大岩桐的组培快繁技术
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大岩桐的组培快繁技术
大岩桐为苦苣苔科、苦苣苔属球根花卉,别名六雪尼。大岩桐原产于巴西,因其花色繁多,花期长,且在夏季开花,深受人们的喜爱,是著名的室内小盆栽花卉。大岩桐传统以播种、扦插、分球进行繁殖。大岩桐种子极小,每克约28万粒,播种对土壤要求高,播种产生的后代易发生性状分离;扦插繁殖系数低,不能满足大批量生产的要求;分球繁殖有
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株形不整齐的缺点。大岩桐杂交种的观赏价值较高,要保持其优良性状,进行工厂化生产,组织培养成了最有效的繁殖途径。我们对紫花、红花、红花白边、粉红花4个大花品种进行了组培研究,并获得了成功,可为工厂化生产大岩桐提供参考。
1 材料与方法
11 材料
大岩桐的幼嫩叶片。
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12 方法
ＭＳ培养基,6-ＢＡ10+ＮＡＡ01,6-ＢＡ05+ＮＡＡ01,6-ＢＡ03+ＮＡＡ01,ＩＢＡ06。各附加琼脂8克/升,糖30克/升,其中糖减半、ＭＳ大量元素减半。ｐＨ57,温度20-25℃,光照强度2000Ｌｕｘ,光照时间12-16ｈ/ｄ。
2 结果与分析
21 愈伤组织诱导、芽的分化
切取盆栽大岩桐的幼嫩叶片,用肥皂水仔细擦洗,然后
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在自来水下冲洗15分钟,再用蒸馏水冲洗2遍。在无菌工作台上,将洗净的叶片先用75%酒精浸泡5秒,倾出酒精,用01%氯化汞溶液处理5-6分钟,取出,用无菌水冲洗5次,最后用无菌滤纸吸干表面水分。切去叶柄,叶片切成8×8ｍｍ小块,平放在号培养基中。经过15天培养,外植体弯曲、膨大增厚。30天后,切口处产生少量颗粒状愈伤组织,在外植体的不定部位产生瘤状、浅黄绿色愈伤组织。转入新的号培养基中,愈伤组织继续生长。45天后,愈伤组织分化出
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小芽眼,继续培养,70天后,叶片几乎长满了芽眼,同时芽逐渐抽长。
22 继代增殖培养
将带芽愈伤组织分切成小块,转入号培养基中,每瓶
4-5块,每月转瓶一次。芽继续分化并生长。将大的芽单独切下,接入号培养基进行增殖培养。10天后,在芽的基部形成丛生芽,25天后丛生芽长大。将丛生芽切割,转入号培养基,每25-30天转瓶一次,可得到大量小苗。
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23 生根培养
将高2ｃｍ以上、带有4-6片叶的小苗切下,接在号培养基中进行生根培养。7天后开始生根,12-15天可得到生根良好的小植株。
24 炼苗移栽
组培苗的移栽环节是关键。先将生根好的瓶苗搬到室外进行炼苗培养:首先,将瓶盖轻轻拧松,放于阴凉处,7天后观察叶片颜色变深,10天左右可进行移栽。移栽前先将
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苗基部及根部的琼脂洗干净,注意不要伤根和折断叶片。用珍珠岩为介质进行假植,先用竹棍戳孔,将苗的根顺好,再用手指轻压根茎部的介质,使苗固定。移好后,浇透水,宜用喷雾,避免水流太大将苗冲倒。浇完水察看有否倒伏的小苗,及时予以扶正、固定。加盖薄膜保湿,10天后小苗挺立,可揭开。若是在夏天移栽,要注意遮荫,待小苗成活后再掀开遮阳网。小苗移栽的前期,要保持80%以上空气湿度,可用喷雾加湿。成活率可达95%以上。小苗成活后,可结合浇水
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每周喷施叶面肥1次,以尿素和三要素复合肥交互使用,浓度不可太高,01%即可。
大巖桐為苦苣苔科、苦苣苔屬球根花卉,別名六雪尼。大巖桐原產於巴西,因其花色繁多,花期長,且在夏季開花,深受人們的喜愛,是著名的室內小盆栽花卉。大巖桐傳統以播種、扦插、分球進行繁殖。大巖桐種子極小,每克約28萬粒,播種對土壤要求高,播種產生的後代易發生性狀分離;扦插繁殖系數低,不能滿足大批量生產的要求;分球繁殖有
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株形不整齊的缺點。大巖桐雜交種的觀賞價值較高,要保持其優良性狀,進行工廠化生產,組織培養成瞭最有效的繁殖途徑。我們對紫花、紅花、紅花白邊、粉紅花4個大花品種進行瞭組培研究,並獲得瞭成功,可為工廠化生產大巖桐提供參考。
1 材料與方法
11 材料
大巖桐的幼嫩葉片。
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12 方法
ＭＳ培養基,6-ＢＡ10+ＮＡＡ01,6-ＢＡ05+ＮＡＡ01,6-ＢＡ03+ＮＡＡ01,ＩＢＡ06。各附加瓊脂8克/升,糖30克/升,其中糖減半、ＭＳ大量元素減半。ｐＨ57,溫度20-25℃,光照強度2000Ｌｕｘ,光照時間12-16ｈ/ｄ。
2 結果與分析
21 愈傷組織誘導、芽的分化
切取盆栽大巖桐的幼嫩葉片,用肥皂水仔細擦洗,然後
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在自來水下沖洗15分鐘,再用蒸餾水沖洗2遍。在無菌工作臺上,將洗凈的葉片先用75%酒精浸泡5秒,傾出酒精,用01%氯化汞溶液處理5-6分鐘,取出,用無菌水沖洗5次,最後用無菌濾紙吸幹表面水分。切去葉柄,葉片切成8×8ｍｍ小塊,平放在號培養基中。經過15天培養,外植體彎曲、膨大增厚。30天後,切口處產生少量顆粒狀愈傷組織,在外植體的不定部位產生瘤狀、淺黃綠色愈傷組織。轉入新的號培養基中,愈傷組織繼續生長。45天後,愈傷組織分化出
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小芽眼,繼續培養,70天後,葉片幾乎長滿瞭芽眼,同時芽逐漸抽長。
22 繼代增殖培養
將帶芽愈傷組織分切成小塊,轉入號培養基中,每瓶
4-5塊,每月轉瓶一次。芽繼續分化並生長。將大的芽單獨切下,接入號培養基進行增殖培養。10天後,在芽的基部形成叢生芽,25天後叢生芽長大。將叢生芽切割,轉入號培養基,每25-30天轉瓶一次,可得到大量小苗。
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23 生根培養
將高2ｃｍ以上、帶有4-6片葉的小苗切下,接在號培養基中進行生根培養。7天後開始生根,12-15天可得到生根良好的小植株。
24 煉苗移栽
組培苗的移栽環節是關鍵。先將生根好的瓶苗搬到室外進行煉苗培養:首先,將瓶蓋輕輕擰松,放於陰涼處,7天後觀察葉片顏色變深,10天左右可進行移栽。移栽前先將
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苗基部及根部的瓊脂洗幹凈,註意不要傷根和折斷葉片。用珍珠巖為介質進行假植,先用竹棍戳孔,將苗的根順好,再用手指輕壓根莖部的介質,使苗固定。移好後,澆透水,宜用噴霧,避免水流太大將苗沖倒。澆完水察看有否倒伏的小苗,及時予以扶正、固定。加蓋薄膜保濕,10天後小苗挺立,可揭開。若是在夏天移栽,要註意遮蔭,待小苗成活後再掀開遮陽網。小苗移栽的前期,要保持80%以上空氣濕度,可用噴霧加濕。成活率可達95%以上。小苗成活後,可結合澆水
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每周噴施葉面肥1次,以尿素和三要素復合肥交互使用,濃度不可太高,01%即可。
《植物组织培养》课程标准
《植物组织培养》课程标准 课程名称：《园林植物植物组织培养》 课程性质：职业能力必修课 学分：3分 计划学时：45 适用专业：园艺技术、园林技术、种子生产与经营专业 1.前言 1.1课程定位 《植物组织培养技术》是一门园艺技术、园林技术等专业的基础课，也是一门实践性很强的课程。通过本门课程学习，主要培养学生将来能从事相关工作，如能够独立设计组培方案、具备培养基制备、进行无菌操作、快繁、控制污染、褐化、玻璃化等不良现象发生和分析解决问题的能力，还能够独立从事植物组织培养经营管理的工作。该课程以化学、植物学、植物生理学、遗传学等学科为基础建立起来的，为适应时代发展，结合当前高职教育改革实际，压缩理论课时，精选教学内容，增加单位时间内的知识传授量，增加实验实训课的课时。培养技能型、应用型人才，使课程教学朝着高职院校校企合作的办学模式，工学结合的人才培养模式，教学做合一的教学模式方向发展。 1.2设计思路 本课程理论课时48学时。根据植物组织培养岗位对从业人员知识、能力和素质要求，以“应用”为主旨和特征，构建课程内容模块体系。课程内容打破传统的“老三段”模式，打破学科特性，理论知识要求“必需、够用”，实践教学突出能力培养，注重知识的应用性、实践性和针对性，并以此来构建组培课结构和内容体系。在实践教学上，以“项目教学法”为主导，强化实训项目的实用性。本课程一般按照“实验室设计与培养条件要求―培养基制备―无菌操作技术―器官培养―个体植物组织培养与园艺植物栽培”的顺序进行。 2．课程目标 2.1总体目标 通过理论学习和实践锻炼，掌握植物组织培养的基本理论，能识别常见的污染、褐变、玻璃化等现象，掌握组培培养方案设计程序和器官培养要求，掌握组培各流程环节与技术要求。通过参观组培实验室，掌握组培实验室的场地选择和厂房设计的原理和方法；通过配制母液、培养基的制作、使用无菌操作技术，能熟练掌握培养基母液和激素母液的配制，并且能够独立完成培养基的制作和高压灭菌锅的使用，还要掌握不通植物材料无菌接种技术。通过个体植物组织培养的
草莓组织培养
草莓的组织培养 一、茎尖 1．概述通过对草莓茎尖离体培养的试验研究表明：取草莓茎尖为外植体，以0．35 mm大小为宜；用MS+0.5 mg/L 6-BA+O.2 mg/L NAA培养基． 不定芽再生率高；以1/2 MS+O.1 mg/L IBA 生根效果最好。 2.结论（1）再生途径：草莓刚抽出的匍匐茎的茎尖 （2）灭菌方法：洗去泥土、灰尘，再用自来水冲淋2～3h，置超净工作台上进行75 ﹪乙醇和0．1 升汞不同时间的灭菌处理，最后用无菌水冲洗5～8次，接种于诱导培养基中。诱导培养基为MS+0．5 mg／L6一BA+0．2mg／L NAA+3 蔗糖(w／v)+0．5﹪卡拉胶，pH值为5.6～5.8。每个灭菌处理接种2O枚外植体，l5d后观察记录外植体的污染、死亡、无菌成活生长等情况。 （3）培养基： ①芽诱导试验，于MS培养基附加0．2 mg／L NAA、IAA、IBA不同种类生长素的培养基中，20d后调查记录幼芽分化情况。 ②继代培养与扩大繁殖，MS培养基附加0.5 mg/L6-BA、0.01 mg/L NAA。 ③根诱导试验, 用1/2 MS附加不同浓度(mg/I )IBA 有0．05、0．1、0．2、0．5及不加IBA的5个处理. （3）条件：培养基均在1～ 1.1大气压下热压灭菌20min。培养温度(25± 2)℃。每日光照12h，光强2 000Lux。 （1）再生途径：用其花药、花蕾、叶、叶柄、子叶、下胚轴等作外植体进行离体培养。 （2）灭菌方法：洗去泥土、灰尘，再用自来水冲淋2～3h，置超净工作台上进行75 ﹪乙醇和0．1 升汞不同时间的灭菌处理. （3）培养基：①MS+BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L(浓度单位,下同)；②MS+6一BA0.5+KT 0.5；③MS+BA2.0+IAA 1.0；④MS+BA2.0+NAA0.5+2,4-D0.1；⑤MS+BA2.0+IBA0.1。以上培养基各加CH 100 mg/L，蔗糖20g/ L(①为30g/ L)。 ①用于花药诱导培养基； ②用于花药幺伤组织分化培养； ③、④用于其余5种外植体(叶盘、叶柄、下胚轴、子叶、花蕾)诱导培养；⑤仅用于花蕾培养。 （4）条件：培养条件均为12 h光照12 h黑暗。光强度1200-1500lx、温度(25 ±2)℃。 三、叶片以红颊、章姬、丰香草莓叶片为试材，对影响草莓叶片不定芽再生的主要因素进行了试验研究，建立了草莓离体叶片的再生体系。试验结果表明，基因型、不同激素种类和配比直接影响了草莓叶片再生芽的发生。基因型是影响草莓叶片再生能力的决定因素，不同激素配比是不定芽产生的关键因素。 叶片愈伤组织的诱导培养基以MS+TDZ 2~3mg／1较理想， 芽伸长的理想培养基为MS+6一BA 0．3～O．5mg／l， 生根培养基以1／2MS+IBA0．3mg／1较适宜，移栽成活率可达90％以上。 2.结论（1）再生途径：先采取当年生匍匐茎茎尖培养繁殖，建立起三个品种的无性繁殖系；再从继代3周的无菌苗上剪取叶片作为外植体，进行不同的处理，每瓶接10片叶盘，每处理重复5瓶。 （2）灭菌方法：于121℃下高温高压蒸汽灭菌20min。
植物组织培养技术
植物组织培养技术 植物组织培养是指将植物体的一部分接种在合成培养基上，使其按照预定目标生 长发育成新植株。近年来，花卉组织培养及快繁脱毒技术越来越多地应用于花卉种苗 繁殖生产中。 一、组织培养在花卉产业中的应用 1.快速、大量繁殖优良品种组织培养技术已成为种苗生产的主要技术之一。经组织 培养，可增加繁殖系数，加快繁殖速度，可生产出种性纯、品质好、产花量高的生产 性用苗。在花卉育种过程中，不断的杂交、选种极大地扩展了花卉的花形与颜色，使 得花卉在各方面都越来越接近人们的需求。但在同时，也造成了花卉基因类型的高度 异质化———子代不易有均一表现。而组培苗是在母株器官、组织或细胞的基础上发展起来的，可以保持母株的全部特性（花形、花色、株形、开花习性、抗逆性等）， 因而可以根据需要来选择集多种优良性状于一体的植株加以分生，从而得到大量与母 株一模一样的植株。 2.培育脱毒苗木采用组织培养技术，利用植株的分生组织不易感染病毒的原理，可 以对花卉植株的分生组织进行组织培养来繁殖苗木，防止亲代植株的病害传递给子代，从而达到脱毒的目的。 病毒病对长期应用营养繁殖（分株、扦插等）的观赏植物及其生产的危害相当严重。由于观赏植物多采用营养繁殖，如嫁接、分株、压条等方法繁殖时，病毒（及类 病毒）则通过营养体及刀具、土壤传递给后代，大大加速了病毒病的传播与积累，导 致病毒病的危害越来越严重。据统计，观赏植物的病毒已多达100多种，并且逐年有 新增病毒的报道。观赏植物因病毒病大大影响其观赏价值，表现在康乃馨、菊花、百合、风信子等的鳞茎、球茎与宿根类花卉及兰科植物等严重退化，花少且小，花朵畸形、变色，大大影响观赏价值，严重者甚至导致某些品种的灭绝，严重制约观赏植物 生产的发展，这也是我国切花品种跨不出国门的原因之一。组培快繁技术已应用到蝴蝶兰的栽培中非洲菊也可以通过组培快繁技术进行繁殖 植物组织培养脱毒的原理主要是利用茎尖分生组织不带毒或少带毒。感病植株体内的病毒分布不均匀，其数量随植株部位和年龄而异，越靠近茎尖顶端的区域，病毒 的浓度也越低。分生区域无维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞不断分 裂和活跃的生长速度，因此生长点含有病毒的数量极少，几乎检测不出病毒。因此， 茎尖培养时，切取茎尖的大小对脱毒效果有很大影响，茎尖越小效果越佳，但太小时 不易成活，过大则不能保证完全除去病毒。不同种类的植物和不同种类的病毒在茎尖
蓝莓组培快繁技术实例 · 附配方
蓝莓（Vaccinium corymbosum）属杜鹃花科，越橘属植物。起源于北美，多年生灌木小浆果果树。因果实呈蓝色，故称为蓝莓国际粮农组织将其列为人类五大健康食品之一。 本试验以蓝莓半木质化茎段为外植体，并通过瓶外生根技术，建立起植株再生体系。 1 材料与方法 1.1 外植体材料及培养条件 1.1.1 外植体选择 高灌蓝莓半木质化茎段。 1.1.2 外植体预处理及灭菌 剪取蓝莓半木质化枝条，立即去掉上部叶片带回室内，剪成带有一个叶芽2-3厘米长茎段，在流动自来水中冲洗20-30分钟，在超净工作台上用75%酒精消毒2-3分钟，用无菌水冲洗3次，吸干水后在0.1%升汞中消毒5-8分钟，用无菌水冲洗3次，吸干水分，剪去茎段两端约 0.5-1厘米，立即接种到初代培养基中。 1.1.3 培养条件 诱导培养基：改良WPM + ZT 1.0mg/L 增殖培养基：改良WPM + IAA 0.1mg/L + ZT 2.0mg/L 复壮培养基：改良WPM + IBA 0.1mg/L WPM具体改良为：以硝酸钙 684mg/L、硝酸钾 190mg/L、EDTA铁钠 73.4mg/L和盐酸硫胺素0.1mg/L代替原WPM培养基中的硫酸钾、氯化钙、硫酸亚铁和乙二胺四乙酸钠。 以上培养基均加蔗糖3%，琼脂0.7%，pH值5.2。 培养温度为25℃，光照强度为2000lx，光照时长为12-16时/天。
2 结果与分析 2.1 初代诱导培养 将处理好的外植体立即接种到诱导培养基中，5-6天叶芽开始萌动，10天开始展叶，20天腋芽长到1厘米长，30天腋芽长到1.5-2.5厘米长。 2.2 继代增殖培养 将初代培养长出的茎剪成1.5-2厘米长茎段转接到增殖培养基中。30-35天增殖5-7倍，增殖苗生长健壮。 2.3 复壮培养 将继代苗剪成1-1.5厘米茎段，转接到壮苗培养基，复壮培养30-40天，复壮苗高5-6厘米且粗壮。 2.4 瓶外生根培养
《植物组织培养技术》组培技术研发
《植物组织培养技术》组培技术研发 模块介绍 本模块针对组培研发岗位的工作职责与任职要求，编排了试验方案设计和数据调查与分析二个实训项目，主要内容包括组培的基本理论、提高组培苗遗传稳定性的措施、组培试验方案的制订等，重点阐述了组培快繁的程序与类型、组培研究的技术路线与试验设计方法、组培快繁的常见问题、组培数据调查与分析方法等。在理论学习的同时，开展项目实践活动，培养学生会设计组培试验、撰写试验方案、编制组培试验观察表和技术指标统计分析，具备组培研发工所要求的理论知识、技能水平和相应的职业素质。模块结构设计见表1。 表1 模块结构设计 项目1 组培试验方案设计 一、学习目标 （一）终极目标 能够根据培养对象和培养目的科学设计试验方案。 （二）促成目标 1.熟悉信息搜集途径和文献检索方法，提高信息搜集与处理能力； 2.清楚组培研究的内容与技术路线、试验方案的体例与撰写要求； 3.熟悉组培基本理论，清楚组培快繁程序、类型与试验设计方法； 4.熟悉组培苗遗传稳定的影响因素与提高措施； 5.培养团队精神、创新意识和科学思维方法。
二、学习内容 1.组培基本理论； 2.组培快繁程序； 3.组培快繁类型与再生途径； 4.提高组培苗遗传稳定性的措施； 5.信息搜集途径与方法； 6．组培研究内容（影响因素）； 7.组培研究的技术路线； 8.组培试验设计方法； 9.组培试验方案格式。 三、知识点 1.植物细胞全能性理论（植物细胞全能性理论、根芽激素理论）； 2.组培快繁程序（初代培养、继代培养、生根培养）； 3.组培快繁类型（无菌短枝型、丛生芽增殖型、器官发生型、胚状体发生型、原球茎发生型）； 4.提高组培苗遗传稳定性的措施； 5.信息搜集途径与方法； 6．组培研究内容（影响因素）； 7.组培研究的技术路线； 8.组培试验设计方法（单因子试验设计、双因子试验设计、正交试验设计）； 9.组培试验方案格式。 四、技能点 1.组培信息搜集与处理能力； 2.组培试验方案设计能力。 五、教学重点 1.细胞全能性理论； 2.组培快繁程序与快繁类型（植株再生途径）； 3.组培研究的内容与技术路线；
苹果树组培快繁技术实例 · 含配方
苹果的组织培养是采用无菌培养技术，将来自优良植物的茎尖、腋芽、叶片、鳞片、块根和球茎等器官以及它们的组织切片进行离体培养，使之在短期内获得大量遗传性一致的个体的方法。由于离体技术处理严格，所以很容易脱除一些细菌病原及病毒，是复壮品种的有效措施。已成功脱除的病毒和病害有苹果褪绿叶斑病毒、花叶病病毒、轮纹病等。苹果矮化砧、抗寒砧的组织培养也已成功。苹果脱毒组培技术流程具体如下。
一 外植体材料选择与处理 早春，将上年芽接或切接的盆栽长富2号苹果苗移人温室，待新梢长出3～5片新叶时，放入热处理箱中，37℃恒温热处理30d或32℃与37℃每8h变换一次，变温热处理60d。脱毒率可达80％以上。热处理结束后，从盆栽苗嫩梢上采集生长旺盛、长约2～3cm顶梢，流水冲洗10min，去掉小叶。70％乙醇浸泡30s，蒸馏水冲洗后放入0.1％HgCI。中消毒10min，无菌水冲洗3～5次，解剖镜下迅速剥取1.0mm的茎尖进行分离培养，接种于起始培养基上。
二 培养基制备 1.1 芽诱导 适宜苹果芽诱导培养基为：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L。诱导的芽生长正常可发育成新梢。 1.2 继代培养 选择诱导的芽丛切割成单芽茎段，转接于设计的继代培养基上。适宜的苹果继代培养基为：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖4％+琼脂0.36mg/L。培养条件：光照强度2000～ 2500lx，光照时间14～16h/d，适宜温度为25℃±2.0℃。40d后增殖6.1倍。 1.3 生根培养 选择生长正常的继代培养苗，剪成单芽茎段，插入生根培养基中，苹果适宜的生根培养基为：1／2MS+IAA1.5mg/L+蔗糖25％+琼脂0.36％。培养30d后，平均4～6条根／苗，长达0.5～1.0cm。根白且粗，多直接生于茎基部。
满天星组培快繁技术实例 · 含配方
满天星 Gypsophila elegans 满天星，又名为霞草、重瓣丝石竹，原产地中海沿岸，属石竹科多年生宿根草本花卉。为常绿矮生小灌木，其株高约为65～70cm，茎细皮滑，分枝甚多，叶片窄长，无柄，对生，叶色粉绿。由于它花型小、浅色、花姿蓬松具立体感，气质高雅清秀，给人以朦胧感，花序群体效果极佳，是重要的陪衬花，为当今最流行的切花之一，十分畅销。
满天星种苗多采用边生产切花，边利用植株下部发生的腋芽进行插扦获得。用这种方法，满 天星繁殖系数较低，种苗品质参差不齐，较难获得大批量的优质种苗。一些单瓣种可用种子 繁殖。商品化切花生产的，种苗繁殖以组培为主，采用茎尖培养，繁殖系数高，根系生长状 况好，花枝挺拔，色泽纯正，切花质量高。满天星组织培养繁殖速度快，生根率高，无畸形 变异，过渡苗驯化成活率高，与其他花卉组培相比，易获得成功，但普遍存在玻璃化现象。 1、初代培养 诱导培养基为1/2MS+0.3mg/L 6-BA+0.1mg/L KT+0.3mg/L NAA，或MS+1.0mg/L 6- BA+2.0mg/L KT+0.3mg/L NAA+0.2mg/L IAA，各培养基加3％～4％蔗糖0.6％～0.7％琼脂。培养温度25～27℃，光照强度2000～2200lx，光照时间每天12～16h。 剪取满天星母株上生长较粗壮的嫩梢，剪去展开叶片，留下生长较嫩的叶片，将外植体放在 烧杯中，用自来水冲洗10～20min，然后加入少量家用洗衣粉或洗洁精少许，加入少量的水，用小毛刷搅拌2～5min。用此方法重复数次，再用自来水冲洗干净满天星茎尖上的洗涤液。 把冲洗净的满天星茎尖外植体放入75％的酒精中约3～5min，再用0.1％的升汞浸泡外植体 5～7min，或在10％的漂白粉清洗液中浸泡10～15min，再用无菌蒸馏水冲洗5～7次，即得 无菌外植体，置于无菌操作台中的培养皿中待用。然后将嫩茎切成lcm左右的带芽茎段，腋 芽切取0.5～1.0cm长的茎尖，接种到诱导培养基上。
樱桃组培快繁技术研究
樱桃组培快繁技术研究 摘要：以甜樱桃品种高砂、顽童和中国樱桃品种莱阳矮樱为试材，以MS与F14为基本培养基进行组织培养试验。对增殖率和成苗率等指标进行研究。结果表明，用F14做培养基3个樱桃品种茎尖组培苗的增殖系数比MS高，F14上高砂、顽童和莱阳矮樱的增殖系数分别是4．17、3．78和5．0，MS上则分别是3．33、3．22和4．17；在F14上，樱桃茎尖组培成苗率莱阳矮樱为83．3％，高砂23．3％，顽童16．7％；在F14添加植物生长调节剂的增殖培养基中，以F14+6-BA 1．0mg／L+IBA 0．5mg／L+GA32．0mg／L对高砂和顽童的茎尖组培苗增殖系数大，以F14+6-BA 1．Omg／L+IBA 0．1mg／L+GA 2．0mg／L对高砂组培苗的增殖系数大，促进节间伸长的效果好：在一步生根法培养基F14+IBA 1．0mg／L上，平均生根率高砂较顽童高；在F14+IBA 1．0mg／L上添加活性炭500～1000mg／L时，可有效提高顽童的生根率。 关键词：樱桃；茎尖；组织培养；快速繁殖 组织培养技术的发展为果树的育种工作带来许多方便，也为长期保存果树种质资源提供了新的手段?。研究表明，通过茎尖外植体进行樱桃组培繁殖，可达到快速繁殖苗木和脱去病毒病的效果。 1 材料和方法 试材为甜樱桃品种高砂、顽童．中国樱桃品种莱阳矮樱，均来自辽阳市农林科学院果树基地。试验采用F14和Ms 为基本培养基；F14+蔗糖30 L+琼脂7 L为分化培养基；F14+植物生 长调节剂为增殖培养基，添加的植物生长调节剂有6一苄基氨基嘌呤(6．BA)、赤霉素(GA )和吲哚丁酸(IBA)，具体配方见表3；F14+IBA和MS+IBA为生根培养基。F14+IBA 1．0mg／L为一步生根法培养基。F14+IBA 1．0mg／L+活性炭为试验活性炭作用的培养基。培养基的pH值为5．6～5．8，分装在lO0ml三角瓶中，在121℃下灭菌20分钟，在黑暗条件下保存备用。 1．1 试材的预处理 取樱桃芽露绿的一年生成熟枝条，剪成带一个芽、长约2cm的枝段，用刀将芽从枝段上削下来(带些木质部)，剥除芽鳞片，去除茎表皮，用洗洁精浸泡3分钟，在流水中冲洗60～90分钟，在超净工作台上用70％酒精消毒30秒钟，用无菌水冲洗3次(每次1～2分钟)，再用0．1％氯化汞消毒15分钟，置无菌水中浸泡20分钟，用无菌水冲洗4次，待接种。 1．2 试材的接种培养 在超净工作台上将经预处理的试材用镊子剥除芽外部的叶原基，去除木质部，切下1mm大小的茎尖，接种于分化培养基F14+蔗糖3O L+琼脂7 L上培养。培养温度25±2cC，光强2000～2500K．每天光照l6小时。 1．3 评价指标 微茎尖成苗数=萌发后能正常增殖继代、具有成苗能力的微茎尖数。 成苗率(％)=成苗微茎尖数／接种微茎尖数×100 增殖芽数=接种1个芽25天后增殖的所有芽数 增殖系数=转接后芽数／转接前芽数 生根率(％)=生根嫩梢数／接种嫩梢数×100 2 结果与分析 2．1 不同樱桃品种间茎尖组培成苗率的差异 在F14基本培养基上，接种甜樱桃品种高砂、顽童和中国樱桃莱阳矮樱的茎尖，高砂的成苗率为23．3％，顽童16．7％，莱阳矮樱83．3％(表1)。在组培中发现，甜樱桃萌发率较低，接种后的第2天伤口处及茎尖边缘褐变，之后有的茎尖周围发生大量愈伤组织，延缓了茎尖的萌发及成苗时间，甚至导致死亡。而中国樱桃莱阳矮樱则萌发率和成苗率均高，组培容易。
植物无糖组培快繁技术
植物无糖组培快繁技术 一、无糖组培技术原理 无糖组培快繁技术是由日本千叶大学的古在丰树教授上世纪八十年代末发明。它是一种全新的植物组织培养技术，是环境控制技术和组织培养技术的有机结合。它以CO2代替糖作为植物体的碳源，利用工程技术手段调节组培微环境的空气、光照、温度、湿度等影响因子，促进植物光合作用，使组培植物由兼养型转变为自养型，从而促进植物的生长发育。 经大量实验研究证明，该项研究成果已成为世界领先技术。目前，中国、美国、英国、韩国等国家已将该项技术应用于种苗工业化生产中。该技术于1997年由国家外国专家局和昆明市科技局委托昆明市环境科学研究所从日本引进。 二、无糖组培技术优势 由于植物无糖组培以CO2代替糖作为植物体的碳源，对植物无糖组培微繁殖中的容器换气次数、光照强度、CO2浓度、培养基质、植物生长调节剂进行调节，并通过监测反馈结合植株生长特性建立符合植株生长要求的稳定供气系统和温度调控系统，从而解决了传统组织培养中存在的污染率高、植物生长发育不良、生长迟缓、生理功能紊乱、玻璃苗、畸形苗多等问题。据相关资料报道，无糖组培快繁技术与传统的植物组织培养技术相比，显著提高苗的质量和产苗率，可缩短培养周期，种苗生产综合成本降低。经大量实验研究证明，该项
研究成果已成为世界领先技术。 无糖组培生产工艺简单，流程缩短，技术和设备的集成度提高，降低了人工操作强度，更易于在规模化生产上推广应用。 三、无糖组培技术国内外研究进展 无糖组培快繁技术通过多年的试验研究和生产示范，在引进消化吸收国外先进技术的基础上，结合国情，昆明市环境科学研究所研制开发了无糖培养微繁殖生产的配套设施，获得三项专利。 目前，该项技术已初步应用于非洲菊、彩色马蹄莲、灯盏花、甘薯、葡萄、满天星等植物并获得成功。上述研究结果表明，无糖组培技术培育出的苗具有抽叶多、植株健壮、节间距短、根系发达、干物质积累多、光合自养能力强等优良的生物学性状。美国、韩国、英国、日本等国家已将该项技术应用于生产，并显示出了巨大的优势和良好的效果。 无糖组培快繁技术可解决传统组织培养中存在的诸多问题，显著提高种苗质量，缩短培养周期，提高产苗率，降低生产成本。但目前，该项技术在药用植物方面的应用研究，除云南农大王荔课题组报道外尚未见其它报道。
草莓组织培养研究进展
[摘要] 从草莓组织培养类型（草莓茎尖组织培养、草莓花药培养、草莓叶片、叶柄组织培养）开始，介绍了近几十年国内外草莓组培的研究现状和进展。 [关键词]草莓;组织培养; 草莓是蔷薇科草莓属多年生草本植物，是世界上七大水果之一，素有“水果皇后”的美称。草莓果实色泽艳丽，芳香多汁，酸甜适度，鲜美可口，营养丰富，每百克果实内含有蛋白质1g，脂肪，糖4～12g，酸～2g，无机盐，粗纤维，Vc45～120mg，比苹果和葡萄高10多倍，并含有丰富的磷、钙、铁、锌等矿物质，其中锌的含量是香蕉的4倍以上，比柑橘高6倍以上，比苹果高40倍以上。另外食用草莓对肠胃病和贫血病有一定的疗效，对促进智力发育有重要作用。深受国内外消费者的喜爱。草莓作为一种栽培周期短、结果早、见效快的经济作物，近15年来在我国发展迅猛，中国园艺学会草莓分会统计2003年底，我国草莓总面积和总产量均跃居世界第一位。在浆果中，草莓的总产量和总面积仅次于葡萄，成为我国发展农村经济，促进农民增收的重要经济作物。 随着草莓在国内栽培面积的扩大和种植年限的延长，草莓的病毒病严重影响草莓的生产。作为高级浆果的草莓，在我国目前的生产栽培上多沿用无性繁殖种苗：主要方法是匍匐茎繁殖和分株繁殖，但这两种方法效率低、种苗易退化、易造成病毒蔓延。王国平（1988）等调查，我国栽培草莓带病毒植株率过80%以上，戴子林（1995）等调查，我国长江流域感染大面积植株感染率在50%以上；感染了病毒病的草莓果子一年比一年小、畸形、品质差、生长缓慢，一般减产30%-80%，并逐年加重；严重影响草莓的长势、品质和产量，对病毒病目前还没有药剂可以防治。 通过草莓组织培养扩繁草莓脱毒苗，可以解决上述问题。近年来在草莓种苗生产中，有关草莓组培快繁技术的研究备受人们的重视，本文就草莓组织培养研究与应用作一综述。 一、常见草莓组织培养类型 目前，国内外在草莓品种快速繁殖上已有不少报道：常用的外植体主要有：茎尖（Adam，1972；庆子孝，1972；谭兰英等，1981）、腋芽（Boxus，1974、1977；杨乃博，1981）、叶片、叶柄、茎段，花药（Quak,1977；大泽，1972）。常见的草莓组织培养主要的类型：草莓茎尖组织培养、草莓叶片和叶柄组织培养、
多肉万象组培快繁技术实例分享 · 附配方
万象（Haworthia maughanii）又名毛汉十二卷，为百合科、十二卷属多年生肉质植物。万象形态非常奇特，叶半圆筒状，肉质叶肥厚，属典型的珍奇观赏多肉植物。 试验以花葶为外植体，获得再生植株，并从芽诱导、芽增殖，到诱导生根的培养，已建立起完整的无性繁殖体系，本课题万象微型繁殖技术已应用于在企业生产中。 1 材料与方法 1.1 外植体材料及培养条件 1.1.1 外植体选择 购得的万象成熟种苗在25℃环境下培养，浇少量水，待到其抽出花葶3-5厘米时切下。 1.1.2 外植体预处理及灭菌 用洗衣粉水清洗并用毛笔刷洗；在超净工作台上用75%酒精快速浸泡30秒，然后用加有两滴吐温-80的0.1%氯化汞溶液浸泡8分钟，之后用无菌水冲洗4次，每次洗2分钟。 1.1.3 培养条件 培养温度22℃-26℃之间，光照12小时/天，光照强度1500-2000lx。 2 结果与分析 2.1 初代诱导培养 在超净工作台上把花葶切断，每段0.5-1厘米，接入诱导培养基（配方见文末，下同）中，培养20天左右，会诱导出愈伤组织，培养45-60天可诱导出丛生芽。 2.2 继代增殖培养 愈伤组织形成后，会在愈伤组织上萌发丛生的不定芽。在超净台上，剥离不定芽，接种于增殖培养基，培养30-40天有新的丛生芽长出。 2.3 生根培养 将长至2厘米以上的小苗，转接至生根培养基中，转接时，切净芽基部的愈伤组织。10天开始可以看到根的发生。 2.4 炼苗与移栽 小苗根长1厘米时可以出苗，移栽前在培养室中打开瓶盖练苗3天，取出生根苗，在放有800-1000倍多菌灵溶液中清洗去基部培养基。
栽培基质用新鲜湿润的蛭石，植入后遮阴，第一次不浇水。1个星期后喷杀菌剂，浇少量水。小苗移栽成活率78%。 附配方 诱导培养基：MS + KT 2mg/L + NAA 0.2mg/L + Ad 5mg/L 增殖培养基：MS + KT 1mg/L + NAA 0.1mg/L + NaH2PO4 40mg/L 生根培养基：1/2MS + NAA 0.2mg/L 以上培养基均加琼脂0.7%，诱导愈伤组织和芽以及芽增殖时加蔗糖3%，生根时加蔗糖2.5%。pH值5.6-5.8，其中NaH2PO4主要起促进芽的分化的作用。
国内外植物组织培养技术的差距
国内外植物组织培养技术的差距 姓名：*** 学号：********* 指导教师：*** 专业班级：生物工程2009级1班 完成日期：2012-06-05
摘要 植物组织培养技术是农业生物技术中最早实现产业化并取得显著经济效益和社会效益的领域，在理论研究和生产实践中具有广泛的应用价值。通过对国内外植物组培的发展概况以及技术差距的分析，指出了我国植物组织培养技术的发展现状、目前存在的主要问题和应采取的措施，并对植物组织培养技术的发展作了展望。 关键词：组织培养概况差距展望 Abstract The plant tissue culture technology is agricultural biotechnology as the first realized industrialization and get a remarkable economic and social benefits of the field, in the theoretical research and production practice has wide application value. Through the domestic and international plant tissue and the development situation of the technology gap analysis, and pointed out the plant tissue culture technology's development present situation, the existing problems and the measures should be taken, and the development of plant tissue culture technology are discussed. Key words：Tissue culture situation gap looking
康乃馨植物组织培养(1)
《植物组培快繁技术》 康乃馨植物组织培养 实 验 设 计 小组成员：陈梅20141641044 郑莉20141641002 雷雨田20141641043
康乃馨植物组织培养 一、实验目的 掌握植物离体快速繁育原理、方法和完整过程。 二、实验原理 香石竹（学名Dianthuscaryophyllus）又名康乃馨，花色艳丽，开花时间长，装饰效果好，是世界上最畅销的切花之一，具有较高经济价值。由于病毒病侵害，常使植株矮化，花朵变小，花色产生斑点，退色甚至不开花，影响切花产 量和质量。通过茎尖分生组织培养，能够获得“无病毒”的健康植株，对于引 进的少而新的脱毒种苗，再进行一次茎尖培养，进一步降低基础苗中的病毒含量，并通过组织培养的方法快速繁殖，在短期内，就可以获得大量的脱毒试管苗，使引入材料迅速在生产上推广应用，取得明显的经济效益。 三、实验仪器与材料 仪器：超净工作台、酒精灯、电炉、烧杯、玻璃棒、镊子、解剖刀、接种盘、 纱布、记号笔、标签纸 试剂：75%乙醇、0.1%升汞、无菌水、MS培养基、IAA0.1mg/L、BA0.5mg/L、pH5.8-6.0、蔗糖、琼脂 材料：康乃馨带芽外植体材料 四、实验步骤 （一）培养基的配方 1、康乃馨的生芽培养基 MS+IAA(0.1mg/L)+BA(2.0mg/L)+NAA(0.2mg/L)+蔗糖30g/L+琼脂(8g/L) pH5.8-6.0,配制300ml,用培养瓶分装10~15瓶。另外需要制备无菌水10瓶，培养瓶每人3~4瓶。纱布、碟子若干，后二者分别用报纸包好一同灭菌。
2、康乃馨的继代培养基 MS+BA(0.3mg/L)+NAA(0.2mg/L)+蔗糖30g/L+琼脂(8g/L)，pH5.8-6.0,配制300ml,用培养瓶分装10-15瓶。另外需要制备无菌水10瓶，培养瓶每人3-4瓶。纱布、碟子若干后二者分别用报纸包好一同灭菌。 3、康乃馨的生根培养基 MS+生根培养基为1/2MS+NAA(0.075mg/L)+蔗糖(30g/L)+琼脂(8g/L)， pH5.8-6.0,配制0.3L，用培养瓶分装10-15瓶。另外，需要制备无菌水10瓶，每人3-4培养瓶、纱布、碟子若干后二者分别用报纸包好一同灭菌。 （二）康乃馨的生芽培养 1、无菌操作准备 将培养基、无菌水、及各种接种用具放入超净工作台，开紫外灯照射消毒20-30min,开送风开关，关紫外灯，通风10min后，打开照明日光灯。洗手、换鞋，换实验服，戴口罩，进入接种室，开启超净工作台。用纱布吸取75%酒精擦手、擦拭超净台、擦拭培养基和无菌水瓶，点燃酒精灯，镊子、解剖刀、剪刀等接种工具放入灭菌锅灭菌，待冷却后使用。 2、外植体消毒 选取康乃馨叶腋间生出的侧芽为外殖体，用自来水冲洗半小时，将材料上的泥土和灰尘及杂质冲洗干净，用解剖刀切取所需组织放入大烧杯中，用75%的酒精浸泡消毒30s，用无菌水冲洗3次，再将材料移入0.1%升汞溶液浸泡10分钟,然后在超净台内用无菌水冲洗6次。材料消毒完成。 3、外植体的制备 将消毒好的材料用无菌滤纸吸去多余的水份,然后在无菌超净工作台上的接种盘内，借助解剖刀剥离茎尖，剥取茎尖大小通常在0.3mm左右。以上操作均
第一节 植物组培快繁工厂的设计
第一节植物组培快繁工厂的设计 第一节植物组培快繁工厂的设计 一、组培苗生产规模的确定 生产规模的确定首先应根据市场需求、生长的植物种类和经济实力来确定，例如，木本植物比草本植物的培养周期长，设计时必须比草本植物多增30%的空间、设备。植物种苗无糖微繁殖工厂化生产程序包括①入选品种外植体的筛选及获取; ②外植体灭菌诱导培养; ③快速 繁殖; ④生根培养; ⑤出瓶过渡炼苗; ⑥包装进入市场等工艺。一般一个熟练的接种工人根据繁殖品种的不同，年生产量可达15―20万苗。即规划一个年生产量达500万株的组培室，需设25―30个无菌操作位置。当无菌操作位置数量确定后，即可计算出接种室的需求面积。按日生产组培苗的数量及培养周期计算需要的培养架数量，以此为基础很容易就可计算出培养室的需求面积，一般为1台无菌工作台或者说一个无菌操作位置，需配备净培养面积（放置培养物的面积）7-10平方米，无菌操作室与培养室的面积比例为1：2，围绕组培工厂建设，其它必备的配套设施设备及操作用具购置的数量，应以每个无菌工作台的需求量计算，解剖刀、镊子、刀片等常用工具还要有充足的备用量。室外应有相应的温室配套，生产品种栽培展示区等，其面积的大小应根据不同的植物种类来确定。因此组培工厂的建设，需要认真规划、仔细计算、合理投资，使之既有系统性又适用，才能充分发挥最大的生产潜力。在市场竞争中，尽量降低生产成本，提高产品质量和确保品种的可靠性。 二、组培种苗工厂的设计 植物组培育苗工厂应选址在安静、清洁、可避开各种环境污染源的地方，以减少污染，降低生产成本确保工作的顺利进行。根据已确定的生产规模，设计组培生产车间时，要全面了解组培工作中所需的最基本的条件，以便因地制宜地利用现有房屋改建或新建组培工厂，尽量做到合理布局。通常按工作程序先后，安排成一条连续的生产线，避免环节错位，增加日后工作的负担或引起混乱。组织培养的生产线主要包括培养器皿清洗；培养基的配制、分装、包扎和高压灭菌；无菌操作材料的表面灭菌和接种；进入培养室培养；试管苗出瓶、移栽等。各个房间的面积要合理安排，做到大小适中，工作方便，减少污染，节省能源，使用安全。图5.1所示的是一种组培生产车间设计的平面布置图： 图5.1组培生产车间的设计
菊苣的组培快繁技术
菊苣(Cichorium intybus L.)菊科菊苣属多年生草本植物。根肉质、短粗；茎直立，有棱，中空，多分枝；叶互生，长倒披针形；头状花序，花冠舌状，花色青蓝。 菊苣为药食两用植物，叶可调制生菜，根含菊糖及芳香族物质，可提制代用咖啡，促进人体 消化器官活动；其地上部分及根可供药用，中药名分别为菊苣、菊苣根，具有清热解毒，利 尿消肿，健胃等功效。 该植物耐寒，耐旱，喜生于阳光充足的田边、山坡等地，具有较强的固土护坡与水土保持作用。为此，艾比蒂繁育大量菊苣组培苗，为大面积的沙漠和退化、沙化土地提供帮助。 菊苣の快繁技术 材料准备 菊苣的种子为外殖体 培养条件 初代培养基 MS+BA0.5-1.0mg/L+IBA0.05-0.1 mg/L 愈伤组织诱导分化培养基
MS+BA1.0-1.5mg/L+IBA0.05-0.1 mg/L 生根培养基 1/2MS+NAA0.05-1.0 mg/L 以上培养基中加入2-3%的蔗糖和0.7%琼脂，pH 5.8-6.8，培养温度为25±2℃，光照时间12 h，光照强度为1000-2000LX。 生长与分化情况 (1) 初代培养：挑选野生菊苣结实饱满的成熟种子，用纱布包好，在超净工作台内，用75% 乙醇消毒30s，再用0.1%的氯化汞浸泡3-5分钟，无菌水冲洗3-5次，种子用滤纸吸干，置 于初代培养基上培养。15-20天，菊苣种子萌发生长2cm左右，切取0.5cm左右的叶片接种 于诱导分化的培养基上。 (2) 愈伤组织诱导分化培养：15-20天叶片分化为疏松的愈伤组织，有绿点凸起的愈伤组织逐 渐长出了小芽。芽生长较快，20天左右长成2-3cm的植株。 (3)生根培养：挑选3-4cm生长健壮的植株转接入生根培养基上，培养10天左右就有根的发生，根生长较快，须根较多。
植物组织培养技术
楚雄师范学院化学与生命科学系 生物技术专业《植物组织培养技术》课程教学大纲 一、课程基本信息 课程代码：031106014 课程中文名称：植物组织培养技术 课程英文名称：Plant Tissue Culture Technology 课程性质：专业选修课 使用专业：生物技术专业、葡萄与葡萄酒工程专业 开课学期：第7学期 总学时：36+27 总学分：3 预修课程：植物学、植物生理学 课程简介 植物组织培养技术是将植物的离体材料(器官、组织、细胞、原生质体等)无菌培养，使其生长、分化，进而再生完整植株的无性繁殖技术，是实践性较强的专业课之一。本课程在介绍了组织培养的含义、特点及其意义；组织培养的概念、类型、特点；组织培养技术的基本原理及操作规范；组织培养的发展简史、发展趋势及其应用。通过本课程的学习，使学生掌握组培实验室、家庭组培室、组培育苗工厂的组成、设计原则与设计要求；熟练掌握各种培养基的特点与应用；熟练掌握茎尖、茎段、叶及花器官培养消毒灭菌、接种及培养的技术；理解种质资源离体保存的意义，掌握种质资源离体保存常用方法；掌握一些常见植物的组培脱毒与快繁技术的应用。 教材建议 《植物组织培养原理与技术》，李胜、李唯主编，化学工业出版社，2008年。 参考书 《植物细胞组织培养》，刘庆昌编著，北京：中国农业大学出版社，2002年，标准书号：7-81066-529-4。 《植物组织培养(第三版)》，潘瑞炽编著，广州：广东高等教育出版社，2003年，标准书号：7-5361-2501-1。 《植物组织培养教程》，李浚明编著，北京：中国农业大学出版社，1996年，标准书号：7-81066-466-2。
花组培快繁技术在实际生产中的应用
菊花组培快繁技术在实际生产中的应用 陈喜林陈晓彬陈琦磊 （广东省汕头市海滨华侨公园管理处 汕头 515041） 摘要：为了去除病害复壮菊花，采用侧芽和花序轴两种外植体，分别在MS+6-BA2.0 mg·L-1+NAA0.1 mg·L-1+3%蔗糖培养基上经过一段时间的培养均可诱导产生不定芽，不定芽继续培养长大切成茎段微插于MS+6-BA1.0 mg·L-1+NAA0.1 mg·L-1+3%蔗糖培养基，再经过30 天左右培养增殖4.6倍。1/2MS+2%蔗糖培养14 天后100%生根。移栽基质采用泥炭与椰糖各半的混合基质，28 天后成活率98%以上。上盆后长势旺盛，翠绿健壮。花朵直径略大，且花色更加洁白，观赏价值更高。 关键词：菊花侧芽培养花序轴培养组培快繁 中图分类号：Q943.1;S682.1+1 文献标识码：A 文章编号：1006—2327—（2009）04—0029—02 菊花Dendranthema morifolium是菊科菊属的多年生宿根草本植物，原产于中国。菊花栽培历史悠久，现栽培的为高度杂交种，已成为世界广泛栽培的名花之一。生产上主要采用扦插方法繁殖，一般名贵品种扦插不仅成活率低，满足不了生产上的需要，而且栽培过程中病害（如黑斑病、褐斑病、炭疽病等）有逐年加重趋势，长势渐弱。为复壮几年前开展了针对菊花十几个品种的组织培养工作，现以“汉白吐玉”品种为例，探讨组培快繁及规模化育苗方法，以解决生产上实际问题。 1材料与方法 1.1外植体及处理 10月下旬从汕头市海滨路尾华侨公园苗圃内选择“汉白吐玉”优良单株（几天前喷杀菌剂），轻取带1～2片叶的侧芽和绿豆大小的花蕾，带回实验室，先用洗洁精饱和溶液浸泡4－5min后，流水冲洗20min后置于洁净工作台上，用1%硝酸银消毒10min，然后用无菌水漂洗并不断搅动5～6次，每次3min ，滤纸吸干水分后，用手术刀切取长0.3～0.5cm侧芽（A）。剥离花蕾得到直径0.2～0.3cm花序轴（B）。这样就获得A、B两种外植体。 1.2培养基 a.MS+6-BA2.0 mg·L-1+NAA0.1mg·L-1+3%蔗糖； b.MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1+3%蔗糖； c.1/2MS+2%蔗糖。 以上培养基是经过预备性试验，逐步添加逐步排除的方法并参考前人的研究成果筛选出来的，均以MS为基本培养基，加入0.7%琼脂，pH值5.8；121℃条件下蒸汽高压灭菌20min，培养过程中温度保持在25℃±1℃，光照12 h·d-1，光照度3000 lx。 2结果与分析 2.1诱导产生不定芽 将A、B分别接种于培养基a，5 天后观察外植体明显长大，9天后在外植体周围产生黄白色致密的愈伤组织，转瓶一次（相同培养基）到18天后，A的愈伤组织开始分化出绿色芽点，B的愈伤组织20天转瓶一次（相同培养基），到第55天才开始分化出浅绿色不定芽。不定芽再经过15天左右培养长成高1～2cm，粗0.1～0.2cm 的芽苗。 2.2 继代增殖培养 将分化出芽苗茎段切成1cm左右且带有2～3片叶作为插穗转接培养基b，4天后见0.1cm左右腋芽产生，21天后腋芽长至0.5～1.0cm，28 天后腋芽长至1.0～1.5 cm，35天后长至1.5～2.5cm，这样每30 天左右转瓶一次，其增殖达4.6倍，即可获得大量苗。 2.3生根培养 将经过大量繁殖的芽苗切成1～1.5cm茎段转瓶接培养基c，经15 天左右培养，生根率达100%，根长0.5～ 3.0cm，白色不定根3～7条，到28天时平均根数8.5条， 平均根长5.0cm。 2.4试管苗的移栽和基质的选择 经14天生根培养，根长至1.0～2.0cm，叶片舒展，叶色浓绿时即出室炼苗，洗苗移栽。采用四种移栽基质做对比试验，结果表明泥炭与椰糠各半混合基质优于纯泥炭土、珍珠岩与河沙各半混合基质，更优于纯河沙基质[1]。在泥炭与椰糠各半混合基质经28天精心养护移栽成活率在98%以上，萌出新叶生出新根，就可以上盆,按菊花生产要求进行正常的田间管理了。 2.5试管苗与同期扦插苗比较 通过田间观测比对株高、茎粗、叶片数、叶片完整度，试管苗均明显好于扦插苗，且叶片翠绿，不易感染病害，花朵直径略大，花色更加洁白。观赏期相应更长，达到了预期目的。（下转第28页） 29
草莓组培实习报告
草莓组培实习 华南农业大学李志真 一、实习意义 植物脱毒苗在农业生产中广泛使用对于降低农业生产成本、提高农产品的品质、改善农业的产业结构、提高农民经济收入都有重要的作用。草莓属多年生草本植物，靠生长出的匍匐茎进行营养繁殖，经多年种植后极易感染多种病毒，致使品质及产量降低，经济效益明显下降。利用组培快繁技术可对草莓脱毒苗进行快速繁殖及推广，出苗整齐，可进行周年生产，不受季节限制，实现新品种的工厂化育苗，并迅速推广。因此在草莓组织培养中，掌握草莓脱毒苗的培养与移栽有重要意义。 二、实习内容 实习主要掌握草莓脱毒苗的培养及大田移栽方法。 移栽的适宜温度为15度到25度。环境温度太高，炼苗不易成活，而环境温度太低，则幼苗生长缓慢。因此，炼苗宜在春秋两季温度适宜时进行。冬季也可以在温室内进行炼苗。炼苗时最好使用由透气性能好、保水能力强的蛭石作为基质配制成的培养体系。蛭石无菌无毒，但亦无营养，因此应定期浇以稀释1倍的MS培养液作为营养液代替水进行浇灌，保证脱毒苗营养及水分的供给。 移栽时，先将草莓生根培养瓶上的扎口绳或皮筋松开使组培苗初步接触空气，让植株开始长出角质层。时间约为2～3d。然后移去瓶口包扎物，让组培苗充分接触空气，2～3d后，组培苗对外界环境已逐渐适应，且培养基已开始长出菌类，此时进行组培苗的出瓶炼苗。首先，小心地用镊子夹持组培苗将苗从瓶中移出，用流水慢慢冲净植株根部的培养基，注意切勿伤及根部的根毛，小心地将洗净的脱毒苗移栽到事先已经灭菌处理过的苗床上。栽苗的深度要做到，浅不露根，深不埋心，浇足水，并用塑料膜进行覆盖使棚内的相对湿度保持在80%左右，以后定期放风，逐渐降低棚内的相对湿度，直至将塑料膜去掉。 于4月上旬选择透气性良好、疏松肥沃的土壤种植脱毒草莓苗，行距、株距各为1m，浇足水，并用防虫网进行覆盖，防止病虫害感染传毒。于9月上旬取健壮的匍匐茎苗进行大田移栽。 三、实习收获