B细胞淋巴瘤分子发病机制的研究进展

　第18卷　第2期医学研究生学报Vol.18　No.2　2005年2月Journal of Medical Postgraduates Feb.2005

?综述?B细胞淋巴瘤分子发病机制的研究进展

杨继红综述,　于亚平审校

(南京军区南京总医院血液病科,江苏南京210002)

摘要:　B细胞淋巴瘤(BCL)是一组包含多种不同,临床表现和分子生物学特征的肿瘤。根据分子发病机制的不同可分为低生长比率BC L和高生长比率BCL。低生长比率BC L的发病主要为凋亡调控异常致使细胞凋亡受抑,而并无明显的细胞增殖异常。与此相反,高增长比率BCL是因参与细胞周期调控的癌基因异常(如B cl26和c2m yc)致细胞增殖增加所致。部分低或高增长比率BCL均可获得另外的分子异常,主要为周期素依赖激酶抑制剂异常,从而进展为高度侵袭性淋巴瘤。

关键词:　B细胞;　淋巴瘤;　凋亡;　细胞周期

中图分类号:　R733.4 文献标识码:　A 文章编号:　100828199(2005)022********

Recent progress i n molecular pathogenesis of B2cell lymphoma

Y ANG J i2hong revie w ing,Y U Ya2p ing checking

(Depart m ent of He m atology,N anjing General Hospital of N anjing M ilitary Co mm and,PLA,N anjing210002,J iangsu,China)

Abstract:　B2cell ly mphomas(BCL)are the most frequent types of ly mphoma and encompasses different entites with variable clinical behavi or and diverse molecular features.I n general ter m s,it can be subdivi2 ded int o2main gr oup s,l ow2and high2gr owth fracti on ly mphomas.I n l ow2gr owth fracti on ly mphomas, cell accu mulati on can be achieved thr ough the inhibiti on of apop t osis without a very severe deregulati on of cell p r oliferati on.I n contrast,high2gr owth fracti on BCL are characterized by an enhanced p r oliferative activity,as a result of the deregulati on of oncogenes with cell cycle regulat ory functi ons,such as B cl6 and c2m yc.A fracti on of both l ow2and high2gr owth ly mphomas acquire additi onal alterati ons in cell cycle contr ol,usually involving cyclin2dependent kinase inhibit ors and evolve t o highly aggressive tumors.

Key words:　B2cell;　Ly mphoma;　Apop t osis;　Cell cycle

0　引言

恶性淋巴瘤是原发于淋巴系统的一组不同病理类型和不同临床行为的肿瘤,各型具有各自特征性的分子生物学改变。细胞周期调控和凋亡异常在淋巴瘤的发病中起着重要的作用。据此,可将临床上最常见的B细胞淋巴瘤(BCL)分为两种主要类型,即低生长比例(l o w2gr owth fracti on,LGF)和高生长比例(high2gr owth fracti on,HGF)淋巴瘤,大体上与国际淋巴瘤研究组病理组织学分类的低度恶性和高度恶性相对应。本文就BCL分子发病机制的研究进展作一综述。

1　低生长比例B细胞淋巴瘤

LGF的BCL包括滤泡性淋巴瘤(F L)、边缘带淋巴瘤(MZ L)、套细胞淋巴瘤(MCL)和B细胞慢性淋

3收稿日期:　2004203219;　修订日期:　2004205217

作者简介:　杨继红(19542),女,上海市人,副主任医师,医学本科,从事血液病科专业。

巴细胞白血病(B2CLL)。该型特点为:细胞增殖指数相对较低,细胞体积小,淋巴结肿大明显,呈大块型,确诊时临床分期虽多为中晚期,但侵袭性低。LGF的BCL的临床病理特征是凋亡调控蛋白异常致凋亡受抑,细胞获得生存优势而生存期延长的结果。细胞凋亡可由内源性和外源性两条途径发起[1]:“外源性”途径由肿瘤坏死因子(T NF)受体或Fas等死亡受体与各自配体结合,从而导致胱冬肽酶8(Cas pases28)活化;“内源性”或“线粒体”途径主要通过B cl22家族成员易位至线粒体,使线粒体膜渗透性改变而释放细胞色素C。Cas pases28和29作为凋亡始动因子,激活凋亡效应因子参与上述两条途径的各种蛋白异常,均与淋巴瘤的发病有关。

1.1　Bcl22蛋白家族的改变　Bcl22是一种与线粒体结构密切相关的稳定蛋白,主要位于线粒体的外膜、核膜以及内质网等结构中,通过线粒体(内源性途径)抑制细胞凋亡。累及B cl22基因的染色体易位t(14;18)(q32;q21)是F L的特征性改变,见于70%～90%的F L患者[2]。易位的B cl22基因在免疫球蛋白重链基因增强子的控制下,致Bcl22蛋白高表达而抑制凋亡,使B细胞生存期延长。部分F L 患者的Bcl22表达并不依赖易位的存在,少数患者甚至缺乏Bcl22表达,这提示肿瘤细胞还可通过非B cl22过渡表达机制获得凋亡抑制。此外,当在初始抑制凋亡病变的基础上再出现关键的细胞周期调控基因,如p53,p16I N K4A或c2m yc等异常,F L即可进展为更具侵袭性的变异型。

1.2　核因子κB(NF2κB)生存途径　NF2κB是细胞主要的信号传递通道,除参与细胞生长、分化、免疫和炎症反应的调控外,另一重要功能是通过诱导四种主要凋亡抑制因子(I A P21、I A P22、T RAF1和TRAF2)的表达而抑制细胞凋亡。Fur man等[3]发现,未经刺激的B2CLL的B细胞核中NF2κB活性明显增高,是正常B细胞的

2.5倍,而且CD40与配体(CD145)结合可进一步增强NF2κB的活性,使细胞生存期延长。

黏膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤最常见的染色体结构异常t(11;18)(q21;q21)发生率为30%～50%,所累及MLT(MALT2Ly mphoma ass ociated transl ocati on)基因产生的AP I22MLT融合蛋白能使细胞程序性死亡抑制作用增强,从而赋予淋巴瘤细胞生存优势[4,5]。Baens等[6]对胃淋巴瘤的研究发现,48%不包含大细胞成分的胃边缘区淋巴瘤可检出AP I22MLT融合蛋白,但其他类型的胃淋巴瘤均阴性。

MALT淋巴瘤另一染色体结构异常t(1;14) (p22;q32)易位,使B cl210与免疫球蛋白重链基因相融合,导致B cl210高表达。在正常淋巴组织中B cl210只存在于细胞质,而MALT淋巴瘤时B cl210定位于细胞核,且有染色体易位者水平高于先易位者[7]。核内B cl210异常表达与t(11;18)异常同时出现,提示为疾病晚期。L iu等[8]分别对MALT淋巴瘤、幽门螺杆菌(HP)胃炎和黏膜弥漫性大B细胞性淋巴瘤(DLBCL)进行RT2PCR检测,结果发现HP胃炎和DLBCL AP I22MLT1融合蛋白阴性,而在35%的MALT淋巴瘤中检出AP I22MLT1融合蛋白,其中53%同时有B cl210高表达。进一步研究还发现,t(11;18)阳性者中B cl210表达率明显高于t(11;18)阴性者,分别为100%和23%。胞核B cl2 10和MLT1形成特定的复合物,与AP I2/MLT融合蛋白相互作用,依靠共同的下游信号因子活化NF2κB,从而增强了细胞程序性死亡抑制作用。

1.3　Fas死亡受体基因突变　Fas诱导的凋亡参与生发中心B细胞的负性选择过程,大约20%源自生发中心或后生发中心B细胞的淋巴瘤(F L、MALT、LBCL)有Fas基因体细胞突变,淋巴结外淋巴瘤则更为常见。来源于未成熟B细胞或前生发中心B 细胞的淋巴瘤(MCL、B2CLL)中未发现有体细胞的突变,但显示有Fas基因表达下调,并对Fas诱导的凋亡具有抵抗性,这可能是B2CLL细胞体内生存期延长的原因。尽管它们发病机制有所不同,Fas凋亡通道被破坏是其共同点[9]。

1.4　其他改变　MCL时的t(11;14)(q13;q32)异常使cyclin D1基因与IgH基因增强子(Eμ)并置,因而MCL时几乎100%有Cyclin D1高表达。但是,在Eμ2Cyclin D1转基因鼠,Cyclin D1高表达并不足以促进恶性转化,这提示MCL的进展除Cyclin D1高表达外,还需有其他凋亡调节途径的异常改变,如线粒体凋亡通路中的B cl22上调,细胞色素C和Cas pase9下调和死亡受体信号通路中的F ADD等下调[9]以及其他一些刺激细胞周期进展的基因(CD K4、MDM2、SKP2、m yc等)参与。t(9;14) (p13;q32)易位使P AX5与I gH并置是淋巴浆细胞样淋巴瘤(LP L)的特征异常,在其他BCL如脾边缘区淋巴瘤(S MZ L)非常罕见[9]。正常情况下,终末分化的B细胞中P AX5呈低表达,P AX5在此阶段不恰当的高表达是LP L发病的原因。

2　高生长比例B细胞淋巴瘤

HGF、BCL包括大B细胞淋巴瘤(LBCL)和伯基

?医学研究生学报2005年2月　第18卷　

特淋巴瘤(BL)。临床病理特点为细胞增殖指数高,从大细胞增殖为主,诊断时临床分期虽较局限,但侵袭性高。主要分子改变为B cl26或c2m yc等细胞周期调节基因的异常,并常同时伴有凋亡受阻。

2.1　B cl26在淋巴瘤发病中的作用　B cl26在一组有累及3q27染色体易位的F L和LBCL中获得鉴定,是具有调控细胞周期、细胞分化和免疫应答等多种功能的调节因子[11],在淋巴细胞中具有较高的B cl26mRNA蛋白水平。大约20%～40%LBCL可因3q27染色体异常累及B cl26基因重排,但原发性纵隔大B细胞淋巴瘤时B cl26重排很罕见。这提示虽然它们组织病理学均表现为大B细胞样改变,但发病机制不同。进一步的研究发现,B cl26表达水平的高低取决于染色体易位时所累及的伙伴染色体,即B cl26与免疫球蛋白(I g)位点相互易位(I g/ B cl26)时,其表达水平明显高于非免疫球蛋白间易位(non2I g/B cl26)。Rosenwald等[12]根据基因表达谱将240例DLBCL患者分为三种亚型:即①生发中心B细胞样DLBCL,表达正常生发中心B细胞特征抗原;②活化B细胞样DLBCL,表达有丝分裂原活化的血B细胞特征抗原;③第三型DLBCL,不表达上述两型的特征基因。B cl26高表达是生发中心B 细胞样DLBCL亚型的特有表现,其特征为低浸润,高c2Rel扩增频率,易累及B cl22基因,化疗后生存期较长。Loss os等[13]亦发现B cl26高表达和体细胞突变的患者总生存期(OS)优于低表达和非突变者,分别为171个月和24个月(P=0.007),2年总生存率(OSR)分别为58.3%和17.6%。

2.2　c2m yc转录因子的改变　c2m yc主要参与细胞周期调节、细胞凋亡以及细胞增殖等功能的调节。c2m yc与正调节的生长因子协同促进细胞增殖,而与具有负调控的生长抑制基因Fas、Fasl和B ax结合后可加速细胞凋亡。在所有BL患者都有染色体结构异常,其中80%BL为t(8;14)(q24;q32)易位,使8q24位置上的c2m yc基因与14q32上的免疫球蛋白重链(I gH)基因的C区融合,另各有10%的BL为t(2;8)(p12;q24)和t(8;22)(q24;q11)变异易位,分别累及I gK的C区和I g L的V区,6%LBCL也发现有c2m yc易位[14]。所有易位均使c2m yc置于I g增强子的控制下,从而导致c2m yc表达异常,这是BL 起病的关键所在。

3　高侵袭性淋巴瘤

LGF和HGF的BCL如在原有分子改变的基础上,再出现主要肿瘤抑制基因途径的异常,即进展为高度侵袭性淋巴瘤(highly aggressive ly mphoma, HAL)。肿瘤抑制基因异常最常为周期蛋白激酶抑制因子(CKI)异常,事实上,不管何种组织类型,CKI

失活均是HAL的标志。调节细胞周期G

/S期转变的三条通路,即P16I N K4A2cyclin D2CDK42Rb、P14ARF2 MDMZ2P532P21C IP1和P27KIP12cyclin E2CDK2在几乎所有HAL均有异常[15]。

3.1　Rb通路的改变　R b(retinoblasto m a,R b)基因最早在视网膜母细胞瘤中发现,之后在许多其他类型的肿瘤相继观察到R b基因的突变或功能缺乏,是目前最受重视的肿瘤抑制基因之一。在反应性淋巴组织中Rb蛋白的表达类型与作为增殖标志的Ki67相同,均优先在生发中心B细胞和皮质胸腺细胞表达。在不同类型的淋巴瘤中,R b基因表达亦不相同,HGF BCL中R b表达水平高于LGF BCL,母细胞化MCL的R b表达和磷酸化水平均较传统型高。在LBCL,R b缺失提示很难获得完全缓解、预后不良、生存期短[9]。目前已知的三型cyclin D(D1,D2和D3)中,以cyclin D3在淋巴组织中的表达最为广泛,主要见于正在增殖的淋巴细胞如生发中心或滤

泡间区淋巴细胞。以往认为Cyclin D3是细胞从G

1期向S期转变的主要调节因子,而非原癌基因, t(6;14)(p21.1;q32.3)易位是cyclin D3异常表达的遗传基础。近年来,在LBCL和MZ L通过长距离反向PCR方法检测出6p21.1断裂点在cyclin D3 (CCND3)基因的5′端,使用I gH探针进行荧光原位杂交方法存在CCND3和I gH融合。这表明CCND3作为显性原癌基因在t(6;14)异常的BCL发病中发挥作用[16]。Fili p its等[17]报道81例以前未治疗的DLBCL,淋巴瘤细胞免疫染色cyclin D3阳性率为0～100%(中位数30%)。cyclin D3高表达(cyclin D3阳性淋巴瘤细胞≥50%)与低表达相比,前者提示临床进展,常伴有多部位结外病变,完全缓解率(CR)和OS明显低于后者(CR分别为17%和74%,P<0.001;3年OS分别为18%和74%,P< 0.001)。多变量分析示,cyclin D3高表达对CR和OS有独立判断预后作用[17]。I N K4家族的p16I N K4A 基因在反应性淋巴组织所有区域均表达,生发中心和滤泡间内等增殖区域表达轻度增加,休止期淋巴细胞为主的边缘区呈低表达。LGF BCL小和中等大小的肿瘤细胞p16I N K4A表达正常,HGF BCL50%以上P16I N K4A表达部分或完全缺失,p16I N K4A低表达是LGF/HGF BCL向侵袭性淋巴瘤转变的信号,F L和MCL进展为侵袭性BCL时,常伴有9p21缺失所致的p16I N K4A表达降低或缺如。

　第2期杨继红,等　B细胞淋巴瘤分子发病机制的研究进展

3.2　p53通路的异常　m dm2是p53激活的靶基因之一,它可以抑制p53,并利用E32蛋白连结酶活性使P53降解,诱导P21C IP1与CDK2Cyclin复合物结合,抑制蛋白激酶活性,阻滞细胞周期进行[18]。HGF BCL时p53基因突变最常见,见于17%～25%的LBCL和BL,明显高于LGF BCL。此外p53突变也与MALT淋巴瘤和F L的大细胞转化及MCL的母细胞变异型密切相关,这支持p53灭活是淋巴瘤自低度恶性向高度恶性进展的原因。md m2高表达是不依赖于p53突变而引起p53灭活的替代机制,与LBCL和LGF BCL的疗效及预后直接相关。m dm2高表达是否存在遗传基础还不十分明确,一些研究证实,BCL无m dm2基因扩增现象,然而另一组在14%LBCL患者中发现12q13区扩增,这可使m dm2的基因拷贝数有效增加[9]。HAL时10%～20%患者有9p21单等位基因或双等位基因缺失,这些改变均潜在的影响了肿瘤细胞p16I N K4A和p14AR F表达[19]。p14AR F高表达使细胞周期调节通路的传感器障碍,肿瘤细胞表现高生长性、高侵袭性和生存期短等临床特征。

3.3　p27KIP1的改变　在G1/S期转变过程中,p27KIP1等CKI家族成员与CDK42cyclin D连结,保留了激酶的活性,有助于晚G

期Rb进一步磷酸化。p27KIP1介导CDK22cyclin E负调节活性,在反应性淋巴组织和淋巴瘤中p27KIP1表达与细胞增殖均呈负相关,休止期细胞p27KIP1强表达,增殖期细胞低表达。Chil osi等[20]报道,LGF BCL中小淋巴细胞p27KIP1表达较强,大细胞呈阴性反应,而在LBCL和BL p27KIP1为零表达。但一个例外的发现是:在一组LBCL和BL中检出高水平的p27KIP1表达。进一步对LBCL大宗资料分析显示[21]:①LBCL的p27KIP1表达范围差异较大,可从完全缺乏至高表达;②LBCL时p27KIP1和细胞增殖之间不存在正或负相关性;③p27KIP1表达高水平是LBCL的不良预后因素,与OS和无病生存期(DFS)短密切相关。

总之,凋亡抑制、细胞周期调节因子及肿瘤抑制通路异常等多种机制破坏了细胞分化和死亡的生理平衡,导致LGF和HGF BC L的发生及向HAL的演变。

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(责任编辑:李风华;　英文编辑:徐　军)

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