匀后室温静置30min,于660nm 测定吸光度,记为A标准管。 4.测定管:取1mL玻璃比色皿,加入50μL上清液,100μL试剂三,20μL 试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水830μL,混匀后室温静置30min,于660nm 测定吸光度,记为A测定管。 注意:空白管和标准管只需测定一次。 S-ACP活性计算: 活性单位定义:37℃中每克土壤每天释放1nmol酚为1个酶活单位。 S-ACP(nmol/d/g)=[C标准液×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]×V总÷W÷T=725×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)÷W C标准液:0.5μmol/mL;V总:催化体系总体积,1.45mL;W:土壤样品质量,g;T:催化反应时间,24h=1d。

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