贝克曼流式细胞仪FC500常规清洗
FC500关机程
常规清洗程序→按→按真空管路清洗→按初始化仪器→点击排气泡按钮使鞘液充满真空管路→按关机→75%酒精清擦拭样本台和样本针探头
1. 常规清洗程序
1)准备1管有效氯浓度为1%的次氯酸2ml, 或Cleanz e清洗液，放在上样
盘的1号位置；
2)准备3管各2ml双蒸水，放在上样盘的2-4号位置；
3) 在Resource Explorer 状态栏中点击PANEL图标选择
→Cleanse.PNL拖到Acquisition Manager栏中；
→回车键
4)输入Carousel No（盘号:1）
5)点击工具栏的运行键，运行清洗程序。
2．真空管路清洗
1)按Cytometer 主界面上的键，使其处于idle状态；
2)将两个真空管洗器内加满双蒸水，放在进样盘的1,2号位置上
3)按下Cytometer主界面上的键，进行真空管路清洗循环；
4)按键，使其仪器恢复初始状态。
5﹚点击排气泡按钮使鞘液充满真空管路
3.退出CXP 软件，点击桌面上的关闭流式主机；依次关闭计算机主机，
打印机，电源箱开关。
（注意：真空管路清洗结束后按键，使其仪器恢复初始状态再关机,否则管路中Cleanz液浸泡管路超过24小时，会造成管路受损）
流式细胞术在药学中的应用
流式细胞术在药学中的应用 流式细胞技术（flow cytometry，FCM）是20 世纪70 年代初发展起来的一项高新技术，利用流式细胞仪进行的一种单细胞定量分析和分选技术。流式细胞术是单克隆抗体及免疫细胞化学技术、激光和电子计算机科学等高度发展及综合利用的高技术产物。它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，具有速度快、精度高、准确性好的优点，是当代最先进的细胞定量分析技术之一。 流式细胞仪根据基本功能不同可以分为流式分析仪和流式分选仪[1] 。流式分析仪可以对细胞或微粒上标记的荧光物质进行分析，从而判定相应蛋白或核酸等物质的水平；而流式分选仪则可以在流式分析的基础上，将所需的细胞或微粒进行进一步分选，用于下游实验。流式细胞仪主要由三部分组成：液流系统、光学系统、和电子系统；流式分选仪还增加了分选系统。流式细胞仪的基本工作原理是：荧光物质标记的单细胞悬液样品在一定压力下进入流动室，经鞘液包裹以单细胞液流的方式经过检测区；细胞或微粒上所承载的荧光物质被激光束照射，发射出散射光以及特定波长的荧光，并通过不同滤光片；光信号在电子系统被转化为电信号，再转换为数字信号，经计算机分析处理，直观地统计出染上各种荧光染料的细胞各自的百分率。散射光信号包括前向角散射光（forward scatter，FSC）和侧向角散射光（side scatter，SSC），FSC主要反映细胞大小，SSC主要反映细胞内颗粒的复杂程度等[2, 3] 。荧光信号的强弱则反映了相应检测物质（细胞内或细胞外）的表达水平高低。
生产流式细胞仪的主要厂家是美国的BD公司和贝克曼库尔特(Beckman Coulter)两家公司, 它们生产出一系列科研型和临床型的流式细胞仪, 并研制生产了FCM所用的各种单克隆抗体和荧光试剂[4] 。事实上，在实验之初，详细分析待测标记物在细胞中的水平，综合考虑标记物抗体、荧光强度、多色荧光补偿等各方面，合理选择荧光抗体并设计实验，这对于流式检测十分重要[3] 。应用流式细胞术的常用实验包括细胞表面标志检测、细胞内蛋白包括细胞因子检测、细胞分选、细胞凋亡与周期检测、染色体倍体分析、荧光报告基因表达和转染效率判定等基础和临床科学研究。 我们课题组主要研究的是2型糖尿病与肠道菌群的关系，查文献发现，Ｔ淋巴细胞是人体重要的免疫细胞群，外周血成熟Ｔ细胞主要有CD4+和CD8+ 2个亚群，它们在体内进行免疫应答时互相协同，又相互拮抗，以维持免疫应答的相对平衡，平衡失调会导致免疫功能紊乱，产生一系列的免疫病理变化，也影响机体的免疫保护机制[5-7] 。CD4+Ｔ细胞通过自身或调节其他免疫细胞分泌细胞因子而发挥作用，各种细胞因子可直接导致胰岛β细胞损伤并参与胰岛素抵抗。其中分泌的各种相关因子可通过各种途径造成组织损伤和肾脏纤维化，导致糖尿病肾病的发生。CD8+ T细胞具有抑制免疫细胞毒性效应的一种Ｔ细胞，其降低使对CD4+ T细胞功能的抑制作用减低，从而促进CD4+ T细胞对胰岛β细胞的损伤，加速糖尿病的发生发展[8, 9] 。 在一篇用流式细胞术检测T细胞在2型糖尿病中发病机制研究文献中发现[10] ，此项研究结果中，CD4+ T细胞亚群较对照组升高，而
流式细胞仪使用方法
流式细胞仪的使用方法及相关资料 仪器名称：流式细胞仪 生产厂家：美国贝克曼库尔特有限公司 使用方法： 一．开机程序 1．检查稳压器电源，打开电源，稳定5分钟。 2．打开储液箱，倒掉废液, 并在废液桶中加入400ml漂白水原液。打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至4/5满（一般可用三蒸水，做分选必须用PBS或FACSFlow），合上压力阀。确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。 3．将FACSCalibur开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY，预热5－10分钟。排出过滤器内的气泡。 4．如果需要打印，打开打印机电源。 5．打开电脑,等待屏幕显示出标准的苹果标志。 6．执行仪器PRIME功能一次，以排除Flow cell中的气泡。 7．分析样品时，先用FACAFlow 或PBS进行HIGH RUN约2分钟。 做过分选后，每次开机后需冲洗管道：向分选装置上装上两个50ml离心管，不接通浓缩系统，摁下右下角白色按钮开始冲洗。待自动停止后接通浓缩装置，同上法冲洗一次。 二．预设获取模式文件(Acquisition Template Files) 1．从苹果标志中选择CELLQuest见一个新视窗，可利用此视窗编辑一个获取模式文件。 2．选取屏幕左列绘图工具中的Dot plot，绘出一个或多个Dot Plots（点图）。从Dot Plot对话框中选取Acquisition作为图形资料来源，并确定适当的x轴和y轴参数。 3．选取屏幕左列绘图工具中的Histogram，同上法可绘出Histogram（直方图）。4．将此视窗命名后储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest Folder \EXP文件夹中，下次进行相同实验时可直接调用。 本计算机中已设定两个模式文件：ACQ和EXP，储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest \EXP文件夹中，ACQ用于细胞DNA检测，EXP用于细胞表面标志分析。 三．用CELLQuest进行仪器的设定和调整 1．从苹果画面中选取CELLQuest，进入CELLQuest后在File指令栏中打开合适的获取模式文件。 2．从屏幕上方Acquire指令栏中，选取Connect to Cytometer（快捷键：＋B）进行电脑和仪器的连机。将出现的Acquisiton Control对话框移至合适位置。3．从Cytometer指令栏中，开启Detectors/Amps、Threshold、Compensation、Status 等四个对话框，并将它们移至屏幕右方，以便获取数据时随时调整获取条件。也可以用+1，2，3，4获得此四个对话框。 4．在Detectors/Amps对话框中，先为每个参数选择适当的倍增模式(amplifier mode)：线性模式Lin或对数模式Log。一般进行细胞表面抗原分析如分析外周
美国贝克曼库尔特流式细胞分析仪
美国贝克曼库尔特流式细胞分析仪（Beckman coulter cell） 产品型号：Cell Lab Quanta SC 当前价格：0.00元 产品数量：0 新旧程度：全新 有效期至：0000-00-00 所在地： 产品简介：仪器简介：T细胞亚群检测的CD45/CD4/CD8/CD3、CD45/CD56/CD19/CD3；阵发性血红蛋白尿（PNH）检测的CD55、CD59；血小板无力症（GT）检测的CD41、CD61等等 详细信息 仪器简介： T细胞亚群检测的CD45/CD4/CD8/CD3、CD45/CD56/CD19/CD3；阵发性血红蛋白尿（PNH）检测的CD55、CD59；血小板无力症（GT）检测的CD41、CD61等等。但对于白血病/淋巴瘤免疫分型，国际上迄今为止也没有统一的抗体组合。在2000年国际细胞分析学会（ISAC）大会上，临床血细胞计数协会组织了一次国际专家会议，以期对检测血液淋巴系统肿瘤所需最少、最有效的单抗数达成共识。75%与会者一致认为，对于慢性淋巴系统增殖性疾病（CLD）有9种单抗：CD5,CD19, κ,λ,CD3,CD20,CD23,CD10,CD45对初诊来说是最基本的。淋巴瘤和CLD相似，需要至少12-16种单抗。对于急性白血病（AL），75%的与会者认为大约13-15种单抗是最基本的：CD10,CD19,CD79a,CD13,CD33,CD34,CD45,CD2,MPO，CD7,CD14,CD3,HLA-DR等，对初步鉴别白血病系列是必需的。其他一些（CD16,CD56,CDw65,TdT,cyCD3）可能对某些病例有用。几乎所有的投票者都认为，要对急性白血病完善分类所需单抗的恰当数量平均为20-24种。但这些抗体之间组合也是一大难题，目前也无统一规定（如表二）。大会多数发言者(11/13)指出，对已确诊病人的监护和分期来说，仅需较少单抗。 抗体的质量控制是实验的关键环节。抗体的质量包括其特异性、灵敏度、精密度。对这一些，一些商业化的公司对常用单抗的检验均推出了一系列质控物。如BECKMAN COULTER公司的Cyto-Trol、Immuno-Trol等（见表一）。 （三）染色方法 细胞表面染色：大多数免疫表型分析均采用此方法。但由于许多抗原也同时存在细胞内，所以在细胞表面抗原检测时应特别注意保持细胞膜的完整以保证检测的特异性。表面标记又分溶血前标记和溶血后标记。若红细胞对标记有影响或血浆成分对标记有影响的，适合溶血后标记，但要注意溶血剂膜抗原的影响，所以，溶血剂一般不含固定剂。如免疫球蛋白轻链检测和阵发性血红蛋白尿的检测等。 细胞内染色：有些胞内抗原的检测对白血病的免疫分型尤为重要，如TdT, MPO, cCD3, cCD79a 。胞内染色的关键是使细胞膜通透，把抗体或核酸染料导入胞内而不影响细胞骨架的完整性。还要保证固定和透膜的步骤不影响有关抗原与相应抗体的结合力和核酸与染料的结合。某些适用于胞内染色的试剂可能不适于表面标记分析。通常胞内染色不能与细胞活性的检测同时进行，除非用EMA的方法。对于胞内染色，所用的荧光素应足够小到能穿透到胞膜内。对于某些核酸染料（如DAPI、TO、AO等）为活细胞染料，无需固定或透膜。 胞膜和胞内染色：通常，先胞膜染色，固定，膜通透和胞内染色，最后是DNA染色。 三、数据的获取和分析 流式细胞仪数据的获取必须是在仪器性能的校准均合格的基础上进行。由于流式细胞仪是基于对散射光信号和荧光信号进行分析的仪器，因此，仪器散射光和荧光信号的光电倍增管电压、增益、颜色补偿等参数的设定直接影响结果。同型对照的设定尤为重要。同型对照是指与单抗种宿来源相同、亚型相同、标记荧光素相同的未免疫动物的免疫球蛋白。同时考虑浓度、F/P值尽量相同，这样阳性阈值的界定才比较准确，特别是对于弱表达抗原阳性率的测定。而DNA倍体分析中参照物的设定非常重要，一般鸡红细胞作为内参照物。为了结果的可靠性，对获取的细胞量至少应在10000-20000个。但不同的实验目的对于获取的细胞量要求一般是不一样的，如DNA倍体分析，至少应获取10000个细胞；微小残留病灶（MRD）的检测，要求达到10-4数量级水平，则应至少分析100000个细胞；干细胞移植中CD34的检测，应至少获取100个CD34阳性细胞或75000个有核细胞。 对于获取的数据，应保存在listmode文件中，便于分析。设门（gating）对于流式数据分析至关重要。设门实际就是确定分析区域。在DNA倍体分析中，设门实际就是圈定
流式细胞术临床检测项目操作流程
临床检测项目操作流程 1：淋巴细胞亚群测定 2：HLA-B27测定 3：CD55／CD59测定 4：血小板抗体测定 5：红细胞抗体测定 6：粒细胞抗体测定 7：白血病免疫分型测定 8：淋巴细胞T细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL-4测定 9：XL操作步骤 淋巴细胞亚群测定 (CD系列) 方法 流式细胞仪(BD) 原理： 双/三色直接免疫荧光法。荧光素标记的各种单克隆抗体加入到全血中，与白细胞膜上相应的抗原结合，经过溶血、洗涤（和固定）等步骤后，在流式细胞仪上进行分析，从而得到淋巴细胞亚群的百分数。淋巴细胞表面抗原分布如下：T淋巴细胞：CD3+；B淋巴细胞：CD5+，CDl9+；辅助性T淋巴细胞：CD3+CD4+；抑制性T淋巴细胞：CD3+CD8+；NK细胞：CD3-CDl6+56+等。根据淋巴细胞膜上CD分子表达的不同，流式细胞仪可以分辨出淋巴细胞及其各种不同的亚群，利用计算机软件计算出淋巴细胞亚群的百分数。 标本采集与处理 受检者的准备：检查对象生活饮食处于日常状态，空腹静脉采血。 抗凝剂：EDTA或肝素抗凝血 要求： 1．样本量至少1ml。 2．样本应在采集后6小时内处理，冷冻的标本不能用。 3．样本白细胞计数应在4.0-10.0×109/L之间。若>10.0×109/L，样本需要稀释，用PBS
稀释；若<4.0×109/L，应分离单个核细胞。 4．溶血样本不能用。 试剂 品牌规格贮存 贝克曼库尔特 成分 1：单克隆抗体 1ML 2—8℃ 2：全血溶血试剂 A：甲酸70ML 室温 B：碳酸钠等32ML 室温 C：多聚甲醛14ML 室温 3：鞘液 20L 室温 4：清洗液 5L 室温 5：荧光微球 10ML 2-8℃ 质控品BD产品，未开瓶的试剂于2-8℃保存，可在有效期内保持稳定，稀释的试剂于2-8℃可稳定2周；每天校准一次：遇特殊情况随时进行校准。 样本制备： 1) 按照要求，分别向已编好号的试管中加入20 ul单克隆抗体和同型对照 2) 分别向试管中加入混匀的100u1抗凝血。 3) 混匀，避光，室温孵育20-30分钟。 4) 溶血：FACS LYSING SOLUTION (按说明书步骤溶血)。 5) 上机测样（可根据样本情况选择洗或不洗上样。 操作性能 精密度批内五次重复CV<2％ 灵敏度 500—1000个荧光素分子 参考值(百分数（绝对值）) CD3+ 60.8-75.4%(1141-1880) CD4+29.4-45.8%(478-1072) CD8+ 18.2-32.8%(393-742) NK 9.5-23.5% (175-567)
新技术对细胞形态学的帮助(贝克曼库尔特)
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Innovations Leading the Way to Our Future
科技创新引导未来之路
贝克曼库尔特公司市场部 梁彬 Apr，2009
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures
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内容
? 血细胞分析的发展历程 ? VCS白细胞分类新参数及应用 ? 血细胞分析自动化
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内容
? 血细胞分析的发展历程 ? VCS白细胞分类新参数及应用 ? 血细胞分析自动化
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血细胞分析发展历程
? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 17世纪 –列文虎克显微镜 1851 – 血细胞计数 1877 - 白细胞苯胺染色进行分类 20th 世纪初 – 计数池计数和血玻片染色 1950’s – Coulter血细胞计数仪 1960’s – 自动化血细胞计数仪 1970’s – 自动化血细胞分析仪 1980’s – 细胞计数和分类结合的血细胞分析仪 1990’s – 血细胞分析自动化 2000’s – 分析仪技术的扩展应用
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures
流式细胞术详解
流式细胞术详解 一. 流式细胞术概述 流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)是七十年代发展起来的高科学技术,?它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体, 同时具有分析和分选细胞功能。它不仅可测量细胞大小、内部颗粒的性状,还可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内DNA、RNA含量等,可对群体细胞在单细胞水平上进行分析, 在短时间内检测分析大量细胞,并收集、储存和处理数据,进行多参数定量分析; 能够分类收集(分选) 某一亚群细胞,分选纯度＞95%。在血液学、免疫学、肿瘤学、药物学、分子生物学等学科广泛应用。 国内使用的流式细胞仪主要由美国的两个厂家生产:BECKMAN- COULTER公司和Becton-Dickinson公司(简称B-D公司)。流式细胞仪主要有两型:临床型（又称小型机、台式机）和综合型（又称大型机、分析型）。BECKMAN-COULTER公司最新产品为EPICS ALTRA和EPICS XL/XL-MCL, B-D?公司最新产品为FACS Vantage和FACS Calibur。EPICS XL/XL-MCL和FACS Calibur是临床型;EPICS ALTRA 和 FACS Vantage是综合型，除具备检测分析功能外,还具有细胞分选功能,?多用于科学研究。 二.流式细胞仪主要技术指标 1．流式细胞仪的分析速度： 一般流式细胞仪每秒检测1000～ 5000个细胞,大型机可达每秒上万个细胞。 2．流式细胞仪的荧光检测灵敏度：一般能测出单个细胞上<600个荧光分子,两个细胞间的荧光差＞5%即可区分。 3．前向角散射（FSC）光检测灵敏度：前向角散射（FSC）反映被测细胞的大小,一般流式细胞仪能够测量到0.2μm～０.5μm。 4．流式细胞仪的分辨率：通常用变异系数CV值来表示，,一般流式细胞仪能够达到<2.0%,这也是测量标本前用荧光微球调整仪器时要求必须达到的。 5．流式细胞仪的分选速度：一般流式细胞仪分选速度＞1000个/秒，分选细胞纯度可达99%以上。 三.流式细胞仪主要构造和工作原理流动室及液流驱动系统
流式细胞术的样品制备
第二节流式细胞术的样品制备 节概述 待测标本的制备是流式细胞术分析的关键，本节分别直接免疫荧光标记、间接免疫荧光标记、微量全血法免疫荧光标记、双标记、培养细胞DNA荧光标记以及细胞凋亡检测样品的制备。 知识点导航 1.直接免疫荧光标记的样品制备 用标有荧光素的特异抗体对细胞进行直接染色，然后用流式细胞仪检测，阳性者即表示有相应抗原存在。实验步骤如下： (1)每份取100 μl单细胞悬液(细胞密度约1×106个细胞)。 (2)一份加入相应量的异硫氰酸荧光素或藻红蛋白标记的特异性荧光直标单抗，另一份加入荧光标记的无关单抗，作为阴性对照样品。 (3)室温下避光反应一定时间(时间长短根据试剂说明书要求进行)，一般在室温下反应15～30min 即可。 (4)加入500 μl磷酸缓冲液重悬成单细胞悬液即可上机检测。 2.间接免疫荧光标记的样品制备 (1)取1×106个细胞/100μl，先加入一抗混匀，置室温下避光反应30 min。 (2)用PBS洗涤细胞2次，离心沉淀弃掉上清液(离心转数一般为800～1000 r/min，5 min)。 (3)用100 μl PBS重悬细胞，再加入FITC或PE标记荧光二抗(用量均按说明书要求加入)混匀，室温下反应30 min。 (4)用PBS再洗涤细胞2次，加入500 μl PBS重悬成单细胞悬液，上机检测。 注意：以上两种染色方法的抗体加入量和反应时间，没有非常具体的规定，一般应根据试剂使用说明书的要求进行。若说明书上未说明，应先进行预实验，掌握好剂量与最佳反应时间后，再进行流式样品的制备。制备好的样品，若不能及时上机检测，用1％～4％的多聚甲醛固定，4℃下可保存5d。
流式细胞仪的发展历史及其原理与应用进展
流式细胞仪的核心部件及其原理与应用进展 姓名：俞辉学号：2010212534 专业：临床检验诊断学 摘要流式细胞术(FCM)，是用流式细胞仪测量液相中的悬浮细胞或微粒的一种现代分析技术。它的发明是流体力学、激光技术、生物学、分子生物学、计算机科学等学科知识凝集的结晶，为人类疾病的检测提供了快速有效的诊断。本文就流式细胞术的发展史、核心部件及其工作原理以及临床应用作如下综述。 关键词流式细胞术(FCM) 原理核心部件应用 引言流式细胞术(flow cytometry FCM)是用流式细胞仪测量液相中悬浮细胞或微粒的一种现代分析技术。FCM可在细胞保持完整的情况下，精确、快速的对鞘流中的单个细胞进行分子水平的多参数的定性且定量分析。它的发明是流体力学、激光技术、生物学、分子生物学、计算机科学等学科知识凝集的结晶，为人类疾病的检测提供了快速有效的诊断。现代流式细胞术应用广泛，在生物学、临床医学、免疫学、病理学等众多研究领域中有飞速的发展。 1、流式细胞术的发展回顾 回顾文献，早在1930 年，Casperrsson和Thorell就开始研究细胞的计数，1936 年，Caspersson 等将显微分光光度术引入细胞计数中，1949 年，Coulter 提出在悬液中计数粒子的方法并获得专利，1954 年，Beirne 和Hutchcon 发明光电粒子计数器，1969年，发明第一台荧光细胞检测仪，1972年，对细胞分选器进行新的改进，1975年，Milstein和Kohler 发明单克隆抗体技术，进一步促进了流式细胞仪的发展。随着现在光电技术的发展，流式细胞仪已开始向模块化发展，即它的光学元件、检测器元件和电子分析系统可以根据实验要求随意更换。进入21世纪，流式细胞术已经日趋完善，成为分析细胞学领域中无可替代的重要工具［1］-［2］。 2. 流式细胞仪的核心部件 2.1 流动室及液流驱动系统 各个仪器厂商开放有独立的鞘流液——单细胞悬液，可使待测细胞在流动室里被液体包绕，形成单一细胞鞘流液，当单个细胞通过检测区时，与激光垂直相交，进行检测。 2.2 激光光源及光束形成系统 流式细胞仪的主要测定信号荧光是由激发光激发的，荧光信号的强弱与激发光的强度和照射时间相关，激光是一种相干光源——Ar +激光器，激发波长为488nm，它能提供单波长、高强度、高稳定性的光照，当已结合特异性单克隆抗体的细胞被激光照射后，会产生散射光和发出荧光。在激光束轴邻近范围所散射的激光束，称为前向散射光(FS)，FS的大小与散射该激光的细胞的大小成正比。在激光束轴90°左右区域所散射的激光，称为侧向散射光(SS)，SS的大小与散射该激光的细胞的颗粒成正比。此外，细胞还在激光束轴的各个方向发出荧光(FL)。该荧光信号可用于测定发出该光的细胞的特性。 2.3 光学系统 流式细胞仪的光学系统由若干组透镜、小孔、滤光片组成，大致可分为流动室前和流动室后两组。流动室前的光学系统由透镜和小孔组成，透镜和小孔（一般为2片透镜、1个小孔）的主要作用是将激光光源发出的横截面为圆形的激光光束聚焦成横截面较小的椭圆形激光光束，使激光能量成正态分布，使通过激光检测区的细胞受照强度一致，最大限度的减少杂散光的干扰；流动室后的光学系统主要由多组滤光片组成，滤光片的主要作用是将不同波
流式细胞仪SOP示例
流式细胞仪操作规程目录 1：淋巴细胞亚群测定 2：HLA-B27测定 淋巴细胞亚群测定 (CD 系列) 方法 流式细胞仪BD) 原理： 用已知总数的荧光微球Beads 作标准内参，加入血中，再加入荧光抗体，应用流式细胞仪的获取和分析软 件，就可以得出血中CD3、CD4，CD8、B 、NK 细胞的绝对数。 标本采集与处理 受检者的准备 检查对象生活饮食处于日常状态，空腹采血。 采集部位 静脉采血 抗凝剂 EDTA 抗凝血 要求 1．样本量至少1ml 。 2．室温放置，24小时内处理，处理前充分混匀。 3．溶血样本不能用。 试剂 (1) 质控品 BEKAMANCOULTER 产品，未开瓶的试剂于2-8℃保存，可在有效期内保持稳定，稀释的试剂于 2-8℃可稳定2周；每天校准一次：遇特殊情况随时进行校准。 试卷方案。
仪器 BeckmanCoulter EPICS XL/FC500/Altra 样本制备： 1)按照要求，分别向已编好号的试管中加入20 ul单克隆抗体和同型对照 2)分别向试管中加入混匀的100u1抗凝血。 3)混匀，避光，室温孵育20-30分钟 4)溶血：a. OptiLyse C(按说明书步骤溶血) b. 使用COULTER Q—PREP制备系统 开机---显示READY灯亮---选择35SEC灯亮---开门---放入试管关门---自动进行溶血---显示READY灯亮---开门---取出试管---再进行下一个样品测定。 （*溶血前确认A/B/C管路充满并能打出液体） 5)上机测样（可根据样本情况选择洗或不洗上样） 报告结果 报告百分数（和绝对值） 操作性能 精密度批内五次重复CV<2％ 灵敏度 500—1000个荧光素分子 参考值(百分数（绝对值）) CD3+ 60.8-75.4%(1141-1880) CD4+ 29.4-45.8%(478-1072) CD8+ 18.2-32.8%(393-742) NK 9.5-23.5% (175-567) Th/Ts 1.05-2.03 临床意义 1.T、B淋巴细胞亚群是重要的免疫状态检测指标，在肿瘤、免疫缺陷、病毒感染，自身免疫性疾病、创伤、急性感染、多脏器功能衰竭、器官移植等具有临床诊断、病情判断、治疗等价值。