质粒小提试剂盒使用说明书
质粒小提试剂盒I简明步骤（PD1211）
（详细内容请参考英文说明书）
I.实验前准备II.注意事项
RNase A: 使用前将提供的所有RNase A瞬时离心后加入Buffer A1, 使用后将Buffer A1/RNase A置于4o C保存。质粒拷贝数:纯化中低拷贝的质粒时，使用2倍的菌液体积，2倍的Buffer A1,B1,N1, 相同体积的Wash Buffer和Elution Buffer.
转化菌:若为-70o C甘油冻存的菌，请先涂布平板培养后，再重新挑选新的单个菌落进行培养。
切勿直接取冻存的菌种进行培养。
DNA Wash Buffer*: 使用前请将8 mL (PD1211-00)或48 mL
(PD1211-01)或216 mL (PD1211-02) or 90 mL (PD1211-
03) 96-100% 乙醇加入DNA Wash Buffer。
Buffer B1: 在低于室温时会沉淀，请于50o C左右水浴加热至沉
淀完全溶解，溶液澄清，使用后保证Buffer B1瓶盖旋紧。
在室温下（22-25o C）进行所有离心操作。
III.操作步骤
1.接种新鲜的单个菌落到1-5 mL的LB培养基（含适量抗生素），37o C震荡培养14-16小时。室温下
10,000 x g离心1分钟，收集菌体，并尽可能的吸去上清。
注：残留的液体培养基容易导致菌液裂解不充分，第5步离心后沉淀较松，不能有效吸取上清。
注：本说明书中的操作程序适用于标准LB （Luria Bertani）培养基培养12-16 小时后，OD600（细菌密度）在
2.0-
3.0之间的菌液。若采用的是富集培养基，例如TB 或2×YT，请注意保证OD600不超过3.0。
2.加入250 μL Buffer A1（确保已加入RNase A），用移液枪或涡流震荡充分悬浮细菌细胞。
注：细菌细胞如果没有充分悬浮均匀，将导致菌体裂解不完全，从而降低产量。
3.加入250 μL Buffer B1,轻轻地反转5-10 次以混合均匀，然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。
注：切勿剧烈振荡。静置时间不超过5分钟，时间过长会导致基因组DNA污染或质粒受到损伤。若溶液未清亮澄清，则表明菌体裂解不充分，应加大Buffer B1的用量或减少菌体量。
4.加入350 μL Buffer N1, 立即反转多次，至溶液充分混匀，此时出现白色絮状沉淀。
5.将离心管转至高速离心机，在室温下13,000 rpm离心10分钟（若上清中有白色沉淀，可再次离心）。
6.小心吸取离心后的上清液至带有收集管的DNA柱中（避免吸起沉淀），室温下13000 rpm离心1分
钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。
7.可选:向DNA柱中加入500 μL Buffer KB, 室温下13000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将
离心柱重新放回到收集管中。
注：此步对富含内源核酸酶的宿主菌（endA＋）来说是必须的，如HB101, JM101, TG1等；对endA-来说可省略，如Top 10和DH5a等，请参照英文说明书第3页的表2.
8.向离心柱中加入500 μL DNA Wash Buffer（确保已加入无水乙醇），室温下，13000 rpm 离心1分
钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。可选步骤：重复步骤“8”。
9.将离心柱放回高速离心机中，13000 rpm室温下开盖离心2分钟，以彻底去除残留的乙醇。
注：此步骤中开盖离心将会更有效的去除残留的乙醇，乙醇是否去除干净将会影响最后的洗脱效率。
10.将离心柱转至一个新的1.5 mL离心管中，向DNA柱的正中间加入50~100 μL（体积>50 μL）的
ddH2O（pH在7.0-8.5之间）或Elution Buffer，室温放置2分钟，13000 rpm 离心1分钟，洗脱质粒DNA。
注：提取到的质粒DNA可直接用于基因克隆、测序、酶切、文库筛选、体外转录翻译、转染HEK293细胞。若用于转染内毒素敏感性细胞株，原代细胞及用于微注射，建议去除内毒素（PD1212）。
IV.DNA浓度及纯度
DNA浓度(μg/mL) = OD260 x 50 x 稀释倍数，OD260/ OD280约为1.7-1.9
V.常见问题及解答
1、没有提出质粒或者质粒收获量很低
A、菌种老化：
?建议：对于甘油保存的菌种，需要先进行活化。涂布或者划线菌种，重新挑选单菌落进行液体培养，并对菌种进行初摇活化，按照1：500的比例进行菌种培养。二次培养细胞最好不要超过16小时。
B、低拷贝质粒：
?建议：如果是由于低拷贝质粒引起的质粒收获量低，可以采用两倍的菌体量，并相应增加各种Buffer的用量，如果必要，更换具有相同功能的高拷贝质粒载体。
C、质粒丢失
?建议：某些质粒在多次继代培养的过程中会出现丢失的现象，另外检查筛选抗生素的浓度是否正确。
D、裂解不充分
?建议：如果采用超过推荐量的菌体进行质粒制备，会导致菌体裂解不充分。可适当减少菌体的用量或者相应增大各种Buffer的用量。请根据选取的试剂盒，处理相应量的细菌量。
E、Buffer中有沉淀未溶解
?建议：Buffer B1和Buffer N1在温度较低时会出现沉淀，使用前请检查是否有沉淀生成，如有沉淀生成，请置于37o C温育片刻，待溶液澄清后使用。
F、DNA Wash Buffer中未按要求加入乙醇
?建议：按照说明书要求加入要求量的无水乙醇，使用后旋紧瓶盖，防止乙醇挥发。
G、离心柱中乙醇残留
?建议：漂洗后，可适当延长离心时间，已尽量去除残留的乙醇。另外对于质粒中提，大提和超大量提取，建议离心后，将柱子或大漏斗用吹风机冷风吹片刻，以彻底去除残留的乙醇，便于洗脱和后续实验操作。
E、洗脱液加入位置不正确，
?建议：洗脱液应加在膜中央，已取得最好的洗脱效果。
F、洗脱液pH值不正确
?建议：将DNA从柱子上洗脱下来的最适pH值在7.0~8.5之间，如果洗脱液的pH超出此范围将会显著影响洗脱效果，请使用试剂盒配套的Elution Buffer（pH 8.5，10mMTris-HCl）进行洗脱，如果用ddH
O进行洗脱，请确保pH在7.0~8.5之间。
2
G、洗脱体积及时间的选择
?建议：洗脱体积将会影响最终的收获量，洗脱体积越大，收获量越高，但是浓度将会降低。请使用试剂盒推荐的洗脱体积进行洗脱，以保证最好的收获量和浓度。如果需要高浓度的质粒，请减少洗脱体积。另外，如果想收获高浓度高收获量的质粒，可进行二次洗脱。
?建议：加入洗脱Buffer后，室温放置2~5分钟，更有利于洗脱。
2、质粒纯度不高
A、蛋白质污染OD260/ OD280<1.7
?建议：选择推荐量的菌体，离心后小心吸取上清，如果上清液中混有悬浮物，可再次离心，以彻底去除蛋白质。
B、RNA污染OD260/ OD280>1.9
?建议：检查配送的RNase A是否完全加入到Buffer A1中，加入RNase A后，Buffer A1/RNase A应该存放在4o C，如果存放时间过长，或者没有正确存放，请重新加入RNase A。
C、基因组DNA污染
?建议：加入Buffer B1后，轻轻颠倒混匀，避免剧烈震荡涡旋，加入Buffer B1的处理时间最好不要超过5分钟。
3、加样时DNA飘出加样孔外
?建议：柱中残留乙醇未除净, 洗脱质粒DNA前确保无乙醇残留在膜上。可再离心或者抽真空。
ADP含量试剂盒使用说明
ADP含量试剂盒使用说明 产品简介： ADP广泛存在于动物、植物、、微生物和培养细胞中，是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定ADP含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。 ADP在254nm下有吸收峰，可以利用高效液相色谱法测定其含量。 试验中所需的仪器和试剂： 高效液相色谱仪、低速离心机、溶剂抽滤装置、针头式过滤器（水系，50个，0.22μm）、滤膜（水系和有机系各1个，0.45μm）、C18柱（4.6×150mm）、可调式移液器、样品瓶（50个，2mL）、甲醇（色谱级，300mL）、甲醇（色谱级，300mL）、蒸馏水 产品内容： 试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存； 试剂二：液体60mL×1瓶，4℃保存； 试剂三：粉剂1×1瓶，粉剂2×1瓶，4℃保存；临用前用少量蒸馏水将粉剂1和粉剂2溶解后倒入1000mL容量瓶中，用蒸馏水定容至1000mL，形成流动相缓冲液基质（注：试剂瓶中的粉剂要冲洗干净）,4℃可保存1周； 试剂四：ADP标准品5mg×1支，-20℃保存。临用前加入1mL双蒸水，配成5mg/mL溶液，配好后-20℃可保存1周； 操作步骤： 一、实验前的准备工作： 1、将双蒸水1000mL、流动相缓冲液基质1000mL和甲醇300mL用0.45μm的滤膜抽滤，以除去溶剂中的杂质，防止堵塞色谱柱。（注：双蒸水和缓冲液基质用水系滤膜抽滤，甲醇用有机系滤膜抽滤）。 2、流动相的配制：将抽滤完毕的流动相缓冲液基质1000mL与甲醇配比为99.9：0.1（v/v），即取999mL缓冲液基质与1mL甲醇混合。
3、将抽滤完毕的甲醇和双蒸水配比成100%的甲醇，10%的甲醇，双蒸水各250mL。将2和3中的溶剂超声30分钟，以脱去溶剂中的气泡，防止堵塞色谱柱。 二、ADP的提取： 1、组织的处理：准确称取组织重量0.1g，加入1mL试剂一，提取ADP，4000g常温离心15min，取上清液，加入等体积的试剂二，混匀，4000g常温离心15min，取上清，0.22μm水系微孔滤膜过滤后冰上放置，待测。 2、细胞处理：收集约30mL细胞，离心菌体经干燥后，加入1mL试剂一，超声破壁细胞(950 W，30%，15min，工作1s间隔2s)，4000g常温离心15min，取上清液，加入等体积的试剂二，混匀，4000g常温离心15min，取上清，0.22μm水系微孔滤膜过滤后冰上放置，待测。 三、ADP含量测定操作步骤： 1.开启电脑、检测器和泵，安装上色谱柱，打开empower软件，在方法组中设置进样量20μL，流速1mL/min，保留时间10min，检测波长254nm,设置完毕保存方法组。 2.用100%的甲醇、10%的甲醇、双蒸水按甲醇浓度从大到小的顺序洗色谱柱30min。 3.用流动相洗柱子，待基线稳定后开始加样。 4.加入标准品20μL，在10min内可分离ADP，ADP的保留时间在4min左右（柱子不同，保留时间有差异），计算不同浓度的ADP标准品的峰面积。 5.加入样品20μL，在相应保留时间处检测ADP的峰面积。 ADP含量的计算： 将5mg/ml的ADP标准品用双蒸水分别稀释成100μg/ml、80μg/ml、60μg/ml、40μg/ml和20μg/ml的ADP标准品溶液，以标准品浓度（μg/ml）为横坐标，峰面积为纵坐标分别计算ADP标准曲线。 注：标准品的稀释倍数要根据样品中ADP浓度确定，样品中ADP的峰面积必须落在不同浓度的ADP标准品的峰面积之内，该标准品稀释倍数只是一个参考。
欧米茄手表真假鉴别方法
目录 前言 (1) 一、欧米茄手表真假鉴别方法 (2) 前言 海外代购自08年以来异军突起，如今已成为电子商务的的主力军之一，今后代购的发展，不再只是单纯的价格战服务、信誉、品质将成为新的行业指标。服务已成为电子商务发展的至关重要环节，一个优秀的海外代购网站，需要有统一完善的代购服务体系，通过优质的电子商务平台、国外分公司、国际快递合作配送中心、专业客服人员组成的服务中心，全程为消费者提供售前咨询、订单追踪、售后支持，能够真正让中国消费者买到优惠的国外商品，享受高品质的时尚生活。然而目前代购网站鱼龙混杂，一些低质的代购站点经常出现欺骗客户以及诽谤竞争对手的现象，导致有些刚接触该行业的用户遭遇精神和金钱上的伤害。特编辑代购相关的注意事项，以及代购相关的帮助文档，让用户真正了解代购这一行业，并且从中获益。
一、代购一般流程图解 来源：美国购物网(https://www.360docs.net/doc/d73532548.html,)"（美国购物网站|美国代购网站|代购第一门户）如需转载请注明来源：美国购物网(https://www.360docs.net/doc/d73532548.html,)"！ 欧米茄是世界著名的瑞士手表，Omega手表的各个系列无论是男表还是女表都很受关注，欧米茄的超霸系列男表设计霸气十足，阳刚大气，非常适合大男生日常佩戴。女士腕表欧米茄蝶飞系列(De Ville)人气最高，属于内涵文艺设计路线，此系列腕表设计优雅奢华，适合正式场合佩戴。下面给大家分享下欧米茄手表真假鉴别方法 1.看表壳的生产序号 欧米茄手表都有生产序号，而且是一表一号，也是唯一的，通常被刻印在手表的后盖上，或
者是在手表某个壳爪的背后，一个8位的数字。如果是机械手表的话，那个8位数字的生产序号也会出现在机芯夹板的边缘上，表壳的生产序号和机芯的是一致的。 2.欧米茄手表真假鉴别方法 3.手表机芯辨别 正品手表机芯内的夹板或摆铊上标有相应的商标标牌字样；机芯在表壳组件中稳固；假冒手表机芯的夹板或摆铊上无商标标牌字样，或商标标牌字迹粗糙、模糊、歪斜，或简单地用小铜片粘贴；有些机芯内有杂志。 4.销售价格的识别 欧米茄价位均在1000元以上，高达几万元。美国代购的欧米茄手表会比专柜价格优惠一些，大概是专柜的6折到7折。
购买欧米茄表入门指南
买表，买的是心头好。那好字就有多解了，要自己喜欢，要价格合适，要购买经过愉快无惊险，还要在使用过程中不给自己带来种种烦恼。每一样都要做到舒服，可就不容易了。那么，购买一块欧米茄手表如何才能做到一个“好”字？就要在这里说说我的见解了。 首先买表的心态要借用迷胡大师的一句话：“手表无贵贱，人心有高低”！买表难免会从品牌因素、知名度来考虑。表是自己戴的，但同时也是戴给别人看的，这一点我也无法免俗。但有一点觉得还是要想明白，手表只是市场定位差别，在真正的功能用途上是没有区别的。即使在宣传上出现了很多技术优势的手表，其实在手表技术上和其它的手表还是大同的，所存在的小异，算是特点，并无高下之分（同时代的东西在今天的科技背景下更多的是依靠专利，而不是技术优势）。 那么在买表前调整了心态，接着就应该了解一下品牌。欧米茄的历史去百度查比我码字要容易，但还是简要说些我了解的细节把。欧米茄在瑞士表中算是一个有历史、有技术的牌子。从百年前的19令机芯开始，到30mm（30T）机芯，到登月辉煌的321机芯，到全自动时代的翘楚561机芯（这个全自动时代从470、490机芯一直到752双历机芯结束），欧米茄一直都是瑞士表中的优秀品牌。可以这样说一直到70年代末期，欧米茄跟劳力士、真利时一直是瑞士表的中流砥柱，无论是技术还是销量上，都是主力军级别的（二十多年无数的天文台证书、市场占有率和好评都纪录了这个辉煌的时代）。80、90年代是欧米茄的衰败时期，随着1020机芯的停产，这样一个百年老厂在十几年的时间里面依靠这ETA机芯支撑着手表的内在，显然这样是不行的。也就是在这个时期欧米茄被劳力士拉开了品牌的距离。直至今日，欧米茄的复兴之路还没有完成，8500机芯的全面使用和9300机芯的出现只是复兴大业的第一步，未来的路还是很漫长的，但可以看见的是欧米茄又重新跻身一流手表的行列。 欧米茄现在使用的机芯在大三针上，主力是2500机芯和8500机芯（当然还有女款以及一些变型机芯，例如2202、2628之类的）。其中争议最大的2500机芯，作为欧米茄重回自产机芯的第一款产品，坊间的评价一直不佳，偷停一直是2500机芯挥之不去的阴影。个人评价，2500机芯的偷停是客观存在的，由于基础机芯ETA2892（1120）的设计取向（偏小和薄），在欧米茄做改造的时候无法大动干戈（这个是正常的，在机械上渐改永远比新设计要合适），因此遗留的问题也使欧米茄头疼。今时今日欧米茄全面启用8500机芯，开始放弃2500机芯，此项问题正是其因之一。但2500机芯并不是一只不可取的机芯，从价格体系上2500机芯是有很大优势的，全钢表2W左右的实际入手价格，在今天物价飞涨的时代已是不易。那么在买2500机芯的欧米茄表时如何避免偷停带来的烦恼呢？个人的看法是保养的注意和使用方法的注意。由于基础机芯的动力偏小，2500机芯的表要注意保持动力，每天戴满8个小时以及适当的手动补链是保证手表正常运行的基础把；减少戴戴停停的次数，不戴的时候用手动上链来保持动力；其次就是保养的间隔，2500机芯的手表正常的保养间隔5年一次的洗油个人认为似乎有缩短的必要，在保养时要尽量避免落入庸手，保证洗油的用油质量（现在看来由于基础机芯的选择似乎不当，同轴擒纵技术的高间隔保养时间反而无法实现，走反了！）。现在随着2500机芯的停产慢慢接近，过几年再想买块2W左右的欧米茄也不容易了，因此2500机芯还是属于可以放心购买的产品。最近2500D机芯开始进入市场了，这个算是大改的新型号2500机芯其实本质上是将机芯结构尽量向8500机芯靠拢，使用了三层擒纵轮，以保证擒纵系统不容易因为动力问题打滑，使机芯不再出现偷停的问题。现在看来2500D机芯的推出，将会很大程度延长2500机芯的寿命，可能还会长期作为中、低端的欧米茄入门级别手表的机芯。其实2500机芯到了D款也脱离了当初推出的时候的基础+添加的味道，开始变成真正的自产机芯。
人elisa试剂盒,人8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)ELISA试剂盒使用说明书
人elisa试剂盒,人8羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）ELISA 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆 樊克生物专业供应： 使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本8羟基脱氧鸟苷 （8-OHdG）含量。 试验原理： 8-OHdG试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知8-OHdG浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板 内进行检测。先将8-OHdG和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合 的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中8-OHdG的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制 96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型 塑料膜板盖1块半块即用型 标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀 稀 空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型 标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型 生物素标记的抗8-OHdG抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型 洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀 释 底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型 自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。 安全性
β-葡萄糖苷酶测定试剂盒使用说明
β-葡萄糖苷酶测定试剂盒使用说明 分光光度法50管/24样货号：BC2560 产品简介： β-GC（EC3.2.1.21）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化β-糖苷键水解，具有多方面生理作用：在纤维素的糖化作用中，β-GC负责进一步水解纤维素二糖和纤维素寡糖生成葡萄糖；β-GC水解萜烯类香气前驱体，使糖苷键合态变成游离态。从而产生香味；β-GC能够水解植物体内野黑樱苷，释放HCN，从而防止昆虫取食。 β-GC分解对-硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算β-GC活性。 试验中所需的仪器和试剂： 可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 产品内容： 提取液：液体50ml×1瓶，4℃保存。 试剂一：粉剂×2瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入10ml双蒸水，充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存。 试剂二：液体25ml×1瓶，4℃保存。 试剂三：液体80ml×1瓶，4℃保存。 标准品：液体×1支，取1.5ml EP管加入1ml，5mol/ml的对硝基苯酚溶液。 操作步骤： 一、样品的前处理：
1.细菌或培养细胞： 先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；15000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 2.组织： 按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml 提取液），进行冰浴匀浆。15000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 3、标准样品的准备：取100μL标准液，加入到400μL试剂三中，得到1mol/ml标准液，十倍稀释到100nmol/ml，倍比稀释：50、25、12.5、6.25nmol/ml，稀释液用试剂二。100、 50、25、12.5、6.25nmol/ml做标准液。 二、测定步骤： 1.分光光度计预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。 2.加样表 试剂名称（μl）对照管测定管标准管试剂一400 试剂二500500 样本100100 迅速混匀，放入37℃准确水浴30min后，立即放入沸水浴中煮沸5min（盖紧，以防止 水分散失），流水冷却后充分混匀（以保证浓度不变） 试剂一400 充分混匀，8000g，4℃，离心5min，取上清液
omga质粒提取试剂盒_说明书_翻译
omgaE.Z.N.A.质粒试剂盒操作规程说明书（译版） 1. 自新鲜划痕选择培养板中分离单菌落，接种含适当选择性抗生素的2-5ml的LB或YT培养基进行培养。37℃强力摇动（~300rpm）孵育20-24h。使用10-20ml培养管或容量至少4倍于培养容积的培养瓶。强烈推荐使用endA阴性大肠杆菌菌株进行常规质粒分离。此类菌株包括DH5α和JM109。 2. 将1.5-5.0ml细菌菌液室温13,000 g离心3min。轻轻倒出或吸走培养基并丢弃。 3. 加入200μl 的溶液Buffer T 1/Rnase A重悬沉淀，涡旋或用移液器反复吹打。充分重悬沉淀对于获得高质量的DNA非常重要。 4. 加入200μl溶液Buffer T 2，倒置、转动试管5-10次使之轻轻混匀，得到透明的裂解产物。室温孵育5min。不要用力混合，以免使染色体DNA断裂，减低质粒的纯度。该步反应不要超过5min。溶液II不用时要拧紧瓶盖，以免试剂被空气中的CO2酸化。 5. 加入200μl溶液Buffer T 3，立即倒置试管15-20次混匀，直至白色絮状沉淀物形成。冰上孵育5min。为避免形成局部沉淀，加入溶液III后应立即、充分混匀溶液。 6. 4℃13,000 g离心10分钟。白色沉淀物形成，立即进行下一步操作。 7. 小心翼翼的吸取上清液，加入到新的1.5ml离心管（不是试剂盒提供的）中。加入200ul 用异丙醇稀释的BAC 结合液（缓冲液），颠倒3-5次充分混匀。BAC 结合液使用前必须用96%-100%的异丙醇稀释，详细的说明见瓶壁或第三页说明书 8.加入样本DNA（HiBind DNA MicroElute）到提供的2ml收集管中。 9. 室温8000g离心30s，丢弃收集管，将离心柱放入新的收集管中。 10. 将收集柱放回收集管并加入750ul SPM buffer（用乙醇稀释），室温8000g离心30s，丢弃收集管，将离心柱放入新的收集管中。 11. 将空柱子以最大速度离心2min，使柱子的基质干燥。此步骤为关键操作，不可遗漏。 12. 将柱子放入干净的1.5ml微量离心管中。将20-50μl（取决于终产物的期望浓度）洗脱液（Elution Buffer）或无菌去离子水直接加入柱子基质上，使之于室温下静置5min。 13.最大速度离心2min洗脱DNA。可以进行二次洗脱，以收集残存的DNA。 14. -20℃保存洗脱的DNA。 15. DNA的产量和质量：分别在波长260nm和280nm处测定样品适当稀释液的吸光度。DNA的浓度计算如下： DNA浓度=A260×50×（稀释倍数）μg/ml A260/A280的比率可以反映核酸的纯度。比值大于1.8表明核算的纯度在90%以上。或者，DNA的产量（及质量）有时可以通过琼脂糖胶/溴乙锭电泳与已知浓度的DNA样品相比较更好的予以确定。通常情况下洗脱的大部分DNA是超螺旋单体形式，但也可能存在串联体形式。 适用于BACs，PACs，P1s和质粒分离步骤（标准）（D2156-00，D2156-01，D2156-02）彭伟翻译
(完整版)OMEGAdna提取说明书
材料与仪器：离心机（至少14000g）、1.5ml或2ml无核酸酶离心管、水浴锅、无水乙醇、氯仿、异戊醇、无酶水。 试验之前：先用absolute ethanol稀释DNA Wash Buffer Concentrate,每瓶DNA Wash Buffer Concentrate加80ml（200份装） 试验步骤： 1.使用mortar和pestle在liquid nitrogen中研磨样品（不超过50毫克），放入1.5ml microcentrifuge tube。 2.加350ulBuffer ML1和25ul Proteinase K,涡旋混匀，60℃孵育（最少30分钟），大多数孵育不超过4小时或者37℃孵育1晚。 3.裂解产物加350ul氯仿和异戊醇的混合溶液（24:1），涡旋混匀。10000g室温离心2min，转移上清液到1.5ml microcentrifuge tube，避免含有污染物和抑制剂的乳白色界面。 4.估计步骤3 supernatant体积，加等集体的Buffer MBL，涡旋15s混匀，70℃孵育10min。 5.加步骤3等体积的无水乙醇，涡旋15s混匀。（tips:300ul上清液+300ul Buffer MBL+300ul absolute ethanol） 6.把柱子和提供的2ml收集管装配好，加步骤5的溶液750ul，10000g 室内离心1min,倒掉被离心的液体，重复利用提供的2ml收集管。 7.把步骤5剩余的混合物按照步骤6的方法离心，但抛弃提供的2ml 收集管。 8.把柱子放在新的2ml收集管，加500ul HB Buffer,10000g，30s，第一次洗柱子。
TPPA试剂盒说明书
T P P A试剂盒说明书-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1
梅毒TPPA试书剂盒说明书 1、试验原理： 梅毒抗体检测是采用抗原抗体凝集反应中的抗原抗体凝集反应。其原理如下：将梅毒 (Nichols 株)的精制菌体成分包被在人载体明胶粒子上。这种致敏粒子和样品中的梅毒螺旋体（TP）抗体进行反应发生凝集，产生粒子凝集反应（TP）抗体，并且可用来测定抗体效价。 2、样本收集和贮存： 血清或血浆1ml，标本应无溶血，无脂血，无微生物污染。不满足上述要求的标本拒收，标本的采集应使用清洁，无菌的一次性的干燥管。 标本用量最少50ul，七天内检测的标本应在2-8℃保存，贮存在-20℃可保存4W，同时避免反复冻融血清。 3、安全防范： 3．1此试剂盒内含人血成分。尽管所有的对照及定点对照都已经过试验验证并且发现对于乙型肝炎表面抗原，丙型肝炎抗体，HIV抗体均为阴性；但仍认为它们具有潜在的感染性。 3．2移液过程禁止用口。 3．3 在处理试剂和标本的地方禁止吸烟，饮食。 3．4使用试剂盒和标本时，必须戴一次性手套，穿试验服。使用后请彻底洗手清洁。 3．5患者样本及其他潜在感染材料试验后应放入医用垃圾桶内。 3．6试剂的溶解液，血清稀释液和阳性对照血清含有叠氮钠作为防腐剂,叠氮钠可以和铅铜反应形成爆炸的金属叠氮化合物.为防止金属叠氮化合物的形成,应用大量的水冲洗以免其堆积. 4、试剂： 4．1 储存与稳定性： 试剂应在2-10℃保存。 冻干试剂必须在复溶后的当天使用，如果保存在2-10℃最多可使用7天。 4．2 试剂盒组成：（由富士瑞士欧公司出产） （1）溶解液（液体） 8mL×1瓶 用于调制致敏粒子和未致敏粒子。 （2）血清稀释液 29mL×1瓶 用于样品的稀释。 （3）致敏粒子（冷冻干燥）
小鼠cfos试剂盒使用方法
小鼠c-fos试剂盒使用方法 检测范围：96T 20pg/ml-480pg/ml 使用目的： 本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中c-fos含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠c-fos水平。用纯化的小鼠c-fos抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入c-fos，再与HRP标记的c-fos抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的c-fos呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠c-fos 浓度。 试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7 终止液6ml×1瓶 2 酶标试剂6ml×1瓶8 标准品（960pg/ml）0.5ml×1瓶 3 酶标包被板12孔×8条9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 4 样品稀释液6ml×1瓶10 说明书1份 5 显色剂A液6ml×1瓶11 封板膜2张 6 显色剂B液6ml×1/瓶12 密封袋1个 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。 480pg/ml 5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 240pg/ml 4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 120pg/ml 3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 60pg/ml 2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 30pg/ml 1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。 6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7.温育：操作同3。
质粒提取试剂盒-说明书-翻译
精品文档 。 1欢迎下载 E.Z.N.A.? 质粒小提试剂盒操作规程（英文版译文） （适用于No. D6942, D6943 & D6944） 1. 自新鲜划痕选择培养板中分离单菌落，接种含适当选择性抗生素的1-5ml 的LB 培 养基进行培养。37℃强力摇动（~300rpm ）孵育12-16h 。使用10-20ml 培养管或容量至少4倍于培养容积的培养瓶。强烈推荐使用endA 阴性大肠杆菌菌株进行常规质粒分离。此类菌株包括DH5α和JM109。 2. 将1.5-5.0ml 细菌室温10,000 x g 离心1min 。轻轻倒出或吸走培养基并丢弃。 3. 加入250μl 的溶液I/Rnase A 重悬沉淀，涡旋或用移液器反复吹打。充分重悬沉 淀对于获得高质量的DNA 非常重要。 4. 加入250μl 溶液II ，倒置、转动试管数次使之轻轻混匀，得到透明的裂解产物。 可能需要孵育2min 。不要用力混合，以免使染色体DNA 断裂，减低质粒的纯度。该步反应不要超过5min 。溶液II 不用时要拧紧瓶盖，以免试剂被空气中的CO2酸化。 5. 加入350μl 溶液III ，立即倒置试管数次混匀，直至白色絮状沉淀物形成。为避免 形成局部沉淀，加入溶液III 后应立即、充分混匀溶液。 6. 室温≥10,000 x g 离心10分钟。白色沉淀物形成，立即进行下一步操作。 7. 小心翼翼．．．． 的吸取上清液，加入装配在2ml 收集管中的小量纯化柱I 中。确保离心沉淀未受扰动，确保没有细胞碎片加入到柱子中。室温下10,000 x g 离心1分钟，使裂解液完全通过柱子。 8. 丢弃滤过液，重新使用2ml 收集管；加入500μl HB 缓冲液清洗柱子，室温10,000 x g 离心1分钟，使溶液完成通过柱子。该步操作需确保残余的蛋白质污染被去除，以保证获得高品质的DNA 以适合于下游的应用。 9. 丢弃滤过液，重新使用2ml 收集管；加入700μl 用无水乙醇稀释的DNA 清洗液清 洗柱子，室温10,000 x g 离心1分钟，使溶液完全通过柱子，丢弃滤过液。 注意：DNA 清洗液的浓缩液使用前必须用无水乙醇稀释（5倍稀释），如果DNA 清洗液稀 释液经过冷藏，则使用之前必须置于室温。 10. 可选步骤：重复清洗，加入另外的700μl 用无水乙醇稀释的DNA 清洗液。 11. 将空柱子≥13,000 x g 离心2min ，使柱子的基质干燥。此步骤为关键操作，不可 遗漏。 12. 将柱子放入干净的1.5ml 微量离心管中。将30-50μl （取决于终产物的期望浓度） 洗脱液或无菌去离子水直接加入柱子基质上，使之于室温下静置1-2min 。≥13,000 x g 离心1min 洗脱DNA 。可以进行二次洗脱，以收集残存的DNA 。 13. DNA 的产量和质量：分别在波长260nm 和280nm 处测定样品适当稀释液的吸光度。DNA 的浓度计算如下： DNA 浓度=A 260×50×（稀释倍数）μg/ml A 260/A 280的比率可以反映核酸的纯度。比值大于1.8表明核算的纯度在90%以上。或者，DNA 的产量（及质量）有时可以通过琼脂糖胶/溴乙锭电泳与已知浓度的DNA 样品相比较更好的予以确定。通常情况下洗脱的大部分DNA 是超螺旋单体形式，但也可能存在串联体形式。 张小强 翻译
欧米茄表使用说明书
如何确定我购买的是正宗欧米茄腕表 遵循如下步骤可以确定您购买的是正宗欧米茄腕表： - 只在欧米茄指定经销商处购买欧米茄腕表。 - 申请一张信用卡大小的保修卡，完整填写8位系列编号、手表编号以及经销商的完整姓名和地址。 - 如果您想确定腕表是否正宗，请携同欧米茄腕表及保修卡到指定的维修中心，让我们的维修服务员确定您购买的是否为正宗欧米茄腕表。客户服务网络 计时表（CHRONOGRAPH）与瑞士官方天文台认证腕表（CHRONOMETER）有何区别返计时表（CHRONOGRAPH）带有显示时、分和秒的指针，它们与机械系统一起透过中央计时指针测定逝去回时间，可以记录到秒，并且具有30分钟和12小时定时装置。瑞士官方天文台认证腕表（CHRONOMETER）页是以不同角度，成功通过温度、精确度和防水功能测试后，获得COSC（瑞士官方天文台）正式颁发的等首 级证书的腕表。通过这些测试至少需要15天时间。 计时腕表上的按钮具有什么功能 返回页首 位于2点钟位置的按钮可以启动或停止计时功能，位于4点钟位置的按钮用于重新计时。 海马系列专业计时腕表的排氦气阀门具有什么功能 返排氦气阀门由欧米茄为职业潜水员专门研发。在深海潜水过程中，潜水员往往会在潜水钟内进行数天作回业。在到达水平面之前，潜水钟内充满氦气和氧气的混合气体。氦气分子轻于空气，可以渗入手表，并页在大气压力的作用下将水晶镜面推出。在到达水平面之前打开氦气排放阀可以将氦气排放，从而防止手首表进水。 自动上链机芯与手动上链机芯有何区别 返回自动上链机芯与手动上链机芯的区别在于上链方式的不同。手动上链腕表需要每天人工上链，而自动上页首链腕表则具有内部摩打，利用手腕的运动来自动上链。自动上链腕表通常具有至少40小时的动力储存，即使不佩戴手表，仍然能够备有足够的能量储存以保持稳定的运行。 返回页首欧米茄腕表是否具有防振功能 是。欧米茄腕表可以承受重量为5000克的振动。 欧米茄腕表是否具有防磁性能 是。欧米茄腕表具有防磁性能，符合ISO 764规定的标准。此标准根据一款腕表任意透过强度为4,800A/M，即特斯拉的磁场测试为基础制订。ISO 764测试内容包括将手表以3种不同的角度放入磁场内，接受每次长度为1分钟的测试： 返回?沿3点钟至 9点钟方向与手表平面平行的角度 页首 ?然后沿6点钟至12点钟方向
质粒提取试剂盒说明书
质粒提取试剂盒说明书 质粒提取的质量和得率受多种因素影响，既和质粒本身的性质以及拷贝有关，也和菌液的状态及实验操作有关，因此在质粒提取中的一些实验要点显得就极为重要了。质粒提取这看似简单的实验，却暗藏杀机，下面我们来看一下在质粒提取过程中那些习以为常的实验操作中的“误会“。 通常我们会认为越多的菌液或是越浓的菌液提取的质粒会越多，但实际实验中结果并非如此。 良好菌液的标准： 按1：1000的比例将菌液接种至培养基中，摇菌时间在8-12个小时，不超过16个小时。 菌液均匀悬浮于培养基中，无凝块、无沉淀，菌液的OD600吸光值在0.8-1.0之间，不超过1.2。 在提取质粒后进行凝胶电泳，如果在在超螺旋质粒的下方出现弥散条带，则是由于忘记加入RNaseA或RNaseA消化不充分，不完全降解的RNA与质粒共同被提取出来。
加入RNaseA的两个阶段： 在使用试剂盒提取质粒时，菌液重悬时在P1溶液中加入RNaseA 提取质粒后，在质粒溶液中加入RNaseA（试剂盒或溶液法） RNaseA的使用方法： RNaseA在质粒中的使用终浓度为20μg/ml 经RNaseA孵育的质粒，需要进行纯化去除残留的RNaseA 如何判断我们所使用的菌体量是否合适呢？在裂解时经几次颠倒混匀后，裂解液仍然为浑浊状态，说明未被裂解的菌体仍然悬浮在裂解液中，而充分裂解的菌体，溶液于裂解液中，裂解液呈现为澄清，质粒充分释放。 质粒小提试剂盒适合1-5 ml菌体的提取 小提中量试剂盒适合5-15 ml菌液的提取
中量提取试剂盒适合50-100 ml菌液的提取 大量提取试剂盒适合100-200 ml菌液的提取 如果我们想要增加提取的菌体量，也要相应提高所加入的裂解液体积。
欧米茄手表维修保养费用是多少
欧米茄手表是瑞士的一个手表品牌，一直沿袭着瑞士手表的精准化与精致感，是很多手表品牌值得借鉴的。欧米茄手表虽然品质优良，但是也是需要定期去保养的，避免损伤手表。那么，欧米茄手表保养一次多少钱呢？ 一、维修保养费用 由于手表的原材料不同，手表的保养费用有所不同，一般原料保养的价格是770元，金表需求800元以上。依照手表职业相关规定，别的还要依据欧米茄表的价格收取千分之一的检查费。保养一般需求5天才能完结，保养前请预留出足够的时刻。 二、那么欧米茄手表日常应该如何保养呢？ 欧米茄手作为日常佩戴的首饰之一，容易感染尘埃、汗渍，欧米茄手需要定期去专卖店清洗和保养，请专业的保养人员来清理。个人平常可对欧米茄表壳、表带、表头等外观处进行清洁：用软毛牙刷和手表清洗剂悄悄擦拭外壳和表带，最后用清水洗净，软布擦干，若有烘干机进行烘干处理。假如手表防水功用欠好，
清洗时要特别注意。表带是皮质的欧米茄表要用皮质清洁剂，不要沾水，避免对皮质形成危害。 欧米茄表带一段时间难免存在差错，很大程度是受到环境中磁场的影响。家用电器电脑、电视、冰箱等都会发生磁场，钱包、手包的磁扣都会引起手表磁化。磁化影响的是手表最重要的内件-摆轮游丝，一旦磁化，手表走时就不精确了。所以在日常佩带中尽可能的远离强磁场。 欧米茄手表还具有防水的功能特点，不同类型的手表防水深度不同。很多人认为防水多少米就是能够把手表放入多少米深的水中，这种主意是十分过错的。欧米茄表防水30米最好就日子防水，不要游泳的时候也佩带。不管防水深度多少，都不能够戴表进入蒸汽较多的当地如桑拿房，蒸气的热度和温差会使手表防水胶圈提早老化，失掉防水功用，无法正常维护机芯。 三、多久保养一次呢？ 正常情况下佩戴的欧米茄手表每2年-3年保养一次即可。 欧米茄手表的保养知识是关乎着每一个手表爱好者的，手表的保养方式是大同小异的。一般来说，一个中高档次的手表在两到三年保养一次为宜，次数不多不少，在保养时，需要注意送到专业的保养店，或者请专业的手表保养人员帮忙保养，不可自己盲目保养手表。 而一般每个城市都会有官方授权的保养维修中心，大家可以到这些地方去。如果你在郑州，也可以到精达亨得利名表维修中心来，精达亨得利名是实体授权的欧米茄手表特约维修服务中心，拥有官方授权，是专业的欧米茄手表售后维修保养中心，且店内配备先进的维修设备和优秀的技师，竭诚为您的爱表提供专业的保养维修服务！
人MyoDELISA试剂盒使用说明书
人Myo-DELISA试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中人Myo-D含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人Myo-D水平。用纯化的人Myo-D抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入Myo-D，再与HRP标记的Myo-D抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Myo-D 呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人Myo-D浓度。 样本处理及要求： 1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后， 离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中 如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
BAC-PAC大型质粒提取试剂盒操作方法及步骤说明书
杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://https://www.360docs.net/doc/d73532548.html, BAC/PAC DNA Kit BAC/PAC大型质粒提取试剂盒 目录号：PL2001 适用范围： 适用于BAC/PAC/P1/Cosmid等大型质粒制备 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成保存20次 RNaseA -20℃ 1.3ml （10mg/ml） 溶液P1 4℃130ml 溶液P2 室温100 ml 溶液PⅢ室温110 ml 杂质清除剂A 室温 3 ml 杂质清除剂B 室温30 ml 内毒素清除剂-20℃10 ml 本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。 储存事项: 1.第一次使用时，将试剂盒所带全部的RNase A加入溶液P1后（终浓度100μg /ml） 置于4℃保存。如果溶液P1中RNase A失活，提取的质粒可能会混杂有微量RNA 残留，在溶液P1中补加RNase A即可。 2.内毒素清除剂在4℃可保存一个月，如果要长期保存，建议保存在－20℃! 3.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热 几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。 4.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时 盖紧盖子。 产品介绍：
常规的离心柱型质粒抽提试剂盒并不适用于BAC/PAC/P1/Cosmid等大型质粒DNA的抽提。这主要是因为大型质粒DNA分子量很大，常常会超过100kb而且一般拷贝数低产量低，使用常规的离心柱吸附膜吸附效率和产量很低而且过膜会打断这些大分子量的质粒DNA。本试剂盒采用改进碱裂解法从培养菌中提取质粒DNA，采用独特的溶液配方和内毒素清除试剂，只需要几次简单离心去除蛋白质、多糖、内毒素、RNA等杂质，获得高质量的质粒DNA。纯化DNA的OD260/280通常在1.8左右，得到的质粒可直接应用于细胞转染甚至动物体内实验等对DNA纯度要求很高的工作中。纯化后期过程均在1.5ml离心管中操作，方法简单，不需特殊设备，无需过柱，不用酚氯仿抽提；基本可完全回收细菌裂解释放出的质粒，不必担心质粒DNA的丢失。本方法提取纯化质粒DNA，对质粒损伤小，即使是100kb甚至200kb以上的大型质粒或超大型BAC/PAC质粒，只要碱裂解法能够提取，就可以有效纯化。此外溶液型的试剂可以按照比例放大缩小进行小提/中提/大提，最后可选择任意小体积溶解质粒，浓度可高达3μg/μl。 产品特点： 1.不需要使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。快速、方便、从150 ml大肠杆菌LB((Luria-Bertani)培养液中，可快速提取典型产量30-50μg高纯度BAC质粒DNA，提取率达80-90 %。 2.获得的质粒产量高，超螺旋比例高，纯度好，可直接用于转染、测序、文库等各 种分子生物学实验。 3.内毒素含量极低（< 0.1 EU/μg DNA），可直接应用于细胞转染。 注意事项 1.提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝 质粒或大于10kb 的大质粒，应加大菌体使用量，同时按比例增加P1、P2、PⅢ的用量。 2.提取大质粒时操作动作要轻柔，应该使用剪大了开口的吸头，防止机械剪切对 DNA的损坏。 3.DNA沉淀液沉淀离心后，可能看不到明显沉淀。如未见沉淀，担心DNA丢失， 可保留上清液，待完成全部操作后电泳鉴定，以确定是否获得终产物（数百微克DNA离心沉淀在管的侧壁上，可能无法看到明显团块）。 4.得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260
加A试剂盒使用说明书
编码品名规格单位 北京华越洋生物 加A试剂盒50次盒GX9133 北京华越洋生物 加A试剂盒100次盒GX9133 产品及特点本产品利用Taq DNA polymerase的不依赖于模板的末端转 移酶活性，在只有dATP存在的情况下，在平末端的DNA片段加 上一个dA尾巴，使平末端片段也能被T载体克隆。 1.简单, 2X Tailing Buffer 中含有所需要的所有成分,不需要 单独准备。 2.适用于任何平末端的DNA片段，包括Pfu DNA polymerase等酶合成的DNA片段。 3.产物可以直接用于与T载体的连接。 规格及成分成份50 次包装 2 X Tailing Buffer 1.25 mL Taq DNA olymerase(5U/uL) 50 uL 使用手册1份运输及保存低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。 自备试剂PCR片段 使用方法一：反应前纯化处理： 用Vent, Deep Vent, Pfu, Pwo等具有3到5外切活性的 DNA聚合酶扩增得到的DNA片段，必须经过彻底的去除残留的酶 的处理过程（如酚/氯仿抽提或Proteinase K处理），否则它们将 在加A反应时，切除掉加上的A尾巴，干扰反应。可以采取胶回收 和酚/氯仿抽提法等常规方法纯化，最后溶解在水或TE中，终浓度 以0.1 ug/uL为宜。 二：加A反应
在干净的0.5 mL或1.5 mL离心管中，分别加入下列成分： 回收的DNA片段(0.2-2 ug) 25 uL 2 X dA Tailing Buffer 1 uL Taq DNA polymerase（5 U/uL） 补水到50 uL 72℃保温2小时 三：反应后处理 加A反应后，Taq DNA polymerase将与DNA末端紧密结合，所以必须酚/氯仿抽提去除。如果使用Proteinase K处理后再 用酚/氯仿抽提效果会更好。得到的DNA溶于适量水和TE中后即 可用于T载体的连接反应。 疑难解答Q：Taq DNA polymerase加尾有特异性吗？ A：在有四种核苷酸存在的反应体系中，Taq DNA polymerase加 尾特异性跟DNA的3’末端的核苷酸有关。如果要加T，要加尾的 DNA片段最好末位为T。如果要加A，要加尾的DNA片段最好末 位为C。其关系具体见下表： 3’末端核苷酸加尾核苷酸 A A,但效率极低 C A>C G G>A>C T T>A --DNA & Cell Biol. 12:763, 1993 关联产品加T试剂盒（dT Tailing Kit）、一站式T载体制备套装
Annexin V-FITC 凋亡检测试剂盒操作方法及步骤说明书
Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒 说明： 细胞凋亡是细胞的基本特征之一，它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面起着十分重要的作用。Annexin Ⅴ是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine，PS）高亲和力特异性结合。以标记了FITC的Annexin Ⅴ作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。 Propidium iodide（PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。将Annexin Ⅴ与PI匹配使用，可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞以及死细胞区分开来。 产品组成（50／25次反应）： · Annexin V-FITC 500ul／250ul（20ug /ml） · Binding Buffer 40ml／20 ml · Propidium Iodide (PI) 250ul／125ul（50ug /ml） 保存条件: 2-8℃储存，有效期一年。 注意事项： 1.为保证得到理想的实验结果，在使用此试剂盒之前请认真阅读该注意事项； 2.试剂（尤其是小瓶装的试剂）在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖 时液体洒落； 3.Propidium iodide（PI）能通过皮肤吸收，对眼睛有刺激作用； 4.此试剂盒仅供科研使用，不宜用于临床诊断； 5.本试剂盒中提供的PBS为随试剂赠送，并非试剂盒的真正组成成分；细胞的洗涤同常规方法。 操作注意要点： 1.整个操作过程动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞，尽量在4℃下操作； 2.反应完毕后请尽快检测，因为细胞凋亡是一个动态的过程，反应1小时后荧光强度就开始衰 变；