DNA protocol(2016)

OMEGA Mollusc DNA Kit (DNA提取方法)

OMEGA:D3396-02

第一步：加omega裂解夜（ML1，buffer ML1，裂解组织）220微升，剪碎，再加钢珠到圆底离心管内，振荡器打碎/3次，每次30秒，6000转/分钟离心1分钟（如果用剪刀或匀浆器可以不用离心这个步骤）;

第二步：加25微升Proteinase K(OB)，分解蛋白、55度孵育4-5小时，或过夜;

答：OB是蛋白酶，降解蛋白质的

OB是什么氯仿和异戊醇的混合溶液（24:1），这个步骤是不是没有写？？

答：这个试剂盒没有加氯仿和异戊醇的混合溶液这一步。

第三步：加BL220u l,震荡混匀（使组蛋白同DNA分离），70度孵育10min，瞬时离心是不是buffer MBL??

答：按照你的说明说做，如果不清楚，你可以把你的试剂盒的说明书扫描发给我，我看看再回你。你的试剂盒好像和我们用的不完全一样。

第四步：加220ul无水乙醇，振荡器混匀，然后6000-9000转/分钟离心60秒。（使DNA在溶液中析出）

第五步：吸取700ul上清液至离心柱上。10000转/分钟离心60秒

第六步：加HBC 500ul，10000转/分离心30s，换至新的收集柱。（清洗杂质）

第七步：加wash buffer 700ul，10000转30秒，倒掉上清液，然后再加入wash buffer 700ul，10000转30秒，（清洗RNA，保证DNA纯度）。

第八步：清洗完后，倒掉上清液，空转2分钟，把离心柱放入1.5mlEP管中。（甩掉残存溶液）

第八步：把the elution buffer放在70℃水域锅内（把DNA溶解液加热到70℃），加70℃the elution buffer 80ul，静置2分钟，8000-9000转/分钟离心1min，1.5ml EP管内即为提取的总DNA.

第九步：编号。

体系：

Mix:15ul

双蒸水：11ul 28ul(2ul模板加28ul的体系) Primer：各1ul

模板2ul