刺梨多糖对衰老小鼠体内抗氧化能力的影响_杨江涛

石斛中多糖含量的测定

题目石斛中多糖含量的测定 学生姓名高换楼学号1111034082所在学院化学与环境科学学院 专业班级化工1102班 指导教师季晓晖 完成地点陕西理工学院 2015 年 06 月 08 日

石斛中多糖含量的测定 高换楼 （陕西理工学院化学与环境科学学院化工专业1102班，陕西汉中723001） 季晓晖 [摘要] 石斛为我国常用贵重药材，有养阴清热、益胃生津的功效，石斛一直备受国内外研究者的重视。本文利用蒽酮-硫酸法对铁皮石斛多糖的含量进行了测定，并采用正交试验得到最佳实验方案，在石斛粉碎程度为粉末、液料比为50mL/g、提取2次，每次3小时的情况下多糖提取率最高。本文的实验结果为今后铁皮石斛多糖提取的质量评价及其进一步开发和利用提供参考依据。 [关键词] 石斛；多糖；蒽酮-硫酸法；抗氧化性；测定； Determination of Dendrobium polysaccharide content GAO Huanlou （Grade 02, Class 11, Major chemical engineering, School of chemical and environmental science Dept, Shaanxi University of Technology, Hanzhong 72300x, Shaanxi） Tutor: JI Xiaohui Abstract: Dendrobium is in common use in our country precious medicinal herbs, the effect of nourishing yin and clearing heat, nourishing stomach fluid, Dendrobium has attracted a lot of attention of researchers at home and abroad. The anthrone-sulfuric acid method of Dendrobium officinale polysaccharide content were measured, and using the orthogonal test and the optimum solution is obtained. In Dendrobium degree of comminution is in the form of powder, liquid to solid ratio for 50mL/1g, extraction 2 times, every time 3 hours of polysaccharides extraction rate was the highest. The experimental results for the quality evaluation of future Dendrobium officinale polysaccharide extraction and its further development and utilization to provide reference. Key words: Dendrobium; polysaccharide; anthrone-sulfuric acid method; antioxidation; determination;

抗氧化实验方法

1还原力的测定 样品2ml加到2ml 0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH6.6）和2ml 1%的铁氰化钾溶液的混合液中。混合物在50℃保温20min，然后在反应混合物中加入2ml 10%的TCA，混合后以3000rpm 离心10min，取上清液2ml与2ml蒸馏水以及0.4ml 0.1%氯化铁在反应试管中反应，10min 后测定其在700nm处的吸光值。吸光值越大表明还原力越强。 注意：建议蛋白浓度以5mg/ml左右变化，例如2.5，5之类变化。但具体情况应根据吸光值大小而定。 0.2mol/L pH6.6的磷酸盐缓冲液的配制见附表。 铁氰化钾溶液应盛装在棕色瓶中。 比色皿的用法：可见光(>400nm)用玻璃比色皿（即没有标字母或者标G的比色皿），紫外光时（<400nm）用石英比色皿（即标Q字比色皿）。 2 DPPH自由基清除活性的测定 将1.5ml样品液添加到1.5ml含0.1 mmol/L DPPH的95％乙醇中，混合，振荡，在 室温下放置30min，然后在波长517nm处检测（Ai）。清除率计算公式为： 空白为1.5 ml 95%的乙醇加入1.5 ml蒸馏水调零。 式中：Ac——对照为1.5 ml DPPH溶液加上1.5 ml蒸馏水在517nm处的吸光值；Aj——1.5ml样品液加上1.5 ml 95%的乙醇在517nm处的吸光值； Ai——1.5ml样品液加上1.5 ml DPPH溶液在517nm处的吸光值； 注意：建议酶解液蛋白浓度以2mg/ml 左右变化，如0.5,1,2,2.5之类变化，但是具体情况应视清除率而定，最终结果应有清除率大于50%和小于50%的情况。 DPPH样品有毒，需戴口罩和手套进行操作。而且DPPH试剂很昂贵，用时注意节约。0.1m mol/L DPPH 乙醇溶液的配制：准确称取0.00395gDPPH，用95%的乙醇溶液溶解并定容到100ml。 3 在卵黄磷脂体系中抗氧化能力的测定 以卵黄脂蛋白为底物的LPO模型反应体系包括:体积比为1:25稀释的卵黄悬液(卵黄用等体积的pH7.45，0.lmol/LPBS配成，使用前磁力搅拌10min)0.2 mL、一定浓度的样品溶液0.lmL、25m moll/LFeSO4溶液0.2mL，用PBS缓冲液补足至2.0mL。对照管除不加样液外其他试剂同前。将上述2种试管同时置37℃恒温水浴锅中保温培养1h。取出后，加入20%TCA0.5mL，静置10 min后，与对照管于3500r/min离心10min，取2.0mL上清液，分别加入质量分数为0.8%硫代巴比妥酸(TBA)溶液1.0mL，加塞于100℃水浴15min，取出冷却。空白管以2.0mLPBS溶液代替，在532nm下测定吸光度，样品对卵黄脂蛋白LPO的抑制率表示为: SA(%)=(Ac一AS)/A C×100 式中:Ac一不加样品的吸光度 As一加入样品的吸光度 注意：卵黄溶液不用时应放置冰箱保存。 酶解液蛋白浓度以5mg/ml左右调整，但具体应视清除率大小而定，对酶解液蛋白浓度

铁皮石斛多糖的功效

铁皮石斛多糖的功效 了解过铁皮石斛的朋友，都知道铁皮石斛的功效卓著，可以滋养阴津、提高免疫、增强体质、补益脾胃、护肝利胆、清虚热、强筋壮骨、降低血糖、抑制肿瘤、明亮眼目、滋养肌肤、延年益寿等等令人诱惑的功效。 很多朋友也听说过，铁皮石斛之所以能有如此多的功效，是因为含有石斛多糖。 糖？ 最近不是报道说，糖不利身体健康吗？！ 此多糖，非彼糖。 糖尿病的人不可以吃糖，但是可以吃石斛多糖。 石斛多糖属于活性多糖的一种。在国内，活性多糖的提法比较新，应用也很少。但在国外，特别是日本，普遍多了。活性多糖是功能性食品的一种，在保健范畴之内。 活性多糖的生理功能 （一）多糖的免疫调节功能 免疫调节作用是大多数活性多糖的共同作用，也是它们发挥其他生理和/或药理作用（抗肿瘤）的基础。活性多糖可通过多条途径、多个层面对免疫系统发挥调节作用。大量免疫实验证明，活性多糖不仅能激活T、B淋巴细胞、巨噬细胞和自然杀伤细胞(NK)等免疫细胞，还能活化补体，促进细胞因子的生成，对免疫系统发挥多方面的调节作用。 （二）抗肿瘤的功能 据文献报道，已有50个属178种的提取物都具有抑制S-180肉瘤及艾氏腹水瘤等细胞生长的生物学效应，明显促进肝脏蛋白质及核酸的合成及骨髓造血功能，促进体细胞免疫和体液免疫功能。 （三）活性多糖的抗突变作用

在细胞分裂时，由于遗传因素或非遗传因素的作用，会产生转基因突变。突变是癌变的前提，但并非所有突变都会导致癌变，只有那些导致癌细胞产生恶性行为的突变才会引起癌变，但可以肯定，抑制突变的发生有利于癌症的预防。多种活性多糖表现出较强的抗突变作用。（四）降血压、降血脂、降血糖的功能 冬虫夏草多糖对心律失常、房性早博有疗效；灵芝多糖对心血管系统具调节作用，可强心、降血压、降低胆固酵、降血糖等。试验结果表明，蜜环茵多糖(AMP)能使正常小鼠的糖耐量增强，能抑制四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖升高；研究也发现，蘑菇、香菇、金针菇、木耳、银耳和滑菇等13种食用茵的子实体具有降低胆固醇的作用，其中尤以金针菇为最强。腹腔给予虫草多糖，对正常小鼠、四氧嘧啶小鼠均有显著的降血糖作用，且呈现一定的量效关系。云芝多糖、灵芝多糖、猴头菇多糖等也具降血糖或降血脂等活性。活性多糖可降低血脂，预防动脉粥样硬化斑的形成。 （五）活性多糖对多种病毒，如艾滋病毒(HIV-1)、单纯泡疹病毒(HSVl，HSV-2)、巨细胞病毒(CMV)、流感病毒、囊状胃炎病毒(VSV)、劳斯肉瘤病毒(RSV)和反转录病毒等有抑制作用。香菇多糖对水泡性口炎病毒感染引起的小鼠脑炎有治疗作用，对阿拉伯耳氏病毒和十二型腺病毒有较强的抑制作用。 （六）活性多糖的抗氧化作用 已发现许多活性多糖具有清除自由基、提高抗氧化酶活性和抑制脂质过氧化的活性，起到保护生物膜和延缓衰老的作用。 （七）活性多糖的其它功能 除具有上述生理功能外，活性多糖还具有抗辐射、抗溃疡和抗衰老等功能。具有抗辐射作用的活性多糖有灵芝多糖、猴头多糖等。具有抗溃疡作用的活性多糖有猴头多糖、香菇多糖等。具有抗衰老作用的活性多糖有香菇多糖、铁皮石斛多糖、虫草多糖、灵芝多糖、云芝多糖和猴头菌多糖等。

简述抗氧化和延缓衰老的区别

简述抗氧化和延缓衰老的区别在卫生部原来批准的保健功能中没有“抗氧化”，只有“延缓衰老”，在颁布新标准后，很多人以为“抗氧化”就是“延缓衰老”，而实际上，“延缓衰老”只是“抗氧化”的主要作用之一。 由于化学制剂的大量使用、汽车尾气和工业生产废气的增加等，令环境污染日趋严重，自由基与日俱增;而人们每天处于电视屏幕、电脑屏幕、复印机、手机等现代化工具的大量辐射中，射线可加速细胞的氧化，使自由基在体内乱窜，加速老化。除此之外，吸烟、酗酒、运动过度、压力过大、食用过多的加工食品，过度摄取油脂等也会诱导过多自由基产生。这些骤然增加的自由基超过了生命所能正常保持平衡的标准，令人体应接不暇，皮肤可能出现皱纹、斑点等老化现象，而内脏器官与血管也会因过度氧化而产生老化与功能衰退，这是引起心脑血管疾病、高血压、糖尿病等退化性疾病的主要因素。 不要以为“抗氧化”就是“延缓衰老”，而实际上，“延缓衰老”只是“抗氧化”的主要作用之一。抗氧化物的定义为“任何以低浓度存在就能有效抑制自由基的氧化反应的物质”，其作用机理可以是直接作用在自由基，或是间接消耗容易生成自由基的物质，防止发生进一步反应。人体在不可避免地产生自由基的同时，也在自然产生着抵抗自由基的抗氧化物质，以抵消自由基对人体细胞的氧化攻击。研究证明，人体的抗氧化系统是一个可与免疫系统相比拟的、具有完

善和复杂的功能的系统，机体抗氧化的能力越强，就越健康，生命也越长。 我们都知道，人体每天都需要能量的补充，吃的食物在体内经消化代谢，氧化产生能量。在这一过程中会产生自由基，它对酶蛋白活性有破坏作用，进而加速细胞的衰老。 人体自身有抗氧化能力，这种能力来源于一种酶，这种酶可以对自由基进行分解， 医学界把它称没为人体的‘清道夫‘。但是，随着年龄的增长，人体内的酶活性下降，最后体内的抗氧化能力就无力清除那些不断积蓄下来的自由基。 清除自由基目前最好的方法就是用抗氧化及帮助人体提高抗氧化能力，通过提高人体抗氧化能力来降低体内自由基的积蓄。 目前，抗衰老医学，普遍使用抗氧化剂类药物，来提高人体抗氧化能力来减少体内自由基的积蓄。 自由基与衰老及治疗。自由基学说认为;人之所以会出现身体机能衰退，除要使体内积蓄的自由基过多。这不仅干扰了人体内其他正常细胞的代谢功能，自由基自身还能引发一系列的连锁反应。自由基是机体代谢过程中不断产生的毒性物质，并由于这种自由基的连锁反

几种市售枫斗的多糖含量测定

几种市售枫斗的多糖含量测定 .烈斗 浙江省医学科学琏1999年9月(邑弟39期 , 多 .j 几种市售枫斗的多糖含 药帕研究所(3l0013)兰李亚芳 中药枫斗是以石斛属多种植物的茎经过 特殊加工制成的干燥品,亦称耳环石斛.传统 认为质重,嚼之粘牙,无渣者为优,老药工凭 此来判断枫斗的优劣,但无内在的质量评价 标准.近年来,石斛多糖的研究引起人们的重 视,并证明石斛多糖是评价枫斗的重要生理 活性物质之一ll.J.我们于l997年2月～ l999年6月采用苯酚一硫酸比色法,测定r 几种市售枫斗的多糖含量. 一 ,材料与方法 ∈一)材料: 1.样品:铁皮枫斗1(福建),铁皮枫斗2 (福建),枫斗1(云南),枫斗2(云南),小环叉 直条枫斗(云南),野生枫斗(云南),野生紫皮 扭斗(云南),儿洲牌铁皮枫斗(广西): 2仪器:7230型分光光度计(上海分析 仪器厂)

3试剂:苯酚试剂:苯酚(分析纯)l0 加水l50g混匀,溶解即得,置淙色瓶内,冰箱'巾备用;其它试剂(无水乙醇,硫酸等)均为国产分析纯 (二)方法: 多糖的提取与含量测定,参照文献方法i 二,结果 (一)葡萄糖标准液吸光度测定结果:标 准品浓度在495,9.90,1485,1980,2475 297O,3465,396O时,吸光度分别为o069, O135,0203,0287,0366,0428,0500 0.587,以吸光度A为纵坐标,浓度c为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程: A=一0010536+0.Ol4923C.r= 25 量测定 z,7/ 丁委静张治国户.f 09994 (二)换算因素 塑重量—— 多糖液葡萄糖浓度(g/m])×多糖稀释因素结果:f为1504. (三)几种市售枫斗多糖含量见表1. 表1几种枫斗的多糖含量 三,讨论 ()结果表明,不同种石斛加工成的枫 斗.多糖含差别很大,已测的几个样品中多糖含最高低相差约4倍

石斛的多糖提取及其多酚物质的抗氧化性研究

目录 1、综述 (2) 1.1 铁皮石斛简介 (2) 1.2 铁皮石斛国内外研究的进展 (3) 1.3 铁皮石斛的育种与繁殖 (4) 1.4 本文研究的意义 (5) 2、铁皮石斛的水分测定及其多糖的提取 (5) 2.1水分的测定 (5) 2.2多糖的提取 (6) 3、铁皮石斛乙酸乙酯萃取多酚物质抗氧化性的研究 (6) 3．1 铁皮石斛乙酸乙酯萃取母液及浓度梯度的配制 (6) 3.2 实验测定原理及方法 (8) 3.2.1 铁皮石斛乙酸乙酯萃取物清除DPPH自由基的测定 (8) 3.2.2 铁皮石斛乙酸乙酯萃取物清除羟基自由基（.OH）的测定 (8) -）的测定 3.2.3 铁皮石斛乙酸乙酯萃取物清除超氧阴离子自由基（·O 2 (9) 3.2.4 铁皮石斛乙酸乙酯萃取物还原能力的测定 (10) 4、结果与讨论 (10) 4.1 对DPPH自由基的清除能力 (10) 4.2 对羟基自由基（.OH）的清除能力 (11) -）的清除能力 (12) 4.3 对超氧阴离子自由基（·O 2 4.3 还原能力的测定 (13) 5、结论 (13) 参考文献： (14)

铁皮石斛的多糖提取及其多酚物质的抗氧化性研究 专业：环境科学学号：200911201066 姓名：许永佳指导老师：苏小建 内容摘要：石斛多达五十余种，是市场上常见的名贵中草药和保健品。研究表明，植物的多糖及多酚含量很大程度决定了它的功效。本次实验，我们主要用铁皮石斛为主原料，选取水提醇沉法来提取它的多糖并测其含量。然后用极性较大的乙酸乙酯来萃取获得多酚物质，通过其对DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除作用以及其还原能力的测定，探讨铁皮石斛多酚物质的抗氧化活性，并与人工合成抗氧化剂BHT对自由基清除能力及还原能力进行比较。实验结果表明：石斛的多糖含量为4.73%，它的多酚物质具有很强的抗氧化性，优于合成物BHT。 关键词：铁皮石斛；多糖；抗氧化性；自由基； BHT 1、综述 1.1 铁皮石斛简介 铁皮石斛[D-officinale]，俗称吊兰,是兰科石斛属植物。茎，直立，圆柱形，节间披有白色的膜质鞘；叶，纸质，长圆状披针形，尖端钝并钩转，基部有抱茎的鞘；花，白色，生于老茎上部节间，唇瓣菱形，喉部有一紫红色的斑块。铁皮石斛为名贵草药，药名为黑节草，拥有滋阴润肺、养胃生津、明目清热、增强免疫力、医治失音沙哑、抗衰老等功效。野生铁皮石斛生于海拔100——3000米之间的山地半阴湿岩石、树皮上，喜温暖湿润气候和半阴湿的环境，不耐寒。铁皮石斛的鲜茎可直接食用，可炖汤，可泡茶，可浸酒[1]，通常加工成制成药品或饮料，如铁皮枫斗、铁皮石斛功能性饮料等。近年来以其为原料生产的高级保健品远销欧美和东南亚沿海发达地区。 早在1400多年前的《神农本草经》和400多年前的《本草纲目》等古典中药书籍中，就将铁皮石斛列为药材中的上品。《道藏》则称：“铁皮石斛、天山雪莲、三两人参、百二十年首乌、花甲之茯苓、肉苁蓉、深山灵芝、海底珍珠、冬虫夏草为九大仙草”。由于铁皮石斛的生长环境特殊及其自身繁殖慢等原因，野生铁皮石斛资源稀缺。目前铁皮石斛主要生长于在中国安徽西南部（大别山）、浙江东部（鄞县、天台、仙居）、福建西部（宁化）、广西西北部（天峨）、四川、云南东南部（石屏、文山、麻栗坡、西畴）。

几种抗氧化酶的作用

一.超氧化物歧化酶(SOD): 超氧化物歧化酶，是一种新型酶制剂，是生物体重要的抗氧化酶，广泛分布于各种生物体，如动物，植物，微生物等。SOD具有特殊的生理活性，是生物体清除自由基的首要物质。SOD在生物体的水平高低意味着衰老与死亡的直观指标；现已证实，由氧自由基引发的疾病多达60多种。它可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞。由于现代生活压力，环境污染，各种辐射和超量运动都会造成氧自由基大量形成；因此，生物抗氧化机制中SOD 的地位越来越重要！ 超氧化物歧化酶(SOD)按其所含金属辅基不同可分为三种，第一种是含铜（Cu）锌（Zn）金属辅基的称（Cu.Zn—SOD），最为常见的一种酶，呈绿色，主要存在于机体细胞浆中；第二种是含锰（Mn）金属辅基的称（Mn—SOD），呈紫色，存在于真核细胞的线粒体和原核细胞；第三种是含铁（Fe）金属辅基的称（Fe—SOD），呈黄褐色，存在于原核细胞中。 SOD是一种含有金属元素的活性蛋白酶。超氧化物岐化酶（SOD）能催化如下的反应：O2-+H+→H2O2+O2，O2-称为超氧阴离子自由基，是生物体多种生理反应中自然生成的中间产物。它是活性氧的一种，具有极强的氧化能力，是生物氧毒害的重要因素之一。SOD 是机体天然存在的超氧自由基清除因子，它通过上述反应可以把有害的超氧自由基转化为过氧化氢。尽管过氧化氢仍是对机体有害的活性氧，但体的过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶（POD）会立即将其分解

为完全无害的水。这样，三种酶便组成了一个完整的防氧化链条。 目前，人们认为自由基（也称游离基）与绝大部分疾病以及人体的衰老有关。所谓的自由基就是当机体进行代时，能夺去氧的一个电子，这样这个氧原子就变成自由基。自由基很不稳定，它要在身体组织细胞的分子中再夺取电子来使自己配对，当细胞分子推出新一个电子后，它也变成自由基，又要去抢夺细胞膜或细胞核分子中的电子，这样又称会产生新的自由基。如，超氧化物阴离子自由基、羟自由基、氢自由基和甲基自由基，等等。在细胞由于自由基非常活泼，化学反应性极强，参与一系列的连锁反应，能引起细胞生物膜上的脂质过氧化，破坏了膜的结构和功能。它能引起蛋白质变性和交联，使体的许多酶及激素失去生物活性，机体的免疫能力、神经反射能力、运动能力等系统活力降低，同时还能破坏核酸结构和导致整个机体代失常等，最终使机体发生病变。因此，自由基作为人体垃圾，能够促使某些疾病的发生和机体的衰老。虽然自由基会对机体产生诸多危害，但是在一般的条件下人体细胞也存在着清除自由基、抑制自由基反应的体系，它们有的属于抗氧化酶类，有的属于抗氧化剂。像SOD就是一种主要的抗氧化酶，能清除超氧化物自由基，在防御氧的毒性、抑制老年疾病以及预防衰老等方面起着重要作用。 SOD能专一地清除体有害的自由基，以解除自由基氧化体的某些组成成分而造成的机体损害。如氧中毒、急性炎症、水肿、自身免疫性疾病、辐射病等疾病都与活性氧的毒性有关。实验证明，SOD 能够清除自由基，因此可消除上述疾病的病因。此解毒反应过程是两

抗氧化功能评价方法

附件1： 抗氧化功能评价方法 试验项目、试验原则及结果判定 Items, Principles and Result Assessment 1 试验项目 1.1 动物实验 1.1.1 体重 1.1.2 脂质氧化产物：丙二醛或血清8-表氢氧异前列腺素（8-Isoprostane） 1.1.3 蛋白质氧化产物：蛋白质羰基 1.1.4 抗氧化酶：超氧化物歧化酶或谷胱甘肽过氧化物酶 1.1.5 抗氧化物质：还原性谷胱甘肽 1.2 人体试食试验 1.2.1 脂质氧化产物：丙二醛或血清8-表氢氧异前列腺素（8-Isoprostane） 1.2.2 超氧化物歧化酶 1.2.3 谷胱甘肽过氧化物酶 2 试验原则 2.1 动物实验和人体试食试验所列的指标均为必测项目。 2.2 脂质氧化产物指标中丙二醛和血清8-表氢氧异前列腺素任选其一进行指标测定，动物实验抗氧化酶指标中超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶任选其一进行指标测定。 2.3 氧化损伤模型动物和老龄动物任选其一进行生化指标测定。 2.4 在进行人体试食试验时，应对受试样品的食用安全性作进一步的观察。 3 结果判定 3.1 动物实验：脂质氧化产物、蛋白质氧化产物、抗氧化酶、抗氧化物质四项指标中三项阳性，可判定该受试样品抗氧化功能动物实验结果阳性。 3.2 人体试食试验：脂质氧化产物、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶三项指标中二项阳性，且对机体健康无影响，可判定该受试样品具有抗氧化功能的作用。

抗氧化功能检验方法 Method for the Assessment of Antioxidative Function 1 动物实验 1.1 实验动物 选用10月龄以上老龄大鼠或8月龄以上老龄小鼠，也可用氧化损伤模型鼠。单一性别，小鼠每组10－15只，大鼠8－12只。 1.2 剂量分组及受试样品给予时间 实验设三个剂量组和一个溶剂对照组，以人体推荐量的10倍（小鼠）或5倍（大鼠）为其中的一个剂量组，另设两个剂量组，高剂量一般不超过30倍，必要时设阳性对照组、空白对照组。受试样品给予时间30天，必要时可延长至45天。 1.3 实验方法 1.3.1 老龄动物 选用10月龄以上大鼠或8月龄以上小鼠，按血中MDA水平分组，随机分为1个溶剂对照组和3个受试样品剂量组。3个剂量组给予不同浓度受试样品，对照组给予同体积溶剂，实验结束时处死动物测脂质氧化产物含量、蛋白质羰基含量、还原性谷胱甘肽含量、抗氧化酶活力。 1.3.2 D－半乳糖氧化损伤模型 1.3. 2.1原理 D-半乳糖供给过量，超常产生活性氧，打破了受控于遗传模式的活性氧产生与消除的平衡状态，引起过氧化效应。 1.3. 2.2造模方法 选25-30g健康成年小鼠，除空白对照组外，其余动物用D-半乳糖40mg－1.2g/kg BW 颈背部皮下注射或腹腔注射造模，注射量为0.1mL/10g，每日1次，连续造模6周，取血测MDA，按MDA水平分组。随机分为1个模型对照组和3个受试样品剂量组，3个剂量组经口给予不同浓度受试样品，模型对照组给予同体积溶剂，在给受试样品的同时，模型对照组和各剂量组继续给予相同剂量D-半乳糖颈背部皮下或腹腔注射，实验结束处死动物测脂质氧化产物含量、蛋白质羰基含量、还原性谷胱甘肽含量、抗氧化酶活力。 1.3.3 乙醇氧化损伤模型 1.3.3.1原理

齿瓣石斛多糖含量测定比较

齿瓣石斛多糖含量测定比较 石斛是中国名贵中药材，多糖是石斛的主要有效成分之一。本文测定了不同产地，种植方式以及不同部位的齿瓣石斛多糖含量，对齿瓣石斛栽培应用有重要意义。 标签：齿瓣石斛多糖；含量测定；比较 石斛属（Dendrobium）是兰科第二大属，全球约有1500种，主要集中分布在我国华南和西南地区[1]。石斛为我国名贵中药，具有滋阴清热、益胃生津等功效。齿瓣石斛化学成分类型多样，其中糖类也是重要化学成分，广西的加工品一级枫斗含量高达45.89%[2]。本文对不同齿瓣石斛多糖含量进行测定比较。 1仪器和试药 1.1仪器UV-2450紫外分光光度计（日本岛津）；电子天平；分析天平（FA200413）。 1.2试药对照品：D-无水葡萄糖（中国食品药品检定研究院，批号：110833-201205）。 1.3试剂双蒸水：自制；无水乙醇，95%乙醇，苯酚。 1.4药材见表1。 2实验方法 2.1紫外可见分光光度法测定石斛多糖含量[3]。 2.1.1对照品溶液的配置取D-无水葡萄糖对照品适量，精密称定，加水制成每1 ml含94.66ug的溶液，即得。 2.1.2供试品溶液的制备取石斛鲜品茎约60 g，精密称定，置于九阳豆浆机中，选择五谷模式榨汁，加水定容至1000ml，混匀，离心（转速为4000转/min）20min，上清液稀释8倍，精密量取2ml置10ml塑料离心管中，精密加入无水乙醇10ml，摇匀，冷藏1 h，离心，弃上清，加80%乙醇洗涤2次，每次8ml，离心，弃上清，沉淀用热水溶解，转移至25ml容量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀，即得。 2.1.3标准曲线的绘制精密量取对照品溶液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分别置10 mL具塞棕色试管中，加水补至1.0 ml，加5%苯酚溶液（临用时配）1.0 ml，摇匀，迅速加入浓硫酸5.0mL，置沸水浴加热20min，取出，立即置冰水浴中冷却5 min后取出，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法在488nm

抗氧化剂抗氧化活性的测定方法

1.抗氧化剂是指在低浓度下能有效延缓或阻止底物氧化的物质。被氧化的底物包括蛋白质、脂质、糖和DNA。 2.初始型抗氧化剂(AH)可通过与脂质自由基L.、过氧自由基LOO.或烷氧自由基LO.反应抑制脂质氧化链反应。 L.+ AH--- LH + A. LOO.+ AH--- LOOH + A. LO.+ AH--- LOH + A. 抗氧化剂自由基A.也能与过氧自由基、烷氧自由基反应从而终止脂质氧化反应。 LOO.+ A.---LOOA LO.+ A.---LOA 次级型抗氧化剂可通过各种机理延缓脂质氧化,如螯合过渡金属、给初始型抗氧化剂补充氢、清除氧以及使活性物质失活等。 抗氧化剂的活性分为在生物体外(如食品中)的活性和在生物体内的活性。本文综述了体外测定抗氧化剂抗氧化活性的方法,不包括在生物体中测定生物活性的方法。 3.评价或表征抗氧化活性的方法为了说明在特定条件下被测物抑制底物氧化的效力或清除自由基的能力 实际测定时至少要说明在测试条件下被测物是抗氧化剂还是促氧化剂;在指定浓度下比较不同测试材料(如被测物与标准抗氧化剂或添加有被测物的测试体系与空白体系)对底物的作用。 评价或表征抗氧化活性的方法有: (1)在指定的时间测量氧化产物或官能团的浓度或吸光度值;( 2)测量反应的速率;

( 3)测量诱导期(延滞期)或氧化达到一定程度所需的时间;( 4)测量速度的积分(即动力学曲线下的面积) ; ( 5)测量被测物产生与标准抗氧化剂相当作用的浓度。4.参数 4.1诱导期( induction period) 诱导期tIND(也叫延滞期, lag period)常定义为化学反应的速度。诱导期是一个相当不确定的值,受检测方法、使用仪器的灵敏性以及一些其他因素的影响。对于脂质氧化,诱导期通常是指链增长阶段动力学曲线的切线和时间轴的交点。 4.2抑制率( percentag e of inhibition)和IC50 抑制率和IC50 (抗氧化剂提供50%抑制作用时的浓度,也可用EC50表示的)常用来表征抗氧化能力。它们不仅与被测抗氧化剂的反应性能和氧化的底物有关,而且受其他因素的影响,如脂质氧化链反应的长度和抑制速率等。此外,用IC50表征抗氧化剂 的活性与比较活性的时间点有关。只有在其他参数相同的情况下,在某一研究中测得的抑制率和IC50才可以与另一研究中测得的值进行直接比较。TEC50是指抗氧化剂提供50%抑制作用所需的时间,也常用来表征抗氧化活性 5.对测定方法的要求 测定抗氧化剂抗氧化活性的方法应满足如下要 求: ( 1)能说明测试体系中发生的反应,并能用明确的动力学图解描述;( 2)测试要有再现性; ( 3)测试效率要足够高; ( 4)方法要相对简单; ( 5)能连续检测; ( 6)应使用与体内或食品有关的活性自由基;

蔬菜病虫害常见

蔬菜主要病虫害种类及适用农药品种 一、病虫种类： 1、苗期病害发生作物：叶菜类、瓜类、茄果类苗期。合用农药：恶习霉灵、甲基立枯磷、苗菌净、多氧霉素、甲霜灵锰锌。 2、霜霉病类发生作物：瓜类、葱类、叶菜类。合用农药：甲霜灵锰锌、百菌清、氰霜唑、杀毒矾、克露、氟吗锰锌、疫霜灵。 3、疫病类型发生作物：瓜类、葱类、叶菜类。合用农药：甲霜灵锰锌、百菌清、氰霜唑、杀毒矾、克露、氟吗锰锌、疫霜灵。 4、早疫病类发生作物：辣椒、黄瓜、葱、芋等。合用农药：代森锰锌、可杀得、百菌清、甲霜灵锰锌、杀毒矾、异菌。 5、晚疫病类发生作物：番茄、马铃薯。合用农药：甲霜灵锰锌、氟吗锰锌、氰霜唑、金雷多米尔、克露、蓝保、可杀得。 6、炭疽病类发生作物：甜椒、白菜、黄瓜、菜豆。合用农药：炭特灵、施保功、农抗120、年夜生、绿亨一号、多福、多氧霉素。 7、白粉病、锈病类发生作物：瓜、豆、葱类。合用农药：晴菌唑、烯唑醇、三唑酮、百菌清、武夷霉素、农抗120、多氧霉素。 8、黑斑病类发生作物：白菜、甘蓝、花椰菜、萝等。合用农药：百菌清、杀毒矾、代森锰锌、农抗120。 9、根腐病类发生作物：瓜类、茄果类。合用农药：根腐灵、多菌灵、双效灵、壮生、百菌通、多氧霉素。 10、枯萎病类发生作物：番茄、菜豆、瓜类等。合用农药：杀菌王、甲基硫菌灵、根病净、绿亨二号、克菌、多氧霉素。 11、细菌性叶斑类发生作物：黄瓜、菜豆、甜椒、菜豆。合用农药：杀菌王、龙克菌、克菌康、硫酸、链霉素、新植霉素、波尔多液。 12、细菌性青枯、软腐、黑腐、黑斑病类发生作物：茄果类、十字花科。合用农药：杀菌王、龙克菌、克菌康、硫酸、链霉素、新植霉素、波尔多液。 13、病毒类发生作物：各类蔬菜。合用农药：病毒A、菌毒清、菌毒必克、素灭星植病灵、毒畏、镇毒。 14、小菜蛾、菜青虫等害虫发生作物：十字花科蔬菜。合用农药：菜喜、

几种生物活性物质体外抗氧化能力评价技术的研究解读

第38卷第3期2802009年5月 卫生研究 JO U R N A L O F H Y G I E N E R ES EA R C H V01.38N o.3 M ay2009 文章编号:1000-8020(200903.02∞.04 几种生物活性物质体外抗氧化能力评价技术的研究 刘小兵朴建华1田园 中国疾病预防控制中心营养与食品安全所,北京100050 论著 摘要:目的研究生物活性物质体外抗氧化能力评价方法,应用体外理化环境下建立起来的评价方法对受试物进行初步抗氧化能力评估。方法联合应用2,2’.连氮.双.(3.乙基苯并噻唑.6.磺酸二铵盐(AB T S 法与铁离子还原/抗氧化能力测定法(r aA P法用于生物活性物质体外抗氧化能力研究。在A B T S法中。使用 紫外可见分光光度计734nm波长下测定以槲皮素、姜黄素、D L-a.生育酚和原花青素等为代表的生物活性物 质;在FR A P法中,运用酶标仪,595nm波长处测定同样受试物的抗氧化能力。结果A B TS法:槲皮素和姜黄 素的抗氧化活性T E A C值分别约为2.02和0.50;而l g D L-a.生育酚、原花青素清除自由基的能力相当于

2.06m m ol、2.897m m ol的Trol ox清除自由基的能力;F RA P法:抗氧化活性以1.O m m ol/L FeS04为参考标准,槲皮 素、姜黄素和Tr ol ox摩尔当量约为5.73、1.18和2.09;而D L-a.生育酚和原花青素抗氧化活性分别是207.7m g、 156.36r ag。结论A B TS法与FR A P法联合应用,操作简便、结果可靠,尤其适宜作为生物活性物质体外抗氧 化能力的评价方法。 关键词:生物活性物质氧化应激中图分类号:R151.2Q591A B T S法FR A P法抗氧化能力 文献标识码:A R ese a r ch on t he eval uat i on m et hods f or ant i oxi dant capaci t y of s ever al bi oact i ve s ubs t ances/n vi t r o LI U X i aobi ng,P I A O Ji anhua,TI A N Y ua n I nst i t ut e of N u t r i ti on a nd F oo d Saf et y,C hi nes e C ent er f or D i seas e C ont r ol a nd Pr event i on,B eij i ng100050,C h i na A bst r act:O bj ect t ve T o s t udy t he eval u at i on m e t h ods f or ant ioxi dant capaci t y of bioacti ve s ubs t B nce i n础阳,an d t O appl y t he m e t h ods w h i ch i s es t abl i s hed i n physi eochem i ea l envi r onm ent i n or der t o g i v e t he pr eli m i nar y as se韶,m ent of t e st subj e ct s.M et hods7r he co m bi ne d appli cat i on of A B T S and F R A P m e t h ods i n t he as s es s m ent https://www.360docs.net/doc/be13510506.html, i ng t he U V—V I S

石斛总多糖提取工艺及测定方法研究

石斛总多糖提取工艺及测定方法研究 发表时间：2018-11-23T14:12:36.320Z 来源：《医药前沿》2018年27期作者：许磊 [导读] 确定石斛总多糖的最佳提取工艺及含量测定方法。方法：通过正交实验，采用苯酚-硫酸法测定的多糖含量为指标 许磊 （天津民祥生物医药股份有限公司天津 300000） 【摘要】目的：确定石斛总多糖的最佳提取工艺及含量测定方法。方法：通过正交实验，采用苯酚-硫酸法测定的多糖含量为指标，研究提取温度、提取次数、提取时间、料液比对石斛总多糖提取率的影响。结果：石斛总多糖最佳提取工艺条件为提取温度为100℃、提取时间为2h、料液比为5:4。结论：该工艺简单、方便、快捷，可用于不同品种石斛总多糖的提取。 【关键词】石斛；总多糖；单因素；正交试验；含量测定 【中图分类号】R284.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）27-0368-02 石斛为兰科植物马鞭石斛、铁皮石斛、环草石斛、黄草石斛的新鲜或干燥茎，被称为“九大仙草”之首，为珍稀、名贵、道地中草药，当下多以其总多糖含量的高低来判断石斛品质的优劣。本研究以总多糖含量为指标，通过正交实验，优化并最终确定了石斛总多糖的最佳提取工艺，以期为石斛总多糖的提取工艺研究提供参考和借鉴。 1.材料与试剂 石斛采自安徽省霍山县，无水葡糖糖、苯酚、硫酸等化学试剂均为分析级，实验用水均为Milli-Q超纯水机制备（密理博（上海）贸易有限公司）。紫外分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）；LC-4016型低速离心机（安徽中科中佳科学仪器有限公司）；十万分之一天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）；超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；双层铁皮电炉（上海日用电炉厂）。 2.方法与结果 2.1 石斛中总多糖含量的测定 2.1.1对照品溶液的制备 取无水葡萄糖对照品适量，精密称定，于100mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，制成每1mL含90μg/mL的溶液，即得对照品储备液。 2.1.2供试品溶液的制备 取石斛粉末（过三号筛）约0.12g，精密称定，加水80mL，加热回流2小时，放冷，转移至100mL量瓶中，用少量水分次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2mL，置15mL离心管中，精密加入无水乙醇10mL，摇匀，冷藏1h，取出，离心（转速为每分钟4000转）20min，弃去上清液（必要时滤过），沉淀加80%乙醇洗涤2次，每次8mL，离心，弃去上清液，沉淀加热水溶解，转移至25mL量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀，即得。 2.1.3总多糖含量的测定 精密量取供试品溶液1mL，置10mL具塞试管中，精密加入5% 苯酚溶液 1mL，摇匀，再精密加硫酸5mL，摇匀，置沸水浴中加热20分钟，取出，置冰浴中冷却5分钟，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（2015药典通则0401），在488nm的波长处测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中无水葡萄糖的量，计算，即得。 总多糖提取率=总多糖质量/原药材的干品重量×100%。 2.1.4标准曲线的制备 精密量取对照品溶液0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL，分别置10mL具塞试管中，各加水补至1.0mL，振摇，精密加入5%苯酚溶液l.0mL（现配现用，注意避光），摇匀，再精密加硫酸5mL，摇匀，置沸水浴中加热20分钟，取出，置冰水浴中冷却5分钟，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（2015药典通则0401），在488nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。在9.016～90.160 μg/mL范围内线性良好（y=0.00881x+0.11252，R2=0.99904）。 2.1.5精密度实验 按标准曲线确定的范围内，精密吸取葡萄糖对照品溶液6份，各1mL，按照2.1.3项下操作测定吸光度，计算RSD=2.4%，精密度良好，符合方法学要求。 2.1.6稳定性实验 在标准曲线确定的范围内，精密吸取2.1.2项下制备的供试品1mL，分别于0h，2h，4h，6h按照2.1.3项下操作测定吸光度，计算其RSD=0.88%，稳定性良好，符合方法学要求。 2.1.7重复性实验 在标准曲线确定的范围内，精密量取2.1.2项下制备的供试品1mL，按照2.1.3项下操作测定吸光度，连续测定6次，计算RSD=3.2%，重复性良好，符合方法学要求。 2.1.8加样回收率实验 取已知含量的石斛粉末100mg，精密称定，共六份，分别加入适量的对照品溶液，按照2.1.3项下操作测定吸光度，计算提取回收率，RSD=3.4%，加样回收率合格，符合方法学要求。 2.2 石斛总多糖提取工艺考察 以提取温度、提取时间、料液比、提取次数为因素，选用L9（34）正交表进行正交实验（表1）。进而得到石斛总多糖加热回流提取的最优条件。石斛总多糖最佳提取条件正交实验表见表2。

抗氧化体内的评价方法

抗氧化体内的评价方法 张丽楠 天津科技大学生物工程学院，天津300457 摘要：抗氧化是抵抗集体氧化作用的过程，目前准确评价生物活性物质的抗氧化能力已经成了氧化与抗氧化研究领域的热点问题，为了更好地评价样品的抗氧化性，常用的评价方法分为体内和体外评价方法，本文主要介绍几种体内的评价方法。 关键词：抗氧化性；体内测定方法 Evaluation of the antioxidant in the body Zhanglinan Biological Engineering, Tianjin University of Science and Technology,Tianjin 300457 Abstract:Anti-oxidation is the process of collective resistance to oxidation, antioxidant capacity currently accurate evaluation of bioactive substances have become oxidized and antioxidant research in the field of hot issues, in order to better evaluate the antioxidant activity of the sample, the commonly used evaluation methods into in vivo and in vitro evaluation methods, this paper describes several methods evaluated in vivo. Key words:antioxidant activity:Determination of in vivo methods 抗氧化是抵抗集体氧化作用的过程，也是任何以低浓度存在就能有效抑制自由基的氧化反应的物质，其作用机理可以是直接作用在自由基，或是间接消耗掉容易生成自由基的物质，防止发生进一步反应。越来越多的研究显示抗氧化是预防衰老的重要步骤，因为自由基或氧化剂会将细胞和组织分解，影响代谢功能。因此，当生物体内产生了大量的自由基，平衡被破坏时，生物体就会生病，这样需氧生物在不断进化过程中，逐渐形成了一套完整的抗氧化系统。 基于不同原理的各种抗氧化活性检测方法已广泛用于抗氧化活性物质，这些方法虽然能够在不同的条件下反映抗氧化活性物质的多种功能特性，但也各有其局限性，目前常用的抗氧化活性检测方法主要基于以下机理：（1）样品对检测体系中脂类物质的氧化抑制能力反映被测物的抗氧化活性；（2）样品对检测体系中自由基的清除能力反映被测物的抗氧化活性；（3）测定样品的还原能力反映被测物的抗氧化活性。[1] 很据以上机理，抗氧化活性物质的检测方法分为体内评价方法和体外评价方法，本文针对当前该领域的发出状况，在总结前人的科研成果的基础上，简单的介绍几种体内评价方法。 1体内抗氧化防御系统 需氧生物在不断进化过程中，逐渐形成了一套完整的抗氧化系统，包括预防性的、阻断性的和修复性的，也即一级和二级抗氧化防御系统；分别在不同水平发挥着防御作用。一级抗氧化防御系统也称为初级抗氧化防御系统，分为抗氧化酶和非酶性抗氧化剂。能够是自由基失效的化学物质称为“抗氧化剂或抗氧化酶”。抗氧化剂或抗氧化酶是清除氧自由基或阻止、抑制氧自由基产生过氧化物的物质。抗氧化酶系统包括超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽转硫酶、髓过氧化物酶、细胞色素C过氧化物抗坏血酸过氧化物酶等。抗氧化非酶系统，也即抗氧化剂，包括两大类，一类是人体必需的抗氧化剂，包括维生素E、维生素C、类胡萝卜素、锌、硒、半胱氨酸、蛋氨酸、色氨酸、组氨酸、铜蓝蛋白、转铁蛋白、乳铁蛋白等；另一类是人类非必需的抗氧化剂，如生物类黄酮、花色素、番茄红素和叶黄素等。 脂质、蛋白质和核酸是氧自由基攻击的主要靶点。在正常情况下，虽然初级抗氧化防御系统通过各种抗氧化剂和抗氧化酶能有效地防止活性氧对靶