植物次生代谢产物生物反应器研究进展_唐克轩_沈乾_付雪晴_颜廷祥[2]

中国农业科技导报，２０１４，（）：一－一

ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ

一收稿日期：２０１４?０１?０３；接受日期：２０１４?０１?１３

一基金项目：国家８６３高技术项目（２０１１ＡＡ１００６０５）资助三

一作者简介：唐克轩，教授，博士生导师，主要从事植物次生代谢工程与植物生物技术研究三Ｅ?ｍａｉｌ：ｋｘｔａｎｇ＠ｓｊｔｕ．ｅｄｕ．ｃｎ

植物次生代谢产物生物反应器研究进展

唐克轩，一沈一乾，一付雪晴，一颜廷祥

（上海交通大学农业与生物学院，复旦－交大－诺丁汉植物生物技术研发中心，上海２００２４０）

摘一要：植物次生代谢产物生物反应器是植物生物反应器的一种，通过代谢调控及代谢工程等现代生物技术手段在分子水平上对植物原有次生代谢途径进行遗传改造达到提高植物中有用次生代谢产物含量的目的三随着越来越多植物次生代谢途径的不断解析，植物次生代谢产物生物反应器的研究和应用前景越来越广阔三以萜类和生物碱类等次生代谢产物为代表，简述了植物次生代谢产物生物反应器的研究进展及展望三关键词：植物次生代谢产物生物反应器；植物基因工程；植物代谢工程；植物次生代谢产物ｄｏｉ：１０．１３３０４／ｊ．ｎｙｋｊｄｂ．２０１４．０２８

中图分类号：Ｑ９４３．２一一一文献标识码：Ａ一一一文章编号：１００８?０８６４（２０１４）０一?００一?０９

ＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｇｒｅｓｓｏｎＰｌａｎｔＳｅｃｏｎｄａｒｙＭｅｔａｂｏｌｉｔｅＢｉｏｒｅａｃｔｏｒ

ＴＡＮＧＫｅ?ｘｕａｎ，ＳＨＥＮＱｉａｎ，ＦＵＸｕｅ?ｑｉｎｇ，ＹＡＮＴｉｎｇ?ｘｉａｎｇ

（Ｆｕｄａｎ?ＳＪＴＵ?ＮｏｔｔｉｎｇｈａｍＰｌａｎｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＲ＆ＤＣｅｎｔｅｒ，ＳｃｈｏｏｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＢｉｏｌｏｇｙ，

ＳｈａｎｇｈａｉＪｉａｏＴｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２００２４０，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｐｌａｎｔｓｅｃｏｎｄａｒｙｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｂｉｏｒｅａｃｔｏｒｉｓｏｎｅｋｉｎｄｏｆｐｌａｎｔｂｉｏｒｅａｃｔｏｒｓ．Ｉｔｓａｉｍｉｓｔｏｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｑｕａｎｔｉｔｙｏｆｕｓｅｆｕｌｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓｏｆｐｌａｎｔｓｂｙｇｅｎｅｔｉｃｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｐｌａｎｔｓｅｃｏｎｄａｒｙｍｅｔａｂｏｌｉｃｐａｔｈｗａｙｔｈｒｏｕｇｈｍｅｔａｂｏｌｉｃｒｅｇｕｌａｔｉｏｎａｎｄｍｅｔａｂｏｌｉｃｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｏｎｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｌｅｖｅｌ．Ａｌｏｎｇｗｉｔｈｔｈｅｍｏｒｅｐｌａｎｔｓｅｃｏｎｄａｒｙｍｅｔａｂｏｌｉｃｐａｔｈｗａｙｓｂｅｉｎｇｅｌｕｃｉｄａｔｅｄ，ｔｈｅｗｉｄｅｒｒｅｓｅａｒｃｈａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｓｐｅｃｔｓｐｌａｎｔｓｅｃｏｎｄａｒｙｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｂｉｏｒｅａｃｔｏｒｈａｓ．Ｉｎｔｈｉｓａｒｔｉｃｌｅ，ｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｅｓａｎｄｐｒｏｓｐｅｃｔｓｉｎｐｌａｎｔｓｅｃｏｎｄａｒｙｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｂｉｏｒｅａｃｔｏｒｗｅｒｅｒｅｖｉｅｗｅｄａｎｄｓｕｍｍａｒｉｚｅｄｕｓｉｎｇｔｅｒｐｅｎｅｓａｎｄａｌｋａｌｏｉｄｓａｓｅｘａｍｐｌｅｓ．

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐｌａｎｔｓｅｃｏｎｄａｒｙｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ；ｐｌａｎｔｇｅｎｅｔｉｃｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ；ｐｌａｎｔｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ；ｐｌａｎｔ

ｓｅｃｏｎｄａｒｙｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ

一一植物是人类赖以生存最重要的物质基础，它们不仅为人类提供生命所必须的碳水化合物二蛋白质和脂类等植物初级代谢产物，其中很多植物也为人类提供了萜类二生物碱类等有益的植物次生代谢产物三人类利用植物次生代谢产物预防和治疗疾病的历史非常悠久三至今，从植物中提取的次生代谢产物仍然在人们的生活中发挥重要的作用，对医药二轻工二化工和食品等领域的发展至关重要［１，２］三

近年来，随着植物分子生物学的飞速发展，植

物生物反应器在基础研究和应用领域都取得了长足进展三植物生物反应器是指利用植物细胞二组织二器官或整株植株，大量生产具有重要功能的蛋

白质，如疫苗二抗体或次生代谢产物等三植物生物反应器可以是天然的植物细胞二组织二器官或植株，也可以是经基因工程改良的植物细胞二组织二器官或植株［３，４］三目前我国植物生物反应器的研究和利用还主要集中在表达或生产药用蛋白的研究和应用方面；而利用代谢调控及代谢工程等技术对植物进行遗传改造来大量生产有用的植物次生代谢产物的研究还相对比较薄弱三随着经济及生活水平的不断提高，植物次生代谢产物在人类的生活中将发挥越来越重要的作用三随着很多中草药的有效成分被不断分离及鉴定，从植物的次生代谢产物中去寻找二开发新药也越来越受到科学家的重视三

网络出版时间：2014-01-16 19:55

网络出版地址：https://www.360docs.net/doc/9812487509.html,/kcms/doi/10.13304/j.nykjdb.2014.028.html

植物次生代谢产物种类丰富二功能强大二运用广泛，但是其有效成分在植物中的含量往往很低，例如治疗疟疾的特效药青蒿素（ａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎ）在青蒿（ＡｒｔｅｍｉｓｉａａｎｎｕａＬ．）中的含量仅为青蒿叶片干重的０．１％ １％［５，６］；植源性抗癌药物紫杉醇在红豆杉中的含量仅为０．０１％［７，８］；植源性抗癌药物长春新碱等有效成分在长春花叶片中的含量仅为０．０１％ ０．１％［９］三面对上述难题，科学家开始运

用植物生物技术探索从植物中获取大量有用的植物次生代谢产物的方法三植物次生代谢产物生物反应器作为植物生物反应器的一种，成为专门获取大量植物有用次生代谢产物的有利工具三植物次生代谢产物生物反应器最大的特点在于以植物为载体，通过代谢调控及代谢工程等现代生物技术手段在分子水平上遗传改造植物原有的代谢途径，其目的在于提高植物中有用次生代谢产物的含量，最后从改造后的转基因植物整株中或植物组织中提取获得更多的有用次生代谢产物［１０，１１］三它与一般的植物生物反应器最大的区别在于其主要是通过代谢调控及代谢工程改变了植物原有的代谢途径，实现对植物自身代谢途径的调控，以获取大量有用的植物次生代谢产物为目的，而不是导入外源表达基因从植物中获取多肽类二疫苗类和蛋白类等物质三

本文以目前作为国内外研究热点的萜类二生物碱类等植物次生代谢产物为例，简述植物次生代谢产物生物反应器的研究现状及发展对策三１一植物萜类次生代谢产物生物反应器１．１一青蒿素植物次生代谢产物生物反应器目前全球大约每年有６０万人死于疟疾，我国科学家从中药青蒿中分离得到的青蒿素是世界卫生组织（ＷｏｒｌｄＨｅａｌｔｈＯｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ，ＷＨＯ）推荐的目前最有效的抗疟药物［１２，１３］三然而，青蒿素在青蒿植物中的含量非常低，直接导致青蒿素供不应求，价格昂贵三

随着青蒿素生物合成途径的关键酶基因被不断克隆与鉴定，目前青蒿素生物合成途径已经基本清晰三青蒿素是一种含有过氧桥键的倍半萜内酯化合物，由法尼尔焦磷酸（ｆａｒｎｅｓｙｌｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ＦＰＰ）经紫穗槐?４，１１?二烯合酶（ａｍｏｒｐｈａ?４，１１?ｄｉｅｎｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ＡＤＳ）催化生成紫穗槐?４，１１?二烯（ａｍｏｒｐｈａ?４，１１?ｄｉｅｎｅ）［１４］，后经细胞色素Ｐ４５０单加氧酶（ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＰ４５０ｍｏｎｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ，ＣＹＰ７１ＡＶ１）两步催化分别生成青蒿醇（ａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｃａｌｃｏｈｏｌ），青蒿醛（ａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｃａｌｄｅｈｙｄｅ）［１５］，再由青蒿醛还原酶（ａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｃａｌｄｅｈｙｄｅΔ１１（１３）ｒｅｄｕｃｔａｓｅ，ＤＢＲ２）催化生成二氢青蒿醛（ｄｉｈｙｒｏａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｃａｌｄｅｈｙｄｅ）［１６］，最后由乙醛脱氢酶（ａｌｄｅｈｙｄｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ１，ＡＬＤＨ１）［１７］催化生成青蒿素的直接前体物质二氢青蒿酸（ｄｉｈｙｒｏａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｃａｃｉｄ）三目前科学家一致认为从二氢青蒿酸到青蒿素的转化不是一个酶促反应过程，而是光氧化（ｐｈｏｔｏ?ｏｘｉｄａｔｉｖｅ）反应的过程，且该反应已在体外实验中得以证实［１８］三至此，青蒿素的生物合成途径已经基本阐明三基于上述对青蒿素生物合成途径的认识，青蒿素植物次生代谢产物生物反应器的研发便有了理论基础与依据三根据青蒿素生物合成途径的特点，科学家们运用植物基因工程二代谢工程等生物技术手段进行了青蒿素生物合成代谢途径改造和调控的研究三最早Ｃｈｅｎ等［１９］将青蒿素代谢途径上的关键酶基因ＦＰＳ（ｆａｒｎｅｓｙｌｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅ）成功导入到青蒿中，获得了过量表达ＦＰＳ基因的转基因青蒿植株，经ＨＰＬＣ测定转基因青蒿与非转基因对照组青蒿中青蒿素的含量，结果发现过量表达ＦＰＳ基因的转基因青蒿中青蒿素的含量提高了４０％左右三之后，不断有文献报道在青蒿中过量表达青蒿素合成途径上关键酶的基因，如ＡＤＳ［２０］，ＣＹＰ７１ＡＶ１［２１］，ＤＸＲ［２２］等均显著提高了青蒿中青蒿素的含量三Ｚｈａｎｇ等［２３］首次通过ｈａｉｒｐｉｎ?ＲＮＡ介导的ＲＮＡｉ技术手段成功抑制了从法尼尔焦磷酸（ＦＰＰ）到甾醇（ｓｔｅｒｏｌ）合成途径的第一步关键酶鲨烯合酶（ｓｑｕａｌｅｎｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ＳＱＳ）基因的表达量（ＳＱＳ基因表达量降低至野生型的４０％ ６０％左右），经ＧＣ?ＭＳ分析发现，在抑制住ＳＱＳ基因表达量的转基因青蒿中麦角固醇（ｅｒｇｏｓｔｅｒｏ）二谷甾醇（β?ｓｉｔｏｓｔｅｒｏｌ）等的含量有显著的降低，而这些转基因青蒿中青蒿素的含量则较非转基因青蒿（１０ｍｇ／ｇ干重）提高到了３．１４倍，最高达到了青蒿叶片干重的３１．４ｍｇ／ｇ，同时转基因青蒿其生长状态与野生型青蒿相比无显著差异三

植物中存在许多调控植物次生代谢产物生物合成的转录因子，目前在青蒿中克隆并鉴定报道

２中国农业科技导报一卷

的转录因子共有４个，分别是ＡａＷＲＫＹ１二ＡａＥＦＲ１二ＡａＥＲＦ２和ＡａＯＲＡ三文献报道称，通过酵母双杂交实验发现ＡａＷＲＫＹ１转录因子能特异结合青蒿素生物合成途径关键酶基因ＡＤＳ的启动子区域上的Ｗ?ＢＯＸ顺式作用元件，瞬时转化发现ＡａＷＲＫＹ１能显著提高ＡＤＳ基因的表达量［２４］三类似的，Ｙｕ等［２５］发现ＡａＥＦＲ１二ＡａＥＲＦ２转录因子能同时结合ＡＤＳ二ＣＹＰ７１ＡＶ１启动子区域上的ＣＲＴＤＲＥＨＶＣＢＦ２（ＣＢＦ２）和ＲＡＶ１ＡＡＴ（ＲＡＡ）顺式作用元件，在青蒿中过量表达这两个转录因子基因的转基因青蒿中青蒿素及青蒿酸的含量都较野生型青蒿有了显著的提高；相反用ＲＮＡｉ技术抑制这两个基因的表达，转基因青蒿中青蒿素及青蒿酸的含量都较野生型青蒿有显著的降低三同样的，Ｌｕ等［２６］发现在青蒿中过量表达ＡａＯＲＡ转录因子基因，转基因青蒿中的ＡＤＳ二ＣＹＰ７１ＡＶ１二ＤＢＲ２和ＡＬＤＨ１等青蒿素合成途径的关键酶基因的表达都有显著提高，与此同时该转基因青蒿中青蒿素的含量也显著高于野生型青蒿三由此可见，青蒿中某些转录因子能够调控青蒿素生物合成途径上多个基因的表达三

青蒿素的生物代谢途径虽然已经基本清楚，但是青蒿素生物合成的调控机理尚不清晰三例如青蒿素中间物质及其前体物质的转运机制，青蒿分泌型腺毛的发育机制等等三今后的研究工作需要进一步探明青蒿素生物合成过程中的调控机理，便于进一步运用到青蒿素植物次生代谢生物反应器的研究之中三

１．２　丹参酮植物次生代谢产物生物反应器丹参（ＳａｌｖｉａｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａＢｕｎｇｅ）是我国一种非常重要的传统中药，被广泛应用于心脑血管疾病和炎症的预防三丹参的根状茎主要包含两种生物活性物质：咖啡酸衍生的丹酚酸类化合物和属于二萜类的丹参酮类化合物［２７］三１９９３年Ｚｈｉ等［２８］利用发根农杆菌侵染丹参植株获得转基因毛状根，并且在转基因毛状根中成功检测出７种丹参酮类成分三毛状根培养技术的建立为提高丹参中有用次生代谢产物的含量奠定了基础三丹参酮属于二萜化合物，其生物合成途径还不是很明确三但是丹参酮和其他的萜类一样，在植物体内都由甲羟戊酸（ｍｅｖａｌｏｎａｔｅ，ＭＶＡ）和１?脱氧?Ｄ?木酮糖?５?磷酸（１?ｄｅｏｘｙ?Ｄ?ｘｙｌｕｌｏｓｅ５?ｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ＤＸＰ）途径合成，异戊烯基焦磷酸（ｉｓｏｐｅｎｔｅｎｙｌｐｙｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ＩＰＰ）及其异构体二甲基烯丙基焦磷酸（ｄｉｍｅｔｈｙｌａｌｌｙｌｐｙｒｏｐｈｏ?ｓｐｈａｔｅ，ＤＭＡＰＰ）为中间代谢产物，接着在牻牛儿牻牛儿基焦磷酸合酶（ｇｅｒａｎｙｌｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ＧＧＰＳ）的作用下合成牻牛儿基焦磷酸（ｇｅｒａｎｙｌｇｅｒａｎｙｌｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ＧＧＰＰ）三目前从ＧＧＰＰ下游合成丹参酮的代谢途径的相关研究还较少，涉及的相关反应步骤还不是很清楚［２９，３０］三Ｇａｏ等［３０］从丹参中克隆了下游合成途径的柯巴基焦磷酸合酶（ｃｏｐａｌｙｌｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ＣＰＳ）和类贝壳杉烯合酶（ｋａｕｎｅｎｅｓｙｎｔｈａｓｅｌｉｋｅ，ＫＳＬ），为进一步研究丹参酮的生物合成途径提供了方向三ＣＰＳ和ＫＳＬ位于ＧＧＰＰ的下游，ＣＰＳ催化ＧＧＰＰ生成丹参酮前体物质柯巴基焦磷酸（ｃｏｐａｌｙｌｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ＣＰＰ），然后由ＫＳＬ催化ＣＰＰ合成次丹参酮二烯（ｍｉｌｔｉｒａｄｉｅｎｅ）三２０１３年，Ｇｕｏ等［３１］利用比较转录组学鉴定出１４个与丹参酮积累相关的细胞色素氧化酶Ｐ４５０基因，并通过基因表达和体外酶活的实验筛选出：ＣＹＰ７６ＡＨ１可以催化ｍｉｌｔｉｒａｄｉｅｎｅ生成铁锈醇（ｆｅｒｒｕｇｉｎｏｌ）；预测其他细胞色素氧化酶Ｐ４５０可能参与丹参酮合成途径的下游催化过程三随着新一代高通量测序技术的发展，丹参转录组测序以及ｃＤＮＡ芯片的相关研究也都陆续展开，结合生物信息学技术，大量未知基因的功能被鉴定，有力地推进了丹参酮生物合成途径的解析［３２］三这对利用植物代谢工程技术改造丹参酮代谢途径，提高丹参中丹参酮等有用次生代谢产物的含量提供了理论依据和基础，并推动了丹参次生代谢产物生物反应器的研究三

研究发现，植物次生代谢产物还受到各种生物和非生物因子的调控［３３］三在丹参毛状根培养体系中添加ＹＥ二ＭＪ二Ａｇ＋二Ｃｏ２＋二α?氨基丁酸等诱导子，均可以不同程度的提高丹参毛状根中丹参酮的含量［３４］三Ｓｈｉ等［３５］用山梨醇处理丹参毛状根，发现处理后的毛状根中总丹参酮类物质的含量是未处理组的４．５倍三

２０１１年，Ｋａｉ等［３６］利用发根农杆菌介导的方法遗传转化丹参外植体，获得过表达丹参ＨＭＧＲ基因的转基因毛状根，其丹参酮含量比对照组高２．２倍；过表达丹参ＧＧＰＰＳ基因的转基因毛状根中丹参酮含量比对照高４．２倍；同时过表达ＨＭＧＲ和ＧＧＰＰＳ基因的转基因毛状根丹参酮含

３

一期唐克轩等：植物次生代谢产物生物反应器研究进展

量比对照高４．７倍三

目前丹参中调控丹参酮代谢的转录因子还未见报道三但是，Ｈｕａ等［３２］通过ＤｅｎｏｖｏＳｏｌｅｘａ对丹参转录组测序，从测序结果中筛选到１３４１条转录因子的ｕｎｉｇｅｎｅ，其中包含了ＭＹＢ二ＷＲＫＹ二Ｈｏｍｅｏｂｏｘ二ＡＰ２?ＥＲＥＢＰ和Ｃ２Ｈ２等转录因子家族三结合已经被报道的调控萜类生物合成的转录因子的研究方法，转录因子参与调控机制，以及丹参转录组测序结果，为丹参酮类生物合成的转录调控研究提供了指导和依据，这也将是今后研究丹参酮植物代谢产物生物反应器的热点三１．３一紫杉醇植物次生代谢产物生物反应器紫杉醇是目前临床上被广泛使用的最有效的抗癌药物之一，但其药源植物红豆杉生长周期长，且主要存在于树皮中，含量非常低，因此资源十分稀缺，这就导致了紫杉醇价格昂贵，长期供不应求［７，８］三

目前，紫杉醇生物合成途径的多数酶基因已经被克隆和鉴定，其生物合成途径已基本明确［７，３７］三紫杉醇也属于植物二萜类化合物三首先由植物二萜的共同前体牻牛儿牻牛儿基焦磷酸（ｇｅｒａｎｙｌｇｅｒａｎｙｌｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ＧＧＰＰ）在紫杉二烯合成酶（ｔａｘａｄｉｅｎｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ＴＳ）催化下生成紫杉二烯（ｔａｘａ?４（５），１１（２）?ｄｉｅｎｅ），然后被紫杉烯５α?羟基化酶（ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＰ４５０ｔａｘａｄｉｅｎｅ５α?ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ，Ｔ５αＨ）二紫杉烯醇５α?乙酰氧化基转移酶（ｔａｘａｄｉｅｎｅ?５α?ｏｌ?Ｏ?ａｃｅｔｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＴＤＡＴ）二紫杉烷１０β?羟基化酶（ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＰ４５０ｔａｘａｎｅ１０β?ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ，Ｔ１０βＨ）二紫杉烷１３α?羟基化酶（ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＰ４５０ｔａｘａｎｅ１３α?ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ，Ｔ１３αＨ）和５个酰基转移酶等一系列的氧化二乙酰化和苯丙氨酸氨基变位反应合成最终合成紫杉醇［３８ ４１］三

目前紫杉醇化学半合成和红豆杉悬浮细胞培养和产紫杉醇内生菌发酵等方法均可以生产紫杉醇［４２ ４４］三虽然红豆杉悬浮细胞培养被认为是最有前途的紫杉醇生产体系［４２］，但是该体系获得的紫杉醇产量较低，仍不足以进行工业化应用［７，３７］三利用植物代谢工程技术改造红豆杉中紫杉醇的代谢途径从而提高红豆杉细胞中紫杉醇的含量可能是今后最有效的方法［４５］三

Ｈｏ等［４６］首次在南方红豆杉细胞中同时过表达紫杉醇合成途径的关键酶基因ＴＳ和ＤＢＡＴ，但发现转基因细胞必须在茉莉酸甲酯（ｍｅｔｈｙｌｊａｓｍｏｎａｔｅ，ＭｅＪＡ）诱导条件下才生成紫杉烷类三２０１１年，Ｚｈａｎｇ等［４７］在中国红豆杉细胞中过表达紫杉醇合成关键酶基因ＤＢＡＴ使得转基因细胞中紫杉醇含量增加了１．７倍三

目前调控紫杉醇代谢途径的一个转录因子ＴｃＷＲＫＹ１被克隆并鉴定，Ｌｉ等［４８］在中国红豆杉细胞中过表达ＴｃＷＲＫＹ１转录因子，并用微量酒精诱导之后，转基因细胞系内紫杉醇含量提高了约２．７倍三

利用现代生物学技术改造紫杉醇代谢途径，深入探索紫杉醇代谢途径的转录因子调控机制，充分开发利用红豆杉植物次生代谢生物反应器是解决紫杉醇药源问题的最有效的方法之一三

２一植物生物碱类次生代谢产物生物反应器

２．１一吲哚类生物碱次生代谢产物生物反应器长春花（Ｃａｔｈａｒａｎｔｈｕｓｒｏｓｅｕｓ（Ｌ．）Ｇ．Ｄｏｎ）作为传统的药用植物，其体内具有生物活性的萜类吲哚生物碱（ｔｅｒｐｅｎｏｉｄｉｎｄｏｌｅａｌｋａｌｏｉｄｓ，ＴＩＡｓ）多达１３０多种［９］，其中双吲哚生物碱长春新碱（ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）和长春碱（ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ），以及它们的单吲哚前体物长春质碱（ｃａｔｈａｒａｎｔｈｉｎｅ）和文多灵（ｖｉｎｄｏｌｉｎｅ）的半合成产物长春瑞滨（ｖｉｎｏｒｅｌｂｉｎｅ）在治疗癌症方面具有很好的效果三但是双吲哚生物碱以及单吲哚前体物在野生型长春花中的含量都非常低，分别仅为植株干重的０．０１％和０．１％左右三同时ＴＩＡｓ分子结构非常复杂，化学合成难度极大三这些原因导致长春花ＴＩＡｓ的供需严重不平衡，使其价格极为昂贵三

长春花体内ＴＩＡｓ的代谢合成途径非常复杂，涉及到３０多步酶促反应，３０多种中间产物，以及７种不同的细胞和亚细胞结构［４９］三ＴＩＡｓ的合成途径可以分为上游及下游两个阶段，上游阶段主要指合成ＴＩＡｓ的共同前体３α（Ｓ）?异胡豆苷（ｓｔｒｉｃｔｏｓｉｄｉｎｅ）的途径，该途径有两条，分别为吲哚途径（ｉｎｄｏｌｅｐａｔｈｗａｙ）和环烯醚萜途径（ｉｒｉｄｏｉｄｐａｔｈｗａｙ）三下游阶段则是以３α（Ｓ）?异胡豆苷为前体经过不同途径合成各种ＴＩＡｓ三目前已知参与ＴＩＡｓ合成过程的关键酶有Ｇ１０Ｈ二ＴＤＣ二ＳＴＲ二Ｔ１６Ｈ二ＯＭＴ二ＮＭＴ二Ｄ４Ｈ二ＤＡＴ二ＳＧＤ和ＣｒＰＲＸ１等，

４中国农业科技导报一卷

调控ＴＩＡｓ合成的转录因子有ＯＲＣＡ２二ＯＲＣＡ３二ＣｒＭＹＣ２二ＣｒＭＹＣ?１二ＢＰＦ?１二ＺＣＴ１二ＺＣＴ２二ＺＣＴ３二ＣｒＷＲＫＹ１二ＣｒＧＢＦ１和ＣｒＧＢＦ２等三虽然目前长春花体内ＴＩＡｓ的代谢合成途径仍未能完全阐明，但目前已经发现的相关关键酶及转录因子仍然为植物次生代谢产物生物反应器的研发提供了较好的理论基础与依据三

目前长春花次生代谢产物生物反应器多为细胞悬浮体系和长春花毛状根三长春花细胞悬浮系由愈伤组织分化而来［５０］三Ｐｏｍａｈａｃｏｖａ等［５１］将一个Ｃ．ｊａｐｏｎｉｃａ的ＡＢＣ家族转运蛋白基因ＣｊＭＤＲ１在长春花细胞系中超表达，发现可以提高阿吗碱含量三但由于长春花细胞系无法合成文多灵［５２］，从而无法直接生产具有药用价值的长春新碱和长春碱，并且其遗传稳定性较差，很难维持其高产植物碱的特性［５３］；毛状根与细胞系相比可以更好的保持遗传和代谢产物的稳定性，而且它也可以无限生长三Ｈｕｇｈｅｓ等［５４］将ＴＤＣ和ＡＳα基因由发根农杆菌介导单转及共转长春花，得到ＴＤＣ和ＡＳα基因超表达的毛状根，单转ＴＤＣ的发根中色胺的含量没有变化，共转ＴＤＣ和ＡＳα的发根中色胺含量提高了约６倍［５４］三Ａｙｏｒａ?Ｔａｌａｖｅｒａ等［５５］将ＭＶＡ途径中的关键酶基因ＨＭＧＲ在长春花毛状根中超表达，结果显示转基因毛状根中长春质碱和阿吗碱含量均有一定程度的提高三Ｊａｇｇｉａ等［５６］成功在长春花毛状根中超表达ＣｒＰｒｘ基因，结果显示转基因毛状根中阿吗碱含量有了一定程度的提高三Ｓｕｔｔｉｐａｎｔａａ等［５７］发现在长春花毛状根中超表达转录因子ＣｒＷＲＫＹ１，可以显著提高色胺以及蛇根碱等单吲哚生物碱的含量三但与细胞系类似，长春花毛状根不能合成所有ＴＩＡｓ，在毛状根中也无法检测到长春新碱和长春碱三龚一富等［５８］于２０１２年成功由毛状根诱导出同时超表达ＯＲＣＡ３和Ｇ１０Ｈ基因的再生植株，结果显示ＴＩＡｓ的含量与对照相比明显增加，但存在植株矮小的缺点三

由于ＴＩＡｓ的合成在不同的细胞二器官中有着较高的特异性，因此长春花细胞系和毛状根都有其局限性三目前长春花下胚轴诱导愈伤组织进而再生植株体系［５９］已被成功地运用到长春花次生代谢产物生物反应器的研发之中三王荃等［６０］于２０１２年首次报道了运用根癌农杆菌介导转化长春花下胚轴，成功获得超表达ＤＡＴ基因的长春花转基因植株，克服了细胞系和毛状根的局限，成功提高了文多灵在长春花中的含量三潘琪芳等［６１］采用相同的遗传转化体系，将转录因子ＯＲＣＡ３和关键酶Ｇ１０Ｈ基因单转及共转化得到转基因长春花植株，经测定发现单转ＯＲＣＡ３基因的长春花植株中长春质碱和文多灵的平均含量分别是对照

（非转基因植株）的２．２９倍和２．５９倍；共转ＯＲＣＡ３和Ｇ１０Ｈ基因的长春花转基因植株中长春质碱和文多灵的平均含量分别是对照的２．１４倍和２．９８倍，证明下胚轴再生植株体系将成为非常重要有效的构建长春花次生代谢产物生物反应器的技术手段三

２．２　莨菪烷生物碱次生代谢产物生物反应器莨菪类生物碱又称托品烷类生物碱（ｔｒｏｐａｎｅａｌｋａｌｏｉｄｓ，ＴＡｓ），主要存在于茄科的颠茄属二山莨菪属二曼陀罗属和天仙子属等数十种植物中［６２］三ＴＡｓ具有很好的医疗价值，临床上常用的产物有莨菪碱（ｈｙｏｓｃｙａｍｉｎｅ）和东莨菪碱（ｓｃｏｐｏｌａｍｉｎｅ）两种，它们在临床上主要作为抗胆碱类药物使用，并且东莨菪碱与莨菪碱相比具有药理作用更强二副作用更小的优点［６３］三但是在作为东莨菪碱主要来源的颠茄二莨菪二曼陀罗等植物中，东莨菪碱的含量比莨菪碱要低很多，其在颠茄中仅为干重的０．０１％ ０．０８％，因此价格昂贵三随着东莨菪碱生物合成途径关键酶基因的不断克隆与鉴定，东莨菪碱在茄科植物中的代谢合成途径已经基本清晰三东莨菪碱的生物合成起始于鸟氨酸和精氨酸，其后在鸟氨酸脱羧酶（ＯｒｎＤＣ）二精氨酸脱羧酶（ＡｒｇＤＣ）二Ｎ?甲基?腐胺转移酶（ＰＭＴ）和二胺氧化酶（ＤＡＯ）等一系列酶的作用下，经过多步酶促和非酶促反应产生ＴＡｓ途径特有的前体托品酮［６４，６５］，托品酮在托品酮还原酶Ｉ（ＴＲＩ）催化下还原成托品（此步有一条竞争性支路：托品酮在托品酮还原酶Ⅱ催化下还原成假托品）三之后托品与苯乳酸缩合生成海螺碱，之后ＣＹＰ８０Ｆ１催化海螺碱生成莨菪碱［６６］，之后经过莨菪碱６?Ｐ?羟化酶（Ｈ６Ｈ）催化，莨菪碱羟基化变成山莨菪碱，最后环氧化成东莨碱［６７］三至此，东莨菪碱的生物合成途径已经基本阐明三基于对东莨菪碱生物合成途径的阐明与认识，东莨菪碱植物次生代谢产物生物反应器的研发便有了理论基础与依据三

５

一期唐克轩等：植物次生代谢产物生物反应器研究进展

根据东莨菪碱生物合成途径的特点，张磊等［６８］于２００４年将克隆到的两个关键酶基因ＰＭＴ和Ｈ６Ｈ通过发根农杆菌介导单独及同时介导转入药用植物天仙子，获得高效表达的转基因发根，结果显示双转基因的天仙子发根中东莨菪碱含量为野生对照组的９倍，为单转基因的天仙子的２倍多，达到了创纪录的４１１ｍｇ／Ｌ，此记录目前仍无人打破，充分说明上下游双基因转化效果比单基因转化效果更好三基于相同的思路，杨春贤等［６９，７０］通过在东莨菪碱商业药源植物颠茄中超量表达ＰＭＴ和Ｈ６Ｈ基因，成功培育出了高产东莨菪碱的转基因颠茄发根三之后王细荣等［７１］将研究工作更进一步，成功构建了根瘤农杆菌介导的颠茄遗传转化体系，并成功培育出了ＰＭＴ和Ｈ６Ｈ基因同时超表达的转基因颠茄植株，转基因植株与对照（野生型）相比，其东莨菪碱最多提高了７．３倍；之后Ｓｏｎｇ等［７２］将根瘤农杆菌介导的颠茄遗传转化体系进行了进一步的优化，以上这些工作使颠茄作为生产东莨菪碱的植物次生代谢产物生物反应器有了一个广阔的前景三

３　问题与展望

植物次生代谢产物生物反应器研究虽然起步较晚，但是发展迅速，已取得了有极大前景的成果，展示出巨大的潜力三但是与普通植物生物反应器相比，植物次生代谢产物生物反应器对植物次生代谢途径的解析及其调控原理的认识更为依赖三同时由于植物次生代谢的复杂性及种属特异性，植物次生代谢产物生物反应器的研发还面临较多问题亟待解决三例如，大多数植物次生代谢产物结构复杂，涉及的生物合成步骤繁多，且生物合成途径还没有被完全解析三尽管少数次生代谢产物例如青蒿素等其生物合成途径虽已经较为清晰，但是青蒿素的生物合成调控机制还不十分清楚，目前仅仅克隆了少数几个调控的转录因子基因，对全面解析青蒿素的生物合成和调控还显得相对不足三此外，研究发现过表达一些代谢途径重要基因并未显著提高预期代谢产物的含量，某些次生代谢产物合成途径上的关键酶天然状态下有突变位点导致催化活性降低等等，这些问题都影响着植物次生代谢产物生物反应器的研发，有待于深入研究三

因此，未来在植物次生代谢生物反应器的研究中，一项重要的任务就是不断解析植物次生代谢途径及其调控网络，主要包括次生代谢产物的前体物质及中间产物的分离鉴定二中间产物合成的关键酶基因的克隆及其表达调控二中间产物合成的细胞分区情况二产物的转运情况以及与其他次生代谢产物途径之间的相互关系等等；考虑到植物次生代谢调控网络的复杂性，在植物次生代谢生物反应器的研发中我们也可以借鉴微生物代谢生物反应器研发的技术与策略，例如将过量表达关键酶基因二阻断竞争支路的合成二多个基因联合过量表达并选用高效特异的启动子二控制基因插入的拷贝数目等技术策略联合运用三随着越来越多植物的基因组转录组测序完成，运用生物信息学的技术，将植物遗传信息与植物次生产物代谢组学信息进行有效的整合，例如将基因组二转录组等信息与核磁共振技术关联分析等，从而建立起完善的植物次生代谢调控网络，以便更有效地调控植物代谢途径，使得植物次生代谢产物生物反应器发挥其最大的潜力三

参一考一文一献

［１］一叶和春，李国凤．获取植物次生代谢产物的新途径［Ｊ］．植物杂志，１９９８，４：１６－１７．

［２］一孙立影，于志晶，李海云，等．植物次生代谢物研究进展［Ｊ］．吉林农业科学，２００９，３４（４）：４－１０．

ＳｕｎＬＹ，ＹｕＺＪ，ＬｉＨＹ，ｅｔａｌ．．Ａｄｖａｎｃｅｓｉｎｓｅｃｏｎｄａｒｙｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓｏｆｍｅｄｉｃｉｎａｌｐｌａｎｔ［Ｊ］．Ｊ．ＪｉｌｉｎＡｇｒｉｃ．Ｓｃｉ．，２００９，３４（４）：４－１０．

［３］一凌华，黄惠琴，鲍时翔．植物生物反应器研究进展［Ｊ］．中国生物工程杂志，２００２，２２（５）：２１－２６．

ＬｉｎｇＨ，ＨｕａｎｇＨＱ，ＢａｏＳＸ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔａｓｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ［Ｊ］．Ｐｒｏｇ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２００２，２２（５）：２１－２６．［４］一杜小春，何正权，陈磊，等．植物生物反应器表达药用蛋白研究新进展［Ｊ］．中国生物工程杂志，２００８，２８（９）：１３５－１４３．

ＤｕＸＣ，ＨｅＺＱ，ＣｈｅｎＬ，ｅｔａｌ．．Ｒｅｃｅｎｔｐｒｏｇｒｅｓｓｏｎｐｌａｎｔｂｉｏｒｅａｃｔｏｒｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｐｒｏｔｅｉｎｓ［Ｊ］．Ｐｒｏｇ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２００８，２８（９）：１３５－１４３．

［５］一ＤｕｋｅＭＶ，ＰａｕｌＲＮ，ＥｌｓｏｈｌｙＨＮ，ｅｔａｌ．．ＬｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎａｎｄａｒｔｅｍｉｓｉｔｅｎｅｉｎｆｏｌｉａｒｔｉｓｓｕｅｓｏｆｇｌａｎｄｅｄａｎｄｇｌａｎｄｌｅｓｓｂｉｏｔｙｐｅｓｏｆＡｒｔｅｍｉｓｉａａｎｎｕａＬ．［Ｊ］．Ｉｎｔ．Ｊ．ＰｌａｎｔＳｃｉ．，１９９４，１５５（３）：３６５－３７２．

［６］一ＫｕｍａｒＳ，ＧｕｐｔａＳ，ＳｉｎｇｈＰ，ｅｔａｌ．．Ｈｉｇｈｙｉｅｌｄｓｏｆａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎｂｙｍｕｌｔｉ?ｈａｒｖｅｓｔｏｆＡｒｔｅｍｉｓｉａａｎｎｕａｃｒｏｐｓ［Ｊ］．Ｉｎｄ．ＣｒｏｐＰｒｏｄ．，２００４，１９（１）：７７－９０．

［７］一ＣｒｏｔｅａｕＲ，ＫｅｔｃｈｕｍＲ，ＬｏｎｇＲＭ，ｅｔａｌ．．Ｔａｘｏｌｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｇｅｎｅｔｉｃｓ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，２００６，５（１）：７５－９７．

６中国农业科技导报一卷

［８］一ＧｕｏＢＨ，ＫａｉＧＹ，ＪｉｎＨＢ，ｅｔａｌ．．Ｔａｘｏｌｓｙｎｔｈｅｓｉｓ［Ｊ］．Ａｆｒ．Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２００６，５（１）：１５－２０．

［９］一ＶｅｒｐｏｏｒｔｅＲ，ＶａｎＤｅｒＨｅｉｊｄｅｎＲ，ＭｏｒｅｎｏＰＲＨ．ＢｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｔｅｒｐｅｎｏｉｄｉｎｄｏｌｅａｌｋａｌｏｉｄｓｉｎＣａｔｈａｒａｎｔｈｕｓｒｏｓｅｕｓｃｅｌｌｓ［Ｍ］．ＳａｎＤｉｅｇｏ：ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，１９９７，２２１－２９９．

［１０］一赵淑娟，刘涤，胡之壁．植物次生代谢基因工程［Ｊ］．中国生物工程杂志，２００３，２３（７）：５２－５６．

ＺｈａｏＳＪ，ＬｉｕＤ，ＨｕＺＢ．Ｐｌａｎｔｓｅｃｏｎｄａｒｙｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｇｅｎｅｔｉｃｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ［Ｊ］．Ｐｒｏｇ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２００３，２３（７）：５２－５６．［１１］一杨致荣，毛雪，李润植．植物次生代谢基因工程研究进展［Ｊ］．植物生理与分子生物学学报，２００５，３１（１）：１１－１８．

ＹａｎｇＺＲ，ＭａｏＸ，ＬｉＲＺ．Ｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｉｎｇｅｎｅｔｉｃｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｏｆｐｌａｎｔｓｅｃｏｎｄａｒｙｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ［Ｊ］．Ｊ．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２００５，３１（１）：１１－１８．

［１２］一ＧｒａｈａｍＩＡ，ＢｅｓｓｅｒＫ，ＢｌｕｍｅｒＳ，ｅｔａｌ．．ＴｈｅｇｅｎｅｔｉｃｍａｐｏｆＡｒｔｅｍｉｓｉａａｎｎｕａＬ．ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓｌｏｃｉａｆｆｅｃｔｉｎｇｙｉｅｌｄｏｆｔｈｅａｎｔｉｍａｌａｒｉａｌｄｒｕｇａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１０，３２７（５９６３）：３２８－３３１．

［１３］一ＷｅａｔｈｅｒｓＰＪ，ＡｒｓｅｎａｕｌｔＰＲ，ＣｏｖｅｌｌｏＰＳ，ｅｔａｌ．．ＡｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｎＡｒｔｅｍｉｓｉａａｎｎｕａ：ｓｔｕｄｉｅｓｉｎｐｌａｎｔａａｎｄｒｅｓｕｌｔｓｏｆａｎｏｖｅｌｄｅｌｉｖｅｒｙｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｒｅａｔｉｎｇｍａｌａｒｉａａｎｄｏｔｈｅｒｎｅｇｌｅｃｔｅｄｄｉｓｅａｓｅｓ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，２０１０，１０（２）：１７３－１８３．［１４］一ＭｅｒｃｋｅＰ，ＢｅｎｇｔｓｓｏｎＭ，ＢｏｕｗｍｅｅｓｔｅｒＨＪ，ｅｔａｌ．．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｌｏｎｉｎｇ，ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆａｍｏｒｐｈａ?４，１１?ｄｉｅｎｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ａｋｅｙｅｎｚｙｍｅｏｆａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｉｎＡｒｔｅｍｉｓｉａａｎｎｕａＬ．［Ｊ］．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．，２０００，３８１（２）：１７３－１８０．

［１５］一ＴｅｏｈＫＨ，ＰｏｌｉｃｈｕｋＤＲ，ＲｅｅｄＤＷ，ｅｔａｌ．．ＡｒｔｅｍｉｓｉａａｎｎｕａＬ．（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）ｔｒｉｃｈｏｍｅ?ｓｐｅｃｉｆｉｃｃＤＮＡｓｒｅｖｅａｌＣＹＰ７１ＡＶ１，ａｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＰ４５０ｗｉｔｈａｋｅｙｒｏｌｅｉｎｔｈｅｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆｔｈｅａｎｔｉｍａｌａｒｉａｌｓｅｓｑｕｉｔｅｒｐｅｎｅｌａｃｔｏｎｅａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎ［Ｊ］．ＦＥＢＳＬｅｔｔ．，２００６，５８０（５）：１４１１－１４１６．

［１６］一ＺｈａｎｇＹ，ＴｅｏｈＫＨ，ＲｅｅｄＤＷ，ｅｔａｌ．．ＴｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｌｏｎｉｎｇｏｆａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｃａｌｄｅｈｙｄｅＤｅｌｔａ１１（１３）ｒｅｄｕｃｔａｓｅａｎｄｉｔｓｒｏｌｅｉｎｇｌａｎｄｕｌａｒｔｒｉｃｈｏｍｅ?ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎｉｎＡｒｔｅｍｉｓｉａａｎｎｕａ［Ｊ］．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００８，２８３（３１）：２１５０１－２１５０８．

［１７］一ＴｅｏｈＫＨ，ＰｏｌｉｃｈｕｋＤＲ，ＲｅｅｄＤＷ，ｅｔａｌ．．ＭｏｌｅｃｕｌａｒｃｌｏｎｉｎｇｏｆａｎａｌｄｅｈｙｄｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｉｍｐｌｉｃａｔｅｄｉｎａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｉｎＡｒｔｅｍｉｓｉａａｎｎｕａ［Ｊ］．Ｂｏｔａｎｙ，２００９，８７（６）：６３５－６４２．

［１８］一ＢｒｏｗｎＧＤ，ＳｙＬＫ．ＩｎｖｉｖｏｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｏｆｄｉｈｙｄｒｏａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｃａｃｉｄｉｎＡｒｔｅｍｉｓｉａａｎｎｕａｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，２００４，６０（５）：１１３９－１１５９．

［１９］一ＣｈｅｎＤＨ，ＹｅＨＣ，ＬｉＧＦ．ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｃｈｉｍｅｒｉｃｆａｒｎｅｓｙｌｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅｇｅｎｅｉｎＡｒｔｅｍｉｓｉａａｎｎｕａＬ．ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓｖｉａＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ?ｍｅｄｉａｔｅｄｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＳｃｉ．，２０００，１５５（２）：１７９－１８５．

［２０］一ＭａＣ，ＷａｎｇＨ，ＬｕＸ，ｅｔａｌ．．ＴｅｒｐｅｎｏｉｄｍｅｔａｂｏｌｉｃｐｒｏｆｉｌｉｎｇａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｒａｎｓｇｅｎｉｃＡｒｔｅｍｉｓｉａａｎｎｕａＬ．ｂｙｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅｔｗｏ?ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｇａｓｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｔｉｍｅ?ｏｆ?ｆｌｉｇｈｔｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ［Ｊ］．Ｍｅｔａｂｏｌｏｍｉｃｓ，２００９，５（４）：４９７－５０６．［２１］一ＳｈｅｎＱ，ＣｈｅｎＹＦ，ＷａｎｇＴ，ｅｔａｌ．．ＯｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＰ４５０ｍｏｎｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ（ｃｙｐ７１ａｖ１）ａｎｄｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＰ４５０ｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ｃｐｒ）ｇｅｎｅｓｉｎｃｒｅａｓｅｄａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎｃｏｎｔｅｎｔｉｎ

Ａｒｔｅｍｉｓｉａａｎｎｕａ（Ａｓｔｅｒａｃｅａｅ）［Ｊ］．Ｇｅｎｅｔ．Ｍｏｌ．Ｒｅｓ．，２０１２１１（３）：３２９８－３３０９．

［２２］一ＸｉａｎｇＬＥ，ＺｅｎｇＬＸ，ＹｕａｎＹ，ｅｔａｌ．．Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔｏｆａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｂｙｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｄｘｒ，ｃｙｐ７１ａｖ１ａｎｄｃｐｒｉｎｔｈｅｐｌａｎｔｓｏｆＡｒｔｅｍｉｓｉａａｎｎｕａＬ．［Ｊ］．ＰｌａｎｔＯｍｉｃｓＪ．，２０１２，５（６）：５０３－５０７．

［２３］一ＺｈａｎｇＬ，ＪｉｎｇＦＹ，ＬｉＦＰ，ｅｔａｌ．．ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｔｒａｎｓｇｅｎｉｃＡｒｔｅｍｉｓｉａａｎｎｕａ（Ｃｈｉｎｅｓｅｗｏｒｍｗｏｏｄ）ｐｌａｎｔｓｗｉｔｈａｎｅｎｈａｎｃｅｄｃｏｎｔｅｎｔｏｆａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎ，ａｎｅｆｆｅｃｔｉｖｅａｎｔｉ?ｍａｌａｒｉａｌｄｒｕｇ，ｂｙｈａｉｒｐｉｎ?ＲＮＡ?ｍｅｄｉａｔｅｄｇｅｎｅｓｉｌｅｎｃｉｎｇ［Ｊ］．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２００９，５２：１９９－２０７．

［２４］一ＭａＤＭ，ＰｕＧＢ，ＬｅｉＣＹ，ｅｔａｌ．．ＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆＡａＷＲＫＹ１，ａｎＡｒｔｅｍｉｓｉａａｎｎｕａｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｔｈａｔｒｅｇｕｌａｔｅｓｔｈｅａｍｏｒｐｈａ?４，１１?ｄｉｅｎｅｓｙｎｔｈａｓｅｇｅｎｅ，ａｋｅｙｇｅｎｅｏｆａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌＰｈｙｓｉｏｌ．，２００９，５０（１２）：２１４６－２１６１．

［２５］一ＹｕＺＸ，ＬｉＪＸ，ＹａｎｇＣＱ，ｅｔａｌ．．Ｔｈｅｊａｓｍｏｎａｔｅ?ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅＡＰ２／ＥＲＦｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｓＡａＥＲＦ１ａｎｄＡａＥＲＦ２ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙｒｅｇｕｌａｔｅａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｉｎＡｒｔｅｍｉｓｉａａｎｎｕａＬ．［Ｊ］．Ｍｏｌ．Ｐｌａｎｔ，２０１２，５（２）：３５３－３６５．

［２６］一ＬｕＸ，ＺｈａｎｇＬ，ＺｈａｎｇＦ，ｅｔａｌ．．ＡａＯＲＡ，ａｔｒｉｃｈｏｍｅ?ｓｐｅｃｉｆｉｃＡＰ２／ＥＲＦｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｏｆＡｒｔｅｍｉｓｉａａｎｎｕａ，ｉｓａｐｏｓｉｔｉｖｅｒｅｇｕｌａｔｏｒｉｎｔｈｅａｒｔｅｍｉｓｉｎｉｎｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃｐａｔｈｗａｙａｎｄｉｎｄｉｓｅａｓｅｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏＢｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎｅｒｅａ［Ｊ］．ＮｅｗＰｈｙｔｏｌ．，２０１３，１９８：１１９１－１２０２．

［２７］一ＺｈｏｕＬ，ＺｕｏＺ，ＣｈｏｗＭＳＳ．Ｄａｎｓｈｅｎ：ａｎｏｖｅｒｖｉｅｗｏｆｉｔｓｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，ａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌｕｓｅ［Ｊ］．Ｊ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ．Ｐｈａｒｍ．，２００５，４５（１２）：１３４５－１３５９．［２８］一ＺｈｉＢＨ，ＡｌｆｅｒｍａｎｎＡＷ．Ｄｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｎｈａｉｒｙｒｏｏｔ，ｃｕｌｔｕｒｅｓｏｆＳａｌｖｉａｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍ．，１９９３，３２（３）：６９９－７０３．

［２９］一ＫａｉＧＹ，ＬｉａｏＰ，ＺｈａｎｇＴ，ｅｔａｌ．．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ，ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｉｎｇ，ａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆａｇｅｎｅｅｎｃｏｄｉｎｇｇｅｒａｎｙｌｇｅｒａｎｙｌｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅｆｒｏｍＳａｌｖｉａｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ［Ｊ］．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｐｒｏｃ．Ｅ，２０１０，１５（２）：２３６－２４５．

［３０］一ＧａｏＷ，ＨｉｌｌｗｉｇＭＬ，ＨｕａｎｇＬＱ，ｅｔａｌ．．Ａｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｇｅｎｏｍｉｃｓａｐｐｒｏａｃｈｔｏｔａｎｓｈｉｎｏｎｅｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｐｒｏｖｉｄｅｓｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｃａｌｉｎｓｉｇｈｔｓ［Ｊ］．Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．，２００９，１１（２２）：５１７０－５１７３．

［３１］一ＧｕｏＪ，ＺｈｏｕＹＪ，ＨｉｌｌｗｉｇＭＬ，ｅｔａｌ．．ＣＹＰ７６ＡＨ１ｃａｔａｌｙｚｅｓｔｕｒｎｏｖｅｒｏｆｍｉｌｔｉｒａｄｉｅｎｅｉｎｔａｎｓｈｉｎｏｎｅｓｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｅｎａｂｌｅｓｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｆｅｒｒｕｇｉｎｏｌｉｎｙｅａｓｔｓ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２０１３，１１０（２９）：１２１０８－１２１１３．

［３２］一ＨｕａＷ，ＺｈａｎｇＹ，ＳｏｎｇＪ，ｅｔａｌ．．ＤｅｎｏｖｏｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｉｎＳａｌｖｉａｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｇｅｎｅｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆａｃｔｉｖｅｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，２０１１，９８（４）：２７２－２７９．

［３３］一ＳｈｅｌｔｏｎＡＬ．Ｖａｒｉａｂｌｅｃｈｅｍｉｃａｌｄｅｆｅｎｃｅｓｉｎｐｌａｎｔｓａｎｄｔｈｅｉｒｅｆｆｅｃｔｓｏｎｈｅｒｂｉｖｏｒｅｂｅｈａｖｉｏｒ［Ｊ］．Ｅｖｏｌ．Ｅｃｏｌ．Ｒｅｓ．，２０００，２（２）：２３１－２４９．

［３４］一ＧｅＸＣ，ＷｕＪＹ．ＩｎｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｄｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｔａｎｓｈｉｎｏｎｅａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｉｎＳａｌｖｉａｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａｈａｉｒｙｒｏｏｔｓｂｙＢ?ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃａｃｉｄ［Ｊ］．Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２００５，６８（２）：１８３－１８８．

７

一期唐克轩等：植物次生代谢产物生物反应器研究进展

［３５］一ＳｈｉＭ，ＫｗｏｋＫＷ，ＷｕＪＹ．ＥｎｈａｎｃｅｍｅｎｔｏｆｔａｎｓｈｉｎｏｎｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｎＳａｌｖｉａｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａＢｕｎｇｅ（ｒｅｄｏｒＣｈｉｎｅｓｅｓａｇｅ）

ｈａｉｒｙ?ｒｏｏｔｃｕｌｔｕｒｅｂｙｈｙｐｅｒｏｓｍｏｔｉｃｓｔｒｅｓｓａｎｄｙｅａｓｔｅｌｉｃｉｔｏｒ［Ｊ］．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃ．，２００７，４６（４）：１９１－１９６．

［３６］一ＫａｉＧＹ，ＸｕＨ，ＺｈｏｕＣＣ，ｅｔａｌ．．ＭｅｔａｂｏｌｉｃｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｔａｎｓｈｉｎｏｎｅｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃｐａｔｈｗａｙｉｎＳａｌｖｉａｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａｈａｉｒｙｒｏｏｔｃｕｌｔｕｒｅｓ［Ｊ］．Ｍｅｔａｂ．Ｅｎｇ．，２０１１，１３（３）：３１９－３２７．［３７］一ＷａｌｋｅｒＫ，ＣｒｏｔｅａｕＲ．Ｔａｘｏｌｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃｇｅｎｅｓ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００１，５８（１）：１－７．

［３８］一ＨｅｚａｒｉＭ，ＬｅｗｉｓＮＧ，ＣｒｏｔｅａｕＲ．Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｔａｘａ?４（５），１１（１２）?ｄｉｅｎｅｓｙｎｔｈａｓｅｆｒｏｍｐａｃｉｆｉｃｙｅｗ（Ｔａｘｕｓｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ）ｔｈａｔｃａｔａｌｙｚｅｓｔｈｅｆｉｒｓｔｃｏｍｍｉｔｔｅｄｓｔｅｐｏｆｔａｘｏｌｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ［Ｊ］．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．，１９９５，３２２（２）：４３７－４４４．

［３９］一ＷｉｌｄｕｎｇＭＲ，ＣｒｏｔｅａｕＲＡ．ｃＤＮＡｃｌｏｎｅｆｏｒｔａｘａｄｉｅｎｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ｔｈｅｄｉｔｅｒｐｅｎｅｃｙｃｌａｓｅｔｈａｔｃａｔａｌｙｚｅｓｔｈｅｃｏｍｍｉｔｔｅｄｓｔｅｐｏｆｔａｘｏｌｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ［Ｊ］．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９６，２７１（１６）：９２０１–９２０４．

［４０］一ＪｅｎｎｅｗｅｉｎＳ，ＬｏｎｇＲＭ，ＷｉｌｌｉａｍｓＲＭ，ｅｔａｌ．．ＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅＰ４５０ｔａｘａｄｉｅｎｅ５α?ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ，ａｍｅｃｈａｎｉｓｔｉｃａｌｌｙｕｎｕｓｕａｌｍｏｎｏｏｘｙｇｅｎａｓｅｃａｔａｌｙｚｉｎｇｔｈｅｆｉｒｓｔｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎｓｔｅｐｏｆｔａｘｏｌｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ［Ｊ］．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，２００４，１１（３）：３７９–３８７．［４１］一ＪｅｎｎｅｗｅｉｎＳ，ＣｒｏｔｅａｕＲ．Ｔａｘｏｌ：ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｍｏｌｅｃｕｌａｒｇｅｎｅｔｉｃｓ，ａｎｄｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２００１，５７（１－２）：１３－１９．

［４２］一ＴａｂａｔａＨ．Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｂｙｐｌａｎｔ?ｃｅｌｌ?ｃｕｌｔｕｒｅｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ［Ｊ］．Ａｄｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｅｎｇ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２００４，８７：１－２３．［４３］一ＳｔｉｅｒｌｅＡ，ＳｔｒｏｂｌｅＧ，ＳｔｉｅｒｌｅＤ．ＴａｘｏｌａｎｄｔａｘａｎｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｂｙＴａｘｏｍｙｃｅｓａｎｄｒｅａｎａｅ，ａｎｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｆｕｎｇｕｓｏｆｐａｃｉｆｉｃｙｅｗ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９３，２６０（５１０５）：２１４－２１６．

［４４］一ＪｉＹ，ＢｉＪＮ，ＹａｎＢ，ｅｔａｌ．．Ｔａｘｏｌ?ｐｒｏｄｕｃｉｎｇｆｕｎｇｉ：ａｎｅｗａｐｐｒｏａｃｈｔｏｉｎｄｕｓｔｒｉａｌｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｔａｘｏｌ［Ｊ］．Ｃｈｉｎ．Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２００６，２２（１）：１－６．

［４５］一ＫｅｔｃｈｕｍＲＥＢ，ＷｈｅｒｌａｎｄＬ，ＣｒｏｔｅａｕＲＢ．Ｓｔａｂｌｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄｌｏｎｇ?ｔｅｒｍｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅｏｆｔｒａｎｓｇｅｎｉｃＴａｘｕｓｃｅｌｌｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｃｕｌｔｕｒｅｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌＲｅｐ．，２００７，２６（７）：１０２５–１０３３．

［４６］一ＨｏＣＫ，ＣｈａｎｇＳＨ，ＬｕｎｇＪ，ｅｔａｌ．．ＴｈｅｓｔｒａｔｅｇｉｅｓｔｏｉｎｃｒｅａｓｅｔａｘｏｌｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｂｙｕｓｉｎｇＴａｘｕｓｍａｉｒｅｉｃｅｌｌｓｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｗｉｔｈＴＳａｎｄＤＢＡＴｇｅｎｅｓ［Ｊ］．Ｉｎｔ．Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｓｃｉ．Ｅｎｇ．，２００５，３：１７９－１８５．

［４７］一ＺｈａｎｇＰ，ＬｉＳＴ，ＬｉｕＴＴ，ｅｔａｌ．．Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａ１０?ｄｅａｃｅｔｙｌｂａｃｃａｔｉｎＩＩＩ?１０β?Ｏ?ａｃｅｔｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｇｅｎｅｌｅａｄｓｔｏｉｎｃｒｅａｓｅｄｔａｘｏｌｙｉｅｌｄｉｎｃｅｌｌｓｏｆＴａｘｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌＴｉｓｓ．Ｏｒｇ．Ｃｕｌｔ．，２０１１，１０６（１）：６３－６７．

［４８］一ＬｉＳＴ，ＺｈａｎｇＰ，ＺｈａｎｇＭ，ｅｔａｌ．．ＦｕｎｃｔｉｏｎａｌａｎａｌｙｓｉｓｏｆａＷＲＫＹｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＤＢＡＴｇｅｎｅｉｎＴａｘｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＢｉｏｌ．，２０１３，１５（１）：１９－２６．

［４９］一ＺａｒａｔｅＲ，ＶｅｒｐｏｏｒｔｅＲ．ＳｔｒａｔｅｇｉｅｓｆｏｒｔｈｅｇｅｎｅｔｉｃｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｍｅｄｉｃｉｎａｌｐｌａｎｔＣａｔｈａｒａｎｔｈｕｓｒｏｓｅｕｓ（Ｌ．）Ｇ．Ｄｏｎ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．，２００７，６（２－３）：４７５－４９１．

［５０］一ＨｅｉｊｄｅｎＲ，ＶｅｒｐｏｏｒｔｅＲ，ＴｅｎＨｏｏｐｅｎＨＪＧ．ＣｅｌｌａｎｄｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅｓｏｆＣａｔｈａｒａｎｔｈｕｓｒｏｓｅｕｓ（Ｌ．）Ｇ．Ｄｏｎ：ａｌｉｔｅｒａｔｕｒｅｓｕｒｖｅｙ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌＴｉｓｓ．Ｏｒｇ．Ｃｕｌｔ．，１９８９，１８（３）：２３１

－２８０．

［５１］一ＰｏｍａｈａｂｏｖáＢ，ＤｕｅｋＪ，ＤｕｋｏｖáＪ，ｅｔａｌ．．ＩｍｐｒｏｖｅｄａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｏｆａｊｍａｌｉｃｉｎｅａｎｄｔｅｔｒａｈｙｄｒｏａｌｓｔｏｎｉｎｅｉｎＣａｔｈａｒａｎｔｈｕｓｃｅｌｌｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇａｎＡＢＣｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ［Ｊ］．Ｊ．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌ．，２００９，１６６（１３）：１４０５－１４１２．

［５２］一ＫｕｔｃｈａｎＴＭ．Ａｌｋａｌｏｉｄｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ［ｍｄａｓｈ］ｔｈｅｂａｓｉｓｆｏｒｍｅｔａｂｏｌｉｃｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｏｆｍｅｄｉｃｉｎａｌｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌ，１９９５，７（７）：１０５９－１０７０．

［５３］一ＰｅｅｂｌｅｓＣＡ，ＳａｎｄｅｒＧＷ，ＬｉＭ，ｅｔａｌ．．ＦｉｖｅｙｅａｒｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅｏｆｔｈｅｉｎｄｕｃｉｂｌｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｎｔｈｒａｎｉｌａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅｉｎＣａｔｈａｒａｎｔｈｕｓｒｏｓｅｕｓｈａｉｒｙｒｏｏｔｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，２００９，１０２（５）：１５２１－１５２５．

［５４］一ＨｕｇｈｅｓＥＨ，ＨｏｎｇＳＢ，ＧｉｂｓｏｎＳＩ，ｅｔａｌ．．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｆｅｅｄｂａｃｋ?ｒｅｓｉｓｔａｎｔａｎｔｈｒａｎｉｌａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅｉｎＣａｔｈａｒａｎｔｈｕｓｒｏｓｅｕｓｈａｉｒｙｒｏｏｔｓｐｒｏｖｉｄｅｓｅｖｉｄｅｎｃｅｆｏｒｔｉｇｈｔｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｔｅｒｐｅｎｏｉｄｉｎｄｏｌｅａｌｋａｌｏｉｄｌｅｖｅｌｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，２００４，８６（６）：７１８－７２７．

［５５］一ＡｙｏｒａＴＴ，ＣｈａｐｐｅｌｌＪ，ＬｏｚｏｙａＧＥ，ｅｔａｌ．．ＯｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＣａｔｈａｒａｎｔｈｕｓｒｏｓｅｕｓｈａｉｒｙｒｏｏｔｓｏｆａｔｒｕｎｃａｔｅｄｈａｍｓｔｅｒ３?ｈｙｄｒｏｘｙ?３?ｍｅｔｈｙｌｇｌｕｔａｒｙｌ?ＣｏＡｒｅｄｕｃｔａｓｅｇｅｎｅ［Ｊ］．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２００２，９７（２）：１３５－１４５．

［５６］一ＪａｇｇｉＭ，ＫｕｍａｒＳ，ＳｉｎｈａＡＫ．ＯｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｎａｐｏｐｌａｓｔｉｃｐｅｒｏｘｉｄａｓｅｇｅｎｅＣｒＰｒｘｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｈａｉｒｙｒｏｏｔｌｉｎｅｓｏｆＣａｔｈａｒａｎｔｈｕｓｒｏｓｅｕｓ［Ｊ］．Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，２０１１，９０（３）：１００５－１０１６．

［５７］一ＳｕｔｔｉｐａｎｔａＮ，ＰａｔｔａｎａｉｋＳ，ＫｕｌｓｈｒｅｓｔｈａＭ，ｅｔａｌ．．ＴｈｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒＣｒＷＲＫＹ１ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙｒｅｇｕｌａｔｅｓｔｈｅｔｅｒｐｅｎｏｉｄｉｎｄｏｌｅａｌｋａｌｏｉｄｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｉｎＣａｔｈａｒａｎｔｈｕｓｒｏｓｅｕｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌ．，２０１１，１５７（４）：２０８１－２０９３．

［５８］一龚一富，王何瑜，卢鹏，等．长春花毛状根再生植株的获得及抗癌生物碱的产生［Ｊ］．中草药，２０１２，４３（４）：７８８－７９４．［５９］一ＹｕａｎＦ，ＷａｎｇＱ，ＰａｎＱ，ｅｔａｌ．．ＡｎｅｆｆｉｃｉｅｎｔｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓｂａｓｅｄｐｌａｎｔｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｆｒｏｍｔｈｅｈｙｐｏｃｏｔｙｌｏｆＣａｔｈａｒａｎｔｈｕｓｒｏｓｅｕｓ［Ｊ］．Ａｆｒｉ．Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２０１１，１０（６６）：１４７８６－１４７９５．

［６０］一ＷａｎｇＱ，ＸｉｎｇＳ，ＰａｎＱ，ｅｔａｌ．．ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｅｆｆｉｃｉｅｎｔＣａｔｈａｒａｎｔｈｕｓｒｏｓｅｕｓｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎａｎｄｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｕｓｉｎｇＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓａｎｄｈｙｐｏｃｏｔｙｌｓａｓｅｘｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．ＢＭＣＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２０１２，１２（１）：３４．

［６１］一ＰａｎＱ，ＷａｎｇＱ，ＹｕａｎＦ，ｅｔａｌ．．ＯｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＯＲＣＡ３ａｎｄＧ１０ＨｉｎＣａｔｈａｒａｎｔｈｕｓｒｏｓｅｕｓｐｌａｎｔｓｒｅｇｕｌａｔｅｄａｌｋａｌｏｉｄｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｒｅｖｅａｌｅｄｂｙＮＭＲ?ｍｅｔａｂｏｌｏｍｉｃｓ［Ｊ］．ＰＬｏＳＯＮＥ，２０１２，７（８）：ｅ４３０３８．

［６２］一肖培根．新编中药志［Ｍ］．北京：化学工业出版社，２００２．［６３］一ＹａｉｖｉａｄａＹ，ＴａｂａｔａＭ．Ｐｌａｎｔｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆｔｒｏｐａｎｅａｌｋａｌｏｉｄｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１９９７，１４（１）：１－１０．

［６４］一ＰａｔｔｅｒｓｏｎＳ，Ｏ＇ＨａｇａｎＤ．ＢｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃｓｔｕｄｉｅｓｏｎｔｈｅｔｒｏｐａｎｅａｌｋａｌｏｉｄｈｙｏｓｃｙａｍｉｎｅｉｎＤａｔｕｒａｓｔｒａｍｏｎｉｕｍ；ｈｙｏｓｃｙａｍｉｎｅｉｓｓｔａｂｌｅｔｏｉｎｖｉｖｏｏｘｉｄａｔｉｏｎａｎｄｉｓｎｏｔｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍｌｉｔｔｏｒｉｎｅｖｉａａｖｉｃｉｎａｌｉｎｔｅｒｃｈａｎｇｅｐｒｏｃｅｓｓ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，６１（３）：３２３－３２９．

［６５］一ＭａｔｓｕｄａＪ，ＯｋａｂｅＳ，ＨａｓｈｉｍｏｔｏＴ，ｅｔａｌ．．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｌｏｎｉｎｇｏｆｈｙｏｓｃｙａｍｉｎｅ６β?ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ，ａ２?ｏｘｏｇｌｕｔａｒａｔｅ?ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｄｉｏｘｙｇｅｎａｓｅ，ｆｒｏｍｃｕｌｔｕｒｅｄｒｏｏｔｓｏｆＨｙｏｓｃｙａｍｕｓｎｉｇｅｒ［Ｊ］．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９１，２６６（１５）：９４６０－９４６４．

８中国农业科技导报一卷

［６６］一ＮａｓｏｍｊａｉＰ，ＲｅｅｄＤＷ，ＴｏｚｅｒＤＪ，ｅｔａｌ．．ＭｅｃｈａｎｉｓｔｉｃｉｎｓｉｇｈｔｓｉｎｔｏｔｈｅｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＰ４５０?ｍｅｄｉａｔｅｄｏｘｉｄａｔｉｏｎａｎｄｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔｏｆｌｉｔｔｏｒｉｎｅｉｎｔｒｏｐａｎｅａｌｋａｌｏｉｄｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ［Ｊ］．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００９，１０（１４）：２３８２－２３９３．

［６７］一ＹｕｎＤＹ，ＨａｓｈｉｍｏｔｏＴ，ＹａｍａｄａＹ．Ｍｅｔａｂｏｌｉｃｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｏｆｍｅｄｉｃｉｎａｌｐｌａｎｔｓ：ＴｒａｎｓｇｅｎｉｃＡｔｒｏｐａｂｅｌｌａｄｏｎｎａｗｉｔｈａｎｉｍｐｒｏｖｅｄａｌｋａｌｏｉｄｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９２，８９（２４）：１１７９９－１１８０３．

［６８］一ＺｈａｎｇＬ，ＤｉｎｇＲ，ＣｈａｉＹ，ｅｔａｌ．．ＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｔｒｏｐａｎｅｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃｐａｔｈｗａｙｉｎＨｙｏｓｃｙａｍｕｓｎｉｇｅｒｈａｉｒｙｒｏｏｔｃｕｌｔｕｒｅｓ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，２００４，１０１（１７）：６７８６－６７９１．

［６９］一ＬｉｕＸＱ，ＹａｎｇＣＸ，ＣｈｅｎＭ，ｅｔａｌ．．ＰｒｏｍｏｔｉｎｇｓｃｏｐｏｌａｍｉｎｅａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓｏｆＡｔｒｏｐａｂｅｌｌａｄｏｎｎａ

ｇｅｎｅｒａｔｅｄｆｒｏｍｈａｉｒｙｒｏｏｔｓｗｉｔｈｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｐｍｔａｎｄｈ６ｈｇｅｎｅ［Ｊ］．Ｊ．Ｍｅｄ．ＰｌａｎｔｓＲｅｓ．，２０１０，４（１７）：１７０８－１７１３．［７０］一ＹａｎｇＣＸ，ＣｈｅｎＭ，ＺｅｎｇＬＪ，ｅｔａｌ．．ＩｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｏｆｔｒｏｐａｎｅａｌｋａｌｏｉｄｓｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｎｈａｉｒｙｒｏｏｔｃｕｌｔｕｒｅｓｏｆＡｔｒｏｐａｂｅｌｌａｄｏｎｎａｂｙｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｐｍｔａｎｄＨ６Ｈｇｅｎｅｓ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＯｍｉｃｓ．Ｊ．，２０１１，４（１）：２９－３３．

［７１］一ＷａｎｇＸ，ＣｈｅｎＭ，ＹａｎｇＣ，ｅｔａｌ．．ＥｎｈａｎｃｉｎｇｔｈｅｓｃｏｐｏｌａｍｉｎｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓｏｆＡｔｒｏｐａｂｅｌｌａｄｏｎｎａｂｙｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｐｍｔａｎｄｈ６ｈｇｅｎｅｓ［Ｊ］．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｐｌａｎｔ，２０１１，１４３（４）：３０９－３１５．

［７２］一ＳｏｎｇＧＱ，ＷａｌｗｏｒｔｈＡ．Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ?ｍｅｄｉａｔｅｄｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＡｔｒｏｐａｂｅｌｌａｄｏｎｎａ［Ｊ］．ＰｌａｎｔＣｅｌｌＴｉｓｓ．Ｏｒｇ．Ｃｕｌｔ．，２０１３，１１５（１）：１０７－１１３．

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一期唐克轩等：植物次生代谢产物生物反应器研究进展