激光治疗法激活干细胞 或可促进牙齿组织再生
激光治疗法激活干细胞或可促进牙齿组织
再生
据国外媒体报道，哈佛大学一个团队成功借助弱激光，在实验室中激活干细胞并且刺激老鼠和人类牙组织的牙齿生长。这项研究仍然处于最初期的阶段，而且尚未在人类身上
进行测试，因此目前无法确定这些未来技术是否会走进医院。然而这些试验带来的可能治疗方案是非常令人
激动的。
干细胞遍布人体，因为拥有变成任何类型细胞的能力而令科学家们着迷。它们的这种能力意味着它们
有可能修复或者取代受损的组织。科学家们过去已经提出理论称，借助激光刺激干细胞生长是有可能实现的，因为激光能够以某种未知的原因刺激组织生长，但是这是科学家们首次演示并且观察
到这一过程。
自然再生牙齿组
织的能力能够改变牙科医学，使医生有可能为病人再生牙齿而不是使用烤瓷牙齿取代它们。更令人惊奇的是，一旦这项技术得到更进一步的测试，它就有可能用于治疗伤口并且再生骨骼、皮肤和
肌肉。
研究人员首先在
老鼠的两颗臼齿上钻孔，露出牙齿内部组织，其中一颗牙齿接受了激光治疗，另一颗则没有接受激光治疗。12个周之后，研究人员观察到接受治疗臼齿中的牙质出现了再次增长，牙齿正在恢复，当研究人员在老鼠身上再次进行试验时出现
了相同的结果。
研究人员随后在各种哺乳动物细胞上测试了相同的技术，每次激光都会导致某种含氧分子出现，那些分子随后导致干细胞开始转变成产生牙质的细胞，研究人员借助这些试验首次了解到激光如何能够促使组织
再生。
研究人员进行的三次试验都是为了观察激光是否会刺激组织中的干细胞开始组织再生的过程。人类细胞试验展示了激光对老鼠产生的效果有可能同样适用于人类牙齿。研究人员称他们正在研发这项技术的人
体试验。如果那些试验成功，那就可能带来测试骨骼、肌肉和其它细胞的再生激光疗法。《汉字英雄》第二季热播十强选手酣战终极淘汰赛“淘宝时代”激活网络视频市场如果沈玎和李洪绸碰面的话，或许真的会为微电影未来的发展路
径发生争吵。因为这两个好不容易从网络视频草根中打拼出的文化人所走的路径如此不同，前者创立的南辕映画靠着网络广告和宣传片需求的爆发，实现了跨越式的发展，这个6人团队在去年创造了超200万的营业收入；而后者开设的优优
影视凭着一系列小有名气的网络剧赚足眼球，在实现收入倍增的同时，李洪绸更登堂入室，签约新公司，将真正指导投资超千万的大电影。
抑或，两人会成为好朋友。因为无论是沈玎还是李洪绸，这一众网络视频草根创业者的
成功，都毫无疑问拜托了这个淘宝时代的点化。真正成为这群草根文化班子输血者的不再是衣冠楚楚的500强大公司，而是一群出手阔绰的淘宝大户；真正成为这些网络视频重度消费者的也不再是以往的沙发土豆，而是热衷网络
生活的都市白领。
换言之，草根的产品需求催生了一群草根的内容提供商，而这个庞大市场的吸金效应才刚刚开始展现。
南方日报记者钟啸实习生钟宜珊
淘宝时代颠覆市场网店生意激活视频草根
写书的时候我就想做电影，这是一种梦想。开口必谈理想仿佛是所有草根故事的开端，这次的主角是李洪绸。2008年，这位还在读大二的同学烧光了几部书的版税喂养着自己的短片创作。在当年10月，他自编自导的《大学生同居的事
儿》(以下简称《同居》)登陆网络，才让更多人都把他看成是一个网
络导演。
回头看看，那时候的片相当粗糙。回忆起青涩岁月，李洪绸印象颇深，什么都得省着来，没什么投入。我们租了个房子，大家就过来帮忙拍，除了一套2
万多元的拍摄器材是自己买的，其他都是凑合着，最搞笑是话筒，就是用竹竿儿挑着的。然而，正是这一次的经历让他看到了这个市场的悸动，这在后来证明比什么都重要。我们当时把联系电话放在了片头和片尾部分，算是招商吧，没想
到第二集和第三集的时候就有人来投广告了。作为团队制片的李洪绸也见证了这次初步的商业化之路，然而一大拨淘宝档主的涌来还是令人喜出望外，卖手机的，卖衣服都来投了，手法也很简单粗暴，就是在片头片尾加广告，但就
这样拼出了一集几千
块的广告额。正是这一波零零碎碎的小广
告帮助了整个团队熬
过了最困难的2008年。凭借着单集点击百万，全季总点击过千万的表现，《同居》在2009年赢得了重庆电视台
接近百万的投资，这部片子也蜕变成了一步
长达70集的电视栏目剧。
就在李洪绸迎来转机的2009年，沈玎的梦想也开始起步，南辕映画工作室成立在2009年，大家都想改变中国本土影视以北派文化为主导的现状，南辕即要强调南方的立场，拍摄一系列视
角新锐、直面现实的影视作品。他和三个核心成员就这样背着如此滂沱的梦想拉起了工作室。
后来一个很偶然的机会，朋友介绍了几个做小企业的朋友过来请我们帮忙拍微电影，随后陆陆续续就有新的项目进来。大家一
想，既然这样，就不如做成生意，既能赚钱，也可以更好地补贴我们的电影。而沈玎和记者提到的金主中也出现了不少淘宝店的名字，在网上卖东西的付钱拍片子给网上买东西的人看，这在供职媒体的沈玎看来，毫无疑问就是一个完整的
间充质干细胞在医学中的应用文献综述
间充质干细胞在医学中的应用文献综述 学院：生命科学学院 年级：2011 姓名：张胜男
前言:干细胞是具有增殖分化潜能的一种细胞,人体200多种细胞均起源于一个全能干细 胞---受精卵,出生后的机体生存也依赖于不同组织中的干细胞,进行自我更新和损伤修复.追溯到1895年人类第一次临床应用骨髓移植治疗肿瘤疾病,干细胞在临床上的应用已有100多年的历史,间充质干细胞是干细胞家族的重要成员.随着人类技术的发展,人类具备了从成体组织中提取间充质干细胞的能力,并可以在体外进行大量的细胞扩增培养,但是间充质干细胞临床试验研究所面临的基础理论、实验技术、行业法规，法律伦理等问题，使其在真正走向临床应用的道路还很艰难，这条路上还有多少障碍？还有多远？需要的不仅仅是生命科学领域研究人员的努力，也需要相关管理部门同行！ 正文： 1间充质干细胞 间充质干细胞英文缩写MSC，存在于多种组织中。 1.1间充质干细胞的发现过程 间充质干细胞最早在骨髓中发现，随后还发现存在于人体发生、发育过程的许多种组织中。目前, 我们能够从骨髓、脂肪、滑膜、骨骼、肌肉、肺、肝、胰腺等组织以及羊水、脐带血中分离和制备间充质干细胞，使用得最多的是骨髓来源的间充质干细胞。 2006年，我国在胎盘和脐带组织中分离出间充质干细胞，这种胎盘和脐带来源的间充质干细胞有可能成为骨髓间充质干细胞的理想替代物，并具有更大的应用潜能。 鉴于间充质干细胞具有多向分化潜能、能支持造血和促进造血干细胞植入、调节免疫以及分离培养操作简便等特点，正日益受到人们的关注。随着间充质干细胞及其相关技术的日益成熟，临床研究已经在许多国家开展。作为种子细胞, 临床上主要用于治疗机体无法自然修复的组织细胞和器官损伤的多种难治性疾病；作为免疫调节细胞，治疗免疫排斥和自身免疫性疾病。 最初的临床研究是1995年由Lazarus等人进行的，他们收集缓解期血液肿瘤患者的自体MSC，在体外扩增培养4~7周，然后再静脉注射入患者体内，患者被分为3组，分别给予不同剂量的MSC，注射后没有观察到毒副作用，提示MSC 用于移植治疗安全可靠。随后自体MSC的临床报道逐渐增多，病种涉及放疗及化疗后造血重建、移植物抗宿主病（GVHD）、心脏系统疾病等，在这些报道中均证明临床经静脉输注安全可靠。 然而自体间充质干细胞的应用过程中逐渐暴露了不便之处：例如扩增能力个体差异很大；潜在的肿瘤细胞污染风险；培养需要一定的时间，不能及时适应病情的需要等。这些制约了自体间充质干细胞的使用。间充质干细胞给未来的再生医学带来了新希望, 对间充质干细胞更深入的研究和临床应用必将在不远的将来造福人类。其中，胎盘和脐带来源的间充质干细胞具有分化潜力大、增殖能力强、免疫原性低、取材方便、无道德伦理问题的限制、易于工业化制备等特征，有可能成为最具临床应用前景的多能干细胞。 1.2 间充质干细胞的生物学特性 间充质干细胞具有其独特的生物学特性
间充质干细胞培养方法
间充质干细胞培养方法 1、间充质干细胞MSＣ基本形态 2、干细胞应用与干细胞调控。 3、间充质干细胞MSC生长过程 ４、间充质干细胞MSC培养得合适气体环境 5、细胞培养板得选择 7、如何维持培养液p Ｈ ６、如何选用细胞培养基? 8、血清与干细胞得培养?9、胎牛血清（F B S )就是否需要灭活?1０、细胞得细菌、真菌污染及排除?１1、细胞培养污染得预防 １2、使用胰蛋白酶时加入 E DTA得目得就是什么 13、胶原酶得种类与选型?1４、胶原酶V S胰酶?1５、干细胞得种类与表面标记 １6、间质干细胞培养原理概述? 17、间质干细胞成脂与成骨诱导分化?1８、干细胞老化得表现 20、冷冻保护剂作用与选择? 21、细胞冻存指导 19、细胞传代消化过程指导? 与处理? 22、干细胞冷冻与复苏 23、移植细胞得基因修饰?1。间充质干细胞MSＣ基本形态?体外培养细胞根据它们在培养器皿就是否能贴附于支持物上生长特征，可分为贴附型生长细胞，常表现为成纤维型细胞与上皮细胞。悬浮型细胞在培养中悬浮生长.?间充质干细胞MSC基本形态：形态与成纤维细胞类似,细胞在支持物表面呈梭形或不规则三角形生长,细胞中央有卵圆形核，胞质向外伸出2－3厘米个长短不同得突起。可瞧到细胞成螺旋状生长。 ?2．干细胞应用与干细胞调控 干细胞得调控就是指给出适当得因子条件，对干细胞得增殖与分化进行调控,使之向指定得方向发?２、１内源性调控 展.? 干细胞自身有许多调控因子可对外界信号起反应从而调节其增殖与分化，包括调节细胞不对称分裂得蛋白，控制基因表达得核因子等。另外,干细胞在终末分化之前所进行得分裂次数也受到细胞内调控因子得制约。 （1)胞内蛋白对干细胞分裂得调控?干细胞分裂可能产生新得干细胞或分化得功能细胞。这种分化得不对称就是由于细胞本身成分得不均等分配与周围环境得作用造成得.细胞得结构蛋白，特别就是细胞骨架成分对细胞得发育非常重要。如在果蝇卵巢中,调控干细胞不对称分裂得就是一种称为收缩体得细胞器，包含有许多调节蛋白，如膜收缩蛋白与细胞周期素A。收缩体与纺锤体得结合决定了干细胞分裂得部位，从而把维持干细胞性状所必需得成分保留在子代干细胞中。?（2）转录因子得调控在脊椎动物中，转录因子对干细胞分化得调节非常重要。比如在胚胎干细胞得发生中,转录因子Oct ４就是必需得.Ｏcｔ4 就是一种哺乳动物早期胚胎细胞表达得转录因子,它诱导表达得靶基因产物就是FＧＦ—４等生长因子，能够通过生长因子得旁分泌作用调节干细胞以及周围滋养层得进一步分化。Oct４缺失突变得胚胎只能发育到囊胚期,其内部细胞不能发育成内层细胞团。另外白血病抑制因子（LＩF)对培养得小鼠ES 细胞得自我更新有促进作用,而对人得成体干细胞无作用，说明不同种属间得转录调控就是不完全一致得。又如Tｃf/Lｅｆ转录因子家族对上皮干细胞得分化非常重要.T ｃｆ/Leｆ就是Wnt 信号通路得中间介质，当与β－Catｅnｉn 形成转录复合物后,促使角质细胞转化为多能状态并分化为毛囊.? 2、2外源性调控 除内源性调控外,干细胞得分化还可受到其周围组织及细胞外基质等外源性因素得影响。?(1）分泌因子?间质细胞能够分泌许多因子,维持干细胞得增殖，分化与存活。有两类因子在不同组织甚至不同种属中都发挥重要作用，它们就是TGFβ家族与Wnｔ信号通路.比如TGF 家族中至少有两个成员能够调节神经嵴干细胞得分化。最近研究发现,胶质细胞衍生得神经营养因子（GDNF）不仅能够促进多
骨髓间充质干细胞移植治疗心血管疾病的临床研究新进展
骨髓间充质干细胞移植治疗心血管疾病的临床研究新进展 自2001年骨髓干细胞被首次用于治疗心肌梗死以来，干细胞移植治疗心血管疾病的临床研究已历经了10余年。近年来，BMSC因其可塑性、遗传稳定性和免疫耐受性而成为用于心肌修复较为理想的细胞。本文主要对BMSC移植治疗心血管疾病的临床研究的现状和进展加以综述。 1 BMSC的特点 BMSC位于骨髓的基质，占骨髓有核干细胞的0.001%～0.01%，能够分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞及心肌细胞等。BMSC的标志物主要为CD29和CD44，研究表明，BMSC具有可塑性、遗传稳定性和免疫耐受性，成为心肌修复的理想细胞。 2间充质干细胞的预处理 移植后细胞成活率较低是影响干细胞移植疗效的主要因素。移植后约90%的干细胞发生细胞凋亡。而细胞移植前的预处理可有效保护细胞，提高其抗缺血和缺氧的能力，提高移植后细胞存活率。 预处理主要有以下几种方法。首先，缺血缺氧预处理。此举可激活SDF-1a/CXCR4轴。基质细胞衍生因子-1（SDF-1）不仅是一种重要的趋化因子，而且具有抑制间充质干细胞的凋亡、增加间充质干细胞的存活率及增殖活性等作用。其次，SDF-1预处理。Liu[1]等通过免疫印迹和PCR技术证实，SDF-1预处理激活了Akt和Erk促生存信号通路，且上调了Bcl-2/Bax的比值。 3 BMSC在心血管疾病治疗中的应用 3.1 BMSC移植疗法的适应症目前主要有以下3种适应症，即：急性心肌梗死，慢性缺血性心力衰竭，扩张型心肌病。 3.1.1急性心肌梗死众多实验研究证明，间充质干细胞移植在减少梗死面积、保藏收缩功能以及缓解左心室重构方面均起到有利作用。而生物材料可作为干细胞的支架，也可用作移植干细胞临时的黏附基质。CUI等[2]将自聚肽纳米纤维支架用于承载骨髓源性心肌干细胞移植，结果表明此法有利于移植细胞在受损心肌内的存活和向功能性心肌的分化，并促进心功能恢复，其疗效优于单纯干细胞移植。 3.1.2缺血性心肌病有关研究表明，治疗的最佳时间为心肌梗死发病后1个月。然而，最佳治疗时间的确定仍需进一步的临床证据。 3.1.3扩张型心肌病先前的临床前研究证实，干细胞移植疗法在动物的特发性扩张型心肌病模型中有显著的作用。临床上应用干细胞移植疗法治疗重度扩张
骨髓干细胞治疗心脏病的研究与进展
?３８２?．，ｏｌｌｍｄｚｏｆＣｌｉｎｉｃａｌａｎｄＥｘｐｅｒｉｒｎｅｎｔａｔＭｅｄｉｃｉｎｅＶｄ．９，Ｎｏ．５Ｍａｒ．２０１０骨髓干细胞治疗心脏病的研究与进展 龚怡综述雷长城’审校（南华大学附属第二医院湖南衡阳４２１０００）【关键词】骨髓干细胞心血管疾病移植 各种心脏病发展到晚期大多导致心力衰竭，心力衰竭严重影响着心脏病患者的预后及生活质量。而常规治疗手段效果有限，骨髓干细胞的临床研究越来越多。现就骨髓干细胞的分类、作用机制、途径、存在的问题及前景等作简要介绍。 １研究背景及现状 冠状动脉粥样硬化性心脏病、风湿性心脏病、扩张型心肌病等各种原因所致的心肌损伤发展到晚期大多伴有心腔扩大和舒缩能力下降，虽然成熟的心肌细胞不是终末分化细胞，但由于其增殖、分裂能力有限，新生成的心肌细胞远远无法修复坏死的心肌，具有完整舒缩功能的心肌细胞数量相对或绝对减少，受损心肌细胞由纤维组织瘢痕修复，未受损的心肌细胞代偿肥大，造成心肌功能收缩功能下降，最终导致心力衰竭。目前常规的治疗手段只能缓解心衰症状，不能修复死亡或濒死的心肌。心肌细胞在出生后已失去增殖能力或增殖能力极低，因此增加具有完整舒缩功能的心肌细胞数目，是改善心功能的关键。细胞移植是一个切实可行的增加成体心肌细胞的方法，骨髓干细胞在体外有良好增殖能力，能在心肌内环境下分化为损伤组织所需要的心肌细胞，且无移植后的免疫排斥反应，因此在心肌损伤的治疗中备受关注。Ｓｏｏｎｐａａ等¨１首先尝试了心肌细胞移植，初步证实了心肌细胞移植的可行性。他们将小鼠胚胎心肌细胞移植到正常小鼠心脏中，发现移植的心肌细胞能够存活并与受体心肌细胞产生闰盘连接。随后，各种干细胞用于心脏病治疗。干细胞移植成为心力衰竭治疗的一种新尝试。德国和香港两个研究小组曾利用心肌梗死患者自身骨髓干细胞修复其受损伤的心脏取得成功。另据报道，美国、德国、中国研究人员利用骨髓干细胞、或自体骨髓干细胞治疗心脏病或心肌梗死患者均取得重要进展。与此同时，在巴西有利用心脏病患者自体骨髓十细胞或血液干细胞注射到患者右心室，能促使新心肌和血管的形成，使患者得到治愈。 ２干细胞概况 干细胞（ｂｏｎｅｍＢ＿ｒｒｏｗｓｔｅｍｃｅｌｌ，ＢＭＳＣ）是一类具有多向分化潜能的细胞，主要分为胚胎干细胞（ＥＳＣ）和成体干细胞两大类。干细胞具有以下几点主要的细胞生物学特性：①具有自我更新及自我维持的能力。②具有多项分化的潜能，可以分化成心肌细胞、脂肪细胞和软骨细胞等。③干细胞的分裂能力可维持相当长的时间， ?通讯作者有的可持续终生。④具有生理性的更新能力。⑤干细胞的自我更新和分化需要特定的微环境，这个微环境能够提供一些因子维持干细胞的未分化状态，并能将诱导干细胞分化的因子排斥在外。 ２．１胚胎干细胞胚胎干细胞是～种源于早期胚胎组织（４～５ｄ）并能被诱导生成机体各种类型的细胞，具有自我更新能力的多能干细胞。有研究表明，将胚胎干细胞移植到梗死心肌后，７一１２周可形成稳定的心肌结构，明显改善血液动力学，促使梗死区新生血管生成∞１但胚胎干细胞移植应用于临床还存在很多问题，比如胚胎干细胞免疫原性引起的免疫反应，移植带来的社会、伦理、法律、道德等问题。 ２．２成体干细胞成体干细胞是未分化的细胞出现在已分化的特定组织中，能够自我更新产生由其来源的所有特定组织。目前用于移植的成体干细胞主要是骨髓干细胞（ＢＭＳＣ）。骨髓干细胞包括造血干细胞（ＨＳＣｓ）、间质干细胞（ＭＳＣｓ）和血管内皮祖细胞（ＥＰＣｓ）三大类细胞群。不同于胚胎干细胞，患者可将自身的骨髓干细胞用于移植治疗，从而避免了伦理方面的问题，由于它属于自身组织，也降低了免疫排斥反应的可能性。２．２．１造血干细胞造血干细胞是骨髓中发现最早的干细胞群。早在上个世纪５０年代，临床就用骨髓移植的方法来治疗血液系统疾病。在此后相当长的时间里，人们一直认为造血干细胞只能分化成血细胞，但近几年的研究结果显示并非如此。Ｌａｇａｓｓｅ等Ｈｏ发现纯化后的造血干细胞在体内可分化为肝上皮实质细胞。Ｏｒｌｉｅ等【５１发现包含肝星状细胞（ＨＳＣ）的¨ｎ—ｅ—ｋｉｔ＋细胞群在大鼠体内可以转化成心肌细胞，而不含ＨＳＣ的Ｌｉｎ—ｅ—ｋｉｔ＋细胞群则不能形成新生的心肌组织。这一结果表明骨髓造血干细胞可分化成心肌细胞。 ２．２．２骨髓间充质干细胞１９６８年Ｆｒｉｅｄｅｎｓｔｅｉｎ等在分离大鼠骨髓成骨细胞时，首次从骨髓基质中鉴定出一种非造血系成体多能干细胞，并证实这类细胞在体外能分化成各种间质细胞，如成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌肉细胞等，甚至能横向分化为神经细胞和神经胶质细胞，因此称之为ＭＳＣｓｏＭＳＣｓ是中胚层来源的具有多向分化能力的干细胞，能实现自我更新和诱导分化。体外培养细胞呈贴壁生长特性；典型细胞集落呈放射状排列。免疫学检查ＭＳＣｓ不表达ＣＤ３４、ＣＤ４５、ＣＤｌ４等造血细胞的标记；而表达为ＣＤ２９、ＣＤ７３、ＣＤｇＯ、ＣＤｌ０５、ＣＤｌ６６等。骨髓中ＭＳＣｓ含量很低，一般为０．００ｌ％一 万方数据
间充质干细胞培养方法
间充质干细胞培养方法 1. 间充质干细胞MSC基本形态 2. 干细胞应用与干细胞调控。 3. 间充质干细胞MSC生长过程 4. 间充质干细胞MSC培养的合适气体环境 5. 细胞培养板的选择 6. 如何选用细胞培养基 7. 如何维持培养液p H 8. 血清与干细胞的培养 9. 胎牛血清（F B S ）是否需要灭活 10. 细胞的细菌、真菌污染及排除 11. 细胞培养污染的预防 12. 使用胰蛋白酶时加入E DTA的目的是什么 13. 胶原酶的种类和选型 14. 胶原酶V S胰酶 15. 干细胞的种类和表面标记 16. 间质干细胞培养原理概述 17. 间质干细胞成脂和成骨诱导分化 18. 干细胞老化的表现和处理 19. 细胞传代消化过程指导 20. 冷冻保护剂作用和选择 21. 细胞冻存指导 22. 干细胞冷冻和复 23. 移植细胞的基因修饰 1．间充质干细胞MSC基本形态 体外培养细胞根据它们在培养器皿是否能贴附于支持物上生长特征，可分为贴附型生长细胞，常表现为成纤维型细胞和上皮细胞。悬浮型细胞在培养中悬浮生长。 间充质干细胞MSC基本形态：形态与成纤维细胞类似，细胞在支持物表面呈梭形或不规则三角形生长，细胞中央有卵圆形核，胞质向外伸出2－3 厘米个长短不同的突起。可看到细胞成螺旋状生长。 2．干细胞应用与干细胞调控 干细胞的调控是指给出适当的因子条件，对干细胞的增殖和分化进行调控，使之向指定的方向发展。 2.1源性调控 干细胞自身有许多调控因子可对外界信号起反应从而调节其增殖和分化，包括调节细胞不对称分裂的蛋白，控制基因表达的核因子等。另外，干细胞在终末分化之前所进行的分裂次数也受到细胞调控因子的制约。 （1）胞蛋白对干细胞分裂的调控 干细胞分裂可能产生新的干细胞或分化的功能细胞。这种分化的不对称是由于细胞本身成分的不均等分配和周围环境的作用造成的。细胞的结构蛋白，特别是细胞骨架成分对细胞的发育非常重要。如在果蝇卵巢中，调控干细胞不对称分裂的是一种称为收缩体的细胞器，包含有许多调节蛋白，如膜收缩蛋白和细胞周期素A。收缩体与纺锤体的结合决定了干细胞分裂的部位，从而把维持干细胞性状所必需的成分保留在子代干细胞中。
脐带间充质干细胞培养方法
(一)1.Sections of 8–10 cm of umbilical cords, which are routinely discarded, were internally washed with phosphate-buffered saline (PBS), supplemented with 3% penicillin/streptomycin (Invitrogen-Gibco, Grand Island, NY, https://www.360docs.net/doc/e410093719.html, ) and immediately immers ed in Dulbecco ’s modi fied Eagle ’s medium- low glucose (DMEM-LG; Invitrogen-Gibco) supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS; Invitrogen-Gibco) and 3% penicillin/streptomycin (Invitrogen-Gibco). All samples were processed within 12 –15 h after collection. 2. UCs were fil led with 0.1% collagenase (Sigma-A ldrich, St. L oui s, https://www.360docs.net/doc/e410093719.html,/sigma-aldrich/home.h tml) in PBS and incuba ted at 37°C for 20 min. Each UC was washed wi th proli feration medium, and the detach ed cell s were harvested after gentl e mass age of the UC. Cells were centr ifuged at 300 g for 10 min, resus -pended in prolifera tion medium, and seeded in 25-cm^ 2 flasks at a densi ty of 5 × 10^7 cells per ml.After 24 h of incubation, non-adherent cells were removed, and culture medi um was replace d every 3 days. （二）HuMSCs were prepared as previously described.8 Wharton's jelly was processed within 24 hours of collection and cut into pieces of about 1 mm3 for culture. These pieces were placed in 24-well plates and cultured in DMEM supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS), 5 ng/ml EGF, 5 ng/ml basic fibroblast growth factor, 100 U/ml penicillin and 100 mg/ml streptomycin, and 1 μg/ml amphoterin B. The culture plate was placed in an incubator with saturated humidity at about 37°C containing 5% (v/v) CO2. The medium was changed every three days and the cells were passaged when they reaching 70% confluence. Adherent cells were recovered by treatment with 0.25% trypsin for 3 to 5 minutes then centrifuged. (三) 脐带间充质干细胞的分离：脐带自手术台取下后，浸入含抗生素的生理盐水中，4 ℃保存，在操净台内取出脐带，用D-PBS冲洗净脐动脉和脐静脉内的残余血液，用止血钳和剪刀剔除上述血管，将脐带剪成1 mm^3大小的组织块后放入200 mL 蓝盖试剂瓶，加入质量/ 体积比为0.1%的Ⅱ型胶原酶30 mL，置于恒温振荡仪内持续消化6 h ，100 目筛网过滤收集细胞。加入D-Hank’s液冲洗细胞3 次，用含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12重悬细胞，调整细胞密度为(4.8×10^3~1×10^4)/cm^2，接种于6 孔板内，于37 ℃、体积分数为5%的CO2孵箱内培养，24 h 后换液。 脐带间充质干细胞在不同培养体系中的体外扩增：待原代培养的脐带间充质干细胞贴壁后，在两个6 孔板中进行3 种培养体系的生长对比实验。第1 个6孔板中细胞密度为1×10^7 L^-1，采用连续适应法使细胞由原代培养时使用的DMEM/F12分别逐步过渡到低糖DMEM、MesenPRO RS?Medium 和STEMPRO?MSC SFM 3 种培养体系，即用含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基和相应的3种培养基按体积比1 ∶1 混合培养细胞，通过下列混合培养基的方式，连续几代减少当前培养基的量，即1 ∶2 ，1 ∶4 ，1 ∶16和100% 替代培养基，每次适应改变培养体系时，传代细胞一两次，其中孔 1 为原代培养时的DMEM/F12培养液，孔2为低糖DMEM，孔3 为MesenPRO RS?Medium ，孔4 为STEMPRO? MSC SFM。第2 个6孔板中细胞密度为2×10^7 L^-1，每孔培养液设置同上，目的是避免在不同时间消化传代间充质干细胞时出现实验操作上的误差。 (四)脐带间充质干细胞的体外分离培养 (1)脐带白手术台取下后，浸入含抗生素的0．9％生理盐水中，4"C保存； (2)在超净台内取出脐带，用生理盐水冲洗净脐动脉和脐静脉内的残余血液，用止血 钳和剪刀剔除上述血管，将脐带剪成1mm^3大小的组织块； (3)加入质量／体积比为0．1％的II型胶原酶至完全覆盖组织块，置于培养箱内持续消化
骨髓基质干细胞及其应用的研究进展(一)
骨髓基质干细胞及其应用的研究进展(一) 【摘要】骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSCs)，又称骨髓基质干细胞，是骨髓中非造血实质细胞的干细胞，具有高度的自我复制能力和多向分化潜能，可分化成多种细胞。【关键词】骨髓干细胞 骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSCs)，又称骨髓基质干细胞，是骨髓中非造血实质细胞的干细胞，具有高度的自我复制能力和多向分化潜能，可分化成多种细胞。近来研究表明它可以向三个胚层的多种组织分化，如来源于外胚层的神经元、神经胶质细胞等，MSCs移植为脑缺血患者开辟了一种新的治疗方法。本文对MSCs移植治疗脑缺血的研究综述。 1骨髓基质细胞的生物学特性 1.1目前发现至少存在3种形态的MSCs。Colter等从培养的人骨髓细胞中分离出MSCs后，发现来自单细胞的克隆中除了含有小的梭形和大的扁平MSCs外，还有一种非常小的圆形细胞，这种小圆形细胞有更强的折光性，它们比大的MSCs能更快分裂、增殖，并且有更强的多向分化潜能，当将MSCs放在不同的微环境内时，它们可相应地分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞或成肌细胞等1-3]。MSCs具有多向分化的潜能，MSCs经静脉途径或局部注射移植到不同的组织时，MSCs即可在相应的组织内分化形成该类组织细胞3，4]。 1.2MSCs的易粘附、易贴壁生长，易增殖特性使得它们经过数次换液和传代后得到分离、纯化3]。 2骨髓基质细胞在体外诱导分化为神经元和胶质细胞 最近研究发现，在特定的实验条件下可将人、大鼠及小鼠等的MSCs在体外诱导分化为神经元样和胶质细胞样细胞，SanchozRamos等发现，表皮生长因子(epidermalgrowthfactor，EGF)或脑源性营养因子(brain-derivedneuotroficfactor，BDNF)可诱导人及小鼠的少数MSCs分化为神经元样及胶质细胞样细胞，它们表达神经前体细胞的标志物巢素蛋白(nestin)及其RNA、神经元标记物神经元特异性核蛋白(neuronspecificnuclearprotein，NeuN)、星形胶质细胞标记物胶质原纤维酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein，GFAP)。将人或小鼠的MSCs与胚胎大鼠中脑或纹状体神经元共培养时，部分MSCs分化为NeuN阳性的神经元样细胞及GFAP阳性的星形胶质细胞样细胞，因此，除了可能通过营养因子和细胞因子传递信号外，细胞与细胞的直接接触还可能在MSCs的分化中发挥重要作用5]。 3MSCS移植治疗局灶性脑缺血的可行性及原理 3.1供体与受体 MSCs移植治疗脑缺血多为同种异体移植，如Brazelton等6]采用的供体鼠为成熟转基因大鼠，鼠龄8～10w，受体鼠为致死量放疗后的相同鼠龄的大鼠，移植的为新鲜未经培养的MSCs。有些学者将供体鼠化疗(5-氟尿嘧啶，150mg/kg，腹部注射)2d后取其骨髓进行体外培养3代，移植前72h加BrdU进行标记，受体鼠亦为相同鼠龄相同体重的同种鼠7]。Zhao等8]的研究中，hMSCs来自于10～35岁的健康志愿者，hMSCs转染了增强的绿色荧光蛋白基因，经26代培养后移植入成熟雄鼠体重(230～250g)，结果未出现免疫排斥反应，说明MSCs具有相当大的免疫反应调节能力。上述研究中，或是供体经化疗或是受体经放疗或是MSCs经多次传代培养以降低免疫活性，从而减少移植物抗宿主反应的发生。 3.2MSCs在脑内有迁移能力 Kopen等将小鼠MSCs注入新生小鼠侧脑室后12d，发现MSCs已迁移至前脑、小脑，而且不破坏脑组织结构，其迁移方式与出生后早期的神经发育过程相同，提示MSCs的行为类似神经前体细胞9]。 3.3目前MSCs移植治疗局灶性脑缺血的途径有3种：脑立体定向移植，经颈内动脉注射移植及经静脉注射移植
骨髓间充质干细胞的分离与培养
骨髓间充质干细胞的分离与培养 艾国平,粟永萍,闫国和,冉新泽,刘晓宏,罗成基,程天民(第三军医大学预防医学系防原医学教研室、全军复合伤研究所,重庆400038) 提要:目的摸索体外分离培养骨髓间充质干细胞的最佳条件,并观察其部分生物学活性。方法采用常规的细胞培养传代技术以及光、电镜技术和细胞增殖活性检测法,观察不同贴壁时间、不同浓度血清、不同种植密度对骨髓间充质干细胞生长、增殖、形态的影响,并观察培养细胞的部分生物学特性。结果以选用4～24ｈ贴壁的有核细胞,加入5%～10%胎牛血清、种植密度(4～8)×104个/ｍｌ的培养条件为最适宜细胞生长;在此条件下,培养扩增的细胞仍具有干细胞多向分化性;其形态呈梭状,具有快速增殖的能力;培养细胞在3～4ｄ进入对数生长期,随后进入平台期,分裂相细胞明显减少;光镜下细胞呈梭状或类成纤维状,2～10代的细胞呈均质状;超微结构显示为早期幼稚细胞形态。结论建立了骨髓间充质干细胞体外分离、培养的条件,探讨了骨髓间充质干细胞部分生物学特性,为进一步深入研究骨髓间充质干细胞的诱导分化和应用打下基础。 关键词:骨髓间充质干细胞;组织工程学 干细胞是近年来研究的热点,骨髓中除造血干细胞以外,还含有另一类干细胞—间充质干细胞(Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌ,ＭＳＣ),在不同的诱导条件下,具有向中胚层和神经外胚层组织细胞分化的能力,如向成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞、成纤维细胞、内皮细胞、神经细胞及支持造血的基质细胞等分化的能力[1,2]。随着细胞工程学和组织工程学的发展,利用干细胞的多向分化性,选择合适的生物材料和有靶向性目的基因,已有报道ＭＳＣ在骨、软骨、肌腱和神经胶质修复中的作用[3,4],国内在这方面的工作尚处于起步阶段。本实验旨在摸索体外分离培养骨髓间充质干细胞的最佳条件,为进一步研究骨髓间充质干细胞的诱导分化和应用打下基础。 1材料与方法 1.1骨髓ＭＳＣ的分离从胸骨无菌抽取约1～2ｍｌ的骨髓,肝素化后,加入红细胞裂解液5ｍｌ,混匀,1200ｒ/ｍｉｎ,离心10ｍｉｎ;弃上清,用0.01ｍｏｌ/Ｌ的ＰＢＳ(ｐＨ7.2)洗2～3次,1200ｒ/ｍｉｎ,各离心10ｍｉｎ;计数,以2×109/ｍｌ种入10%ＦＢＳα ＭＥＭ培养基,青霉素100Ｕ/ｍｌ、链霉素100μｇ/ｍｌ,37℃,5%ＣＯ2孵箱中培养;不同时相点弃悬浮细胞,用0.01ｍｏｌ/ＬＰＢＳ(ｐＨ7.2)尽量轻轻洗去未贴壁的细胞,加入含10%ＦＢＳα ＭＥＭ培养基。 1.2不同贴壁时间对ＭＳＣ增殖的影响选用贴壁后1、2、3、4、6、8、12、24、48、72ｈ的细胞进行传代培养,观察不同时间贴壁的细胞传代、增殖能力及形态学的变化。 1.3不同浓度胎牛血清(ＦＢＳ)对ＭＳＣ生长的影响细胞按4×104/ｍｌ种入96孔培养板中,分别加入以下ＦＢＳ浓度的α ＭＥＭ培养基:0%、1%、 2.5%、5%、7.5%、10%、12.5%、15%、17.5%、20%,每个浓度6孔;培养48ｈ后,加入20μｌＭＴＴ(5ｍｇ/ｍｌ二苯基四氮唑溴盐),37℃避光培养4ｈ;尽量吸掉上清液,加入150μｌ二甲基亚砜,室温振荡10ｍｉｎ,ＨＴ7000ｐｌｕｓ多孔读数仪490ｎｍ处读取Ｄ490值,以培养液作空白对照。 1.4比较不同种植密度对ＭＳＣ生长的影响用含10%ＦＢＳ的α ＭＥＭ培养基;细胞按以下密度(×104/ｍｌ):0.3、0.6、1.0、 2.0、 3.0、 4.0、 5.0、 6.0、 7.0、 8.0、 9.0、10.0种入96孔培养板中,每一密度6孔;培养48ｈ后,按上述方法测其Ｄ490值。 1.5培养细胞生长曲线细胞按0.5×104/ｍｌ种入24孔培养板,每孔培养液为1ｍｌ,每天取3孔测其Ｄ490值,连续测8ｄ,绘出培养细胞生长曲线。 1.6培养细胞分裂指数曲线按检测细胞生长曲线的细胞密度接种于放有小盖玻片的24孔培养板中,每24ｈ取出3块小玻片,连续8ｄ;用95%酒精固定,ＨＥ染色、封片。对每一时间组细胞进行计数,算出1000个细胞中分裂相细胞的百分比。 1.7ＭＳＣ的形态学观察在倒置显微镜下,直接观察第2、4、8代ＭＳＣ的活体形态;并分别用光镜及透射电镜观察其形态结构。 1.8统计学分析用哈佛统计软件,进行单因素方差分析及均数间的显著性差异检验,用Ｍｉｃｒｏｓｏ
骨髓干细胞治疗心肌梗死临床应用现状与前景
骨髓干细胞治疗心肌梗死临床应用现状与前景 发表时间：2016-04-05T10:25:12.580Z 来源：《系统医学》2015年第1卷第12期供稿作者：于冬莲[导读] 黑河市第一人民医院据统计，全球每年约有十几百万的人死于心血管疾病，其中有一半以上死于急性心肌梗死。 黑河市第一人民医院黑龙江黑河市 164300 【摘要】近年来骨髓干细胞在心肌梗死的治疗中已有快速发展。国内外的事实证明，骨髓干细胞在目前心梗的治疗中具有突出优势：如广泛的迁移现象、可动员的量大、细胞移植其容易与原固有心肌形成“一体化”等，尤其是自体骨髓干细胞移植治疗心梗简便易行、无免疫排斥反应、成本低，经冠脉注射法更为直接、创伤小，治疗效果甚优。以下通过建立完成的动物模型技术平台，探索各项技术在床应用中的可能性，骨髓干细胞治疗心肌梗死可能成为一个全新的方法。 【关键词】骨髓干细胞；心肌梗死；临床应用 【中图分类号】R331.2+2【文献标识码】A【文章编号】2096-0867（2016）-12-098-01 据统计，全球每年约有十几百万的人死于心血管疾病，其中有一半以上死于急性心肌梗死。尽管目前应用血运重建和药物治疗来阻止心功能的恶化和心律失常的发生，但效果有限，无法使已梗死的心肌细胞再生。如何使坏死心肌或无功能心肌再生，再现其舒缩功能，一直是科学家们亟待解决的难题。干细胞技术的出现与成熟给治疗这类疾病带来了新的曙光，应用干细胞治疗心肌梗死已经成为当前世界心血管病学研究的热点之一。目前用于尝试治疗心肌梗死的干细胞主要为胚胎心肌细胞、胚胎干细胞、骨骼肌干细胞、骨髓干细胞和周围血干细胞等。 1骨髓干细胞的定义及其研究背景 骨髓干细胞为多潜能细胞，具有分化成为心肌细胞、血管内皮、细胞和平滑肌细胞的潜能。骨髓干细胞的组成复杂，从免疫组织化学染色可大致分为CD34+和CD34-两类细胞，形成心肌组织及血管的能力各不相同，以CD34-干细胞作用较强。从干细胞分化方向和功能上又可分为造血干细胞、成骨干细胞、成肌干细胞、成血管祖细胞等多种细胞系组成的定向干细胞和间充质干细胞，以及其他功能不明的干细胞。就目前来看骨髓干细胞被认为是最具应用前景的一种。原因是最先发现的是骨髓中的造血干细胞，其特点是数量相对稳定，且在生命过程中长期存在，为临床备用提供了可靠的研究条件。骨髓干细胞几乎没有细胞外基质，采用温和的机械分离方法即可很容易地制备单细胞悬液。加之，限于人类伦理道德与法律的规范要求，人体胚胎干细胞尽管具有许多其他干细胞所不可比拟的优越之处，却仍然难以发展到应用的阶段，这是自然的事。故此，成体干细胞成为受世人瞩目的研究对象。所以到目前为止，骨髓干细胞研究的最深入而且应用为广泛。 2骨髓干细胞治疗心肌梗死的临床应用现状 对于心肌梗死的治疗，既往追求的目标是千方百计地对缺血心肌恢复血供。目前，干细胞已被作为有希望的治疗措施。无疑若能够将可以变成心肌细胞的干细胞种植于缺血区域，从而恢复对该区域的供血，肯定是保证治疗成功而被期望的前景。修复缺血心肌的最有效途径当然是使具有正常生理功能的心肌细胞达到足够数量。其途径可以是增加自身心肌细胞的分裂，或是干细胞移植以直接或间接增加成体心肌细胞数量。当前出现的骨髓干细胞移植治疗心肌梗死的研究已经显示出这种措施的乐观苗头。已经试用于治疗心肌梗死的干细胞包括骨髓干细胞、骨骼肌干细胞和胚胎干细胞，其中以骨髓干细胞具有的优势最为突出。目前，围绕着骨髓干细胞移植治疗心肌梗死的研究焦点主要包括几个方面：第一点，细胞移植途径，目前用于移植的骨髓干细胞主要包括骨髓单核细胞、造血干细胞和边缘细胞群等。骨髓单核细胞不需要体外扩增和诱导分化，但由于混有大量的白细胞，可能会加重坏死心肌的炎症反应。骨髓造血干细胞数量较少，而且分离成本高。骨髓干细胞需要经过体外扩增、诱导及分化，成本低，且可获得大量细胞。SP细胞是纯度高、组成均一的骨髓干细胞。可能成为应用于移植的主要干细胞是选择单核细胞、骨髓干细胞、造血干细胞和SP细胞还是定向诱导后的成熟细胞，或是处于这细胞之间的祖细胞来进行移植，这需要进行系统的比较研究；第二点，关于横向分化的调控机制目前还不清楚，大多数观点认为干细胞的分化与微环境密切相关。骨髓干细胞能否分化成心肌细胞这一问题还有待研究；第三点，移植的安全性，骨骼肌干细胞移植和造血干细胞移植会引起心律失常、肿瘤等，最新研究发现除粒细胞集落刺激因子动员有加重支架内再狭窄风险外，骨髓间充质干细胞、骨髓干细胞移植也存在潜在风险，冠状动脉内移植骨髓干细胞会引起冠状动脉微梗死，还有注射未分选的骨髓细胞到急性梗死心肌会诱导心肌严重钙化等一系列问题。3骨髓干细胞治疗心梗的前景 当前关于骨髓干细胞治疗心肌梗死的实验研究是与临床应用同时发展的。细胞生物学的研究已经涉及医学的许多领域，归纳之却是集中在成体干细胞的增殖、诱导分化等几个领域，一些相关技术环节尚在研究与积累经验的过程中，目标是获得大量多能或组织干细胞，以用在相关患者的移植治疗上。在临床应用于治疗心肌梗死方面，对于单一冠脉主干闭塞的病例，已有多种有效方法进行治疗。可能当前研究的重点首先在于冠状动脉多支且有广泛粥样硬化病变的患者，或者虽然患者是单支冠脉的阻塞，但其病变弥漫进展并且很可能伴有心功能不良者，这几种应是移植干细胞的合适对象，并伴随配套的、必要的其他临床治疗措施和药物，治疗效果仍是可观的。虽然目前骨髓干细胞移植治疗心肌梗死的研究尚处在初期阶段，但是通过建立完整的动物模型技术平台，探索各项技术在临床应用的可能性，使骨髓干细胞移植治疗心肌梗死的手段有可能成为不同于内科传统的药物治疗、心血管介入治疗和外科手术治疗的又一个全新的治疗方法。这将为心血管科学带来更光辉的前景，为心肌梗死患者带来更大的福音。 尽管面临着诸多问题，干细胞移植仍然具有光明的前景。基因技术的发展，可能给上述问题的解决带来曙光，一些基因的引入可有效改善干细胞在梗死心肌内的生存能力，还有干细胞“归巢”机制的深入研究，则也会给梗死心肌的自我修复带来希望。相信随着对医学、干细胞分子生物学等领域研究的进一步深入，干细胞广泛用于临床治疗心肌梗死指日可待。 参考文献： [1]刘宏伟，盖鲁粤，张端珍，等.骨髓干细胞动员与移植治疗心急梗死的比较[J].中国现代医学杂志，2015（15）：2731-2745. [2]张少衡，郭静萱，周喜燕等.骨髓干细胞移植治疗心肌梗死的研究进展[J].中华心血管病杂志，2013，31（3）：231-232 [3]王晓明，臧益民，高峰.心肌细胞再生与心脏修复[J] .中华心血管病杂志，2013，31（9）：711- 714
骨髓干细胞移植治疗股骨头坏死疗效分析
骨髓干细胞移植治疗股骨头坏死疗效分析 摘要目的研究对股骨头坏死采用骨髓干细胞移植方法治疗的效果。方法20例股骨头坏死患者，在接受治疗过程中，干细胞动员之后，骨科与血液内科合作对患者进行刮除死骨、植骨和骨髓干细胞移植。所有的股骨头坏死患者经过手术治疗后，均对病理诊断给予证实。结果20例患者经过手术治疗后出院，6个月后，对于股骨头坏死部位进行数字化减影血管造影术复查，发现在股骨头坏死区域的血管有所延伸，股骨头侧支的吻合度提升。所有患者治疗优良率为70.00%。结论对股骨头坏死采用骨髓干细胞移植方法治疗，不仅能够使关节功能在一定程度上得以恢复，而且对股骨头坏死区域的血液供应情况有所改善，是安全、有效的治疗方法。 关键词股骨头坏死；骨髓干细胞移植；创伤性 1 资料与方法 1. 1 一般资料对本院2013年12月～2014年12月20例股骨头坏死患者的临床资料进行回顾性分析。20例患者中，男14例，女6例，年龄22～43岁，平均年龄（31.0±3.2）岁。按照股骨头坏死的Ficat分期[1]，其中双侧股骨头坏死7例，单侧股骨头坏死13例，由于酒精中毒而导致的股骨头坏死8例，由于激素类药物所导致的股骨头坏死12例。股骨头坏死患者临床表现为单侧髋关节疼痛，特别是股骨头关节活动的时候，由于疼痛严重而使得活动受到限制。所有接受研究的股骨头坏死患者都接受过物理疗法、中医治疗和各种药物治疗，均没有获得良好的治疗效果，没有使髋关节的疼痛缓解。 1. 2 方法患者在接受手术的前1 d晚皮下注射300 μg的吉粒芬，进行骨髓干细胞总动员。对骨髓干细胞的采集，在手术前2 h，要对干细胞进行采集、分离和鉴定，采用含有2 ml的肝素钠注射器在髋骨的上棘处抽取20 ml的骨髓。在无菌操作下采集骨髓干细胞，并实施分离术，从髂后上嵴处抽取250～350 ml 的骨髓血，经过对骨髓血的沉淀和离心处理，之后制备成为干细胞悬浊液25 ml。关于干细胞的鉴定，将采集到的骨髓干细胞稀释之后，经过分离，采用流式细胞法进行鉴定，以将CD33、CD34、CD90和CD34检测出来。 股骨头坏死患者的治疗，当股骨头患处的病变被确认后，进行药物灌注。所使用的药物为50 ml干细胞混悬液，35～40 ml的灯盏细辛，25 ml银杏叶注射液，30 min注射完毕。药物注射的过程中还要注意观察患者的反应，如果患者患处有烧灼的感觉，将药物灌注的速度放缓。手术结束后，静脉滴注抗生素，口服复方丹参片3 d。如果患者治疗效果不良而需要重复治疗，要间隔1个月后进行治疗。 术后护理，手术结束后，患者平卧6 h，对患者体温、脉搏、呼吸以及血压等变化情况进行分析。常规采用抗生素以预防感染。手术3 d后，使用运动仪进行被动功能锻炼，3周后患者可拄拐下床活动。在出院3、6、12个月时接
造血干细胞移植技术临床应用质量控制指标2017版
附件2 造血干细胞移植技术临床应用 质量控制指标 （2017年版） 一、造血干细胞移植适应证符合率 定义：造血干细胞移植术适应证选择正确的例数占同期造血干细胞移植术总例数的比例。 计算公式： 造血干细胞移植适应证符合率 =造血干细胞移植术适应证选择正确的例数同期造血干细胞移植术总例数×100% 意义：体现医疗机构开展造血干细胞移植技术时，严格掌握适应证的程度，是反映医疗机构造血干细胞移植技术医疗质量的重要过程性指标之一。 二、异基因造血干细胞移植植入率 定义：异基因造血干细胞移植术后100天内，实现造血重建（患者外周血中性粒细胞＞0.5×109/L 与血小板＞20×109/L ）的患者例次数占同期异基因造血干细胞移植患者总例次数的比例。 计算公式： 异基因造血干细胞移植植入率 =异基因造血干细胞移植术后100天内实现造血重建的患者例次数同期异基因造血干细胞移植患者总例次数×100% 意义：反映医疗机构造血干细胞移植技术水平的重要指标之一。 三、重度（Ⅲ-Ⅳ度）急性移植物抗宿主病发生率 定义：急性移植物抗宿主病（aGVHD ），是指造血干细胞移植术后100天内，由于移植物抗宿主反应而引起的免疫性疾病，主要表现为皮疹、腹泻和黄疸，是异基因造血干细胞移植的主要并发症和主要死亡原因。重度（Ⅲ-Ⅳ度）急性移植物抗宿主病发生率，是指异基因造血干细胞移植术后发生重度（Ⅲ-Ⅳ度）急性移植物抗宿主病患者例次数占同期异基因造血干细胞移植患者总例次数的比例。
计算公式： 重度（Ⅲ?Ⅳ度）急性移植物 抗宿主病发生率=重度 Ⅲ?Ⅳ度 异基因造血干细胞移植术后 发生急性移植物抗宿主病患者例次数同期异基因造血干细胞移植患者总例次数×100% 意义：体现医疗机构对不同移植方式造血干细胞移植术后aGVHD 预防水平，是反映医疗机构造血干细胞移植技术医疗质量的重要过程性指标之一。 四、慢性移植物抗宿主病发生率 定义：慢性移植物抗宿主病（cGVHD ），是指造血干细胞移植术100天后，由于移植物抗宿主反应而引起的慢性免疫性疾病。慢性移植物抗宿主病发生率，是指异基因造血干细胞移植术后发生慢性移植物抗宿主病患者例次数占同期异基因造血干细胞移植患者总例次数的比例。 计算公式： 慢性移植物 抗宿主病发生率=异基因造血干细胞移植术后发生慢性移植物抗宿主病患者例次数同期异基因造血干细胞移植患者总例次数×100% 意义：体现医疗机构对造血干细胞移植术后cGVHD 预防水平，是反映医疗机构造血干细胞移植技术医疗质量的重要过程性指标之一。 五、异基因造血干细胞移植相关死亡率 定义：异基因造血干细胞移植术后100天内非复发死亡患者数占同期异基因造血干细胞移植患者总数的比例。 计算公式： 异基因造血干细胞移植相关死亡率 =异基因造血干细胞移植术后100天内非复发死亡患者数同期异基因造血干细胞移植患者总数×100% 意义：体现医疗机构对造血干细胞移植术后患者的综合管理水平，是反映医疗机构造血干细胞移植技术医疗质量的重要结果指标之一。 六、异基因造血干细胞移植总体生存率 定义：异基因造血干细胞移植后1年和3年随访（失访者按未存活患者统计）尚存活的患者数占同期异基因造血干细胞移植患者总数的比例。 计算公式：