酸性染料比色法测定蒙药合日呼_5汤中总生物碱的含量
酸性染料比色法测定蒙药合日呼—5汤中总生物碱的含量
内蒙古蒙医学院(028041) 白玉霞
提 要 采用酸性—溴麝香草酚蓝比色法测定了蒙药合日呼—5汤中总生物碱的含量。方法简单,结果稳定,重现性好;结果平均回收率为100.70%,RSD%=0.99。
关键词 合日呼—5汤 苦参生物碱 比色法 含量测定
合日呼—5汤(忠伦—5汤)由苦参、栀子、诃子、川楝子、地格达等5味药组成。具有清热、燥“协日乌素”、止痛,用于游痛症、新久热、关节炎〔1〕,疗效良好。苦参是合日呼—5汤的主要组成之一,其主要有效成分为苦参碱等生物碱。故以苦参碱为指标,采用酸性染料比色法测定了总生物碱的含量。
1 材料与仪器
1.1 材料 苦参、栀子、诃子、地格达、川楝子购自内蒙古通辽市药材站。经鉴定苦参为豆科植物苦参Sophor a flavescens A it.的干燥根;栀子为茜草科植物栀子G ardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果实;诃子为使君子科植物诃子T erm inalia chebula Retz.的干燥成熟果实;川楝子为楝科植物川楝M elia to osendan sieb.et zucc.的干燥成熟果实;地格达为堇菜科植物紫花地丁V io la yedoensis M akino的干燥全草;以上药材分别粉碎,过40目筛,备用。合日呼—5汤诸样品,内蒙古蒙医学院附属医院蒙药制剂室提供,(批号为950121);哲里木盟蒙医研究所蒙药制剂室提供,(批号为951030);自拟制剂,照文献〔1〕处方及方法配制。空白对照品制剂,照文献〔1〕处方比例及方法配制缺苦参空白对照制剂。苦参碱,由中国药品生物制品检定所提供,(批号为805—9001)。1.2 试剂 苦参碱标准溶液,准确称取10.0mg苦参碱对照品,置10m l容量瓶中,用无水乙醇溶解并稀释至刻度(1mg/ml);缓冲溶液(PH7.6),取N aO H 溶液(0.1mo l/L),420ml和磷酸二氢钠溶液(0. 1mo l/L)500ml,再加双蒸水稀释至1000ml;0. 0002mol/L溴麝香草酚蓝PH7.6缓冲溶液;精密称取0.125g溴麝香草酚蓝,加PH7.6缓冲溶液1000ml使溶解,即得。
1.3 仪器7230分光光度计,上海分析仪器厂; T G328B型电光分析天平,福州天平仪器厂。2 方法及结果
2.1 供试液的制备 精密称取成药,自拟制剂、空白对照品各1.0000g,分别置50ml磨口三角瓶中,加1.0ml氨水搅拌均匀,放置30min,各加20ml氯仿过夜,过滤,提取3次,药渣用氯仿洗至无生物碱反应为止。滤液合并浓缩,定容于25ml容量瓶中,即得。
2.2 标准曲线的制备〔2〕精密吸取苦参碱标准溶液0.0,10,20,30,40,50ul,分别置25m l具塞试管中。挥干溶剂,精密加入0.0002mo l/L溴麝香草酚蓝P H7. 6缓冲溶液6.0ml,氯仿6.0ml,用力振摇1min,倾入分液漏斗中,放置2h,取氯仿层,以0号为空白对照,在7230分光光度计上,用1cm比色皿于415nm处测定吸收度。计算求得其回归方程为:C=0.124+ 17.592A, =0.9994。
2.3 背景干扰的考察 精密吸取空白对照品供试液80ul,置25ml具塞试管中,挥干溶剂,照标准曲线制备,自“0.0002mo l/L溴麝香草酚蓝P H7.6缓冲溶液6ml”起,依法操作,测定吸收度。结果A=0.007。
2.4 加样回收试验 精密称取成药(950120)0. 8000g×3份,分别加2.1mg,2.1mg,2.15mg苦参碱对照品,置50ml磨口三角瓶中,照供试液的制备方法操作,制备供试液。精密吸取供试液各80ul,按标准曲线项下方法测定含量,计算回收率。结果见表1。
表1 加样回收实验结果
编号加入量测得量回收率X±S RS D (mg)(mg)(%)(%)(%)
1 2.10 2.109100.40
2 2.10 2.09899.88100.69±0.9930.99
3 2.15 2.189101.80
2.5 样品含量测定 精密吸取样品供试液,各80ul,分别置25ml具塞试管中,挥干溶剂,照标准曲线项下操作,以试剂空白为对照,测定吸收度,计算含量,结果见表2。
48中国民族医药杂志 1998年4月(第4卷)第2期
表2 样品中苦参生物碱的含量测定结果
样品编号含量(%)X±S(%)RSD%
1 1.09
95012122 1.09 1.10±0.010.91
3 1.11
1 1.13
9510302 1.11 1.12±0.010.90
3 1.13
1 1.25
9605152 1.23 1.24±0.010.81
3 1.23
3 讨 论
采用酸性—溴麝香草酚蓝比色法测定蒙药合日呼—5汤中苦参碱的含量,灵敏度较高,结果准确、稳定、重现性好,操作简便,便于推广。为完善该制剂的质量标准提供了科学依据,也可供其它含苦参制剂含量测定时参考。
该方中川楝子含有少量生物碱,但背景干扰考察结果表明,干扰甚微,在本实验条件下测定苦参生物碱含量无明显影响。
测定结果表明,合日呼—5汤总生物碱含量均在1.10%以上,平均回收率为100.70%,RSD%=0. 99。
参考文献
1 内蒙古自治区卫生厅.内蒙古蒙成药标准(补充本),1988:202
2 章育中等.苦参及其制剂中生物碱的薄层分离和含量测定.药学学报,1981;16(4):283
1997年5月12日收稿
蒙药阿木日—8味汤在妇产科腹部手术后的应用
内蒙古蒙医学院附属医院(028000) 张呼群
内蒙古科左中旗蒙医院(029300) 张桂英
内蒙古呼盟根河市金河医院(022359) 吴奇山
几年来,我们对妇产科腹部手术后的100例患者应用蒙药阿木日—8味汤促进胃肠蠕动机能恢复,疗效满意。总结如下:
1 临床资料
本组100例病人均为我院收治的住院病人。年龄21～29岁23例,30～44岁为36例,45岁以上41例。子宫全切除术44例,子宫次全切除术32例,卵巢肿瘤切除术18例,宫外孕输卵管切除术6例,子宫全切除术患者为多数。
2 方剂组成及用法
本方系传统蒙药组方的基础上根据蒙医药基础理论加减组成。处方:寒水石(煅)50g、土木香10g、诃子10g、山奈20g、大黄30g、碱面(制)20g、沙棘15g、皮硝(制)5g。将以上8味药研成细粉,术后第1天始煎汤或开水沏上送服,每天5～15g,每日2～3次,用3天。
3 疗效评定
满意:术后服药后肠鸣音良好,无肠胀气。基本满意:术后服用上药后肠鸣音恢复良好,但起初1～2天有轻度胀气,服至第3天后腹胀全消。不满意:术后服用上药3天后仍有肠胀气,肠鸣音恢复甚慢。
4 治疗结果
本组满意者82例(82%);基本满意11例(11%);不满意7例(7%)。有效率为93%。
5 讨 论
蒙药阿木日—8味汤在临床观察中确有预防术后气胀之功,其原理与其“三气”有关,即补气、行气、下气。蒙医认为,保持人体生命活动动力的三要素,即赫依、希日、巴达干机体受创伤后,失去固有的平衡,导致赫依受损,希日、巴达干功能亢进。支配胃肠蠕动赫依的运行受阻,引起胃肠胀气。方中寒水石、诃子为补气之要药,除补气外尚有健脾之功,木香、沙棘、山奈可行气,皮硝可下气,大黄泻肠热,故本方有促进肠蠕动,帮助消化,排气及泻大便的作用。腹部术后病人用此方可达到减轻气胀或消除胀气之目的。
1997年9月23日收稿
利用荧光染料法检测单核苷酸多态性(SNP)
利用荧光染料法检测单核苷酸多态性（SNP） 单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)是指基因组DNA中某一特定核苷酸位置上发生转换、颠换、插入或缺失等变化，并且任何一种等位基因在群体中的频率不小于1%。一般来说，一个SNP位点只有两种等位基因，因此又叫双等位基因。SNP是继RFLP 和STR后的第三代分子标记，具有数量多、分布广和遗传稳定等特点。它与许多疾病直接相关，是决定人类疾病易感性和药物反应差异的主要因素。因此，SNP分析对于群体遗传学、疾病相关基因的研究、新药研究、临床检验和分子诊断等领域有着重要作用。 荧光定量PCR中的SNP分析平台主要是基于等位基因特异性杂交原理，通过检测PCR过程中产生的荧光信号来区分等位基因，每检测一个SNP位点需要一对TaqMan探针(或分子信标)和一对位于检测位点的上下游引物。下面介绍一种新的基于荧光定量PCR 检测SNP位点的方法，它不需要设计特异性的TaqMan探针，只是通过溶解曲线的分析来区分等位基因，从而大大降低了检测成本。 该方法使用了两种不同的等位基因特异性正向引物，每个正向引物3′端的最后一个碱基对应于SNP位点的二等位基因，反向引物都一样，并使用荧光染料（SYBRGreenI）来检测PCR产物。纯合子基因组DNA只能被与其完全匹配的正向引物扩增，而杂合子基因组DNA能同时和两种正向引物结合扩增出两种PCR产物。 为了区分这两种扩增产物，我们在其中一个等位基因特异性引物的5′加一个20bp左右含GC重复序列。由于DNA的溶解温度主要与其片段长度和GC含量有关，经过修饰后的引物的长度和GC含量明显高于另一个等位基因特异引物，因此，使用这两种引物后的PCR扩增产物有着不同的Tm值。在PCR扩增结束后，运行一个溶解曲线程序，即让产物慢慢从60度升温到90度，从溶解曲线图上就可以分析出哪种等位基因参与了PCR扩增，由此也得到了相应的基因组的基因型。 补充一点： 1. 在PCR反应体系中，加入过量SYBR Green I荧光染料，SYBR荧光染料掺入DNA 双链后荧光信号显著增强；当DNA变性时SYBR Green I染料释放出来，荧光急剧减少；随后在聚合延伸过程中引物退火并形成PCR产物，SYBR Green染料与双链产物结合，经检
染料法示踪前哨淋巴结定位活检的意义
染料法示踪前哨淋巴结定位活检的意义 发表时间：2011-07-20T17:08:11.327Z 来源：《求医问药》2011年第2期供稿作者：孙涛王晓丽刘清茂 [导读] 乳腺癌的远位转移是导致患者死亡的主要因素。随着健康意识的提高和定期乳腺癌筛查，早期乳腺癌的发现率增加。孙涛王晓丽刘清茂 （河北省南皮县人民医院河北沧州061500） 【摘要】目的：探讨染料法示踪前哨淋巴结定位活检的意义。方法：选择Ⅰ、Ⅱ乳腺癌患者60例，随机分组，分别用亚甲蓝及纳米碳混悬液（卡那琳）染色示踪前哨淋巴结活检，选择是否进行腋窝淋巴结清扫，同时对比两种染色剂临床疗效。结果：经随访前哨淋巴结切除活检阴性未行腋窝淋巴结清扫患者或行下腋位清扫术，复发率及远处转移率无明显增高，但患肢肿胀的发病率明显下降，明显提高患者术后存活质量。结论：亚甲蓝及纳米碳作为示踪剂行前哨淋巴结活检术，效果相仿，但亚甲蓝价格低廉，非常适合基层医院实施，同时前哨淋巴结活检技术，可避免过度医疗，减少患者患侧肢体的并发症，提高患者术后生活质量。 【关键词】乳腺癌；亚甲蓝染色；纳米碳染色；前哨淋巴结活检；基层医院 【中图分类号】R446.8【文献标识码】B【文章编号】1672-2523（2011）02-0112-02 乳腺癌的发病率呈逐年升高趋势。大量研究证实，乳腺癌是一种全身性疾病，其转移及播散在很早即可发生，虽然淋巴结转移和原发肿瘤大小是目前判断预后和制定治疗方案的主要参考指标，但是恶性肿瘤细胞的全身转移是主要致死因素。传统手术均进行腋窝淋巴结清扫，术后患侧肢体肿胀，肩部疼痛及患肢活动障碍，肩部及前臂内侧感觉异常等，对患者的后期生活造成很大影响，对于早期无腋窝淋巴结转移的乳腺癌患者行腋窝清扫术，在某种意义上存在过度治疗。 本研究拟通过对早期乳腺癌在肿瘤周围注射染色剂示踪前哨淋巴结，行前哨淋巴结活检，快速冷冻病理学检测确定前哨淋巴结是否存在转移，从而确定是否进行腋窝淋巴结清扫术，对无前哨淋巴结转移者，避免腋窝清扫导致的并发症，提高患者术后生活质量。 1 资料与方法 1.1临床资料我院 2009 年 10 月～2010年 10 月治疗乳腺癌患者 60 例，患者均为女性。本组患者年龄 25～68 岁，平均 40 岁；其中，左侧 37例，右侧 23 例；原发肿瘤位于外上象限 35 例(58%)，内上象限 7 例(12%)，外下象限 8 例(13%)，内下象限 3 例(5%)，中央区 7 例 (12%)；病理学诊断：浸润性导管癌 49 例，浸润性小叶癌 11 例。 1.2前哨淋巴结切除活检方法 术前麻醉成功后，随机分组，分别用1%亚甲蓝、纳米碳混悬液于原发肿瘤周围皮下或活组织检查后的残腔壁周围皮下注射。10～15 min 后经腋底部胸大肌外侧作一小切口(该切口均在根治术预切范围内)，寻找并追踪染色淋巴管，循此解剖至染色淋巴结即为前哨淋巴结(SLN)，切除前哨淋巴结送病理科进行术中冰冻快速病理检查。 2结果 切除前哨淋巴结送病理科行冰冻病理检查。如病理回报阳性，则行腋窝淋巴结清扫术；前哨淋巴结活检病理回报阴性，则不清扫腋窝淋巴结。全部患者均行前哨淋巴结活检，成功检出SLN 染色 58 例，其检出率为 96%（58/60），共检出SLN 100 枚，平均 1.7 枚，其中，1 枚 37 例（49.3%）、2 枚 23 例 (33.3%)、3 枚 10 例 (13.3%)。未行腋窝淋巴结清扫的患者，术后复发率无明显增高，但术后的生活质量得到了明显的改善。 3讨论 乳腺癌已成为妇女最常见的恶性肿瘤，且其发病率仍有逐渐升高趋势。目前对乳腺癌患者仍以原发肿瘤大小和淋巴结转移状况作为判断患者预后和制定治疗方案的主要参考指标。临床实践已经证实，在初诊的乳腺癌患者中，大约半数其体内存在隐匿转移癌（亦称微转移癌）。乳腺癌的远位转移是导致患者死亡的主要因素。随着健康意识的提高和定期乳腺癌筛查，早期乳腺癌的发现率增加。传统的腋窝淋巴清扫存在诸多患侧上肢的并发症，如上肢水肿、麻木、肩关节活动障碍、腋窝皮下积液等影响患者生活质量。 前哨淋巴结活检术的应用，对无腋窝淋巴结转移的患者，不进行腋窝淋巴结清扫，避免过度治疗，从而减少患者患侧上肢并发症，提高术后生活质量,另保留一定数量的腋淋巴结，使其继续具有抗肿廇的免疫屏障作用是非常重要的［1］。国内外常用前哨淋巴结示踪方法包括同位素示踪法和染料示踪法，后者多用异硫蓝，此药价格昂贵，且尚未在国内上市，不利于基层医院应用。亚甲蓝染色示踪方法简单，经济易行，不需要特殊的穿刺装置和穿刺针具，手术切除成功率高，纳米碳混悬液，颗粒大，不易于周围软组织内弥散，利于淋巴结染色成功，二者均适用于基层医院实施。其对于早期乳腺癌保腋窝、提高早期乳腺癌患者生活质量具有深远的意义。 参考文献 ［1］邵彬,巴图,郭冰.亚甲蓝示踪法在乳腺癌前哨淋巴结活检中应用观察［J］.中国肿瘤临床与康复,2008,15(4):310-312.
实验1几种常见染料的鉴别方法
实验一几种常见染料的鉴别方法 一、实验目的 染料按照应用分类，可以依照最适宜纤维染色性能的方法，将染料分为11大类。结合目前实验室现有染料，对照下述染料性能，请分别对下列几种染料进行鉴别。 二、实验原料 未知类型染料一批，NaOH、保险粉、DMF（N,N-二甲基甲酰胺） 三、染料性能 1分散染料的鉴别方法 分散染料不溶于水，多数情况下用于涤纶染色，在水中难以溶解，可在100％的二甲基甲酰胺对试样进行溶解，染料溶解即为分散染料。 2还原染料的鉴别方法 还原染料不溶于水，但在碱性条件下，融入含有若还原剂的溶液中，染料能溶于水。操作步骤如下，100-300mg试样置于35mL试管中，加2-3mL水和0.5-ｌmL10％的氢氧化钠溶液，加热煮沸，再加入10-20mg保险粉，煮沸 0.5-1min，取出试样投入25-50mg白棉布和10-20mg 氯化钠，继续煮沸40-80s，然后冷却至室温。取出棉布放在滤纸上氧化。如果氧化后色泽与原样差不多，表示还原染料存在。 3活性染料鉴别 该类染料为水溶性染料。由于活性染料染色时染料与纤维形成共价键，结合非常牢固，因而活性染料上染纤维后，不能被水解。因此，可以根据比色法染料在二甲基甲酰胺溶剂中的溶解情况判断。实验步骤：二甲基甲酰胺萃取：置0.1g试样于试管中，加入5ml二甲基甲酰胺，加热至沸，移去热源，观察溶剂变色情况。一般经洗涤的活性染料染色试样上的染料不溶于二甲基甲酰胺，即溶剂不变色。可溶于二甲基甲酰胺的有硫化染料、还原染料、不溶性偶氮染料、有机颜料。 4颜料 颜料是一种微细粉末状的有色物质，一般不溶于水、油和溶剂，但能均匀的分散在其中。用溶解法可以初步鉴别出染料和颜料。
药物分析简答题(最新整理)
1.药物分析的任务是什么？ ①.药物成品的化学检验工作 ②.药物生产过程的质量控制 ③.药物贮存过程的质量考察 ④.临床药物分析工作 2.高效液相色谱法检查药物的杂质方法有几种? ①.内标法加校正因子测定供试品中某个杂质含量 ②.外标法测定供试品中某个杂质含量 ③.加校正因子的主成分自身对照法 ④.不加校正因子的主成分自身对照法 ⑤.面积归一法 3.杂质有哪些来源和途径? 来源； ①.从药物生长过程中引入 ②.由药物储藏过程中引入 途径：在合成药的生产过程中，未反应完全的原料、反应的中间体和副产物，在精致时未能完全出去，就会成为产品中的杂质。药品在储藏过程中，在外界 条件的影响下，或因微生物的作用，可能发生水解、氧化、分解、异构化、晶 型转变、聚合、潮解和发霉等变化，产生有光的杂质。具有酚羟基、巯基、亚 硝基、醛基以及长链共轭多烯等结构的药物，在空气中易被氧化，引起药物变色、失效甚至产生毒性的氧化产物等。 4.铁盐检查法中加入硫酸铵的目的是什么？ 加入氧化剂过硫酸铵，一方面可以氧化供试品中Fe2＋成Fe3＋，同时可防止光线导致的硫氰酸铁还原货分解褪色。 5.为什么标准铅液、标准铁液、标准砷液都要事先配制成储备液存放，用时稀释？ 铅离子、铁离子和亚砷酸根离子在低浓度、近中性溶液中易水解，故先配成高浓度的酸性储备液，使其稳定。用时稀释即可。 6.薄层色谱法检查杂质的类型有哪几种？ ①.选用实际存在的待检杂质对照品法 ②.选用可能存在的某种物质作为杂质对照品 ③.高低浓度对比法 ④.在检查条件下，不允许有杂质斑点。 7.用对照法检查杂质，应注意哪些方面的平行？ 供试液的处理和对照液的处理在所用试剂、反应条件、反应时间、实验顺序登方面要相同，以保证结果的可比性。 8.重金属检查的常用四种方法反别在什么情况下应用？ 第一法（硫代乙酰胺法）：适用于无需有机破坏，在酸性条件下可溶解的，无色的药物的重金属检查。 第二法（炽灼破坏后检查重金属）：适用于含芳香环、杂环以及不溶于水稀酸及乙醇的有机药物的重金属检查。 第三法（硫化钠法）：适用于溶于碱而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的药物。 第四法（微孔滤膜法）：适用于含2～5μg重金属杂质及有色供试液的检查。
除色素方法
目前应用于中药脱色的方法及工艺很多，但大致可通过以下方法进行分类 一、根据色素在不同溶剂中的溶解度差别进行除去 属于最常用、最简单、也是效果比较差的方法。 1．水提醇沉：可去除小部分水溶性色素。 醇提水沉：可除去大部分脂溶性色素。（也可以两种方法交替使用） 2．酸碱沉淀法：例如当杂质色素是一些黄酮、蒽醌等酚酸性成分时，可调节PH3以下，另其析出。 例如当杂质色素是一些黄酮、蒽醌等酚酸性成分时，可采取调节PH到12以上，用有机溶剂萃取的方法。这时由于色素都以解离形式存在，不宜被萃出。 属于最常用、最简单、也是效果比较差的方法。 1．水提醇沉：可去除小部分水溶性色素。 醇提水沉：可除去大部分脂溶性色素。（也可以两种方法交替使用） 2．酸碱沉淀法：例如当杂质色素是一些黄酮、蒽醌等酚酸性成分时，可调节PH3以下，另其析出。 二、根据色素在两相溶剂中的分配比不同进行除去 例如当杂质色素是一些黄酮、蒽醌等酚酸性成分时，可采取调节PH到12以上，用有机溶剂萃取的方法。这时由于色素都以解离形式存在，不宜被萃出。 三、根据色素与有效成分吸附性差别进行分离 1．物理吸附：（吸附力是分子间力） （1）极性吸附剂：如硅胶、氧化铝。可去除亲水性色素。 （2）非极性吸附剂：如活性炭，纸浆、滑石粉、硅藻土。可去除亲脂性色素。 活性炭是一种优良的吸附剂，它对色素、细菌、热原等杂质有很强的吸附能力，并且其还有助滤作用。 其内部有大量的微孔和空隙，表面积可达200-500m2/g。 吸附原理：由于大多数色素具有共扼双键结构，易吸附。 使用方法：冷吸附法，热吸附法，炭层助滤法，柱层析吸附法。 2．化学吸附： （1）例如可用碱性氧化铝去除一些黄酮、蒽醌等酚酸性色素。 （2）离子交换树脂法：例如黄酮、蒽醌等酚酸性色素可以用阴离子交换树脂除去。 3．半化学吸附：聚酰胺与大孔树脂。吸附原理为氢键作用，大孔树脂还有部分范德华力作用。 聚酰胺可通过分子中的酰胺羰基与酚类、黄酮类的酚羟基形成氢键。也可一通过酰胺键上的游离胺基与醌类、脂肪羧酸上的羰基形成氢键。 四、沉淀法除去色素 代表物质：石灰乳。 常用浓度：20％－30％。 脱色原理：石灰乳中钙离子能与药液中的有效成分及杂质结合成钙螯合物、钙盐沉淀。而沉淀在硫酸作用下，黄酮、蒽醌、酚类、皂苷、部分生物碱与钙离子形成的钙盐可以被分解出来，再溶解到水中。但是鞣质、部分蛋白质、有机酸、极性色素、多糖等不能分解出来。 五、絮凝剂法除去色素 1．常用的絮凝剂分以下几种： （1）明胶类：鞣质影响药液稳定性且容易变色。可利用明胶与鞣质行政络合物，与水中悬浮颗粒一起沉淀（2）ZTC1+1天然澄清剂： 分为四种：I型：除蛋白型 II型：脱色澄清型 III型：中药口服液与颗粒剂型，可代替醇沉法，起到去除不稳定成分和助滤作用。 IV型：注射液型，主要提高澄明度。 （3）101果汁澄清剂： （4）甲壳素及壳聚糖：壳聚糖是甲壳素乙酰化制得。它们都是天然的阳离子絮凝剂。 2．影响澄清效果的因素 （1）澄清剂的用量 （2）澄清剂的配制浓度和加入顺序
酸性染料比色法测定延胡索中总生物碱的含量 (1)
酸性染料比色法测定延胡索中总生物碱的含量 一、目的要求 掌握酸性染料比色法测定延胡索中总生物碱含量的原理和方法。 二、基本原理 在适当的介质中，生物碱（B ）可与氢离子（H +）结合成阳离子（BH +），一些酸性染料，如溴百里酚蓝、溴酚蓝、溴甲酚紫或溴甲酚绿等，在此条件下可解离成阴离子（In -）。上述阳离子与阴离子定量地结合成有色配位物（BH +In -）离子对，可以定量地溶于某些有机溶剂，在一定波长处测定该溶液有色离子对的吸光度，即可计算出生物碱含量。 ++?→←+BH H B -++?→←In H HIn 有机相水相)()(__In BH In BH In BH ??→←??→←+++-+ 三、实验方法 对照品溶液的配制 取延胡索乙素对照品约2mg ，精密称定，置25ml 量瓶中，加三氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。 供试品溶液的配制 取延胡索粉末约0.5g ，精密称定，置50ml 具塞锥形瓶中，加少量氨水湿润（约20滴），密塞放置15分钟，精密加乙醚-三氯甲烷-甲醇（25：8：2.5）混合溶剂25ml ，轻轻摇匀，称重，冷浸一周，称重，补足重量，滤过，精密吸取续滤液10ml ，置25ml 具塞锥形瓶中，水浴加热挥干溶剂，精密加入三氯甲烷10ml ，使完全溶解，摇匀，即得。 测定法 精密量取对照品溶液和供试品溶液1ml ，分别置分液漏斗中，各精密加三氯甲烷9ml ，再分别加溴甲酚绿溶液5ml ，振摇3分钟后，静置使分层；同法制备空白溶液。分取上述三种溶液的三氯甲烷液，在410nm 的波长处测定吸光度，按下式计算，即得。 %100%) 1(25(%)?-??=水分含量样对对样W C A A 式中 A 样与A 对分别为供试品溶液与对照品溶液吸光度；C 对为对照品溶液中延胡索浓 度，g/ml ；W 样为取样量，g 。 四、思考题 1．酸性染料比色法的影响因素有哪些？ 2．本法中使用的溶剂均有挥发性，操作中应注意哪些事项？
药用分析化学复习内容
药用分析化学复习题 一、选择题（将正确答案前的字母填在括号内） 1.在分析过程中,通过( )可以减少偶然误差对分析结果的影响。A.增加平行测定次数 B.对照试验 C. 空白试验 D.加样回收试验 2.在酸碱滴定中,凡是变色点pH( )的指示剂都可以用来指示滴定的终点。 A.等于7 B.与化学计量点完全符合 C.处于滴定突跃范围之内 D.处于滴定突跃范围之外 3.以下关于偏差的叙述正确的是( )。 A.测量值与真实值之差 B.测量值与平均值之差 C.操作不符合要求所造成的误差 D.由于不恰当分析 方法造成的误差 4.下列物质中,不能用0.1000mol/LNaOH标准溶液直接滴定的是( )。 A.硼酸(Ka1=5.8×10-10) B.甲酸(Ka=1.77×10-4) C.苯甲酸 (Ka2=6.28×10-6) D.乙酸 (Ka=1.75×10-5) 1.标定氢氧化钠标准溶液常用的基准物为()。A.ZnO B.无水碳酸钠 C.饱和氢氧化钠溶液 D.邻苯二 甲酸氢钾 2.用氢氧化钠直接滴定苯甲酸，应选用( )作指示剂。A.甲基红 B.甲基橙 C.酚酞 D.甲基黄 3.普通玻璃电极测定溶液的pH范围为( )。A.1—14 B.1—9 C.< 1 D. >9 4.下列类型的电子能级跃迁所需要能量最小的是( )。A. σ→σ* B. n→σ* C. π→π* D. n→ π* 5.衡量色谱柱效能高低的指标是( )。A.相对保留值 B.分离度 C.分配比 D. 有效塔板数 四氮唑比色法测定甾体激素含量,用( )做溶剂。 A.冰醋酸 B.水 C.95%的乙醇 D.无水乙醇 3.下列何种溶剂对HAc、HCl、HClO4有均化效应？( )A.甲酸 B.水 C.乙二胺 D.苯 1.下列反应中, ( 麦芽酚反应)属于链霉素的特有鉴别反应。A.茚三酮反应 B. C.重氮化反应 D.硫酸— 硝酸呈色反应 1.电位滴定是根据滴定过程中指示电极电位的变化来确定滴定终点的。 5.下面有关红外分光光度法的错误是（）。 D.因为光路较长而符合朗伯-比尔定律，实际操作比较简单 1.黄体酮在酸性溶液中可与( )发生呈色反应。A.四氮唑盐 B.三氯化铁 C.重氮盐 D.2,4-二硝基苯肼 2.对乙酰氨基酚中的特殊杂质是( )。 A.对氨基酚 B.间氨基酚 C.对氯酚 D.对氨基苯甲酸 3.下列药物分子中含有手性碳原子,因而具有旋光活性的是 ( )。A.青霉素 B.链霉素 C.庆大霉素 D.四 环素 4.Kober反应可用于含量测定的药物为( )。A.链霉素 B.皮质激素 C.维生素C D.雌激素 5.维生素A含量用生物效价表示,其效价单位是( )。A.IU B.IU/ml C.IU/g D.ml 1.《药品生产质量规范》简称 ( )。A.GLP B.GMP C.GSP D.GCP 2.以下关于偶然误差的叙述正确的是 ( )。A.大小误差出现的几率相等 B.正负误差出现的几率相等C.正 误差出现的几率大于负误差。D.负误差出现的几率大于正误差 9.酸性最弱的是( )。A.盐酸 B.苯甲酸 C.水杨酸 D.硫酸 12.生物碱类药物通常具有碱性，可在冰醋酸或酸酐等非水酸性介质中，用( )滴定液直接滴定。 A.高氯酸 B.硫酸 C.盐酸 D.碳酸 6.对理论塔板高度没有影响的因素是( )。A.填料的粒度、均匀程度 B. 载气流速 C. 固定相液膜厚度 D. 柱长 7.有关药物中的杂质，下列说法错误的是( )。A.可能是生产过程中引入的 B.可能是在贮藏过程中产生 的 C.杂质的限量通常用百分之几或百万分之几（ppm）来表示 D.氯化物、硫酸盐、重金属等都属于信号杂质 9.酸性最弱的是( )。A.盐酸 B.苯甲酸 C.水杨酸 D.硫酸 4.普通玻璃电极不能用于测定pH＞10的溶液，这是因为( )。 A.氢氧离子在电极上的效应 B.钠离子在电极上的效应 C.电极的内阻太大 D.玻璃被碱腐蚀 5.下面有关紫外吸收光谱在有机化合物分子结构研究中的作用叙述错误的是( )。 A.分子中五种轨道能级的高低顺序是σ < π < n <σ* < π* B.分子外层电子跃迁中，所需能量最大的是n→ π*
探讨染料法示踪前哨淋巴结定位活检的意义
探讨染料法示踪前哨淋巴结定位活检的意义 摘要：目的：探讨染料法示踪前哨淋巴结定位活检的意义。方法：选择Ⅰ、Ⅱ乳腺癌患者60例，随机分组，分别用亚甲蓝及纳米碳混悬液（卡那琳）染色 示踪前哨淋巴结活检，选择是否进行腋窝淋巴结清扫，同时对比两种染色剂临床疗效。结果：经随访前哨淋巴结切除活检阴性未行腋窝淋巴结清扫患者或行下 腋位清扫术，复发率及远处转移率无明显增高，但患肢肿胀的发病率明显下降，明显提高患者术后存活质量。结论：亚甲蓝及纳米碳作为示踪剂行前哨淋巴结活检术，效果相仿，但亚甲蓝价格低廉，非常适合基层医院实施，同时前哨淋巴结活检技术，可避免过度医疗，减少患者患侧肢体的并发症，提高患者术后生活质量。 关键词：乳腺癌；亚甲蓝染色；纳米碳染色；前哨淋巴结活检；基层医院 乳腺癌的发病率呈逐年升高趋势。大量研究证实，乳腺癌是一种全身性疾病，其转移及播散在很早即可发生，虽然淋巴结转移和原发肿瘤大小是目前判断预后和制定治疗方案的主要参考指标，但是恶性肿瘤细胞的全身转移是主要致死因素。传统手术均进行腋窝淋巴结清扫，术后患侧肢体肿胀，肩部疼痛及患肢活动障碍，肩部及前臂内侧感觉异常等，对患者的后期生活造成很大影响，对于早期无腋窝淋巴结转移的乳腺癌患者行腋窝清扫术，在某种意义上存在过度治疗。 本研究拟通过对早期乳腺癌在肿瘤周围注射染色剂示踪前哨 淋巴结，行前哨淋巴结活检，快速冷冻病理学检测确定前哨淋巴结是否存在转移，从而确定是否进行腋窝淋巴结清扫术，对无前哨淋巴结转移者，避免腋窝清扫导致的并发症，提高患者术后生活质量。 1 资料与方法 临床资料我院 20XX 年 10 月～20XX年 10 月治疗 乳腺癌患者 60 例，患者均为女性。本组患者年龄 25～68 岁，平均 40 岁；其中，左侧 37例，右侧 23 例；原发肿瘤位于外上象限 35 例(58%)，内上 象限 7 例(12%)，外下象限 8 例(13%)，内下象限 3 例(5%)，中央区 7 例 (12%)；病理学诊断：浸润性导管癌 49 例，浸润性小叶癌 11 例。 前哨淋巴结切除活检方法 术前麻醉成功后，随机分组，分别用1%亚甲蓝、纳米碳混
酸性染料比色法测定玛咖总生物碱含量的方法研究_卢馨
酸性染料比色法测定玛咖总生物碱含量的方法研究 卢馨1，刘文虎1，曾里1，黄张君2，易彬2，曾凡骏1* 1. 四川大学食品科学与工程系（成都 610065）； 2. 泸州老窖集团养生酒业有限责任公司（泸州 646000） 摘要以苦参碱为对照品, 采用酸性染料比色法测定玛咖总生物碱的含量, 研究并建立玛咖总生物碱的测定方法。对检测方法使用的最大吸收波长、缓冲液pH、缓冲液用量、0.05%溴甲酚绿显色剂用量、溶液振摇时间、氯仿萃取时间进行了优化研究。结果显示, 此方法精密度RSD=0.95%, 回收率为108.03%, RSD=0.79%, 表明该方法具有较好的精密度和稳定性; 且操作简单, 具有良好的可重复性。此方法测得云南丽江玛咖总生物碱含量为0.7%, 苦参碱最低检测限为0.86 μg。 关键词酸性染料比色法; 玛咖; 总生物碱 Determination of Total Alkaloids in Maca by Acid Dye Colorimetry Lu Xin1, Liu Wen-hu1, Zeng Li1, Huang Zhang-jun2, Yi Bin2, Zeng Fan-jun1* 1. Department of Food Science, Sichuan University (Chengdu 610065); 2. Luzhou Laojiao Group Health Wine Industry Co., Ltd. (Luzhou 646000) Abstract With the matrine as reference, establish a method for the determination of total alkaloids in Maca by acid dye colorimetry, and research and establish the determination methods of total alkaloids in Maca. The detection method of the maximum absorption wavelength, buffer pH, the dosage of buffer solution, 0.05% of bromocresol green coloration agent dosage, solution of shaking time, chloroform extraction time were studied. The results showed that the RSD=0.95% of precision, the recovery was 108.03%, RSD=0.79%, showed that the method had good precision and stability; And the operation is simple, with good repeatability. This method measured the content of alkaloids was 0.7% of Maca, the lowest detection limit of matrine was 0.86 μg. Keywords acid dye colorimetry; Maca; total alkaloids 玛咖（Lepidium meyenii Walp），十字花科独行菜，属一年生或2年生草本植物，原产于秘鲁安第斯山区[1]，其块根可以药食兼用，具有悠久历史，近十多年来更逐渐成为开发的热点之一。生物碱是含负氧化态氮原子的环状化合物[2]，广泛存在于生物有机体中。适量的总生物碱对人体具有镇痛、消炎、降压、抑菌、抗氧化及抗癌等多种生理活性[3]，因此研究玛咖中总生物碱的测定方法具有非常重要的意义。总生物碱含量定量分析方法常用方法有滴定法和酸性染料比色法、薄层扫描法、高效液相色谱法、毛细管电泳法和气相色谱法等[4]。本研究对玛咖总生物碱的酸性染料比色法进行了研究和探索。 1 材料与方法 1.1 材料与设备 原料与试剂：玛咖粉：产地为云南丽江，由丽江百岁坊生物科技开发有限公司提供；95%乙醇；2%HCl；1mol/L NaOH溶液；pH 3.6盐酸-邻苯二甲酸氢钾缓冲溶液；0.05%溴甲酚绿指示液（溴甲酚绿显色剂）；苦参碱标品溶液：8.6 mg/100 mL；氯仿；蒸馏水。 主要仪器：DSY-1-4 型电热恒温水浴锅：北京爱琦霞商贸中心；AR2130 型电子天平：奥豪斯Adver-turerTM；UV-1100 型紫外-可见光分光光度计：上海美谱达仪器有限公司；低速离心机：LD5-2B 型最大转速5 000 r/min：北京雷博尔离心机有限公司；PHS-3C 型精密pH计：上海雷磁仪器厂；KQ-100DE 型数控超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司；125 ml 分液漏斗、三角瓶、漏斗、容量瓶、比色管、蒸发皿等。 1.2 试验方法 1.2.1 玛咖总生物碱提取液的制备 取玛咖粉末5.0 g于250 mL三角烧瓶中，加入200 mL 95%乙醇，置于功率为100 W的超声波清洗器中，温度60 ℃下超声提取40 min，过滤，残渣重复提取2次，合并滤液，浓缩得浸膏。10 mL 2%的HCl溶解，过滤，残渣用10 mL 2% HCl洗涤2次，合并滤液。用浓氨水调节滤液pH 2~3，等体积氯仿萃取3次。将酸提取液用5 mol/L NaOH调节pH 9~10，等体积氯仿萃取3次。合并萃取液，蒸发浓缩至10 mL，即得玛咖总生物碱的供试品溶液。 1.2.2 苦参碱对照品溶液的配置 取苦参碱对照品8.6 mg，精密称量，溶于氯仿溶液中，并定容至100 mL，得到质量浓度为8.6 mg/100 mL的对照品溶液。 1.2.3 溴甲酚绿显色剂的制备 * 通讯作者 241
第五节酸性染料染色
第五节酸性染料染色 ?酸性染料通常以磺酸钠盐的形式存在，极少数以羧酸钠盐存在。 ?在染料发展初期需要在酸性条件下染色，故习惯上称为酸性染料。 ?结构比较简单，多数为单偶氮结构，少数为双偶氮结构 ?是一类很重要的染料，品种很多，具有色谱齐全、色泽鲜艳等特点。 ?对纤维素纤维直接性很低，只有少数结构复杂的可以上染纤维素纤维 ?主要用于羊毛、蚕丝等蛋白质纤维以及聚酰胺纤维的染色和印花，还可用于维纶、皮革、 纸张、木材、食品的染色或着色和制备墨水等。 ?酸性染料的湿处理牢度和耐日晒牢度随品种不同有很大的差异，一般中深色都要经过固 色处理以达到湿处理牢度 按应用性能分类: ?（1）强酸性浴染色酸性染料（匀染性酸性染料） ?（2）弱酸性浴染色酸性染料（半匀染性或半缩绒性酸性染料） ?（3）中性浴染色酸性染料（耐缩绒性酸性染料） 一、对羊毛、蚕丝和锦纶的上染机理 ?均含有氨基和羧基，具有两性性质，具有等电点 等电点—当溶液在某一pH值时，纤维中电离的氨基和羧基数目相等，纤维不带电荷。 ?当pH值低于纤维等电点时，质子化氨基数量大于离子化羧基数量 ?反之，则相反 ?在不同的pH值情况下，带电情况如下 ? 1.酸性条件 ?酸性染料阴离子被蛋白质纤维和聚酰胺纤维上带正电荷的氨基所吸引，借助离子键的结 合而染上纤维 ?加入食盐或硫酸钠起到缓染作用，还能增进染料解吸，增进染料移染性能，提高匀染效 果。 ?染料吸附过程
? 2.中性条件 ?纤维带有较多负电荷，染料阴离子必须克服较大的静电斥力才能上染纤维，类似直接染 料 ?染料依靠范德华力和氢键和纤维结合。 ?加入中性电解质起促染作用，促染机理与直接染料相似。 3. 染料上染特点 （1）强酸性浴染色酸性染料（匀染性酸性染料） ?结构简单，相对分子质量较小，与纤维的范德华力和氢键力较小，染料与纤维的结合主 要是离子键的结合 ?对纤维染色，存在染色饱和值——按纤维氨基计算所得的数值。 ? A. 染浴酸性较弱 ?NH3+的数量较少，纤维所带正电荷少，染料与纤维分子间的库仑引力较小，染料的上 染速率和上染百分率较低 ? B.酸用量增加 ?NH3+的数量增加，所带正电荷增加，染料与纤维分子间的库仑引力增加，染料的上染 速率和上染百分率增加 ? C.染色条件 ?pH值范围：2～4 ?中性盐：降低库仑力，缓染 （2）弱酸性浴染色酸性染料（半匀染性或半缩绒性酸性染料） ?结构较复杂，染料与纤维之间有较大的范德华力和氢键力 ?若pH值在强酸性条件，染色速率过快，易造成染色不匀 ?弱酸性染料染色饱和值，超过按纤维中氨基含量计算的饱和值，这主要是由于染料与纤 维之间的范德化力和氢键的作用结果 ?染色pH值 ?（1）一般在4～6，弱酸性 ?（2）等于等电点时（羊毛4.2~4.8）——纤维不带电荷，染料靠范德华力和氢键力上染， 上染后染料阴离子再与纤维中的NH3+成离子键结合 ?（3）在等电点以上染色，羊毛带负电荷，染料与纤维之间存在库仑斥力，染料依靠范 德华力和氢键力上染纤维。然后，染料与纤维通过离子键、范德华力和氢键力结合在一起，结合较牢固，湿处理牢度较好 （3）中性浴染色酸性染料（耐缩绒性酸性染料） ?相对分子质量更大，染料与纤维之间有较大的范德华力和氢键力，有超饱和染色现象。 ?在中性条件下，存在较大的电荷斥力，通过范德华力和氢键力上染。 ?中性盐：促染，提高上染速率和上染百分率 ?结合：范德华力和氢键力，结合较牢固，湿处理牢度较好 二、羊毛、蚕丝和锦纶的染色工艺 1.羊毛染色 ?由于羊毛的鳞片结构，升高温度有助于上染 ?高温保温可提高移染性和染料扩散速率，有助于匀染，需要长时间沸染 ?可使用元明粉等中性盐作缓染剂 2.蚕丝染色 ?酸性染料是蚕丝染色的主要染料 ?丝素对酸稳定性较低，在强酸性条件下，蚕丝的光泽、手感、强力都会受到影响 ?一般不使用强酸性染料 ?pH值控制在等电点（丝素3.5~5.2)附近，一般为4～4.5，使用醋酸－醋酸钠缓冲体系?为防止沸染条件下，织物擦伤，光泽变暗，一般采用95℃染色 ?蚕丝无鳞片层，无定形区结构较松弛，水中膨化剧烈 ?染料扩散容易，上染速率较高，温度越高，上染越快——逐渐升温，提高匀染 ?一般使用非离子型的平平加作匀染剂 ?染色鲜艳，但湿处理牢度比羊毛低，需使用阳离子型固色剂固色
《药物分析》课程(A)卷答案与评分标准
200 6?2007 学年第1学期期末 《药物分析》课程（A）卷参考答案及评分标准 （供2004级制药工程专业班用） 、名词解释：（15分，共5题，每题3分，英文名及缩写，请先写出中文名称后再解释之） 1、Accuracy：准确度（1），系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般以回收 率（%）表示。准确度应在规定的范围内建立（2）。 2、Blank test：空白试验（1），系指在不加供试品或以等量溶剂替代供试液的情况下，按同法操作所得 的结果（2 ）。 3、Content uniformity :含量均匀度（1），是指小剂量的片剂、胶囊剂、膜剂或注射用无菌粉末 等每片（个）含量偏离标示量的程度（ 2 ）。 4、特殊杂质：是指在特定药物的生产和贮藏过程中引入的杂质。 5、抗生素微生物检定法：系在适宜条件下，根据量反应平行线原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑 制作用，计算抗生素活性（效价）的方法。 二、单项选择题（每题1.5分，共26道题，总计39分） 1-5 : BBCCB 6-10 : CADCB 11-15: BAABD 16-20 : ADCCB 21-26: AADACA 三、多项选择题:（10分，共5题，每题2分，多选少选均不得分） 1、ABCE 2 、 ABE 3 、 BCD 4 、 BCD 5 CDE 命题教师: 教研室或系负责人: 主管系（部）主任: 年月曰
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四、填空题：（每空1分，共20空，总计20分） 1、芳伯氨基或潜在芳伯氨基 2、重氮盐 3、B -萘酚 4、对氨基酚 5、母核10位上（2位上） 6、2位上（10位上） 7、凡例 8、正文 9、附录 10、索引 11、GLP 12、GCP 13、GMP 14、GSP 15、氧瓶燃烧法 16、杂质限量 17、空白 18、阳性对照 19、硫色素反应 20、含量均匀度
早期乳腺癌染料法前哨淋巴结活检专家共识及技术操作指南(最全版)
早期乳腺癌染料法前哨淋巴结活检专家共识及技术操作 指南（最全版） 腋淋巴结评价是乳腺癌临床病理学分期的重要指标之一。研究证实，前哨淋巴结活检（sentinel lymph node biopsy, SLNB）与传统腋淋巴结清扫（axillary lymph node dissection, ALND）相比具有并发症少和创伤小的优势［1］。美国国家综合癌症网络（NCCN）乳腺癌临床实践指南以Ⅰ类证据推荐腋淋巴结阴性的早期乳腺癌病人优先选择SLNB作为腋淋巴结分期的标准方式［2］。 SLNB常用的示踪方法包括染料法、核素法、染料联合核素法及荧光示踪法。由于操作医生资质、示踪剂制备、需要专业仪器检测及费用等原因，在我国开展核素法及荧光法受到限制。染料法操作简单，经过学习培训后容易掌握，是目前国内应用最多的乳腺癌SLNB示踪方式。为规范开展乳腺癌染料法SLNB技术，中华医学会外科学分会乳腺外科学组组织国内部分专家深入讨论，制定本共识及操作指南，旨在为国内乳腺外科医师临床工作提供参考借鉴。 第一部分专家共识 自1894年Halsted开创乳腺癌根治性手术以来，ALND已经成为准确评价乳腺癌病人腋淋巴结状态和获得R0切除的标准术式。但是，
ALND可能导致病人发生上肢水肿、皮肤感觉异常和肩关节功能障碍等并发症，影响生活质量。近年来，随着临床早期乳腺癌病人比例不断提高和综合治疗手段不断进步，显著改善了乳腺癌病人的整体预后。探索更为合理的手术方式受到广泛关注。 前哨淋巴结（sentinel lymph node，SLN）是指最早接受肿瘤区域淋巴引流和发生肿瘤转移的1枚（或几枚）淋巴结。SLNB技术首先应用在阴茎癌和黑色素瘤外科治疗中。20世纪90年代初，采用放射性核素示踪法及异硫蓝染料法进行乳腺癌SLNB获得成功［3-4］。随后的前瞻性研究证实，ALND不能改变腋淋巴结阴性乳腺癌病人的生存时间［5］。同时，SLNB具有创伤小、上肢水肿等并发症发生率显著降低的优势。而且，该项技术能够更准确地进行乳腺癌腋淋巴结分期评价［6］。目前，国内外指南和共识一致认为，SLN阴性的早期乳腺癌病人可以免除ALND，SLNB已成为腋淋巴结阴性早期乳腺癌病人腋淋巴结评估的优选术式［7-10］。 染料法SLNB不需要特殊的仪器和手术条件。临床外科医师在独立完成染料法SLNB前需要经过相应的学习曲线训练，以提高成功率和降低假阴性率［11］。
脑脊液总蛋白检测试剂盒(染料结合比色法)
脑脊液总蛋白检测试剂盒(染料结合比色法) 简介： 脑脊液(Cerebro-Spinal Fluid ，CSF)是存在于脑室、蛛网膜下腔和脊髓中央管内的无色透明液体，由脑室中的脉络丛产生，与血浆和淋巴液的性质相似。正常成年人的脑脊液，弱碱性，不含红细胞。正常脑脊液具有一定的化学成分和压力，对维持颅压的相对稳定有重要作用，当中枢神经系统受损时，脑脊液的检测成为重要的辅助诊断手段。总蛋白(Total Protein ，TP)由白蛋白和球蛋白组成。对于生物体液(血清、尿液、脑脊液)中总蛋白质含量的测定，一般要基于如下两个假设：1、所有蛋白质分子由纯多肽组成，含氮量的质量百分比为16%；2、体液中含有数百个蛋白质分子，每个分子对测定反应都具有非常相似的特性。目前常用的方法有：双缩脲法、紫外分光光度法、染料结合法、凯氏定氮法、沉淀法等。 Leagene 脑脊液总蛋白检测试剂盒(染料结合比色法)其检测原理是在酸性条件下，伊红解离成阴离子型，染料瞌颜色逐渐褪去，使试剂空白吸光度降低；蛋白质多肽中的精氨酸、组氨酸、赖氨酸、色氨酸残基解离成带有-NH3+基团，与伊红结合成红色蛋白复合物，其吸光度与蛋白浓度呈比例，与同样处理的标准液比较，测得样本中蛋白质的含量。本试剂盒专门用于人或动物脑脊液样本中的总蛋白含量测定。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 自备材料： 1、 离心管、小试管 2、 比色杯 3、 分光光度计 操作步骤(仅供参考)： 1、 取蛋白标准配制液或稀释液加入到蛋白标准中，充分溶解后配制成蛋白标准溶液，配制 编号 名称 TC060350T TC0603100T Storage 试剂(A): TP 显色液 A1: Eosinsolution 1ml 2ml RT 避光 A2: Acidic buffer 1ml 2ml RT A3: Eosin buffer 100ml 200ml RT 临用前，A1：A2：A3混合，即为TP 显色液。 试剂(B): TP acidic buffer 3.5ml 7ml RT 试剂(C): 蛋白标准 20mg 20mg RT 试剂(D): 蛋白标准配制液 5ml 5ml RT 使用说明书 1份
染料基础知识：酸性染料(染整百科)
染料基础知识之：酸性染料 导语 传统的酸性染料是指染料结构中含有酸性基团的水溶性染料，通常在酸性条件下染色。一、酸性染料概述 1、酸性染料的历史： 1868年，出现了最早的酸性染料三芳甲烷类酸性染料，其染色能力强但牢度欠佳；1877年，用于羊毛染色的第一只酸性染料酸性红A合成，其基本结构被确定； 1890年后，蒽醌结构的酸性染料发明，其色谱也越来越全； 至今为止酸性染料已有近几百个染料品种，被广泛的应用于羊毛、真丝、锦纶等纤维的染色。 2、酸性染料的特点： 酸性染料中的酸性基团一般以磺酸基（-SO3H)为主，以磺酸钠盐（-SO3Na)的形式存在于染料分子上，也有个别染料以羧酸钠盐（-COONa)为酸性基团。 其特点是水溶性好，色泽鲜艳、色谱较全，分子结构相对其他染料比较简单，染料分子中缺少较长的共轭连贯系统，染料的直接性较低。 3、酸性染料的反应机理： 二、酸性染料分类 1、按染料母体的分子结构分类： 偶氮类(占60%，广泛的色谱) 蒽醌类(占20%，主要是蓝、绿色系）
三芳甲烷类（占10%，紫色、绿色系) 杂环类（占10%，红色、紫色系） 2、按染色的pH分类： 强酸性浴酸性染料：染色pH值2.5-4，日晒牢度好，但湿处理牢度差，色泽鲜艳，匀染性好； 弱酸性浴酸性染料：染色pH值4-5，染料分子结构中磺酸基所占比例稍低，因此水溶性略差，湿处理牢度好于强酸性浴染料，匀染性略差。 中性浴酸性染料：染色pH值6-7，染料分子结构中磺酸基所占比例更低，染料溶解度低， 匀染性差，色泽不够鲜艳，但湿处理牢度高。 三、酸性染料相关术语 1、色牢度： 纺织品的颜色对与它在染整加工过程或使用、服用过程中遭受到各种物理、化学、生化作用的抵抗能力。 2、标准深度： 公认的深度标准系列，定义中等深度为1/1标准深度。同一标准深度的颜色，在心理感觉上是相等的，使色牢度可在同一基础上进行比较。目前已发展到2/1、1/1、1/3、1/6、1/12及1/25共六档标准深度。 3、染色深度： 以染料质量与纤维质量的百分比表示（即O.M.F)，染料浓度根据不同色泽而不同。 4、变色： 经一定的处理后，染色织物的颜色在色光、深度或艳度方面的变化，或这些变化的综合结果。 5、沾色： 经一定的处理后，染色织物的颜色向相邻的贴衬织物上转移，对贴衬织物的沾污。 6、评定变色用灰色样卡： 色牢度试验中，为评定染色物的变色程度而使用的标准灰色样卡，一般称为变色样卡。7、评定沾色用灰色样卡：
荧光定量PCR办法探针法VS染料法
荧光定量P C R办法探针 法V S染料法 Ting Bao was revised on January 6, 20021
荧光定量PCR方法：探针法VS染料法？ 荧光定量PCR又称qPCR，是一项非常常见的分子生物学实验技术。荧光定量PCR荧光为基础对核酸进行定量分析，其应用非常广泛，可以用于检测基因的表达量（RNA的丰度），验证表达谱芯片或转录组测序的数据，确定病原体的载量，对片段的拷贝数（CNV）进行分析，对基因进行分型等等。 大部分研究者主要的应用是对基因的表达量进行测定，其原理为通过监控反应体系中荧光强度的变化，记录检测荧光达到阈值时的循环数（Ct值）。从理论上说，起始模板量和Ct值密切相关，因此我们通过判读Ct值从而对样本进行定量。 在进行荧光定量PCR时，从技术和产品来说，我们往往会有许多选择，尤其是方法的选择，对最终结果的准确性至关重要。荧光定量PCR从方法上来说可以分为染料法和探针法两种。 探针法染料法 一、染料法 在国内，染料法一般采用DNA染料SYBRGreenⅠ，染料法使用简单，成本也相对较低，因此会有很多国内研究者会选择使用染料法进行后续实验。在染料法荧光定量PCR实验中，染料能够与双链结合，从而发光，而在游离状态下，SYBRGreenI发出微弱的荧光。所以，一个反应发出的全部荧光信号与出线的双链DNA量呈比列，且会随扩增产物的增加而增加。但是染料法检测的是体系中的所有双链DNA,因此一些非特异性扩增或者引物二聚体的出现，会极大的影响真实结果的准确性。为此，一些厂商提供ROX作为内部荧光参考标准，用来校正背景，但是即便如此，染料法特异性的问题依旧无法与探针法相比。另外染料法无法在同一个反应中检测多个目的片段，对于复杂序列，如果难以扩增的话，也会受到脱靶效应（如引物二聚体）的影响。在这种情况下，就需要在实验前期进行熔解曲线分析，判断扩增所得产物是否只有一种。