RTPCR

中国古代地方行政区划演变知识讲解

历史专题一中国古代地方行政区划的演变 中国古代的行政区划大致可以划分为以下五个时期：萌芽时期（先秦）、郡县制时期（秦、汉）、州制时期（魏晋南北朝、隋）、道（路）制时期（唐、宋）、行省制时期（元、明、清）。 1. 中国古代地方行政机构的发展演变 （1）秦：郡县制。 （2）汉：由郡、县两级制变成了州、郡、县三级。 （3）隋：州、县两级制。 ⑷唐：道、州、县三级。 宋：道（或称路）、州（或称府）、县三级制。 ⑹元：行省之下设路、府、州、县。 ⑺明：承宣布政司（习惯仍称行省）以下设府、县。 ⑻清：省、道、府、县 2. 演变特点： （1）由虚入实;监察机构行政化;变化多发生在混乱时期;一级行政区变化较大;次级行政区变化不大。 （史实：由虚入实，监察机构行政化史实：东汉时期的刺史制度逐渐演化为州一级行政机构。发生在政权交替混乱时期的史实：唐朝的藩镇;元朝的行省制。一级行政区变化大，次级行政区变化不大史实：一级行政区秦汉为郡，元为行省;县级基本未动。） （2）原则：山川形便；犬牙相入；依经济和人口变化不断调整。元代以前与自然环境和经济发展密切相关（或山川形便）；元代以后受政治因素影响较大（或犬牙交错）。 （元以前：与经济区、自然区和文化区相吻合;元后：“犬牙交错”原则， 避免行政区与经济区、自然区和文化区的吻合。各自的优点：与经济区、自然区和文化区相吻合：顺应了封建社会的自然规律和社会发展规律;有利于促进区域内部经济的交流发展和形成独立的经济体;有利于形成文化认同。“犬牙交错”原则：有利于削弱地方经济实力和文化认同感;有利于防止地方割据的出现，强化中央集权。不利于地方经济发展和抗御自然灾害；对内部交通、文化交流产生了不良影响。） （3 ）深层特征：中央集权逐步加强，地方主动性与能动性越来越受到压抑。地方权力越来越集中到中央。 （4 ）整体特征：二级三级制是古代地方管理制度的主体；局部而言：县是中国历史最稳定的一级政区；州的地位不断降低。 3. 对地方行政机构演变的整体评价： ⑴积极：有利于加强了中央集权，维护国家统一；便于征发徭役、兵役，征收赋税，管理地方治安；有利于社会稳定和经济发展。评述：以政治为目的为主，加强中央集权，遏制地方割据；维护了农耕经济的稳定和区域经济的均衡发展；思想上

rtpcr(rt pcr)

rt-pcr（rt - pcr） I. Experimental apparatus and materials: 1, transfer guns: 1ml, 200 L, 20 L, 10 L, 2 L 2, suction head: 1ml, 200 L, 20 L 3, homogenate tube: 5ml 4, suction head table: put 1ml suction head one, put 20 l suction head one 5, EP tubes: 1.5ml, 0.2ml, 100 L 6, reagent bottle: 2 60ml Brown reagent bottle (wide mouth, with cover) 1 125ml white reagent bottles (with absolute ethanol) 7, 50ml, 250ml, 500ml: a 8, capacity bottle: 250ml, 500ml, 1000ml 9, test tube rack: 5ml, 1.5ml, 20 L 10, salt water bottles: 250ml, 500ml each 2 spare, one with absolute ethanol, another with DEPC water 11, aluminum lunch box: 4 12, plastic small lunch box: 1

13, large porcelain cylinder: 2 14, tin paper: a roll 15 rolls of paper: 2 rolls 16, triangle flask: with a cap, slightly larger Two, the processing and preparation of experimental equipment 1, plastic products: (including gun head, EP tube, homogenate tube, etc.) The DEPC of water from the flask into the ceramic cylinder, the plastic products by soaking them, which requires a small tip Straw DEPC into the water, and then dried overnight, high pressure, spare, before the experiment will first put the gun suction head, and a high pressure (EP tube) 2, glass products: acid soaking overnight, washed clean, dry spare foil Mongolia (DEPC blister) (wash after the first bubble 1 per thousand DEPC overnight, and then dried) 3, homogenizer: (including scissors, tweezers) first wash, and then high pressure (do not need to bubble DEPC) Three. Reagent preparation: 1, DEPC water: suck 1ml, placed in 1000ml double steamed water, with 1 per thousand DEPC water, placed in the 1000ml capacity

RT-PCR实验方法总结大全.

RT-PCR实验方法总结大全 RT-PCR实验有三步:抽提RNA,RT,PCR。 要求: 1.做RT前必需测RNA浓度,逆转录体系对RNA量还是有一些要求,常用500ng 或1ug。 2. RT按要求做,一般不会出太大问题。 3. PCR,按常规。但如需扩长片段,则对前两步要求较高,需要有完整的cDNA 存在,不是单改变Mg2+浓度、退火温度能解决的。 1RT和PCR时的引物设计是不是一定要先知道目的基因的序列?必须 在RT时,引物设计有3种方法即a:Random 9mers;b:Oligo dT-Adaptor Primer;和c:特异的下游引物。如果用a和b方法,是扩增的所有的cDNA(理论上,还要用此产物做PCR 的模板继续扩增。 如果用c方法,那么要去那里查它的序列呢?https://www.360docs.net/doc/e07510228.html,问题: 在做RT-PCR遇到一怪现象,即对同一动物不同组织扩增同一段基因,结果从一种组织中可以扩出我的目的基因,条带非常的好,而另一组织在同样的条件下却得到许多非特异性的条带,尝试其他条件同样无法得到满意的结果,百思不得其解!(注:已肯定该基因在两种组织中都表达,且内参照在两种组织都可扩增出来 从这两种组织中提取的RNA的量是不一样的,我测过吸光度,差异还很大,会不会和这有关呢?请高手指教! 解答: 1.RT-PCR有两种做法:

条件具备的话可用kit进行一步法进行;若条件不太好的话可分两步进行逆转录再PCR。但后来发现两步法的结果更加理想,条带特异性强且无拖尾现象,我推测是体系更加单一比较利于PCR的进行,当然也可能是我买的kit不太好。(promega。 2.RT-PCR应具备的条件 高质量的RNA(保留后可做5‘,3’RACE;引物的(最好产物短点;若涉及粗略定量的话还应考虑RNA的浓度或是cDNA的浓度(如果由内标分子更好,但我发现其实很不容易将RNA的浓度以及内标分子的表达量调整的完全一样;体系的均一性等。 3.RACE 我做过RACE(3’RACE是宝生物的Kit;5‘RACE是Gibico,但现在再进行另一个同源基因的3‘RACE时却怎么也P不出来,这两个基因是由同一对引物扩增出来的,其中一个已经获得了全序列(RACE的方法,而另一个基因的3’UTR 却增么也扩不出来,我推测是不是该基因的3‘UTR太长的缘故,我都快绿了,有无 RT-PCR的常用内标b-actin 和GAPDH的使用有选择性吗?比如不同的细胞,不同的刺激。 有关内参: RT-PCR内参照可以在一个管子里做(那样也是图好看一些,最好分开两管,把除了引物之外的mixture统一配,拍照后,算目的基因和内参的比值,这就是基因表达的相对浓度。 问:我曾经作过同一管的PCR,内有actin 和目的基因引物。虽然可见到两条均一条带但图片质量不理想(而且酶量、Mg2+加倍。请教mxbdna2003 ,你是如何处理同一管的PCR的各成分的浓度? 答: it should determined the amount of RNA. but it not for the quantitity of the PCR. it just was convienent to guess the amount ot the template<(for RT and PCR and bettrer for publication and editor if he don not know the preocedure much. but the amount just

RNA提取,RT-PCR实验报告

RNA制备及其鉴定 实验目的初步掌握组织总RNA制备的原理及其基本方法，掌握RNA纯度鉴 定的基本方法。 实验原理 细胞内的RNA通常与蛋白质结合，以核蛋白（RNP）的形式存在。分离制备RNA时，首先必须破碎细胞，使RNP释放到溶液中并与蛋白质分离，然后将RNA同其他的细胞成分分离开并保证RNA的完整性。本次实验我们选用了Trizol法分离提取小鼠肝组织的总RNA，Trizol法分离提取的RNA产率高、纯度好且不易降解。 评价RNA质量的标准是RNA的均一性和完整性。均一的RNA取决于有效的去除RNA提取物中的DNA、蛋白质和其他杂质；完整的RNA取决于最大限度地避免纯化过程中内源性及外源性RNA酶对RNA的降解。通常采用紫外分光光度法测定RNA的浓度和纯度，纯RNA的A260/A280=2.0，但由于所用的标本不同，此比值有一定的变化，一般在1.8~2.0之间，低于改值表明有蛋白污染，需进一步用酚/氯仿抽提。RNA的完整性可通过琼脂糖电泳法进行鉴定。完整的RNA电泳时，28S和18SrRNA经EB染色后，两条电泳条带的显色强度近似为2比1。 本实验中几个重要试剂的作用： Trizol试剂：Trizol的主要成分是苯酚、异硫氰酸胍、十二烷基肌氨酸钠、β-巯基乙醇、醋酸钠、柠檬酸钠。它的主要作用是1、裂解细胞，使细胞中的蛋白、核酸物质解聚得到释放。2、使蛋白质变性，有利于DNA和RNA与蛋白质的分离。3、抑制内源和外源RNase。 氯仿：氯仿的作用有多个方面，一、作为有机溶剂变性蛋白，使其沉淀并通过离心除去。二、通过变性作用抑制RNase活性；三、通过氯仿把水相里参与的苯酚抽提掉；四、作为溶剂抽提样品中的一些脂溶性杂质（比如油脂、脂溶性色素等），起到一定除杂作用。 异丙醇：异丙醇是沉淀核酸用的，作用和乙醇一样。只不过用量要比乙醇少。异丙醇是等体积，而乙醇一般需要2.5倍体积。在水相很多，离心管容积有限，加不下太多乙醇的时候一般会用异丙醇沉淀。 75%乙醇：应用无水乙醇+DEPC水制备。用乙醇洗涤沉淀，可去除所有残留的蛋白质和无机盐.RNA样品中如果含有无机盐,有可能对后续实验操作中的一些酶促反应产生抑制作用。 实验步骤按规定的操作步骤进行操作，特别注意创造一个无RNA酶的环境。实验结果 经RNA琼脂糖电泳后，紫外灯下观察RNA分离情况如下图：

阿甘正传》中你不知道的地方分析

1。阿甘和对丹中尉说自己要做船长时，丹中尉嘲笑说如果阿甘做了船长自己就会做太空人，这为以后也埋下了一个小伏笔，因为最后丹中尉的假腿就是用造航天飞机的材料做的。

2。阿甘最后和珍妮举行婚礼时，丹中尉是站在最后，其他人都是座着的。 对于失去双腿的人，能够站立着就是幸福。 3。阿甘在住宾馆的时候打电话叫人到对面楼去查看一下,他被楼对面的手电桶光照的眼睛睡不着,这其实就是着名的“水门事件”,导演巧妙安排了甘作为检举人。我们可以在后面马上看到尼克松辞职的一幕。 4。阿甘跑步时被溅了一脸泥水了吗？阿甘用路人递过来的背心擦脸，从此就有了文化衫。要知道在这之前是没有在背心上印字或图案的。 5。丹把赚的钱投资苹果电脑了吗？阿甘居然说是投资水果行业，真是搞笑。 6。这部片子最搞笑的是：阿甘在美式足球比赛中，当他得分后冲向场外时，看台上飘下一张标语：STOP！ 7。一开始阿干还小得的时候他妈指着电视上那个跳摇摆舞的说“少儿不宜”。。之前这个人还在阿甘他们家投宿过。。 这个人就是猫王。。呵呵~ 没想到他也客串了一把。。的确在那个时候，猫王最先引导了扭臀的时尚，不过一开始大部分美国人都觉得这个招牌动作是很下流的。。 8。拿背心擦脸的那个不只是文化衫那么简单。。擦出来的印记就是着名的品牌smile啊，那个人就是创始人。。 呵呵~原来也是阿甘指引他了 9。阿甘在集会上碰到一个黑人在滔滔不绝的演说，以前不知道是什么人，后来看了丹泽尔华盛顿的片子后知道是黑豹党。 10。阿甘到白宫作客，洗手间里有一张梦露的相片。 11。影片中你还可以看到：鲍勃·霍普（Bob Hope），美国喜剧演员，生前得到1500余个奖项，《吉尼斯世界纪录》因此称之为“最受尊重的娱乐界人士”。2003年7月27日去世。另外还有一个大家都熟悉的美国登月宇航员——阿姆斯特朗（Neil Armstrong）。 还有一处大家更熟悉的，阿甘在退伍之后回到家，他妈妈给他准备的球拍是“毛主席”牌的，上面有个很大的毛主席头像。 12。把阿甘带到反战活动现场并推上讲台的女的的名字叫Hillary(希拉里) 不知道是不是在影射什么。。毕竟阿甘上映的时候是克林顿的年代 13。还有一些是我在网上收集的： 介绍丹中尉是军人之家的时候给了他祖辈的四个战死的镜头，分别是独立战争，南北战争，一战和二战．从着装看出来了． 还有阿甘和珍尼在一辆”灰狗”见面,是肯.克西,就是写飞跃布谷鸟巢的作者组织的”merry pra

位置和坐标A

位置与坐标（A ） 一、选择题 1.若y x =0，则点P （x ，y ）的位置是（ ） A.在数轴上 B.在去掉原点的横轴上 C.在纵轴上 D.在去掉原点的纵轴上 2.如果点P （m +3，m +1）在直角坐标系的x 轴上，P 点坐标为（ ） A.（0，2） B.（2，0） C.（4，0） D.（0，﹣4） 3.若点A （m ，n ）在第二象限，那么点B （﹣m ，|n |）在（ ） A.第一象限 B.第二象限； C.第三象限 D.第四象限 4.点M 在x 轴的上侧，距离x 轴5个单位长度，距离y 轴3个单位长度，则M 点的坐标为（ ） A.（5，3） B.（﹣5，3）或（5，3） C.（3，5） D.（﹣3，5）或（3，5） 5.如图，小明从点O 出发，先向西走40米，再向南走30米到达点M ，如果点M 的位置用（﹣40，﹣30）表示，那么（10，20）表示的位置是（ ） A.点A B.点B C.点C D.点D 6.如果直线AB 平行于y 轴，则点A ，B 的坐标之间的关系是（ ） A.横坐标相等 B.纵坐标相等 C.横坐标的绝对值相等 D.纵坐标的绝对值相等 （﹣3，2）关于y 轴的对称点是B ，B 关于x 轴的对称点是C ，则点C 的坐标是（ ） A.（﹣2，3） B.（﹣3，2） C.（3，﹣2） D.（3，2）

8.已知点A（1，0），B（0，2），点P在x轴上，且△PAB的面积为5，则点P的坐标为（） A.（﹣4，0） B.（6，0） C.（﹣4，0）或（6，0） D.无法确定 二、填空题 9.在电影票上，如果将“8排4号”记作（8，4），那么（10，15）表示 . 10.如图，用（0，0）表示点O的位置，用（3，2）表示点M的位置，则点N的位置可表示为 . 11.点P（a，b）与点Q（1，2）关于x轴对称，则a+b= . 12.已知A在灯塔B的北偏东30°的方向上，则灯塔B在小岛A的的方向上. 三、解答题 13.写出如图中“小鱼”上所标各点的坐标并回答： （1）点B、E的位置有什么特点； （2）从点B与点E，点C与点D的位置看，它们的坐标有什 么特点？ 14.如图所示，是聊城市区几个旅游景点的示意图（图中每个小 正方形的边长为1个单位长度），请以某景点为原点，画出直角坐标系，并用坐标表示出下列景点的位置. 光岳楼、湖心岛、

常见矿物基本特征

常见矿物基本特征 一、常见白色矿物 (3) 方解石：CaCO3 (3) 白云石:CaMg[CO3] (4) a-石英：a-SiO2 (5) 斜长石：Na[AlSi3O8]—Ca[Al2Si2O8] 架状硅酸盐 (6) 重晶石:BaSO4 硫酸盐 (8) 二、含铜矿物 (8) 黄铜矿:CuFeS2（原生矿） (8) 辉铜矿:CuS2（次生富集带） (9) 斑铜矿:Cu5FeS4（原生矿） (10) 黝铜矿:Cu5Sb4S13（原生矿） (11) 孔雀石:Cu2CO3（OH）2（氧化带） (12) 蓝铜矿:Cu3[CO3]2（OH）2（氧化带） (12) 铜蓝:CuS（斑铜矿的次生矿物，次生富集带） (13) 胆矾:CuSO4.5H2O（氧化带） (13) 赤铜矿: Cu2O（氧化带）cuprite (14) 赤铜矿-产地分布 (15) 三、含铁矿物 (16) 褐铁矿: FeO(OH).nH2O错误！未指定文件名。 (16) 赤铁矿: Fe2O3 (17) 黄铁矿: FeS2 (18)

菱铁矿: FeCO3 (19) 三、稀有金属矿物 (20) 细晶石 (20) 辉钼矿 (22)

一、常见白色矿物 方解石：CaCO3 【化学组成】 CaO56.03%, CO243.97%，常含Mn和Fe,有时含Sr. 【形态】经常可以见到良好的晶体，常见晶形有六方柱[1010]和菱面体[0112]的聚形、复三方偏三角面体[2131]等，三组解理彼此斜交，其夹角为74055′集合体呈粒状、致密块状、钟乳状、结核状等。 【物理性质】透明无色或白色，有时因含杂质而呈灰、黄、粉红、蓝等色；白色条痕；玻璃光泽；硬度3；解理上常见平行长对角线方向的双晶纹；比重2.715. 无色透明的晶体为贵重光学材料，称为冰洲石（因盛产于冰岛而得名）【成因产状】方解石在自然界分布极广。 在浅海或湖泊中常常沉积形成广大的石灰岩（以方解石为主的沉积岩）层。 地下水可溶蚀石灰岩，也可以重新形成方解石，如石钟乳、石笋、石灰华等。在土壤中活动的地下水在潜水面附近常形成沿一定水平分布的方解释结核，地质工作者习惯称为钙质结核。 在热液活动中常形成含矿或不含矿的方解石脉。在晶洞中，常有良好晶体。 在岩浆作用形成的碳酸盐中，方解石常占80%左右。 此外，方解石还作为碎屑沉积岩的胶结物，基性火成岩蚀变后的矿物等参加到各种岩石中去。由于地下水活动，各种岩石的裂隙中也经常充

三国群英传7 特殊地点图解

三国群英传7 特殊地点图解 山寨（一共18个）送礼 编号名称占领者势力城池11 龙王坞管承豫州，鄱阳，南海，鹿耳门 12 百花坞玲玲赤壁，江夏，夏口，南昌 14 洞庭坞区星乌林，赤壁，庐陵，长沙，湘潭 23 百兽寨吐悉泥武陵，交趾，建宁，云南 28 巨熊寨塔郎江陵，零陵，桂林 33 飞凤寨碧月汉中，梓潼，成都 34 虎头寨褚飞燕天水，下卞，祁山，阳平 38 翻江坞雷公临江，白帝，长坂坡，涪陵 43 黑风寨郭大贤长安，洛阳，虎牢关，五丈原，郿 46 天柱山李大目新野，汝南48 大兴山十常侍许昌，汝南，宛 52 偃月坞兰兰淮安，区阿，徐州，盱眙，小沛 55 九里山昌豨谯，陈留，小沛，定陶 59 白狼寨高丽王朱蒙昌黎，南皮，襄平，北平 64 纠云寨申雄邺，界桥，壶关 67 血蛟坞雷绪郿坞，扶风 68 黄沙寨于氐根西凉，街亭，陇右，安定 70 天王寨难楼陇右 妖兽(一共39个) 攻打

编号名称占领者首先攻破可得宝物 01 浮冰岛巨雪熊 UJ好人卡 02 青鬼岛青罗刹童子御守（童子招来） 03 赤鬼岛赤夜叉姬御守（姬招来） 06 沧冥礁青鳞水妖 UJ好人卡 09 大渚泽剑仙八宝灵灯（技回） 10 凤凰岭剑仙行军方略（行军） 13 碧水地穴太岁水龙旗{水龙狂涛（武将计）} 15 映月幽潭地仙回春石（回春） 16 罗刹谷青罗刹玉屑金丹（体力+10） 17 黑泉黑玉妖蟒狮蛮宝带（精武） 18 灭泉噬人巨熊熊骨饰（大熊呼唤） 19 柔泉太岁 UJ好人卡 20 哑泉乌戈战牛翔鹰羽（飞鹰召唤） 21 万蛇坑黑玉妖蟒艾草香囊（专心） 22 豹子林大花豹豹皮腕（花豹召唤） 24 瘴气林瘟神虎面具（猛虎招唤） 29 龙魂井金甲妖龙兽面战甲（刚体） 31 金牛山赤夜叉猛牛角（猛牛呼唤） 35 龙岳剑仙狮蛮宝带（精武） 36 先秦地监秦俑武将 UJ好人卡 37 紫金废矿血焰火蚁 UJ好人卡 39 景山洞窟尖牙鬼虎 UJ好人卡

各种矿物详细图文解析

各种矿物详细图文解析 (Siver) 名字来源：源于古代文明社会； 化学组成：成分中常含Au、Cu、Hg等；类别：自然元素-金属元素-自然铜族晶系和空间群：等轴晶系，Fm3m； 晶胞参数:a0=0.4077nm； 形态：单晶呈立方体和八面体或两者的聚形，但极少见。集合体成树枝状、不规则薄片状、 粒状和块状； 颜色：新鲜断口呈银白色，但表面往往呈灰黑的锖色；条痕：银白色 透明度：不透明

光泽：金属光泽 硬度：2.5 解理和断口：无解理，锯齿状断口； 比重：10.5g/cm3 （纯银） 其他性质：具延展性，是电和热的最良导体；鉴定特征新鲜断口呈银白色，锯齿状断口，比重大，富延展性； 成因和产状：热液成因的自然银见于一些中低温热液矿床，它呈显微粒状分布于铅锌热液矿 床的硫化物中。外生成因的自然银见于硫化物矿床的氧化带。 主要用途：为银的唯一来源； 著名产地：墨西哥和挪威。 (Selenium) 名字来源：来源于希腊语Selene，意思是月之女神； 化学组成：主要成份是硒，含有微量的硫；类别：自然元素-半金属元素-自然硒族；晶系和空间群：三方晶系，P3221；晶胞参数:a = 0.4366nm，c = 0.4954nm；形态：为粒状或浸染状分布于基质中；颜色：灰，灰紫色或微红色；

条痕：红色； 透明度：：不透明； 光泽：亚金属光泽； 硬度：2； 解理和断口：（0112）完全解理；比重：4.81 g/cm3；g/cm3 其他性质：晶体易弯曲，具有挠性；鉴定特征： 成因和产状：自然硒为硒化物的风化产物，常由硒铅矿变来，与褐铁矿共生并被其胶结。 主要用途：硒的最显著性质是它的光电效应，由此它可作光电池，用于电视方面；还可用于 玻璃工业、橡胶工业等部门，玻璃中加入硒可消除铁杂质引起的绿色，再橡胶配料中加入硒， 能提供橡胶的抗热、抗氧化及耐磨性； 著名产地：玻利维亚Potosí，意大利Liguria，美国Nevada。 (Antimony)

PCR和RT-PCR区别

PCR和RT-PCR PCR和RT-PCR基础 PCR基础 聚合酶链式反应（PCR）过程利用模板变性，引物退火和引物延长的多个循环来扩增DNA序列。这是一个指数增长的过程，因为上一轮的扩增产物又作为下一轮扩增的模板，使其成为检测核酸的一种非常灵敏的技术。一般，经过20-30个循环得到的扩增产物就足够在溴化乙锭染色的凝胶上观察到。反应包括几个成分（表1）。模板可以为纯化的基因组或质粒DNA；由RNA转化得到的cDNA；或未经纯化的粗制生物样品，如细菌克隆或噬菌斑。引物确定了扩增产物的序列和长度。最常用的热稳定聚合酶是Taq DNA聚合酶。这种酶适用于常规扩增，但是使用其他热稳定聚合酶会改善结果。扩增反应还包括缓冲液，三磷酸脱氧核苷及镁离子。镁离子浓度影响酶的活性、引物退火、模板和PCR产物的熔点（Tm），忠实性以及引物二聚体的形成等。在随后的章节中将讨论这些成分、循环参数以及其他参与作用的因子相互间各种作用对于成功PCR的影响。 表1.反应成分 Component Final Concentration Template 10^4-10^6 copies of DNA template Primer 1 0.1-0.5μM Primer 2 0.1-0.5μM 10X Reaction buffer 1X Magnesium 1.0-3.0mM dNTP mix 200 mM each dNTP Thermostable DNA polymerase 1-4 units/100 ml reaction RT-PCR基础 RT-PCR将以RNA为模板的cDNA合成同PCR结合在一起，提供了一种分析基因表达的快速灵敏的方法。RT-PCR用于对表达信息进行检测或定量。另外，这项技术还可以用来检测基因表达差异或不必构建cDNA文库克隆cDNA。RT-PCR比其他包括Northern印迹、RNase保护分析、原位杂交及S1核酸酶

图解印刷网点基础知识简介

图解印刷网点基础知识简介 2007-5-16 图解印刷网点基础知识简介 在印刷过程中，连续调和半色调图像都是由网点的疏密来进行调整表现的。而通过将CMYK四色的网点混合，则可以表现出无穷多的颜色。 目前在印刷工艺中使用的网点主要有两种不同的类型：调幅网点（AM）和调频网点（FM）。 调幅网点 调幅网点是目前使用的最为广泛的一种网点。它的网点密度是固定的，通过调整网点的大小来表现色彩的深浅，从而实现了色调的过渡。在印刷中，调幅网点的使用主要需要考虑网点大小、网点形状、网点角度、网线精度等因素。 网点大小 此主题相关图片如下： 网点大小是通过网点的覆盖率决定的,也称着墨率。一般习惯上喜欢用“成”作为衡量单位，比如10％覆盖率的网点就称为“一成网点”、覆盖率20％的网点称为“二成网点”另外，覆盖率0％的网点称为“绝网”，覆盖率100％的网点称为“实地”。 印刷品的阶调一般划分为三个层次：亮调、中间调、暗调。亮调部分的网点覆盖率为10％～30％左右；中间调部分的网点覆盖率为40％～60％左右；暗调部分则为70％～90％。绝网和实地部分是另外划分的。 网点形状 印刷中的网点形状不只是大家想象中的单单圆形一种，以50％着墨率情况下网点所表现出的形状来划分，可以分为：方形、圆形、菱形三种。

此主题相关图片如下： 方形网点在50％覆盖率下，成棋盘状。它的颗粒比较锐利，对于层次的表现能力很强。适合线条、图形和一些硬调图像的表现。 圆形网点无论是在亮调还是在中间调的情况下，网点之间都是独立的，只有暗调的情况下才有部分相连。所以对于的采层次的表现能力不佳，四色印刷中比较少采用。 菱形网点综合了方形网点的硬调和圆形网点的柔调特性，色彩过渡自然，适合一般图像、照片的表现。 网点角度 印刷制版中，网点角度的选择有着至关重要的作用。选择错误的网点角度，将会出现干涉条纹。 常见的网点角度有90度、15度、45度、75度几种。45度的网点表现最佳，稳定而又不显得呆板；15度和75度的的角度稳定性要差一些，不过视觉效果也不呆板；90度的角度是最稳定的，但是视觉效果太呆板，没有美感了。 此主题相关图片如下： 两种或者两种以上的网点套在一起，会有相互的干涉，当干涉严重到影响图像美观时，就出现俗称的“龟纹”了。

PCR技术的种类及应用

PCR技术的发展及应用 平骏 14112822276摘要：聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）是1985年由美国PE- Cetus 公司的科学家Kary Banks Mullis发明的一种可在体外快速扩增特定基因或DNA序列的技术。经历了近30年的技术发展，现如今PCR技术在生命科学研究以及相关的很多领域都得到广泛的应用。本文主要对PCR的基本原理、反应组份作简要的介绍；同时也对在PCR基础上发展起来的相关技术作简要综述。 关键词：PCR技术；PCR原理；PCR新技术 对核酸的研究己有100多年的历史，20世纪70年代初人们就致力于研究基因的体外分离技术，Korana于1971年最早提出核酸体外扩增的设想，该设想在1985年被Mullis等人实现，他们发明了具有划时代意义的聚合酶链反应[6]。这项新技术是根据生物体内DNA序列能进行快速复制的特点，实现在体外对特定DNA序列进行快速扩增，可在短时间内从试管中获得数百万个特异DNA序列拷贝。PCR技术操作简便、结果可靠，被世界各国广泛应用于医学、农业、考古学等各个领域的基因研究和分析，对分子生物学的发展产生了深远的影响[18]。发明人Kary Banks Mulis也因此荣获了1994年的诺贝尔化学奖。 1、PCR 技术的原理[1,2] PCR技术是模拟细胞内DNA的天然复制过程，DNA 聚合酶以单链DNA为模板，借助一小段双链DNA 来启动合成，通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA 模板中的一段互补序列结合，形成部分双链。在适宜的温度和环境下，DNA 聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3，- OH 末端，并以此为起始点，沿模板5，→3，方向延伸，合成一条新的DNA互补链。简言之，其基本原理包括3个基本反应过程：变性→退火→延伸。PCR 反应的基本成分包括：模板DNA( 待扩增DNA )、引物、4种脱氧核苷酸( dNTPs)、DNA 聚合酶和适宜的缓冲液。每一循环中所合成的新链，又都可作为下一循环中的模板。PCR 合成的特定的DNA序列产量随着循环次数呈指数增加，每完成一次循环需2-4min，2-3h就能将目的基因扩增，从而达到迅速大量扩增的目的。 2、PCR技术的反应组份 2.1 模板DNA PCR反应的模板可以是单链DNA也可以是双链DNA，可以是基因组DNA 或cDNA，

rtpcr注意事项

RT-PCR技术 RT-PCR简介 RT-PCR的指数扩增是一种很灵敏的技术，可以检测很低拷贝数的RNA。 RT-PCR广泛应用于遗传病的诊断，并且可以用于定量监测某种RNA的含量。（检测基因表达的方法，参见Northern Blot法。） RT-PCR有时候也会指代实时PCR(real-time PCR)。为了与逆转录PCR 相区别，通常被写作“定量PCR”(quantitative PCR)或者 RTQ-PCR(real-time quantitative PCR)。 实时PCR 实时PCR(real-time PCR)，属于定量PCR（Q-PCR）的一种，以一定时间内DNA的增幅量为基础进行DNA的定量分析。 real time PCR 的定量使用萤光色素，目前有二种方法。一种是在ds DNA （双链DNA）中插入特异的萤光色素；另一种使用一种能与增幅DNA序列中特定寡核酸序列相结合的一种萤光探针（probe）。 real time PCR 与reverse transcription PCR(反转录PCR) 相结合，能用微量的RNA来找出特定 时间、细胞、组织内的特别表达的遗传基因。这两种RT PCR的组合又被称之为“定量RT-PCR（quantitative RT-PCR）” RT-PCR技术相关试剂 oligo: 多聚体，相当于mRNA引物 AMV（M-MLV）：逆转录酶 dNTP：脱氧核苷酸 RNase：RNA酶抑制剂

PCR Buffer：RT-PCR缓冲液 MgCl2：2价镁离子 （一）预变性： 破坏DNA中可能存在的较难破坏的二级结构。使DNA充分变性，减少DNA 复杂结构对扩增的影响，以利于引物更好的和模板结合，特别是对于基因组来源的DNA模板，最好不要吝啬这个步骤。此外，在一些使用热启动Taq酶的反应中，还可激活Taq酶，从而使PCR反应得以顺利进行。 （二）变性--退火--延伸循环： ①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备； ②模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合； ③引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为 反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。 （三）PCR仪扩增循环后72度延伸10分钟 用PCR仪扩增时,(变性.退火,延伸)循环完成后,继续72度延伸了10分钟的原因： 1.延伸时间取决于待扩增DNA片段的长度。（当然是在反应体系一定的条件下）例如，使用taqDNA聚合酶，72度时的碱基掺入率为35-100bp/s，因此延伸速率为1kb/min。 2.根据延伸速率推得，扩增1kb以内的dna片段1min即可，而3-4kb 则需要3-4min，依次照推。通常在最后一轮要适当的将延伸时间延长至 4-10min，这样做是使pcr反应完全以提高扩增产量。 3.继续72度延伸了10分钟除了可以使pcr反应完全以提高扩增产量外，还有一个作用是：在用普通taq酶进行PCR扩增时在产物末端加A尾的作用，可以直接用于TA克隆的进行。 RT-PCR的注意事项

RT-PCR实验报告

逆转录pcr rt-pcr 为反转录rcr（reverse transcription pcr ）和实时pcr（real time pcr）共同的缩写。逆转录pcr，或者称反转录pcr(reverse transcription-pcr, rt-pcr)，是聚合酶链式反应(pcr)的一种广泛应用的变形。在rt-pcr 中，一条rna链被逆转录成为互补dna，再以此为模板通过pcr进行dna扩增。 由一条rna单链转录为互补dna(cdna)称作“逆转录”，由依赖rna的dna聚合酶（逆转 录酶）来完成。随后，dna的另一条链通过脱氧核苷酸引物和依赖rna的dna聚合酶完成， 随每个循环倍增，即通常的pcr。原先的rna模板被rna酶 h降解，留下互补dna。 rt-pcr的指数扩增是一种很灵敏的技术，可以检测很低拷贝数的rna。rt-pcr广泛应用 于遗传病的诊断，并且可以用于定量监测某种rna的含量。（检测基因表达的方法，参见 northern blot法。） rt-pcr有时候也会指代实时pcr(real-time pcr)。为了与逆转录pcr相区别，通常被写 作“定量pcr”(quantitative pcr)或者rtq-pcr(real-time quantitative pcr)。 实时pcr 实时pcr(real-time pcr)，属于定量pcr（q-pcr）的一种，以一定时间内dna的增幅量 为基础进行dna的定量分析。 real time pcr 的定量使用萤光色素，目前有二种方法。 一种是在ds dna中插入特异的萤光色素；另一种使用一种能与增幅dna序列中特定寡核酸序 列相结合的一种萤光探针（probe）。 real time pcr 与 reverse transcription pcr 相 结合，能用微量的rna来找出特定时间、细胞、组织内的特别表达的遗传基因。这两种rt pcr 的组合又被称之为“定量rt-pcr（quantitative rt-pcr）” rt-pcr技术相关试剂 oligo: 多聚体，相当于mrna引物 amv（m-mlv）：逆转录酶 dntp：脱氧核苷酸 rnase：rna酶抑制剂 pcr buffer：rt-pcr缓冲液 mgcl2：2价镁离子 pcr各步骤的目的 （一）预变性： 破坏dna中可能存在的较难破坏的二级结构。使dna充分变性，减少dna 复杂结构对 扩增的影响，以利于引物更好的和模板结合，特别是对于基因组来源的dna模板，最好不要 吝 啬这个步骤。此外，在一些使用热启动taq酶的反应中，还可激活taq酶，从而使pcr 反应得以顺利进行。 （二）变性--退火--延伸循环： ①模板dna的变性：模板dna经加热至93℃左右一定时间后，使模板dna双链或经pcr 扩增形成的双链dna解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备； ②模板dna与引物的退火(复性)：模板dna经加热变性成单链后，温度降至55℃左右， 引物与模板dna单链的互补序列配对结合； ③引物的延伸：dna模板--引物结合物在taqdna聚合酶的作用下，以dntp为反应原料， 靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板dna 链互补的半保留复 制链。 （三）pcr仪扩增循环后72度延伸10分钟 用pcr仪扩增时,(变性.退火,延伸)循环完成后,继续72度延伸了10分钟的原因：

刺客信条 黑旗 藏宝图地图坐标 具体位置图文详解分解

支线收集：藏宝图(共22个，其中3个需要Uplay、XBOXlive、PSN) 注：暂缺联网的3份藏宝图 (1)哈瓦那宝藏 step1.哈玩那最北面的杂货店的左侧花基上有一具骸骨，搜刮它可以获得一份哈瓦那藏宝图。 step2.(哈瓦那)顺着托勒斯的甘蔗田往哈瓦那南部的沙滩走去，走到哈瓦那城墙南部的了望塔与一棵倒卧生长的椰子树之间能够挖掘出一嗰宝藏。

(2)马坦蕯斯宝藏 step1.去到托尔蒂东北面鸟瞰点悬崖下方的海滩上(从这儿起就再没有士兵骚扰了)，在小船旁有具骷髅躺在大石旁，搜刮它便可以获得一份藏宝图(宝藏的地点是在乾龟岛海域的马坦蕯斯)。 step2.按十字键→调出从托尔蒂拾获的藏宝图。从藏宝图的图中看到了马坦蕯斯最让人眼前一辆的水车，图中水车是在水车房的右侧，由此可以得知宝藏是在东面。 穿过水车屋和仓库，去到了马坦蕯斯的玛雅石柱水池中，在玛雅石柱的东面的崖壁中有一个凹陷处，走进去，便能够挖掘该位置的土壤，并获得宝藏。 (3)伯纳维斯塔角宝藏

step1.此时到海湾的沙滩上，搜刮一具骸骨，获得藏宝图。 按十字键→唤出藏宝图，往次海湾草地的西北面走去，会看见一嗰水潭，然而地图上显示水潭位置在更深的位置，而眼前所见水潭就近在眼前，因此水潭内部必定别有洞天。 顺着水潭往西北面走去，便能够挖掘出一嗰宝箱。 (4)拿索宝藏 step1.进入“快速旅行选单”选择前往大伊纳瓜。离大伊纳瓜的码头不远的西面草地上，有一棵倾斜的大树。 登上它后可以登上码头西面的山头上，这山头前有一个洞穴，走进洞穴会因湿滑而倾斜的地面滑到下方去，就在洞的悬崖出口前会发现一副骸骨，搜刮他可以获得一份藏宝图(宝藏地点在拿索)。 step2.按十字键→然后按Y键打开从大伊纳瓜拾获的藏宝图(633，784)。而且地图当中画有拿索标志性的建筑——白色豪宅，因此各位读者不要被地图当中那些水体给迷惑了，此时拿索是伊留塞拉海域拥有沼泽面积最大的岛屿。 因此藏宝位置就在白色豪宅右侧通往沼泽湖的道路与白色豪宅所在的山头直接的泥土上。 (5)盐泻岛宝藏

RTPCR原理和实验步骤

RT—PCR原理与实验步骤 一、知识背景： 1、基因表达：DNA RNA Protein 单拷贝基因表达存在逐步放大机制，如一个蚕丝心蛋白基因 104个丝心蛋白mRNA（每个mRNA存活4d,可以合成105个丝心蛋白) 共合成109个丝心蛋白。因此单拷贝基因的mRNA表达水平对于其功能水平的调控是非常重要的。 2、PCR技术(Polymerase chain reaction）：即聚合酶链式反应。 在模板、引物和四种脱氧核苷酸存在的条件下依赖于DNA聚合酶的酶促反应，其特异性由两个人工合成的引物序列决定。反应分三步： A。变性：通过加热使DNA双螺旋的氢键断裂，形成单链DNA； B.退火：将反应混合液冷却至某一温度，使引物与模板结合. C。延伸：在DNA聚合酶和dNTPs及Mg2＋存在下，退火引物沿5’3’方向延伸。以上三步为一个循环,如此反复。 3、逆转录酶和RT-PCR 逆转录酶（reverse transcriptase）是存在于RNA病毒体内的依赖RNA的DNA聚合酶,至少具有以下三种活性： 1、依赖RNA的DNA聚合酶活性：以RNA为模板合成cDNA第一条链; 2、Rnase水解活性：水解RNA：DNA杂合体中的RNA； 3、依赖DNA的DNA聚合酶活性:以第一条DNA链为模板合成互补的双链cDNA。 二、RT—PCR的准备: 1。引物的设计及其原则： 1）引物的特异性决定PCR反应特异性.因此引物设计是否合理对于整个实验有着至关重要的影响。在引物设计时要充分考虑到可能存在的同源序列，同种蛋白的不同亚型,不同的mRNA剪切方式以及可能存在的hnRNA对引物的特异性的影响。尽量选择覆盖相连两个内含子的引物,或者在目的蛋白表达过程中特异存在而在其他亚型中不存在的内含子。 2) 引物设计原则的把握 引物设计原则包括： a、引物长度：一般为15～30bp ，引物太短会影响PCR的特异性，引物太长PCR的最适延伸温度会超过Taq酶的最适温度,也影响反应的特异性。 b、碱基分布:四种碱基最好应随机分布，避免嘌呤或嘧啶的聚集存在，特别是连续出现3个以上的单一碱基。GC含量（Tm值）:40％～60％，PCR扩增的复性温度一般是较低Tm值减去5～10度.

让你倒背如流的地点记忆法详解

让你倒背如流的地点记 忆法详解 集团标准化工作小组 #Q8QGGQT-GX8G08Q8-GNQGJ8-MHHGN#

让你倒背如流的地点记忆法详解 你应该见过一些特殊的课外辅导班，他们教授的东西让我们充满好奇，比如：心算、快速计算、快速记忆法等等，其实每种方法的背后都有其一定原理。 中小学生很多对背诵，尤其是古文背诵很畏惧和厌烦，我们在这里讲述一种世界上非常先进的记忆法—地点法，这种方法也是目前记忆专家常用的方法，地点法若与系统的学习步骤相结合，可以让我们对一整本古文倒背如流，怎么你不信好吧，我会让你心服口服，请往下看： 我们以四书中的《大学》为例，地点法的重要步骤如下：工具/原料 纸笔和一篇任意文章 步骤/方法：地点记忆法的步骤 1准备好地点 以标点符号为准，每一句放一个地点 《大学》，有300多句话，首先得准备400个地点。2熟悉文章 了解大意，把不认识的生字找出来，通过字典等方法全部疏通，标好拼音，生字记清楚，这一步是基础。3熟读文章 并能理解每句话的大概意思。老师说，熟读才能熟背，这点至关重要！4给每句标上序号 把每句话要放的地点对应起来，标记关键点。5开始记忆

文章 拿出秒表，语文家教李老师说过，背诵关键在心态的平和！激发自己竟技的心态，务必做到快、狠、准！ 在背诵的过程中，首先循着自己的第一印象摸索，把关键词语找出来，然后把它们快速的联系起来。 每10句复习一次，每10句记一次时间，每50句进行一次阶段性复习，然后把句子遮住，在脑中回忆一遍，标记一下错的地方。全部记忆完毕之后，一定要来一次总复习，遗忘的或者没记牢的要标记一下，然后针对这些没记牢的从新记忆一次，最后根据具体情况再进行复习，直到自己完全记忆牢固！ 注意事项 记忆文章还应注意以下几点： 1、不要太纠结准确率，前俩次只要背诵对75%就可以，不要影响心态； 2、要求自己10句一个阶段的记忆速度不断加快； 3、战略上藐视你要背诵的文章，觉得背诵完一本书也没什么； 4、抓住早晚这两个黄金记忆时间，复习一遍。 整篇课文记忆好之后，是记章节和页码，把章节和叶吗的序号联系起来按顺序放到第一句话的地点上面。这样章和页的对应关系你也就知道了。 语文家教老师提示：这种方法也可以用到现代文等文章，而且