发酵罐接种操作

发酵罐接种操作

3.0 内容：

3.1 接种前准备

3.1.1将温度降至25℃以下的发酵罐移至接种室，接通进气管道，先调整进气压力为0.06Mpa，开启进气阀门后打开发酵罐排气阀，保持罐内正压；

3.1.2 将接种工具和摇瓶检测用试管放在层流罩下一侧平台架上；环境检测用平板放在检测专用平台上；

3.1.3 将准备好的灭火用水、湿毛巾、酒精放入接种室的回风区；

3.1.4 关闭接种室门，开启层流罩开关和紫光灯开关，30min后关闭紫光灯后开始接种。

3.1.5 摇瓶使用前挑选：摇瓶摇瓶在使用前由技术部挑选是否为合格菌种，并将所用摇瓶菌丝状态填写在《摇瓶接种及使用记录》上。

3.1.6 需放在磁力搅拌器上搅拌10分钟，待菌球打碎均匀后，方可接种，品保部每瓶进行复核。

3.2 接种

3.2.1 接种人员带接种用手套，使用75%酒精+新洁尔灭溶液手部喷雾消毒；

3.2.2 将准备好的摇瓶使用75%酒精+新洁尔灭溶液表面喷雾消毒，经接种孔，放入层流罩内待接发酵罐上；3.2.3 在检测专用架上打开环境检测平板；

3.2.4 除去安全阀上的保险丝，将95%的酒精棉均匀放入发酵罐接种口下的凹槽中，用火焰喷枪引燃；

3.2.5充分灼烧发酵罐的盖面部分，并将灼烧后的接种工具并放于盖面上；

3.2.6 用火焰喷枪对待用接种摇瓶瓶口及瓶口以下10cm范围灼烧消毒，灼烧棉塞，灼烧过程中旋转摇瓶，使其灼烧均匀充分；

3.2.7调整进气阀压力为0.00Mpa，待排气口出气微弱后，用工具打开接种口的保护阀，迅速调整进气阀压力为0.06Mpa，用接种工具挑起接种口罐盖，并放于发酵罐盖面火焰附近。

3.2.8在喷枪的火焰保护下，用坩埚钳拔去摇瓶棉塞扔至灭火水桶内，并在火焰保护下迅速将摇瓶菌种倾倒入发酵罐，留20-30ml样品检测PH值备用；

3.2.10挑取发酵罐盖盖于接种口上，使用工具锁紧保护；

3.3 摇瓶检测

3.3.1将灼烧后的接种钩放于摇瓶内；

3.3.2手持检测用试管，在酒精火焰上对试管口进行灼烧，待试管口内壁干燥后，保持试管口在火焰上方，另一只手指缝拔取棉塞，用接种钩蘸取少量样品，在试管斜面培养基上划线，并迅速塞上棉塞。

3.3.3 收取沉降菌检测平板，两天后由品保部记录结果；

3.3.4 用湿毛巾熄灭凹槽内的火焰；

3.3.5 关闭发酵罐出气阀门，待罐压回升至0.06 Mpa，关闭进气阀门；

3.3.6 将接种后的发酵罐移至对应编号位置，连接进气管，先调整0.1 Mpa进气压力，打开进气阀，后打开排气

阀，通气培养；

3.3.7 填写《发酵罐状态卡》并悬挂于发酵罐上。

3.4 接种结束

3.4.1 关闭接种室层流罩电源开关；

3.4.2 对摇瓶余留样液进行PH值检测，并填写《摇瓶接种及使用记录》，品保部签字确认；

3.4.3 填写《发酵罐接种记录表》,品保部复核。

3.4.4 清洁和整理接种室，使用200ppmTCCA对接种室墙壁和地面拖洗消毒，并填写《发酵罐接种室清洁记录》；

3.4.5 关闭接种室日光灯和接种室门；

3.4.6 检查确认接种后的发酵罐管道连接和通气状况是否正常，发酵罐接种结束。