-SDS-PAGE

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产品简介:

碧云天生产的SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒提供了配制SDS-PAGE 凝胶所需的各种试剂,用户只需自备制胶器具和蒸馏水,即可配制 PAGE 胶了。

SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒不仅可用于配制SDS-PAGE 凝胶,也可用于配制非变性(native)PAGE 凝胶。

本试剂盒约可配制30-50块常规大小的PAGE 胶(即聚丙烯酰胺凝胶)。

包装清单:

保存条件:

1M Tris-HCl, pH8.8、10% SDS 、Ammonnium persulfate(过硫酸铵)和1M Tris-HCl, pH6.8室温保存。30% Acr-Bis(29:1)

和TEMED 4℃避光保存。过硫酸铵配制成10%溶液后,分装成小管-20℃保存,通常半年内有效。

注意事项:

过硫酸铵配制成10%溶液后,应当-20

℃保存。同时应尽量减少室温存放时间,以防失效。

TEMED 宜避光保存。另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切,可通过适当调节TEMED 的用量,控制在不同的室内环境下凝胶凝 聚的速度。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:

1.

根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度,再按照下面的表格配制SDS-PAGE 的分离胶(即下层胶):

注:如果配制非变性胶,参考上述配方,不加10%SDS即可配制成非变性PAGE胶。2.

电路原理习题集(下册)精品文档7页

下 册 习 题 1-1 绘出题1-1图所示各电路的有向图,并求出支路数b ,节点数n t 和基本回路数l 。 (a) (b) 题 1-1 图 1-2 对题1-2图所示有向图,任意选出两种不同的树,并对每种树列出各基本割集的支路集和各基本回路的支路集。 1-3 绘出题1-3图所示网络的有向图,并写出其关联矩阵A (以节点⑤为参考节点)。 题1-2图 题1-3图 1-4 绘出对应于下列节点-支路关联矩阵A a 的有向图: 1-5 题1-5(a)、(b)图表示同一有向图的两种不同的树,图中粗线为树支。试在该图上表示出各基本回路和基本割集,并写出基本回路矩阵B 和基本割集矩阵Q 。 1-6 应用题1-5写出的矩阵B 和矩阵Q 验证公式QB T =0。 1-7 对于某一有向图中的一个指定的树,其基本割集矩阵为 试写出对应于该有向图中同一树的基本回路矩阵B 。 1-8 对于某一有向图中的一个指定的树,其基本回路矩阵为 试写出对应于该有向图中同一树的基本割集矩阵Q 。 1-9 对题1-8-1图所示有向图,试选一树使得对应于此树的每一个基本回路是图中的一个网孔,并写出基本回路矩阵B 。 1-10 证明题1-10图中的图G 1和G 2都是图G 的对偶图。 (a) (b) 题 1-10 图 2-1 写出题2-1图所示正弦交流网络的支路阻抗矩阵和用支路阻抗矩阵表示的支路方程的矩阵形式(电源角频率为 )。 2-2 题2-2图是一直流网络。试写出该网络的支路电导矩阵和用支路电导矩阵表示的支路方程的矩阵形式。 题 2-2 图 2-3 题2-3图表示一个直流网络,其中各电流源的电流和各元件的电阻值业已给出。 (1) 绘出此网络的有向图,并写出关联矩阵; (2) 用节点分析法写出矩阵形式的节点方程; (3) 解节点方程,求出各节点电压。 2-4 写出题2-4图所示直流网络的矩阵形式的节点方程,并求出各支路电流。 题 2-3 图 题 2-4 图 2-5 题2-5图表示一正弦交流网络。试绘出网络的有向图并写出关联矩阵A :用节点分析法写出矩阵 题 1-5 图 (c ) 题 2-1 图

SDS-PAGE电泳标准操作流程

SDS-PAG电泳标准操作规程(网上) 3. 程序: 端平齐。放于制胶架上夹紧,下端紧贴密封条。 3.1.2分离胶的配置 3.122 灌胶混匀后用移液枪将凝胶溶液沿玻棒小心注入到长、短玻璃板间的狭缝内(胶高度距样品模板 梳齿下缘约1cm)。 3.1 . 2.3液封在凝胶表面沿短玻板边缘轻轻加一层水以隔绝空气,使胶面平整。静置约30min观察胶面 变化,当看到水与凝固的胶面有折射率不同的界限时,表明胶已完全凝固,倒掉上层水,并用滤纸 吸干残留的水液。 3.1.3浓缩胶的配置 混匀后用移液枪将凝胶溶液注入到长、短玻璃板间的狭缝内(分离胶上方),轻轻加入样品模板梳,小心避免气泡的出现。约30分钟,聚合完全。 3.2.1安装电泳槽将制备好的凝胶板取下,小心拔下梳子。两块10%勺凝胶板分别插到U形橡胶框的两边凹 形槽中,可往上提起使凝胶板紧贴橡胶。将装好玻璃板的胶模框平放在仰放的贮槽框上,其下缘与 贮槽框下缘对齐,放入电泳槽内。倒入1X tris-gly 电泳缓冲液。 3.2.2 样品处理对于蛋白样品直接取80 pl的样品,依次加上20Q 5x buffer (加了B-巯基乙醇),混匀。 对于菌体或组织等固体样品,取少量样品加100ul 2x buffer (加了B-巯基乙醇)煮沸10分钟。 3.2.3 加样用移液枪取处理过的样品溶液10 p l,小心地依次加入到各凝胶凹形样品槽内,marker加 入到其中一个槽内,为区别两块板,marker可加在不同的孔槽中。 3.2.4电泳将电泳槽放置电泳仪上,接通电源,正负极对好。电压调至约150v保持恒压。待溴酚蓝标记移 动到凝胶底部时,关电源,把电泳缓冲液倒回瓶中。 3.2.5剥离胶把电泳槽取出,两块板拿下来,用刮片从长短玻片中间翘起,再把浓缩胶刮掉,取下。 3.3. 染色放于加有R250染色液的染色皿中,染液漫过胶即可,置于摇床上,转速约为45r/min,时间约1小时, 完成后染液倒掉并用水洗掉染液。 3.4. 脱色取出染色过的胶放于加有脱色液的染缸里,脱色液漫过胶即可,置于摇床上,转速约为45r/min,时间 约1小时,本底色脱净,条带清晰可见即可,完成后倒掉脱色液。 3.5. 拍照将脱色后的胶置于透明文件夹中,把胶上面的气泡赶出(用前也可用酒精棉球擦干净文件夹),放到 扫描仪上,拍照。 4. 注意事项 4.1 根据目的蛋白的大小选择合适的胶片浓度。一般为100KD-50KD选用10%交;50KD-30KD选用12%胶; 30KD-10KD选用15%交。4.2 要根据样品浓度来加样品溶解液。每加一个样品后换一支吸头或清洗吸头后再点另一个样品。4.3 制备聚丙烯酰胺凝胶时,倒胶后常漏出胶液,那是因为二块玻璃板与塑料条之间没封紧,留有空隙,所以这步要特别留心操作.4.4 电泳完毕撬板取凝胶时要小心细致不能把胶弄破。 4.5 电泳缓冲液可重复利用,如果胶上出现不正常痕迹,就要及时更换新液。 4.6 分离胶高度控制得当,确保 有大约1cm左右的浓缩胶空间。过长或过短均不能得到理想的电泳结果。 4.7 电泳染色液注意进行回收再利用, 一般可重复使用2-3次。4.8 AP和TEMED是催化剂,加入的量要合适,过少则凝胶聚合很慢甚至不聚合,过多则聚合过

手机电路原理,通俗易懂

第二部分原理篇 第一章手机的功能电路 ETACS、GSM蜂窝手机是一个工作在双工状态下的收发信机。一部移动电话包括无线接收机(Receiver)、发射机(Transmitter)、控制模块(Controller)及人机界面部分(Interface)和电源(Power Supply)。 数字手机从电路可分为,射频与逻辑音频电路两大部分。其中射频电路包含从天线到接收机的解调输出,与发射的I/Q调制到功率放大器输出的电路;逻辑音频包含从接收解调到,接收音频输出、发射话音拾取(送话器电路)到发射I/Q调制器及逻辑电路部分的中央处理单元、数字语音处理及各种存储器电路等。见图1-1所示 从印刷电路板的结构一般分为:逻辑系统、射频系统、电源系统,3个部分。在手机中,这3个部分相互配合,在逻辑控制系统统一指挥下,完成手机的各项功能。 图1-1手机的结构框图 注:双频手机的电路通常是增加一些DCS1800的电路,但其中相当一部分电路是DCS 与GSM通道公用的。 第二章射频系统 射频系统由射频接收和射频发射两部分组成。射频接收电路完成接收信号的滤波、信号放大、解调等功能;射频发射电路主要完成语音基带信号的调制、变频、功率放大等功能。手机要得到GSM系统的服务,首先必须有信号强度指示,能够进入GSM网络。手机电路中不管是射频接收系统还是射频发射系统出现故障,都能导致手机不能进入GSM网络。 对于目前市场上爱立信、三星系列的手机,当射频接收系统没有故障但射频发射系统有故障时,手机有信号强度值指示但不能入网;对于摩托罗拉、诺基亚等其他系列的手机,不管哪一部分有故障均不能入网,也没有信号强度值指示。当用手动搜索网络的方式搜索网络时,如能搜索到网络,说明射频接收部分是正常的;如果不能搜索到网络,首先可以确定射频接收部分有故障。 而射频电路则包含接收机射频处理、发射机射频处理和频率合成单元。 第一节接收机的电路结构 移动通信设备常采用超外差变频接收机,这是因为天线感应接收到的信号十分微弱,而鉴频器要求的输人信号电平较高,且需稳定。放大器的总增益一般需在120dB以上,这么大的放大量,要用多级调谐放大器且要稳定,实际上是很难办得到的,另外高频选频放大器的通带宽度太宽,当频率改变时,多级放大器的所有调谐回路必须跟着改变,而且要做到统一调谐,

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)实验原理和操作步骤

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)实 验原理和操作步骤 实验原理: SDS-PAGE是对蛋白质进行量化,比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的。 SDS是一种去垢剂,可与蛋白质的疏水部分相结合,破坏其折叠结构,并使其广泛存在于一个广泛均一的溶液中。SDS蛋白质复合物的长度与其分子量成正比。在样品介质和凝胶中加入强还原剂和去污剂后,电荷因素可被忽略。蛋白亚基的迁移率取决于亚基分子量。 试剂和器材: 试剂:1. 5x样品缓冲液(10ml):0.6ml 1mol/L的Tris-HCl(pH6.8),5ml 50%甘油,2ml 10%的SDS,0.5ml巯基乙醇,1ml 1%溴酚蓝,0.9ml蒸馏水。可在4℃保存数周,或在-20℃保存数月。 2. 凝胶贮液:在通风橱中,称取丙烯酰胺30g,甲叉双丙烯酰胺0.8g,加重蒸水溶解后,定容到100ml。过滤后置棕色瓶中,4℃保存,一般可放置1个月。 3. pH8.9分离胶缓冲液:Tris 36.3g ,加1mol/L HCl 48ml,

加重蒸水80ml使其溶解,调pH8.9,定容至100ml,4℃保存。 4. pH6.7浓缩胶缓冲液:Tris 5.98g ,加1mol/L HCl 48ml,加重蒸水80ml使其溶解,调pH 6.7,定容至100ml,4℃保存。 5. TEMED(四乙基乙二胺)原液 6.10%过硫酸铵(用重蒸水新鲜配制) 7. pH8.3 Tris-甘氨酸电极缓冲液:称取Tris 6.0g,甘氨酸28.8g,加蒸馏水约900ml,调pH8.3后,用蒸馏水定容至1000ml。置4℃保存,临用前稀释10倍。 8. 考马斯亮蓝G250染色液:称100mg考马斯亮蓝G250,溶于200ml蒸馏水中,慢慢加入7.5ml 70%的过氯酸,最后补足水到250ml,搅拌1小时,小孔滤纸过滤。 器材:电泳仪,电泳槽,水浴锅,摇床。 实验操作

电路原理下册

第一章网络图论 图论是数学领域的一个重要分支,是研究自然科学、工程技术、经济管理以及社会问题的一个重要工具。网络图论是图论在网络理论中的应用。现代大型复杂网络的分析计算,都是借助于电子计算机进行的,要将网络结构的信息送入计算机就需要借用网络图论的知识。 本章主要介绍网络图论的基本知识。这是学习本书第二章和第三章的基础。 §1-1 网络的图 意见:(1)“网络的图”是否可简称为“网络图”,更为简明 (2)树枝、连枝全书没统一:有的地方树枝用细实线,连枝虚线,而有的地方树枝用粗实线,连枝用细实线 在电路原理(上册)中介绍特勒根定理时,曾对网络的图作了粗浅介绍,下面将进行系统讨论。 对于任何一个由集中参数元件组成的网络N,如果暂时撇开元件的性质,只考虑元件之间的联接情况,可将网络中的每一个元件(即支路)用一条线段代替(线段长、短、曲、直不论),并仍称之为支路;将每一个元件的端点或若干个元件相联接的点(即节点)用一个圆点表示,并仍称之为节点。如此得到的一个点、线的集合,称为网络N的图,或线形图,用符号G代表。 图1-1-1(a)表示一个无源网络N1和它的图G1。 (a)连通图(b)非连通图

图1-1-1 网络及网络的图 对于网络中的独立源和受控源,除了可以单独作为一条支路处理外,也可采用下述方法处理:将电压源(含受控电压源)连同串联的无源元件作为网络的一条复合支路,在图G中用一条支路表示;将电流源(含受控电流源)连同并联的无源元件作为网络的一条复合支路,在图G中也用一条支路表示。网络中由无源元件与电压源串联,再与电流源并联的部分也可作为一条复合支路,在图G中用一条支路表示。图1-1-1(b)所示网络N2的图G2就是按这种方法处理的。本章对于独立源和受控源均采用上述复合支路处理法。 根据网络的图的定义和绘制原则,网络的图只表明网络中各支路的联接情况,而不涉及元件的性质。因此,可以说网络的图只是用以表示网络的几何结构(或拓扑结构)的图形。此外,网络的图中的支路和节点与相应网络中的支路和节点是一一对应的。 应当指出,网络中的互感表示耦合电感元件之间的磁耦合关系,从属于元件的性质,而不从属于网络的几何性质,因此,在网络图中不予表现。 在网络分析中,一般都要规定网络各支路电流、电压的参考方向。在网络的图中也可规定各支路的参考方向。标明各支路参考方向的图称为有向图。图1-1-1(b)中的G2就是有向图。为了分析方便起见,有向图中每一支路的参考方向均与网络中相应支路参考方向一致。 图1-1-2 图及其子图与补图 如果图G a中的每一个节点和支路都是图G中的节点和支路,即图G a 是图G的一部分,则G a叫做G的子图(subgraph)。图1-1-2中的G a、G b、G c都是G的子图。如果图G的子图G a和G b包含了G的所有支路和节点,

(完整版)SDS-PAGE蛋白电泳方法

SDS-PAGE 一. 实验原理 SDS 是一种阴离子表面活性剂,在蛋白质溶液里加入 SDS 和巯基乙醇后,巯基乙醇能使蛋白质分子中的二硫键还原, SDS 能使蛋白质的氢键、疏水键打开并结合到蛋白质分子上,形成蛋白质-SDS 复合物。在一定条件下,SDS 与大多数蛋白质的结合比例为 1.4:1。由于十二烷基磺酸根带负电,使各种蛋白质的SDS-复合物都带上相同密度的负电荷,它的量大大超过了蛋白质原有的电荷量,因而掩盖了不同种类蛋白质间原有的电荷差别。SDS与蛋白质结合后,还引起了蛋白质构象的改变。蛋白质-SDS复合物的流体力学和光学性质表明,它们在水溶液中的形状,近似于雪茄烟形的长椭圆棒,不同蛋白质的 SDS 复合物的短轴长度都一样,约为 1.8nm ,而长轴则随蛋白质的 Mr 成正比的变化。基于上述原因,蛋白质-SDS 复合物在凝胶电泳中的迁移率,不再受蛋白质原有电荷和形状的影响,而只与椭圆棒的长度有关,也就是蛋白质 Mr 的函数。 二. 试剂器材 30%凝胶贮液(100mL):称取试剂Acr 29.2g和Bis 0.8g置于100mL烧杯中,向烧杯中加入约60mL双蒸水,充分搅拌溶解后加双蒸水定容至100mL,置于棕色瓶内4℃贮存,每过1-2个月应重新配制; 注意:丙稀酰胺具有很强的神经毒性,并可通过皮肤吸收,其作用有积累性,配制时应戴手套和口罩等。 分离胶缓冲液(1.5 mol/L Tris-HCl,pH 8.8,100mL):称取Tris 18.2g 溶于约80mL 双蒸水,用6mol/L的HCl 调整pH值至8.8,加双蒸水定容到100mL,4℃ 贮存;堆积胶缓冲液(0.5 M Tris-HCl,pH 6.8,100mL):称取Tris 6.0g溶于约80mL双蒸水,用1mol/L的HCl 调整pH值至6.8,加双蒸水定容到100mL,4℃ 贮存;

电路原理复习题含答案

电路原理复习题含答案 Document number:PBGCG-0857-BTDO-0089-PTT1998

1.如图所示,若已知元件A 吸收功率6 W ,则电压U 为____3__V 。 2. 理想电压源电压由 本身 决定,电流的大小由 电压源以及外电路 决 定。 3.电感两端的电压跟 成正比。 4. 电路如图所示,则R P 吸= 10w 。 5.电流与电压为关联参考方向是指 电压与电流同向 。 实验室中的交流电压表和电流表,其读值是交流电的 有效值 6. 参考方向不同时,其表达式符号也不同,但实际方向 相同 。 7. 当选择不同的电位参考点时,电路中各点电位将 改变 ,但任意两点 间电压 不变 。 8. 下图中,u 和i 是 关联 参考方向,当P= - ui < 0时,其实际上 是 发出 功率。 9.电动势是指外力(非静电力)克服电场力把 正电荷 从负极经电源内部移 到正极所作的功称为电源的电动势。 10.在电路中,元件或支路的u ,i 通常采用相同的参考方向,称之为 关联参考方向 . 11.电压数值上等于电路中 电动势 的差值。 12. 电位具有相对性,其大小正负相对于 参考点 而言。 13.电阻均为9Ω的Δ形电阻网络,若等效为Y 形网络,各电阻的阻值应为 3 Ω。 14、实际电压源模型“20V 、1Ω”等效为电流源模型时,其电流源=S I 20 A ,内阻=i R 1 Ω。 15.根据不同控制量与被控制量共有以下4种受控源:电压控制电压源、 电压 控电流源 、 电流控电压源 、 电流控电流源 。 16. 实际电路的几何 近似于其工作信号波长,这种电路称集 总参数电路。 17、对于一个具有n 个结点、b 条支路的电路,若运用支路电流法分析,则需 列出 b-n+1 个独立的KVL 方程。 18、电压源两端的电压与流过它的电流及外电路 无关 。 (填写有关/无 关)。 19、流过电压源的电流与外电路 有关 。(填写有关/无关)

电路原理课后习题答案

第五版《电路原理》课后作业 第一章“电路模型和电路定律”练习题 1-1说明题1-1图(a)、(b)中:(1)u、i的参考方向是否关联?(2)ui乘积表示什么功率? (3)如果在图(a)中u>0、i<0;图(b)中u>0、i>0,元件实际发出还是吸收功率? (a)(b) 题1-1图 解 (1)u、i的参考方向是否关联? 答:(a) 关联——同一元件上的电压、电流的参考方向一致,称为关联参考方向; (b) 非关联——同一元件上的电压、电流的参考方向相反,称为非关联参考方向。(2)ui乘积表示什么功率? 答:(a) 吸收功率——关联方向下,乘积p = ui > 0表示吸收功率; (b) 发出功率——非关联方向,调换电流i的参考方向之后,乘积p = ui < 0,表示 元件发出功率。 (3)如果在图(a) 中u>0,i<0,元件实际发出还是吸收功率? 答:(a) 发出功率——关联方向下,u > 0,i < 0,功率p为负值下,元件实际发出功率; (b) 吸收功率——非关联方向下,调换电流i的参考方向之后,u > 0,i > 0,功率p为正值下,元件实际吸收功率; 1-4 在指定的电压u和电流i的参考方向下,写出题1-4图所示各元件的u和i的约束方程(即VCR)。 (a)(b)(c) (d)(e)(f) 题1-4图 解(a)电阻元件,u、i为关联参考方向。 由欧姆定律u = R i = 104 i (b)电阻元件,u、i为非关联参考方向 由欧姆定律u = - R i = -10 i (c)理想电压源与外部电路无关,故u = 10V (d)理想电压源与外部电路无关,故u = -5V

SDSPAGE操作方法要点

S D S P A G E操作方法要点 IMB standardization office【IMB 5AB- IMBK 08- IMB 2C】

SDS-PAGE教程 1SDS-PAGE原理 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS(十二烷基硫酸钠),SDS会与变性的多肽,并使蛋白带负电荷,由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关,因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关,在达到饱和的状态下,每克多肽可与去污剂结合。当分子量在15KDa到200KDa之间时,蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系,符合下式:logMW=K–bX,式中:MW为分子量,X为迁移率,k、b均为常数,若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图,可获得一条标准曲线,未知蛋白质在相同条件下进行电泳,根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。 SDS-PAGE[Laemmli法] 这种方法帖出来,大家是不是感觉非常的陌生呢?其实这种发方法很普遍,现在大部分的实验室都是用Laemmli法跑电泳的。如今实验室中用的最多的蛋白电泳是源于Laemmli于1970年发表在nature上的一篇文章中的方法,这篇文章很特别,不仅被引用的次数较多,而且该篇并不是专门阐述蛋白电泳方法上的提出和改进问题,而是对噬菌体头部包装过程中的蛋白进行分析过程中用到电泳分析方法而已,所以阐述如何操作的文字只有那么一小段(但相当经典),这是SDS-PAGE(不连续系统)的首次成功应用。现在我们在实验室进行的SDS-PAGE试剂的配方仍然是沿用了它的数据,许多论文在描述其SDS-PAGE时引用Laemmli方法,目前常用的具有浓缩胶和分离胶的不连续SDS-PAGE的基础的确来自Laemmli方法,但也略有差别例如一些缓冲液的具体组成。你也许会恍然大悟:原来我们用的就是Laemmli! SDS-PAGE各试剂配制方法

SDS-PAGE电泳实验步骤

垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质 一、实验目的 学习SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS—PAGE)测定蛋白质的分子量的原理和基本操作技术。 二、实验原理 蛋白质是两性电解质,在一定的pH条件下解离而带电荷。当溶液的pH大于蛋白质的等电点(pI)时,蛋白质本身带负电,在电场中将向正极移动;当溶液的pH小于蛋白质的等电点时,蛋白质带正电,在电场中将向负极移动;蛋白质在特定电场中移动的速度取决于其本身所带的净电荷的多少、蛋白质颗粒的大小和分子形状、电场强度等。 聚丙烯酰胺凝胶是由一定量的丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合而成的三维网状孔结构。本实验采用不连续凝胶系统,调整双丙烯酰胺用量的多少,可制成不同孔径的两层凝胶;这样,当含有不同分子量的蛋白质溶液通过这两层凝胶时,受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率。由于上层胶的孔径较大,不同大小的蛋白质分子在通过大孔胶时,受到的阻滞基本相同,因此以相同的速率移动;当进入小孔胶时,分子量大的蛋白质移动速度减慢,因而在两层凝胶的界面处,样品被压缩成很窄的区带。这就是常说的浓缩效应和分子筛效应。同时,在制备上层胶(浓缩胶)和下层胶(分离胶)时,采用两种缓冲体系;上层胶pH=6.7—6.8,下层胶pH=8.9;Tris —HCI缓冲液中的Tris用于维持溶液的电中性及pH,是缓冲配对离子;CI-是前导离子。在pH6.8时,缓冲液中的Gly-为尾随离子,而在pH=8.9时,Gly的解离度增加;这样浓缩胶和分离胶之间pH的不连续性,控制了慢离子的解离度,进而达到控制其有效迁移率之目的。不同蛋白质具有不同的等电点,在进入分离胶后,各种蛋白质由于所带的静电荷不同,而有不同的迁移率。由于在聚丙烯酰胺凝胶电泳中存在的浓缩效应,分子筛效应及电荷效应,使不同的蛋白质在同一电场中达到有效的分离。 如果在聚丙烯酰胺凝胶中加入一定浓度的十二烷基硫酸钠(SDS),由于SDS带有大量的负电荷,且这种阴离子表面活性剂能使蛋白质变性,特别是在强还原剂如巯基乙醇存在下,蛋白质分子内的二硫键被还原,肽链完全伸展,使蛋白质分子与SDS充分结合,形成带负电性的蛋白质—SDS复合物;此时,蛋白质分子上所带的负电荷量远远超过蛋白质分子原有的电荷量,掩盖了不同蛋白质间所带电荷上的差异。蛋白质分子量愈小,在电场中移动得愈快;反之,愈慢。蛋白质的分子量与电泳迁移率之间的关系是: M r =K(10-b·m) logM r =LogK—b·R m , 式中M r ——蛋白质的分子量; logK——截距; b——斜率; R m ——相对迁移率。 实验证明,蛋白质分子量在15,000—200,000的范围内,电泳迁移率与分子量

电子电路图及工作原理

桥式整流电路图及工作原理介绍 桥式整流电路如图1所示,图(a)、(b)、(c)是桥式整流电路的三种不同画法。由电源变压器、四只整流二极管D1~4 和负载电阻RL组成。四只整流二极管接成电桥形式,故称桥式整流。 图1 桥式整流电路图 桥式整流电路的工作原理 如图2所示。

在u2的正半周,D1、D3导通,D2、D4截止,电流由TR次级上端经D1→ RL →D3回到TR 次级下端,在负载RL上得到一半波整流电压 在u2的负半周,D1、D3截止,D2、D4导通,电流由Tr次级的下端经D2→ RL →D4 回到Tr次级上端,在负载RL 上得到另一半波整流电压。 这样就在负载RL上得到一个与全波整流相同的电压波形,其电流的计算与全波整流相同,即 UL = 0.9U2 IL = 0.9U2/RL 流过每个二极管的平均电流为 ID = IL/2 = 0.45 U2/RL 每个二极管所承受的最高反向电压为 什么叫硅桥,什么叫桥堆 目前,小功率桥式整流电路的四只整流二极管,被接成桥路后封装成一个整流器件,称"硅桥"或"桥堆",使用方便,整流电路也常简化为图Z图1(c)的形式。桥式整流电路克服了全波整流电路要求变压器次级有中心抽头和二极管承受反压大的缺点,但多用了两只二极管。在半导体器件发展快,成本较低的今天,此缺点并不突出,因而桥式整流电路在实际中应用较为广泛。

二极管整流电路原理与分析 半波整流 二极管半波整流电路实际上利用了二极管的单向导电特性。 当输入电压处于交流电压的正半周时,二极管导通,输出电压v o=v i-v d。当输入电压处于交 流电压的负半周时,二极管截止,输出电压v o=0。半波整流电路输入和输出电压的波形如图所 示。 二极管半波整流电路 对于使用直流电源的电动机等功率型的电气设备,半波整流输出的脉动电压就足够了。但对于电子电路,这种电压则不能直接作为半导体器件的电源,还必须经过平滑(滤波)处理。平滑处理电路实际上就是在半波整流的输出端接一个电容,在交流电压正半周时,交流电源在通过二极管向负载提供电源的同时对电容充电,在交流电压负半周时,电容通过负载电阻放电。 电容输出的二极管半波整流电路仿真演示 通过上述分析可以得到半波整流电路的基本特点如下:

SDS-PAGE及Western Blot简明操作指南

SDS-PAGE及Western Blot简明操作指南 一.蛋白样品制备 ?推荐使用RIPA裂解液。一般使用强裂解液,对于coIP可用弱裂解液。 1.准备工作: 1)取足量裂解液,加入PMSF和(或)蛋白酶抑制剂;若要检测蛋白磷酸化,推荐加 入磷酸酶抑制剂。置于冰上预冷。 2)准备足量PBS,置于冰上预冷。 3)提前打开离心机预冷至4度。 2.裂解样品:(注意保持样品处于冰上,4度离心) 1)动物组织:取1g左右置入离心管,加入配制好的裂解液0.5-1ml,置于冰上,用匀 浆器充分匀浆; 2)悬浮细胞:以6孔板的一个孔为例(面积约10平方cm);300g离心10分钟,去 除培养基,收集细胞;1ml 预冷的PBS重悬后,转移到1.5ml离心管中,300g离 心10分钟,去除上清;加入60-200ul裂解液重悬细胞,置于冰上,裂解5-10分 钟;裂解期间,每隔一分钟使用涡旋仪震荡5秒或使用移液器吹打5秒。 3)贴壁细胞:以6孔板的一个孔为例(面积约10平方cm);去除培养基,用1ml PBS 洗涤细胞;去除PBS,加入60-200ul裂解液,置于冰上,裂解2-3分钟;用细胞铲 刮掉细胞,用移液器转移到1.5ml离心管中;置于冰上,裂解5-10分钟,裂解期 间,每隔一分钟使用涡旋仪震荡5秒或使用移液器吹打5秒。 3.收集蛋白: 1)将上述裂解样品于4度10000g离心10-20分钟,转移上清至一新的离心管,此即 为蛋白样品。此处样品可于-20或-80度长期保存。 4.蛋白的相对定量:BCA法 ?为保证各样品western上样蛋白量一致,须定量蛋白;推荐相对定量;绝对定量需要在本方法基础上额外做BSA标准曲线。 ?备注:每个蛋白要做2个重复,blank对照须使用步骤2中的裂解液。 1)参考说明书,配制足量BCA工作液(多配制10%,以免不足); 2)取一96孔酶标板,在要用到的孔中加入上述BCA工作液,每孔100ul; 3)在上述孔中分别加入1-2ul各蛋白样品及blank对照; 4)将酶标板于37度孵育10-30分钟,直到出现较明显颜色变化即可; 5)测定吸光度; 6)计算相对蛋白含量:各吸光度去除blank背景,以吸光度最低者为参考,进行归一 化处理,即计算吸光度倍数关系;western上样时,须依据此倍数关系调整各样品 上样体积,以保证各样品上样蛋白量一致。 5.western用蛋白样品的制备: 1)向步骤3中的蛋白样品中,按1:4体积比例,加入5XSDS-PAGE loading buffer, 混匀; 2)80-90度加热10分钟,变性蛋白。此处样品可保存于4或-20度。

电路原理第二章课后习题答案

答案2.1 解:本题练习分流、分压公式。设电压、电流参考方向如图所示。 (a) 由分流公式得: 23A 2A 23 I R Ω?==Ω+ 解得 75R =Ω (b) 由分压公式得: 3V 2V 23 R U R ?==Ω+ 解得 47 R =Ω 答案2.2 解:电路等效如图(b)所示。 20k Ω 1U + - 20k Ω (b) + _ U 图中等效电阻 (13)520 (13)k //5k k k 1359 R +?=+ΩΩ= Ω=Ω++ 由分流公式得: 220mA 2mA 20k R I R =? =+Ω 电压 220k 40V U I =Ω?= 再对图(a)使用分压公式得: 13==30V 1+3 U U ? 答案2.3 解:设2R 与5k Ω的并联等效电阻为 2325k 5k R R R ?Ω=+Ω (1) 由已知条件得如下联立方程:

32 113 130.05(2) 40k (3) eq R U U R R R R R ?==?+??=+=Ω ? 由方程(2)、(3)解得 138k R =Ω 32k R =Ω 再将3R 代入(1)式得 210k 3 R =Ω 答案2.4 解:由并联电路分流公式,得 1820mA 8mA (128)I Ω =?=+Ω 2620mA 12mA (46)I Ω =?=+Ω 由节点①的KCL 得 128mA 12mA 4mA I I I =-=-=- 答案2.5 解:首先将电路化简成图(b)。 图 题2.5 120Ω (a) (b) 图中 1(140100)240R =+Ω=Ω 2(200160)120270360(200160)120R ??+?=+Ω=Ω??++? ? 由并联电路分流公式得 2 112 10A 6A R I R R =?=+ 及 21104A I I =-= 再由图(a)得 32120 1A 360120 I I =? =+ 由KVL 得,

SDS-PAGE标准操作规程

SDS-PAGE标准操作规程 一、试剂 (一)储存液 (1)2M Tris-HCl (pH8.8),100ml 称取24.2g Tris碱; 加50ml蒸馏水; 缓慢的加浓盐酸至pH8.8(约加4ml);让溶液冷却至室温,pH将会升高; 加蒸馏水至100ml。 (2)1M Tris-HCl(pH6.8),100ml 称取12.1g Tris碱; 加50ml蒸馏水; 缓慢的加浓盐酸至pH6.8(约加8ml);让溶液冷却至室温,pH将会升高; 加蒸馏水至100ml。 (3)10%(w/v)SDS,100ml。室温保存 称取10g的SDS; 加蒸馏水至总量为100ml。 (4)50%(v/v)甘油,100ml 倒取50ml 100%的甘油; 加入50ml蒸馏水。 (5)1%(w/v)溴酚蓝,10ml 称取100mg溴酚蓝; 加蒸馏水至10ml,搅拌直到完全溶解; 过滤除去聚合的染料。 (二)工作液 (1)30%(w/v)丙烯酰胺/0.8%(w/v)双丙烯酰胺 30g丙烯酰胺 0.8g双丙烯酰胺 注意:未聚合的丙烯酰胺是一种皮肤刺激物和神经毒素,操作时必须戴手套在通风柜操作,加蒸馏水至100ml,缓慢搅拌直至丙烯酰胺粉末完全溶解,过0.45μm滤膜。 可在4℃存放数月。 (2)4×Tris-Cl/SDS (pH8.8 1.5M Tris-Cl Containing 0.4%SDS) 91g Tris base 2g SDS 加水300ml,用1N HCl调pH至8.8,再加水至500ml过0.45μm滤膜,4℃存放

(3)4×Tris-Cl/SDS (pH6.8 0.5M Tris-Cl Containing 0.4%SDS) 6.05g Tris base 0.4g SDS 加水40ml,用1N HCl调pH至6.8,再加水至100ml过0.45μm滤膜,4℃存放 (4)10%过硫酸铵APS 0.1g过硫酸铵 1ml蒸馏水 长期不用应-20℃干燥分装保存,临用前再加D.W。 (5)5×电泳缓冲液 15.1g Tris碱 72.0g甘氨酸 5.0g SDS 加蒸馏水至1L,pH应该在8.3左右。 (6)5×样品缓冲液,10ml 0.6ml 1mol/L的Tris-HCl(pH6.8) 60mmol/L 5ml 50%的甘油25% 2ml 10%的SDS 2% 0.5ml 2-巯基乙醇14.4mmol/L 1ml 1%溴酚蓝0.1% 0.9ml的蒸馏水 可在4℃保存数周,或在-20℃保存数月。 (7)考马斯亮兰染色液 1.0g R-250 450ml甲醇 450ml D.W 100ml冰醋酸 (8)脱色液 100ml甲醇 100ml冰醋酸 800ml D.W (9) 二、步骤 1.准备先将电泳玻璃平板洗干净,用95%乙醇擦净,晾干,固定于平板固定架上。(注 意:①高低板方向正确,底面要平,必要时可用凡士林封底;②玻璃平板固定高低时四个螺丝应依次适当旋紧,再装于固定器架) 2.制胶

SDS-PAGE操作方法要点

SDS-PAGE教程 1 SDS-PAGE原理 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS(十二烷基硫酸钠),SDS会与变性的多肽,并使蛋白带负电荷,由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关,因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关,在达到饱和的状态下,每克多肽可与1.4 g去污剂结合。当分子量在15 KDa 到200 KDa之间时,蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系,符合下式:log MW = K –bX,式中:MW为分子量,X为迁移率,k、b均为常数,若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图,可获得一条标准曲线,未知蛋白质在相同条件下进行电泳,根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。 SDS-PAGE [Laemmli法] 这种方法帖出来,大家是不是感觉非常的陌生呢?其实这种发方法很普遍,现在大部分的实验室都是用Laemmli法跑电泳的。如今实验室中用的最多的蛋白电泳是源于Laemmli于1970年发表在nature上的一篇文章中的方法,这篇文章很特别,不仅被引用的次数较多,而且该篇并不是专门阐述蛋白电泳方法上的提出和改进问题,而是对噬菌体头部包装过程中的蛋白进行分析过程中用到电泳分析方法而已,所以阐述如何操作的文字只有那么一小段(但相当经典),这是SDS-PAGE(不连续系统)的首次成功应用。现在我们在实验室进行的SDS-PAGE 试剂的配方仍然是沿用了它的数据,许多论文在描述其SDS-PAGE时引用Laemmli方法,目前常用的具有浓缩胶和分离胶的不连续SDS-PAGE的基础的确来自Laemmli方法,但也略有差别例如一些缓冲液的具体组成。你也许会恍然大悟:原来我们用的就是Laemmli!

sdspage操作方法资料

精品文档 SDS-PAGE教程 1 SDS-PAGE原理 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS(十二烷基硫酸钠), SDS会与变性的多肽,并使蛋白带负电荷,由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关,因此SDS多肽复合物在丙稀酰胺凝胶电泳中的迁移率只与多肽的大小有关,在达到饱和的状态下,每克多肽可与1.4 g去污剂结合。当分子量在15 KDa到200 KDa之间时,蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系,符合下式:log MW = K – bX,式中:MW为分子量,X为迁移率,k、b均为常数,若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量对数作图,可获得一条标准曲线,未知蛋白质在相同条件下进行电泳,根据它的电泳迁移率即可在标准曲线上求得分子量。 SDS-PAGE [Laemmli法] 这种方法帖出来,大家是不是感觉非常的陌生呢?其实这种发方法很普遍,现在大部分的实验室都是用Laemmli法跑电泳的。如今实验室中用的最多的蛋白电泳是源于Laemmli于1970年发表在nature上的一篇文章中的方法,这篇文章很特别,不仅被引用的次数较多,而且该篇并不是专门阐述蛋白电泳方法上的提出和改进问题,而是对噬菌体头部包装过程中的蛋白进行分析过程中用到电泳分析方法而已,所以阐述如何操作的文字只有那么一小段(但相当经典),这是 SDS-PAGE(不连续系统)的首次成功应用。现在我们在实验室进行的SDS-PAGE试剂的配方仍然是沿用了它的数据,许多论文在描述其SDS-PAGE时引用Laemmli方法,目前常用的具有浓缩胶和分离胶的不连续SDS-PAGE的基础的确来自Laemmli方法,但也略有差别例如一些缓冲液的具体组成。你也许会恍然大悟:原来我们用的就是Laemmli!

第五版《电路原理》课后作业

第一章“电路模型和电路定律”练习题 1-1说明题1-1图(a)、(b)中:(1)u、i的参考方向是否关联?(2)ui乘积表示什么功率? (3)如果在图(a)中u>0、i<0;图(b)中u>0、i>0,元件实际发出还是吸收功率? (a)(b) 题1-1图 解 (1)u、i的参考方向是否关联? 答:(a) 关联——同一元件上的电压、电流的参考方向一致,称为关联参考方向; (b) 非关联——同一元件上的电压、电流的参考方向相反,称为非关联参考方向。(2)ui乘积表示什么功率? 答:(a) 吸收功率——关联方向下,乘积p = ui > 0表示吸收功率; (b) 发出功率——非关联方向,调换电流i的参考方向之后,乘积p = ui < 0,表示 元件发出功率。 (3)如果在图(a) 中u>0,i<0,元件实际发出还是吸收功率? 答:(a) 发出功率——关联方向下,u > 0,i < 0,功率p为负值下,元件实际发出功率; (b) 吸收功率——非关联方向下,调换电流i的参考方向之后,u > 0,i > 0,功率p为正值下,元件实际吸收功率; 1-4 在指定的电压u和电流i的参考方向下,写出题1-4图所示各元件的u和i的约束方程(即VCR)。 (a)(b)(c) (d)(e)(f) 题1-4图 解(a)电阻元件,u、i为关联参考方向。 由欧姆定律u = R i = 104 i (b)电阻元件,u、i为非关联参考方向 由欧姆定律u = - R i = -10 i (c)理想电压源与外部电路无关,故u = 10V (d)理想电压源与外部电路无关,故u = -5V (e) 理想电流源与外部电路无关,故i=10×10-3A=10-2A (f)理想电流源与外部电路无关,故i=-10×10-3A=-10-2A

SDS-PAGE具体步骤

(一)安装夹心式垂直版电泳槽 各部分依下顺序安装: 装上储槽和固定螺丝销钉,仰放在桌面上; 将长、短玻璃板分别插到硅胶框的凹形槽中。注意勿用手接触灌胶面,以保持玻璃清洁; 将已插好玻璃板的凝胶模平方在储槽上,短玻璃板应面对上储槽; 将下储槽的销孔对准已装好螺丝销钉的上储槽,双手以对角线的方式旋紧螺丝帽。竖直电泳槽,用细头长滴管吸取已熔化的1%琼脂(糖)溶液,封住长玻璃板下端与硅胶膜间的缝隙。加琼脂(糖)溶液时,应防止气泡进入。琼脂(糖)溶液用不连续体系电极缓冲液配制。 (二)配胶及凝胶板的配制 1、配胶 配胶应根据所测蛋白质相对分子质量范围选择适宜的分离胶浓度。 2、凝胶板的配制 分离胶的制备: 按表配制20mL10%的聚丙烯酰胺(PAA)溶液,混匀后用细长头滴管将凝胶液加至长、短玻璃板之间的缝隙内,约8cm高,用1mL注射器取少许蒸馏水,沿长玻璃板壁缓慢注入,约3~4mm高,以进行水封。30min后,凝胶与水封层间出现折射率不同的界线,则表示凝胶完全聚合。倾去水封层的蒸馏水,再用滤纸条吸去多余水分。 浓缩胶的制备: 按表配制10mL3%的PAA,混匀后用细长头滴管将浓缩胶加到已聚合的分离胶上方,直至距离玻璃板上缘约0.5cm处轻轻将样品槽模板插入浓缩胶内,约30min后凝胶聚合,再放置20~30min,使凝胶“老化”。小心拔去样品槽模板,将pH值为8.3的Tris-甘氨酸缓冲液倒入上、下储槽中,应没过短玻璃板0.5cm以上,即可准备加样。 (电极缓冲液即pH值为8.3的T ris-甘氨酸缓冲液,内含0.1%的SDS) (三)样品的处理与加样 样品的处理: 称取0.5~1mg蛋白质加1mL样品溶解液处理,溶解后,在100摄氏度沸水浴中保温3min,取出冷却后取样电泳。(如处理好的样品暂时不用,可放在-20摄氏度冰箱内保存,使用前在100摄氏度沸水中加热3min,以除去亚稳态聚合物。) 加样: (加样体积要根据凝胶厚度及样品浓度灵活掌握,一般加样体积为10~15uL(即 2~10ug蛋白);如样品较稀,加样体积可达100uL。如样品槽中有气泡,可用注射器针头跳出。)加样时,将微量注射器的针头穿过电极缓冲液深入加样槽内,应尽量接近底部,轻轻推动微量注射器,注意针头勿碰破凹形槽胶面。(由于样品溶解液中含有相对密度较大的蔗

电路原理复习题(含答案)

1.如图所示,若已知元件A 吸收功率6 W ,则电压U 为____3__V 。 2. 理想电压源电压由 本身 决定,电流的大小由 电压源以及外电路 决定。 3.电感两端的电压跟 成正比。 4. 电路如图所示,则 R P 吸 = 10w 。 5.电流与电压为关联参考方向是指 电压与电流同向 。 实验室中的交流电压表和电流表,其读值是交流电的 有效值 6. 参考方向不同时,其表达式符号也不同,但实际方向 相同 。 7. 当选择不同的电位参考点时,电路中各点电位将 改变 ,但任意两点间电压 不变 。 8. 下图中,u 和i 是 关联 参考方向,当P= - ui < 0时,其实际上是 发出 功率。

9.电动势是指外力(非静电力)克服电场力把正电荷从负极经电源内部移到正极所作的功称为电源的电动势。 10.在电路中,元件或支路的u,i通常采用相同的参考方向,称之为关联参考方向 . 11.电压数值上等于电路中电动势的差值。 12. 电位具有相对性,其大小正负相对于参考点而言。 13.电阻均为9Ω的Δ形电阻网络,若等效为Y形网络,各电阻的阻值应为 3 Ω。 14、实际电压源模型“20V、1Ω”等效为电流源模型时,其电流源= I S 20 A,内阻= R 1 Ω。 i 15.根据不同控制量与被控制量共有以下4种受控源:电压控制电压源、电压控电流源、 电流控电压源、电流控电流源。 16. 实际电路的几何近似于其工作信号波长,这种电路称集总参数电路。 17、对于一个具有n个结点、b条支路的电路,若运用支路电流法分析,则需列出 b-n+1 个独立的KVL方程。

18、电压源两端的电压与流过它的电流及外电路无关。(填写有关/无关)。 19、流过电压源的电流与外电路有关。(填写有关/无关) 20、电压源中的电流的大小由电压源本身和外电路共同决定 21、在叠加的各分电路中,不作用的电压源用短路代替。 22、在叠加的各分电路中,不作用的电流源用开路代替。 23、已知电路如图所示,则结点a的结点电压方程为(1/R1+1/R2+1/R3)Ua=Is-Us/R2 。 2 S —— R1 R3 U S + 24、列出下图所示电路的结A点电压方程

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