Quantity_One定量分析及成像系统使用说明
GEL EQ凝胶成像使用指南
1.打开主机电源与计算机电源.
2.点击凝胶成像软件,进入QUANTITY ONE操作界面.
3.在FILE菜单中,选择GEL EQ菜单,进入图像采集界面
4.点击LIVE/FOCUS菜单,采集图像.(根据被扫胶的要求, 在凝
胶成像主机面板上选择UV/WHITE紫外光/白光).(如需使用透射白光,则把白光台电源打开,把白光台放在底板上,把胶放在白光台上.)
5.调节光圈大小,点击IRIS下OPEN/CLOSE;调节聚焦,点击
FOCUSE下NEAR/FAR按钮;调节远近即大小,点击ZOOM 下相应按钮,直到满意为止.
6.爆光时间一般选择自动AUTO EXPOSE即可.
7.若图像上有高亮红点,说明爆光过度,则须缩小光圈.
8.图像调好后,点击SA VE键保存.若需保存为其他格式,则在
FILE菜单下选择导出,保存为JPEG/TIFF格式文件.
9.关于分析处理见Quantity One应用讲义
Quantity One应用讲义
本讲义介绍Quantity One的两个重要分析功能：定量分析和分子量确定。
Quantity One软件Help Quick Guide快捷指南提示如何实现一个功能，如定量分析(V olumes Quick Guide)，电泳条带分析(Band Analysis)，差显分析(Differential Display Analysis)，克隆计数(Colony Counting Analysis)等。快捷指南下有1，2，3…步骤，根据提示完成。
一．定量分析功能
快捷指南Volumes Quick Guide，此功能能对任意所选区域进行定量分析,此分析可以报告2个结果：相对浓度和绝对浓度（如有浓度标准样品）
1．选择成像系统或打开已保存的文件(软件可以控制Bio-Rad所有的成像系统如GelDoc,ChemiDoc,V ersaDoc,GS-800,FX,如不是Bio-Rad成像系统所摄取的图象，将图象保存为Tiff文件格式，软件也可进行分析处理)
2．Zoom Box，缩放，对图象进行放大观察
3．Transform转化，调节图象的对比度黑白
4．V olume Rect Tool 矩形区域选择，如U1
5．V olume Free hand Tool自由画笔选择区域，可以勾勒出无规则形状,如U2
6．V olumn Contour Tool等高线勾勒区域，自动连接浓度浓度相同的点，如U3 上面3种方法选择需要定量的区域。
双击所选区域，出现如下窗口，定义样品类型，如未知样品Unkonwn(U1,U2…即待计算样品)，背景Background(B1,B2…，软件在算浓度时会将此区域的浓度自动扣除) 或标准样品Standard（Std1,Std2, 如果该样品是浓度标准样品，即定量标准，需在浓度concentration一栏输入该样品的浓度）。
7．Select Tool选择不同区域
8．Print Image打印图像
9．V olume Analysis Report 定量报告结果，打开出现如下窗口，选择要报告的参数，主要有2个参数V olume和Concentration。V olume为相对浓度，如有浓度标准样品（Std），软件可报告Concentration绝对浓度。
二．条带分析功能Band Analysis
介绍用此功能对泳道内的所有条带进行分子量确定，相对浓度分析
1，2，3同上
4，5，6确定泳道lane,
并可对泳道进行各种调整（实际实验中泳道往往不是垂直的而出现各种变形。在软件的工具栏中有一Lane Tool 图标，包含有更多泳道编辑工具。
7．Lane Background 去除泳道背景，建议不做
8．Detect Band ，检测泳道内的条带，打开出现如下窗口，一般可通过调节sensitivity 灵敏度来调节检测出的条带，或通过人工编辑来增加/减少条带。打开工具栏中Band Tool 条带编辑工具包可看到更多编辑工具（如上图）
Lane Tool
泳道编辑工具包 Band Tool 条带编辑工具包
10. Standard 输入分子量标准，软件自带有许多Bio-Rad 的分子量标准，如你用的是自己的
标准，进入New Standard 建立新的分子量标准，软件可以选择标准单位是MW （蛋白质）还是BP （核酸）等（左下图）。在Protein-Standard 对话框中输入分子量数值，完成后单
击赋值图标（右下图），回到图象文件上单击标准样品的泳道，软件自动将所输的分子量数值和泳道内的条带一一对应。
10. Band Attribute 条带属性，在完成第9步以后，软件已自动计算出了其他未知条带的分子
量,打开band attribute 选择要报告的参数，这里我们选择Molecular Weight ，图象上可以看到所有条带的分子量（红颜色标记），标准分子量为蓝色标记。
赋值图标：
告诉软件哪条是
分子量标准样品的泳道 输入分子量数值
11. Match ，跳过不做
12. Print Image 打印图象
13. All Lane Report 所有泳道条带结果报告。打开窗口，选择要报告的参数，如Mol.Wt.（分
子量，如左下图），软件将报告结果（右下图），在报告的右下脚有一报告输出工具，点击可将报告结果输出成TXT 文本格式或输出至剪贴板，
你可把它粘贴到EXCEL ，WORD 等文件下。
如有问题请咨询成都百乐科技公司.
电话：138********(杨明强)
139********(费嘉)
先将DGGE 图片用画图软件转成TIF 格式，加载进Quantity One 后点工具栏上的Lane Tools ，找到create lanes in an adjustable frame 这个工具，在你的DGGE 图谱 上添加可以看见的每个泳带，添加完了在match 下面找到match 匹配，匹配好了后在reports 下面找到phylogenetic tree 就可以进行聚类分析了，里面自己选择不同的聚类分析方法。
报告结果输出工具