组培实验方案

阿坝师范学院生化系

蔷薇组织培养实验方案

指导教师：鲜雪梅

姓名：何静

组员：刘茂杨雅璇刘俐伶

班级：2015级生物教育

组号：1-2

联系电话：139********

2016年12月16日

一、实验题目：

蔷薇组织培养

二、目的要求：

1、熟练掌握培养基的灭菌和接种的方法及操作技能。

2、熟练掌握外植体的灭菌方法及操作技能。

3、掌握无菌操作的方法及技能。

三、实验器材：

器材：蔷薇枝条带芽、手术剪、镊子、酒精灯、超净工作台、培养瓶、洗衣粉、培养瓶、移液管、量筒、PH试纸、无菌水、培养皿、滤纸、烧杯药品：75%酒精、2%次氯酸钠、蔗糖、琼脂、大量元素母液（扩大10倍）、微量元素母液（扩大100倍）、铁盐母液（扩大100倍）、有机物母液（扩大50倍）、0.2mg/L NAA、1mg/L 6-BA

四、实验原理：

细胞具有全能性，其外植体接种在无菌人工培养基上，给予适当的条件能长成完整的无菌植株

五、方法与步骤：

1、培养基配制及分装称取蔗糖30g、琼脂10g溶于水，倒入锅中加热融化后倒出，加入大量元素母液100ml、微量元素母液10ml、铁盐母液10ml、有机物母液20ml、NAA 1ml、6-BA 2ml，搅拌均匀，测PH在6左右即可，定容至1L。将培养基倒入洗净烘干的培养瓶中，每瓶倒入约2cm左右高的培养基。

2、培养基及各器材的灭菌将烧杯、培养皿及滤纸用报纸包好和装有培养基的培养瓶一起放入121℃高压灭菌锅内灭菌20min。

3、外植体的选择和初步消毒选择生长健壮带芽的蔷薇枝条为外植体，用洗衣粉水洗去表面灰尘及杂物，自来水冲洗干净。用灭菌的剪刀将枝条的病虫害部分剪去，剪为3cm左右的带芽的茎段。洗衣粉水冲洗10min，再用自来水冲洗干净。

4、接种准备将配制好的75%的酒精、酒精灯、无菌水、装有培养基的培养瓶、已灭菌的烧杯、培养皿及滤纸放入超净工作台，打开紫外光灯和干热灭菌器

20min后关闭。

5、外植体的消毒用75%棉擦拭双手及工作台及培养瓶，点燃酒精灯，将外植体放入培养皿中，用无菌水清洗2次，倒入75%的酒精6s后倒出，无菌水清洗2次。倒入2%的次氯酸钠10min后倒出，无菌水清洗4次，用无菌滤纸吸取表面水分。

6、外植体的接种将镊子在酒精灯上灼烧冷却后，取合适的外植体，两端各剪去1cm，然后将外植体插入培养瓶中，每个瓶中插一个即可，将瓶口和盖子过火，盖上盖子，每人操作四瓶，留下一瓶做空白对照。

7、外植体的培养将培养瓶放在环境温度为24℃，每天光照16h。

六、实验结果：

七、分析讨论：

褐变的原因：

感染原因：