RIP实验技术

【实验技巧】RIP实验技术

RIP实验技术

导语

近年来，长非编码RNA（lncRNA）得到了研究界的广泛关注。如今，人们已经鉴定了大量lncRNA，但大多数lncRNA的功能还未明确。为了解决这一问题，研究者们开始对lncRNA的互作蛋白进行研究，并为此开发出了越来越多的分析工具。下面我们来介绍一下RIP技术。

RNA结合蛋白免疫沉淀技术又称为RIP（RNA immunoprecipitation），可以说是RNA版的ChIP （染色质免疫沉淀），该技术能帮助人们分析与RNA结合蛋白相关的核酸。

在RIP试剂盒（如Sigma的Imprint? RNA Immunoprecipitation kit）的帮助下，研究者们能够利用针对RNA结合蛋白的抗体，从细胞提取物中捕获与蛋白相结合的RNA，再通过qPCR、芯片或二代测序技术对这些RNA进行鉴定。

不论是细胞质还是细胞核，都会发生RNA与蛋白的相互作用。据Active Motif公司产品经理Kyle Hondorp介绍，该公司的RNA ChIP-IT? kit专用于研究RNA与细胞核染色质的相互作用。该试剂盒通过甲醛固定来锁定RNA-染色质的互作，随后对染色质进行超声，并用DNAse I处理，最后利用磁珠进行沉淀。

“如你研究的是总mRNA，那么常规RIP试剂盒更合适一些，”Hondorp说，“常规RIP试剂盒可以处理所有细胞裂解物的总mRNA。”

生产Magna RIP? RNA-binding protein immunoprecipitation kit的EMD Millipore公司，也在开发专门针对染色质的RIP试剂盒。预计这一新产品将于2014年第一季度发布，该产品有化学交联与native两种形式。据介绍，化学交联可以分析究间接的蛋白-RNA相互作用，研究更高分子量的蛋白复合物。而native方法展现的是，亲和力更高也更为直接的相互作用。

除RIP以外，CLIP（UV crosslinking and immunoprecipitation）也可以帮助人们捕捉与RNA 结合蛋白互作的核酸。CLIP方案整合了交联与核酸酶消化，不仅允许对RNA-蛋白复合物进行进一步的纯化（如凝胶电泳片段分离），还能够揭示RNA-蛋白互作所发生的位点。最近人们又开发出了新型CLIP 技术——iCLIP（individual-nucleotide resolution CLIP），该技术能够以单个碱基的分辨率，来展示RNA-蛋白互作的详细信息。

据伦敦大学学院的Jernej Ule教授介绍，CLIP与RIP的关键性差异，在于沉淀复合物后的凝胶纯化步骤。CLIP技术可以给RNA-蛋白复合物的RNA末端带上放射性标记，并将这些复合物进行SDS-PAGE分离，之后转移到一张膜上。这样的过程可以提高纯化的特异性，减少非特异性的RNA。蛋白酶消化可以将RNA从膜上解离下来，用于制备cDNA文库，以备测序分析。

“CLIP要比RIP麻烦一些，不过我认为它很值得采用，”Ule说。“放射性信号的量及其特异性，能够帮助我们提高cDNA文库的质量，最终得到准确实用的数据。”

一. 细胞裂解液获取

A. 单层细胞或者贴壁细胞处理

1. 冷PBS清洗培养皿或培养瓶中的细胞两次

2. 加入冷PBS后用细胞刮将细胞刮下来，收集至enpendoff管

3. 1500rpm，4℃离心5min，弃上清，收集细胞

4. 用与细胞等体积的RIP裂解液重悬细胞，吹打均匀后于冰上静置5min

5. 每管分装200μl细胞裂解液，贮存于-80℃

B. 悬浮细胞处理：先收集细胞再计数，然后清洗裂解

C. 组织样品处理

1.冷PBS清洗新鲜切下的组织三次

2. 加入冷PBS后，用匀浆器或其他细胞分离设备使组织分散为单个细胞，计数

3. 1500rpm，4℃离心5min，弃上清，收集细胞

4. 用与细胞等体积的RIP裂解液重悬细胞，吹打均匀后置于冰上静置5min

5. 每管分装200μl细胞裂解液，贮存于-80℃

二. 磁珠的准备

A. 实验前准备

1、enpendoff管

2、磁力架

3、冰盒，RIP Wash Buffer置于冰上

4、抗体，置于冰上

5、涡旋震荡器

6、枪、枪头放于超净台照射30min，枪喷DEPC水

B. 磁珠准备过程

1. 重悬磁珠

2. 标记实验所需的enpendoff管，样品包括目的样品，阴性对照与阳性对照

3. 吸取50μl 重悬后的磁珠悬液于每个enpendoff管

4. 每管加入500μl RIP Wash Buffer，涡旋震荡

5. 将enpendoff管置于磁力架上，并左右转动15°使磁珠吸附成一条直线，去上清，重复一次

6. 用100μl的RIP Wash Buffer重悬磁珠，加入约5ug相应抗体于每个样品中

7. 室温孵育30min

8. 将enpendoff管置于磁力架上，弃上清

9. 加入500μl RIP Wash Buffer，涡旋震荡后弃上清，重复一次

10. 加入500μl RIP Wash Buffer，涡旋震荡后置于冰上

三. RNA结合蛋白免疫沉淀

A. 准备工作

1、冰盒

2、360°旋转仪

3、RIP Wash Buffer 、0.5M EDTA 、RNase Inhibitor 置于冰上

B. RNA结合蛋白免疫沉淀实验过程

1. 准备RIP Immunoprecipitation Buffer

2. 将前上步的enpendoff管放磁力架上，去上清，每管加入900ul RIP Immunoprecipitation Buffer

3. 迅速解冻第一步制备的细胞裂解液，14,000rpm，4℃离心10min。吸取100μl上清液于上一步的磁珠-抗体复合物中，使得总体积为1ml

4. 4℃孵育3h至过夜

5. 短暂离心，将enpendoff管放在磁力架上，弃上清

6. 加入500μl RIP Wash Buffer，涡旋震荡后将enpendoff管放在磁力架上，弃上清，重复清洗6次

四、RNA纯化

A. 实验前准备

1. 枪、枪头、enpendoff管紫外照射30min，喷DEPC水以除RNA酶

2. Salt SolutionⅠ、Salt SolutionⅡ、RIP Wash Buffer、Proteinase K、10%SDS、Precipitate Enhancer 置于冰上

3.RNase-free的乙醇、氯仿、异戊醇

4.DEPC水置于冰上

5. 离心机预冷

6. 冰盒

B. RNA纯化过程

1.准备Proteinase K Buffer。每个样品需150ul

2.用150ul Proteinase K Buffer重悬上述磁珠-抗体复合物

3. 55℃孵育30min

4. 孵育完之后，将enpendoff管置于磁力架上，将上清液吸入一新的enpendoff管中

5. 于每管上清液中加入250μlRIP Wash Buffer

6. 于每管加入400μl苯酚：氯仿：异戊醇，涡旋震荡15s，室温下14,000rpm离心10min

7. 小心的吸取350μl上层水相，吸入另一新的enpendoff管

8. 于每管加入400μl氯仿，涡旋震荡15s，室温下14,000rpm离心10min

9. 小心的吸取300μl上层水相，吸入另一新的enpendoff管

10. 每管加入50μl Salt SolutionⅠ，15μl Salt SolutionⅡ,5μl Precipitate Enhancer ，850μl 无水乙醇（无RNase），混合，-80℃保持1h至过夜

11. 14,000rpm，4℃离心30min，小心去上清

12. 用80%乙醇冲洗一次，14,000rpm，4℃离心15min，小心去上清，空气中晾干.

13. 10-20μl DEPC水溶解，-80℃保存，送测序

RIP实验常见问题

1：RIP试验需要注意什么?

(1)防止RNA与蛋白非特异性结合。

(2)避免RNA蛋白质结合被破坏。

(3)避免外源RNAse污染。

(4)抑制内源RNase的活性。

(5)选择适合做RIP的抗体。

(6)避免RNA结合蛋白的降解。

2：为什么抗体无法沉淀RIP裂解液中的目标蛋白?

(1)先进行IP或者WB，测试抗体可以与目标RBP结合。

(2)另选一个能与抗原其他表位结合的抗体。

(3)尽可能选用密理博RIPAb+抗体。

(4)稀释抗体成浓度梯度，进行IP测试。

(5)4℃过夜孵育抗体与RIP裂解液。

(6)确定抗体类型与Protein A/Protein G匹配。

3：提取RNA时，蛋白酶k消化不完全是什么原因?

当进行蛋白酶K消化时，确保水浴温度应设置在55℃左右，长期在65℃以上孵育会导致蛋白酶K失活。

4：提取RNA后，A260/A280比值偏离1.8~2.2区域是什么原因?

(1)需要缩短酚氯仿提取RNA的时间间隔。

(2)测试提纯后RNA中是否存在RNA酶，可能RNA发生了降解。

5：做RIP的时候和beads孵育的lysate的浓度如何确定?有些动物的文献提到用细胞板数细胞个数，想知道如果用蛋白浓度的话，大概在什么数量范围的蛋白总量对应50 ul BEADS?

50 ul beads对应的是一个reaction，而我们推荐一个reaction是100ul裂解上清(2×107 cells加入100ul RIP lysis buffer得到)，所以只需要在裂解前计数一下，并按括号中的比例加入裂解buffer，后续100 ul 裂解上清就是一个reaction的蛋白用量。不建议通过裂解后测蛋白浓度的方法进行配比。

6：RIP可以分提核浆的RNA-蛋白质复合物吗?

理论上，可以采用能分别抽提核浆蛋白的蛋白抽提kit先分离样本，再进行RIP实验。但需要特别注意的是所用kit中的reagent不能有RNase和DNase，以及要能与下游的抗体beads孵育兼容。

7：因为RIP做完得到的是RNA序列，要做后续检测，比如测序、判断目标序列位置等，是不是都必须要做RT-PCR，得到逆转录的DNA后，后面就跟ChIP相同了?

常见的用real time qRT-PCR。如果对照的目的是保证两个样品间加入的细胞量一致或者进行定量，理论上说，使用input作为判别，计算不同样品上样量的差异。如果对照的目的是为了看IgG 以及目的抗体富集的非特异性mRNA的量的话，那么可以找一个确定不会与目的抗体结合的RNA片段设计primer进行qPCR，用来看IgG以及目的抗体拉下来的背景情况。RIP可以看成是普遍使用的染色质免疫沉淀ChIP技术的类似应用，但由于研究对象是RNA-蛋白复合物而不是DNA-蛋白复合物，RIP实验的优化条件与ChIP实验不太相同(如复合物不需要固定，RIP反应体系中的试剂和抗体绝对不能含有RNA酶，抗体需经RIP实验验证等等)

实验6-RIP路由实验

实验六RIP路由一、实验课时：2学时二、实验目的熟悉动态路由的基本特点。掌握RIP路由选择协议的要点。掌握给路由器配置动态路由的方法。三、实验环境两台用于测试的计算机路由器两台网线若干四、实验过程用串口线连接两台路由器。用网线将两台计算机分别和两台路由器相连在计算机上配置路由器的命令，配置两台路由器的RIP路由选择协议。使用ping命令测试用于实验的两台计算机的连通性。五、实验内容配置路由器的主机名等基本配置。配置路由器接口的ip地址。配置路由器的RIP路由。在主机上ping，连通说明实验成功，否则实验不成功。撰写实验报告。六、实验步骤： 1、用网线连接两台路由器与两台计算机注意，用串口线连接路由器时，Router1为DCE端，Router2为DTE端。

2、在路由器Router1上配置接口的IP地址和串口上的时钟频率 Router>enable Router#configure terminal Router(config)#hostname Router1 Router1 (config)#no ip domain-lookup Router1 (config)#line console 0 Router1 (config-line)#logging synchronous Router1 (config-line)#exec-timeout 0 0 Router1 (config-line)#exit Router1(config)# int fa0/0 Router1(config-if)# ip address 172.16.1.1 255.255.255.0 Router1(config-if)# no shutdown Router1(config-if)# exit Router1(config)# int s0/0/0 Router1(config-if)# ip address 172.16.2.1 255.255.255.0 Router1(config-if)#clock rate 64000 Router1(config-if)# no shutdown Router1(config-if)#exit 3、在路由器Router1上配置RIP V2路由协议 Router1(config)# router rip ！创建RIP路由进程 Router1(config-router)#version 2 ！定义RIP版本 Router1(config-router)#network 172.16.0.0 ！定义关联网络（必须是直连的主类网络地址）

PLC技术应用集中实训任务单

2011年上学期PLC技术应用集中实训任务单一、实训的目的与任务实训的目的：通过本次实训让学生进一步熟习常用继电器接触器控制线路和PLC电气控制系统的设计、安装、调试与故障排除方法，使学生具备常用继电控制系统和PLC电气控制系统的设计、安装、调试和故障排除的能力。实训任务：项目一、星形-三角形降压启动正反转控制电路的设计、安装与调试。 1）设计星形-三角形降压启动下的正反转加继电接触器控制电路电气原理图，要求具有失压、欠压、短路、过载等保护。从实训现场所提供的电器元件中正确选择所需电器元件，给出详细的元件明细表。 2）在木板上安装星形-三角形降压启动正反转控制电路，并进行调试，直到正确运行。 3）用PLC实现上述控制要求，要求根据现场开关信号正确分配I/O地址并建立I/O地址分配表；设计PLC输入/输出接口电路；安装PLC输入/输出接口电路；设计PLC梯形图；并上机进行程序调试。项目二、送料小车PLC控制系统的设计用PLC控制运料小车的动作，如上图所示。在操作面板上装有启动按钮和停止按钮，其中启动按钮用来开启运料小车，停止按钮用来停止运料小车。控制运料小车的动作要求如下： 1、按启动按钮小车从原点SQ1起动， KM1接触器吸合使小车向前运行直到碰SQ4开关停， YV2电磁阀吸合使乙料斗装料5秒，然后KM2接触器吸合小车向后运行直到碰SQ3开

关停，此时YV1电磁阀吸合使甲料斗装料3秒， 2、随后KM2接触器吸合小车向后运行直到碰SQ2开关停止，KM3接触器吸合使小车卸料4秒，卸料后KM1接触器吸合使小车向前运行直到碰SQ5开关停，YV3电磁阀吸合使清洗阀清洗小车5秒，然后再直接去装料、卸料、清洗如此循环工作。 3、当中途按下停止按钮X1后，小车在本次装卸料、清洗完成后，回到原点SQ1停止。考核要求： 1、电路设计：电路的设计要符合题目的任务与要求。 2、安装与接线：（1）安装元件的要求： 1）选用元器件正确，元件要牢固安装在配线板上。 2）各元件的安装位置应整齐、匀称，间距及布局合理。 3）安装要以端子排区分出板内、板外元件。 4）负荷开关、熔断器的受电端子应安装在控制板的外侧，并使熔断器的受电端为底座的中心端。（2）导线的接线要求： 1）选择的线径要符合要求。 2）板内布线应横平竖直，分布均匀。变换走向时应垂直。 3）板内布线同一平面的导线应高低一致或前后一致，不能交叉。非交叉不可时，该根导线应在元件接线端子引出时，就水平架空跨越，但必须走线合理。 4）板内布线通道尽可能少，同路并行导线按主、控电路分类集中，紧贴配线板布线（主电路若有换相可架空布线）。 5）板外软导线要用绑扎软管套好，进出端子排的导线要套数码管，软线要压冷压端子。 6）所有接点要紧固、不反圈、不压绝缘皮、不露铜太长。（3）PLC编程：根据控制要求将程序输入PLC可编程序控制器，功能达到设计要求。（4）PLC和配电板进行互连线，接通电源试运行，观察元件动作情况必须满足设计要求，（满足设计要求的步骤，有一步给一步的分数），若全部满足则接电动机试车，否则不予以接电动机试车。（5）注意要正确使用工具和仪表，调试时必须遵守安全操作规程和安全文明生产，如发生短路等重大事故，实训成绩为不合格。项目三、送料小车PLC控制系统的设计（此题为2011年5月株洲市技能大赛PLC设计项目试题，一二项目完成后可选做）三台电机的顺序控制电路的设计。控制及设计要求如下： 1）按下启动按钮后第一台电机启动，8秒后第二台电机自动启动，第二台电机启动后第

1_RIP路由协议实验资料

1. 实验报告如有雷同，雷同各方当次实验成绩均以0分计。 2. 当次小组成员成绩只计学号、姓名登录在下表中的。 3. 在规定时间内未上交实验报告的，不得以其他方式补交，当次成绩按0 分计。 4. 实验报告文件以PDF 格式提交。【实验题目】RIP 路由协议实验【实验目的】 1. 掌握在路由器上配置RIPv2和RIPv1路由协议。 2. 了解有类路由和无类路由的区别，是否支持VLSM （可变长子网掩码） 3. 了解路由器广播和组播形式的区别【实验内容】 1. 在实验设备上完成P145实验4-2并测试实验网连通性。 2. 通过实验观察RIP V1 和 V2的区别（重点在VLSM 上）给出分析过程与结果（实验IP 采用 10.10.x.0网段） 3. 学会使用Debug ip packet 和Debug ip rip 命令，并对debug 信息做分析。 4. 观察试验拓扑中链路状态发生改变时路由表的前后信息对比及debug 信息的变化。【实验要求】重要信息信息需给出截图，注意实验步骤的前后对比。【实验记录】(如有实验拓扑请自行画出) 实验拓扑图：实验一：RIPv2路由协议（使用10.10.x.0的IP 地址，变长子网掩码，两个路由器之间的网段是10.10.2.0/30，路由器和PC 之间的网段分别是10.10.3.0/24和10.10.1.0/24。）步骤0：（1）配置PC1和PC2的IP 、掩码、网关，测试连通性。警示

分析：因为PC1和PC2之间还没有配置路由，所以ping不通。（2）在Router1上执行show ip route，记录路由表信息。分析：PC1和PC2之间还没有配置路由。（3）在PC上的命令窗口执行命令route print，记录路由表信息。

RIP动态路由协议的汇总实验

RIP动态路由协议的汇总实验报告一、实验目的 1、掌握RIP协议的配置实验 2、通过动态路由协议RIP实验学习路由的设置 3、熟练掌握RIPv1与RIPv2在路由中的不同二、RIPV1与RIPV2的区别 RIPv1： 1、RIPv1 是有类路由协议 2、RIPv1发布路由更新不携带子网掩码信息 3、不支持可变长子网掩码VISM 4、RIPv1发布路由更新时自动汇总并且无法关闭的 RIPv2： 1、RIPv2是无类路由协议 2、RIPv2 发布路由更新携带子网掩码信息 3、支持可变长子网掩码VISM 4、RIPv2发布路由更新时自动汇总并且可以关闭的三、实验器材需要四台电脑、两个（2811型号）路由器、五根交叉线注意：R1需要设备物理试图为（NM—4E）四、实验拓扑图

五、实验步骤 1、路由之间实现全网互通 R1的配置实验 Router> Router>en Router#conft Router(config)#hostname R1 R1(config)# R1(config)#int e1/0 R1(config-if)#ip add R1(config-if)#ip address 10.10.10.254 255.255.255.0 R1(config-if)#no shu %LINK-5-CHANGED: Interface Ethernet1/0, changed state to up %LINEPROTO-5-UPDOWN: Line protocol on Interface Ethernet1/0, changed state to up R1(config-if)# R1(config-if)#int e1/1 R1(config-if)#ip add R1(config-if)#ip address 10.10.20.126 255.255.255.128 R1(config-if)#no shu %LINK-5-CHANGED: Interface Ethernet1/1, changed state to up R1(config-if)# %LINEPROTO-5-UPDOWN: Line protocol on Interface Ethernet1/1, changed state to up R1(config-if)#int e1/2 R1(config-if)#ip add R1(config-if)#ip address 11.11.11.254 255.255.255.0 R1(config-if)#no shu %LINK-5-CHANGED: Interface Ethernet1/2, changed state to u R1(config-if)# %LINEPROTO-5-UPDOWN: Line protocol on Interface Ethernet1/2, changed state to up R1(config-if)#int e1/3 R1(config-if)#ip address 11.11.22.126 255.255.255.128 R1(config-if)#no shu %LINK-5-CHANGED: Interface Ethernet1/3, changed state to up %LINEPROTO-5-UPDOWN: Line protocol on Interface Ethernet1/3, changed state to up R1( (config-if)# R1(config-if)#int f0/0 R1(config-if)#ip add R1(config-if)#ip address 10.10.30.1 255.255.255.0 R1(config-if)#no shu

实验报告-RIP路由实验三

实验报告RIP路由实验三一、实验小组拓扑(VI) 二、实验准备 1、路由器网络地址方案设计 2、PC机设置方案三、实验内容

根据要求，我们按照拓扑结构和路由协议进行了子网划分而且子网掩码的长度一致，设置了9个网段（200.10.10.16,200.10.10.32,200.10.10.48,200.10.10.64,200.20.20.80,20 0.10.10.96,200.10.10.112,200.10.10.128,200.10.10.144），测试网络连通性实验过程如下（这里以路由c、d和主机6-3、6-4的操作为演示）： 1.为各个网段、路由器的各个接口（e0,e1,e2）设置ip地址（路由器有a,b,c,d,e 共5个），配置rip1协议，并使能各个网段。 2.内网-本机IP设置ip地址和缺省网关（对第二个网卡进行设置）

3.查看路由c 路由表 4.路由c ping / tracert路由e(200.10.10.82端口) 测试过程

5.路由c ping / tracert主机（6-4）测试过程 6.主机（6-3）ping通路由a 端口过程 7.主机（6-3）ping/tracert路由e端口（200.10.10.114）过程

8.主机（6-3）ping通主机（6-4）过程 9.RIP2的报文认证实验选择对路由C的e2端口设置报文协议等待一段时间后路由表发生变化，如图（缺少了对应端路由器接口e2(200.10.10.50)的信息）

（缺少了对应端路由器接口e2(200.10.10.49)的信息）

RIP路由实验

在小规模网络的互联的情况下，可以采取手工建立的静态路由的方法，人为指定每一个可达网络的路由。所以静态路由一般用于网络相对简单、网络与网络之间只有一条路径互联的情况。动态路由是指利用路由协议，通过与相邻的路由器交换路由信息而动态建立的路由表。路由协议分为内部路由协议（IGP）和外部路由协议（EGP）；根据交换的路由信息的不同，路由协议可分为：距离向量、链路状态、混杂型。RIP、IGRP属于距离向量型，OSPF属于链路状态型。路由协议优缺点：静态路由的优先级比动态路由的高；静态路由不会占有路由器CPU的资源，也不会占用路由器之间的带宽（动态路由须相互通信更新路由，显然要占用一定的带宽）；动态路由能够自动适用变换了网络情况，不需要手工更新路由表（而静态路由无法自适用，需要手工更新路由表，数据可以路由到哪个网络由管理员指定）。

动态路由协议RIP实验一、实验拓扑图 RouterB router A 的IP地址：F0/1 172.1.1.1/24 F0/0 192.168.1.1/24 router B 的IP地址：F0/1 192.168.1.2/24 F0/0 172.2.2.1/24 host A的IP地址: 172.1.1.2/24 网关：172.1.1.1 host B的IP地址: 172.1.1.3/24 网关：172.1.1.1 host C的IP地址: 172.2.2.2/24 网关：172.2.2.1 host D的IP地址: 172.2.2.3/24 网关：172.2.2.1 二、实验要求： 1.路由器的基本配置: 1）、设置路由器接口IP地址。 2.根据以上拓扑划分出的3个网段，要求配置RIP路由以达到所有客户机都能相互通信。该如何实现？三、实验步骤：路由器的基本配置: 1）、设置路由器接口IP地址。

rip综合实验

需求： 1、R1, R2, R3各有一个LO0,地址分别是:10.10.X.X/24 (X是你的路由器号), 运行RIP VERSION 2, 并把LO0 及各路由器的直连以太网段宣告到RIP中 2、请确保R1和R2之间的VERSION 2的更新是通过BROADCAST发送的。 Ip rip v2-broadcast 3、如果在R1、R2、R3的以太网段里有一些VER 2的RIP更新包，但UPDATE SOURCE 是150.1.1.1，很显然R1-R3是不会收这些包的，在合适的路由器上做配置，使它们可以收到这些路由。不能增加，删除，修改IP ADDRESS 关闭源检测 4、在三台路由器的路由表里都可以相互看到对方的LO0 关闭自动汇总 5、在R1上，用最小的命令行.增加八个interface地址. 地址为: 100.1.0.1/24 …… 100.1.7.1/24，这八个地址在R1的RIP数据库中是作为外部路由出现的以辅助地址的方式配置在R1的lo口，用重分布的方式引入rip数据库 6、只在R1做配置,并使用最小的命令行,使R3上可以看到的这八个网段的七个, 看不到100.1.0.0/24这条路由,且奇数路由的HOP为5, 偶数路由的HOP为7, 不允许用OFFSET-LIST Route-map 1. ACL 匹配路由 2．Route-map 对匹配的路由做策略 3. 路由协议进程下调用route-map Distribute-list 1 out fastethernet0/0 1.R1: Route-map A permit 10 Match ip address 2 Set metric 7 Route-map A permit 20 Match ip address 3 Set metric 5

RIP实验技术

【实验技巧】RIP实验技术 RIP实验技术近年来，长非编码RNA（lncRNA）得到了研究界的广泛关注。如今，人们已经鉴定了大量lncRNA，但大多数lncRNA的功能还未明确。为了解决这一问题，研究者们开始对lncRNA的互作蛋白进行研究，并为此开发出了越来越多的分析工具。下面我们来介绍一下RIP技术。 RNA结合蛋白免疫沉淀技术又称为RIP（RNA immunoprecipitation），可以说是RNA版的ChIP（染色质免疫沉淀），该技术能帮助人们分析与RNA结合蛋白相关的核酸。在RIP试剂盒（如Sigma的Imprint? RNA Immunoprecipitation kit）的帮助下，研究者们能够利用针对RNA 结合蛋白的抗体，从细胞提取物中捕获与蛋白相结合的RNA，再通过qPCR、芯片或二代测序技术对这些RNA进行鉴定。不论是细胞质还是细胞核，都会发生RNA与蛋白的相互作用。据Active Motif公司产品经理Kyle Hondorp介绍，该公司的RNA ChIP-IT? kit专用于研究RNA与细胞核染色质的相互作用。该试剂盒通过甲醛固定来锁定RNA-染色质的互作，随后对染色质进行超声，并用DNAse I处理，最后利用磁珠进行沉淀。 “如你研究的是总mRNA，那么常规RIP试剂盒更合适一些，”Hondorp说，“常规RIP试剂盒可以处理所有细胞裂解物的总mRNA。” 生产Magna RIP? RNA-binding protein immunoprecipitation kit的EMD Millipore公司，也在开发专门针对染色质的RIP试剂盒。预计这一新产品将于2014年第一季度发布，该产品有化学交联与native两种形式。据介绍，化学交联可以分析究间接的蛋白-RNA相互作用，研究更高分子量的蛋白复合物。而native方法展现的是，亲和力更高也更为直接的相互作用。除RIP以外，CLIP（UV crosslinking and immunoprecipitation）也可以帮助人们捕捉与RNA结合蛋白互作的核酸。CLIP方案整合了交联与核酸酶消化，不仅允许对RNA-蛋白复合物进行进一步的纯化（如凝胶电泳片段分离），还能够揭示RNA-蛋白互作所发生的位点。最近人们又开发出了新型CLIP 技术——iCLIP （individual-nucleotide resolution CLIP），该技术能够以单个碱基的分辨率，来展示RNA-蛋白互作的详细信息。据伦敦大学学院的Jernej Ule教授介绍，CLIP与RIP的关键性差异，在于沉淀复合物后的凝胶纯化步骤。CLIP技术可以给RNA-蛋白复合物的RNA末端带上放射性标记，并将这些复合物进行SDS-PAGE分离，之后转移到一张膜上。这样的过程可以提高纯化的特异性，减少非特异性的RNA。蛋白酶消化可以将RNA从膜上解离下来，用于制备cDNA文库，以备测序分析。 “CLIP要比RIP麻烦一些，不过我认为它很值得采用，”Ule说。“放射性信号的量及其特异性，能够帮助我们提高cDNA文库的质量，最终得到准确实用的数据。” 一. 细胞裂解液获取 A. 单层细胞或者贴壁细胞处理 1. 冷PBS清洗培养皿或培养瓶中的细胞两次 2. 加入冷PBS后用细胞刮将细胞刮下来，收集至enpendoff管 3. 1500rpm，4℃离心5min，弃上清，收集细胞 4. 用与细胞等体积的RIP裂解液重悬细胞，吹打均匀后于冰上静置5min 5. 每管分装200μl细胞裂解液，贮存于-80℃ B. 悬浮细胞处理：先收集细胞再计数，然后清洗裂解 C. 组织样品处理

RIP基本实验

实验RIP路由协议基本配置【实验名称】 RIP路由协议基本配置。【实验目的】掌握在路由器上如何配置RIP路由协议。【背景描述】假设在校园网在地理上分为2个区域，每个区域内分别有一台路由器连接了2个子网，需要将两台路由器通过以太网链路连接在一起并进行适当的配置，以实现这4个子网之间的互联互通。为了在未来每个校园区域扩充子网数量的时候，管理员不需要同时更改路由器的配置，计划使用RIP路由协议实现子网之间的互通。【需求分析】两台路由器通过快速以太网端口连接在一起，每个路由器上设置2个Loopback端口模拟子网，在所有端口运行RIP路由协议，实现所有子网间的互通。【实验拓扑】实验拓扑图

【实验设备】路由器2台【预备知识】路由器的工作原理和基本配置方法，距离矢量路由协议，RIP工作原理和配置方法。【实验原理】 RIP（Routing Information Protocols，路由信息协议）是应用较早、使用较普遍的IGP（Interior Gateway Protocol，内部网关协议），适用于小型同类网络，是典型的距离矢量（distance-vector）协议。 RIP协议以跳数做为衡量路径开销的，RIP协议里规定最大跳数为15。RIP在构造路由表时会使用到3种计时器：更新计时器、无效计时器、刷新计时器。它让每台路由器周期性地向每个相邻的邻居发送完整的路由表。路由表包括每个网络或子网的信息，以及与之相关的度量值。【实验步骤】第一步：配置两台路由器的主机名、接口IP地址 RSR20#configure terminal Enter configuration commands, one per line. End with CNTL/Z. RSR20(config)#hostname RouterA RouterA(config)# RouterA(config)#interface fastEthernet 0/0 RouterA(config-if)#ip address 192.168.1.1 255.255.255.0

RIP协议原理及配置实验报告

通信网络实验 ——RIP协议原理及配置实验报告班级：学号：姓名：

RIP协议原理及配置实验报告一、实验目的 1.掌握动态路由协议的作用及分类 2.掌握距离矢量路由协议的简单工作原理 3.掌握RIP协议的基本特征 4.熟悉RIP的基本工作过程二、实验原理 1.动态路由协议概述路由协议是运行在路由器上的软件进程，与其他路由器上相同路由协议之间交换路由信息，学习非直连网络的路由信息，加入路由表。并且在网络拓扑结构变化时自动调整，维护正确的路由信息。动态路由协议通过路由信息的交换生成并维护转发引擎需要的路由表。网络拓扑结构改变时自动更新路由表，并负责决定数据传输最佳路径。动态路由协议的优点是可以自动适应网络状态的变化，自动维护路由信息而不用网络管理员的参与。其缺为由于需要

相互交换路由信息，需要占用网络带宽，并且要占用系统资源。另外安全性也不如使用静态路由。在有冗余连接的复杂网络环境中，适合采用动态路由协议。目的网络是否可达取决于网络状态动态路由协议分类按路由算法划分：距离-矢量路由协议( 如RIP ) ：定期广播整个路由信息，易形成路由环路，收敛慢链路状态路由协议（如OSPF）：收集网络拓扑信息，运行协议算法计算最佳路由根本解决路由环路问题，收敛快按应用范围划分：域间路由协议(EGP)和域内路由协议(IGP) 自治域系统(AS) 是一组处于相同技术管理的网络的集合。IGPs 在一个自治域系统内运行。EGPs 连接不同的自治域系统。 2.R IP协议概述

客户关系管理实训任务单

工作任务1 什么是客户关系管理一、任务目的 1．通过对客户内心深处的分析，了解客户的体验要求及生活方式，进而联系到产品使用情况上，最后联系到品牌上。 2．通过对一些案例的分析，了解客户体验平台建立的基础和模式。 3．通过学习了解品牌体验对客户管理的重要性，掌握设计品牌体验的基本步骤和方法。 4．构建与客户的接触的有效接触点，规范客户接触管理。二、任务描述通过本次实训，获得客户关系管理应用的感观体验，进而更深入地理解CRM的功能，了解目前CRM在国际社会上的普及程度以及对企业的重要性。三、任务分析 1．进行客户调研，设计客户体验方案； 2．了解如何为你的公司和品牌建立体验平台； 3．了解品牌体验设计的要素； 4．掌握与客户接触的有效途径；四、任务组织要求 1．学生分组（两人一组） 2．角色演练学生按原事先分好的组，分别扮演客服与顾客。 3．课后练习请同学们选择较有代表性的能够体能到CRM的功能的日常生活经历。（电话银行服务系统、电子10000客户服务系统、移动、联通等）五、任务实施条件（一）比萨店客户服务人员与顾客的一次通话（1）阅读下面一段客户服务人员（以下简称客服）与顾客的通话场景：东东比萨店的电话铃响了，客服人员拿起电话。 ▲客服：东东比萨店，您好，请问有什么需要我为您服务？ ◆顾客：你好，我想要订餐 ▲客服：先生，请把您的VIP会员卡号码告诉我。 ◆顾客：5XXXXXX。 ▲客服：陈先生，您好，您是住在XX街一号12楼1205室，您家电话是2039XXXX。对吗？ ◆顾客：为什么你知道我的电话号码？(你怎么知道我的这些信息) ▲客服：陈先生，因为我们有AIC会员系统。(因为我们联机到了电子客户关系管理系统). ◆顾客：我想要海鲜比萨...... ▲客服：陈先生，海鲜比萨不适合您。

RIP配置实验

RIP配置实验静态路由 rip 距离矢量 r1 r2 负载均衡 RIP基本配置：命令： R1(config)#router rip //创建RIP进程，启用RIP协议 R1(config-router)#version 2 //启用RIPv2 R1(config-router)#network 192.168.1.0 //通告主类直连网段R1(config-router)#no auto-summary //关闭自动汇总 R1(config)#router rip R1(config-router)#version 2 R1(config-router)#network 192.168.1.0 R1(config-router)#network 192.168.2.0 R1(config-router)#no auto-summary R2(config)#router rip R2(config-router)#version 2 R2(config-router)#network 192.168.2.0 R2(config-router)#network 192.168.3.0 R2(config-router)#no auto-summary 实验调试 R1#show ip protocols //查看IP路由协议配置和统计信息

R1#debug ip rip //查看RIP路由协议的动态更新过程R1#clear ip route *

RIPv1、RIPv2兼容试验：接口特性优于进程特性，对于本实验，如果在进程中配置了(version 1或version 2)，但是在接口上配置了 ip rip receive version 1 2，则版本1和版本2的路由更新该接口都可以接收。 send receive 默认模式： 1 1、2 RIPv1： 1 1 RIPv2： 2 2 命令： R2(config-if)#ip rip send version 1 2 //设置R2即发送v1又发送v2 R2(config-if)#ip rip receive version 1 2 //设置R2即接收v1又接收v2

客户关系管理实训任务单客户关系管理实训内容

客户关系管理实训任务单客户关系管理实训内容工作任务1 什么是客户关系管理一、任务目的 1．通过对客户内心深处的分析，了解客户的体验要求及生活方式，进而联系到产品使用情况上，最后联系到品牌上。 2．通过对一些案例的分析，了解客户体验平台建立的基础和模式。 3．通过学习了解品牌体验对客户管理的重要性，掌握设计品牌体验的基本步骤和方法。 4．构建与客户的接触的有效接触点，规范客户接触管理。二、任务描述通过本次实训，获得客户关系管理应用的感观体验，进而更深入地理解CRM的功能，了解目前CRM在国际社会上的普及程度以及对企业的重要性。三、任务分析

1．进行客户调研，设计客户体验方案； 2．了解如何为你的公司和品牌建立体验平台； 3．了解品牌体验设计的要素； 4．掌握与客户接触的有效途径；四、任务组织要求 1．学生分组（两人一组） 2．角色演练学生按原事先分好的组，分别扮演客服与顾客。 3．课后练习请同学们选择较有代表性的能够体能到CRM的功能的日常生活经历。（电话银行服务系统、电子10000客户服务系统、移动、联通等）五、任务实施条件（一）比萨店客户服务人员与顾客的一次通话（1）阅读下面一段客户服务人员（以下简称客服）与顾客的通话场景：东东比萨店的电话铃响了，客服人员拿起电话。

▲客服：东东比萨店，您好，请问有什么需要我为您服务？◆顾客：你好，我想要订餐 ▲客服：先生，请把您的VIP会员卡号码告诉我。◆顾客： [1**********]5XXXXXX。 ▲客服：陈先生，您好，您是住在XX街一号12楼1205室，您家电话是2039XXXX。对吗？◆顾客：为什么你知道我的电话号码？(你怎么知道我的这些) ▲客服：陈先生，因为我们有AIC会员系统。(因为我们联机到了电子客户关系管理系统). ◆顾客：我想要海鲜比萨...... ▲客服：陈先生，海鲜比萨不适合您。 ◆顾客：为什么？ ▲客服：根据您的医疗记录，您有高血压和胆固醇偏高。◆顾客：那......你们有什么可以推荐的？▲客服：您可以试试我们的低脂健康比萨。◆顾客：你怎么知道我会喜欢吃这种的？ ▲客服：您上星期一 __图书馆借了一本《低脂健康食谱》。◆顾客：好......那我要一个家庭号特大比萨，要付多少钱？

rip 实验指导

7.6.1: Packet Tracer 综合技巧练习拓扑图

地址表设备接口IP 地址子网掩码默认网关 Fa0/0不适用 Fa0/1不适用 S0/0/0209.165.201.2 255.255.255.252 不适用HQ S0/0/1不适用 S0/1/0不适用 S0/1/1不适用 Fa0/0不适用B1 Fa0/1不适用 S0/0/0不适用 Fa0/0不适用B2 Fa0/1不适用 S0/0/0不适用 Fa0/0不适用B3 Fa0/1不适用 S0/0/0不适用 Fa0/0209.165.202.129 255.255.255.252 不适用ISP S0/0/0209.165.201.1 255.255.255.252 不适用 Web 网卡209.165.202.130 255.255.255.252 209.165.202.129 服务器 PC1网卡 PC2网卡 PC3网卡 PC4网卡 PC5网卡 PC6网卡 PC7网卡 PC8网卡

简介：本 Packet Tracer 综合技巧练习与您在前面章节中创建的练习非常相似。为了使您能够更好地进行练习，场景稍稍做了一些改变。在本练习中，您将从头构建一个网络。从给定的地址空间和网络要求开始，您必须实现一个能够满足要求的网络设计。接下来，您将利用静态路由和默认路由实现有效的 RIPv2 路由配置以访问Internet。目标 ?根据要求设计一个编址方案并记录下来。 ?选择适当的设备并使用电缆连接设备。 ?在设备上应用基本配置。 ?测试直接相连的设备之间的连通性。 ?配置 RIPv2 路由。 ?配置用于 Internet 访问的静态路由和默认路由。 ?检验拓扑中所有设备间的完全连通性。任务 1：设计并记录编址方案。步骤 1：设计编址方案。根据拓扑图中显示的网络需求，设计适当的编址方案。 ?为 LAN 编址，以 LAN 1 开始，然后是 LAN 2，依此类推。路由器接口使用第一个地址，PC 使用最后一个地址。 ?为 WAN 编址，以 WAN 1 开始，然后是 WAN 2，依此类推。在所有 WAN 链路中，HQ 使用第一个可用地址（连接到 ISP 的链路除外）。对于 ISP 链路，HQ 使用第二个可用地址。步骤 2：记录编址方案。 ?以点分十进制/斜杠格式记录网络地址。 ?记录 IP 地址、子网掩码和默认网关地址。任务 2：应用基本配置。步骤 1：配置路由器。使用您记录的编址方案，对路由器进行基本配置，包括编址和主机名。使用cisco作为线路口令（控制台和 Telnet）。使用class作为使能加密口令。步骤 2：配置 PC。根据您的记录，为 PC 配置 IP 地址、子网掩码和默认网关。任务 3：测试连通性。继续执行下面的步骤前，请确保每台设备都能 ping 通其直接相连的邻居。

vissim5.4实验任务指导书

（学生版）仿真实验任务指导书

目录 1. VISSIM简介 ................................................................................................................. 错误!未定义书签。2定义路网属性. (3) 物理路网 (3) 准备底图的创建流程 (3) SYNCHRO 输入 (5) 添加路段（Links） (6) 连接器 (7) 定义交通属性 (8) 定义分布 (8) 目标车速变化................................................................................................. 错误!未定义书签。交通构成....................................................................................................... 错误!未定义书签。交通流量的输入........................................................................................... 错误!未定义书签。路线选择与转向...................................................................................................... 错误!未定义书签。信号控制交叉口设置............................................................................................ 错误!未定义书签。信号参数设置................................................................................................. 错误!未定义书签。信号灯安放及设置 (17) 优先权设置 (18) 冲突区域设置 (19) 3仿真............................................................................................................................... 错误!未定义书签。参数设置....................................................................................................... 错误!未定义书签。仿真............................................................................................................... 错误!未定义书签。4评价............................................................................................................................... 错误!未定义书签。行程时间....................................................................................................... 错误!未定义书签。延误............................................................................................................... 错误!未定义书签。数据采集点 (26) 排队计数器 (27) 5实验内容与实验报告 (29) 6 思考题 (30)

动态路由rip2实验报告

实验报告实验名称路由信息协议Rip 2 课程名称计算机网络实训一.实验目的 1、进一步理解网络配置的基本原理； 2、熟练掌握Boson NetSim软件的配置方法； 3、掌握动态协议的配置。 4、掌握路由器的基本命令配置。 5、学会实验出错时排查。二.实验环境（软件、硬件及条件） 1、3台2501路由（R1、R 2、R3）； 2、3台工作站； 4、网络连接线路若干（双绞线、串行线）。 5、网络拓朴结构如下： 6、软件：windows xp 操作系统、Boson NetSim软件。

LAN2指PC2、 Router2(Ethernet 0)所组成的局域网； LAN3指PC3、 Router3(Ethernet 0)所组成的局域网；动态路由协议采用：rip version 2 四、实验步骤： 1、启动Boson Network Designer软件，选择路由器、PC构成以上拓扑结构，画出拓扑图，然后用Boson NetSim软件对此网络进行配置。 2、配置各个局域网； 1）配置PC1-9的IP和网关，子网掩码 PC1配置：选择“estations”→“PC1”，在图1界面中回车，在C:>命令提示符下输入如下图所示：同理根据规划表和拓扑图配置好PC2、PC3机的IP地址、子网掩码和网关。 2）配置路由器的Ethernet port和Serial port的IP地址、子网掩码: Router1的配置命令如下：

Router2的配置命令如下：

Router3的配置命令如下：

4、验证。在PC1上执行两次ping命令对PC2、PC3进行连通性检测验证，结果如下：以上结果说明PC1和PC2、PC3能正常通信,从而说明整个网络配置是成功的。五、实验分析： 1、对路由器的接口状态和路由表进行分析，在Router1上进行察看结果如下：

RIP路由实验

动态路由实验（RIP协议）拓扑图如下：路由器1配置如下： Router>enable Router#configure terminal Router(config)#interface fastEthernet 0/0/ Router(config-if)#ip add 192.168.2.1 255.255.255.0 Router(config-if)#no shutdown Router(config-if)#exit Router(config)#interface fastEthernet 0/1 Router(config-if)#ip address 192.168.1.1 255.255.255.0 Router(config-if)#no shutdown Router(config-if)#exit Router(config)#router rip Router(config-router)#network 192.168.1.0 Router(config-router)#network 192.168.2.0 ——配置动态路由表Router(config-router)#exit Router(config)#exit Router# Router#write Building configuration... [OK] 路由器2配置如下： Router>enable Router#configure terminal Router(config)#interface fastEthernet 0/0/ Router(config-if)#ip add 192.168.2.2 255.255.255.0 Router(config-if)#no shutdown Router(config-if)#exit Router(config)#interface fastEthernet 0/1 Router(config-if)#ip address 192.168.3.1 255.255.255.0 Router(config-if)#no shutdown Router(config-if)#exit Router(config)#router rip Router(config-router)#network 192.168.2.0 Router(config-router)#network 192.168.3.0 ——配置动态路由表

实验室检测任务单

检验任务申请/通知单

填写说明： 1、检验任务申请/通知单编号按《所质量管理体系文件的编号方法》执行，具体如下：。口口(部门代号) —口口(项目代号) —口口（流水号）—口口口口（年代号） 2、合同编号、合同名称、检验/试验产品名称、产品阶段、产品标识、数量、课题号、所属项目名称、检验类别、检验依据、送检部门、项目联系人、联系电话等栏目由项目组填写。科研人员应确保每个栏目的内容都要填写清楚，不留空白；表中所填内容应与文本文件内容完全相符；对于信息不全、内容不一致的表单，质检中心有权拒绝接收。其中，“合同编号”和“合同名称”栏目，所填写内容应与实际文本合同内容一致；“检验/试验产品名称” 栏目，应与文本合同提供的产品名称、型号一致；“产品标识”栏目，应与实际送检产品本身的标识一致；外包产品入所检验时，“数量”栏目，应与外包合同审批单数量一致；“课题号”和“所属项目名称”栏目，应与科研管理部门提供的实际课题号和项目名称一致；“检验依据”栏，应详细填写送检产品所须检验依据的具体技术文件名称、唯一性编号等信息。对未按程序文件规定提出检验申请的项目，应由项目组填写情况说明栏目，并由项目管理人员签字确认。 3、项目负责人栏目需本人签署，并对申请单内容的正确性负责。 4、任务下达部门、检验起始时间由项目管理人员填写，项目管理人员签批栏须由项目管理人员本人签署，并对产品检验任务的真实性和正确性负责。 5、产品状态栏应在科研人员送检产品时，由科研人员和质检中心人员共同对送检产品状态及其附件情况以文字形式进行详细描述，并签字确认。双方均需对送检时的产品状态负责。 6、外包产品入所检验时，质检中心人员在接受检验任务前应确认外包产品相关资料、记录的齐套性，若不齐套则不应接受检验任务。