丹参预处理对大鼠视网膜缺血再灌注的保护作用及Bcl-2、Caspase-3表达的影响-杨先梅
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第17卷 第8期 2015?年?8?月
辽宁中医药大学学报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 17 No. 8 Aug .，2015
视网膜属于神经组织，其血供来自于视网膜中
央动脉，该动脉属于终动脉，所以，视网膜在缺血环境中极易受到损伤。RIRI 是临床常见的眼科疾病之一，常见的原因如视网膜中央动脉阻塞、高眼压以及眼外伤等，而有效挽救视网膜缺血的措施是早期恢复血供，然而临床发现，缺血后血液再灌注反而加重视觉功能的损害，甚至是造成不可逆性损伤。造成视网膜缺血再灌注损伤的机制比较复杂，是多种因素综合反应的结果，主要包括氧自由基的
损伤、细胞内钙超载等，这些因素均可以导致节细
胞凋亡。因此，积极防治视网膜节细胞的凋亡，并掌握其作用机制成为临床治疗视网膜缺血再灌注损伤的重点。
丹参作为传统活血化瘀中药，具有抗肿瘤、抗菌、抗炎、抗氧化和抗凋亡等作用，被广泛用于治疗心脑血管疾病。从理论推测，丹参对视网膜缺血再灌注损伤具有一定的防治作用，但其作用机制尚不明确。本实验通过观察丹参对RIRI 后神经
丹参预处理对大鼠视网膜缺血再灌注的保护作用及Bcl-2、Caspase-3表达的影响
杨先梅1，程辉2，郭英2
（1.菏泽家政职业学院，山东?菏泽?274300；2.齐鲁医药学院，山东?淄博?255213）
摘 要：目的：探讨大鼠视网膜缺血再灌注损伤（retinal?ischemia-reperfusion?injury，RIRI）过程中，丹参对RIRI
的保护作用以及对Bcl-2、caspase-3蛋白表达的影响。方法：随机选取66只Wistar 大鼠，分为正常对照组、缺血再灌注组、丹参预处理组，通过对前房加压制作RIRI 模型。后两组各分为6、12、24、48、72?h?5个亚组，HE 染色观察视网膜组织学变化，SABC 法检测Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的变化。结果：Bcl-2、Caspase-3蛋白在正常组表达较弱。缺血再灌注组和丹参预处理组6?h 开始表达，24?h 显著增强，48?h 下降，72?h 表达减弱，变化趋势基本一致。但是，两组比较，丹参预处理组在不同时间点Bcl-2蛋白的表达均明显强于缺血再灌注组，Caspase-3蛋白表达明显减弱，差异具有统计学意义（P <0.01）。结论：丹参预处理对RIRI 可以通过减少神经节细胞的凋亡起到保护作用，其作用机制可能是调节Bcl-2?、Caspase-3蛋白表达来实现。
关键词：丹参；视网膜缺血再灌注损伤；Bcl-2；Caspase-3
中图分类号：R774.1 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2015) 08- 0033- 04
收稿日期：2014-12-17基金项目：山东省万杰医学院校级课题（X13ZK16）作者简介：杨先梅（1970-），女，山东菏泽人，副教授，学士，研究方向：病理学。通讯作者：程辉（1980-），男，山东淄博人，讲师，硕士，研究方向：神经解剖学。
Protective Effect and Bcl-2 Caspase-3 Expression of Salvia
Pretreatment on Retinal Ischemia-reperfusion YANG Xianmei 1，CHENG Hui 2，GUO Ying 2
（1.Heze Housekeeping Institute，Heze 274300，Shandong，China；
2.Qilu Medical University，Zibo 255213，Shandong，China）
Abstract：Objective ：To study the protective effect and Bcl-2，caspase-3expression of Salvia
pretreatment on retinal ischemia-reperfusion. Methods ：Sixty six Wistar rats were randomly divided into normal control group，ischemia-reperfusion group and salvia pretreatment group. The model of retinal ischemia-reperfusion injury was constructed by increasing the intraocular pressure. The ischemia-reperfusion and salvia pretreatment group were divided into 6 h，12 h，24 h，48 h，72 h five subgroups according to the different reperfusion time. Observe the structural changes in retina by HE staining. The immunohistochemitry were used to measure changes of Bcl-2 and caspase-3 protein levels in retinal. Result ：The positive expression of Bcl-2 and caspase-3 protein was weak in normal group. At the ischemia-reperfusion and salvia pretreatment groups，the expression of Bcl-2 and caspase-3 protein began to increase at 6 hours after reperfusion，the expression reached the peak at 24 hours after reperfusion，and after 48 hours the expression began to decrease. There were had the same trend between the ischemia-reperfusion group and salvia pretreatment group. However，the salvia pretreatment group compared with ischemia-reperfusion group，Bcl-2 expression was significantly stronger and caspase-3 expression was significantly reduced. There was significant difference between two groups（P <0.01）. Conclusion ：Salvia pretreatment can protect the retina by reducing RGCs apoptosis on RIRI. The mechanism may be to achieve by regulating the expression of Bcl-2 and Caspase-3 protein.
Key words：salvia；RIRI；Bcl-2；Caspase-3DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2015.08.011
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节细胞凋亡的影响，明确丹参对RIRI的保护作用；测定Bcl-2、Caspase-3蛋白表达，探讨可能的作用机制。
1 材料和方法
1.1?材料
实验用成年Wistar大鼠66只，雌雄不限，体重（220±30）g，随机分为正常对照组（6只）、缺血再灌注组（30只）和丹参预处理组（30只）。正常对照组，不做任何处理；缺血再灌注组和丹参预处理组在造模前5 d分别给予腹腔注射生理盐水和丹参注射液0.2 mL，每天2次，直至处死。造模成功后根据观察时间不同，分为6 h、12 h、24 h、48 h和72 h 5个亚组，每组6只。10%胎牛血清、Rabbit Anti-Bcl-2、Caspase-3抗体、生物化素山羊抗兔抗体、DAB显色试剂盒均购自北京中杉生物公司，其他相关设备均由山东万杰医学院基础实验中心提供。
1.2?方法
1.2.1?动物模型的建立
视网膜缺血-再灌注模型是通过自制装置[1]升高前房压力来实现。方法如下：首先腹腔注射戊巴比妥30 mg/kg麻醉大鼠。待大鼠麻醉后，将大鼠固定好，眼睛滴加局麻药和散瞳剂。然后，将输液器始端、血压计输气管和三通管相连，输液器尾端连接21G针头，将针头经角膜巩膜缘刺入前房，注意保护晶状体，将血压计数值调节到125 mmHg并保持60 min，根据连通器原理，此时水银计显示的压力与大鼠眼内压相等。观察发现结膜苍白，直接检眼镜观察，视网膜中央动脉血液断流，此时可确定视网膜缺血。去掉压力后，球结膜再次充血，检眼镜可见视网膜血供恢复。整个过程注意无菌操作，术后预防眼部感染。视网膜缺血再灌注组和丹参处理组，每个时间点取4只，脱臼处死后，用剪刀将大鼠眼周围软组织分离，用21G针头在角膜巩膜缘处刺一小孔，先放入FAA固定液中浸泡1 min，再快速放入体积分数10%中性甲醛固定液中固定24 h，流水冲洗1 h，梯度酒精脱水，在脱水至体积分数95%乙醇时去除角膜、虹膜和晶状体，然后继续脱水，将得到的视网膜制备石蜡切片。
1.2.2?HE染色
常规脱蜡入水，蒸馏水冲洗，苏木素染色5~10 min，自来水充分冲洗15 min，70%盐酸乙醇分化10 s，1%氨水返蓝20 s，自来水冲洗15 min，蒸馏水冲洗，0.5%伊红染色，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树脂封片，光镜下观察视网膜组织结构变化。
1.2.3?SABC免疫组织化学法
石蜡切片常规脱蜡入水，封闭内源性过氧化物酶：新鲜配制0.3％H2O2-甲醇，室温处理15 min，0.01 M PBS冲洗2 min×3次，抗原热修复：将切片放在盛满0.01 M枸橼酸盐缓冲液（PH=6.0）的小容器中，微波炉加热至即将沸腾时断电，间隔5~10 min后，反复2~3次。自然冷却后用0.01 M PBS（pH 7.2~7.4）冲洗，2 min×3次，滴加5%BSA封闭液，室温孵育20 min，滴加稀释的一抗，4 ℃冰箱过夜，37 ℃温箱复温60 min，0.01 M PBS冲洗，2 min×3次，滴加生物
素化的羊抗大鼠IgG抗体，37 ℃孵育60 min，DAB显色，苏木素轻度复染，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，显微镜下观察。
1.3?统计学分析
应用SPSS16.0软件进行统计学分析，所有计数资料采用均数±标准差（x—±s）表示，组间比较采用t检验，同一组内不同时间点采用单因素方差分析，以P<0.01为差异有统计学意义。
2 结果
2.1?HE染色观察视网膜组织结构变化
视网膜由分界清楚的10层结构组成。正常组视网膜结构清晰完整，RGCs呈单层排列，胞核大，染色较淡，胞浆少，光感细胞层列整齐致密，无空泡化；内、外核层，内、外网状层以及神经纤维层形态结构正常（图1）。缺血再灌注6 h后，出现RGCs空泡化，视网膜水肿；12 h后，RGCs层和内核层空泡化加重，间质疏松，视网膜水肿；24 h 后可见RGCs核固缩明显，内核层细胞排列紊乱，内丛状层变薄；48 h后，RGCs核固缩更加明显；
72 h后，内丛状层变薄，RGCs细胞数目进一步减少，空泡化和核固缩明显，排列稀疏紊乱（图2）。丹参预处理组在各个时间点与缺血再灌注组变化趋势一致，但是，细胞空泡化、核固缩、内丛状层厚度等病理变化减轻，细胞数目减少减轻（图3）。
2.2?SABC法测定Bcl-2、Caspase-3蛋白表达
Bcl-2和Caspase-3蛋白阳性表达存在于细胞浆中，成黄色或者棕黄色。正常组织中未见Bcl-2阳性表达，缺血再灌注组6 h后Bcl-2开始少量表达，12 h后Bcl-2阳性表达增强，24 h后表达进一步增强，48 h达到高峰，72 h后下降（P<0.01）（图4）。丹参处理组在各个时间点与缺血再灌注组变化趋势一致，但是Bcl-2阳性表达比缺血再灌注组明显增强，两组在各时间点比较具有统计学意义（P<0.01）（图5，表1）。
缺血再灌注组6 h后蛋白开始少量表达，12 h后Caspase-3阳性表达增强，24 h后达到高峰，48 h后逐渐减弱（图6）。丹参处理组在各个时间点与缺血再灌注组变化趋势一致，但是Caspase-3蛋白阳性表达比缺血再灌注组明显较弱，两组在各时间点比较具有统计学意义（P<0.01）（图7，表2）。
图1 正常视网膜形态结构
图2 缺血再灌注组72 h形态 结构
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?
图3 丹参预处理组72 h 图4 缺血再灌注组 形态结构 Bcl-2
表达
图5 丹参预处理组Bcl-2 图6 缺血再灌注组 表达 Caspase-3
表达
图7 丹参预处理组Caspase-3表达
表1 视网膜缺血再灌注组与丹参处理组不同
时间Bcl-2阳性表达细胞数（x —±s ）观察时间
n 缺血再灌注组丹参预处理组t 值P 值6 h 629.75±2.0430.40±2.36 3.2400.00312 h 630.30±1.1234.41±3.46 3.0240.00324 h 644.80±2.0845.10±2.12 5.2920.00248 h 642.70±1.4742.87±1.2410.0240.00072 h
629.30±1.5830.04±1.77 5.0650.002
表2 视网膜缺血再灌注组与丹参处理组不同
时间Caspase-3阳性表达细胞数（x —±s ）观察时间
n 缺血再灌注组丹参预处理组t 值P 值6 h 625.75±1.0421.32±2.16 3.1340.00312 h 632.40±2.0229.31±2.58 4.2750.00224 h 644.77±2.0836.27±1.72 5.2450.00448 h 640.70±1.6528.78±2.2511.4240.00072 h
629.10±1.7422.42±1.67 5.0650.003
3 讨论
视网膜缺血再灌注损伤的发病机制较为复杂，是多种因素综合作用的结果，如氧自由基的损伤[2]、兴奋性氨基酸[3]、凋亡及凋亡基因的调控[4]、一氧
化氮[5]
和钙超载等。Bcl-2基因是Tsujimato 等[6]于1984年从滤泡性淋巴瘤中分离出来的一种癌基，Bcl-2是凋亡抑制基因，可能通过调节线粒体膜通道的通透性来稳定线粒体，阻止线粒体Cyt-c 等凋亡相关蛋白，抑制凋亡的发生。Caspase-3蛋白存在于细胞浆之中，损伤因素的作用下，Cyt-c 向胞浆内释放，与Apaf-1结合，在特定位点降解Caspase-3前体，发挥其活性，促进细胞凋亡[7]。
丹参，为唇形科植物丹参的干燥根，是中药常见的活血化瘀药。主要成分可分为脂溶性成分和水溶性成分两类。脂溶性成分主要有丹参酮Ⅰ、Ⅱ
A、ⅡB 等，水溶性成分包括丹酚酸、丹参素等[8]
。动物实验表明丹参提取物具有降血压、保护心肌、防治心肌梗死、改善微循环等作用[9]。李岱等[10]在不同的时间点检测视网膜缺血再灌注损伤中视网膜中MDA 的含量，ERG 中被标化的b 波振幅等指标，发现复方丹参注射液可以通过减少氧自由基的含量，减轻细胞的损伤，并可以在功能上有助于ERG b 波的恢复，对视网膜缺血再灌注损伤具有保护作用。代应辉等[11]通过电镜观察视网膜的超微结构，说明复方丹参注射液对视网膜有保护作用。本实验同样验证了丹参对视网膜缺血再灌注损伤具有保护作用，通过免疫组织化学检测检测Bcl-2、Caspase-3蛋白表达，发现正常组织中未见Bcl-2阳性表达；缺血再灌注组6 h 后Bcl-2开始少量表达，12 h 后Bcl-2阳性表达增强，24 h 后表达进一步增强，48 h 达到高峰，72 h 后下降。丹参处理组在各个时间点与缺血再灌注组变化趋势一致，但是Bcl-2阳性表达比缺血再灌注组明显增强。缺血再灌注组6 h 后Caspase-3蛋白开始少量表达，12 h 后Caspase-3阳性表达增强，24 h 后达到高峰，48 h 后逐渐减弱。丹参处理组在各个时间点与缺血再灌注组变化趋势一致，但是Caspase-3蛋白阳性表达比缺血再灌注组明显较弱。进一步证实了凋亡在RIRI 中发挥重要作用，主要机制可能与Bcl-2、Caspase-3的表达失衡有关。丹参对RIRI 的保护机制可能与通过调节Bcl-2、Caspase-3的表达有关。
综上所述，丹参可减轻视网膜缺血再灌注损伤所致的视网膜病理性改变，减少节细胞的凋亡数。凋亡抑制基因Bcl-2的上调表达和Caspase-3的下调表达，可能是丹参对视网膜缺血再灌注损伤起保护作用的重要机制之一。◆
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恶性肿瘤是当前危害人类健康的严重疾病，化学治疗是应用于恶性肿瘤全身治疗的主要方法之一，但大部分抗肿瘤化学药物在杀死肿瘤细胞的同时，也严重损伤了正常细胞，因此寻找高效低毒的抗肿瘤药物具有重要意义。多糖是构成生命的四大基本物质之一，广泛存在于动物、植物、微生物中，具有广泛的生物学功能。研究表明，多糖具有抗肿瘤、抗
炎、抗病毒、抗氧化等多种功能，并且对人体的毒副作用相对较小。其中多糖抗肿瘤作用的主要机制为对肿瘤细胞直接抑制作用，提高宿主免疫功能，诱导肿瘤细胞的分化，以及通过抗突变和抑制肿瘤血管形成而发挥抗肿瘤作用[1-2]。
桦菌芝为多孔菌科植物木蹄的菌体[Pyropo-lyporusfomentaries（L1exFr1）Teng]，多寄生于桦及
桦菌芝多糖GF对S180荷瘤小鼠抑瘤作用及细胞超微结构的影响
齐彦1，郭丽新1，冯哲2，魏博洋1
（1.黑龙江中医药大学，黑龙江?哈尔滨?150040；2.西南科技大学生命科学与工程学院，四川?绵阳?621010）摘 要：
目的：研究桦菌芝多糖G-F 组对荷瘤小鼠（S180）的抑瘤作用及对肿瘤组织细胞超微结构的影响，并探讨其抗肿瘤机制。方法：建立?S180?小鼠动物模型，随机分为对照组、桦菌芝多糖G-F 低剂量组、桦菌芝多糖G-F 中剂量组、桦菌芝多糖G-F 高剂量组、猪苓多糖组。连续给药12?d 后，利用颈部脱臼方法处死小鼠，将剥离的各组肿瘤组织分别称重，计算其抑瘤率；通过透射电镜观察S180荷瘤小鼠肿瘤组织细胞超微结构变化。结果：桦菌芝多糖G-F 高、中剂量组抑瘤率分别为41.84%、41.38%，与模型对照组比较（P <0.01），具有显著性差异；通过透射电镜形态学观察显示，桦菌芝多糖能明显改善小鼠肿瘤组织细胞的病理形态学变化，诱导肿瘤细胞凋亡。结论：桦菌芝多糖G-F 组具有抑制S180荷瘤小鼠肿瘤生长和诱导细胞凋亡的作用。
关键词：桦菌芝多糖G-F 组；S180；电镜；形态学观察
中图分类号：R979.1 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2015) 08- 0036- 03
收稿日期：2014-12-02
基金项目：黑龙江省中医药管理局资助项目（ZHY10－Z45）作者简介：齐彦（1970-），女，河北保定人，高级实验师，硕士，研究方向：生物化学、机能方面研究工作。通讯作者：郭丽新（1967-），女，黑龙江宁安人，副教授，博士，研究方向：生物化学与分子生物学教学与科研工作。
Effects of Pfspgf on Anti- tumor and Cell Ultrastructure in S180 Bearing-mice QI Yan 1，GUO Lixin 1，FENG Zhe 2，WEI Boyang 1
（1.Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 150040，Heilongjiang，
China；2.College of Life Science and Technology，Southwest University of
Science and Technology，Mianyang 621010，Sichuan，China）
Abstract：Objective ：To explore the mechanism of its anti-tumor，research on effect of pyropolyporus
fomentaries sporophore polysaccharide GF content on anti- tumor and cell ultrastructure in S180 Bearing-Mice. Methods ：Establish S180 mice animal model，the mice randomly divided into the model control group，grifola polysaccharide group and modeling group and PFSPGF high，middle，and low-dose groups. check tumor tissues weighing，calculation of inhibition rate，carried out by electron microscopy observation of tumor tissues ultrastructure. Results ：The inhibition rate of pyropolypous fomenarius sporophore Polysaccharides on the S180 tumor-bearing mice show that the high，middle and low dose group compared with model control group inhibit tumor growth of the S180 tumor mice in varying degrees，the middle and high dose group compared with the model control group（P <0.01）are obviously lower；the inhibition rate are 41.84%，41.38%；through the cell morphology，pyropolypous fomenarius sporophore polysaccharides GF can promote tumor cell apoptosis and necrosis. Conclusions ：Pyropolypous fomenarius sporophore Polysaccharides GF has a clear anti-tumor effect on the s180 tumor-bearing mice，promote tumor cell apoptosis and necrosis.
Key words：pyropolypous fomenarius sporophore polysaccharides GF；S180；electron microscope；morphologic observation
DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2015.08.012
丹参的作用与功效
一、心血管系统的作用 1. 强心加强心肌收缩力、改善心脏功能，不增加心肌耗氧量 2. 对血管作用扩张冠脉，增加心肌血流量；扩张外周血管，血流增加；脑血流量下降 3. 抗血栓形成提高纤溶酶活性；延长出、凝血时间；抑制血小板聚集（提高血小板内cAMP水平抑制TXA2合成）；改善血液流变学特性（血粘度降低、红细胞电泳时间缩短） 4. 改善微循环 二、促进组织的修复与再生作用 1、促进组织的修复与再生丹参制剂治疗：坏死心肌清除快；纤维母细胞分化、胶原纤维形成较明显；肉芽形成比较成熟。局部淤血减轻、血液循环改善，愈合时间缩短。 2、抑制过度增生对过度增生的纤维母细胞有抑制作用。 三、保肝改善肝微循环。 四、抗菌丹参制剂中含有隐丹参酮、二氢丹参酮，对体外的葡萄球菌、大肠杆菌、变性杆菌有抑制作用 食疗价值编辑 唇形科草本植物丹参的根和根茎。产于江苏、安徽、河北、四川等地。春、秋采挖，洗净，晒干。切片、段，生用或酒炒用。 [性能]味苦，性微寒。能活血化瘀，凉血，安神。 [参考]含丹参酮、原儿茶醛、原儿茶酸、丹参素、维生素E等。 能扩张冠状动脉，增加冠脉流量，改善心肌缺血、梗塞和心脏功能，调节心律，并能扩张外周血管，改善微循环；能提高机体耐缺氧能力；有抗凝血，促进纤溶，抑制血小板凝聚，抑制血栓形成的作用；能降低血脂，抑制冠脉粥样硬化形成；能抑制或减轻肝细胞变性、坏死及炎症反应，促进肝细胞再生，并有抗纤维化作用；能缩短红细胞及血色素的恢复期，使网织细胞增多，能促进组织的修复，加速骨折的愈合；有中枢神经有抑制作用；有抗肿瘤作用；能增强机体免疫功能；能降低血糖；对结核杆菌等多种细菌有抑制作用。 [用途]用于血瘀所致月经不调、痛经、经闭，产后瘀滞腹痛；冠心病心绞痛，动脉粥样硬化；慢性肝炎、肝硬化，腹腔包块或肿瘤；慢性肺心病，支气管哮喘；血不养心或心火偏亢，心悸不安，心烦失眠。 [用法]一日5~15g。煎汤，浸酒，泡茶。 [附方] 1，田七丹参：三七100g，丹参15g。水煎取浓汁，加白糖适量，干燥成颗粒。每次20g，温水溶化饮。亦可将二药研为细末，每次10g，加糖适量，泡茶饮。 本方用二药活血化瘀，并降血脂，增加冠脉流量。用于冠心病心绞痛。 2，丹参饮：丹参15g，檀香、砂仁各5g。以水先煎丹参，后下檀香、砂仁煎沸饮。可加适量红糖调味。 源于《时方歌括》。本方以丹参活血化瘀，檀香、砂仁行气止痛。用于血瘀气滞，脘腹疼痛。现亦用于冠心病心绞痛。 3，丹红酒：丹参60g，红花、月季花各15g。以白酒500g浸渍。每次饮1~2小杯。 本方以三者活血化瘀，调经。用于血瘀经闭，月经不调，痛经。亦用于病心病心绞痛。 4，丹参玉楂饮：丹参、玉竹、山楂各15g。煎水饮。 本方以丹参活血化瘀，并同玉竹、山楂降血脂。用于冠心病心绞痛，动脉粥样硬化，高脂血症。
大鼠视网膜神经细胞的原代培养(译文)
大鼠视网膜神经细胞的原代培养 摘要 目的:在前人建立的方法上优化SD 大鼠视网膜神经细胞体外培养的技术和方法，为后续研究提供实验基础。 方法:使用胰酶消化法分离新生1 ～ 3d SD 大鼠视网膜神经细胞，以DMEM/F12 为培养基体外培养，免疫组织化学染色的方法进行鉴定。 结果:观察光镜下培养的细胞贴壁生长，部分细胞伸出突起，且有些突起相互连接。免疫细胞化学染色显示，培养的细胞大多数抗神经元特异性烯醇化酶(NSE) 抗体反应阳性。结论:视网膜神经细胞体外培养成功为进一步进行视网膜疾病的研究创造了条件。 关键词:细胞培养; 视网膜神经元; 胰蛋白酶消化法; 神经元特异性烯醇化酶 引言 一个世纪前，从青蛙身上剥离的神经管片段仍能在生理液中维持几天的活性，使得越来越多的神经纤维得到的实时观测以来，体外培养技术已经广泛的应用于生物技术领域。【1】在没有了完整动物的复杂性，体外培养的方法可以大大提高对视网膜的基本属性和环境的适应性的了解。在体外系统中，这个界定的实验条件可以很容易设定和维持。这提供了一个稳定的辅助药理学和分子操纵的平衡，同时保持了完整的组织复杂表型特征。在这里我们根据一些成功方法报告探讨一下大鼠视网膜神经细胞的原代培养技术。【2-3】 材料与方法 动物：实验中使用的所有SD大鼠幼崽均是从青岛实验动物中心根据眼科和视觉研究中动物的ARVO声明，同时保留了出生后1-3SD大鼠的相对温度和湿度条件下获得的SD大鼠幼崽 材料：DMEM/F12培养液和胎牛血清购自Gibco公司（美国），兔抗大鼠神经元特异性烯醇化酶（NSE）单克隆抗体，兔抗大鼠神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）多克隆抗体，羊抗兔IgG 和HRP-链霉亲和素购自中山Goldbridge生物技术有限公司（北京，中国）。所有其他试剂均为Sigma公司（圣路易斯，密苏里州，美国）。 方法： 预涂层的聚-D-赖氨酸组织培养皿为了使视网膜神经细胞，紧贴组织培养皿，聚-D-赖氨酸添加到被预先放置盖玻片的24孔板的孔中。10分钟后，去除聚-D-赖氨酸，凝固聚-D-赖氨酸孔用无菌蒸馏水冲洗三次，在37℃培养箱隔夜干燥，然后立即使用该板块。 视网膜剥离 1-3天后处死前被麻醉的SD大鼠被转移到Hank，s平衡盐溶液。在无菌条件的光学显微镜下，用注射器的针头刺穿角膜的边缘来打开SD大鼠的每只眼睛。然后用剪刀和镊子剪开针口，小心取出眼睛前部的眼角膜。移除眼球和大部分晶状体后，剩下的两个松散的联结组织和视网膜色素上皮细胞层，轻轻地剥离开来，用镊子轻轻捏开，从而完全取出视网膜视神经组织。 视网膜的分离和培养在37℃下将视网膜放在0.125%的胰蛋白酶溶液中消化15分钟。消化时间结束后，去除消化液，将组织移入Dulbecco's改良Eagle培养基：含10％胎牛血清及营养成分混合的F-12（DMEM/F12培养液），过400目细胞筛，1500rpm离心5分钟，弃上清，将细胞悬浮在含10％胎牛血清的DMEM/F12培养液中研磨。用血球计数板检查细胞密度，并把细胞接种在细胞密度为1.0×106个/cm2的涂有聚-D-赖氨酸（0.1mg/ml）的24孔板中，放在37℃，CO2浓度为5%的加湿培养箱中培养。培养的视网膜细胞也可能生长于盖玻片内的这些小孔之中。在接种细胞后24小时,将5-溴-2'-脱氧尿苷（20μg /ml）加入培养基抑制非神经细胞。
丹参的功效与作用
丹参功效与作用 丹参的功效： 丹参又名赤参，紫丹参，红根等。有活血调经，祛瘀止痛，凉血消痈，清心除烦，养血安神。主治妇女月经不调；痛经；经闭；产后瘀滞腹痛；心腹疼痛；症瘕积聚；热痹肿痛；跌打损伤；热入营血；烦躁不安；心烦失眠；痈疮肿毒。别名：郄蝉草，赤参；木羊乳、逐马、奔马草、山参、紫丹参、红根、山红萝卜、活血根、靠山红、红参、精选酒壶根、野苏子根、山苏子根、大红袍、蜜罐头、血参根、朵朵花根、蜂糖罐、红丹参。 丹参炭为丹参片用武火炒至焦黑，存性，清水灭尽火星。取出晾干，然后入药者。偏于止血。 鳖血丹参又名鳖血拌丹参。为丹参片用适量鳖血拌匀，晾干后入药者。偏于养血。 丹参的功效与作用 炒丹参为丹参片用文火炒至深黄色，略见焦斑，取出摊晾，而后入药者。 酒丹参又名酒炒丹参。为丹参片用黄酒淋洒，闷透，文火微妙入药者。增强活血之功。 醋丹参又名醋炒丹参。为丹参片用米醋淋洒，微闷，文火微炒入药者。增强止痛之功。 功效分类：活血祛瘀药；安神药。 别名：郄蝉草，赤参；木羊乳、逐马、奔马草、山参、紫丹参、红根、山红萝卜、活血根、靠山红、红参、精选酒壶根、野苏子根、山苏子根、大红袍、蜜罐头、血参根、朵朵花根、蜂糖罐、红丹参。 性味：味苦；性微寒。 归经：归心；心包；肝经。 功效：活血祛瘀；调经止痛；养血安神；凉血消痈。 主治：妇女月经不调；痛经；经闭；产后瘀滞腹痛；心腹疼痛；症瘕积聚；热痹肿痛；跌打损伤；热入营血；烦躁不安；心烦失眠；痈疮肿毒。 用法用量：内服：煎汤，5-15g，大剂量可用至30g。 用于温病热入营血、身发斑疹、神昏烦躁。常与鲜地黄、水牛角、玄参等药
同用。 用于心悸怔忡、失眠。常与酸枣仁、柏子仁等药配合同用。 用于胸肋胁痛，风湿痹痛，症瘕结块，疮疡肿痛，跌仆伤痛，月经不调，经闭痛经，产后瘀痛等。治疗胸肋疼痛、症瘕结块，以及月经不调、经闭经痛具有良效，常与川芎配伍应用。在治疗胸腹疼痛属于气滞血瘀方面，往往配合砂仁、檀香等药同用。 丹参的作用： 丹参治月经不调，闭经痛经，产后瘀滞腹痛丹参功善活血祛瘀，性微寒而缓，能祛瘀生新而不伤正，善调经水，为妇科调经常用药。其性偏凉，对之证尤为相宜。亦常配川芎、益母草等用药。若配吴茱萸、肉桂等用，可治寒凝学滞者。 丹参治热病烦躁神昏，心悸失眠本品入心经，既可清热凉血，又可除烦安燥。既能活血又能养血以安神定志。用于热病邪心营之烦躁不寐，甚或神昏，可配伍生地、玄参、黄连、竹叶等。用于血不养心之失眠、心悸，常与生地、酸枣仁、柏子仁等同用。 丹参治血瘀心痛，脘腹疼痛，跌打损伤，风湿痹症本品善能通行血脉，祛瘀止痛，广泛应用于各种淤血病证。若治血脉瘀阻之胸痹心痛，脘腹疼痛，可配伍砂仁、檀香;治跌打损伤，肢体淤血作痛，常与当归、乳香、没药等药同用;治风湿痹证，可配伍防风、秦九等祛风湿药用。 丹参治疮痈肿毒本品性寒，既能凉血活血，又能清热消痈，可用于热毒瘀阻引起的疮痈肿毒等药用。如治乳痈初起，可与金银花、连翘等同用。 1、丹参治妇人经脉不调，或前或后，或多或少，产前胎不安，产后恶血不下；兼治冷热劳，腰脊痛，骨节烦疼：用丹参洗净切晒为末．每服二钱温酒调下．（《妇人良方》丹参散） 2、丹参治经水不调：丹参一斤，切薄片，于烈日中晒脆，为细末，用好酒泛为丸，每服三钱，清晨开水送下．（《集验拔萃良方》调经丸） 3、治心腹诸痛属半虚半实者：丹参一两，檀香、砂仁各一钱半，水煎服．（《肘方歌括》丹参饮） 4、丹参治阴疼痛或肿胀：丹参一两，槟榔一两，青橘皮半两（汤浸去白瓤焙），茴香子半两，上药捣细罗为散，每于食前以温酒调下二钱．（《圣惠方》丹参散）
大鼠视神经切断后视网膜Muller细胞及小胶质细胞变化特点
大鼠视神经切断后视网膜Muller 细胞及小胶质细胞变化特点 唐茂丹1），陈家波1），孙永芳1），童世琼1），武丽红2），吴春云2 ）（1）昆明医学院05级临床医学（眼视光学专业）；2）组织胚胎学教研室，云南昆明 650031） ［摘要］目的观察视网膜M uller 细胞和小胶质细胞在大鼠视神经切断后的变化特点．方法应用大鼠视 神经完全横断模型，随机分为术后1d 、3d 、7d 、14d 4个损伤组和假手术组（ 每组n ＝5）；分别用M uller 细胞和小胶质细胞特异性标记物谷氨酰胺合成酶（GS ）和OX-42，进行免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP ）法染色，以显示视网膜M uller 细胞和小胶质细胞的变化．结果在视神经切断后，大鼠视网膜M uller 细胞GS 阳性产物立即增粗、深染，并与周围细胞紧密联系在一起，3d 达高峰，14d 明显减弱；小胶质细胞OX-42的阳性产物表达在视神经切断后7d 明显增强，14d 达高峰．结论 视神经切断后大鼠视网膜 M uller 细胞反应性增生，小胶质细胞被激活，但反应高峰晚于M uller 细胞，其作用有待进一步研究． ［关键词］视神经切断；M uller 细胞；小胶质细胞；大鼠 ［中图分类号］R774；R779.12［文献标识码］A ［文章编号］1003－4706（2010）01－0001－05 Immunohist ochemical St udy of Muller Cells and Micr oglia Cells Responses t o Opt ic Ner ve Tr ansect ion in Rat s TANG Mao －dan 1），CHEN Jia －bo 1），SUN Yong －fang 1），TONG Shi －qiong 1） ， WU Li －hong 2），WU Chun －yun 2 ） （1）2005Year of Clinical Medicine （Ophthalmology and Optometry ）；2）Dept.of Histology and Embryology ，Kunming Medical University ，Kunming Yunnan 650031，China ） ［Abstract ］Objective To study features of the retinal M uller cells and microglia cells in rats after optic nerve transection ．Methods We built the optic nerve transection model which was randomly divided into five groups ：four injury groups （n ＝5in each group ：the 1，3，7，and 14day groups post optic nerve injury ），control group （n ＝5）．Then we observed the changes of M uller cells and glial cells which is immunohistochemically streptavidin-perosidase stainned by using anti-GS （glutamine synthetase ）and anti-OX-42antibody （amoeba-like glial cell line-specific marker ）．Results The expression of （GS ）-immunoreaction （GS-IR ）increased significantly compared to the control group ．The most significant change occurred in the 3-day group ．the expression of GS-IR had a descending tendency in the 7-day and 14-day groups compared to the 3-day group ．And immunoreaction of 0X-42increased significantly compared to the control group ，at day 7post-axotomy were markedly expressed ，and in 14day group reached the peak ．Conclusions Rat retinal M uller cells are reactive gliosis after optic nerve transection and have roles of protecting the retinal neurons and repairing the injury retina ；The response of microglial cell are the same as M uller cells basically with the exception 昆明医学院学报2010，（1）：1～4Journal of Kunming Medical University CN 53-1049/R ［基金项目］国家自然科学基金资助项目（30760093） ［作者简介］唐茂丹（1985～），女，云南昆明市人，在读本科生，昆明医学院2005级临床医学（眼视光学专业）.［通讯作者］吴春云．E-mail:wuchunyunkm@https://www.360docs.net/doc/8a18871196.html,
丹参简介
丹参简介 丹参（拉丁学名：Salvia miltiorrhiza Bunge）又名赤参，紫丹参，红根等。为双子叶植物唇形科鼠尾草属多年生直立草本植物，根肥厚，外朱红色，内白色，肉质，叶常为奇数羽状复叶，顶生或腋生总状花序；苞片披针形，花萼钟形，带紫色，花冠紫蓝色，花柱远外伸，小坚果黑色，椭圆形，花期4-8月，花后见果。 其根是一种中药。性味苦，微寒。归心、肝经。有祛瘀止痛，活血通经，清心除烦之功效。用于月经不调，经闭痛经，症瘕积聚，胸腹刺痛，热痹疼痛，疮疡肿痛，心烦不眠；肝脾肿大，心绞痛。 功能主治 根入药，含丹参酮，为强壮性通经剂，有祛瘀、生新、活血、调经等效用，为妇科要药，主治子宫出血，月经不调，血瘀，腹痛，经痛，经闭，庙痛。对治疗冠心病有良好效果。此外亦治神经性衰弱失眠，关节痛，贫血，乳腺炎，淋巴腺炎，关节炎，疮疖痛肿，丹毒，急慢性肝炎，肾孟肾炎，跌打损伤，晚期血吸虫病肝脾肿大，癫癎。外用又可洗漆疮。 ⑴《本经》：主心腹邪气，肠鸣幽幽如走水，寒热积聚；破症除瘕，止烦满，益气。 ⑵《吴普本草》：治心腹痛。 ⑶《别录》：养血，去心腹痼疾结气，腰脊强，脚痹；除风邪留热，久服利人。 ⑷陶弘景：渍酒饮之，疗风痹。 ⑸《药性论》：治脚弱，疼痹，主中恶；治腹痛，气作声音呜吼。 ⑹《日华子本草》：养神定志，通利关脉。治冷热劳，骨节疼痛，四肢不遂；排脓止痛，生肌长肉；破宿血，补新生血；安生胎，落死胎；止血崩带下，调妇人经脉不匀，血邪心烦；恶疮疥癣，瘿赘肿毒，丹毒；头痛，赤眼，热温狂闷。 ⑺《滇南本草》：补心定志，安神宁心。治健忘怔冲，惊悸不寐。 ⑻《纲目》：活血，通心包络。治疝痛。 ⑼《云南中草药选》：活血散瘀，镇静止痛。治月经不调，痛经，风湿痹痛，子宫出血，吐血，乳腺炎，痈肿。[3]
大鼠视网膜神经节细胞培养
大鼠视网膜神经节细胞培养步骤及配方 1.成年SD大鼠摘除眼球，取出视网膜组织。 2.在木瓜蛋白酶中37o C，孵育25分钟 木瓜蛋白酶溶液配制：木瓜蛋白酶34个单位/ml（或2mg/ml） DL-半胱氨酸3.3mM（或0.4mg/ml） BSA 0.4mg/ml 溶解于Neurobasal medium中 3.RGC培养基漂洗3次 RGC培养基配制：Penicillin 100单位/ml Streptomycin 100ug/ml Pyruvate 1mM(无) Glutamine 2mM Insulin 5ug/ml Transferring 100ug/ml BSA 100ug/ml Progesterone 60ng/ml Putrescine 16ug/ml Thyroxine 40ng/ml Tri-iodothyronine 40ng/ml（无） BDNF 50ng/ml CNTF 10ng/ml bFGF 10ng/ml froskolin 5um(无？) fetal calf serum 1% 培养基：neurobasal/B27 各浓缩液配制：penicillin: 10000单位/ml (每100ml培养基加入1ml) Streptomycin 10mg/ml (每100ml培养基加入1ml) Glutamine(分子量：146.15) 29.23mg/ml或200mM (每100ml培养基加入1ml) Insulin 5mg/ml (每100ml培养基加入100ul) Transferring 10mg/ml (每100ml培养基加入1ml) BSA 10mg/ml (每100ml培养基加入1ml) Progesterone 600ug/ml (每100ml培养基加入10ul) Putrescine 1.6mg/ml (每100ml培养基加入1ml) Thyroxine 400ug/ml (每100ml培养基加入10ul) BDNF 500ug/ml (每100ml培养基加入10ul) CNTF 100ug/ml (每100ml培养基加入10ul)
丹参的食用方法
丹参的食用方法 丹参是我国古老的中草药之一，人们在日常生活中适当的服用丹参，有活血护心，强身健体，延年益寿等功效。虽然丹参的药用价值得到了人们的肯定，但是人们常说“是药三分毒”，所以我们不可以盲目服用，应严格遵守食用的“法则”。这样人们才能更好将丹参的药效吸收，把丹参的副作用减少到最低。那么生活中我们该如何食用丹参呢？让我们一起来看看吧！ 丹参的食用方法有哪些呢？ 丹参煮水喝 我们可以将丹参清洗干净之后，切成一段段或者切片之后，放到锅中加入清水炖着，观察在丹参水变色，散发药香的时候，可以适当加入红糖水调味，并改用小火继续慢炖，直到出锅加入各种调味料服用，这种食用方法比较方便有效。 丹参泡酒 最好购买丹参片，红花等其他配药，接着将它们清洗干净之后，用白酒密封浸泡半个月左右即可饮用。最好每天不宜多喝，应控制次数和剂量。
丹参炖鸡 我们先将鸡清洗干净，放到锅中，加入清水，去腥香料以及处理干净的丹参，然后用大火熬制，等到鸡煮熟的时候，加入各种调味料就可以出锅食用。 丹参泡茶 女性朋友可以在日常生活中，泡制一杯丹参益母茶。取适当的丹参片，以及益母茶用热水冲泡就可以了。可以反复冲泡，但不宜过夜饮用。 食用丹参应注意哪些问题呢？ 丹参虽然对许多病症有改善和治疗作用，但是服用时应注意定时定量，不可过度服用，以免发生毒副作用。同时注意不可长期服用。 服用丹参时应避免以下食物，比如辛辣刺激，生冷油炸，以及黄豆，牛奶等物，这些都会影响到药效的发挥。 还有特殊体质不适合服用，比如过敏患者，孕妇，还有长期服用相关药物的患者，都不适合服用丹参，以免产生不良反应。
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光损伤大鼠视网膜TNF
光损伤大鼠视网膜TNF 【摘要】目的：观察光损伤大鼠视网膜肿瘤坏死因子（tnf）-α表达变化的规律，及预先使用米诺环素（minocycline，mc）对其分泌表达的影响，探讨视网膜光损伤的损伤机制和防治措施。方法：54只sd大鼠，随机分为光照对照组、光照实验组、正常对照组，前两组再各分为光照后6h、3d、7d、14d组，每组各6只大鼠（12只眼）。光照前90min，光照实验组大鼠mc灌胃（45mg/kg），光照对照组大鼠等量pbs液灌胃。分别于预定时间点取眼球，左眼石蜡包埋、he染色、tnf-α免疫组化染色，计算机图像分析软件（image-pro plus，ipp）测量视网膜外核层（outer nuclear layer，onl）厚度。右眼球摘除后即刻完整取出视网膜，匀浆后取上清液，elisa法测定tnf-α的吸光度（o.d）值并计算出tnf-α浓度。spss 行统计分析。结果：1，正常对照大鼠视网膜形态正常，tnf-α未见阳性染色，elisa定量仅含微量。2，光照对照组视网膜6h即出现病理改变，3d和7d进行性加重，14d略有减轻。视网膜tnf-a 阳性表达6h开始增加，3d显著增加，7d减少，14d进一步减少，elisa定量结果和免疫组化结果相平行。各时间点onl厚度、tnf-a 表达量和正常对照组相比，p值均0.05。tnf-a表达量均较光照对照组同一时间点为少，两两比较p值均p0.05。结论：本实验首次研究了光损伤大鼠视网膜tnf-α定位和定量的表达变化，及预先使用米诺环素对tnf-α表达变化和视网膜病理损伤的影响，结论如下：1.光损伤时过度表达的tnf-α参与并加重了视网膜光损伤。
丹参的功效
丹参的功效与作用 云南三七丹参的功效与作用：人们使用丹参通常和三七一起使用，因为丹参的功效于作用和三七类似，只是比起三七来有点差距，所以经常有医生建议客户使用三七粉的时候搭配一点丹参粉，既可降低使用成本，也不至于太大影响三七粉的效果。 丹参的功效与作用： 一心血管系统的作用 ①强心加强心肌收缩力、改善心脏功能，不增加心肌耗氧量 ②对血管作用扩张冠脉，增加心肌血流量；扩张外周血管，血流增加；脑血流量下降 ③抗血栓形成提高纤溶酶活性；延长出、凝血时间；抑制血小板聚集（提高血小板内cAMP水平抑制TXA2合成）；改善血液流变学特性（血粘度降低、红细胞电泳时间缩短） ④改善微循环 二促进组织的修复与再生作用 ①促进组织的修复与再生丹参制剂治疗：坏死心肌清除快；纤维母细胞分化、胶原纤维形成较明显；肉芽形成比较成熟。局部淤血减轻、血液循环改善，愈合时间缩短。 ②抑制过度增生对过度增生的纤维母细胞有抑制作用。 三保肝改善肝微循环。 四抗菌丹参制剂中含有隐丹参酮、二氢丹参酮，对体外的葡萄球菌、大肠杆菌、变性杆菌有抑制作用。丹参食疗作用： 丹参味苦、微辛，性微寒；心、脾、肝、肾血分之药； 具有活血祛瘀，养血安神，凉血消肿的功效； 主治瘀血头、胸、胁、腹疼痛，积聚，月经不调，痛经经闭，产后瘀滞腹痛，关节痹痛，跌打瘀肿，温病心烦，血虚心悸，疮疡肿毒，丹疹疥癣。 注意:这一部分就是和三七具有相通功效与作用，但不是丹参的强项。 丹参在扩张冠状动脉，增加冠脉流量，改善心肌缺血、梗塞和心脏功能，调节心律，并能扩张外周血管，改善微循环；能提高机体耐缺氧能力；有抗凝血，促进纤溶，抑制血小板凝聚，抑制血栓形成的作用；能降低血脂，抑制冠脉粥样硬化形成；能抑制或减轻肝细胞变性、坏死及炎症反应，促进肝细胞再生，并有抗纤维化作用；能缩短红细胞及血色素的恢复期，使网织细胞增多，能促进组织的修复，加速骨折的愈合；有中枢神经有抑制作用；有抗肿瘤作用；能增强机体免疫功能；能降低血糖；对结核杆菌等多种细菌有抑制作用。 [用途]用于血瘀所致月经不调、痛经、经闭，产后瘀滞腹痛；冠心病心绞痛，动脉粥样硬化；慢性肝炎、肝硬化，腹腔包块或肿瘤；慢性肺心病，支气管哮喘；血不养心或心火偏亢，心悸不安，心烦失眠。 [用法]一日5~15g。煎汤，浸酒，泡茶。 [附方] 1，三七丹参：三七100g，丹参15g。水煎取浓汁，加白糖适量，干燥成颗粒。每次20g，温水溶化饮。亦可将二药研为细末，每次10g，加糖适量，泡茶饮。 源于《全国医药产品大全》。本方用二药活血化瘀，并降血脂，增加冠脉流量。用于冠心病心绞痛。 2，丹参饮：丹参15g，檀香、砂仁各5g。以水先煎丹参，后下檀香、砂仁煎沸饮。可加适量红糖调味。 源于《时方歌括》。本方以丹参活血化瘀，檀香、砂仁行气止痛。用于血瘀气滞，脘腹疼痛。现亦用于冠心病心绞痛。 3，丹红酒：丹参60g，红花、月季花各15g。以白酒500g浸渍。每次饮1~2小杯。
糖尿病大鼠视网膜早期病变中PDGF(一)
糖尿病大鼠视网膜早期病变中PDGF(一) 作者：刘丽娟，李茂欣，汤旭磊，高林，朱任之 【关键词】糖尿病视网膜病变ExpressionofPDGFBinretinaofratswithearlystagediabeticretinopathy 【Abstract】AIM:ToobservetheexpressionofplateletderivedgrowthfactorBchain(PDGFB)mRNAintheretinaofdia beticratsattheearlystageofdiabeticretinopathy.METHODS:Atotalof60healthyadultmaleWistarratsw ererandomlydividedintocontrolanddiabeticgroups.Streptozotocin（60mg/kg）wasinjectedintothetailveintoinducediabetesin35ratsindiabeticgroup,while25ratsincontrolgroupw eretreatedwiththesamevolumeofcitricacidbuffersolution.Onthe3rddayafterinjection,theratswhos eurineglucosewasmorethan++andfastingbloodglucose≥16.7mmol/Lwerechosena slaboratoryobjec ts.Attheendof1st,2ndand3rdmonths,6ratsinbothgroupswererandomlysacrificedandtheretinaswer edissectedandtotalRNAwasisolatedforthedetectionofmRNAforPDGFBbysemiquantitativereversetr anscriptionpolymerasechainreaction(RTPCR).Theretinasoftheotherratsinbothgroupsweretakenan dpreparedastheultrathinandobservedbytransmissionelectronmicroscope.RESULTS:ThelevelsofmR NAencodingPDGFBintheretinasofdiabeticratsweresignificantlyhigherthanthoseincontrolsateachob servedtimepoint （P0.05orP0.01attheendof1stand3rdmonth）.Obviousultrastructuraldamages,whichwereinrelati ontothecourseofdiabetes,couldbeseenintheretinasofdiabeticrats.CONCLUSION:Diabetesupregulat esPDGFBmRNAlevelsintheretinasofdiabeticratsinatimedependentmanner. 【Keywords】diabeticretinopathy；pericyte；plateletderivedgrowthfactorBchain；RTPCR 【摘要】目的：探讨血小板源生长因子B（PDGFB）mRNA表达水平在糖尿病(DM)大鼠视网膜中的变化规律及其作用.方法：雄性Wistar大鼠60只，随机分为正常对照组（25只）与造模组（35只）.造模组以链脲佐菌素(STZ)尾iv，3d后测定血糖≥16.7mmol/L，尿糖以上者定为DM大鼠.分别于造模成功后1，2，3mo末各组随机取6只大鼠，采用半定量逆转录聚合酶链反应（RTPCR）方法检测PDGFBmRNA在大鼠视网膜中的表达水平；电镜观察DM大鼠视网膜超微结构的改变.结果：随着病程的延长，视网膜中PDGFBmRNA表达水平在DM组明显升高，与正常对照组相比于造模后1mo末时即差异具有统计学意义（P＜0.05），3mo 末时差异显著（P0.01）；DM大鼠视网膜超微结构的损害随病程进展逐渐加重.结论：PDGFBmRNA在视网膜中的表达水平随DM病程进展逐步升高. 【关键词】糖尿病视网膜病变；周细胞；血小板源生长因子B；逆转录聚合酶链反应 0引言 视网膜周细胞的渐进性功能丧失及死亡为糖尿病(diabetesmelitus,DM)视网膜病变（diabeticretinopathy,DR）的早期典型病理特征.周细胞对于保持微血管形态与功能的完整都有重要作用，缺乏周细胞将导致内皮细胞增生及血管形态异常〔1〕，并且促使DR进展〔2〕.血小板源生长因子B（plateletderivedgrowthfactorB，PDGFB）是周细胞最重要的生长因子，与周细胞表达的受体PDGFRβ结合维持着周细胞的密度和数量.PDGFB可以显著减少因缺血缺氧导致的周细胞死亡、减少缺氧对体外培养的视网膜微血管的损害〔3〕.因此，探讨PDGFB 在早期DR中表达的变化规律及其作用，可为DR的早期检测、防治提供理论依据. 1材料和方法 1.1材料 雄性Wistar大鼠60只，体质量(200±20)g，由兰州军区总医院实验动物中心提供；链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）（美国Alexis公司）；Trizol（BBI产品）；罗氏血糖仪及试纸条；PDGFB 的引物为：5＇CGCTCCTTTGATGACCTTC3＇,5＇GCACTCGGCGATTACGG3＇（长177bp），βactin
浅谈中药丹参及其制剂
成都中医药大学药学院 论文 题目丹参综述 学号 201240301077 学生姓名 __ 杨益________ ___ _ 年级 2012级中药3班 学科专业方向中药学 所属院（所） ___ 药学院 _ ___ _
丹参综述 摘要： 丹参是我国常用的传统中药，从70年代开始，国内外学者对丹参进行了比较系统的研究,如丹参资源调查、化学成分分离、药理作用、制剂及制剂工艺等。通过查阅相关文献，本文对丹参进行综述。主要介绍丹参资源情况、丹参主要化学成分及其活性成分的药理作用、有效成分提取分离纯化工艺、丹参制剂类型、丹参药材及制剂的质量控制方法研究。 关键词：丹参；资源情况；化学成分；药理作用；制剂；提取分离纯化；质量控制 丹参，为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根和根茎。春、秋二季采挖，除去泥沙，干燥。具有活血祛瘀，通经止痛，清心除烦，凉血消痈之功效。用于胸痹心痛，脘腹胁痛，瘕瘕积聚，热痹疼痛，心烦不眠，月经不调，痛经经闭，疮疡肿痛等。对冠心病、心血管病、慢性肝炎、早期肝硬化等病有良好疗效。 1.丹参正品、习用品、伪品及资源开发现代研究情况 1.1丹参正品资源情况 上世纪60年代之前，丹参以应用野生品为主，随着市场需求的增加，野生资源锐减，因此，各地开始对丹参进行引种栽培，获得成功后，种植面积迅速扩大[1]。主产于四川、山东、浙江省等，现在全国大部分地区都有分布。野生丹参与栽培丹参所处的生长环境迥异，野生者多生于林下，阳光遮蔽，植株生长矮小，地上茎分枝少，根条细长; 而栽培丹参则生长在阳光充足，土壤肥沃的丘陵或平原地区，植株高大，地上茎分枝多，根条粗。临床应用常以人工栽培丹参代替野生丹参，但由于生产中长期的只种不选引起品种退化，导致药材产量和品质均有较大程度下降。 1.2丹参习用品及伪品 1.2.1 丹参习用品 （1）南丹参（Sal via bawl eyana Dun）：根较小，外皮灰红色。小叶卵状披针形，无毛。花萼筒状或近筒状；花冠筒短，内藏。 （2）甘西鼠尾（S．przewals kii Maxim．）：别名甘肃丹参。多年生草本，高达70 厘米，全株密被柔毛。根粗壮，圆锥形，红褐色。单叶，有基生叶和茎生叶两种，均具柄，叶片三角状或椭圆戟形。花序顶生或腋生，总状花序；花萼钟状，2 唇形；花冠紫红色；小坚果，灰褐色。 1.2.2 丹参伪品 非正品未列入药典，不具备正品丹参的各种功效，故不可代替正品丹参入药。 市场上存在丹参伪品，主要有四种:
中药故事-丹参
中药故事-丹参 丹参是一味常用中药，别名红根、紫丹参、血参根等，这是因其药用的根部呈紫红色之故。此外，民间还有将其称作“丹心”的，这与流传的一个感人故事有关。 相传很久以前，东海一个小岛上有一个几十户人家的渔村。渔村里住着一个叫“阿明”的青年。在阿明小的时候父亲在一次出海打鱼时葬身鱼腹，留下母子二人相依为命，母亲由于生下孩子后得了产后瘀血症，长期腹痛不已，在家靠种菜和纺织把孩子拉扯大。阿明因自幼在风浪中长大，练就了一身好水性，人称“小蛟龙”。平时有空跟村中一位老和尚读书识字，学习医药，是个有名的孝子。 一年夏天，海明的母亲旧病复发，经常带下崩漏，脸黄肌瘦，神疲肢倦，气短懒言，请了很多大夫，都未治愈，阿明是一筹莫展。最后几天几夜高烧不退。老和尚经望闻问切，自谓无能为力。阿明举债请遍方圆十里医家郎中，可母亲的病仍不见好转。渐渐地母亲神昏谵语，不省人事。正当绝望之际，老和尚再度前来：“据说有一种不知名的草药能治好你母亲的病，但本岛风吹浪打，咸水浸袭，草药不能生长，必须到大陆山地才能找到。”孩子听了大喜：“那草药是什么样子的？”老和尚把一幅早已画好的图样交给他。阿明见图中的草药高约一尺有余，茎四棱形，叶对生，顶上开着一朵朵紫色的小花，其根细长，圆柱形，外皮土红色。于是他收起图样准备去采。老和尚又说：“现在风急浪大，对岸暗礁林立，水流湍急，船只根本就靠不了岸。”正当阿明焦急之际，母亲又发出痛苦的哀叫。海明心如刀割，于是咬咬牙，打点好行装，带就出海了。因为海路不但暗礁林立，而且水流湍急，十有九死，犹过“鬼门关”。但病不宜迟，阿明救母心切，毅然决定出海采药。 他凭着高超的水性，绕过了一个个暗礁，冲过了一个个激流险滩，终于闯过“鬼门关”、顺利登上岸，他顾不上旅途劳顿，立即对照老和尚给的图样，四处寻找那种开着紫蓝色花、根是红色的药草。每找到一棵，便赶快挖出其根，花了整整一天时间，终于挖到了一大捆，然后返航回家。船行至半途，一伙海盗拦住海明的去路，要他交出钱财，否则留下小命来。阿明仅交出老和尚给的那一点银两，双手紧抱着草药不放。海盗见没油水可捞，恼羞成怒，把阿明捆绑起来，要把他掳去做苦工。阿明趁海盗不备挣开绳索逃脱，怀里始终抱着那一捆救命草药。 当阿明回到家中时，母亲已奄奄一息。他急忙用那草药的根给母亲煎汤喝。一剂喝下之后，母亲气息有所转好。第二天，母亲的脸色稍转红润。第三天，母亲的脸上露出了一丝久违的笑容。一连服用七天后，母亲终于有力气下床走动了。阿明对这种草药产生了兴趣，他研究发现此药不但可以治疗月经不调、经闭腹痛、带下崩漏和产后瘀血等，而且还可以治疗失眠、心烦、心悸、胸痛和关节疼痛等病症。于是他多次重返原地采挖，为岛上不少乡亲治好了顽疾。此事一传十，十传百，不久便传遍小岛和中原大地，各地医家郎中纷纷采用此药治疗上述诸病。 后人为缅念海明不畏艰险、采药救母、普度患病乡亲的事迹，把那种药草称为“丹心”，意指它体现了阿明对母亲、对乡亲的一片丹心或赤子之心之意，并以此教育子女。此事在民间广为流传，随着时间的推移，人们无意中把“丹心”读写成“丹参”，一直延用至今。
丹参的功效与作用及食用方法
丹参的功效与作用及食用方法 丹参又名赤参，紫丹参，红根，赤参，山参，红暖药，紫党参，红参，血参，血参根，血丹参，红丹参，赤丹参，血生根，血山根，木羊乳，连马，山红萝卜，活血根，靠山红，烧酒壶根，野苏子根，山苏子根，大红袍，蜜罐头，蜂糖罐，朵朵花根，却蝉草根，奔马草根，长鼠尾草根，水羊草根，红娘子根。为双子叶植物唇形科，干燥根及根茎。功效：活血调经，祛瘀止痛，凉血消痈，清心除烦，养血安神。 丹参的功效与作用及食用方法 性味归经：苦，微寒。归心、肝经。 功效：活血调经，祛瘀止痛，凉血消痈，清心除烦，养血安神。 主治：月经不调，经闭痛经，症瘕积聚，胸腹刺痛，热痹疼痛，疮疡肿痛，心烦不眠；肝脾肿大，心绞痛。 丹参的功效与作用及食用方法：应用 用于胸肋胁痛，风湿痹痛，症瘕结块，疮疡肿痛，跌仆伤痛，月经不调，经闭痛经，产后瘀痛等。治疗胸肋疼痛、症瘕结块，以及月经不调、经闭经痛具有良效，常与川芎配伍应用。在治疗胸腹疼痛属于气滞血瘀方面，往往配合砂仁、檀香等药同用。 用于温病热入营血、身发斑疹、神昏烦躁。常与鲜地黄、水牛角、玄参等药同用。 用于心悸怔忡、失眠。常与酸枣仁、柏子仁等药配合同用。 心脏病患者多有不同程度的心前区疼痛、胸闷憋气、舌质暗红、口唇发紫等表现，中医称之为“血淤证”。因此，活血化淤就是治疗各种心脏疾病，特别是冠心病心绞痛及心肌梗死的重要治疗方法之一。 丹参是活血化淤的代表性中药。研究表明，丹参能改善周围循环和微循环，具有明显抗血栓形成和溶解血栓效果，对缺血心肌有显著保护作用，且有降脂和抗动脉粥样硬化作用。因此，丹参对心脏病引起的血淤证具有良好的治疗效果。丹参制剂有多种，成分功效不尽相同，适应症也略有区别，必须在医生的指导下，结合实际情况选择应用。 丹参的功效与作用及食用方法 用法用量：煎服，9～15g。活血化瘀宜酒炙用。 使用注意：反藜芦。孕妇慎用。 炒丹参为丹参片用文火炒至深黄色，略见焦斑，取出摊晾，而后入药者。 酒丹参又名酒炒丹参。为丹参片用黄酒淋洒，闷透，文火微妙入药者。增强活血之功。 醋丹参又名醋炒丹参。为丹参片用米醋淋洒，微闷，文火微炒入药者。增强止痛之功。 丹参炭为丹参片用武火炒至焦黑，存性，清水灭尽火星。取出晾干，然后入药者。偏于止血。鳖血丹参又名鳖血拌丹参。为丹参片用适量鳖血拌匀，晾干后入药者。偏于养血。 丹参的功效与作用及食用方法 1，田七丹参：三七100g，丹参15g。水煎取浓汁，加白糖适量，干燥成颗粒。每次20g，温水溶化饮。亦可将二药研为细末，每次10g，加糖适量，泡茶饮。 源于《全国医药产品大全》。本方用二药活血化瘀，并降血脂，增加冠脉流量。用于冠心病心绞痛。 2，丹参饮：丹参15g，檀香、砂仁各5g。以水先煎丹参，后下檀香、砂仁煎沸饮。可加适量红糖调味。 源于《时方歌括》。本方以丹参活血化瘀，檀香、砂仁行气止痛。用于血瘀气滞，脘腹疼痛。现亦用于冠心病心绞痛。
丹参归经及功效需知
丹参归经及功效需知 丹参归经及功效需知 【别名】亦参、木羊乳（《吴普本草》），逐马（陶弘景），山参（《日华子本草》），紫丹参（《现代实用中药》），红根（《中国药植志》），紫党参（《南京民间药草》），山红萝卜（《浙江中药手册》），活血根、靠山红、红参（《江苏植药志》），烧酒壶根、野苏子根、山苏子根（《东北药植志》），大红袍（《河北药材》），蜜罐头、血参根、朵朵花根（《山东中药》），蜂糖罐（《陕西中药志》）。 【来源】为唇形科植物丹参的根。自11月上旬至第二年3月上旬均可采收，以11月上旬采挖最宜。将根挖出，除去泥土、根须，晒干。 【炮制】拣净杂质，除去根茎，洗净，捞出，润透后切片，晾干。炒丹参：取丹参片放入锅内，以文火炒至微有焦斑为度，取出，放凉。
《品汇精要》：去芦，剉碎用。 【性味】苦，微温。 ①《本经》；味苦，微寒，无毒。 ②《吴普本草》：岐伯：咸。 ③李当之《药录》：大寒。 ④《本草经疏》：味苦，平，微温。 丹参归经及功效需知 【归经】入心、肝经。 ①《纲目》：手少阴、厥阴血分药。 ②《本草经疏》：入手足少阴、足厥阴经。 ③《本草正》：心、脾、肝、肾血分之药。
【功能主治】活血祛瘀，安神宁心，排脓，止痛。治心绞痛，月经不调，痛经，经闭，血崩带下，症瘕，积聚，瘀血腹痛，骨节疼痛，惊悸不眠，恶疮肿毒。 ①《本经》：主心腹邪气，肠鸣幽幽如走水，寒热积聚；破症除瘕，止烦满，益气。 ②《吴普本草》：治心腹痛。 ③《别录》：养血，去心腹痼疾结气，腰脊强，脚痹；除风邪留热，久服利人。 ④陶弘景：渍酒饮之，疗风痹。 ⑤《药性论》：治脚弱，疼痹，主中恶；治腹痛，气作声音呜吼。 ⑥《日华子本草》：养神定志，通利关脉。治冷热劳，骨节疼痛，四肢不遂；排脓止痛，生肌长肉；破宿血，补新生血；安生胎，落死胎；止血崩带下，调妇人经脉不匀，血邪心烦；恶疮疥癣，瘿赘肿毒，丹毒；头痛，赤眼，热温狂闷。
浅谈中药的丹参及其制剂
中医药大学药学院 论文 题目丹参综述 学号 7 学生姓名 __ 益________ ___ _ 年级 2012级中药3班 学科专业方向中药学 所属院（所） ___ 药学院 _ ___ _
丹参综述 摘要： 丹参是我国常用的传统中药，从70年代开始，国外学者对丹参进行了比较系统的研究,如丹参资源调查、化学成分分离、药理作用、制剂及制剂工艺等。通过查阅相关文献，本文对丹参进行综述。主要介绍丹参资源情况、丹参主要化学成分及其活性成分的药理作用、有效成分提取分离纯化工艺、丹参制剂类型、丹参药材及制剂的质量控制方法研究。 关键词：丹参；资源情况；化学成分；药理作用；制剂；提取分离纯化；质量控制 丹参，为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根和根茎。春、秋二季采挖，除去泥沙，干燥。具有活血祛瘀，通经止痛，清心除烦，凉血消痈之功效。用于胸痹心痛，脘腹胁痛，瘕瘕积聚，热痹疼痛，心烦不眠，月经不调，痛经经闭，疮疡肿痛等。对冠心病、心血管病、慢性肝炎、早期肝硬化等病有良好疗效。 1.丹参正品、习用品、伪品及资源开发现代研究情况 1.1丹参正品资源情况 上世纪60年代之前，丹参以应用野生品为主，随着市场需求的增加，野生资源锐减，因此，各地开始对丹参进行引种栽培，获得成功后，种植面积迅速扩大[1]。主产于、、省等，现在全国大部分地区都有分布。野生丹参与栽培丹参所处的生长环境迥异，野生者多生于林下，遮蔽，植株生长矮小，地上茎分枝少，根条细长; 而栽培丹参则生长在充足，土壤肥沃的丘陵或平原地区，植株高大，地上茎分枝多，根条粗。临床应用常以人工栽培丹参代替野生丹参，但由于生产中长期的只种不选引起品种退化，导致药材产量和品质均有较大程度下降。 1.2丹参习用品及伪品 1.2.1 丹参习用品 （1）南丹参（Sal via bawl eyana Dun）：根较小，外皮灰红色。小叶卵状披针形，无毛。花萼筒状或近筒状；花冠筒短，藏。 （2）甘西鼠尾（S．przewals kii Maxim．）：别名丹参。多年生草本，高达70 厘米，全株密被柔毛。根粗壮，圆锥形，红褐色。单叶，有基生叶和茎生叶两种，均具柄，叶片三角状或椭圆戟形。花序顶生或腋生，总状花序；花萼钟状，2 唇形；花冠紫红色；小坚果，灰褐色。 1.2.2 丹参伪品 非正品未列入药典，不具备正品丹参的各种功效，故不可代替正品丹参入药。 市场上存在丹参伪品，主要有四种: