RT-PCR方法检测白血病中NUP98-HOX融合基因的初步研究

中国实验血液学杂志Ｊｏ“ｒｎｎｚ吖、Ｅｚ印ｒｉｍＰ”ｆ口ｚＨＰｍｎｆｏｚ０＿削２００５；１３（１）：８３—８７

文章编号（ＡｒｔｉｃｌｅＩＤ）：１００９—２１３７（２００５）０１—００８３—０５

ＲＴ．ＰＣＲ方法检测白血病中ＮＵＰ９８．ＨＯＸ

融合基因的初步研究

张琰，李玲１，温丙昭１，林仁勇，曹旭２，王宁２，哈力达?牙森１，

江明１，温浩，卢晓梅，冯晓辉，王星

新疆医科大学第一附属医院中心实验室，乌鲁木齐８３００５４；１新疆医科大学第一附属医院血液科，乌鲁木齐８３００５４；２美国ＡＬａｂａｍａ大学病理系

?８３??论著?

摘要为了研究白血病患者体内是否有ＮＵＰ９８一ＨＯＸＡ、ＮｕＰ９８一Ｈ０ｘＢ、ＮｕＰ９８一Ｈ０ｘｃ、ＮｕＰ９８一ＨｏｘＤ融合基因，提取了骨髓中单个核细胞总ＲＮＡ，用甲醛变性电泳检测其完整性；反转录合成ｃＤＮＡ第一链并设计了１７对引

物，以巢式ＰＣＲ法（ｎｅｓｔｅｄ—ＰＣＲ）扩增ＮｕＰ９８一Ｈ０ｘＡ融合基因；一步法扩增ＮｕＰ９８一ＨＯｘＢ、ＮｕＰ９８一ＨｏｘＣ和

ＮｕＰ９８一Ｈ０ｘＤ融合基因，４１２ｂｐＧＡＰＤＨ作为内参照引物，２％琼脂糖凝胶电泳判断ＰｃＲ结果。结果表明：所提ＲＮＡ完整，反转录后ＰｃＲ扩增每个样本中均有内参照ＧＡＰＤＨ的表达，但是未发现有ＮｕＰ９８一ＨｏｘＡ、ＮｕＰ９８一

ＨｏｘＢ、ＮＵＰ９８一Ｈ０ｘｃ、ＮｕＰ９８一ＨｏｘＤ融合基因。结论：在本研究所取新疆白血病人群中没有检测到ＮｕＰ９８一ＨＯＸＡ、ＮＵＰ９８一ＨｏＸＢ、ＮＵＰ９８一ＨｏＸＣ和ＮＵＰ９８一ＨＯＸＤ融合基因。

关键词ＮＵＰ９８一ＨＯＸ融合基因；白血病；ＲＴ—ＰＣＲ

中图分类号Ｒ７３３．７文献标识码Ａ

ＲＴ．ＰＣＲＤｅｔｅｃｔｉｎｇＮＵＰ９８．ＨｏＸＦｕｓｉｏｎＧｅｎｅｉｎＬｅｕｋｅｍｉａ

ＺＨＡＮＧＹ砬”，ＬｊＬｉ咒９１，ＷＥＮＢｉｎｇ—Ｚ矗以０１，Ｌ工ＮＲ硎一Ｙｒｏ竹ｇ，ＣＡｏＸ“２，ＷＡＮＧＮｉ咒９２，

ＨＡＬＩＤＡ—Ｙ江Ｓｅｎｇｉ，ＨＡＮＧＭｉｎｇＬ，ＷＥＮＨ晓０．ＬＵＸｉｎｏ—Ｍｅｉ，ＦＥＮＧｘｉｎｏ—Ｈｕｉ，ＷＡＮＧｘｉｎＭ耐ｉｍｆＲＰ５阳ｒｃ＾（■订￡Ｐｒ，了ｈｅＦｉ耶￡Ａ∥：ｆ记￡鲥Ｈｏｓ加栅Ｚ盯Ｘｉ可如ｎｇＭｄｉｆｎｚＬ『ｎｉ雠ｒｓｉ砂，Ｕｒ“”ｚｑｉ８３００５４，ａｚｉ＂“；１Ｊ卫加九＂２ｅｎｆ可

Ｈｅ７ｎｎｔ（）ｚＯｇｙ，ＴｈｅＦｉｒｓｔＡ，ｆｉｚｉｎｔｅｄＨｏｓｐｎｎｌ【ｄｘｉｎ＇ｉｎ扎ｇＭｅｄｔｃｎｚＵ札ｉ础ｒｓｉｔｙ，Ｕｒｕ？ｎｑｉ８３Ｑ０５４，Ｃｈｉｎｎ；ｚ１）ｅｐｎｌ‘ｔＨｌｅｎｔｏｆＰｎｔｈｏ｛ｏｇ，，Ｌ，ｎｚ训ｅ“ｉ９ｏ厂ＡＬⅡ６Ⅱ”２ｄ，ＵＳＡ

ＡｂｓｔｒａｃｔＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｗｈｅｔｈｅｒｔｈｅｒｅａｒｅＮＵＰ９８一ＨＯＸＡ，ＮＵＰ９８一ＨｏＸＢ，ＮＵＰ９８一Ｈ（）ＸＣ，ＮＵＰ９８一ＨＯＸＤｆｕｓｉｏｎｇｅｎｅｓｉｎ

ｌｅｕｋｅｍｉａｐａｔｉｅｎｔｓｉｎＸｉｎｊｉａｎｇ，ｃｅｌｌｌｌｌａｒｔｏｔａｌＲＮＡｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍｔｈｅｂｏｎｅｍａｒｍｗｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｌｓ，ｔｈｅｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄ｝ａｇａｒｏｓｅｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｗａｓｕｓｅｄｔｏｊｕｄｇｅｗｈｅｔｈｅｒＲＮＡｗａｓｉｎｔａｃｔ，ｔｈｅ１７ＲＴ—ＰＣＲｐｒｉｍｅｒｓｗｅｒｅｄｅｓｉｇｎｅｄｔｏａｍｐｌｉｆｙｔｈｅｐｒｅｄｉｃｔｅｄｆｕｓｉｏｎｊｕｎｃｔｉｏｎｓａｎｄ４１２ｂｐＧＡＰＤＨｗａｓｕｓｅｄａｓａｎｉｎｔｅｒｎａｌｃｏｎｔｒ０１，ＮＵＰ９８一ＨＯＸＡｆｕｓｉｏｎｇｅｎｅｓｗｅｒｅａｍｐｌｌｆｉｅｄｂｙｎｅｓｔｅｄ—ＰＣＲｆｏｌｌｏｗｉｎｇｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ．（）ｎｅ—ｓｔｅｐＰＣＲｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｔｏａｍｐｌｉｆｙｔｈｅｏｔｈｅｒｐｒｅｄｉｃｔｅｄｆｕｓｉｏｎｇｅｎｅｓ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＲＮＡｗａｓｐｍｖｅｄｔｏｂｅｉｎｔａｃｔａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＧＡＰＤＨｗａｓｆｏｕｎｄｉｎｅｖｅｒｙｓａｍｐｌｅ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｎｏｐｒｅｄｉｃｔｅｄｆｕｓｉｏｎｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎｌｅｕｋｅｍｉａｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｉｎｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ，ｎｏＮＵＰ９８一ＨＯＸｆｕｓｉｏｎｇｅｎｅｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎｔｈｅｓａｍｐｌｅｓｆｒｏｍＸｉｎｊｉａｎｇ．

ＫｅｖｗｏｒｄｓＮＵＰ９８一ＨＯＸｆｕｓｉｏｎｇｅｎｅ；ｌｅｕｋｅｍｉａ；ＲＴ—ＰＣＲ

．，。Ｅｚ声心，”ａｆｏＺ２００５；１３（１）：８３８７

染色体易位常与肿瘤的发生相关，尤其在急性白血病中染色体易位至少占６５％１１。３１。急性白血病发生与基因重排及非随机的染色体易位相关。易位可致具有重要功能而原本分离的两条多肽链断端融合形成新的融合蛋白。通过对这些基因的生物学研究可使我们更好的了解染色体重排发生的原因和白血病发生的机制。近年来，国外学者在急性粒细胞白血病（ＡＭＬ），骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ），慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）中发现了与染色体１１Ｐ１５相关的易位，即核孔蛋白基因（ｎｕｃｌｅｏｐｏｒｉｎｇｅｎｅ，ＮｕＰ９８）¨叫５Ｊ。这些易位产生的融合基因中，较为普遍的是ＮＵＰ９８与同源框基因（ｈｏｍｅｏｂｏｘｇｅｎｅ，ＨＯｘ）的融合，后者包括染色体１ｑ２３的ＰＭｘｌ¨。、２ｑ３１的ＨｏＸＤｌ３”ｏ、７ｐ１５的ＨｏＸＡ９、ＨｏＸＡｌｌ和ＨｏＸＡｌ３［６＿９’１６ｊ、ＨＯＸＣｌｌ［”１、ＨｏＸＤｌｌ［１８Ｊ。报道发现发生ＮＵＰ９８一ＨｏＸＡ９融合的患者８０％一９０％源自东方人种，这些白血病患者主要是ＦＡＢ分型中的

通讯作者：温浩，主任医师、教授、博士生导师．电话：（０９９１）４３６２８４４．Ｅ—ｍａｉｌ：ｗｅｎｈａｏ＠ｓｕｐｅｒｉｎｆ０．ｉｎｆｏ

２００４—０３一０１牧稿；２００４—１０—２０接受

万方数据

?８４?

Ｍ，，很少一部分是Ｍ。，偶尔是Ｐｈ染色体阳性或阴性的ＣＭＬ患者ｎ９‘２０Ｉ。Ｋｒｏｏｎ等心¨的研究发现，将表达有ＮｕＰ９８一Ｈ０ｘＡ９融合基因的逆转录病毒转染至小鼠骨髓细胞，在体外可导致髓祖细胞增生，体内则可诱发小鼠发生髓增生性疾病（ｍｙｅｌｏｐｒｏｌｉｆ．ｅｒａｔｉｖｅｄｉｓｅａｓｅ，ＭＰＤ），几个月后，随着ＭＰＤ的发展，表达有ＮＵＰ９８一ＨＯＸＡ９的小鼠发生ＡＭＬ。因此，本研究采用逆转录．聚合酶链反应（ＲＴ—ＰＣＲ）的方法初步检测急性白血病患者体内是否存在ＮＵＰ９８一ＨＯＸ融合基因。

材料与方法

研究对象

２００２年１２月一２００４年１月在新疆医科大学第一附属医院血液科就诊及外院送检的初诊标本共７０例（附表），其中主要选择非淋巴细胞性白血病，按ＦＡＢ分型诊断为：急性淋巴细胞性白血病（ａｃｕｔｅｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｌｅｕｋｅｍｉａ，ＡＬＬ）８例，其中Ｌ２６例，Ｌ３２例；急性非淋巴细胞性白血病３８例（附表），其中Ｍ。／Ｍ。７例，Ｍ２２１例，Ｍ。８例，Ｍ５。１例，Ｍ。１例；慢性粒细胞性白血病２２例；慢性淋巴细胞性白血病（ｃｈｒｏｎｉｃｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅＩｅｕｋｅｍｉａ，ＣＬＬ）２例。男性３４例，女性３６例，平均年龄４１岁。

主要仪器和试剂

总ＲＮＡ提取试剂ＴＲＩｚｏＬ购自ＩｎｖｉｔｒＯｇｅｎ公司，异丙醇、氯仿及去离子甲酰胺均为Ｓｉｇｍａ公司产品，反转录试剂盒购自Ｐｒｏｍｅｇａ公司，ＴａｑＤＮＡ聚合酶（１０ｕ／弘１）、琼脂糖为上海生工产品，ＰＣＲ仪（ＢＩｏＲＡＤ，美国）。

总ＲＮＡ的提取及ＲＴ

标本的采集及单个核细胞（ＭＮｃ）提取化疗前采骨髓血４—５ｍｌ（ＥＤＴＡ．Ｎａ２抗凝）。‘取抗凝骨髓或外周血４ｍ１加等量的１×ＰＢｓ稀释后用Ｆｉｃｏｌｌ分离液（Ｓｉｇｍａ公司Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ一１０７７）分离出ＭＮＣ，ＰＢＳ洗涤２次，在液氮中存储备用。

细胞总ＲⅣＡ提取根据ＴＲＩｚｏＬ试剂说明书提取样品ＲＮＡ后将其溶于去离子甲酰胺中，置一８５℃冰箱备用。

甲醛变性电泳按照ＲＮＡ提取试剂盒说明书（Ｐｒｏ—ｍｅｇａ公司）进行。

逆转录（陀阳瑚口ｆｒｎｎｓｃｒｆｐｆｆｏ，ｌ，ＲＴ）按试剂盒（Ｐｒｏｍｅｇａ公司）操作说明进行，产物存于一２０℃。

中国实验血液学杂志，Ｅｚｐ胁ｍ“ｆｏｚ２００５；１３（１）

ＰＣＲ方法扩增ＮＵＰ９８．ＨＯｘ融合基因

简并引物为上海生工公司合成，余均为Ｑｉａｇｅｎ公司合成，以ＧＡＰＤＨ为内参照，反应体系为２０肚ｌ，模板ｃＤＮＡ（ＲＴ产物）１弘ｌ，１０×ＰＣＲ缓冲液２弘ｌ，２５ｍｍ０１／ＬＭｇＣｌ２１．３弘ｌ，ｄＮＴＰ０．４弘ｌ（终浓度４００肛ｍｏｌ／Ｌ），各引物均为１弘ｌ（终浓度０．６肛ｍｏｌ／Ｌ），ＴａｑＤＮＡ聚合酶１Ｕ。

巢式ＰｃＲ扩增ＮｕＰ９８．Ｈｏｊ，Ａ引物设计及扩增条件参考文献［１６］。

第一轮扩增上游引物：ＮＵＰ９８一ｌ５７一ＣＴＴＧＧＴ—ＧＣＴＧＧＡＣＡＧＧＣＡＴＣ３７；下游引物：ＨＯｘＡ简并引物５—７（Ａ／Ｃ）Ａ（Ｃ／Ｔ）（Ｃ／Ｇ／Ｔ）Ｃ（Ｇ／Ｔ）（Ｃ／Ｇ）Ｇ（Ｇ／Ｔ）ＧＴＴ（Ｃ／Ｔ）ＴＧ（Ａ／Ｇ）ＡＡＣＣＡ３７。扩增条件为９５℃４分钟；９４℃３０秒，５５℃４５秒，７２℃２分钟，共３５个循环，７２℃１０分钟；４℃过夜。

第二轮扩增：以稀释１０—２０倍后的第一轮产物为模板，引物如下：

上游引物：Ｎｕｐ９８—２５一ＣＧＧＧＡＴＣＣＧＣＡＣＡＡＡＴＡＣ—ＣＡＧＴＧＧＧＡＡＴＡＧ一３７；下游引物：Ｈｏｘａ９５７一ＧＧ—ＧＣＡＣＣＧＴＴＴＴＴＴＣＣＧＡＧＴＧＧＡＧ一３７．Ｈｏｘａｌ０５７一ＴＧＴＣＴＧＧＴＧＣＴＴＣＧＴＧＴＡＧＧＧＧＣＡ一３７．Ｈｏｘａｌ１５７一ＣＡＧＣＣＧＣＴＧＧＡＧＴＣＴＴＡＧＡＧＧＡＧＴＧ一３７．Ｈｏ—ｘａｌ３５７一ＡＴＴＣＧＴＧＧＣＧＴＡＴＴＣＣＣＧＴＴＣＡＡＧＴＴＣ一３７。扩增条件为９５℃４分钟；９４℃３０秒，５６℃４５秒，７２℃２分钟，３５个循环，７２℃１０分钟；４℃过夜。一步法扩增ＮＵＰ９８．ＨｏｘＢ，ＮＵＰ９８．Ｈｏｘｃ．ＮＬ伊９８．Ｈｏ』ｘＤ引物采用ＤＮＡＭＡＮ生物学软件设计如下：上游引物：Ｎｕｐ９８５７一ＡＴＡＴＡＴＧＧＡＴｃ—ＣＧＣＡＣＡＡＡＴＡＣＣＡＧＴＧＧＧＡＡＴＡＧ一３７；下游引物：Ｈｏｘｂ９５７一ＣＴＴＴＧＣＣＣＴＧＣＴＣＣＴＴＡＴＴＣＡＴＴＴＴＣ—ＴＴＣ一３７．Ｈｏｘｂｌ３５７一ＡＧＧＧＧＴＡＧＣＧＣＴＧＴＴＣＴＴ—ＣＡＣＣＴＴＧ一３７，Ｈｏｘｃ９５７一ＣＴＧＧＧＴＡＧＧＧＴＴＴＡＧ—ＧＡＣＴＧＣＴＣＣ一３７．Ｈｏｘｃｌ０５７一ＴＧＧＡＧＧＴＣＡＧＴＴＣ—ＣＣＧＧＡＴＣＣＧＡ一３７．Ｈｏｘｃｌ１５７一ＣＡＧＣＡＧＡＧＧＡＴＴ—ＴＣＣＣＧＡＧＡＡＡＴＡＣＴＧ一３７．Ｈｏｘｃｌ２５７一ＡＧＡＧＡＧＣ—ＴＴＧＣＴＣＣＣＴＣＡＡＣＡＧＡＡＧＴＣ一３７．Ｈｏｘｃｌ３５７一ＡＧ—ＧＴＧＧＡＧＴＧＧＡＧＡＴＧＡＧＧＣＧＣＴ一３７．Ｈｏｘｄ９５７一ＣＡＧＴＣＴＣＣＴＴＴＧＧＧＧＣＡＴＴＴＣＴＣＣＴＴ一３７．Ｈｏｘ—ｄ１０５７一ＣＧＴＧＡＧＧＴＴＧＧＣＧＧＴＣＡＧＴＴＣＴＣ一３７．Ｈｏｘｄｌ１５７一ＡＣＴＧＣＡＧＡＣＧＧＴＣＴＣＴＧＴＴＣＡＧＴＴ—ＴＣ一３７．Ｈｏｘｄｌ２５７一ＧＴＡＧＡＧＣＧＣＣＡＧＣＧＣＣＴＧＣＴ一３７．Ｈｏｘｄｌ３５７一ＣＡＧＧＡＧＡＣＡＧＴＡＴＣＴＴＴＧＡＧ—ＣＴＴＧＧＡＧ＿３７。扩增条件为９５℃４分钟；９４℃４５秒，６３℃１分钟，７２℃２分钟，共３５个循环，７２℃１０分钟，４℃过夜。

万方数据

ＲＴ－ＰｃＲ方法检测白血病中ＮｕＰ９８一Ｈｏｘ融合基因的初步研究

内参照引物ＧＡＰＤＨ（４１２ｂｐ）：扩增条件同上。上游引物：５７一ＣＣＣＡＴＣＡＣＣＡＴＣＴＴＣＣＡＧＧＡＧ一３７；下游引物：５７一ＧＧＣＡＧＧＧＡＴＡＴＴＣＴＧＧＡＧＡＧＣＣ一

３

７。

ＰＣＲ产物电泳

取ＰＣＲ产物６肛ｌ，２％琼脂糖凝胶

电泳，结果在凝胶成像仪下读取。

Ｔａｂｌｅ１．Ｔｈｅｇｅｎｅｒａｌｄａｔａｏｆ７０ｌｅｕｋｅｍｉａｐａｔｉｅｎｔｓ

结果

ＲＮＡ样品鉴定

经甲醛变性电泳可见清晰亮带（２８Ｓ，１８Ｓ）（图１），说明所提取的ｍＲＮＡ较完整。分光光度计测浓度表明，所提ＲＮＡ浓度为ｏ．５—２．ｏｐｇ缸ｌ时，ｏＤ２。。／

Ｆｉｇｕｒｅ

１．

ＲＮＡ

ｆＯｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ

ｄｅｎａｔｕｒａｌｉｚｉｎｇｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ．Ｌａｎｅ１：ｔｏｔａｌＲＮＡｏｆｓａｍｐｌｅ

１．Ｌａｎｅ２：ｔＯｔａＩＲＮＡ０ｆ

ｓａｍｐｌｅ

２

?

８５

?

ＯＤ２。。值在１．８—２．０之间。这表明ＲＮＡ相对分子质量完整，无降解，无污染。ＲＴ—ＰＣＲ结果

提取的７０例白血病患者ＲＮＡ经ＲＴ—ＰＣＲ扩增ＮＵＰ９８一ＨＯＸＡ、ＮＵＰ９８一ＨＯＸＢ、ＮＵＰ９８一ＨＯＸＣ及ＮｕＰ９８一ＨＯｘＤ融合基因（共１６种），见图２，图３。内参照ＧＡＰＤＨ在每一样品中均有表达，ＮｕＰ９８一

Ｆｉｇｕｒｅ２．ＴｈｅｆｉｒｓｔｒｏｕｎｄＰＣＲ

ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｏｆＮＵＰ９８－

ＨｏＸＡｆｕｓｉｏｎｇｅｎｅ．Ｌａｎｅ１：ｐＵＣｌ９ＤＮＡｍａｒｋｅｒ．Ｌａｎｅ２：ｓａｍｐｌｅ２．Ｌａｎｅ３：ｓａｍｐＩｅ５．Ｌａｎｅ４：ｓａｍｐｌｅ１６

Ｆｉ２ｕｒｅ３．ＴｈｅＰＣＲ

ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｏｆｆｕｓｉｏｎ２ｅｎｅＮＵＰ９８．

ＨｏＸ（ｓ锄ｐｌｅ

２）．Ｌａｎｅｌ：ｐＵＣｌ９ＤＮＡｍａｒｋｅｒ．Ｌａｎｅ２：ｆｉｒＳｔ

ｒｏｕｎｄｏｆ

ＮＵＰ９８－ＨｏＸＡ．Ｌａｎｅ

３：ｓｅｃｏｎｄ

ｒｏｕｎｄｏｆ

ＮＵＰ９８－

ＨｏＸＡ９．Ｌａｎｅ４：ｓｅｃｏｎｄｒｏｕｎｄＯｆＮＵＰ９８－ＨｏＸＡｌ３．Ｌａｎｅ５：

ＮＵＰ９８．ＨｏＸＢ９．Ｌａｎｅ６：ＮＵＰ９８－ＨｏＸＣｌ１．Ｌａｎｅ７：ＮＵＰ９８－ＨｏＸＣｌ３．Ｌａｎｅ

８：ＮＵＰ９８．ＨｏＸＤ９（４１２

ｂｐ：ＧＡＰＤＨ）

万方数据

?８６?

ＨＯｘＡ在第一轮扩增中未见条带，第二轮特异性扩增后仍无条带。同样ＮＵＰ９８一ＨＯＸＢ、ＮＵＰ９８一ＨｏＸＣ、ＮＵＰ９８一ＨＯＸＤ扩增未见条带。

讨论

ＨＯＸ基因是一簇含有共同的１８３个核苷酸序列的调节基因，在生物的发育分化中起重要作用，具有高度保守性，是转录过程的主控基因。人类ＨＯＸ基因主要分为两大类：Ｉ类ＨＯＸ基因和ＩＩ类ＨｏＸ基因（后者又称为非ＨＯｘ基因）。Ｉ类ＨＯｘ基因具有特定的时空表达模式，分为Ａ、Ｂ、ｃ、Ｄ４簇，呈线性依次排列于７，１７，１２和２号染色体。在造血发育中ＨＯｘ基因家族也表现出多样性和重复性的调控作用，具有系谱特异性和阶段特异性，整个ＨＯＸ基因在造血调控中相互协调，共同调节造血细胞。近年来，一些实验已证明某些ＨｏＸ基因表达的改变可能引发白血病¨＿９＇１６＿１８＇２１’２３＇２４｜。

ＮｕＰ９８是核孔复合物（ｎｕｃｌｅａｒｐｏｒｅｃｏｍｐｌｅｘ）的组成部分，位于人类染色体１１Ｐ１５，编码分子量９８ｋＤ的核孔蛋白，ＮｕＰ９８位于核孔复合物的胞核面，它在核浆运输中起到停靠蛋白的作用。这一功能主要依赖于其Ｎ末端的多个丙氨酸一甘氨酸（ＦＧ）重复序列‘２２Ｉ。

近年来的一些研究证实某些ＨｏＸ基因和ＮｕＰ９８基因融合可能与白血病的发生有关。Ｈｕａｎｇ等心３１在台湾发现４例７号和ｌｌ号染色体易位，即ｔ（７；１１）（Ｐ１５；Ｐ１５）的ＡＭＬ患者，其中３例为Ｍ，，１例为Ｍ。。病人接受化疗后，仅其中１例短期内完全缓解。该研究提示：ｔ（７；１１）的发生有种族性和地域性，尤其多发生于东方人群，而且预后差。通过分子生物学的方法检测ＮｕＰ９８．ＨＯｘＡ９融合基因是诊断ｔ（７；１１）的有效手段，同样也可通过其来监测治疗后的疾病状态。Ｎａｋａｍｕｒａ等Ｈｏ报道，ｔ（７；１１）（Ｐ１５；Ｐ１５）易位是由ＮｕＰ９８和ＨｏｘＡ９融合所致。框内融合转录本含ＮｕＰ９８的Ｎ一末端和ＨＯｘＡ９的大部分编码区域，其中ＮｕＰ９８部分包含其功能性的ＧＬＦＧ重复域，ＨｏｘＡ９部分含整个ＨＯｘＡ９的同源域ｔ（７；１１）易位对整个ＨＯｘＡ簇基因有潜在的影响心５Ｉ，Ｎａｋａｍｕｒａ等¨ｏ认为ｔ（７；１１）使ＨｏｘＡｌ０，Ａ１１，和Ａ１３与其他的Ａ簇基因，包括位于ＨＯＸＡｌ３’端的维甲酸应答元件（ｒｅｔｉｎｏｔｉｃａｃｉｄｒｅ—ｓｐｏｎｓｅｅｌｅｍｅｎｔ，ＲＡＲＥ）分开，ＨＯＸＡｌ０、Ａ１１、Ａ１３和ＮＵＰ９８一ＨＯＸＡ９位置的改变致使机体对维甲酸的敏感性降低。ＮｕＰ９８一ＨｏｘＡ９融合基因中，ＨｏｘＡ９

中国实验血液学杂志’，ＥｚｐＨｊｍｎ￡ｏｚ２００５；１３（１）

与ＮＵＰ９８启动子结合，抑制了ＨＯｘＡ９的关闭。

ＫｗｏｎｇＬ２４ｏ和Ｋｅｉ“２６ｏ等报道了３例白血病人（１例Ｍ．，２例Ｍ，）中有ＮＵＰ９８一ＨＯｘＡ融合基因，患者

均发生了粒细胞生成紊乱，且预后较差。Ｋｅｉｌ【ｉ

等。２６。认为ＮＵＰ９８一ＨＯｘ融合基因的检出有助于鉴

别ＡＭＬＭ，和ＢＣＲ，Ｐｈ染色体阴性的ｃＭＬ加速期。Ｇｏｌｕｂ等旧７。发现，在与临床预后相关的６８００多种基因检测中，ＨｏｘＡ９基因是唯一的标志基因，认为ＨＯｘＡ９表达是诊断ＡＭＬ的预测指标，其过表达与ＡＭＬ病人治疗失败相关。

本研究根据目前关于ＮｕＰ９８一ＨＯｘ融合基因

的研究报道，推测可能还存在其它的ＨＯｘ家族基

因与ＮＵＰ９８的融合。因此，我们采用了ＤＮＡＭＡＮ

５．０针对１６种ＨＯｘ基因终止密码子前部分序列设

计特异性下游引物，这样如扩增出片段，它将包括

ＨｏＸ的同源结构域，后者是ＮＵＰ９８一ＨｏＸ融合基因

的组成部分。ＲＴ—ＰＣＲ是检测染色体结构畸变形成

的融合基因较为敏感和有效的方法，其敏感度达１０一１０。（可从１０７个正常细胞中检测出１个携带ＮＵＰ９８一ＨＯＸｍＲＮＡ的白血病细胞）。本研究运用ＲＴ—ＰＣＲ检测白血病患者体内是否有融合基因。以巢式ＰＣＲ扩增ＮｕＰ９８一ＨｏｘＡ融合基因，其中第一轮扩增采用ＨＯｘＡ简并引物，第二轮扩增目的是判断具体是何种ＨｏｘＡ簇基因与ＮＵＰ９８融合；另外以一步法扩增ＮＵＰ９８一ＨＯＸＢ、ＮＵＰ９８一ＨｏＸＣ、ＮＵＰ９８一ＨＯＸＤ融合基因。样本中均有ＧＡＰＤＨ的表达，但未检测到融合基因。这一结果提示：①ＮｕＰ９８一ＨＯｘ融合基因在新疆人白血病中的发生率可能比较低。Ｆｕ．ｉｍｕｒａＬ２８‘曾报道融合基因在日本所有ＡＭＬ患者中的发生率＜１％。②本研究共设计了多达１７对引物，但其数量和针对性仍然有限，这可能是导致未发现ＮｕＰ９８一ＨＯｘ融合基因的原因之一。③本研究主要针对急慢性髓性白血病，样本例数有限，对于ＮｕＰ９８一Ｈｏｘ融合基因在白血病的发生和发展的作用机制，有待我们扩大样本数从细胞遗传学，分子生物学等多角度做进一步的研究。

致谢：衷心感谢美国阿拉巴马大学病理系曹旭教授，王宁博士给予的无私帮助；感谢新疆医科大学第一附属医院血液科所有医护人员给予的大力支持；感谢北京西苑医院血液病实验室许勇钢，杨晓红，王宏志三位老师和麻柔主任在此研究中给予的协助！

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８ＨａｔａｎｏＹ，ＭｉｕｒａＩ，ＮａｋａｍｕｒａＴ，以ｎＺ．ＭｏｌｅｃｕｌａｒｈｅｔｅｍｇｅｎｅｉｔｙｏｆｔｈｅＮｕＰ９８／ＨＯｘＡ９ｆｕｓｉｏｎｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｎｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａＳｔｉｃｓｙｎｄｒｏｍｅｓ

ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｔ（７；１１）（ｐ１５；ｐ１５）．ＢｒＪＨａｅｍａｔｏｌ，１９９９；１０７：６００

—６０４

９ＷｏｎｇＫＦ，ＳｏＣＣ，ＫｗｏｎｇＹＬ．Ｃｈｒｏｉｃｍｙｅｌｏｍｏｎｏｃｙｔｉｃｌｅｕｋｅｍｉａｗｉｔｈｔ（７；¨）（ｐ１５；ｐ１５）ａｎｄＮｕＰ９８／ＨｏｘＡ９ｆｕｓｉｏｎ．ｃａｎｃｅｒＧｅｎｅｔ

Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔ，１９９９；１１５：７０一７２

１０Ａ“Ｙ，ＨｏｓｏｄａＦ，ＫｏｂａｙａｓｈｉＨ，甜ｎｚ．Ｔｈｅｉｎｖ（１１）（ｐ１５；ｑ２２）ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎｏｆｄｅ—ｎｏｖｏａｎｄｔｈｅｒａｐｙ—ｒｅｌａｔｅｄｍｙｅｂｉｄ

ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓｒｅｓｕｌｔｓｉｎｆｕｓｉｏｎｏｆｔｈｅｎｕｃｌｅｏｐｏｒｉｎｇｅｎｅ，ＮＵＰ９８，ｗｉｔｈ

ｔｈｅｐｕｔａｔｉｖｅＲＮＡｈｅｌｉｃａｓｅｇｅｎｅ，ＤＤＸｌＯ．Ｂ１００ｄ，１９９７；８９：３９３６—

３９４４

１１ＩｋｅｄａＴ，ＩｋｅｄａＫ，ＳａｓａｋｉＫ，以ｎｚ．Ｔｈｅｉｎｖ（１１）（ｐ１５；ｑ２２）ｃｈｒｏ—ｍｏｓｏｍｅｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｒａｐｙ—ｒｅｌａｔｅｄｍｙｅｌ。ｄｙｓｐｌａｓｉａｗｉｔｈ

ＮＵＰ９８一ＤＤＸｌ０ａｎｄＤＤＸｌ０一ＮＵＰ９８ｆｕｓｉｏｎｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ．ＩｎｔＪＨｅｍａ—

ｔｏｌ，１９９９；６９：１６０—１６４

１２ＮｉｓｈｉｙａｍａＭ，ＡｒａｉＹ，ＴｓｕｎｅｍａｔｓｕＹ，甜口￡．１１ｐ１５ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎｓｉｎｖｏｌｖｉｎｇｔｈｅＮＵＰ９８ｇｅｎｅｉｎｃｈ订ｄｈ００ｄｔｈｅｒａｐｙ—ｒｅｌａｔｅｄａｃｕｔｅｍｙｅｌｏｉｄ

ｌｅｕｋｅｍｉａ，ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｔｉｃｓｙｎｄｒｏｍｅ．ＧｅｎｅＣｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓＣａｎｃｅｒ，

１９９９；２６：２１５２２０

１３ＨｕｓｓｅｙＤＪ，ＮｉｃｏｌａＭ，Ｍ００ｒｅＳ，以ｎｆ．Ｔｈｅ（４；１１）（ｑ２１；ｐ１５）ｔｒａｎｓｋ圮ａｔｉｏｌｌｆｕｓｅｓｔｈｅＮＵＰ９８ａｎｄＲＡＰｌＧＤＳｇｅｎｅａｎｄｉｓｒｅｃｕｒｒｅｎｔ

ｉｎＴ—ｃｅｌｌａｃｕｔｅｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｂ１００ｄ，１９９９；９４：２０７２—２０７９

１４ＡｈｕｊａＨＧ，ＦｅｌｉＸＣＡ，ＡｐｌａｎＰＤ．Ｔｈｅｔ（１１；２０）（ｐ１５；ｑ１５）ｃｈｒｏ—ｍｏｓｏｍａｌｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｒａｐｙ—ｒｅｌａｔｅｄｍｙｅｌｏｄｙｓ—

ｐｌａｓｔｉｃｓｙｎｄｒｏｍｅｒｅｓｕｌｔｓｉｎａｎＮＵＰ９８一ＴＯＰｌｆｕｓｉｏｎ．Ｂｋｏｄ，１９９９；

９４：３２５８—３２６１

?８７?

１５ＡｈｕｊａＨＧ，ＨｏｎｇＪ，ＡｐｌａｎＰＤ，以Ⅱｆ．ｔ（９；１１）（ｐ２２；ｐ１５）ｉｎａｃｕｔｅｍｙｅｌｏｉｄ１ｅｕｋｅｍｉａｒｅｓｕｌｔｓｉｎａｆｕｓｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎＮＵＰ９８ａｎｄｔｈｅｇｅｎｅｅｎｃｏｄｉｌｌｇｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒｓｐ５２ａｎｄｐ７５一ｌｅｎｓｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ—ｄｅ—ｒｉｖｅｄｇｍｗｔｈｆａｃｔｏｒ（ＬＥＤＧＦ）．ＣａｎｃｅｒＲｅ￥，２０００；６０：６２２７６２２９

１６ＦｕｊｉＴ∞Ｔ，ｓｕｚｕｋｉＡ，ＩｔｏＹ，酊ｎＺ．Ｓｉｎｇｌｅ—ｔｒａｎｓｋａｔｉｏｎａｎｄｄｏｕｂｌｅ—ｃｈｉｍｅｒｉｃｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ：ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＮＵＰ９８一ＨｏＸＡ９ｉｎｍｙｅｌｏｉｄ１ｅｕｋｅ—ｍｉａｓｗｉｔｈＨｏＸＡｌｌｏｒＨＯＸＡｌ３ｂｒｅａｋｓｏｆｔｈｅｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎｔ（７；１１）（ｐ１５；ｐ１５）．Ｂ１００ｄ，２００２；９９：１４２８—１４３３

１７ＴａｋｅｔａｎｉＴ，ＴａｋｉＴ，ＳｈｉｂｕｙａＮ，甜ｎＺ．ＮｏｖｅｌＮＵＰ９８一ＨＯＸＣｌ１ｆｕｓｉｏｎｇｅｎｅｒｅｓｕｌｔｅｄｆｍｍａｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌｂｒｅａｋｗｉｔｈｉｎｅＸｏｎｌｏｆＨｏＸＣｌｌｉｎａｃｕｔｅｍｙｅｌｏｉｄｌｅｕｋｅｍｉａｗｉｔｈｔ（１１；１２）（ｐ１５；ｑ１３）Ｃａｎ—ｃｅｒＲｅｓ．２００２：６２：４５７１—４５７４

１８ＴａｋｅｔａｎｉＴ，ＴａｋｉＴ，ＳｈｉｂｕｙａＮ，甜ⅡＺ．ＴｈｅＨｏＸＤｌｌｇｅｎｅｉｓｆｕｓｅｄｔｏｔｈｅＮＵＰ９８ｇｅｎｅｉｎａｃｕｔｅｍｙｅｌｏｉｄｌｅｕｋｅｍｉａ

ｗｉｔｈｔ（２；１１）（ｑ３１；

ｐ１５）．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ，２００２；６２：３３—３７

１９ＳａｔｏＹ，ＡｂｅＳ，ＭｉｓｅＫ，甜ｎＺ．Ｒｅｃｉｐｒｏｃａｌｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎｉｎｖ０１ｖｉｎｇｔｈｅｓｈｏｒｔａｒｍｓｏｆｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ７ａｎｄ１１，ｔ（７ｐ；１１ｐ＋）ａｓＳ０ｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｍｙｅｌｏｉｄｌｅｕｋｅｍｉａｗｉｔｈｍａｔｕｒａｔｉｏｎ．Ｂｌｏｏｄ，１９８７；７０：１６５４—１６５８

２０ＫｗｏｎｇＹＬ，ＬｉｕＨＷ，ＣｈａｎＬＣ．Ｒａｃｉａｌｐｒｅｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎｔｏｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ（７；１１）．Ｌｅｕｋｅｍｉａ，１９９２；６：２３２

２１ＫｒｏｏｎＥ，ＴｈｏｒｓｔｅｉｎｓｄｏｔｔｉｒＵ，ＭａｙｏｔｔｅＮ，以ｎＺ．ＮＵＰ９８一ＨｏＸＡ９ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ

ｉｎｈｅｍｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｓｉｎｄｕｃｅｓＣｈｒｏｎｉｃａｎｄａｃｕｔｅｍｙ—ｅｌｏｉｄｌｅｕｋｅＨ矗ａｉｎｍｉｃｅ．ＥＭＢ０Ｊ，２００１；２０：３５０３６１

２２ＲａｄｕＡ，Ｍ００ｒｅＭＳ，Ｂ１０ｂｅｌＧＴｈｅｐｅｐｔｉｄｅｒｅｐｅａｔｄｏｍａｉｎｏｆｎｕ—ｃｌｅｏｐｏｒｉｎＮＵＰ９８ｆｕｎｃｔｉｏｎａｓａｄｏｃｋｉｎｇｓｉｔｅｉｎｔｒａｎｓｐｏｒｔａｃｒｏｓｓｔｈｅｎｕｃｌｅａｒｐｏｒｅｃｏｍｐｌｅｘ．ＣｅＵ，１９９５；８１：２１５２２２

２３ＨｕａｎｇＳＹ，ＴａｎｇＪＬ，ＬｉａｎｇＹＪ，甜日Ｚ．Ｃ１ｉｎｉｃａｌｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｓｔｕｄｉｅｓｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎｔ（７；

１１）：ａｓｔｕｄｙｏｆｆｏｕｒＣｈｉｎｅｓｅｐａｔｉｅｎｔｓｉｎＴａｉｗａｎ．ＢｒＪＨａｅｍａｔｏｌ，１９９７：９６：６８２—６８７

２４

ＫｗｏｎｇＹＬ，Ｐａｎｇ

Ａ．Ｌｏｗｆｒｅｑｕｅｎｃｙｏｆｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔｓｏｆｔｈｅｈｏ—ｍｅｏｂｏｘｇｅｎｅＨｏＸＡ９／ｔ（７；１１）ｉｎａｄｕｌｔａｃｕｔｅｍｙｅｌｏｉｄｌｅｕｋｅｍｉａ．ＧｅｎｅｓＣｈｒｏｍｏＳ０ｍｅｓＣａｎｃｅｒ，１９９９；２５：７０７４

２５ＬａｗｒｅｎｃｅＰＡ，ＭｏｒａｔａＧ．Ｈｏｍｅｏｂｏｘｇｅｎｅｓ：ＴｈｅｉｒｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎＤｒｏｓｏｐｈｉｌａｓｅｇｍｅｎｔａｔｉｏｎａｎｄｐａｔｔｅｒｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ．Ｃｅｌｌ’１９９４；７８：１８１—１８９

２６ＫａｗａｋａｍｉＫ，ＭｉｙａｎｉｓｈｉＳ，ＮｉｓｈｉｉＫ，甜ｎＺ．Ａｃａｓｅｏｆａｃｕｔｅｍｙ—ｅｌｏｉｄｌｅｕｋｅｍｉａｗｉｔｈｔ（７；１１）（ｐ１５；ｐ１５）ｍｉｍｉｃｋｉｎｇｍｙｅｌｏｉｄｃｒｉｓｉｓｏｆｃｈｒｏｎｉｃｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓｌｅｕｋｅｍｉａ．ＩｎｔＪＨｅｍａｔｏｌ，２００２；７６：８０—８３

２７ＧｏｌｕｂＴＲ，ＳｌｏｎｉｍＤＫ，ＴａｍａｙｏＰ，以ｎＺ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｃａｎｃｅｒ：ｃｌａｓｓｄｉｓｃｏｖｅｒｙａｎｄｃｌａｓｓｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎｂｙｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９９；２８６：５３１—５３７

２８ＦｕｊｉｍｕｒａＴ，ｏｈｙａｓｈｉｋｉＫ，ｏｈｙａｓｈｉｋｉＪＨ，甜口Ｚ．Ｔｗｏａｄｄｉｔｉｏｎａｌｃａｓｅｓｏｆａｃｕｔｅｍｙｅｌｏｉｄ

１ｅｕｋｅｍｉａｗｉｔｈｔ（７；１１）（ｐ１５；ｐ１５）ｈａｖｉｎｇｌｏｗｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅｓｃｏｒｅｓ．ＣａｎｃｅｒＧｅｎｅｔＣｙｔｏｇｅｎｅｔ，１９９３；６８：１４３１４６

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