MDA测定方法

丙二醛(MDA)的测定方法

一、实验原理

植物在逆境下遭受伤害（或衰老）与活性氧积累诱发的膜脂过氧化作用密切相关，膜脂过氧化的产物有丙二醛、二烯轭合物、乙烷等。其中丙二醛（MDA：Malondialdehyde）是膜脂过氧化最重要的产物之一，因此可以通过检测MDA了解膜脂过氧化程度，以间接测定膜脂受损程度以及植物的抗逆性。

丙二醛在高温条件下，可以与硫代巴比妥酸（TBA）反应生成红棕色的三甲川（3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮），该物质在532nm处有一吸收高峰，并且在660nm处有较小光吸收。根据其532nm处的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。醛、可溶性糖对此反应有干扰，在450nm处有以吸收峰，可用双组分分光光度法加以排除。二、仪器设备

紫外可见分光光度计；

离心机；

电子天平；

研钵；

恒温水浴锅；

试管；

剪刀。

三、主要试剂

1、10%三氯乙酸（TCA）

2、0.5%硫代巴比妥酸（用10％的三氯乙酸溶解）；

3、石英砂。

四、实验材料

正常生长以及受逆境胁迫的小麦叶片

五、实验步骤

1. 取小麦不同部位的叶片3~5片，洗净擦干，剪成0.5 cm长的小段，混匀。

2. 称取叶片切断0.3 g，放入冰浴的研钵中，加入2 ml 10％TCA 和少量石英砂，研磨至匀浆，

4. 然后在 4℃，12, 000 g 离心 15 min，取上清。

5. 吸取离心的上清液1.5 ml（对照加1.5 ml 10％ TCA），加同

体积 0.5% TBA溶液，混匀物于沸水浴上反应30 min，迅速冷却后

再离心。

6. 取上清液测定532nm、450nm和600nm波长下的消光度。

六、计算含量

根据植物组织的重量计算测定样品中MDA的含量：

MDA浓度(μmol L-1) = 6.45*(OD535-OD600)-0.56*OD450

MDA含量(μmol/g FW）= (MDA浓度(umol/L)*提取液体积(ml)) / 植物组织鲜重(g)

七、注意事项

1. MDA-TBA显色反应的加热时间，最好控制沸水浴15-30 min之内。

时间太短或太长均会引起532 nm下的光吸收值下降。

2. 如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间，最好使用低温离心机

离心。

3. 可溶性糖与TBA显色反应的产物在532 nm也有吸收(最大吸收在

450 nm)，当植物处于干旱，高温，低温等逆境时可溶性糖含量会增高，必要时要排除可溶性糖的干扰。

植物生理学实验课程

《植物生理学实验》课程大纲一、课程概述课程名称（中文）：植物生理学实验（英文）：Plant Physiology Experiments 课程编号：18241054 课程学分：0.8 课程总学时：24 课程性质：专业基础课前修课程：植物学、生物化学、植物生理学二、课程内容简介植物生理学是农林院校各相关专业的重要学科基础课，是学习相关后续课程的必要前提，也是进行农业科学研究和指导农业生产的重要手段和依据。本实验课程紧密结合理论课学习内容，加深学生对理论知识的理解。掌握植物生理学的实验技术、基本原理以及研究过程对了解植物生理学的基本理论是非常重要的。本大纲体现了植物生理学最实用的技术方法。实验内容上和农业生产实践相结合，加强学生服务三农的能力。实验手段和方法上，注重传统、经典技术理论与现代新兴技术的结合，提高学生对新技术、新知识的理解和应用能力。三、实验目标与要求植物生理学实验的基本目标旨在培养各专业、各层次学生有关植物生理学方面的基本研究方法和技能，包括基本操作技能的训练、独立工作能力的培养、实事求是的科学工作态度和严谨的工作作风的建立。开设植物生理学实验课程，不仅可以使学生加深对植物生理学基本原理、基础知识的理解，而且对培养学生分析问题、解决问题的能力和严谨的科学态度以及提高科研能力等都具有十分重要的作用。要求学生实验前必须预习实验指导和有关理论，明确实验目的、原理、预期结果，操作关键步骤及注意事项；实验时要严肃认真专心操作，注意观察实验过程中出现的现象和结果；及时将实验结果如实记录下来；实验结束后，根据实验结果进行科学分析，完成实验报告。四、学时分配植物生理学实验课学时分配实验项目名称学时实验类别备注植物组织水势的测定3学时验证性叶绿体色素的提取及定量测定3学时验证性植物的溶液培养及缺素症状观察3学时验证性植物呼吸强度的测定3学时设计性红外CO2分析仪法测定植物呼吸速率3学时设计性选修植物生长物质生理效应的测定3学时验证性植物种子生活力的快速测定3学时验证性

植物生理生化测定

2.1.8转基因植株在盐胁迫下的超氧化物歧化酶(SOD)活性测定将转基因植株与非转基因对照植株继代于含有0.5% NaCl的MS固体培养上进行胁迫培养，培养条件为27±1℃，每天13 h、3000 lux光照。胁迫培养4 w后，取其叶片测定其SOD 活性，每个样品设3次重复，求其平均数，并进行多重比较。 2.1.8.1主要试剂及配方（1）0.1 mol/l pH 7.8磷酸钠（Na2HPO4-NaH2PO4）缓冲液 A液（0.1 mol/l Na2HPO4溶液）：称取Na2HPO4·12H2O 7.163 g，用少量蒸馏水溶解后定容至200 ml，4℃冰箱中保存备用； B液（0.1 mol/l NaH2PO4溶液）：称取NaH2PO4·2H2O 0.780 g，用少量蒸馏水溶解后定容至50 ml，4℃冰箱中保存备用；取上述A液183 ml与B液17ml充分混匀后即为0.1 mol/l pH 7.8的磷酸钠缓冲液，4℃冰箱中保存备用。（2）0.026 mol/l甲硫氨酸（Met）磷酸钠缓冲液称取甲硫氨酸（C5H11NO2S）0.388 g，用少量0.1 mol/l pH 7.8的磷酸钠缓冲液溶解后，再用相同磷酸钠缓冲液定容至100 ml，现用现配，4℃冰箱中保存可用1～2 d。（3）7.5 × 10-4 mol/l NBT溶液称取NBT（C40H30Cl2N10O6）0.153 g，用少量蒸馏水溶解后，定容至250 ml，现用现配，4℃冰箱中保存可用2～3 d。（4）含1.0 μmol/l EDTA的20 μmol/l核黄素溶液 A液：称取EDTA 0.003 g，用少量蒸馏水溶解； B液：称取核黄素0.075 g，用少量蒸馏水溶解； C液：合并A液和B液，定容至100 ml，此溶液即为含0.1 mmol/l EDTA的2 mmol/l 核黄素溶液，避光保存（可用黑纸将装有该液的棕色瓶包好），4℃冰箱中可保存8～10 d，当测定SOD酶活时，将C液稀释100倍，即为含1.0 μmol/l EDTA的20 μmol/l核黄素溶液。（5）含2% PVP的0.05 mol/l pH7.8磷酸钠缓冲液取0.1 mol/l pH7.8的磷酸钠缓冲液50 ml，加入2 g PVP（聚乙烯吡咯烷酮），充分溶解后移入100 ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，充分混匀，4℃冰箱中保存备用。 2.1.8.2提取及测定方法（1）称取1.0 g样品叶片于预冷的研钵中，加入4 ml预冷的提取介质（含2% PVP的0.05 mol/l pH7.8磷酸钠缓冲液），冰浴研磨匀浆，转入10 ml离心管，并用提取介质定容至

植物生理生化指标测定

小黑豆相关生理指标测定 1.表型变化：鲜重、株高、主根长和叶面积鲜重：取处理好的植株，擦干根和叶表面水分，测量整株植物的重量，每个测6个重复。株高：取处理好的植株，测量从根和茎分隔处到植株最高点的高度，记录，每个测6个重复。主根长：取处理好的植株，测量从根和茎分隔处到主根最远点长度，记录，每个测6个重复。叶面积：取处理好的植株，选择第二节段的叶片，测量叶面积，叶面积测量方法是测每个叶片最宽处长度作为叶的长，测叶片最窄处长度作为叶的宽，叶片长和宽的乘积即为叶表面积。每个测6个重复。 2.总蛋白、可溶性糖、丙二醛（MDA）和H2O2含量测定样品处理：取0.5g样品（叶片要去除叶脉、根要先用清水清洗干净），速在液氮中冻存，在遇冷的研钵中加液氮研磨，然后加入1.5ml的Tris-HCl（pH7.4）抽提，将抽提液转移到2ml的EP管中，于4℃，12000rpm离心15min，取上清，保存在-20℃下，上清液可用于总蛋白、丙二醛（MDA）、可溶性糖和H2O2含量测定。总蛋白测定（Bradford法）：样品反应体系（800ul H2O+200ul Bradford+5ul 样品），空白对照为（800ul H2O+200ul Bradford）。测定后带入标准曲线Y=32.549X-0.224(Y代表蛋白含量，X代表OD595)，计算得出蛋白含量。可溶性糖测定：样品反应体系（1ml蒽酮+180ul ddH2O+20ul样品提取液）；空白对照（1ml蒽酮+180ul ddH2O），测定OD625后带入标准曲线：Y=0.0345X+0.0204(Y代表OD625，X代表可溶性糖含量（ug）) 蒽酮配方：称取100mg蒽酮溶于100ml稀硫酸（76ml浓硫酸+30mlH2O）.注意：浓硫酸加入水中时，一点一点递加，小心溅出受伤。丙二醛（MDA）测定：在酸性和高温条件下，丙二醛可与硫代巴比妥（TBA）反应生成红棕色的3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮，在532nm处有最大吸收波长，但该反应受可溶性糖的极大干扰，糖与TBA的反应产物在532nm处也有吸收，但其最大吸收波长在450nm处。采用双组分分光光度法，可计算出MDA含量。MDA的计算公式为：MDA（umol/L）=6.45OD532-0.56OD450. 反应体系为：400ul 0.6%TBA+350ul H2O+50ul样品，80℃水浴10min后，测OD532和OD450。对照用Tris-HCl. 0.6%TBA配方：称取硫代巴比妥0.6g，溶于少量1M NaOH中，待其完全溶解后用10%TCA（称取10gTCA三氯乙酸，溶于100ml蒸馏水中，待其溶解即可）定容至100ml。 H2O2测定（二甲酚橙法）：样品反应体系（82ul溶液A+820ul溶液B （A:B=1:10）+150ul样品提取液），30℃水浴30min，测OD560。标准曲线为:Y=0.01734X-0.0555(Y代表OD560，X代表H2O2含量)

总酚与单宁的测定

一、单宁红葡萄酒颜色的稳定很大程度上取决于单宁荷花色素苷发生的缩合反应，由于这种物质的存在，葡萄酒成熟过程中的颜色趋于稳定。单宁也是呈味物质，它与多糖和肽缩合，使酒更为柔和。有氧时缩合为浅黄色，有收敛性;无氧时为棕红色，无收敛性。 1、高锰酸钾氧化法 ①原理：利用酒中的单宁色素和其他非挥发性还原物质，在酸性条件下，能被高锰酸钾所氧化，而酒中的单宁色素又能被活性炭吸附除掉，据此测出酒中单宁色素的含量。 ②试剂 a.0.1mol/L高锰酸钾（1/5KMnO4）标准溶液：称取3.3g高锰酸钾，溶于100mL水中，缓缓煮沸15min，冷却后用水稀释至1000mL，置于暗处保存一周。以4号玻璃漏斗过滤于干燥的棕色瓶中。标定：准确称取0.2g（准确至0.0002g）于105～110℃烘至恒重的基准草酸钠置入250mL三角瓶中，加100mL（8+92）硫酸溶液溶解，加热至60～70℃，趁热用高锰酸钾溶液滴定至溶液呈粉红色。同时做空白试验。计算公式如下：高锰酸钾浓度（1/5KMnO4，mol/L）=m/((V-V0)*0.06700) 式中m-----草酸钠的质量，g V-----测定时消耗高锰酸钾溶液的体积，mL V0----空白试验消耗高锰酸钾溶液的体积，mL 0.06700-----消耗1mL 1mol/L高锰酸钾（1/5KMnO4）标准溶液相当于草酸钠的质量，g/mmol b.0.05mol/L高锰酸钾（1/5KMnO4）溶液：将0.1mol/L高锰酸钾（1/5KMnO4）标准溶液稀释至原浓度的1/2 c.靛红纸试剂（靛蓝二黄酸钠，靛胭脂）：称取靛红1.5g，溶于50mL硫酸中，用水稀释至1000mL。 d.粉末活性炭 ③测定步骤用容量瓶取酒样100mL，倾入蒸发皿中，置于沸水浴中，除去挥发物（一般蒸发掉一半溶液即可），然后取下冷却至室温，返回原容量瓶中，洗涤蒸发皿3～4次，将洗涤液并入容量瓶中，定容摇匀，得处理液Ⅰ取上述处理后的酒样50mL于100mL烧杯中，加入2g左右粉末活性炭用玻璃棒搅匀，静置5分钟，过滤。滤液收集于50mL容量瓶中，用水定容至刻度，得处理液Ⅱ。要求滤液无色透明。吸取10mL处理液Ⅰ，置于1000mL三角瓶中，加入水500mL及10mL靛红指示剂，以0.05mol/L(1/5KMnO4）高锰酸钾标准溶液滴定至金黄色即为终点。记下消耗高锰酸钾标准溶液的毫升数V1。同样取处理液Ⅱ10mL，同上操作，记下消耗的高锰酸钾标准溶液毫升数V2。 ④计算单宁含量（以没食子单宁酸计，g/L）=（V1-V2）*c*0.04157*（1/V）*1000 式中：V1-----滴定处理液Ⅰ时高锰酸钾标准溶液的体积，mL; V2-----滴定处理液Ⅱ时高锰酸钾标准溶液的体积，mL; c------高锰酸钾（1/5 KMnO4）标准溶液的浓度，mol/L; V-----取样量，mL 0.04157-----消耗1mL1mol/L高锰酸钾（1/5 KMnO4）标准溶液相当于没食子单宁酸的质量，g/mmol ⑤讨论 a.本方法测定为单宁色素的含量，也可称为“高锰酸钾氧化值”。 b.活性炭用量随酒样颜色的深浅适量增减 c.滴定速度不要太快（每秒钟一滴），但要连续，间断滴定会影响反应终点。 d.正在发酵的红葡萄酒需经过过滤后再测定，样品太浑浊会影响终点的判定。

植物生理生化指标测定(精)

小黑豆相关生理指标测定 1. 表型变化:鲜重、株高、主根长和叶面积鲜重 :取处理好的植株,擦干根和叶表面水分,测量整株植物的重量,每个测 6个重复。株高 :取处理好的植株,测量从根和茎分隔处到植株最高点的高度,记录,每个测6个重复。主根长 :取处理好的植株,测量从根和茎分隔处到主根最远点长度,记录,每个测6个重复。叶面积 :取处理好的植株,选择第二节段的叶片,测量叶面积,叶面积测量方法是测每个叶片最宽处长度作为叶的长, 测叶片最窄处长度作为叶的宽, 叶片长和宽的乘积即为叶表面积。每个测 6个重复。 2. 总蛋白、可溶性糖、丙二醛(MDA 和 H2O2含量测定样品处理:取 0.5g 样品(叶片要去除叶脉、根要先用清水清洗干净 ,速在液氮中冻存,在遇冷的研钵中加液氮研磨,然后加入 1.5ml 的 Tris-HCl (pH7.4 抽提, 将抽提液转移到 2ml 的 EP 管中, 于 4℃, 12000rpm 离心 15min , 取上清, 保存在 -20℃下,上清液可用于总蛋白、丙二醛(MDA 、可溶性糖和 H2O2含量测定。总蛋白测定(Bradford 法 :样品反应体系(800ul H2O+200ul Bradford+5ul样品 , 空白对照为(800ul H2O+200ul Bradford 。测定后带入标准曲线 Y=32.549X-0.224(Y代表蛋白含量, X 代表 OD595 ,计算得出蛋白含量。可溶性糖测定:样品反应体系(1ml 蒽酮 +180ul ddH2O+20ul样品提取液 ; 空白对照 (1ml 蒽酮 +180ul ddH2O , 测定 OD625后带入标准曲线 : Y=0.0345X+0.0204(Y代表 OD625, X 代表可溶性糖含量(ug

不同方法测定苹果中单宁的含量(精)

黑龙江东方学院食品化学综合设计实验实验题目：不同方法测定苹果中单宁的含量姓名学号专业班级指导教师学部实验设计曹智 10202201 食品科学与工程 2010-2/2 姚晶食品与环境工程 2012年6月8日实验题目果蔬中单宁含量的测定摘要单宁是多酚中高度聚合的化合物，广泛存在于自然界中，主要应用于日化、食品、医药、制革等领域。简要介绍了植物单宁的性质、生理活性及应用，综述了单宁含量的经典测定方法以及现代测定方法，并对其发展前景进行了展望化学本质：鞣质是高分子多酚衍生物性质： 1. 有涩味、易氧化 2. 易与金属离子反应生成褐黑色物质 3. 重金属离子与鞣质生成不溶性盐 4. 易溶于水、丙酮、乙醇等，不溶于烃类、氯仿、无水乙醚关键词： 1. 涩味 2. 氧化 3. 金属离子 4. 吸光值目录摘要 (1)

1 前言 . ......................................................................................................................................... 3 1.1 实验目的 .......................................................................................................................... 3 1.2 实验原理 .......................................................................................................................... 3 2 材料与方法 . ............................................................................................................................. 4 2.1 实验材料 .. (4) 2.1.1 实验原料 (4) 2.1.2 实验试剂 (4) 2.2 实验设备 .......................................................................................................................... 5 2.3 实验方法 .......................................................................................................................... 6 2.3.1 络合滴定法 ............................................................................................................... 6 2.3.2 分光光度法 ............................................................................................................... 6 2.3.3 高锰酸钾滴定法 ....................................................................................................... 7 3 结果与讨论 . ............................................................................................................................. 8 3.1 络合滴定法 ...................................................................................................................... 8 3.2 分光光度法 ...................................................................................................................... 9 3.3 高锰酸钾滴定法 (9) 结论 .................................................................................................................................... 11 参考文献 (12) 致谢 .................................................................................................................................... 13 实验题目果蔬中单宁含量的测定）

植物生理指标检测方法

植物组织中可溶性糖含量的测定在作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。它们在营养中的作用主要有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可作为NH 3 的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。由于碳水化合物具有这些重要的作用，所以是营养中最基本的物质，也是需要量最多的一类。 Ⅰ蒽酮法测定可溶性糖一、原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为 620 nm ，故在此波长下进行比色。二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料任何植物鲜样或干样。（二）试剂 1. 80 ％乙醇。 2. 葡萄糖标准溶液（100 μg/mL ）：准确称取100 mg 分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水并定容至100 mL ，使用时再稀释 10 倍（ 100 μg/mL ）。 3 ．蒽酮试剂：称取 1.0 g 蒽酮，溶于 80% 浓硫酸（将 98% 浓硫酸稀释，把浓硫酸缓缓加入到蒸馏水中） 1000 mL 中，冷却至室温，贮于具塞棕色瓶内，冰箱保存，可使用 2 ～ 3 周。（三）仪器设备分光光度计，分析天平，离心管，离心机，恒温水浴，试管，三角瓶，移液管（ 5 、 1 、0.5 mL ），剪刀，瓷盘，玻棒，水浴锅，电炉，漏斗，滤纸。三、实验步骤 1. 样品中可溶性糖的提取称取剪碎混匀的新鲜样品0.5 ～ 1.0 g （或干样粉末 5 ～100 mg ），放入大试管中，加入15 mL 蒸馏水，在沸水浴中煮沸20 min ，取出冷却，过滤入100 mL 容量瓶中，用蒸馏水冲洗残渣数次，定容至刻度。 2. 标准曲线制作取 6 支大试管，从 0 ～ 5 分别编号，按表 24-1 加入各试剂。表 24-1 蒽酮法测可溶性糖制作标准曲线的试剂量将各管快速摇动混匀后，在沸水浴中煮10 min ，取出冷却，在620 nm 波长下，用空白调零测定光密度，以光密度为纵坐标，含葡萄糖量（ μg ）为横坐标绘制标准曲线。 3 ．样品测定取待测样品提取液 1.0 mL 加蒽酮试剂 5 mL ，同以上操作显色测定光密度。重复 3 次。

单宁酶酶活力检测方法

单宁酶酶活力的检测 1引用文件 2范围本标准适用于微生物发酵产单宁酶制剂酶活力检测 3.术语和定义下列术语和定义适用于本标准。 3.1酶活性单位定义在30℃、pH值为5.0的条件下，每分钟降解没食子酸丙酯（PG）溶液解释放1μmol没食子酸所需的酶量定义为一个酶活力单位（U）。 4.原理酶活力的测定采用保玉心的绕丹宁法，该法以没食子酸丙酯（PG）作为反应的底物，单宁酶分解PG产生的没食子酸可与绕丹宁在碱性条件下形成红色复合物，该复合物在520nm处有最大吸收，据此可通过测定A520的变化量来计算生成的没食子酸的量，从而计算酶活力。 5.试剂和材料本标准中所有试剂，在没有注明其它要求时，均指分析纯试剂和符合GB/T6682中规定的二级水。 5.10.1mol/L的磷酸氢二钠：准确称取十二水合磷酸氢二钠35.814g，加入800ml水溶解，溶解后定容至1000ml。 5.20.05mol/L的柠檬酸：准确称取一水合柠檬酸10.507g，加入800ml水溶解，溶解后定容至1000ml。 5.1和5.2两者混匀，互调pH为5.0. 5.30.5mol/l的KOH溶液：准确称取KOH28.055g，加入800ml水溶解，溶解后定容至1000ml。 5.40.667%（W/V）罗丹宁溶液（甲醇绕丹宁）：准确称取罗丹宁0.667g，加入80ml甲醇溶解，溶解后用甲醇定容至100ml。 5.5没食子酸标准溶液，浓度为10mmol/l 称取没食子酸0.18813g，加磷酸-柠檬酸缓冲溶液溶解，定容至100ml。 5.6没食子酸丙酯（PG）溶液，浓度为10.0mmol/L

植物生理学实验指导

植物生理学实验指导主编胡君艳陈国娟张汝民浙江农林大学植物学科 2013年8月

实验一植物组织水势的测定水势与渗透势的测定方法可分为3大类：⑴液相平衡法，包括小液流法、重量法测水势，质壁分离法测渗透势；⑵压力平衡法（压力室法测水势）；⑶气相平衡法，包括热电偶湿度计法、露点法等。 Ⅰ小液流法【实验目的】了解采用小液流法测定植物组织水势的方法。【实验原理】水势表示水分的化学势，像电流由高电位处流向低电位处一样，水从水势高处流向低处。植物体细胞之间，组织之间以及植物体和环境间的水分移动方向都由水势差决定。当植物细胞或组织放在外界溶液中时，如果植物的水势小于溶液的渗透势（溶质势），则组织吸水而使溶液浓度变大；反之，则植物细胞内水分外流而使溶液浓度变小；若植物组织的水势与溶液的渗透势相等，则二者水分保持动态平衡，所以外部溶液浓度不变，而溶液的渗透势即等于所测植物的水势。可以利用溶液的浓度不同其比重也不同的原理来测定试验前后溶液的浓度变化，然后根据公式计算渗透势。【实验器材与试剂】 1.实验材料：八角金盘、大叶黄杨等。 2.实验试剂：0.05、0.10、0.15、0.20、0.30mol·L-1蔗糖溶液、甲烯蓝溶液。 3.实验仪器：试管10支、微量注射器、镊子、打孔器、垫板。【实验步骤】 1.取干燥洁净的试管5支为甲组，标记1~5，各支中分别加入0.05~0.30mol·L-1蔗糖溶液5mL。另取5支干燥洁净的试管为乙组，标记1'~5'，各试管中分别加入0.05~0.30mol·L-1蔗糖溶液2ml。 2.取待测样品的功能叶数片，用打孔器打取小圆片约50片（避开叶脉），混合均匀。用镊子分别夹入10个小圆片到乙组试管中。并使叶圆片全部浸没于溶液中。放置约30~60min，为加速水分平衡，应经常摇动试管。 3.到时间后，在乙组试管中加入甲烯蓝溶液1~2滴，并用微量注射器取各试管糖液少许，将注射器插入对应浓度甲组试管溶液中部，小心地放出一滴蓝色溶液，并观察蓝色小液流的

植物生理学实验指导

植物生理学实验指导 Prepared on 24 November 2020

植物生理学实验指导

植物材料的采集、处理与保存植物生理实验使用的材料非常广泛，根据来源可划分为天然的植物材料（如植物幼苗、根、茎、叶、花等器官或组织等）和人工培养、选育的植物材料（如杂交种、诱导突变种、植物组织培养突变型细胞、愈伤组织、酵母等）两大类；按其水分状况、生理状态可划分为新鲜植物材料（如苹果、梨、桃果肉，蔬菜叶片，绿豆、豌豆芽下胚轴，麦芽、谷芽，鳞茎、花椰菜等）和干材料（小麦面粉，玉米粉，大豆粉，根、茎、叶干粉，干酵母等）两大类，因实验目的和条件不同，而加以选择。植物材料的采集和处理，是植物生理研究测定中的重要环节。在实际工作中，往往容易把注意力集中在具体的仪器测定上，而对于如何正确地采集和处理样品却不够注意，结果导致了较大的实验误差，甚至造成整个测定结果的失败。因此，必须对样品的采集、处理与保存给予足够的重视。一、原始样品及平均样品的采取、处理植物生理研究测定结果的可靠性（或准确性），首先取决于试材对总体的代表性，如果采样缺乏代表性，那么测定所得数据再精确也没有意义。所以，样品的采集除必须遵循田间试验抽样技术的一般原则外，还要根据不同测定项目的具体要求，正确采集所需试材。目前，随着研究技术的不断发展，应该不断提高采样技术的水平。在作物苗期的许多生理测定项目中都需要采集整株的试材样品，在作物中后期的一些生理测定项目中，如作物群体物质生产的研究，也需要采集整株的试材样品，有时虽然是测定植株的部分器官，但为了维持器官的正常生理状态，也需要进行整株采样。除研究作物群体物质生产外，对于作物生理过程的研究来说，许多生理指标测定中的整株采样，也只是对地上部分的采样，没有必要连根采样，当然对根系的研究测定例外。采样时间因研究目的而不同，如按生育时期或某一特殊需要的时间进行。除逆境生理研究等特殊需要外，所取植株应是能代表试验小区正常生育无损伤的健康植株。

粮油检验高粱中单宁含量测定编制说明

《粮油检验高粱单宁含量测定》国家标准编制说明《高粱单宁含量测定法》国家标准编制小组 2008年4月20日

1．工作简况（包括任务来源、协作单位、主要工作过程、国家标准主要起草人及其所做的工作等） 1.1 任务来源及协作单位根据全国粮油标准委员会《2008年国家标准制修订计划》的要求，河南工业大学负责编制国家标准《粮油检验高粱单宁含量测定》(项目编号-T-449)，河南工业大学组成了起草小组。 1.2 主要工作过程 2008年2月，起草组检索和查阅了国际标准化组织和发达国家关于高粱单宁的测定方法，确定采用国际标准。为了保证本标准为最新国际标准的版本，标准起草工作组查阅了国际标准最新的标准目录，通过国际互联网查阅了最近一段时间相关国际标准的修制定情况。 2008年3月，起草组开始对ISO 9648 : 1988(E) Sorghum — Determination of tannin content 进行了全文翻译。2008年4月，完成ISO 9648 : 1988(E)的翻译并形成《粮油检验高粱单宁含量测定(征求意见稿)》，通过正式文件向国内相关高等院校、科研机构、生产企业和个人征求意见。 2. 国家标准编制原则和确定国家标准主要内容（如技术指标、参数、公式、性能要求、实验方法、检验规则等）的论据（包括实验、统计数据），修订国家标准时，应增列新旧国家标准水平的对比 2.1 编制原则本标准等同翻译ISO 9648 : 1988(E) Sorghum — Determination of tannin content ，为我国高粱单宁含量测定提供方法。 2.2 确定国家标准主要内容的依据根据GB/T 1.1-2000《标准化工作导则第1部分：标准的结构与编写规则》、GB/T 20000.2-2001《标准化工作指南第2部分：采用国际标准的规则》、GB/T 1.2-2002 《标准化工作导则第2部分：标准中规范性技术要素内容的确定方法》规定的要求, 为了便于使用, 做了下列修改。 a)“本国际标准”一词改为“本标准”。 b) 将原文中的“引用标准”改为“规范性引用文件”，将引用“ISO 950：1979，谷物采样(籽粒)”标准改为引用“GB 5491 粮油、油料检验扦样、分样法”，并增加“凡是不注日期的引用标准，其最新版本适用于本标准”的文字说明。 c) 删除国际标准的前言，增补新的前言。 d) 在第9节中，为了表述更清晰，将单宁含量计算公式“H m c -?1001002”改为

植物单宁的含量测定方法

植物单宁的含量测定方法 1 植物单宁单宁（Tannins）又称单宁酸、鞣质、鞣酸。按Bategnt的定义，指相对分子质量为500~3000的能沉淀蛋白质、生物碱的水溶性多酚化合物。主要应用于[1]医药、食品、制革、日用化学品、水处理等领域。单宁在传统医药上内服可治胃肠道出血和止痢，外用于局部止血和创面保护防止感染发炎；近年研究发现单宁还具有抑菌抗病毒、抗过敏、抗氧化和延缓衰老、预防心血管疾病、抗肿瘤和促进免疫等作用。单宁在食品行业中可作为功能性成分用于制作保健品，生产食品添加剂、风味剂等；在化妆品中主要起收敛、防晒、美白、抗皱、保湿、防腐等作用；在制革工业中，单宁是栲胶的主要成分。 2 单宁的含量测定经典的有皮粉法、干酪素法、氧化滴定法、分光光度法等；现阶段涌现出许多新型的测定方法，如高效液相色谱法、流动注射分析法、原子分光光度法等。 2.1 经典测定方法 2.1.1 皮粉法皮粉法是国际上公认的单宁含量测定方法，从 20 世纪 60 年代至今，原苏联、日本、印度和中国都采用此法作为国家标准测试方法。皮粉的主要成分是蛋白质，单宁是多元酚类，分子中的酚羟基与蛋白质的酰胺键以氢键结合形成不溶于水的沉淀，以此使单宁沉淀下来，用重量法测定其含量。根据皮粉与单宁溶液接触方式不同，可将其分为震荡法和过滤法。震荡法是皮粉与单宁溶液一起震荡来脱去溶液中的单宁；过滤法是将单宁溶液流过皮粉柱层以脱去单宁。通常，过滤法所测的单宁含量比震荡法高5%～7%。皮粉法所测的是单宁的绝对含量，并且不需要标样，操作简单，可用其测定中药水提液中鞣质的含量[2]。但皮粉法的缺点是，用重量法测定样品时，须经过过滤、干燥、称重，样品耗用量大，测定时间较长，一般样品分析需20 h 左右，不适合大批量样品的快速测定；没有选择性，对低相对分子质量的多酚也具有一定的吸附能力，往往使测定结果偏高；适用于单宁含量高的样品，不适合低含量和微量测定；另外皮粉试剂的供应和质量都较难保证。针对以上缺点，现在大多采用皮粉- 分光光度法[3]、磷钼钨酸- 皮粉比色法[4]等，具有操作简单、快速、精密度高的优点。 2.1.2 干酪素法干酪素的主要成分是酪蛋白，为含磷蛋白。利用其能选择性地结合具有生理活性的鞣质，从而测定具有疗效鞣质的含量。干酪素法一般与分光光度法结合，鞣质在一定的pH 条件下与Folin 试剂反应，并且鞣质含量与吸光度成正比。很多人利用干酪素法测定了金樱子、侧伯叶、大黄、旋覆花[5- 8]等药材中单宁的含量，此法样品取量少、简单、灵敏、快速、准确，可作为检测植物药材质量标准的可靠分析手段。 2.1.3 胶体滴定法胶体滴定法，又称聚电解质滴定法，是利用一些电荷密度已知且性能比较稳定的阴、阳离子

植物生理测定方法

1 叶圆片放氧活性的测定原理：同光合速率一样，叶片光合放氧速率是反应光合能力的一项重要指标，其大小本质上取决于PSII活性的大小。称取2～3 cm2 叶片约0.2g，用打孔器2-3 mm2的小圆片后放入含有200mmol Trincine-NaOH，100 mmol NaHCO3，pH7.0 的缓冲液中，并用注射器抽真空1min 左右，使缓冲液充分渗入到叶肉细胞里，最后将叶圆片连同缓冲液转移至极谱氧电极(Hansatech，英国)的反应杯里测定放氧活性，测定在20℃及800μmol.m-2.s-1光强下进行，每个样品测定3个重复。 2 核酮糖-1，5-二磷酸羧化酶（RuBPCase）活性测定原理：Rubiscase是光合作用中最重要的关键酶，它既催化RuBP羧化反应，又催化RuBP加氧反应，对植物的光合作用具有重要的调控作用。参照李合生等[57]的方法，称取0.5g叶片加入匀浆液6ml（100mmol/L Tris-HCl 缓冲液pH7.8，10 mmol/L MgCl2，1.0 mmol/L EDTA，20 mmol/L 2-巯基乙醇，2%聚乙烯吡咯烷酮）冰浴研磨匀浆，14000g、4℃离心20min，上清液作酶液活性分析。反应液总体积为200μL，内含反应介质100mmol/L Tris- HCI 缓冲液(pH7.8)、0.4mmol/L EDTA、12 mmol/L MgCl2）93.3μL、50 mmol/L ATP、50mmol/L 磷酸肌酸，200mmol/L NaHCO3各13.3μL，160 u/ml 磷酸肌酸激酶，160 u/ml 磷酸甘油酸激酶，160 u/ml 磷酸甘油醛脱氢酶各6.7μL，5mM/L NADH，蒸馏水各13.3μL，RuBPCase提取液6.7μL 30℃恒温水浴10 min, 最后加入9 mmol/L RuBP 6.7μL反应开始，用Theymo1500型酶标仪96孔板测定340 nm下光吸收的变化。以ΔA340·min-1下降0.01为l U，每个样品测定3个重复。

植物生理学实验详解

一植物组织中ETH（乙烯）释放量的测定测定原理：ACC是乙烯合成的直接前体，为了更好地了解乙烯对植物的调节作用，有必要测定植物中ACC的含量，在冷却的Hg+存在下，NaClO专一地使ACC转化成乙烯。ACC：1-氨基环丙烷-1-羧酸测定中气相色谱仪用的是氢火焰检测器FID。色谱仪包括固定相和流动相。由于固定相和流动相对各种物质的吸附或溶解能力不同，因此各物质的分配系数不一样。当待测样（含ETH混合气体）加入固定相以后，不断通以流动相（通常为氮气、氢气）待测物不断再分配，最后按照分配系数大小顺序依次被分离，并进入检测系统被检测，检测信号的大小，反映出物质含量的多少，在记录仪上呈现色谱图。判断气相色谱仪氢火焰检测器是否点燃的3种方法？如何判断检测器已工作？ 1、将不锈钢镊子接触到检测器的喷扣处，若镊子上有水珠证明氢气已被点燃； 2、根据记录笔的位置来判断； 3、微电流放大器的“引燃开关”切换“引燃”时，检测器如发出扑声火焰已被点燃。结果分析：经冷冻的苹果ETH释放速率低于常温的乙烯释放速率。经低温处理ACC合成酶的形成受到损伤和影响，从而降低乙烯的合成与释放。 3大温度3大气流量：基线成一直线表明稳定了柱温80度进样器温度120度检测器温度140度 N2 流量35微升每分钟400 H2 流量45 微升每分钟55千帕空气流量350 微升每分钟40 千帕二植物组织中脂肪氧化酶活力测定原理根据基质浓度一定，反应体系中溶解氧浓度的变化与酶活力大小呈线性相关原理进行测定。LOX氧化多元不饱和脂肪酸生成具有共轭双键的过氧化物时消耗氧气，溶液中氧浓度的减少速率与酶活力大小成正比，用氧电极可精确的测定酶活力。结果：经过干旱处理的小麦组织中LOX活力低（受干旱条件的诱导LOX基因的表达）注意事项：1测定时，维持温度恒定，氧电极对温度变化非常敏感; 2 反应杯中不应有气泡，否则会造成信号不稳 3 进行试验时要保持磁转子的转动，以平衡氧气浓度 4 电极使用一段时间后，在阳极上形成一层氧化膜，使电极的灵敏度下降，需要用清洁剂清洁阳极。三半伤害温度的求算 1 以伤害度为纵坐标，温度为横坐标，制作曲线，50%伤害对应的温度即半伤害温度； 2 以Logistic生长曲线方程拟合Y=K/(1+Ae-BT) Y 伤害度（相当于胁变）K 最大外渗量 T 温度（相当于胁强）A，B 常数据Logistic方程，以Ln（（K/Y）-1）为纵坐标，以T为横坐标作图，的一直线，直线与横轴交点即半伤害温度。半伤害温度的生理意义，半伤害温度通常可用来表示植物对高温或低温抗性的大小。在高温伤害情况下，若半伤害温度高，说明对高温伤害抗性强；在低温伤害时，则半伤害温度越低，植物对低温伤害抗性强。对于其他逆境，具有相应的生理意义。但是对于高温伤害，同样以Ln（（K/Y）-1）为纵坐标，以T为横坐标作图，发现做出的不是直线而是S型曲线。四蒸汽压渗透压计测植物组织渗透势蒸汽压渗透压计的工作原理 1 原理对于一种溶液来说，溶质颗粒数的增加改变了溶剂分子的自由度，导致溶剂分子主要特征的改变。这些溶液特征的相对变化与溶液中粒子的增加量呈线性相关，所以称他们为

不同方法测定苹果中单宁的含量

黑龙江东方学院食品化学综合设计实验实验题目：不同方法测定苹果中单宁的含量姓名曹智学号10202201 专业食品科学与工程班级2010-2/2 指导教师姚晶学部食品与环境工程实验设计2012年6月8日

实验题目果蔬中单宁含量的测定摘要单宁是多酚中高度聚合的化合物，广泛存在于自然界中，主要应用于日化、食品、医药、制革等领域。简要介绍了植物单宁的性质、生理活性及应用，综述了单宁含量的经典测定方法以及现代测定方法，并对其发展前景进行了展望化学本质：鞣质是高分子多酚衍生物性质： 1.有涩味、易氧化 2.易与金属离子反应生成褐黑色物质 3.重金属离子与鞣质生成不溶性盐 4.易溶于水、丙酮、乙醇等，不溶于烃类、氯仿、无水乙醚关键词： 1.涩味 2.氧化 3.金属离子 4.吸光值

目录摘要 (1) 1前言 (3) 1.1实验目的 (3) 1.2实验原理 (3) 2材料与方法 (4) 2.1实验材料 (4) 2.1.1实验原料 (4) 2.1.2实验试剂 (4) 2.2实验设备 (5) 2.3实验方法 (6) 2.3.1络合滴定法 (6) 2.3.2分光光度法 (6) 2.3.3高锰酸钾滴定法 (7) 3结果与讨论 (8) 3.1络合滴定法 (8) 3.2分光光度法 (9) 3.3高锰酸钾滴定法 (9) 结论 (11) 参考文献 (12) 致谢 (13)

实验题目果蔬中单宁含量的测定） 1 前言 1.1 实验目的了解单宁性质及熟练掌握单宁含量的测定方法 1.2 实验原理方法一：EDTA络合滴定法本方法操作简便，实验条件容易控制，适合于单宁含量较少的植物样品的测定，测定相对误差一般不超过2%。根据单宁可与重金属离子形成络合物沉淀的性质，在样品提取液中加入过量的标准醋酸锌溶液，待反应完全后，再用EDTA标准溶液滴定剩余的醋酸锌，根据EDTA标准溶液的消耗量，可计算出样品中单宁的含量方法二：分光光度法分光光度法是通过测定被测物质在特定波长或一定波长范围内光的吸收度，以此对该物质进行定性和定量分析的方法。分光光度法的应用光区包括紫外光区、可见光区、红外光区，其中常用的是紫外光区和可见光区，两者的波长范围分别为200～400 nm 和400～760 nm。分光光度法的基本原理是朗伯- 比尔定律，即当一束平行的单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比。方法三：高锰酸钾滴定法作为多酚，单宁是一种强还原剂，极易被氧化剂氧化，还可被活性碳吸附。本测定以高锰酸钾为氧化剂，根据样品中单宁可以被活性碳吸附的特点，测定样品液在用活性碳吸附前后的氧化值之差，计算单宁物质的含量。

单宁含量的测定

（一）单宁含量的测定 1．原理单宁具有较强的还原性，可将Fe3+还原为Fe2+。利用邻二氮菲与Fe2+反应生成橙红色配合物，用分光光度计在λ=510nm 处测吸光度并与标准比较而测定单宁。 2．仪器可见光分光光度计，研钵，250ml 容量瓶，50ml 容量瓶，100ml 容量瓶，天平，1ml ，2ml ，5ml ，10ml 移液管，100ml 量筒 3．试剂（1）单宁标准溶液：取标准单宁酸(C76H52O46)100 mg 溶于1000mL 蒸馏水中，再取适量溶液稀释10 倍，配成10 μg/mL 的溶液. （2）EDTA 溶液：取EDTA 二钠盐0.25 g 溶于500 mL 水中配成0.05 mol/L 。（3）铁（Ⅲ）溶液：取硫酸铁铵（NH4Fe (SO4)2·12H2O ）2.41 g 溶于500 mL 蒸馏水，并加入0.5 mL 浓硫酸，配成0.01 mol/L 的溶液。（4）邻二氮菲溶液：取1，10-邻二氮菲1.485 g 于500 mL 蒸馏水中，配成0.015 mol/L 的溶液。（5）缓冲溶液：取冰醋酸15 g 和醋酸钠20 g 溶于250 mL 蒸馏水中，配成pH 为4.4 的缓冲溶液。 4．标准曲线的绘制取单宁标准溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL 于6 只25 mL 容量瓶中，分别加入铁（Ⅲ）1.5mL ，置于80 ℃水浴25 min 。冷却至室温后分别依次加入缓冲溶液2.0 mL 、邻二氮菲3.0 mL 、EDTA 溶液0.5 mL ，用蒸馏水定容至刻度后摇匀，静置10 min ，在510 nm 波长下以试剂空白作对照测量吸光度。以单宁质量浓度（依次为0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0，单位μg/mL ）为横坐标，吸光度为纵坐标作图。 5．样品的提取称取0. 300～0. 500 g 叶片于60 mL 水中,在沸水浴中煮1 h,冷却至室温过滤,将滤液稀释至100 mL 。取稀释液0. 4～0. 6 mL 于25 mL 容量瓶中,按上述方法测定吸光度,鞣酸含量按下式计算: 鞣酸含量(% ) =%100v 10m 10025C 6????? 式中: C ———由工作曲线查出的鞣酸浓度,μg /mL;