实验一 银耳多糖的制备及分析-给学生
实验一银耳多糖的制备及分析
实验名
称
实验一银耳多糖的制备及分析
实验班
级09级药学本
科1班
09级药学本
科2班
实验课
时间
11.19 11.20
实验目的：
1. 学习真菌多糖类的分离、纯化原理。
2. 掌握多糖类物质的一般鉴定方法。
实验原理：
银耳（Tremella fuciformis）是我国一种传统的珍贵的真菌，具有滋补强壮、扶正固本之功效。银耳中含有的多糖类物质则具有明显提高机体免疫功能、抗炎症和抗放射等作用。
多糖（polysaccharides）的纯化方法很多，但必须根据目的物质的性质及条件选择合适的纯化方法。而且往往用一种方法不易得到理想的结果，因此必要时应考虑合用几种方法。1、乙醇沉淀法：乙醇沉淀法是制备黏多糖的最常用手段。乙醇的加入，改变了溶液的极性，导致糖溶解度下降。供乙醇沉淀的多糖溶液，其含多糖的浓度以1%----2%为佳。加完酒精，搅拌数小时，以保证多糖完全沉淀。沉淀物可用无水乙醇、丙酮、乙醚脱水，真空干燥即可得疏松粉末状产品。
2、分级沉淀法：不同多糖在不同浓度的甲醇、乙醇或丙酮中的溶解度不同，因此可用不同浓度的有机溶剂分级沉淀分子大小不同的黏多糖。
3、季铵盐络合法：黏多糖与一些阳离子表面活性剂如十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）和十六烷基氯化吡啶（CPC）等能形成季铵盐络合物。这些络合物在低离子强度的水溶液中不溶解，在离子强度大时，这种络合物可以解离，溶解，释放。
本实验采用固体法培养获得的银耳子实体，经沸水抽提、氯仿—正丁醇法除蛋白质和乙醇沉淀分离可制得银耳多糖粗品，再用CTAB
（溴化十六烷基三甲铵）络合法进一步精制可得银耳多糖精品，然后进行定性分析。
实验内容与方法：
1、提取
将20g银耳实体和800ml水加入1000ml烧杯中，于沸水浴中加热搅拌8h，离心去残渣（3000r/min,25min）。上清液用硅藻土助滤，水洗，合并滤液后于80摄氏度水浴搅拌浓缩至糖浆状。然后加入1/4体积的氯仿—正丁醇溶液，摇匀，离心（3000r/min,10min）分层，再用分液漏斗分出下层氯仿和中层变性蛋白，然后重复去蛋白质操作2次。上清液用2moL/L氢氧化钠调至PH7.0，加热回流，用1%活性炭脱色，抽滤，上清液于80摄氏度水浴浓缩至原体积的1/3.然后加入3倍体积的95%乙醇，离心（3000r/min,15min），沉淀用无水乙醇洗涤2次，乙醚洗涤一次，真空干燥得银耳多糖粗品
2、纯化
取粗品1g，溶于100ml水中，溶解后离心（3000r/min,10min）除去不溶物，上清液加入2%CTAB溶液至沉淀完全，摇匀，静置4h，离心（3000r/min,10min）,沉淀用热水洗涤3次，加100ml 2mol/L 的氯化钠溶液于60摄氏度解离4h, 离心（3000r/min,10min），上清液扎袋流水透析12h，透析液于80摄氏度水浴浓缩，加3倍量95%乙醇，搅拌均匀后，离心（3000r/min,10min），沉淀再分别用无水乙醇，乙醚洗涤，真空干燥，得精品银耳多糖。
3、理化性质分析
将银耳多糖精品分别加入水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和正丁醇中，观察其溶解性。另外在浓硫酸存在的条件下观察银耳多糖与a—萘酚的作用，于界面出观察颜色变化。
4、含量测定
多糖在浓硫酸中水解后，进一步脱水生成醣醛类衍生物，与蒽酮作用形成有色化合物，进行比色测定。
请同学们（1）熟悉本次实验内容；
（2）在网上查阅测定多糖含量有几种方法；
（3）详细写出蒽酮-浓硫酸测定银耳多糖的实验步骤
银耳多糖抗衰老作用机理的研究进展
银耳多糖抗衰老作用机理的研究进展 摘要：银耳多糖作为一种有效的抗衰老活性物质为国内外学者广泛重视。 研究表明，银耳多糖的抗衰老作用主要是通过参与细胞的各种生命现象 来进行的。且作用机制与其生物学特性息息相关。本文就近年来银耳多 糖的生物学特性、化学成分、银耳多糖的药理作用及抗衰老作用机理的 研究进展作一综述。 关键词：银耳；多糖；抗衰老 Abstract: tremella polysaccharide as an effective anti-aging activema terial for scholars widespread attention at home and abroad. Researchsh ows that tremella polysaccharide anti-aging is mainly through its parti cipation in the life of cells to the phenomenon. And the mechanism andb iological characteristics are closely related. This paper tremella poly saccharide in recent years on the biological characteristics, chemicalc omposition, tremella polysaccharide pharmacological effects and mechani sm of anti-aging advances in the research reviewed. Keywords: Tremella, Polysaccharide, Anti-aging 衰老是一个渐进的过程，在这个过程中环境与遗传都有很大影响，现代医学使很多疾病引起的衰老得到了控制，但仍未能改变正常衰老的过程，这说明在生物体中有自身控制寿命的机制的存在，只有对相应的机制进行调控，才能真正发挥抗衰老的功能。国外关于营养对衰老的研究已经进入分子生物学领域，如Se、维生素A、E都成为研究的对象。关于衰老的机制众口不一，如遗传学说、脂褐质累积学说、交联学说、端粒学说、特异ERC DNA(环状DNA)积累学说等，最新研究是关于细胞周期调控与衰老。 许多研究结果提示，很多营养素具有抗衰延寿的作用，我国传统食物银耳中所含的银耳多糖(TP)对很多老年性疾病都有防治作用。能明显延长果蝇的寿命，有很好的抗衰保健功能。 本文基于目前银耳多糖抗衰老研究的基础上，对银耳多糖抗衰老的作用机理进行全面的阐述，关注抗衰老与提高免疫功能、抗氧化、细胞周期调节之间的关系。 1 银耳的生物学特性及化学成分
银耳多糖的提取与纯化工艺的设计
燕山大学 课程设计说明书银耳多糖的提取与纯化工艺的设计 学院（系）：里仁学院建环系 年级专业：10级生物制药 学号：101610051006 学生姓名：韩雨薇 指导教师：崔洪霞 教师职称：副教授
燕山大学课程设计（论文）任务书 院（系）：里仁学院基层教学单位：建环系 说明：学生、指导教师、基层教学单位各一份。
燕山大学课程设计成绩评定表
2013-2014 秋季学期 生物工程专业课程设计 结题论文 银耳多糖的提取与纯化工艺的设计 学院（系）：里仁学院建环系 年级专业：10级生物制药 学号：101610051006 学生姓名：韩雨薇 指导教师：崔洪霞 教师职称：副教授
银耳多糖是银耳中的主要活性物质，来源于银耳子实体和银耳细胞深层发酵孢子中分离、纯化得到的杂多糖。现代医学和药理学的很多研究将银耳多糖的药用功效概括为提高免疫力、抗肿瘤、抗衰老、降血糖和降血脂等多种生理功能。本设计通过采用微波辅助提取法来提取银耳多糖。在微波提取系统中，影响多糖提取率的主要因素有三个：微波功率、加热时间、加热温度。针对这三个因素分别设计单因素实验，根据单因素实验得出最佳范围，然后再根据所得出的范围做三因素三水平的正交实验，从而得出最佳的提取条件组合。本文系统地综述了银耳多糖的化学组成、制备和提取纯化、生物活性、实际应用等方面的研究概况，并展望了其今后研究方向及开发应用前景。 关键词：银耳多糖；提取；纯化
第一部分文献综述 1、银耳多糖简介 (1) 1.1银耳多糖的组成 (1) 1.1.1酸性杂多糖 (1) 1.1.2中性杂多糖 (1) 1.1.3胞壁多糖 (2) 1.1.4胞外多糖 (2) 1.1.5酸性低聚糖 (2) 2、银耳多糖的提取及制备 (2) 2.1银耳多糖的提取方法 (2) 2.1.1浸提法 (2) 2.1.2超声波辅助提取法 (3) 2.1.3微波辅助提取法 (4) 2.1.4超临界流体萃取法 (4) 2.2银耳多糖的干燥方法 (4) 2.3银耳多糖生理活性试验 (5) 2.3.1银耳多糖清除羟自由基活性 (5) 2.3.2银耳多糖清除超氧阴离子自由基活性 (5) 2.3.3银耳多糖的抗氧化作用 (5) 3、银耳多糖的功能特性 (5) 3.1在食品生产中的加工特性 (5) 3.2在化妆品生产中的加工特性 (5) 3.3银耳多糖的药理学特性 (6) 3.3.1免疫调节作用 (6) 3.3.2抗肿瘤作用 (6) 3.3.3降血糖、降血脂作用 (6) 3.3.4抗溃疡作用 (6) 第二部分课程设计部分 1. 材料 (8)
果胶酶讲解
葡萄糖异构酶 从以下六个方面来了解和认识： 1.酶的催化特性和来源 2. 酶的功能用途 3. 酶的结构和理化性质 4. 酶的生产方法和提取纯化工艺 5. 酶制剂在生产中的应用 6. 该酶制剂的发展趋势 一、酶的催化特性和来源 ?葡萄糖异构酶又称木糖异构酶，它可以催化D-木糖、D-葡萄糖，D-核糖等醛糖转化为相应的酮糖。 ?目前为止，发现的产酶菌为细菌和放线菌，还有少量的米曲霉和酵母中。 1、催化特性 由于葡萄糖异构化为果糖具有重要的经济意义，因此工业上习惯将D-木糖异构酶称为葡萄糖异构酶。 该酶一般只能催化C2与C4羟基为顺式的戊糖和己糖异构化，即只能催化D-木糖、D-核糖和D-葡萄糖异构化为对应的酮糖 大多数微生物该酶是胞内酶，可以直接利用细胞进行异构化反应，但也有一些微生物可以产生胞外酶，因菌种菌龄培养条件而异。 2、来源 细菌 ?主要是乳酸杆菌，如短乳杆菌、发酵乳杆菌、盖氏乳杆菌、李氏乳杆菌、甘露醇乳杆菌、产气气杆菌、阴沟气杆菌、果聚糖气杆菌、凝结芽孢杆菌、嗜热芽胞脂肪杆菌等。 放线菌 ?主要是链霉菌和诺卡菌，如白色链菌、包氏链霉菌、多毛链霉菌、黄微绿链霉菌、橄榄色链霉菌、秀红链霉菌、委内瑞拉链霉菌、达氏诺卡菌等。 ?还有密苏里游动放线菌 其他 ?米曲霉 ?酵母菌 密苏里游动放线菌胞内酶达95%以上，嗜热放线菌M1033的胞外异构酶达99%，我国7号淀粉酶链霉菌M1033菌株也可以产生胞外葡萄糖异构酶。 生产葡萄糖异构酶的微生物分为 诱导型需要木糖作为诱导剂 组成型不添加木糖，是工业生产发展的方向 二、酶的功能用途 1. 将葡萄糖异构化为高果糖浆，味道纯正，具有较强保温性、着色性和防腐性，营养价值较高 2. 可不经消化直接被肠胃吸收，果糖的代谢不受胰岛素调节，糖尿病人可以利
银耳多糖的制备及一般鉴定
银耳多糖的制备及一般鉴定 【实验目的】 1．学习真菌多糖类的分离、纯化原理。 2．学习多糖类物质的一般鉴定方法。 3. 掌握真菌多糖类粗提取的具体步骤及相应原理。 【实验原理】 银耳是我国传统的一种珍贵药用真菌，具有滋补强壮、扶正固本之功效。银耳中含有的多糖类物质则具有明显提高机体免疫功能、抗炎症和抗放射等作用。 提取与纯化动植物中存在的多糖或微生物胞内多糖，因其细胞或组织外大多有脂质包围，要使多糖释放出来，第一步就是去除表面脂质, 常用醇或醚回流脱脂。第二步将脱脂后的残渣以水为主体的溶液提取多糖，这样提取得到的多糖提取液含有许多杂质。杂质主要是无机盐，低分子量的有机物质及高分子量的蛋白质、木质素等。第三步则要除去这些杂质，对于无机盐及低分子量的有机物质可用透析法、离子交换树脂或凝胶过滤法除去；对于大分子杂质可用酶消化(如蛋白酶．木质素酶) ，乙醇或丙酮等溶剂沉淀法或金属络合物法。多糖提取液中除去蛋白质是一个很重要的步骤，常用方法有S e v a g e法、三氯乙酸法、酶解法、三氟三氯乙烷法等。（1）S e v a g e法是除蛋白的经典方法，主要是利用蛋白质在氯仿中变性的特点，用氯仿:正丁醇=5:1或4:1的二元溶剂体系按1:5加入到多糖提取液中，混合物经剧烈振摇后离心，蛋白质与氯仿-正丁醇生成凝胶物而分离，分去水层和溶剂层交界处的变性蛋白质。（2）三氯乙酸法利用三氯乙酸，在低温下搅拌加入到多糖提取液中，直到溶液不再继续混浊为止离心弃沉淀，即可达到脱蛋白的目的。存在于溶液中的三氯乙酸经中和后，通过透析或超滤等方法除去。（3）酶解法提取是根据植物细胞壁的构成，利用酶反应所具有高度专一性的特点，选择相应的酶，将细胞壁的组成成分(纤维素、半纤维素和果胶质)水解或降解，破坏细胞壁结构，使细胞内的成分溶解、混悬或胶溶于溶剂中，从而达到提取目的，且有利于提高成分的提取率。（4）三氟三氯乙烷法将三氯乙烷按1:1的比例加到多糖提取液中，在低温下搅拌约10min，离心得上层水层，水层继续用上述方法处理几次即得，此法效率较高，但因其易挥发，不宜大量应用。 本实验采用固体法培养获得的银耳子实体，经沸水抽提、三氯甲烷一正丁醇法除蛋白质和乙醇沉淀分离可制得银耳多糖粗品。然后进行定性和定量测定及杂质含量测定。 【实验方法】 1．提取 1.1 银耳5g，剪碎，放入1000ml烧杯中。加500 ml蒸馏水，加一匙NaHCO3 (可加速溶化)，沸水提取1.5h，同时搅拌。提取过程中可以少量加水。 1.2 三层纱布过滤，得提取液（约200ml）。将提取液移至分液漏斗中。 1.3 向提取液中加1/4体积的氯仿：正丁醇溶液（V:V=4:1）。振摇15min，离心（5 min）。离心后，溶液分为三层，吸取最上层清液，得到去蛋白的多糖液。 1.4 向去蛋白的多糖液加3倍体积的95%乙醇，玻棒搅拌既得多糖沉淀。 1.5 用乙醇和丙酮分别洗涤沉淀，干燥，得粗提取物。
果胶酶实验报告
实验报告 果胶酶在果汁生产中的作用 一．实验目的 1.探究不同温度对果胶酶活性的影响; 2.探究不同 ph 对果胶酶活性的影响; 3.探究果胶酶的用量对果汁生产的影响。 二．实验原理 1.果胶酶的活性受温度影响。处于最适温度时，活性最高。果肉的出汁率、果汁的澄清 度与果胶酶的活性大小成正比。 2.果胶酶的活性受ph影响，处于最适ph，酶的活性最高，高于或低于此值活性均下 降。果肉的出汁率、果汁的澄清度与果胶酶的活性大小成正比。 3.在一定的条件下，随着酶浓度的增加，果汁的体积增加；当酶浓度达到某一数值后， 在增加酶的用量，果汁的体积不再改变，此值即是酶的最适用量。 三．实验材料与用具 苹果、果胶酶、盐酸溶液、榨汁机、电子天平、恒温水浴锅、烧杯、量筒、试管、漏斗、温度计、玻璃棒、滤纸、滴管、三脚架 四．实验步骤 （一）温度对果胶酶活性的影响 1.制备果汁选取一个中等大小的苹果( 约 200g) 洗净后，不去皮，切成小块，放入榨 汁机中，加入约 200ml 水，榨取 2min，制得苹果泥。量取一定体积的苹果泥， 不同条件下处理后，用滤纸进 行过滤即可得到果汁； 2.取9支试管编号并分别加入等量的果汁和果胶酶； 3.将9支试管分别放入30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃的水 浴锅中保温10分钟； 4.过滤果汁用量筒测量果汁的里量，并记录数据。 （二）ph 对果胶酶活性的影响 1.制备果汁； 2.取5支试管编号并分别加入等量的果汁和果胶酶； 3.将5支试管放入40℃恒温水浴锅中加热； 4.待试管内温度稳定后在5支试管分别加入ph分别为5、6、7、8、9的盐酸溶液； 5.恒温保持10min； 6.过滤果汁用量筒测量果汁的里量，并记录数据。 （三）果胶酶的用量对果汁生产的影响 1.配制不同浓度的果胶酶溶液准确称取纯的果胶酶1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、6mg、 7mg、8mg、9mg，配制成相等体积的水溶液，取等量放入9支试管中，并编号1～ 9。； 2.在9支试管中加入等量的苹果汁； 3.将上述试管放入恒温水浴加热一段时间。 4.将不同浓度的果胶酶分别迅速与各试管的苹果泥混合，然后再放入恒温水箱中。 5.恒温水浴约20分钟 6.过滤后测量果汁的体积 四．实验结果 五．分析与结论篇二：果胶酶活性测定实验报告 一、实验设计 二、实验报告 篇三：果胶的实验报告
果胶酶提取银耳多糖的研究
目录 摘要 (1) 关键词 (1) Abstract (1) Key words (1) 1 前言 (2) 2 仪器、设备和试剂 (2) 2.1 材料、与设备 (2) 2.2试剂及溶液的配制 (2) 3.方法及试验步骤 (2) 3.1葡萄糖含量标准曲线的制作 (2) 3.2 银耳多糖的提取方法 (3) 3.3 银耳多糖含量的测定 (4) 4 结果与分析 (4) 4.1 银耳多糖含量测定结果 (4) 4.2 酶解法提取银耳多糖结果分析 (5) 5小结与讨论 (6) 参考文献 (7)
果胶酶提取银耳多糖的研究 摘要：国内常用的银耳多糖提取方法有热水提取法，酸碱提取法和酶解提取法等，其中酶解提取法具有提取时间短，条件温和等优点。本试验选取了酶解时间和提取时间作为研究对象，探讨了不同条件下银耳多糖的收率，由试验结果表明，解法提取银耳多糖的最适条件为：银耳与水的比例为1g:50ml,加入果胶酶浓度为1%，酶解时间45min,提取时间60min。 关键词：果胶酶；银耳多糖；酶解 On Pectinase extract of Tremella polysaccharides Abstract:Tremella polysaccharide extraction of hot water extraction method, the acid-base extraction and enzymatic extraction, enzymatic extraction with extraction time is short, under mild conditions. This test selected the study of enzymatic hydrolysis time and extraction time to explore the Tremella polysaccharides yield under different conditions, the results showed that the optimal conditions of the solution extract of Tremella polysaccharides: white fungus and water ratio 1g: 50ml join the pectinase concentration of 1%, the hydrolysis time was 45min, extraction time 60min. Key words: Pectinase; the Tremella polysaccharide; enzymatic
果胶的提取
实验果胶的提取 一、目的要求 1．掌握从柚子皮中提取果胶的方法。 2. 了解果胶的性质和提取原理。 3. 了解果胶在食品工业中的用途。 二、实验原理 果胶物质广泛存在于植物中，主要分布于细胞壁之间的中胶层，尤其以果蔬中含量为多。不同的果蔬含果胶物质的量不同，山楂约为6.6%，柑橘约为0.7～1.5%，南瓜含量较多，约为7%～17%。在果蔬中，尤其是在未成熟的水果和果皮中，果胶多数以原果胶存在，原果胶不溶于水，用酸水解，生成可溶性果胶，再进行脱色、沉淀、干燥即得商品果胶。从柚子皮中提取的果胶是高酯化度的果胶，在食品工业中常用来制作果酱、果冻等食品。 果胶是一种分子中含有几百到几千个结构单元的线性多糖，平均分子量大约在50000~180000之间，其基本结构是以α-1,4苷键结合而成的聚半乳糖醛酸，在聚半乳糖醛酸中，部分羧基被甲醇酯化，剩余部分与钾、钠或铵等离子结合。 在果蔬中果胶多以原果胶存在。在原果胶中，聚半乳糖醛酸可被甲醇部分酯化，并以金属桥（特别是钙离子）与多聚半乳糖醛酸分子残基上的游离羧基相连接。原果胶不溶于水，用酸水解时这种金属离子桥（离子键）被破坏，即可得可溶性果胶。再进行纯化和干燥即为商品果胶。 三、实验器材 恒温水浴、布氏漏斗、抽滤瓶、玻棒、尼龙布、表面皿、精密pH试纸、烧杯、电子天平、小刀、真空泵、柚子皮（新鲜）。 四、实验试剂 1．95%乙醇。 2．浓盐酸 3．2mol/L氨水 4．活性炭 五、操作步骤 1．称取新鲜柚子皮5g，用水冲洗后切成3～5 mm大小的颗粒，放入100 mL烧杯中，加20 mL水，加热至90 ℃保温5～10 min，使酶失活。把果皮粒用尼龙布挤干，用50 ℃左右的热水漂洗，直至水为无色，果皮无异味为止。每次漂洗都要把果皮用尼龙布挤干，再进行下一次漂洗[注1]。 2．将处理过的果皮粒放入烧杯中，加入45 mL水，滴加浓盐酸调溶液的pH 2.0～2.5之间。加热至90 ℃，在恒温水浴中保温30 min，保温期间要不断地搅动，趁热用垫有100目尼龙布(或四层纱布)的布氏漏斗抽滤，收集滤液。 3．在滤液中加入0.5—1%的活性炭于80℃加热10 分钟进行脱色和除异味，趁热抽滤[注2]。 4．滤液冷却后，滴加2mol/L氨水调至pH 3～4，在不断搅拌下缓缓地加入95%酒精溶液，加入乙醇的量为原滤液体积的1.5倍(使其中酒精的质量分数达50%～60%)。酒精加入过程中即可看到絮状果胶物质析出，静置10 min后，用尼龙布过滤、挤压。将脱水的果胶放入表面皿中摊开，在60～70 ℃烘干。将烘干的果胶磨碎过筛，制得干果胶。 5.滤液可用蒸馏法收回乙醇。 六、问题与思考 1．从柚子皮中提取果胶时，为什么要加热使酶失活？ 2．沉淀果胶除用乙醇外，还可用什么试剂？ 3．在工业上，可用什么果蔬原料提取果胶？ [注1]：处理的主要目的是灭酶，以防果胶酶解。同时也是对果皮进行清洗，以除去泥土、杂质、色素等。 这种处理的好坏直接影响果胶的色泽和质量。 [注2]：如果柚子皮漂洗干净，滤液清沏，则可不脱色。因为胶状物容易堵塞滤纸，这时可加入占滤液2~4%的硅藻土用助滤剂。
银耳多糖的提取工艺
银耳多糖的提取工艺 李帅涛 摘要：国内常用的银耳多糖提取方法有热水提取法，酸碱提取法和酶解提取法等，其中酶解提取法具有提取时间短，条件温和等优点。本试验选取了酶解时间和提取时间作为研究对象，探讨了不同条件下银耳多糖的收率，由试验结果表明，解法提取银耳多糖的最适条件为：银耳与水的比例为1g:50ml,加入果胶酶浓度为1%，酶解时间45min,提取时间60min。 关键词：银耳多糖；酶解法；提取工艺 引言：我国银耳资源丰富，为开发应用银耳多糖提供了有利条件。近年来，有关银耳多糖的研究越来越多，但这些研究多为银耳多糖的化学特性和药理作用方面的研究，少有关于银耳中提取银耳多糖的研究。目前银耳多糖的提取方法多为热水浸提法或酸碱法提取，但热水浸提法耗时过长，且收率较底，费时费力，因此不适合大规模的工业生产，而酸碱法提取虽然提取时间较短，却会破坏银耳多糖立的生物活性，使提取到的银耳多糖药用效果大大下降。本试验主要研究使用果胶酶酶解银耳，热水提取的技术来提取银耳多糖的方法。而如今生物工程工艺发展迅速，生物制品价格不断下降，这为用酶解法提取银耳多糖提供了可行性。用酶解法提取银耳多糖不仅能缩短单纯用热水法提取的时间，还不会像酸碱法那样破坏银耳多糖的生物活性。 材料与设备: ①实验材料：银耳;葡萄糖(分析纯):取1g葡萄糖加入1000ml容量瓶中，定容至1000ml;果胶酶：按100ml:1g加入果胶酶;苯酚（分析纯）;精确量取6ml苯酚放入100ml容量瓶中，定容至100ml;浓硫酸(发烟硫酸) ②实验设备：101型电热鼓风干燥；YP202N型电子天平；HH系列恒温水浴锅；电子万用炉;TDZ5-WS型台式低俗离心机；722E型可见分光光度计 分离与纯化：取市售银耳适量，洗净，70℃烘干后，破碎成粉末状，称取粉末0.5g（2%），果胶酶0.25g（1%），同时加入蒸馏水25mL，迅速置于45℃水浴锅中酶解，3个样品为一组，第一组酶解30min，第二组酶解45min，第三组酶解60min。酶解后迅速升温至98℃将酶灭活，然后每组样品分别于98℃水浴中保温浸提30min,45min,60min，浸提完成后置于冷水中冷却至室温，然后于4500rpm离心分离10min，最后取上清液待用。 含糖量测定：银耳浸提液离心后，分别取上清液1ml,加水19ml,即稀释20倍，取银耳浸提稀释液1mL于一洁净试管中，再加入苯酚试液1.0mL，浓硫酸5mL，混匀，室温放置30min，冷却后，于490nm处测定吸光度。 结果与分析：本试验采用果胶酶酶解银耳的方法提取银耳多糖。试验讨论了不同酶解时间与不同提取时间对提取效果的影响，最终确定最佳提取工艺为：在45℃下，用1%果胶酶酶解，水与银耳比例为100ml:1g,酶解时间为45min，然后于98℃热水浴中浸提60min。用此法提取银耳多糖，提取率可达40% ，远高于传统的银耳多糖提取工艺。相比传统工艺，果胶酶提取银耳多糖不仅有较高的提取率，还可以明显缩短提取的时间。银耳多糖的生物活性在长时间高温环境和酸碱性条件下容易受到破坏，酶解法提取环境温和，且提取时间较短，能较好的保留银耳多糖的生物活性。固定酶解时间时，提高提取时间可显著提高提取效果，改变酶解时间时，提取效果有提高，但不大，且从45min 增加到60min增加不显著。
果胶酶的制作工艺及流程
果胶酶的生产工艺流程 一、生产工艺流程 原料→预处理→抽提→脱色→浓缩→干燥→成品。 二、具体过程 1．原料及其处理 鲜果皮或干燥保存的柚皮均可作为原料。鲜果皮应及时处理，以免原料中产生果胶酶类水解作用，使果胶产量或胶凝度下降。先将果皮搅碎至粒径2～3mm，置于蒸汽或沸水中处理5～8min，以钝化果胶酶活性。杀酶后的原料再在水中清泡30min，并加热到90℃5min，压去汁液，用清水漂洗数次，尽可能除去苦味、色素及可溶性杂质。榨出的汁液可供回收柚苷。干皮温水浸泡复水后，采取以上同样处理备用。 2．抽提 通常用酸法提取。将处理过的柚皮倒入夹层锅中，加4倍水，并用工业盐酸调ph至1．5～2．0，加热到95℃，在不断搅拌中保持恒温60min。趁热过滤得果胶萃取液。待冷却至50℃，加入1%～2%淀粉酶以分解其中的淀粉，酶作用终了时，再加热至80℃杀酶。然后加0．5%～2%活性炭，在80℃下搅拌20min，过滤得脱色滤液。 因柚皮中钙、镁等离子含量较高，这些离子对果胶有封闭作用，影响果胶转化为水溶性果胶，同时也因皮中杂质含量高，而影响胶凝度，故酸法提取率较低，质量较差。为解决以上问题，西南农业大学食品学院(1995)对酸法提取作了改进，即在酸法基础上，按干皮重量加入5%的732阳离子交换树脂或按浸提液重量加入0．3%～0．4%六偏磷酸钠，前者果胶得率
可提高7．2%～8．56%，胶凝度提高30%以上，而后者得率提高25．35%～35．2%，其胶凝度可达180±3。 3．浓缩 采用真空浓缩法，在55～60c的条件下，将提取液的果胶含量提高到4%～6．5%后进行后续工序处理。近来作者和国内其他单位研究表明，超滤可用于果胶液浓缩，如用切割分子量为50 000u的管式聚丙烯腈膜超滤器，在温度45℃、ph3．0、压力0．2mpa条件下进行超滤浓缩，可将果胶浓度浓缩至4．21%，而其杂质含量和经常性生产费用分别仅为真空浓缩的1／5和1／2～1／3。 4．干燥 常用方法为沉淀干燥法，即用95%酒精或铝、铜等金属盐类使果胶沉淀。以酒精沉淀法制取的果胶质量最佳。其方法是：在果胶浓缩液中加入重量1．5%的工业盐酸，搅匀，再徐徐加入等量的95%酒精，边加边搅拌，使果胶沉淀析出。再用80%的酒精洗涤，除去醇溶性杂质。然后用95%酸性酒精洗涤2次，用螺旋压榨机榨干后，将果胶沉淀送入真空干燥机在60℃下干燥至含水量10%以下，把果胶研细，密封包装即成果胶粉成品。用金属盐类沉淀果胶，其杂质含量较高，现较少采用。 目前国外果胶干燥大多采用喷雾干燥，即用压力式喷雾干燥，将浓缩液在进料温度150～160℃，出料温度220～230℃的条件下干燥，连续化操作中可不断得到粉末状产品。西南农业大学食品学院用超滤浓缩液进行喷雾干燥试验，结果表明该法是完全可行的，果胶质量符合国家标准。 5.果胶酶的固定化
银耳多糖的提取及抗氧化的探究
Open Journal of Nature Science 自然科学, 2018, 6(3), 230-236 Published Online May 2018 in Hans. https://www.360docs.net/doc/a510076832.html,/journal/ojns https://https://www.360docs.net/doc/a510076832.html,/10.12677/ojns.2018.63033 Extraction and Antioxidation of Polysaccharide from Tremella fuciformis Ying Li, Min Lv, Shilong Cang, Dongyu Hou, Shaoyi Yu, Xinjun Zhu College of Life Science, Dezhou University, Dezhou Shandong Received: May 10th, 2018; accepted: May 24th, 2018; published: May 31st, 2018 Abstract Tremella polysaccharides were extracted from Tremella dry sample using ultrasonic extraction method. The effect of material to liquid ratio, temperature and time on the extraction efficiency was investigated, and the results showed that the optimum ratio was 1:40, the temperature was 60?C and the extraction time was 30 min. The antioxidant activity of Tremella polysaccharides was investigated using 2,2’-Azino-bis(3-ethyl benzothiazo line-6-sulfonic acid)(ABTS)asradical model. The results showed that Tremella polysaccharides extracted via ultrasonic extraction method had obvious antioxidant activity. Keywords Temella Polysaccharides, Ultrasonic Extraction, Antioxidant 银耳多糖的提取及抗氧化的探究 李颖，吕敏，仓世龙，侯冬玉，于少艺，朱新军 德州学院生命科学学院，山东德州 收稿日期：2018年5月10日；录用日期：2018年5月24日；发布日期：2018年5月31日 摘要 以银耳干品为实验材料，研究了超声提取法对银耳多糖提取效率的影响。通过考察料液比、温度及提取时间对银耳多糖提取率的影响，发现在料液比为1:40，温度为60?C，提取时间为30 min为最佳提取条件。 以2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)为自由基模型，考察了银耳多糖的抗氧化性能。 结果表明，该法提取的银耳多糖具有明显的抗氧化能力。
果胶的提取
从果皮中提取果胶 一、目的要求 1．学习从柑橘皮中提取果胶的方法。 2．进一步了解果胶质的有关知识。 二、实验原理 果胶物质广泛存在于植物中，主要分布于细胞壁之间的中胶层，尤其以果蔬中含量为多。不同的果蔬含果胶物质的量不同，山楂约为6.6%，柑橘约为0.7～1.5%，南瓜含量较多，约为7%～17%。在果蔬中，尤其是在未成熟的水果和果皮中，果胶多数以原果胶存在，原果胶不溶于水，用酸水解，生成可溶性果胶，再进行脱色、沉淀、干燥即得商品果胶。从柑橘皮中提取的果胶是高酯化度的果胶，在食品工业中常用来制作果酱、果冻等食品。 三、实验药品、仪器、装置 仪器：恒温水浴、布氏漏斗、抽滤瓶、玻棒、尼龙布、表面皿、精密pH试纸、烧杯、电子天平、小刀、真空泵、柑橘皮（新鲜）。 试剂：1．95%乙醇、无水乙醇。 2．0.2 mol/L盐酸溶液 3．6 mol/L氨水 4．活性炭 四、操作步骤 1．称取新鲜柑橘皮20 g（干品为8 g），用清水洗净后，放入250 mL烧杯中，加120 mL水，加热至90 ℃保温5～10 min，使酶失活。用水冲洗后切成3～5 mm大小的颗粒，用50 ℃左右的热水漂洗，直至水为无色，果皮无异味为止。每次漂洗都要把果皮用尼龙布挤干，再进行下一次漂洗。 2．将处理过的果皮粒放入烧杯中，加入0.2 mol/L的盐酸以浸没果皮为度，调溶液的pH 2.0～2.5之间。加热至90 ℃，在恒温水浴中保温40 min，保温期间要不断地搅动，趁热用垫有尼龙布(100目)的布氏漏斗抽滤，收集滤液。 3．在滤液中加入0.5%～1%的活性炭，加热至80 ℃，脱色20 min，趁热抽滤(如橘皮漂洗干净，滤液清沏，则可不脱色)。 4．滤液冷却后，用6 mol/L氨水调至pH 3～4，在不断搅拌下缓缓地加入95%酒精溶液，加入乙醇的量为原滤液体积的1.5倍(使其中酒精的质量分数达50%～60%)。酒精加入过程中即可看到絮状果胶物质析出，静置20 min后，用尼龙布(100目)过滤制得湿果胶。 5．将湿果胶转移于100 mL烧杯中，加入30 mL无水乙醇洗涤湿果胶，再用尼龙布过滤、挤压。将脱水的果胶放入表面皿中摊开，在60～70 ℃烘干。将烘干的果胶磨碎过筛，制得干果胶。 五、注意事项 1．脱色中如抽滤困难可加入2%～4%的硅藻土作助滤剂。 2．湿果胶用无水乙醇洗涤，可进行2次。 3．滤液可用分馏法回收酒精。 六、实验现象及结论记录表
果胶酶的制备与应用
1104110116 1041101班 食品学院 陈家晟 2013/6/25
摘要：果胶酶是分解果胶质酶类的总称。通常包括聚半乳糖醛酸酶(PG)、果胶酯酶(PE)、果胶裂解酶(PL)等主要组分。本文主要叙述了果胶酶的制备方法和主要的应用。 关键词：果胶；果胶酶；黑曲霉；制备；应用； 前言：50年前国外就将果胶酶应用于果汁的加工，现有商品果胶酶制剂生产。近年来，为了满足国内市场对果胶酶的需求，一些研究单位对果胶酶的生产菌种及研制[1]展开了积极的研究。 此外，随着中国三大产业的发展，特别是第一和第二产业的高速发展，果胶酶的应用也越来越广泛。现在果胶酶主要应用于果汁加工和果酒酿造。除此之外，果胶酶在茶和咖啡的发酵、桔子脱囊衣、麻料脱胶、废水处理、造纸、榨油等领域也有应用。 1.果胶酶及其简述 1.1果胶酶的定义 果胶酶，英文别名:Pectase; Polygalacturonase，是个多酶复合物，通常包括原果胶酶、果胶甲酯水解酶、果胶酸酶。果胶酶由黑曲霉经发酵精制而得。外观呈浅黄色粉末状。主要用于果蔬汁饮料及果酒的榨汁及澄清，对分解果胶具有良好的作用。 1.2果胶酶的特性 特性：作用pH:3.0-6.0，最适作用pH:3.0 温度特性：作用温度为15-55℃左右。最适作用温度为 50℃。 1.3果胶酶的作用原理 果胶酶是从根霉中提取的,可以分解细胞间的果胶物质，可以澄清果汁和分离细胞。2.果胶酶的制备 2.1高产酶菌株的选育 激光诱变育种:由成熟的黑曲霉斜面孢子制成一定浓度的孢子悬液，在搅拌条件下，采用810nm多模连续输出的半导体激光进行辐照.将辐照过的抱子悬液进行分离培养，挑单菌落接种于装有含1%果胶的麦芽汁试管中，置30℃恒温培养5-6d，观测并选出透明层较对照为最长的试管，将其孢子接种于斜面培养，在发酵培养基进行复筛，选出产酶最高者[2]. 2.2果胶酶的生产工艺 固体发酵生产果胶酶工艺流程: 培养料拌料 ↓ 灭菌 ↓ 斜面菌种→麸皮菌种→接种曲盘发酵培养 ↓ 出曲浸提 ↓ 离心甩滤→去渣 ↓ 填充剂脱色 ↓↓ 成品包装←喷雾干燥←超滤浓缩
银耳多糖资源化学与应用
银耳多糖资源化学与应用 摘要：本文介绍了银耳多糖的资源状况、结构特性、生物活性、提取纯化及检测研究进展，总结了银耳多糖的开发与利用现状，为今后银耳多糖的有效开发与深加工利用提供重要参考。 关键字：银耳多糖；生物活性；开发利用 银耳又称白木耳、雪耳，被称为“菌中之冠”。自古以来，银耳作为一种珍贵的食用菌和重要药材，被誉为“延年益寿之珍品”。银耳含有丰富的多糖、蛋白质、矿物质、维生素等营养及功能成分，其中银耳多糖的含量约占银耳干重的60~70%，研究发现银耳多糖具有降血脂、降血糖、抗溃疡、抗氧化、抗肿瘤、增强免疫力、改善记忆力等功效[1-2]。近年来，银耳多糖还被广泛应用于食品、保健品、化妆品及医药等领域。本文对银耳多糖的资源状况、结构特性、生物活性、提取分离及检测研究进展进行了介绍，为银耳多糖的有效开发与深加工利用提供重要参考。 1 银耳的资源状况 银耳是中温型菌类，主要生长于温带和亚热带地区。我国是银耳的重要产区，其中以福建古田、四川通江的产量最大，另外在我国浙江、江西、台湾、内蒙古、西藏等地区均有分布。我国于1958年在福建古田首创瓶栽法开始种银耳，1978年首创袋栽法开始推广种植，1983年开始利用棉籽壳大规模种植银耳。随着制种和栽培技术的发展，银耳产量大幅度提高。目前我国银耳主要采用层架式代料栽培，该方法原料易得、生长周期短、产量高、空间利用率高、管理方便，且所得银耳中氨基酸含量略高于段木栽培[3]。我国是银耳生产及出口大国，银耳资源十分丰富，但有关银耳制种及栽培、银耳成分及价值、银耳加工及利用等方面都有待更进一步的深入研究。 2 结构特性与生物活性 2.1 银耳多糖的结构特性 银耳多糖是以α-(1→3)-D-甘露糖为主链的杂多糖，主链的2,4,6位上连接有葡萄糖、木糖、岩藻糖及普通糖醛酸等残基组成的侧链。银耳多糖在子实体、孢子、发酵液和细胞壁中都有存在，其组成单糖有葡萄糖、甘露糖、果糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖和葡萄糖醛酸。银耳多糖作为银耳的主要活性成份可分为酸性杂多糖、中性杂多糖、酸性低聚糖、胞壁多糖和胞外多糖5大类，其中酸性杂多糖约占银耳总多糖的70~75%，为木糖、甘露糖和葡萄糖醛酸为主的多聚体，其中有少量岩藻糖。而中性杂多糖约占银耳总多糖的20%，为木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖的多聚体[4]。 2.2 银耳多糖的生物活性 2.2.1 降血糖血脂 银耳多糖能够阻抑肠道对脂类的吸收，减少外源性脂类进入机体外，对高脂血症有一定的降脂作用。田春雨等[5]研究银耳多糖对链脲佐菌素和高能量饲料诱发的2型糖尿病模型大鼠血糖、血脂的影响，结果表明采用高能量饮食加STZ诱发的2型糖尿病大鼠空腹血糖、
植物多糖及其提取方法
植物多糖及其提取方法 1 前言 多糖是自然界和生物体中广泛存在的物质，它是生物体内除蛋白质和核酸以外的又一类重要的信息分子。它具有多种生物活性，与生物机能的维持密切相关，与蛋白质、脂类形成的糖蛋白、脂多糖在细胞的识别、分泌以及在蛋白质的加工、转移方面起着不容忽视的作用。近年来，植物、海洋生物及菌类等来源的多糖已作为有生物活性的天然产物中的一个重要类型出现，各种多糖所具有的抗肿瘤、免疫、抗凝血、降血糖和抗病毒活性已相继被发现。我国对多糖研究始于20世纪70年代，植物多糖由于它们独特的功能和低毒性，作为新药发展的方向具有广阔的应用前景，越来越多的研究人员将目光投向植物多糖。 2 植物多糖的结构 植物多糖是由许多相同或不同的单糖以a或p一糖苷键所组成的化合物，普遍存在于自然界植物体中，包括淀粉、纤维素、多聚糖、果胶等。多糖有复杂的四级结构，一级结构指糖基的组成、排列顺序、相邻糖基的连接方式、异头碳构型及糖链有无分支、分支的位置与长短等；二级结构指多糖主链以氢键为主要次级键而形成的有规则构象；三、四级结构是指以二级结构为基础，糖单位之间的非共价相互作用，导致二级结构在有序地空间产生规则构象。植物多糖的
主链与支链形成了特殊的构型一凹形槽。凹形槽是一级结构与构象的体现。凹形槽的支链与活性关系为：支链度越大，凹形槽越多，生物活性越大。近年来，人们对多糖的结构和活性的研究不断深入，进一步阐明了多糖作用机制与结构的关系，其多样性的生理活性更加受到重视。 3 植物多糖的功能 多糖与蛋白质一样，具有生物大分子的复杂结构，具有一定的生理和生物学活性，概括起来多糖的生物活性包括：免疫调节性、抗肿瘤活性、降血糖活性、降血脂活性、抗病毒活性、抗衰老活性(抗氧化活性)、抗疲劳、抗突变活性，除此之外，还具有其他生物活性，包括抗凝血、抗炎、抗菌、抗惊厥、镇静、止喘及降血压等作用。 (1)免疫调节功能。由于现代医学、细胞生物学及分子生物学快速发展，人们对免疫系统的认识越来越深入。免疫系统紊乱，会导致人体衰老和多种疾病的发生。植物多糖是一种免疫调节剂。多糖对肌体的免疫调节作用，包括激活巨噬细胞，激活网状内皮系统，激活T和B细胞，激活补体，进干扰素的生成，促进白细胞介素的生成，诱生肿瘤坏死因子等。 2)抗肿瘤活性植物多糖主要是通过增强机体的免疫功能来达到杀伤肿瘤细胞的目的，许多高等植物中都含有抗肿瘤活性的多糖，如芦荟多糖、香菇多糖提取物、人参多糖具有
银耳多糖水浸提取
武汉工商学院 生物制药工程技术论文 学院：环境与生物工程学院 专业：生物工程年级：2012级 学生：夏继承学号1204011104 指导教师：乐薇职称: 副教授 题目: 水浸提银耳多糖的关键技术研究 2015年4月5日
目录 水浸提银耳多糖的关键技术研究 (1) 摘要 (1) Abstract (1) 2.实验试剂及仪器 (2) 2.1实验试剂 (2) 2.2实验仪器 (3) 3.实验部分 (3) 3.1标准曲线的制作 (3) 3.2实验材料预处理 (4) 3.3单因素试验 (4) 3.3.1料水比单因素试验 (4) 3.3.2温度单因素试验 (4) 3.3.3pH值比单因素试验 (4) 3.3.4时间单因素试验 (4) 3.4单因数试验结果与讨论 (4) 3.5正交试验 (6) 3.6正交试验结果与讨论 (7) 3.7验证性试验 (7) 4.结论 (7) 致谢 (9)
水浸提银耳多糖的关键技术研究 摘要 为充分利用提取银耳多糖，探讨银耳多糖的水浸提的关键技术。本设计用正交分析法研究了温度、pH值、料水比、时间等四个因数对银耳多糖的水浸提法的效率影响，并获得的最佳的提取条件为温度50℃，pH值12，料水比1:50，时间2h。 关键词：水浸提取；银耳多糖；关键技术 Key techniques of water extraction of tremella polysaccharide Abstract To make full use of tremella polysaccharide extracted, this paper discusses the key technology of tremella polysaccharide water leaching. This design for the four factor of water extraction of tremella polysaccharide extraction efficiency was studied, and obtain the best extraction conditions for temperature is 50 ℃, the pH value is 12, the ratio of material to water is 1:50, time is 2 h Key words: water immersion extraction; Tremella polysaccharide; The key technology 1
云芝多糖的提取
云芝多糖的提取分离 第一章文献综述 云芝是担子菌纲云芝属的一种杂色菌，腐木生，是珍贵的药用真菌，其子实体具有清热消炎之功效，临床上用于治疗慢性气管炎，慢性肝炎等疾病[1]。这只要是和云芝多糖密切相关，云芝多糖（PSK）是从担子菌纲云芝（Coriolus versicolor in basidiomycete）中提取的一种蛋白质多糖，它具有免疫调节功能，已用于肿瘤和炎症的辅助性治疗[2]。它能激活免疫细胞，提高机体免疫功能而对正常细胞没有毒副作用[3]。根据张翼伸等的报道[4]，用水醇提取法从天然云芝子实体中分离提取，获得了糖和蛋白含量较恒定的蛋白结合多糖，通过对其生物学效应的研究，发现小鼠腹腔注射PSK有提高其腹腔巨噬细胞硒谷胱甘肽过氧化物酶（SeGSHPx）的活性和基因表达水平，保护巨噬细胞免受tbOOH和氧化修饰LDL（Ox-LDL）引起的脂质过氧化物损伤[5-9]。现在除了用水醇提取法以外，还有的人采用盐提法，酸提法甚至超声波法等等。 1.1水提法不同因素的比较 1.1.1真菌多糖提取条件 影响真菌多糖提取率的因素很多，有培养方法，提取原材料的状态，温度、介质、介质浓度、提取时间、浸提次数、原料的预处理等等，做真菌多糖的提取时要充分考虑到这些因素，因为一个因素的不同就会对提取量造成很大的影响。1.1.2原材料对多糖提取的影响 真菌原材料的不同对多糖的提取会产生一定的影响，有研究指出姬松茸菌丝体的多糖提取率高于子实体[10]。而香菇现在则多从子实体中提取多糖，当存在着周期长，成本高等问题。而且就算同是从云芝中提取多糖，还有野生和栽培之分，根据田光辉等人的研究，发现栽培的云芝用水提法提取出的多糖含量要高于野生菌株。 1.1.3提取方法的比较 水提法中还包括了不同的提取方法，有干提法，湿提法等等。参考国内外已有
银耳多糖成分资料
文献：银耳孢糖的化学结构初步研究及其免疫活性 112 分离纯化 银耳孢糖1 kg ,加水配成5 %的溶液,充分搅拌,离心(3 000 r·min - 1 ) ,除去色素等杂质,离心(1 000 r·min - 1) ,离心液搅拌下加乙醇至60 % ,离心,离心液加乙醇至醇浓度为80 % ,离心,收集沉淀,干燥,即得粗多糖100 g。取粗多糖10 g ,加水溶解,经DEAE2Sephadex2A 50 离子交换柱,依次用蒸馏水、012 mol·L - 1 、014 mol·L - 1 、018 mol·L - 1 、2 mol·L - 1 NaCL 溶液洗脱,分别收集各洗脱液,透析,干燥。将012 mol·L - 1部分称为TSP22。对TSP22 经Sephadex G2150 进一步纯化,分别得到TSP22a～TSP22c 。 11211 纯度鉴定及分子量测定采用标准葡聚糖Dextran T 系列在下述色谱条件下制作标准曲线,然后测定TSP22a～TSP22c 在相同色谱条件下的色谱图及保留时间,从标准曲线上求出各多糖的分子量,此过程由GPC 软件完成。流动相为017 %的硫酸钠,流速为015 mL·min - 1 ,柱温30 ±011 ℃。 11212 理化性质及组成糖分析[2 ] 1121211 理化性质测定总糖含量以酚- 硫酸法测定,糖醛酸以间羟基联苯方法测定,蛋白质含量以lowry 法测定。 1121212 组成糖分析取TSP22a～TSP22c 各10mg ,加2 mol ·L - 1 三氟乙酸1 mL ,溶解,密封,于121 ℃烘箱中水解115 h ,吹干,残渣加1 mL 甲醇吹干,反复3 次,加水015 mL 溶解,加硼氢化钠20mg ,室温放置115 h ,不时振荡,滴加醋酸至无气泡产生,吹干。残渣加10 %醋酸甲醇溶液1 mL ,吹干,反复3 次,残渣置五氧化二磷真空干燥器中过夜。残渣加吡啶015 mL , 醋酐1 mL , 密封, 置121 ℃烘箱中3 h ,放至室温,吹干。加3 mL 水使溶解,用氯仿萃取3 次,氯仿层吹干,作为中性糖供试品溶液, 进行GC 检测。酸性糖的还原, 将TSP22a～TSP22c 水解后吹干,置真空干燥箱80 ℃减压干燥2 h ,置五氧化二磷真空干燥器中过夜使成内酯后,再加硼氢化钠还原,以下操作同中性糖部分。样品进行GC 检测,与标准糖醇衍生物对比,确定单糖的种类。 11213 甲基化分析取TSP22a～TSP22c 各20 mg ,第一部分甲基化按文献[3 ] 进行,衍生物通过GC2MS 检测。第二部分取少量第一部分甲基化样品,加氘代四氢铝锂还原液[4 ] ,充氮气,密封,80 ℃水浴回流16 h ,放至室温,滴加稀盐酸至无气泡,反应液充氮气离心,取上清液吹干,按组成糖分析方法制备乙酰化衍生物,通过GC2MS 检测,确定糖苷键连接位置。11214 放射免疫法定量细胞因子放射免疫试管一套,每份设3 副平行管,第一天,每支试管中加入100μl 不同浓度的标准细胞因子和TSP22、TSP22a～TSP22c ,并加入100μl 细胞因子抗体,最后加入300μl 013 %正常家兔血清,振荡。第二天每支试管加入100μl 125 I 标记的细胞因子。第三天每支试管中加入700μl 含6 % PEG和2 %放射免疫缓冲液,待反应完全后,离心,弃去上清,放置过夜。测定沉淀物的放射性, 从标准曲线上查出 TSP22 和TSP22a～TSP22c 的细胞因子含量。 2 结果与讨论 银耳孢糖经离子交换、凝胶色谱法分离纯化得到TSP22a～TSP22c ,并对其进行纯度分析及分子量测定。Sepharose CL26B 柱层析表明, TSP22a ～TSP22c 均为单峰;HPGPC 分析的结果表明,TSP22a～TSP22c 均为单一对称峰,表明他们为均一多糖。用标准葡聚糖Dextran T 系列制作校正曲线。测得TSP22a～TSP22c 分子量分别为1 100 kD、500 kD、400 kD。IR 光谱中,3 组分在1733 cm- 1处的肩峰为C = O 的伸缩振动产生的吸收峰,提示可能都含有糖醛酸。并在810 及870 cm- 1处均出现甘露糖的特征吸收峰,表明含有甘露糖。