氨基酸测定方法

氨基酸测定方法
氨基酸测定方法

氨基酸测定方法

谷物籽粒色氨酸测定法

1 适用范围本标准适用于测定谷物籽粒色氨酸含量。

2 原理谷物蛋白质碱解后,降解成肽和游离的氨基酸。在酸性介质中,有硝酸盐存在条件下,色氨酸吲哚环与对二甲胺基苯甲醛反应,生成蓝色化合物,在一定范围内颜色深浅与色氨酸含量成正比。

3 仪器、设备

3.1 分析天平,感量0.1mg。

3.2 实验室用粉碎机。

3.3 721型分光光度计,或相当的仪器。

3.4 离心机,4000r/min。

3.5 培养箱。

3.6 20ml具塞刻度玻璃试管(须校准)。

4 试剂除注明者外均为分析纯。水为蒸馏水。

4.1 浓盐酸(GB 622—77),比重1.19。

4.2 10%盐酸溶液:22.7ml浓盐酸加水至100ml。

4.3 5%对二甲胺基苯甲醛(HGB 3486—62)溶液:5g 对二甲胺基苯甲醛溶于10%盐酸中,并定容100ml。

4.4 1%硝酸钠(GB 636—77)水溶液(m/V)。

注:4℃冰箱中保存,一周内使用有效。

4.5 10%氢氧化钾(GB 2306—80)水溶液(m/V)。

4.6 L-色氨酸,层析纯。

4.7 L-色氨酸标准溶液:准确称25mgL-色氨酸(105℃干燥2h),加少量0.1mol/L氢氧化钠(GB 629—81)使之溶解,定量地转移到250ml棕色容量瓶中,用水定容。浓度为100μg/ml。

注:4℃冰箱中保存,一个月内使用有效。

5 试样的选取与制备

5.1 选取具有代表性谷物籽粒,挑拣干净,按四分法缩减取样,样量不得少于20g。籽粒充分风干后用粉碎机磨碎(带壳籽粒先脱壳),使95%以上通过0.25mm孔径筛。

5.2 按GB 2906—82《谷类、油料作物种子粗脂肪测定法》脱脂并测定脂肪含量。脱脂样品风干后,混匀,装入磨口瓶中备用。

6 校准曲线的绘制吸L-色氨酸标准溶液0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7ml分别置于20ml具塞刻度玻璃试管中,加1ml10%氢氧化钾溶液,摇匀;加0.2ml5%对二甲胺基苯甲醛,摇匀;加0.2ml1%硝酸钠,摇匀;将试管置于冰水中,再加5ml浓盐酸。取出试管,强烈振摇后放入25℃培养箱中显色75min(温度升到25℃时记时),取出后用水稀释至刻度,摇匀。以试剂空白作对照在590nm波长处测读吸光度。以色氨酸含量(μg)为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制校准曲线。在温度较高的季节和地区,制定校准曲线时,参见附录A。

7 测定步骤

7.1 称样:称取40mg试样两份,准确至0.1mg,与此同时,另称样品,按GB 3523 —83《谷类、油料作物种子水分测定法》测定水分含量。

7.2 水解:将试样置于20ml具塞刻度玻璃试管中,加1ml10%氢氧化钾,振摇,样品全部湿润后,放入40℃培养箱中水解16~18h。

7.3 显色:从培养箱中取出试管冷至室温后加0. 2ml5%对二甲胺基苯甲醛,摇匀;加0.2ml1%硝酸钠,摇匀;将试管置于冰水中,再加5ml浓盐酸。取出试管,强烈振摇后置于40℃培养箱中显色45min (温度升到4℃时记时)。

7.4 测定:取出试管冷至室温后,用水稀释至刻度,摇匀。以4000r/min离心10min。取上清液以试剂空白作对照,在590nm波长处测读吸光度。

8 结果计算

8.1 计算公式

式中:m──

试样质量,mg;

α──

从校准曲线上查得的色氨酸含量,μg;

H──

试样水分百分率。

8.2 结果的表示

两个平行样品的测定结果用算术平均值表示,保留有效数字两位,第三位数按GB 1.1—81《标准化工作导则编写标准的一般规定》附录C规定取舍。

石斛中多糖含量的测定

题目石斛中多糖含量的测定 学生姓名高换楼学号1111034082所在学院化学与环境科学学院 专业班级化工1102班 指导教师季晓晖 完成地点陕西理工学院 2015 年 06 月 08 日

石斛中多糖含量的测定 高换楼 (陕西理工学院化学与环境科学学院化工专业1102班,陕西汉中723001) 季晓晖 [摘要] 石斛为我国常用贵重药材,有养阴清热、益胃生津的功效,石斛一直备受国内外研究者的重视。本文利用蒽酮-硫酸法对铁皮石斛多糖的含量进行了测定,并采用正交试验得到最佳实验方案,在石斛粉碎程度为粉末、液料比为50mL/g、提取2次,每次3小时的情况下多糖提取率最高。本文的实验结果为今后铁皮石斛多糖提取的质量评价及其进一步开发和利用提供参考依据。 [关键词] 石斛;多糖;蒽酮-硫酸法;抗氧化性;测定; Determination of Dendrobium polysaccharide content GAO Huanlou (Grade 02, Class 11, Major chemical engineering, School of chemical and environmental science Dept, Shaanxi University of Technology, Hanzhong 72300x, Shaanxi) Tutor: JI Xiaohui Abstract: Dendrobium is in common use in our country precious medicinal herbs, the effect of nourishing yin and clearing heat, nourishing stomach fluid, Dendrobium has attracted a lot of attention of researchers at home and abroad. The anthrone-sulfuric acid method of Dendrobium officinale polysaccharide content were measured, and using the orthogonal test and the optimum solution is obtained. In Dendrobium degree of comminution is in the form of powder, liquid to solid ratio for 50mL/1g, extraction 2 times, every time 3 hours of polysaccharides extraction rate was the highest. The experimental results for the quality evaluation of future Dendrobium officinale polysaccharide extraction and its further development and utilization to provide reference. Key words: Dendrobium; polysaccharide; anthrone-sulfuric acid method; antioxidation; determination;

氨基酸自动分析仪

氨基酸自动分析仪 1.实验目的 ①了解氨基酸自动分析仪的分析原理; ②掌握氨基酸自动分析仪的操作技巧。 2.实验原理 测定原理是利用样品各种氨基酸组分的结构不同、酸碱性、极性及分子大小不同,在阳离子交换柱上将它们分离,采用不同pH值离子浓度的缓冲液将各氨基酸组分依次洗脱下来,再逐个以另一流路的茚酮试剂混合,然后共同流至螺旋反应管中,于一定温度下(通常为115~120℃)进行显色反应,形成在570nm有最大吸收的蓝紫色产物。其中的羟脯氨酸与茚三酮反应生成黄色产物,其最大吸收在440nm。这些有色产物对570nm、440nm光的吸收强度与洗脱出来的各氨基酸的浓度(或含量)之间的关系符合比耳定律,可与标准氨基酸比较作定性和定量测定。 3.实验仪器与耗材 实验仪器: 耗材: 4.实验步骤 ①样品处理: 测定样品中各种游离氨基酸含量,可以除去脂肪杂质后,直接上柱进行分析。 测定蛋白质的氨基酸组成时样品必须经酸水解,使蛋白质完全变成氨基酸后才上柱进行分析。 ②样品分析:经过处理后的样品上柱进行分析。上柱的样品量根据所用自动分析仪的灵 敏度来确定。一般为每种氨基酸0.1μmol 左右(水解样品干重为0.3mg 左右)。测定必须在pH5~5.5、100℃下进行,反应进行时间为10~15min,生成的紫色物质在570nm 波长下进行比色测定。而生成的黄色化合物在440nm 波长下进行比色测定。做一个氨基酸全分析

一般只需1h 左右,同时可将几十个样品一起装入仪器,自动按序分析,最后自动计算给出精确的数据。仪器精确度在±1~3%。用阳离子交换柱分离及测定氨基酸所的如下图 自动分析仪氨基酸分离图谱 5.结果计算 带有数据处理机的仪器,各种氨基酸的定量结果能自动打印出来,否则,可用尺子测量峰高或用峰高乘以半峰宽确定峰面积进而计算出氨基酸的精确含量。另外,根据峰出现的时间可以确定氨基酸的种类。 6.说明 ①显色反应用的茚三酮试剂,随着时间推移发色率会降低,故在较长时间测样过程中应随时采用已知浓度的氨基酸标准溶液上柱测定以检验其变化情况。 ②近年出现的采用反相色谱原理制造的氨基酸分析仪,可使蛋白质水解出的17 种氨基酸在12min 内完成分离,且具有灵敏度高(最小检出量可达1pmol)、重现性好以及一机多用等优点。

四种常见蛋中的氨基酸成分对比分析

四种常见蛋中的氨基酸成分对比分析 陈巧玲,郑艺梅,王兵丽,张泽宏 (闽南师范大学生物科学与技术学院,福建漳州 363000) 摘要:采用氨基酸自动分析仪检测样品,得出土鸡蛋、鸭蛋、皮蛋、洋鸡蛋均含有17种水解氨基酸。必须氨基酸与总氨基酸比值为鸭蛋%>洋鸡蛋%>土鸡蛋%>皮蛋%,必须氨基酸与非必须氨基酸的比值为鸭蛋>洋鸡蛋>土鸡蛋>皮蛋。根据FAO/WHO 提出的理想蛋白质条件,可知这四种蛋品均属于理想蛋白质范畴。氨基酸总含量分别为土鸡蛋%>鸭蛋%>洋鸡蛋%>皮蛋%。鸭蛋、皮蛋、土鸡蛋、洋鸡蛋的第一限制氨基酸分别为苏氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸和半胱氨酸、缬氨酸。因此根据分析结果,可以在日常饮食中根据食物的优缺点合理搭配饮食,实现营养最大化。 关键词:蛋;氨基酸;营养分析 Determination of amino acid in four kinds of eggs using amino acid analyzer CHEN Qiao-ling, ZHENG Yi-mei, Wang Bi-li, ZHANG Ze-hong (School of Biological Science And Biotechnology, MinNan Normal University,Zhangzhou 363000, Fujian China) Abstract:This paper finded out that 17 kinds of amino acid were content in the four kinds of eggs by using amino acid auto-analyzer. Essential amino acid /Total amino acid of this four kinds of eggs were duck eggs %>eggs %>farm eggs %>preserved % and the essential amino acid /nonessential amino acids of this four kinds of eggs were duck eggs >eggs >farm eggs >preserved eggs high quality?protein as their essential amino acid /Total amino acid and essential amino acid /nonessential amino acids numerical value close to the reference value of WHO/FAO model. The total content of amino acid were duck eggs % >eggs % >farm eggs % >preserved eggs %. The first limiting amino acids of duck eggs\ preserved eggs\ farm eggs\ eggs were threonine\ isoleucine\ methionine& cysteine\ valine.

实验 一游离氨基酸测定

实验一:游离氨基酸测定 实验学时:3学时 实验类型:验证 实验要求:必修 一、实验目的 1、掌握甲醛法测定游离氨基酸的测定原理和方法。 二、实验内容 使用甲醛滴定法测定游离氨基酸 三、实验原理 氨基酸中的NH2基的pK值常在9.0以上,不能和NaOH标准溶液直接滴定,需使这些含氮化合物(包括有机含氮化合物)都转化为氨态氮,然后进行测定。但可以用甲醛法测量。在pH中性和常温条件下,甲醛迅速与氨基酸中的 -氨基相互作用,使滴定终点移至pH值9.0左右,可以用酚酞批示剂,以NaOH标准溶液来滴定NH3+基上的H+,每释放一个氢离子,就相当于有一个氨基氮 R-NH3+→H++R-NH2 R-NH2+2HCHO→R-N(CH2H)2 4 NH4+ + 6 HCHO == (CH2)6N4H+ + 3 H+ + 6 H2O 滴定的结果表示游离a—氨基的含量,其精确度可达理论量的90%。如果样品中只某一种已知的氨基酸,从甲醛法结果可求得该氨基酸的含量。如果样品中是多种氨基酸的混合物(如蛋白水解液),则测定结果不能作为氨基酸的定量依据。一般常用此法测定蛋白质水解程度,随着水解程度的增加滴定值增加,当水解完全后,滴定值即保持恒定。甲醛滴定法采用的甲醛浓度为2.0-3.0mol/L,即滴定后最终浓度为6 %-9 %。 四、实验组织运行要求 集中授课形式 五、实验条件 1.试剂 (1)40%中性甲醛溶液: 在50mL 36 % ~ 37 %甲醛中加入5滴5g/L酚酞乙醇溶液,然后 用0.2mol/L NaOH溶液滴定到微红(使用前需重新中和) (2)酚酞指示剂: 5g/L酚酞的50%乙醇溶液 (3)0.01mol/L氢氧化钠标准溶液 (4)10%(体积分数)乙酸溶液 2.玻璃仪器 ⑴50ml容量瓶 ⑵20ml移液管 ⑶碱式滴定管 ⑷50ml量杯 ⑸250ml三角瓶 六、实验步骤 (1)样品处理称取试样0.2g(准确至1mg),置入研钵中,加5ml 10%乙酸溶液研磨至均匀,用水转移到50mL容量瓶中并定容至刻度,摇匀、过滤(弃去最初部份溶液)。 (2)样品滴定在三角瓶中加入2mL样品滤液,加水4mL,3滴酚酞指示剂,摇匀后用0.01mol/L NaOH标准溶液滴定到微红色。然后加入2mL中性甲醛溶液,摇匀,放置片刻,再用0.01mol/L NaOH标准溶液滴定回到微红色中点,记下甲醛加入后样品消耗NaOH标准溶液的体积。同样,取6mL水按以上操作做空白实验。 七、计算

几种市售枫斗的多糖含量测定

几种市售枫斗的多糖含量测定 .烈斗 浙江省医学科学琏1999年9月(邑弟39期 , 多 .j 几种市售枫斗的多糖含 药帕研究所(3l0013)兰李亚芳 中药枫斗是以石斛属多种植物的茎经过 特殊加工制成的干燥品,亦称耳环石斛.传统 认为质重,嚼之粘牙,无渣者为优,老药工凭 此来判断枫斗的优劣,但无内在的质量评价 标准.近年来,石斛多糖的研究引起人们的重 视,并证明石斛多糖是评价枫斗的重要生理 活性物质之一ll.J.我们于l997年2月~ l999年6月采用苯酚一硫酸比色法,测定r 几种市售枫斗的多糖含量. 一 ,材料与方法 ∈一)材料: 1.样品:铁皮枫斗1(福建),铁皮枫斗2 (福建),枫斗1(云南),枫斗2(云南),小环叉 直条枫斗(云南),野生枫斗(云南),野生紫皮 扭斗(云南),儿洲牌铁皮枫斗(广西): 2仪器:7230型分光光度计(上海分析 仪器厂)

3试剂:苯酚试剂:苯酚(分析纯)l0 加水l50g混匀,溶解即得,置淙色瓶内,冰箱'巾备用;其它试剂(无水乙醇,硫酸等)均为国产分析纯 (二)方法: 多糖的提取与含量测定,参照文献方法i 二,结果 (一)葡萄糖标准液吸光度测定结果:标 准品浓度在495,9.90,1485,1980,2475 297O,3465,396O时,吸光度分别为o069, O135,0203,0287,0366,0428,0500 0.587,以吸光度A为纵坐标,浓度c为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程: A=一0010536+0.Ol4923C.r= 25 量测定 z,7/ 丁委静张治国户.f 09994 (二)换算因素 塑重量—— 多糖液葡萄糖浓度(g/m])×多糖稀释因素结果:f为1504. (三)几种市售枫斗多糖含量见表1. 表1几种枫斗的多糖含量 三,讨论 ()结果表明,不同种石斛加工成的枫 斗.多糖含差别很大,已测的几个样品中多糖含最高低相差约4倍

氨基酸含量测定

茚三酮比色测定氨基酸含量 一、实验原理 氨基酸在碱性溶液中能与茚三酮作用,生成蓝紫色或黄色化合物(除脯氨酸外均有此反应),可用吸光光度法测定。生成的蓝紫色或黄色化合物颜色深浅与氨基酸含量成正比,其最大吸收波长分别为570nm或350nm,故据此可以测定样品中氨基酸含量。 二、实验试剂 (1)1.2%茚三酮溶液:称取茚三酮1g于盛有35mL热水的烧杯中使其溶解,加入40mg氯化亚锡(SnCl2?H2O),搅拌过滤(作防腐剂)。滤液置冷暗处过夜,加水至50mL,摇匀备用。 (2)pH 8.04磷酸缓冲液: Ⅰ、准确称取磷酸二氢钾(KH2PO4)4.5350g于烧杯中,用少量蒸馏水溶解后,定量转入500mL容量瓶中,用水稀释至标线,摇匀备用。 Ⅱ、准确称取磷酸氢二钠(Na2HPO4)11.9380g于烧杯中,用少量蒸馏水溶解后,定量转入500mL容量瓶中,用水稀释到标线,摇匀备用。 Ⅲ、取上述配好的磷酸二氢钾溶液10.0mL与190mL磷酸氢二钠溶液混合均匀即为pH8.04的磷酸缓冲溶液。 (3)氨基酸标准溶液:准确称取干燥的氨基酸(如异亮氨酸)0.2000g于烧杯中,先用少量水溶解后,定量转入100mL容量瓶中,用水稀释到标线,摇匀,准确吸取此液10.0mL于100mL容量瓶中,加水到标线,摇匀,此为200μg/mL 氨基酸标准溶液。 三、实验方法及步骤 (1)标准曲线绘制 准确吸取200μg/mL的氨基酸标准溶液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL (相当于0、100、200、300、400、500、600μg 氨基酸),分别置于25mL 容量瓶或比色管中,各加水补充至容积为 4.0mL,然后加入茚三酮溶液(20g/L)和磷酸盐缓冲溶液(pH为8.04)各1mL,混合均匀,于90℃水浴上加热至显色恒定为止(该加热过程至少需要25分钟),取出迅速冷至室温,加水至标线,摇匀。静置15min后,若生成蓝紫色化合物,在570nm波长下,以试剂空白为

生物化学实验-氨基酸分析实验报告

【实验报告第一部分(预习报告内容):①实验原理、②实验材料(包括实验样品、主要试剂、主要仪器与器材)、③实验步骤(包括实验流程、操作步骤和注意事项);评分(满分30分): XX 】 一、预习报告 实验原理:

根据固定相基质的形式,层析可分为纸层析、薄层层析和柱层析。薄层层析是在玻 璃或塑料等光滑表面铺一层很薄的基质进行层析。 薄层层析(thin layer chromatography ,TLC ):是将吸附剂均匀地在玻璃板上铺成薄层(固定相),再把样品点在薄层板一端,再把板的这端浸入适当的溶剂(流动相)在薄层板上扩展。并在此过程中通过吸附——解吸附——再吸附——再解吸附的反复进行,而将样品各组份分离出来。 本次实验: ● 具体原理:当流动相在固定相上流动时,由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不 一样,不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样,点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同,因而可以彼此分开。 ● 吸附剂(固定相):硅胶(C.P.)。为使制成的薄层板不易松散,加入5%羟甲基 纤维素钠(CMCNa )作黏合剂。 ● 展开剂:正丁醇、冰醋酸和蒸馏水的混合液(80:10:10,V/V/V )。 ● 展层-显色剂:按照10:1比例(V/V )混匀的展开剂和0.1%茚三酮溶液。 ● 活化(activation ):在一定温度下,对吸附剂硅胶加热去除水分。可使硅胶的 活性提高,吸附能力加强。 ● 氨基酸与茚三酮的显色反应:茚三酮水化后生成的水合茚三酮在加热时被还原, 此产物与氨基酸加热分解产生的氨结合,以及另一分子水合茚三酮缩合生成紫红色化合物而使氨基酸斑点显色。 ● Rf 值: 点的距离 对应溶剂前沿到样品原距离 斑点中心到样品原点的 Rf 由于物质在一定溶剂中的分配系数是一定的,故移动速率(Rf 值)也是恒定的,

齿瓣石斛多糖含量测定比较

齿瓣石斛多糖含量测定比较 石斛是中国名贵中药材,多糖是石斛的主要有效成分之一。本文测定了不同产地,种植方式以及不同部位的齿瓣石斛多糖含量,对齿瓣石斛栽培应用有重要意义。 标签:齿瓣石斛多糖;含量测定;比较 石斛属(Dendrobium)是兰科第二大属,全球约有1500种,主要集中分布在我国华南和西南地区[1]。石斛为我国名贵中药,具有滋阴清热、益胃生津等功效。齿瓣石斛化学成分类型多样,其中糖类也是重要化学成分,广西的加工品一级枫斗含量高达45.89%[2]。本文对不同齿瓣石斛多糖含量进行测定比较。 1仪器和试药 1.1仪器UV-2450紫外分光光度计(日本岛津);电子天平;分析天平(FA200413)。 1.2试药对照品:D-无水葡萄糖(中国食品药品检定研究院,批号:110833-201205)。 1.3试剂双蒸水:自制;无水乙醇,95%乙醇,苯酚。 1.4药材见表1。 2实验方法 2.1紫外可见分光光度法测定石斛多糖含量[3]。 2.1.1对照品溶液的配置取D-无水葡萄糖对照品适量,精密称定,加水制成每1 ml含94.66ug的溶液,即得。 2.1.2供试品溶液的制备取石斛鲜品茎约60 g,精密称定,置于九阳豆浆机中,选择五谷模式榨汁,加水定容至1000ml,混匀,离心(转速为4000转/min)20min,上清液稀释8倍,精密量取2ml置10ml塑料离心管中,精密加入无水乙醇10ml,摇匀,冷藏1 h,离心,弃上清,加80%乙醇洗涤2次,每次8ml,离心,弃上清,沉淀用热水溶解,转移至25ml容量瓶中,放冷,加水至刻度,摇匀,即得。 2.1.3标准曲线的绘制精密量取对照品溶液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml,分别置10 mL具塞棕色试管中,加水补至1.0 ml,加5%苯酚溶液(临用时配)1.0 ml,摇匀,迅速加入浓硫酸5.0mL,置沸水浴加热20min,取出,立即置冰水浴中冷却5 min后取出,以相应试剂为空白,照紫外-可见分光光度法在488nm

氨基酸分析

2.2.56氨基酸分析(1)(见注解) 氨基酸分析是指利用方法对蛋白质,多肽和其他药物制剂进行氨基酸组成或含量的分析。蛋白质和多肽一般是氨基酸残基以共价键的形式组成的线性大分子。蛋白质或多肽中氨基酸的序列决定了其分子的性质。蛋白质普遍是由大分子以折叠的方式形成的特定构象,而多肽则比较小,可能只有几个氨基酸组成。氨基酸分析方法可以用于对蛋白质和多肽的量化,基于氨基酸的组成来确定蛋白质或多肽的类型,支撑蛋白质和多肽的结构分析,评估碎片肽段,并检测可能存在于蛋白质或多肽中的不规则氨基酸。并且在氨基酸分析之前必须进行将蛋白质或多肽水解为个别氨基酸。伴随着蛋白质或多肽的水解,氨基酸分析的过程和其他药物制剂中氨基酸的游离是一致的。通常我们采用易于分析的方法来测定样品中的氨基酸成分。 设备 用于氨基酸分析方法通常是基于色谱分离氨基酸的方法设定的。当前的方法是利用自动化色谱仪进行分析。氨基酸分析仪通常是一个能够产生梯度的低压或高压的液相色谱仪,并在色谱柱上分离氨基酸。除非样品在柱前进行了衍生化,否则这些仪器必须具备柱后衍生化的能力。检测器使用的是紫外可见光检测器或荧光检测器。此外,还需具有一个记录仪器(例如,积分仪),用于转化检测到的信号及用于定量测定。而且,这些仪器是专门用于氨基酸分析使用的。 一般预防策施 在氨基酸分析中,分析师关注的一个重点是背景的污染。高纯度的试剂是必要的(例如,低纯度的盐酸的使用在分析中会产生甘氨酸污染)。分析试剂通常是每隔几周更换一次,并且仅使用HPLC级别的溶剂。所用试剂使用之前必须用过滤器将溶剂中可能潜在的微生物和外来材料污染过滤除去,保持溶剂贮存器出于密封状态,并且不可将氨基酸分析仪放置于光照条件下。 实验室的操作规范决定了氨基酸分析的质量。仪器应放置在实验室的空旷区域。保持实验室的卫生干净。根据维修计划,及时清洁和校准移液管,将移液吸头放置在相应的盒子中,分析师不得用手处理移液管。分析师需要穿戴一次性的乳胶手套或同等质量的其他手套。限制测试样品瓶开启和关闭的次数,因为飞灰可以提高甘氨酸,丝氨酸和丙氨酸的浓度。 良好的仪器状态是氨基酸分析结果可接受的一个关键步骤。在日常使

游离氨基酸

总游离氨基酸测定(完整版) 实验原理:游离氨基酸的游离氨基可与水合茚三酮作用,产生蓝紫色的化合物二酮茚-二酮茚胺,产物的颜色深浅与游离氨基酸含量成正比,用分光光度计在570nm下测其含量。因蛋白质中的游离氨基酸也会产生同样反应,在测定前必须用蛋白质沉淀剂将其除掉. 仪器与用具:100ml容量瓶;漏斗;三角瓶研钵;刻度吸管:0.1ml×1、1ml×2、2ml×2、5ml×1;沸水浴;具塞刻度试管20ml×10;分光光度计. 一、试剂 1.水合茚三铜:称重结晶的茚三铜0.6g,装入烧杯,加入正丙醇15ml,使其溶解加入正丁醇30 ml、乙二醇60 ml、乙酸-乙酸钠缓冲液(pH=5.4)9 ml,混匀,棕色瓶冰箱保存,10天内有效。 2.乙酸-乙酸钠缓冲液(pH5.4):称取化学纯乙酸钠54.4g,加入无氨蒸馏水100 ml,电炉加热至沸,使其体积减半,冷却后加冰乙酸30 ml,加蒸馏水定容至100 ml。 0.2M 醋酸:11.55ml 冰醋酸定容至1000ml。 0.2M 醋酸钠:16.4g 无水醋酸钠或27.2g 醋酸钠.3H2O溶于1000ml水中。 0.2M 醋酸6.8ml 0.2M 醋酸钠43.2ml,混匀,如果有PH计,可以测一下(基本差不多),如果高了点,可以加一点0.2M 醋酸,低了,再加一点醋酸钠,最终浓度为0.2M。如果要别的浓度,可以稀释。 3.氨基酸标准溶液:精确称取80℃烘干至恒重的亮氨酸0.0234g溶于10%异丙醇并定容至50ml。取此液5ml蒸馏水稀释到50ml,即为5μg/ml 氨基酸标液。

4.0.1%抗坏血酸:称取0.050g抗坏血酸,溶于50 ml蒸馏水中,即配即用。 5.10%乙酸 二、标准曲线制备 度为纵坐标,氨基氮ug数为横坐标,绘标准曲线 三、实验步骤: 1. 烟末0.5g于研钵中加入5 ml10%乙酸,研磨匀浆后用蒸馏水定容100 ml,用滤纸过滤到三角瓶中备用。 2. 1ml滤液加入到20ml 干燥试管中,加1 ml蒸馏水,水合茚三铜3ml, 0.1%抗坏血酸0.1ml, 加塞子密封于沸水中加热15分钟,取出后用冷水迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红色被空气逐渐氧化褪去,待呈现兰紫色时,用60%乙醇定容至20ml,摇匀于570nm波长下比色。 四. 计算: 求三重复的平均值,由标准曲线得知各样的氨基酸ug数,代入公式计算。氨基酸含量(mg/g干样)={氨基酸ug数×(提取液总体积/测定体积)}/(样品g数×1000)

氨基酸分析实验报告

生物化学实验报告 姓名: 学号: 专业年级: 组别: 生物化学与分子生物学实验教学中心

实验名称氨基酸的薄层层析 实验日期2014-10-22 实验地点第4实验室 合作者指导老师 评分教师签名批改日期 一、实验目的 1.掌握薄层层析法的一般原理。 2.掌握氨基酸薄层层析法的基本操作技术。 3.掌握如何根据移动速率(R f值)来鉴定被分离的物质(即氨基酸混合液)。 二、实验原理 (一)薄层层析 1.层析技术是利用化合物中各组分的物理性质(如溶解度、吸附能力、分子形状和大小、分子极性、分子亲和力、分配系数等)的不同,使各组分不同程度地分布在两相中,随着流动相从固定相上流过,不同组分以不同速度而最终被分离。 1)特点:分离效率高,能分离各种性质相类似的物质。不仅可用于少量物质的 分离纯化,也可用于大量物质的分离纯化和制备。 2)固定相:固定相是层析的一个基质。包括固体物质(如吸附剂,凝胶,离子 交换剂等)和液体物质(如固定在硅胶或纤维素上的溶液),这些物质能与相 关的化合物进行可逆性的吸附、溶解和交换作用。 3)流动相:在层析过程中,推动固定相上待分离的物质移动的液体、气体等, 都称为流动相。柱层析中一般称为洗脱剂,薄层层析时称为展层剂。 4)分类

(1)按两相所处状态,可分为液相层析和气相层析,前者以液体为流动相,后者以气体为流动相。 (2)按操作形式不同,可分为柱层析、薄层层析和纸层析。 (3)按层析的原理不同,可分为吸附层析、分配层析、凝胶层析、离子交 换层析和亲和层析等。 今天要做的试验,根据原理属于吸附层析,根据操作形式又属于薄层层析,合到一起叫:吸附薄层层析。 2.薄层层析法是色谱分析技术的一种 一般是将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为固定相。当液相(展开溶剂)在固定相上流动时,由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样,不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样,点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同,因而可以彼此分开。(即通过吸附-解吸-再吸附-再解吸的反复进行,而将样品各组分分离开来)3.硅胶吸附薄层层析 1)吸附薄层中常用的吸附剂为氧化铝和硅胶 : 硅胶:表达式为SiO2·XH2O。层析用硅胶是一种多孔性物质,它的硅氧环交链结构表面上密布极性硅醇基(-Si-OH),这种极性的硅醇基能和许多化合物形成氢键而产生吸附. 2)硅胶吸附薄层层析的特点: (1)硅胶的吸附能力比氧化铝稍弱,其吸附活性也与含水量呈负性相关。 (2)硅醇基显较弱的酸性,因而,硅胶只能用于中性、或酸性成分的分离,碱性成分不能用它分离。 (3)硅胶的活化温度通常为105℃-110℃,不能过高。 (二)氨基酸与茚三酮的显色反应 茚三酮水化后生成水化茚三酮,它与氨基酸的羧基反应生成还原茚三酮、氨基

天津第三中心医院全自动氨基酸分析仪项目需求书

天津市第三中心医院全自动氨基酸分析仪项目需求书数量:一台 一、环境条件: 1.电源电压:220V±10%,50Hz。 2.温度:15~30℃。 3.湿度:25~85%。 二、全自动氨基酸分析仪功能要求及配置: (一)功能要求: 1.蛋白水解液及生理体液分析。 2.缓冲液、反应液试剂配方公开,可采用国产试剂。 3.色谱工作站,能够实现仪器的控制、数据采集和处理。能够实现系统的自动清洗,符合GLP/GMP规则,能够进行系统校验性试验、订制客户报告。 (二)配置要求: 1.蛋白水解液的标准分析系统。 2.生理体液分析系统。 3.色谱柱装填工具:1 套。 4.树脂。 5.光源灯:2个。 6.泵密封件:若干。 7.清洗密封件。 8.保护柱芯:若干。 9.电脑系统和打印机。 三、全自动氨基酸分析仪技术要求: (一)系统指标: 1.净分析时间:蛋白水解≤ 50 min; 生理体液90-180 min。 2.保留时间重现性:全部氨基酸平均≤0.5%CV。 3.峰面积重现性:全部氨基酸平均≤1.0%CV。 4.检测限:全部氨基酸平均≤10pmol。

5.分离度:平均≥1.2。 (二)分离柱:可自行填充。 1.柱温范围:室温~99℃。 2.温度稳定性:≤±1℃。 (三)自动进样器:带制冷单元。 1.进样体积:1~500 uL 2.样品位:≥80 (四)检测器: 1.检测波长:570nm,440nm。 2.反应器温度范围:40-140℃。 3.温度稳定性:≤±1℃。 (五)泵系统:具备梯度控制功能。 1.流速稳定性:RSD≤1.0%。 2.最大压力:≥19.6MPa。 3.压力波动≤0.1%。 (六)数据处理工作站: 1.硬件:CPU Pentium IV以上,内存≥1GB,硬盘≥120 GB,DVD刻录光驱,17寸液晶彩显。 2.操作系统:32位操作系统。 四、技术服务:在用户单位现场提供应用技术培训,符合用户指定安装,要求完善的售后服务,以确保临床使用。 五、售后服务:保修期两年,保证开机率95%以上(以365天计算),软件终身免费升级。提供10年以上备件供应。境内具备正规维修机构,出具相关法律文件。境内具备零备件保税库,出具相关法律文件。 六、投标价为免税美元价,按7.7比率折合人民币价格。

四种常见蛋中的氨基酸成分对比分析

四种常见蛋中的氨基酸成分对比分析 标准化管理部编码-[99968T-6889628-J68568-1689N]

四种常见蛋中的氨基酸成分对比分析 陈巧玲,郑艺梅,王兵丽,张泽宏 (闽南师范大学生物科学与技术学院,福建漳州 363000) 摘要:采用氨基酸自动分析仪检测样品,得出土鸡蛋、鸭蛋、皮蛋、洋鸡蛋均含有17种水解氨基酸。必须氨基酸与总氨基酸比值为鸭蛋%>洋鸡蛋%>土鸡蛋%>皮蛋%,必须氨基酸与非必须氨基酸的比值为鸭蛋>洋鸡蛋>土鸡蛋>皮蛋。根据FAO/WHO 提出的理想蛋白质条件,可知这四种蛋品均属于理想蛋白质范畴。氨基酸总含量分别为土鸡蛋%>鸭蛋%>洋鸡蛋%>皮蛋%。鸭蛋、皮蛋、土鸡蛋、洋鸡蛋的第一限制氨基酸分别为苏氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸和半胱氨酸、缬氨酸。因此根据分析结果,可以在日常饮食中根据食物的优缺点合理搭配饮食,实现营养最大化。 关键词:蛋;氨基酸;营养分析 Determination of amino acid in four kinds of eggs using amino acid analyzer CHEN Qiao-ling, ZHENG Yi-mei, Wang Bi-li, ZHANG Ze-hong (School of Biological Science And Biotechnology, MinNan Normal University,Zhangzhou 363000, Fujian China) Abstract:This paper finded out that 17 kinds of amino acid were content in the four kinds of eggs by using amino acid auto-analyzer. Essential amino acid /Total amino acid of this four kinds of eggs were duck eggs %>eggs %>farm eggs %>preserved % and the essential amino acid /nonessential amino acids of this four kinds of eggs were duck eggs >eggs >farm eggs >preserved eggs high qualityprotein as their essential amino acid /Total amino acid and essential amino acid /nonessential amino acids numerical value close to the reference value of WHO/FAO model. The total content of amino acid were duck eggs % >eggs % >farm eggs % >preserved eggs %. The first limiting amino acids of duck eggs\ preserved eggs\ farm eggs\ eggs were threonine\ isoleucine\ methionine& cysteine\ valine. According to the result, people can eat more scientific and made the food to the maximize nutrition Key words: eggs; amino acid; nutritional analysis 蛋及其制品在日常生活中有着重要的意义,它的营养价值也是国际公认的。有研究表明蛋中所

游离氨基酸的测定实验报告

游离氨基酸的测定实验方案 (茚三酮比色法) 一、实验目的 茚三酮比色法测定发酵液中游离氨基酸含量,利用氨基酸含量这个参数,控制发酵过程。 二、实验原理 游离氨基酸的游离氨基可与水合茚三酮作用,产生蓝紫色的化台物二酮茚一二酮茚胺,产物的颜色深浅与游离氨基酸含量成正比,用分光光度计在570nm 下测其含量。因蛋白质中的游离氨基酸也会产生同样反应,在测定前必须用蛋白质沉淀剂将其除掉。 三、实验材料 发酵液样品; 实验试剂:水合茚三酮;氨基酸标准液;0.1%抗坏血酸 实验仪器:100ml容量瓶;漏斗;三角瓶;研钵;移液器;枪头;沸水浴;具塞刻度试管20 ml×10;分光光度计 四、实验方法 1.溶液配制 (1)水合茚三酮称取0.6g重结晶的茚三酮放烧杯中,加入15ml 正丙醇、30ml正丁醇、60ml乙二醇及9 ml PH4.54的醋酸盐缓冲液混匀,棕色瓶中冰箱内保存,10天内有效。 (2)氨基酸标准液称取80℃烘干的亮氨酸23.4mg,以10%的异丙醇溶解定溶至50ml(含氮为50ug/ ml),取此液5ml,用水定容至50 ml,此为含氮量5ug/ ml工作液。 (3)0.1%抗坏血酸称取0.1g抗坏血酸定容100 ml,随用随配。

2.标准曲线绘制 取6支20ml 试管,按下表加剂: 试剂 管号 1 2 3 4 5 6 亮氨酸标准液(ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 无氨蒸馏水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 水合茚三酮(ml) 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 抗坏血酸(ml) 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 氨基氮量(ug/管 ) 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 将各管溶液混合均匀,封口,在沸水中加热15min ,取出后立即用冷水摇 动冷却,用60%乙醇定容至20 ml ,摇匀。 λ=570nm 处测定吸 光度 0 0.025 0.055 0.099 0.146 0.186 以吸光度为纵坐标,氨基氨ug 数为横坐标,绘标准曲线如图: 茚三酮比色法测定游离氨基氮标准曲线 y = 0.0382x - 0.0103 R 2 = 0.9882 -0.05 00.05 0.10.15 0.20123456 氨基氮(ug) 吸光度A 3.样品中游离氨基酸的测定 取20ml 试管,取待测液1ml ,加蒸馏水l ml ,水合茚三酮3.0 ml ,坏血酸0.1ml ,混匀,封口。沸水浴加热1 5分钟,冷水中摇动冷却,用 60%乙醇定溶至20ml ,摇匀,于570mn 测定吸光度。

氨基酸的鉴定(纸层析法)

氨基酸的鉴定(纸层析法) 实验目的: 1、掌握纸层析法的基本原理 2、通过对氨基酸的分离,掌握纸层析的操作方法并学会分析未知样品中的氨基酸组分。实验原理: 1、层析法又称色谱法(Chromatography),是一种物理的分离方法。利用混合物中各组分物理化学性质的差异(如吸附办、分子形状及大小、分子亲和力、分配系数等),使各组分以不同程度分布在固定相和流动相两相中,并使各组分以不同速度移动,从而得到有效的分离。操作方式: 纸层析、薄层层析、柱层析等。 分离机理: 分配层析、吸附层析、离子交换层析、凝胶层析、亲和层析等。 2、纸层析法是用滤纸作为情性支持物的分配层析法,展层溶剂由有机溶剂和水组成。滤纸纤维上的羟基具有亲水性,在滤纸上水就被吸附在纤维素的纤维之间形成固定相。当有机溶剂(流动相) 沿纸流动经过层析点时,层析点上溶质就在水相和有机相之间不断进行分配。由于溶质中各组分的分配系数不同,移动速率也不同,因而可以彼此分开。 物质被分离后在纸层析图谱上的移动速率用R f值来表示: 3、在一定条件下,物质的R f值是常数。R f值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。 4、本实验利用纸层析法分离氨基酸,利用茚三酮反应将氨基酸层析点显色来鉴定氨基酸的种类。 试剂: 1、酸性展层剂——正丁醇:88% 甲酸:水=15:3:2 2、显色储备液:0.4mol/L茚三酮-异丙醇:甲酸:水=20:1:5 3、标准氨基酸溶液(6mg/ml,苯丙氨酸Phe、甘氨酸Gly、脯氨酸Pro、组氨酸His) 4、未知样品液:上述4种氨基酸中的一种或几种混合液(每组任选一个样品) 实验器材: 1、滤纸 2、烧杯 3、剪刀 4、毛细管 5、层析缸 6、微量注射器

绿豆芽中游离氨基酸的测定

绿豆芽中游离氨基酸总量的测定 一、实验目的:掌握茚三酮显色法测定氨基酸含量的方法。 二、实验原理:游离氨基酸的氨基可与水合茚三酮反应,产生蓝紫色化合物,其颜色的深浅与游离氨基酸的含量成正比。 三、材料、仪器设备及试剂 材料:绿豆芽 仪器设备:722型分光光度计,分析天平,研钵,容量瓶,移液管,水浴锅,三角瓶,漏斗 试剂:水合茚三酮试剂、乙酸-乙酸钠缓冲液、标准氨基酸、0.1%抗坏血酸、10%乙酸 四、实验步骤 1.样品的制备 用剪刀将绿豆芽剪碎、混匀,称取1g 放入研钵中加入5mL 10%乙酸,研磨匀浆后,用蒸馏水稀释至100mL 。混匀,并用干滤纸过滤到三角瓶中备用。 2.标准曲线的制作 取6支20ml 具塞刻度试管,下表操作 试剂 管号 1 2 3 3 5 6 标准氨基酸/mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 无氨蒸馏水/mL 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 水合茚三酮/mL 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 抗坏血酸/mL 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 每管含氮量/μg 1 2 3 4 5 加完试剂后混匀,盖上大小合适的玻璃球,置沸水中加热15min ,取出后用冷水迅速冷却,并不时摇动,使加热时形成的红色被空气逐渐氧化而褪去,进而呈现蓝紫色时,用60%乙醇定容至20 ml 。混匀后用1cm 光径比色皿在570 nm 波长下测定吸光度,绘制标准曲线。 3.样品的测定 吸取样品滤液1.0ml ,放入20mL 干燥试管中,加无氨蒸馏水1.0ml ,其他操作与制作标准曲线相同。根据样品吸光度在标准曲线上查得含氮量。 四、结果计算 按下式计算样品中氨基态氮的含量。 100V V C 100s T ???= W 克样品中氨基态氮含量 式中:C 为从标准曲线上查得的氨基态氮含量,/μg;V T 为样品稀释总体积,mL ;Vs 为测定时样品体积,mL ;W 为样品鲜重。 五、实验结论与误差分析 六、思考题 1.茚三酮与所有氨基酸的反应产物颜色都相同吗?为什么? 2.抗坏血酸的作用是什么?

石斛总多糖提取工艺及测定方法研究

石斛总多糖提取工艺及测定方法研究 发表时间:2018-11-23T14:12:36.320Z 来源:《医药前沿》2018年27期作者:许磊 [导读] 确定石斛总多糖的最佳提取工艺及含量测定方法。方法:通过正交实验,采用苯酚-硫酸法测定的多糖含量为指标 许磊 (天津民祥生物医药股份有限公司天津 300000) 【摘要】目的:确定石斛总多糖的最佳提取工艺及含量测定方法。方法:通过正交实验,采用苯酚-硫酸法测定的多糖含量为指标,研究提取温度、提取次数、提取时间、料液比对石斛总多糖提取率的影响。结果:石斛总多糖最佳提取工艺条件为提取温度为100℃、提取时间为2h、料液比为5:4。结论:该工艺简单、方便、快捷,可用于不同品种石斛总多糖的提取。 【关键词】石斛;总多糖;单因素;正交试验;含量测定 【中图分类号】R284.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752(2018)27-0368-02 石斛为兰科植物马鞭石斛、铁皮石斛、环草石斛、黄草石斛的新鲜或干燥茎,被称为“九大仙草”之首,为珍稀、名贵、道地中草药,当下多以其总多糖含量的高低来判断石斛品质的优劣。本研究以总多糖含量为指标,通过正交实验,优化并最终确定了石斛总多糖的最佳提取工艺,以期为石斛总多糖的提取工艺研究提供参考和借鉴。 1.材料与试剂 石斛采自安徽省霍山县,无水葡糖糖、苯酚、硫酸等化学试剂均为分析级,实验用水均为Milli-Q超纯水机制备(密理博(上海)贸易有限公司)。紫外分光光度计(上海美谱达仪器有限公司);LC-4016型低速离心机(安徽中科中佳科学仪器有限公司);十万分之一天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司);超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);双层铁皮电炉(上海日用电炉厂)。 2.方法与结果 2.1 石斛中总多糖含量的测定 2.1.1对照品溶液的制备 取无水葡萄糖对照品适量,精密称定,于100mL容量瓶中,加水至刻度,摇匀,制成每1mL含90μg/mL的溶液,即得对照品储备液。 2.1.2供试品溶液的制备 取石斛粉末(过三号筛)约0.12g,精密称定,加水80mL,加热回流2小时,放冷,转移至100mL量瓶中,用少量水分次洗涤容器,洗液并入同一量瓶中,加水至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液2mL,置15mL离心管中,精密加入无水乙醇10mL,摇匀,冷藏1h,取出,离心(转速为每分钟4000转)20min,弃去上清液(必要时滤过),沉淀加80%乙醇洗涤2次,每次8mL,离心,弃去上清液,沉淀加热水溶解,转移至25mL量瓶中,放冷,加水至刻度,摇匀,即得。 2.1.3总多糖含量的测定 精密量取供试品溶液1mL,置10mL具塞试管中,精密加入5% 苯酚溶液 1mL,摇匀,再精密加硫酸5mL,摇匀,置沸水浴中加热20分钟,取出,置冰浴中冷却5分钟,以相应试剂为空白,照紫外-可见分光光度法(2015药典通则0401),在488nm的波长处测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中无水葡萄糖的量,计算,即得。 总多糖提取率=总多糖质量/原药材的干品重量×100%。 2.1.4标准曲线的制备 精密量取对照品溶液0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL,分别置10mL具塞试管中,各加水补至1.0mL,振摇,精密加入5%苯酚溶液l.0mL(现配现用,注意避光),摇匀,再精密加硫酸5mL,摇匀,置沸水浴中加热20分钟,取出,置冰水浴中冷却5分钟,以相应试剂为空白,照紫外-可见分光光度法(2015药典通则0401),在488nm的波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。在9.016~90.160 μg/mL范围内线性良好(y=0.00881x+0.11252,R2=0.99904)。 2.1.5精密度实验 按标准曲线确定的范围内,精密吸取葡萄糖对照品溶液6份,各1mL,按照2.1.3项下操作测定吸光度,计算RSD=2.4%,精密度良好,符合方法学要求。 2.1.6稳定性实验 在标准曲线确定的范围内,精密吸取2.1.2项下制备的供试品1mL,分别于0h,2h,4h,6h按照2.1.3项下操作测定吸光度,计算其RSD=0.88%,稳定性良好,符合方法学要求。 2.1.7重复性实验 在标准曲线确定的范围内,精密量取2.1.2项下制备的供试品1mL,按照2.1.3项下操作测定吸光度,连续测定6次,计算RSD=3.2%,重复性良好,符合方法学要求。 2.1.8加样回收率实验 取已知含量的石斛粉末100mg,精密称定,共六份,分别加入适量的对照品溶液,按照2.1.3项下操作测定吸光度,计算提取回收率,RSD=3.4%,加样回收率合格,符合方法学要求。 2.2 石斛总多糖提取工艺考察 以提取温度、提取时间、料液比、提取次数为因素,选用L9(34)正交表进行正交实验(表1)。进而得到石斛总多糖加热回流提取的最优条件。石斛总多糖最佳提取条件正交实验表见表2。

相关文档
最新文档