各种培养液的配方
各种溶液的配制基础公式
最终摩尔浓度 = 最初摩尔浓度/ 稀释倍数稀释倍数 = 稀释后液体总量 / 需稀释液体量。
最初摩尔浓度3需稀释液体量
最终摩尔浓度 =
稀释后液体总量
例如，需稀释液体量 0.1ml, 浓度为1mmol/L, 最终稀释总量 4 ml , 最终的浓度0.025mmol/L 以配1000ml 液体为例, g = 分子量 * 摩尔浓度(M)(或mmol/1000)
配50ml 0.1mmol/L CaCl2为例 g = 147 * 0.5/1000 / 20(1000/50) 0.003675g
0.3mol/L 甘露醇 g = 182.2 * 0.3 /20(1000/50) 2.733g
或
X = 分子量3摩尔浓度（mol/L ）/ （ 1000/ 需要量）
X = 分子量3摩尔浓度（mmol/L ）/1000 /（ 1000/ 需要量）
各种浓缩液的配制
1.FSH 浓缩液
FSH（中科院）规格10mg/瓶，用10ml水稀释，即1mg/ml。分装规格：250μl/管（即浓缩液），配50ml OM液时，加入浓缩液1管，即5μg/ml。
2．LH浓缩液
LH（宁波）规格200IU/管，用2ml 水稀释，分装成8管。分装规格：25IU/管（即浓缩液）。
配50ml OM液时，加入浓缩液2管，即0.5IU/ml。
3．17β-E
2
浓缩液
E
2
2.5mg 溶于100μl 乙醇, 然后用25ml水稀释，分装成25管，分装规格：100μg/ml/管（浓
缩液）。临用前，再分装成500μl/管，配50ml OM液时，加入浓缩液1管。
4．HMG浓缩液
HMG（），含有FSH / LH 75IU。用10ml无离子水稀释。7.5IU/ml/管(即浓缩液)。如配100ml OM时加入1管（1ml），即终浓度0.075IU/ml 。
5．Ca、Mg离子浓缩液
PBS（200ml）用Ca、Mg离子浓缩液100ml：称取CaCI
2.2H2O 2.64g(1003)、MgCI
2
.6H2O 2g
（1003），溶于100ml水中，0.0264g + 0.02g/ml CaCI
2.2H2O/MgCI
2
.6H2O(浓缩液)。分装规格: 1ml/
管。
PBS（200ml）用Ca、Mg离子浓缩液25ml：称取CaCI
2.2H2O 0.66g(1003)、MgCI
2
.6H2O 0.5g
（1003），溶于25ml水中，0.0264g + 0.02g/ml CaCI
2.2H2O/MgCI
2
.6H2O(浓缩液)。分装规格: 1ml/
管。配200ml PBS时，加入浓缩液1管。
SoF（50ml）用Ca、Mg离子浓缩液100ml：称取CaCI
2.2H2O 1.26g(1003)、MgCI
2
.6H2O 0.5g
（1003），溶于100ml水中，0.0126g + 0.005g/ml CaCI
2.2H2O/MgCI
2
.6H2O(浓缩液)。分装规格: 1ml/
管。
SoF（50ml）用Ca、Mg离子浓缩液25ml：称取CaCI
2.2H2O 0.315g(1003)、MgCI
2
.6H2O 0.125g
（1003），溶于25ml水中，0.0126g + 0.005g/ml CaCI
2.2H2O/MgCI
2
.6H2O(浓缩液)。分装规格: 1ml/
管。配50ml SoF 液时，加入浓缩液1管。配100ml SoF 液时，加入浓缩液2管6．200 mM Glutamine （1003）浓缩液
Glutamine 2.922g 溶于100ml 水中。
7．0.05%胰蛋白酶– 0.53mmol/L EDTA?4Na混合消化液
0.05%胰蛋白酶 0.5g
EDTA?4Na 0.2g
PBS（无Ca2+，Mg2+）加 1L (1000ml),过滤除菌,分装小瓶,2-5ml/瓶,-20℃保存。
8．0.25%胰蛋白酶— 0.004%EDTA混合消化液
称取胰蛋白酶粉末0.5g（1：250）和EDTA 0.08g ，先用少量PBS（无Ca2+，Mg2+）中，常温搅拌，彻底溶解，然后在补足PBS（无Ca2+，Mg2+）加至200ml，用0.22um滤膜过滤分装,-20℃保存(一次用完不宜反复冻溶)
9．0.25％胰蛋白酶一0.02％EDTA混合消化液
胰蛋白酶(Trypsin)粉（1：250） 0.25g
EDTA粉 0.02g
0.01mol／L PBS 100ml
先用少量PBS（无Ca2+，Mg2+）溶解胰蛋白酶，然后将EDTA粉末和剩下的液体加入混合，置37℃水浴中1小时左右(待彻底溶解，液体呈透明为止)，用G
抽滤，分装置4℃冰箱中保存。
5
10．A23187（IA）
A．1mmol/L浓缩液：取1mg IA 用1.9ml DMSO 或DMSO/乙醇混合液溶解为1mmol/L浓缩液。应用时，用纯净水或培养液（无BSA）稀释后使用。
B．TCM-199 + 15mmol/L Hepes + 0.168mg/ml NaHCO3 + 5umol/L A23187
信息 IA 激活用无Ca2+ 培养液，获得更多的卵母细胞激活。
11．6-DMAP（2mM）
取0.0326g 6-D 溶于500ｕl DMSO 中，即为浓缩液，浓缩液再分装成50ｕl 冻存。需要时50ｕl 6-D 浓缩液中加入10ml SoF 液，再分装成400ｕl，即工作液。
12．Ion(5μM)
用DMSO溶解（2mg/ml），18.7μl Ionomycin , 加入到10ml SoF液，再分装成400ｕl，即工作液。
13. 0.1%透明质酸酶
用PBS（无Ca2+ Mg2+）配制。30ml PBS ，加入0.03g Hy。
13．CCB
50ｕl CB ,加入20ml PBS , 即操作液。
14．1M MgSO4Stock
24.074 g MgSO4，distilled water to 200 ml，store at room temperature.
15. 1 M HEPES, pH = 7.0 Stock
119.15 g HEPES (free acid)，distilled water to 400 ml ，add solid NaOH a few pellets at a time while mixing until the pH is ~6.8 ，add concentrated NaOH dropwise to achieve pH = 7.0 ，distilled water to 500 ml，sterile filter and store at 4oC.
16. 0.5 M EDTA Stock
16.81 g EDT A (Sodium Salt) ，distilled water to 90 ml，Adjust pH to 7.0 ，Distilled water 100 ml
Store at room temperature.
17. 10 M NaOH Stock
40 g NaOH , distilled water to 100 ml , store at room temperature.
18.0.05 M CaCl2
(per 200 ml), CaCl2·2 H2O 1.5 g ,Add 198 ml water. Autoclave.
19. 0.5 M CaCl2
(per 200 ml) , CaCl2·2 H2O 15.0 g ,Add 188 ml water. Autoclave.
20. 0.1 M MgSO4
(per 200 ml) , MgSO4(anhydrous) 2.4 g, Add 200 ml water. Autoclave.
21. 40% Glucose
(per 200 ml) , Glucose(dextrose)80.0 g, Add water to 200 ml(~145-150 ml).Autoclave.
22. 2% Gelatin
(per 500 ml) Gelatin 10 g , Add 500 ml water. Autoclave.
23.10 mM EDTA
For example, for 10 mM EDT A, multiply 292.24 X 0.010 to obtain 2.92 grams of EDTA per l iter
24. Ca/Mg free Phos phate buffered saline - 10X (10X PBSA)
Dissolve 80 grams of NaCl, 2.0 grams of KCl, 15.0 grams of Dibasic sodium phosphate and 2.0 grams of Monobasic potassium phosphate(KH PO MW 136.09)in 1 liter of distilled water. This makes a 10X solution of Ca/Mg free phosphate buffered saline. Dilute 1:10 prior to use. Store in a refrige rator.
25.Sodium bicarbonate (NaHCO MW 84.0)
0.1 M Dissolve 0.84 grams of NaHCO to a final volume of 100 ml with water or buffer
26.1mol/LMgCl2:
溶解20.3g MgCl226H2O于足量的水中，定容到100ml。
27.100mmol/L PMSF
溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20℃。
28.卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）
溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
29.氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）
溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug /ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
30.链霉素（streptomycin）（50mg/ml）
溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
31．5.6％NaHCO
3
溶液
称NaHCO
3
5.6克，溶于100ml蒸馏水中，室温保存即可(如需要也可10磅15分钟高压灭菌，4℃冰箱保存)
32．VE浓缩液（1003）
1ml VE用50ul 0.05%酒精溶解。取液1ml，再加OM液99ml，其终浓度为100umol/L。
33．Hanks液
1．原液甲
NaCl 160g
KCl 8g
MgSO
427H
2
O 2g
MgCI
226H
2
O 2g
溶于800ml馏水中。
CaCl
2
(无水) 2.8g
溶于100ml蒸馏水中。
将两种液体混合后，加水至1000ml用滤纸滤过，再加2ml氯仿防腐，置4℃冰箱备用。
原液乙
Na
2HPO
4
212H
2
O 3.04g
KH
2PO
4
1.2g
葡萄糖 20.0g
溶于800ml蒸馏水中，用滤纸过滤，然后加0.5％酚红80ml，再加水至1000ml，最后加入2ml 氯仿防腐，置4℃冰箱备用。
2．使用液
甲乙两液各1份，双蒸水18份，混匀分装包扎好瓶口，经10磅15分钟高压灭菌后置4℃冰箱
中保存。使用时用5.6％NaHCO
3
调pH值到所需要求。
34．1640培养液(含lO％小牛血清)
RPMI-1640粉 10.39g
双蒸水加至1000ml
通入适量的C0
2气体，边通入CO
2
边慢慢搅拌，使其(呈透明)完全溶解。用NaHCO
3
1.5克调pH值
到7.2。
双抗1万u/ml 10ml
灭活小牛血清 110ml
混匀上述液体，立即用G
6
抽滤除菌分装，置4℃冰箱备用。
35．青、链霉素溶液
青霉素钠盐(40万u／瓶) 5瓶
链霉素(100万u／瓶) 2瓶
将两者溶于200ml 0.9％的无菌生理盐水，分装小瓶，-30℃保存。双抗在培养基中的终浓度为各l OOu为宜。
36．1M NaOH Stock
6.645g NaOH distilled water to 50 ml , store at room temperature.
37．上皮细胞培养
体内上皮细胞生长在胶原构成的基膜，因此培养在有胶原的底物上可能利于生长，另外人或小鼠表皮细胞培养在以3T3细胞为饲养层（用射线照射后）时，细胞易生长并可发生一定程度的分化现象。降低PH、Ca2+含量和温度，向培养基中加入表皮生长因子，均有利于表皮细胞生长。
以表皮细胞为例，用皮肤表皮和真皮分离培养法可获得纯上皮细胞，其法如下（黑木凳志夫1981）
1、取材：取皮肤小块，切成0.5－1平方厘米小块。
2、置0.02%EDTA中，室温，5分钟。
3、换入0.25%胰蛋白酶中，4℃过夜。
4、分离：取出皮块，用血管钳或镊子将表皮与真皮层分开。
5、取出表皮，剪成更小的块后，置0.25%胰酶中，37℃，30—60分钟。
6、反复吹打，制成悬液。
7、培养：用80目不锈钢纱网滤过后，低速离心，吸去上清。
8、直接加入培养基（Eagle加20%小牛血清）制成细胞悬液，接种入培养瓶，CO
2
温箱培养。
38．颗粒细胞单层的制备
IVM26h 卵母细胞经透明质酸酶消化处理后将卵母细胞移出将酶液及颗粒细胞用IVC 液离心(1500rpm , 5min) 漂洗3 次用移卵针吸取少量颗粒细胞置于培养液滴中5%CO2 38.6 饱和湿度
培养48h,以颗粒细胞贴壁生长过半者为宜半换液备用
39．输卵管上皮细胞单层的制备
选有红体或新鲜黄体的卵巢无菌条件下轻轻刮取输卵管内表面少量黏膜IVC 培养液离心1500rpm 5min, 洗涤3 次用移卵针吸取少量输卵管上皮置于培养液滴中5%CO2 38.6 饱和湿度
培养48h,可见有输卵管上皮贴壁生长并且有大量输卵管上皮细胞在液滴中悬浮生长600ⅹ倒置
显微镜下观察可见上皮表面大量纤毛鲜活地摆动半换液备用
40．mSOF+SLG共培养
孤雌激活卵母细胞的体外培养用IVC 液将激活的卵母细胞洗涤三次移入IVC 培养盘15~20 个/滴5%CO2 38.6, 饱和湿度进行培养每48h 半换液一次48h 观察卵裂情况并计算卵裂率
7~10 天观察囊胚,计算囊胚率。
将提前48h 制备的输卵管上皮细胞单层用mSOF 培养液半换液，并将需要共培养。二细胞以上的胚胎用培养液漂洗三次后移入单层培养液滴进行培养每48h 半换液一次并观察发育情况41．TCM199+KL + mSOF+SLG共培养
将卵裂的胚胎先置于TCM199+KL共培养系统中发育至8 细胞时，将其移入mSOF+SLG 共培养系统中，每48h 半换液一次并观察发育情况。
42．细胞原代培养
原理
将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。
仪器、材料及试剂
仪器：培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃）
材料：胎鼠或新生鼠
试剂：1640培养基（含20%小牛血清），0.25%胰酶，Hank’s液，碘酒
操作步骤
胰酶消化法
1、器材：将孕鼠或新生小鼠拉颈椎致死，置75%酒精泡2—3秒钟（时间不能过长、以免酒精从口和肛门浸入体内）再用碘酒消毒腹部，取胎鼠带入超净台内（或将新生小鼠在超净台内）解剖取肝脏，置平皿中。
2、用Hank’s液洗涤三次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。
3、用手术剪将肝脏剪成小块（1mm2），再用Hank’s液洗三次，转移至小青霉素瓶中。
4、视组织块量加入5—6倍的0.25%胰酶液，37℃中消化20—40分钟，每隔5分钟振荡一次，或用吸管吹打一次，使细胞分离。
5、加入3—5ml培养液以终止胰酶消化作用（或加入胰酶抑制剂）。
6、静置5—10分钟，使未分散的组织块下沉，取悬液加入到离心管中。
7、1000rpm，离心10分钟，弃上清液。
8、加入Hank’s液5ml，冲散细胞，再离心一次，弃上清液。
9、加入培养液l—2 ml（视细胞量），血球计数板计数。
10、将细胞调整到53105/ml左右，转移至25ml细胞培养瓶中，37℃下培养。
上述消化分离的方法是最基本的方法，在该方法的基础上，可进一步分离不同细胞。细胞分离的方法各实验室不同，所采用的消化酶也不相同（如胶原酶，透明质酶等）。
组织块直接培养法
自上方法第3步后，将组织块转移到培养瓶，贴附与瓶底面。翻转瓶底朝上，将培养液加至瓶中，培养液勿接触组织块。入37℃静置3—5小时，轻轻翻转培养瓶，使组织浸入培养液中（勿使组织漂起），37℃继续培养。
注意事项
1、自取材开始，保持所有组织细胞处于无菌条件。细胞计数可在有菌环境中进行。
2、在超净台中，组织细胞、培养液等不能暴露过久，以免溶液蒸发。
3、凡在超净台外操作的步骤，各器皿需用盖子或橡皮塞，以防止细菌落入。
无菌操作的几个注意事项
1、操作前要洗手，进入超净台后手要用75%酒精或0.2%新洁尔灭擦试。试剂等瓶口也要擦试。
2、点燃酒精灯，操作在火焰附近进行，耐热物品要经常在火焰上烧灼，金属器械烧灼时间不能太长，以免退火，并冷却后才能夹取组织，吸取过营养液的用具不能再烧灼，以免烧焦形成碳膜。
3、操作动作要准确敏捷，但又不能太快，以防空气流动，增加污染机会。
4、不能用手触已消毒器皿的工作部分，工作台面上用品要布局合理。
5、瓶子开口后要尽量保持45°斜位。
6、吸溶液的吸管等不能混用。
41．1M NaOH溶液
配25ml 1M NaOH溶液的配制：称取NaOH 1g，溶于25ml 三蒸水中，即为1M NaOH，用于调节溶液的PH值。
42．1M HCI溶液
配25ml 1M HCI溶液的配制：
X = 分子量3摩尔浓度（mol/L ）3需要量 / 1000
X = 37.5 3 1M/L 3 25ml / 1000ml
X = 0.9375
43.1.5mol Hepes
Hepes 36.0g, NaOH 3.3g , 加水至100ml。
44．2μg/ml EGF母液（曹鸿国）
100μg EGF 加入50ml （可根据需要量）纯净水，先向EGF管中加入0.5ml 水，吸出加入50 ml 水中，再从50ml水中吸0.5ml水，如此反复多次，然后分装，即为2μg/ml母液。
1ml（1管）EGF加入100ml 溶液中，其浓度为20ηg/ml 。
1ml（1管）EGF加入50ml 溶液中，其浓度为40ηg/ml。
5μg/ml EGF母液（李向臣）
称取BSA 0.0195g 充分溶于20ml超纯水中,然后再加入0.142g醋酸(10mmol)溶解后,向100μg EGF管中加入0.5ml 水，吸出加入20 ml水中，再从20ml水中吸0.5ml水，如此反复多次，然后分装，即为5μg/ml 母液。
200μl（1管）EGF加入100ml 溶液中，其浓度为10ηg/ml 。
400μl（1管）EGF加入100ml 溶液中，其浓度为20ηg/ml。
45．0．25%胰蛋白酶
胰蛋白酶粉末（1：250） 0.25g
PBS（无Ca2+，Mg2+） 100ml
先用少量PBS（无Ca2+，Mg2+）中，常温搅拌，彻底溶解，液体呈透明为止，然后在补足PBS（无Ca2+，Mg2+）加至100ml，用0.22um滤膜过滤分装,-20℃保存(一次用完不宜反复冻溶)（一次用不完可在置4℃冰箱中保存）。
46．体外活体染色观察和活体染料
碱性活性染料（带正电荷）噻嗪类（次甲基蓝、甲苯胎蓝）
丫嗪类（中性红、詹纳斯绿）
恶嗪类（亮焦油蓝、亮焦油柴）
三酚苯甲烷类（甲基柴、维克多利亚蓝）
工作液：用PBS、生理盐水配制，配0.1%-0.03%的浓度。
47．孕酮（10μmol/L） 4℃冰箱中保存
第一储存液
孕酮 3.145mg
无水乙醇 10ml
第二储存液
第一储存液 0.05ml
Hank,s BSS 4.95ml
48.冻存液
DMEM 6ml
DMSO 1.5ml
血清 2.5ml
49. TE液(100ml)
0.15%: T 150mg(0.15g)
0.02%: EDTA 20mg(0.02g)
加水至100ml。
50.蛋白酶K 浓缩液
蛋白酶K 5mg/250ml
20mg/ml
分装小管, 0.4ml 消化缓冲液中加250μl蛋白酶。蛋白酶K 1mg/ml浓度消化细胞，预计消化5小时。
51．消化缓冲液（10ml） PH：8.0
NaCI 100mmol/L 0.059g
Tirs 10mmol/L 10ml/Tirs.H
EDTA 25mmol/L 0.0867g
0.1mg/ml 蛋白酶K 1mg/10ml
SDS 0.05g
52.DMBA
0.2mg DMBA加入20ml 培养液,浓度为10μg/ml。
53．各试剂溶解性质
成分名称溶剂贮存液的浓度℃工作浓度
胰岛素0.01mol/LHCL 2.5mg/mL 4 0.1-10ug/mL
三碘甲腺原AA（Ts）0.02mol/LNaoH 5*10-7mol/L -20 1-100pmol/L
氢化可的松95%酒精1*10-5mol/L 4 1*10-7 mol/L
雌激素无水乙醇100umol/L 4 1-10nmol/L
EGF H2O 2 ug/mL -20℃ 1-100ng/ml
IGF H2O 2 ug/mL -20℃ 1-100ng/ml
V C H2O 1mg/mL 4 10ug/mL
V E 丙酮1mg/mL 4 10ug/mL
V A 无水乙醇5ug/mL -20℃避光 50 ng/ml
丁二胺 Hank，s 50mmol/L 4 10umol/L
亚油酸无水乙醇10-3mol/L -20℃10-5mol/L
去脂牛血清白蛋白DMEM/F12 10-3mol/L -20℃10-5mol/L
54 D-PBS 配方-1
成份： g/100ml
NaCI 0.8000
KCI 0.0203
HPO4 0.1152
Na
2
KH
PO4 0.0203
2
Na-Py 0.0036
Glucose 0.1
BSA 0.2
CaCI
.2H2O 0.0134
2
.2H2O 0.01
MgCI
2
S/N 0.005
Phenolred 少许
PH:
配法：
注意: CacL2.2H2O和MgCI222H2O单独溶解后缓慢倒入。
55 PBS 配方-1
成份： g/100ml
NaCI 0.80
KCI 0.020
HPO4 0.115
Na
2
PO4 0.020
KH
2
Na-Py 0.0036
Glucose 0.1
Heperin 0.001
.2H2O 0.0132
CaCI
2
MgCI
.6H2O 0.01
2
S/N 0.005
Phenolred little
NCS 2%
PH:
配法：
注意: 1. CacL2.2H2O和MgCI226H2O单独溶解后缓慢倒入。
2．定量(如100ml)后弃2.0ml 无离子水。
评价:
56 PBS（无Ca2+ Mg2+ ）配方-1
成份： g/100ml
NaCI 0.8000
KCI 0.020
HPO4(无水) 0.115
Na
2
KH
PO4 0.020
2
PH:
配法：
注意:
1.Na
HPO427H2O 0.216g
2
2.加不加下列成份?
Na-Py 0.0036
Glucose 0.1
S/N 0.005
Phenolred 少许
NCS 2%
评价:
57 M199基础液配方-1
成份： g/100ml
TCM199 0.95
NaHCO3 0.22
Hepes 0.2384
Na-Py 0.022
Pencillin 0.0075
Strepotomycin 0.005
PH:
58 OM(绵羊用)配方-1
成份： g/100ml
TCM199 0.95
NaHCO3 0.22
Hepes 0.2384
Na-Py 0.022
Glutamine 0.003
FSH（5μg/ml） 2管
LH（0.5IU/ml） 4管
17β-E
（1μg/ml）1ml（分装）
2
S/N 0.005
Phenolred 少许
FBS 10ml
PH: 配法：
注意: 1.此配方是目前使用的OM液配方。
2.李雪锋的OM液配方中Na-Py 的浓度0.0042g/100ml。
评价:
59 OM(绵羊用)配方-2
成份： g/100ml
TCM199 0.95
NaHCO3 0.22
Hepes 0.2384
Na-Py 0.022
Glutamine 0.003
HMG（0.075IU/ml） 1ml(分装)
（1μg/ml） 1ml（分装）
17β-E
2
S/N 0.005
Phenolred 少许
FBS 10ml
PH:
配法：
注意:
评价:
60 SoFaa 配方-1
成份： g/100ml g/50ml
NaCI 0.6294 0.3147
KCI 0.0534 0.0267
PO4 0.0162 0.0081
KH
2
NaHCO3 0.2106 0.1053
Na-Py 0.0033 0.0017
L-Glutamine 0.0146 0.0073
BSA 0.8 0.4
CaCI2.2H2O 0.0251 0.0126
MgCI226H2O 0.01 0.005
BME amino acids 2ml 1ml
MEM amino acids 1ml 500μl
Sodium lactate 0.037(28.24ul) 0.018(14.12μl)
Pencillin 0.0075 0.00375
Strep 0.0050 0.0025
Phenolred 少许少许
PH:
配法:
注意: 1. CacL2.2H2O和MgCI226H2O单独溶解后缓慢倒入。
2．定量后弃3.0285ml 无离子水。
61 融合液配方-1
成份 mol/L g/50ml
甘露醇 0.3mol/L 2.733
CaCl2 0.5mmol/L 0.003675
MgSO4 0.1mmol/L 0.0006
HEPES 0.5mmol 0.0059
BSA 0.025
融合液配方-2 成份 mol/L g/50ml
CaCl2 0.1mmol/L
MgSO4 0.1mmol/L
组氨酸 10mmol/L
肌醇 0.28mol/L
融合液配方-3 成份 mol/L g/50ml
甘露醇 0.28mol/L
CaCl2 0.1mmol/L
MgSO4 0.1mmol/L
组氨酸 10mmol/L
配法：
注意:
评价:
62 DMEM (高糖)配方-1
成份： g/200ml
DMEM 2.700
NaHCO3 0.740
S/N 0.01
FBS 20%
water 200ml
PH:
DMEM 配方-2 成份： g/200ml
DMEM 2.0
NaHCO3 0.74
Hepes 0.24
S/N 0.01
FBS 20%
water 200ml
PH:
配法：
注意: DMEM (高糖)中没有Hepes？
评价:
63 D/F12 配方-1
成份： g/100ml
D/F12 1. 5600
NaHCO3 0.1200
S/N 0.005
FBS 15%
water 100ml
PH:
配法：
注意:
评价:
64各试剂的分子量成份：
NaCI 58.48 KCI 74.56
Na
2HPO
4
?12H
2
O 358.14
KH
2
PO4 136.10
Na-Py 110.00 NaHCO3 84.02
CaCI
2
.2H2O 147.20
MgCI
2
.6H2O 203.30
MgSO4?7H
2
O 246.50 60%乳酸钠 112.10
乳酸钙.H2O 303.30
Hepes 238.30
Glucose 198.17
EDTA.Na2 372.20
牛碘酸 125.10
果糖 180.16
Glutamine 146.15
PMSF 174.2
Leupiptin 4
146种培养基配方 1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用） 牛肉膏3g 蛋白胨5g 氯化钠10g 琼脂15~20g pH 7.0~7.2 水1000mL 2、2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用） 可溶性淀粉20g 硝酸钾1g 氯化钠0.5g 磷酸氢二钾0.5g 硫酸镁0.5g 硫酸亚铁0.01g 琼脂20g 水1000mL pH 7.2～7.4 配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。121℃灭菌20min。 查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用） 硝酸钠2g 磷酸氢二钾1g 氯化钾0.5g 硫酸镁0.5g 硫酸亚铁0.01g 蔗糖30g 琼脂15~20g 水1000mL pH 自然 121℃灭菌20min。
4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用） 葡萄糖10g 蛋白胨5g 磷酸二氢钾1g 七水合硫酸镁0.5g 1/3000孟加拉红 100mL （rose bengal，玫瑰 红水溶液） 琼脂15—20g pH 自然 蒸馏水800mL 112℃灭菌30min。 临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。 5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用） 马铃薯200g 蔗糖（或葡萄糖）20g 琼脂15—20g pH 自然 培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至1000mL。121℃灭菌30min。 6、麦芽汁琼脂培养基 培养基的配制： (1)、取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，至15℃阴暗处发芽，上面盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。 (2)、将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。 (3)、将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。 (4)、将滤液稀释到5—6波美度，pH约6.4，加入2%琼脂即成。121℃灭菌30min。 7、无氮培养基（自生固氮菌、钾细菌）
常用缓冲液及培养基配方 LB液体培养基： Bacto-蛋白胨10g 酵母抽提物5g 氯化钠10g 加950ml蒸馏水溶解，用5N氢氧化钠调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后保存。LB固体培养基： 每升LB液体培养基中加入12g琼脂粉，高压灭菌后保存。 SOB液体培养基 Bacto-蛋白胨20g 酵母抽提物5g NaCl 0.5g 加950 ml水溶解，加入250mmol/L KCl 溶液10ml，用5 N NaOH调pH至7.0，定容至1000 ml，高压灭菌后保存。使用前加入5ml经灭菌的2mol/LMgCl2。 SOC液体培养基 SOB中加入经灭菌的葡萄糖溶液至终浓度为20mmol/L。 麦康凯固体培养基 每1000ml水中加52g培养基粉，煮沸溶解后分装，高压灭菌。 NA固体培养基 牛肉浸膏3g 酵母浸膏1g 蛋白胨蔗糖琼脂粉 5g 10g 15g 加950ml蒸馏水溶解，调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后保存。 TB培养基： 将下列组分溶解在0.9L水中： Bacto-蛋白胨12g 酵母抽提物24g 甘油4ml 各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/ 0.72 mol/L K2HPO4的溶液。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌。 溶液Ⅰ 葡萄糖2.25 g 50mmol/L 1mol/L Tris·Cl(pH8.0) 6.25ml 20mmol/L 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 5ml 10mmol/L 调pH至8.0后，用水定容至250 ml，高压灭菌后保存。 溶液Ⅱ 10 mol/L NaOH 2ml 10% SDS 10ml 用水定容至100 ml，现配现用。 溶液Ⅲ 5 mol/L 醋酸钾60ml
光合细菌（Photosynthetic bacteria，简称PSB）是具有原始光能合成体系的原核生物的总称，它广泛存在于自然界的水田、湖泊、江河、海洋、活性污泥及土壤内，是一类以光作为能源、能在厌氧光照或好氧黑暗条件下利用自然界中的有机物、硫化物、氨等作为供氢体兼碳源进行光合作用的微生物。 第一节光合细菌的生物学和营养价值 一、光合细菌的生物学 光合细菌包括产氧光合细菌（蓝细菌）和不产氧光合细菌两大部分，在实际中应用的大部分是不产氧型光合细菌。不产氧光合细菌包括紫细菌、绿细菌和日光杆菌属、红色杆菌属等总共 27个属 66个种。不产氧光合细菌是代谢类型复杂、生理功能最为广泛的微生物类群。各种光合细菌获取能量和利用有机质的能力不同，它们的代谢途径随环境变化可以发生改变。光合细菌从营养类型看包括光能自养型、光能异养型及兼性营养类型；从呼吸类型看包括好氧、厌氧和兼性厌氧型。 光合细菌是革兰氏阴性菌，在10～45℃范围内均可生长繁殖，最佳温度在30～40℃。绝大多数光合细菌的最佳pH值范围在7～8.5之间。钠、钾、钙、钴、镁和铁等是光合细菌生理代谢中的必需元素。 二、光合细菌的营养价值 光合细菌的菌体无毒，营养丰富，蛋白质含量高达65%，而且氨基酸组成齐全，含有机体需要的8种必需氨基酸，各种氨基酸的比例也比较合理。PSB还含有丰富的B族维生素，尤其是B12、叶酸、生物素的含量相当高是啤酒酵母和小球藻的20到60多倍。PSB 菌体内含有较高浓度的类胡萝素，而且种类繁多，迄今已从光合细菌中分离出80种以上的类胡萝卜素。除此之外，细胞内还含有碳素储存物质糖原和聚β一羟基丁酸、辅酶Q、抗病毒物质和生长促进因子，具有很高的营养价值。 光合细菌在虾、贝类的幼体培育中应用非常广泛，其一方面能净化水质，改善幼体的环境条件，另一方面作为饵料被幼体摄食（贝类幼体相对虾幼体的蚤状阶段都能直接摄食光合细菌），对促进幼体生长、变态和提高成活率有明显效果。 第二节光合细菌的培养方法 一、培养方式 光合细菌的大量培养通常采用全封闭式厌气光照培养和开放式微气光照培养两种方式。 （一）全封闭式厌气光照培养 全封闭式厌气光照培养是采用无色透明的玻璃容器或塑料薄膜袋，消毒后装入消毒好的培养液，接入20％～50％的菌种母液，使整个容器均被液体充满，加盖（或扎紧接口）， 造成厌气的培养环境，置于有阳光的地方或用人工光源进行培养，定时搅动，在适宜的温度下，一般经过5～10天的培养，即可达到指数生长期高峰，此时可采收或进一步扩大培养。 （二）开放式微气光照培养 开放式微气光照培养一般采用容量为l00～200升的塑料桶为培养容器。在桶底部装一气石，培养时微充气、使桶内的光合细菌呈上下缓慢翻动。在桶的正上方距捅面30厘米左有装一有罩的白炽灯泡，使被面照度达2000 lx左右。培养前先把容器消毒，加入消毒好的培养液，接入20％～50％的菌种母液，照明，微充气培养。在适宜的温度下，一般经7～10天的培养，即可达到指数生长期高峰，此时，进行采收或近一步扩大培养。 两种培养方式相比，以厌气培养方式较为理想，微气培养方式虽然设备比较简单，易于大量培养，但杂菌污染程度大，培养达到的菌细胞密度低。 二、菌种分离、保藏 培养光合细菌首先要有菌种。目前，应用于水产养殖业的光合细菌，主要是红螺菌科即紫色非硫细菌中的一些种类。它们共同的特征是具鞭毛，能运动，不产生气泡，细胞内不积累硫磺。光合细菌分离成功的关键在于选择适宜的富集、分离培养基，和提供适于光合细菌生长需要的厌气环境及适宜的温度、光照条件。 （一）采样 红螺菌科细菌可用有机物作为光合作用的供氢体兼碳源，广泛分布在被有机物污染的地方，如河底、湖底、海底、水田、沟渠和污水塘的泥土以及豆制品厂、淀粉厂和食品工业 等废水排水沟处呈橙黄色或粉红色的泥土中。浅水处直接用杯舀取少量泥土作样品，深水处借用采水器和采泥器采样。 （二）富集培养 富集培养均采用液体培养基。将采回的样品(土壤或水)装入玻璃圆筒或大型试管或具塞的磨口玻璃瓶中，倒入配制好的培养液，充分搅拌。为造成厌气环境，在玻璃圆筒或大型
芽孢杆菌常用培养基配方 （按理说，该实验的所有培养基都在这了，后红字更为清楚些。。。摘自百度） 一、肉汤琼脂培养基：蛋白胨10g ，牛肉膏15g ，NACL15g ，蒸 馏水1000ml ，琼脂18g 。调节PH7.2,0.1MPA20min 灭菌。如果用液体做培养基，则去掉琼脂即可。100 mL/组，其中20 mL 液体培养基/250 mL△中（内装玻璃珠10颗）；50 mL固体斜面培养基分装在试管中：5mL/支，10支。 2、或是（J-琼脂培养基：胰蛋白胨5g,酵母膏15g, 磷酸 氢二钾3g,葡萄糖2g, 琼脂20g, 蒸馏水1000ml。调节 PH7.3—7.5Mpa 30min灭菌。） 二、过氧化氢酶测定 1、试剂：3-10%过氧化氢 2、接种与培养：一般将测试菌种接种于肉汤琼脂斜面上，30度下 培养1-2天。 3、试验方法：取一干净载玻片，在上面加一滴3-10%的双氧水， 挑取1环1-2天的的菌苔，在双氧水溶液中涂抹，如有气泡出 现（O2），作为过氧化氢酶阳性，无泡为阴性。也可以将过氧 化氢液直接加入斜面上，观察气泡的产生。 三、需氧性测定
1、培养基：酪素水解物20g,葡萄糖 10g, ,NACL5g,HOCH2SO3Na1g,HSCH2COONa2g,琼脂15g,蒸馏水1L。调节PH7.2，分装试管，0.06Mpa，30min灭菌，培养基不摆斜面。 2、接种与观察：用一小环的肉汤菌液，穿刺接种到上述培养基中 （穿刺管底），一般与30 度培养3-7天观察结果。若芽孢杆菌在琼脂柱表面生长为好氧菌，沿穿刺线生长则为厌氧菌。四、酪素水解（用于检测不同种类的芽孢杆菌是否具有分解酪素的 特点） 1、培养基 （1）脱脂牛奶制备取新鲜牛奶，煮沸后去掉上层油脂，再经离心脱脂（3000r/min,10min）,除去上层油脂，即为脱脂牛奶。（2）牛奶平板的制备取50ml的脱脂牛奶放入一只三角瓶中，另外称1.5g琼脂置于含有50ml蒸馏水的另外3只三角瓶中，然后将两液分开灭菌，0.06Mpa-20min，带冷至45-50摄氏度时， 速将两液混匀倒平板，即为牛奶平板。将平板倒置过夜，使表面水分干燥。 2、接种与观察 将测试菌种以三点法点接在牛奶平板上，一般于30度培养1,3,5,7和14天，如菌落周围和下面呈透明，表明酪素已被分解。
填空题： 1.在所有卤虫品系的脂肪酸组成中几乎没有_DHA__，所以对卤虫必须进行营养强化。 2.微藻藻种保藏的基本条件是_低温和弱光__。 3.光合细菌培养基灭菌的方式有_常压蒸汽灭菌和过滤灭菌__和高压蒸汽灭菌。 4.“绿水育苗”是指在育苗过程中利用__微藻___的育苗方式。 5.微藻基因工程育种是引入__外源基因__在微藻内表达以改良微藻遗传品质的方法。 6._褶皱臂尾_轮虫在海水鱼虾蟹苗种培育过程中应用最为广泛。 7.在开放式培养螺旋藻时，施用__碳酸氢铵__可以杀死藻液中的轮虫和原生动物，还可以作为肥料。 名词解释： 1.营养强化:指针对生物饵料的营养缺陷，有意识地通过其摄食特定食物进行改善和补偿，达到营养平衡和满足鱼虾幼体发育的 需求。 2.诱变育种: 是指人为地利用物理的或化学的因素，诱发微藻产生遗传变异，通过对突变体的选择和鉴定，培育出有利用价值 的新品种或新的种质资源 3.单种培养: 指在培养过程中不排除细菌存在的一种培养方式 4.生物饵料:指经过筛选的优质饵料生物，进行人工培养后投喂给养殖对象食用的活的饵料。 5.指数生长期: 指微藻细胞迅速地生长繁殖，细胞数目以几何级数增加的时期. 判断题: 1、所有卤虫卵都是在低盐度下有较高的孵化率。 X 2、小新月菱形藻的最佳培养生态条件和应用途径与三角褐指藻相似。√ 3、角毛藻在低盐度下比高盐度下生长好。√ 4、褶皱臂尾轮虫对低氧含量甚至短时间缺氧的耐受力很强，因此，在高密度培养时，不需要充氧。X 5、微藻对二氧化碳的需要量大，但给微藻培养液过量通入二氧化碳，会对微藻产生毒害作用。√ 6、实验室小型培养微藻，海水的消毒通常采用有效氯消毒。X 7、不同光合细菌体内的颜色在固定的培养条件下具有特征性，因此，每个菌种的颜色不会随着培养条件的变化而发生变化。X 8、刚产出的卤虫休眠卵就具有较高的孵化率。X 9、目前培养的桡足类主要是隶属于猛水蚤目和哲水蚤目的种类。√ 10、轮虫的营养价值与所摄食的饵料有关。√ 选择题: 1、标准的血球计数板盖上盖玻片后，一个大格所在区域的体积是__C_____。 A: 1mm3B: 10mm3C: 0.1mm3D: 0.1mL 2、敌害生物对微藻培养的危害作用主要有_D___。 A:掠食 B:通过分泌有害物质对微藻起抑制和毒害作用 C:竞争营养盐 D: A+B 3、土池培养浮游动物饵料时，采用施放___C______肥料培育浮游植物较佳。 A:无机肥B:有机肥C:无机肥+有机肥D:粪肥 4、红螺菌科光合细菌的获能方式有__D__。 A:光合磷酸化B:氧化磷酸化 C:呼吸作用D: A+B+C 5、用藻类二次强化培养轮虫所需的时间一般至少要在_A___以上。 A:6-12小时B:24-36小时 C:36-48小时D:1-3小时 6、分布于咸水中的枝角类是__A__。 A:蒙古裸腹溞 B:大型溞 C:多刺裸腹溞 D:鸟喙尖头溞 7、在轮虫培养过程中，若以酵母为饵料进行培养，则适宜的轮虫接种量是_C___。 A:0.1个/ml～0.5个/ml B:1个/ml C:14个/ml～70个/ml D:200个/ ml 8、采用酒精对皮肤和器皿表面进行消毒时，常采用的浓度是___C______。 A: 40-45‰B: 60-65‰C: 70-75‰D:80-85‰ 9、在下列藻类中，最佳培养条件为高温、强光和强碱性的是__A__。 A:极大螺旋藻 B:湛江等鞭金藻 C:中肋骨条藻 D:小球藻 10、生产上螺旋藻的培养方式是_A___。
植物组织培养MS培养基配方 （一）母液配制与保存 配制培养基时，如果每次配制都要按着杨成分表依次称量，既费时，又增加了多次称量误差。为了提高配制培养基的工作效率，一般将常用的基本培养基配制成10～200倍，甚至1000倍的浓缩贮备液，即母液。母液贮存于冰箱中，使用时，将它们按一定的比例进行稀释混合，可多次使用，并在配制较多数量的培养基时，降低工作强度，也提高试验的精度。 基本培养基的母液有四种：大量元素（浓缩20倍），微量元素（浓缩100倍），铁盐（浓缩200倍），除蔗糖之外的有机物质（浓缩100倍） 1大量元素 配制大量元素母液时要分别称量，分别溶解，在定容时按表1中的序号依次加入容量瓶中，以防出现沉淀。倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保存。 表1大量元素母液（配1L20倍的母液） 序号成分配方浓度/（mg.L-1）称取量/mg 配1mL培养基吸取 量/mL 1 硝酸铵NH4NO3 1650 33000 50 2 硝酸钾KNO 3 1900 38000 3 磷酸二氢钾KH2PO 4 170 3400 4 七水合硫酸镁MgSO4.7H2O 370 7400 5 氯化钙无水CaCl2 440 6644 2微量元素母液 在配制微量元素母液时，也应分别称量和分别溶解，定溶时不分先后次序，可随意加入溶量瓶中定容（表2），一般不会出现沉淀现象。倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保有存。 表2微量元素母液(配制1L100倍母液) 成分配方浓度/(mg.L-1) 称取量/mg 配制1L培养基吸取 量/mL 碘化钾KI 0．83 83 10 硫酸锰MnSO4.H2O 22．3 2230 硼酸H3BO3 6．2 620 硫酸锌ZnSO4.7H2O 8．6 860 钼酸钠Na2MoO4.2H2O 0．25 25 硫酸铜CuSO4.5H2O 0．025 2．5 氯化钴CoCl2.6H2O 0．025 2．5 3铁盐母液 由于铁盐无机化合物不易被植物吸收利用，只有基螯合物才能被植物吸收利用，因此需要单独配成螯合物母液表3）。 配制方法：称取5.56g硫酸亚铁和7.46g乙二胺乙酸二钠，分别用450ml的去离子水溶解，分别适当加热不停搅拌，分别溶解后将硫酸亚铁溶液缓缓加入到乙二胺四乙酸二钠溶液中，将两种溶液混合在一起，最后用去离子水定溶于1000mL，倒入棕色贮液瓶中，贴好标签和做好记录后放入冰箱内保存。
常用抗生素 氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml） 溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml） 溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 甲氧西林（methicillin）（100mg/ml） 溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。 卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml） 溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml） 溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 链霉素（streptomycin）（50mg/ml） 溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml） 溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 四环素（tetracyyline）（10mg/ml） 溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 常用培养基 LB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨10g 酵母提取物5g 氯化钠10g 如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。(实验室一般都不调PH) SOB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨20g 酵母提取物5g 氯化钠0.5g 1 mol/L 氯化钾2.5ml
常用培养基概念及配 方
LB培养基：是微生物学实验中最常用的培养基，用于一般细菌培养，特别用于分子生物学试验中大肠杆菌的保存和培养。用于培养大肠杆菌、枯草杆菌等细菌，分为液态培养基和加入琼脂制成的固态培养基。加入抗生素的 LB 培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆。PDA培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基，即Potato Dextrose Agar （Medium），依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。 改良MC培养基：用于乳酸菌饮料中乳酸菌的菌落计数；原理：大豆蛋白胨、牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源；乳酸菌发酵糖产酸使菌落周围碳酸钙溶解，以辨别乳酸菌；琼脂是培养基的凝固剂；中性红为pH指示剂。MRS培养基：乳酸菌培养基，由多种成分组成，适用于乳酸菌的生长，用来分离培养乳酸菌的一类培养基，一种常用的培养基，宜培养分离乳酸菌。由于该培养基十分适于乳酸菌的生长，而且抑制其他菌的生长，因此具有分离乳酸菌的功能。当乳酸菌长成后在培养基上显黄色，之后会变淡黑色。以此分离乳酸菌。 乳酸菌：凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为乳酸菌。这是一群相当庞杂的细菌，目前至少可分为18个属，共有200多种。除极少数外，其中绝大部分都是人体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其广泛存在于人体的肠道中。目前已被国内外生物学家所证实，肠内乳酸菌与健康长寿有着非常密切的关系。乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总
称。常见菌种有双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和嗜酸乳杆菌等 自配高浓度污水：葡萄糖5550 mg／L+(NH4)2SO4,1170 mg／L+KH2PO4，170 mg／L+COD为5000 mg／L。 自配污水：葡萄糖555 mg／L+(NH4)2SO4，117mg／L+KH2PO4 17 mg／ L+CaC12 0，08 mg／L+MgSO4，1，534 mg／L+NaHCO3 550．8 mg／ L+FeC13·6H2O 0．25 mg／L+C0D 500 mg／L+氨氮为30 mg／L． 一、LB培养基配制
光合细菌的分离培养 光合细菌（Photosynthetic Bacteria，略作PSB）是一大类能进行光合作用的原核生物的总称。除蓝细菌外，都能在厌氧光照条件下进行不产氧的光合作用。研究与应用的实践表明，光合细菌在高浓度有机废水处理与资源化、水产养殖的水质调控与促进健康生长、在农业生产中作为高效活性菌肥等方面，发挥着十分有益的和令人瞩目的作用。关于光合细菌的类群、形态与生理特征、在生态系统中的地位和作用等内容，请参考有关文献与专著。这里仅就光合细菌的分离、培养方法作一介绍。 1光合细菌的富集培养的一般方法 ①分离源 光合细菌四个科-红螺菌科(Rhodospirillaceae)、着色菌科(Chromatiaceae)、绿菌科(Chlorobiaceae)、绿色丝状菌科(Chloroflexaceae)的各种菌，广泛分布于地球生物圈的各处。作为光合细菌的分离源，一般可从富营养化的湖泊、池沼、海滩、以及水田、硫黄泉、灌水土壤、和污水厂活性污泥、畜牧场水沟等厌氧或缺氧环境采样。在较深的水体，可使用采水器采取厌氧层的水。在较浅的地方，可直接用吸管吸取带底泥的水。采样的同时记录水温、pH、有无H2S气味等项内容。将采集到的水样或泥样放在厌氧、低温条件下，带回实验室进行分离。 ②光合细菌富集培养基 用于光合细菌富集培养用的培养基有许多配方，这里仅介绍日本星野氏推荐的基本培养基I和基本培养基II。前者适合于红螺菌科的光合细菌，后者适用于着色菌科和绿菌科的菌。 基本培养基I： KH2PO4 0.5g K2HPO4 0.6g (NH4)2SO4 1.0g MgSO4·7H2O 0.2g NaCl 0.2g CaCl2·2H2O 0.05g酵母浸出汁 0.1g微量元素溶液（见后）1mL 生长因子溶液（见后）1mL蒸馏水1000ml以上配制成的培养基pH值约6.7 根据需要，可在上述培养基中添加一些成分，如富集的是缺少同化型硫酸还原系的菌种，则可在基本培养基I中加入0.01%硫代硫酸钠；如是海洋
一. 土壤样品的采集 第一种: 选择植被群落具有代表性的固定样方,除去地面植被和地表覆盖物,每样方采用土壤剖面法和多点混合取样法采样,将土样混匀,用四分法弃去多余样品,取500g装入灭菌信封, 带回实验室后立即进行土壤微生物分离（4℃保存）、计数。 第二种: 在小区内机械抽取 6 株样木，距树干基部0.5 m 呈梅花形分布挖取根系周围0～20 cm、20～40 cm 和40～60 cm 土样，分层充分混合后作为非根际土壤样品。同时采集各层直径小于0.2～0.5 cm 细根上粘附的土壤，分层充分混合作为根际土壤。供微生物分析的鲜土样装入已消毒过的密封塑料袋，带入实验室。 二. 三大类土壤微生物分离与数量测定 1. 细菌的分离与数量测定 (1)以平板表面涂抹法计数。称取土壤鲜样10g在无菌条件下用无菌水配成不同浓度梯度悬浮液，取稀释度为10-3，10-4，10-5，10-6，10-7土壤悬浮液各50μL，接种于盛有灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基的培养皿中,用无菌刮刀涂抹均匀。每个浓度3个重复，恒温(28 ℃) 培养3d，选取每皿菌落数为15-150的1个稀释度统计菌落数，按下列公式计算细菌数量： 菌数(cfu/ g) = （菌落平均数×稀释倍数）÷干土% （Ⅰ） 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，配方如下： 牛肉膏3.0 g 琼脂18 g 蛋白胨5.0 g 蒸馏水1000mL pH7.0 —7.2 2. 真菌的分离与数量测定 以平板表面涂抹法计数。即称取土壤鲜样10 g ,在无菌条件下用无菌水配成不同浓度梯度悬浮液,取稀释度为10-2，10-3，10-4的土壤悬浮液各50μL，接种于盛有灭菌的马丁- 孟加拉红培养基的培养皿中,用无菌刮刀涂抹均匀。每个浓度3个重复,恒温(25 ℃) 培养5～7 d，选取每皿菌落数为15～150 的1个稀释度统计菌落数计算真菌数量公式同公式（Ⅰ）。 马丁- 孟加拉红培养基，配方如下： 葡萄糖10.0 g MgSO4.7H2O 1.0 g KH2PO41.0 g 琼脂15 g 蛋白胨 5.0 g 孟加拉红(Rose Bangal) 每升加1%溶液0.33mL 1% 链霉素3 mL 蒸馏水1000 mL pH自然 临用前再加入1% 链霉素3 mL
1、Ampicillin□组份浓度100mg/ml Ampicillin （100mg/ml）□配制量50mL □配制方法1. 称量5g Ampicillin置于50mL离心管中。 2. 加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。 4. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 2、IPTG □组份浓度24mg/mL IPTG （24mg/mL）□配制量50mL □配制方法1. 称量1.2g IPTG置于50mL离心管中。 2. 加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。 4. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 3、X- Gal□组份浓度20mg/mL X- Gal （20mg/mL）□配制量50mL □配制方法1. 称取1g X-Gal置于50mL离心管中。 2. 加入40mL DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50mL。 3. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 4、LB培养基□组份浓度1％（W/V）Tryptone，0.5％（W/V）Yeast Extract，1％（W/V）NaCl □配制量1L □配制方法1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中 Tryptone 10g；Yeast Extract 5g ；NaCl 10g 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。 4. 高温高压灭菌后，4℃保存。 5、LB/Amp培养基□组份浓度1％（W/V）Tryptone 0.5％（W/V）Yeast Extract 1％（W/V）NaCl 0.1mg/mL Ampicillin □配制量1L □配制方法1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中 Tryptone 10g Yeast Extract 5g NaCl 10g 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。 4. 加去离子水将培养基定容至1L。 5. 高温高压灭菌后，冷却至室温。 6. 加入1mL Ampicillin（100mg/mL）后均匀混合。 7. 4℃保存。 6、TB培养基□组份浓度1.2％（W/V）Tryptone
光合细菌培养基配方 光合细菌是兼性厌氧的，不同的光合细菌用的培养基不一样我现在就在做关于光合细菌的问题，这几中细菌都是常见的细菌，培养基在许多微生物上后面都有，光合细菌的富集培养基是：NH4Cl0.1g NaHCO3 0.1g KH2PO4 0.02g CH3COONa 0.1-0.5g MgSO4.7HO2 0.02g NaCl0.05-0.2g 三生长因子１ml 微量元素溶液１ml 蒸馏水９７ml ＰＨ７.０ 生长培养基加氮源（谷氨酸钠）和碳源（乙酸．丙酸．丁酸盐等）及可．其他菌的分离只要选择不同的培养基就可以选择分离啊光合细菌富集纯化详见网易网盘 光合细菌培养基配方 氯化氨1克，磷酸氢二钾0.5克，氯化镁0.2克，氯化钠2克，酵母膏0.1克，水900毫升。 各成份溶解后15磅灭菌20分钟，然后无菌的加入过滤的碳酸氢钠5.0克/50毫升水；50毫升过滤的乙醇。用过滤的0.1N磷酸调PH=7.0即可。 响应面设计法优化光合细菌培养基配方。培养基成分中醋酸钠和蛋白胨对于光合细菌的生长影响最为显著，最优培养基配方为：醋酸钠1．145g／L、蛋白胨0．055g／L、碳酸氢钠0．6g／L、硫代硫酸钠0．4g／L、氯化钠0．3g／L、硫酸镁0．1g／L、磷酸二氢钾0．05g／L。在此条件下，光合细菌生长最为良好，经过5d培养以后，培养液OD600可以达到0．5以上
光合细菌(含生产工艺) 优良的光合细菌菌种的外观质量是啥样？ 一般优良的光合细菌菌种和产品的外观质量有以下几点： 1、外观上看比较均匀，基本无上下分层。相反，市场上有许多光合细菌是上下分层的，包括我中心初期的产品也是这样，上层比较清淡，下层则比较深厚，上层颜色浅，下层颜色深，最底层可能还会有一层黑黑的沉淀。 而优秀的光合细菌菌种和产品，上下都是比较均匀的，没有较明显的分层，颜色比较均匀，外观看起来也悦目。（当然，除了培养基溶解时，会与硬水中的重金属离子反应产生的絮装沉淀除外）这种上下无分层，颜色均匀，不是靠加悬浮剂，或增稠剂而造成的，而是自然培养出来的，不加任何修饰而成的。少数地方，由于水质的原因，可能会产生稍稍的差别。 2、没有粘壁现象。很多市场上的产品都有粘壁现象，即在容器的壁上形成一层红紫色的颜色层，就象是油漆一样，洗不掉，抹不去。这主要是在培养过程中形成的，也有在保存过程中形成的。 优秀的光合细菌菌种和产品，应该是没有一丝一毫的粘壁现象。所以外观上看起来质量也更好。 3、颜色的深度比较深。根据国家质量标准，可以用721分光光度计，测量A660nm处的吸光值，如果大于1.5，则说明，浓度一般都在30亿/毫升以上，好的光合细菌菌种和产品都在1.5以上。 4、颜色鲜艳无杂色。优秀的菌种和产品，不仅颜色深，而且，比较鲜艳，没有杂色，比如是大红色，血红色，或是深紫色，看起
细胞培养基种类与基本成分 是应用最广泛的培养基。其他如M199、IMDM、L15培养基等也用于某些细胞的培养。其具体的特征及应用如下： 1、BME细胞培养基 基础Eagle 培养基 (Basal Medium Eagle)，1955 年Eagle 设计，BSS+ 12 种氨基酸+谷氨酰胺+ 8种维生素。简单、便于添加，适于各种传代细胞系和特殊研究用，在此基础上改良的细胞培养基品种有MEM、DMEM、IMDM等。 2、MEM细胞培养基 又称低限量Eagle 培养基 (Minimal Essential Medium) ，1959 年在Eagle's基础培养基 (BME )上修改而来，删去赖氨酸、生物素，氨基酸浓度增加，适合多种细胞单层生长，有可高压灭菌品种，是一种最基本、试用范围最广的培养基，但因其营养成分所限，针对生产之特定细胞培养与表达时，并不一定是使用效果最佳或者最经济的培养基。 3、DMEM细胞培养基 DMEM 是由Dulbecco 改良的Eagle 培养基, 起初是为小鼠成纤维细胞设计的。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍，维生素浓度是MEM的4倍，采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。最初的配方中葡萄糖含量为1000 mg/L,后来为了某些细胞的生长需要，将葡萄糖含量又调整为4500 mg/L, 这就是大家常说的低糖和高糖了。 低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。高糖更适合高密度悬浮细胞培养，也适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。例如CHO细胞表达生产乙肝疫苗、CHO细胞表达EPO。 4、IMDM细胞培养基 Guilber 和Iscove 将Dulbecco' Medium 改良为Iscove's Medium,用于培养红细胞 和巨噬细胞前体。此种培养液含有硒、额外的氨基酸和维生素、丙酮酸钠和HEPES o并用硝酸钾取代了硝酸铁。IMDM 还能够促进小鼠B淋巴细胞，LPS 刺激的
配方一萨氏（Sabouraud's）培养基 蛋白胨10克琼脂20克麦芽糖40克水1000毫升 先把蛋白胨、琼脂加水后，加热，不断搅拌，待琼脂溶解后，加入40克麦芽糖（或葡萄糖），搅拌，使它溶解，然后分装，灭菌，备用。 1.营养肉汤培养基 牛肉膏 0.3克 蛋白胨 1.0克 NaCl 0.5克 水 100毫升 pH 7.0～7.2 在烧杯中加水，称取牛肉膏、蛋白胨和NaCl，加热溶化后，调节pH值至7.0～7.2。分装，加棉塞，高压蒸汽灭菌即成。常用于培养细菌。 2.营养琼脂培养基 在营养肉汤培养基中增加20克琼脂即成。常用于培养细菌。 3.肉汁蛋白胨液体培养基 牛肉 500克 蛋白胨 10克 NaCl 5克 pH 7.1～7.2 取新鲜牛肉500克，去净脂肪、筋腱后，绞碎或剁碎，加水1000毫升浸泡，15℃下放置12小时或50℃下放置半小时。用纱布将肉汁过滤，补足失水。向肉汁中加入蛋白胨和食盐。将肉汁加热，放入苏打（碳酸钠）至红色，调整pH值。分装，高压蒸汽灭菌。 将上述已灭菌的培养基用棉花滤去凝集的蛋白质，制成液体培养基，如需制成固体培养基，可在每100毫升液体中加入2克琼脂，加热溶化后，分装，再次进行高压蒸汽灭菌。常用于培养细菌。 4.高氏一号培养基（淀粉琼脂培养基） 可溶性淀粉 2克 K2HPO4 0.05克 MgSO4·7H2O 0.05克 KNO3 0.1克 NaCl 0.05克
FeSO4 0.001克 琼脂 2克 水 100毫升 pH 7.2～7.4 在烧杯中加水95毫升，加热至沸腾，取可溶性溶粉2克，用5毫升水调成糊状，倒入沸水中和匀。再称取其它药品，陆续加入烧杯内（待一种药品溶解后，再加入第二种药品）。待全部药品溶解后，停止加热，补足失水，调pH值至7.2～7.4。分装后，高压蒸汽灭菌。本培养基常用于培养放线菌。 5.马铃薯蔗糖培养基 马铃薯 200克 蔗糖 10克 琼脂 20克 水 1000毫升 自然pH 称取200克马铃薯片，加水1000毫升，煮沸半小时，用纱布过滤，补足失水。在上述滤汁中加入10克蔗糖、20克琼脂，加热使琼脂熔化。分装后，高压蒸汽灭菌。常用于培养酵母菌。 6.麦芽汁培养基 将从啤酒厂买来加有啤酒花的麦芽汁，装入锥形瓶中，加塞高压蒸汽灭菌。常用于培养酵母菌。 7.察氏培养基 NaNO3 2克 K2HPO4 1克 KCl 0.5克 MgSO4 0.5克 FeSO4 0.01克 蔗糖 30克 琼脂 15～20克 水 1000毫升 自然pH
常用培养基配方（微生物学与微生物检验学部分） 渤海大学生物与食品科学学院 2006年3月
目录 01糖发酵管 02 ONPG培养基 03西蒙氏柠檬酸盐培养基 04缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用) 05克氏柠檬酸盐培养基 06丙二酸钠培养基 07葡葡糖铵培养基 08Hugh－Leifson培养基(O/F试验用) 09 马尿酸钠培养基 10营养明胶 11苯丙氨酸培养基 12 氨基酸脱羧酶试验培养基 13蛋白胨水(靛基质试验用) 14 硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用) 15 尿素琼脂 16 氰化钾(KCN)培养基 17 氧化酶试验 18 硝酸盐培养基 19 细胞色素氧化酶试验 20 过氧化氢酶试验 21 过氧化物酶试验 22 磷酸盐缓冲液 23明胶磷酸盐缓冲液 24 乳酸－苯酚溶液 25 肉浸液肉汤 26肉浸液琼脂 27牛肉(或牛心)消化汤 28血消化汤 29豆粉琼脂 30血琼脂 31营养琼脂 32营养肉汤 33 乳糖胆盐发酵管 34乳糖发酵管 35 EC肉汤 36 缓冲蛋白胨水(BP) 37 氯化镁孔雀绿增菌液(MM) 38 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB) 39 四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法) 40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC) 41 GN增菌液
42 肠道菌增菌肉汤 43 亚硫酸铋琼脂(BS) 44 DHL琼脂 45 HE琼脂 46 SS琼脂 47 WS琼脂 48 麦康凯琼脂 49 伊红美蓝琼脂(EMB) 50三糖铁琼脂(TSI) 51 三糖铁琼脂(换用方法) 52 克氏双糖铁琼脂(KI) 53 克氏双糖铁琼脂(换用方法) 54 葡萄糖半固体发酵管 55 5%乳糖发酵管 56 CAYE培养基 57 Honda氏产毒肉汤 58 Elek氏培养基(毒素测定用) 59 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基 60 胰蛋白胨水 61 Rustigian氏尿素培养液 62 氯化钠结晶紫增菌液 63 氯化钠蔗糖琼脂 64 嗜盐菌选择性琼脂 65 3.5%氯化钠三糖铁琼脂 66 氯化钠血琼脂 67 3.5%氯化钠生化试验培养基 68 改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用) 69 CIN－1培养基 70 嗜盐性试验培养基 71 改良Y培养基 72 改良克氏双糖 73 快速硫化氢(H2S)试验琼脂 74 DNA酶甲基绿琼脂(DTA) 75 Cary－Blair氏运送培养基 76 Skirrow氏培养基 77 TTC琼脂 78 甘氨酸培养基 79 改良磷酸盐缓冲液 80 氯化镁孔雀绿肉汤 81 胰酪胨大豆肉汤 82 Baird－Parker氏培养基 83 7.5%氯化钠肉汤 84 匹克氏肉汤 85 甘露醇卵黄多粘菌素琼脂
光合细菌的优化培养和生长动力学 摘要:对光合细菌(PSB)培养的最适温度、光照、pH、溶解氧等条件进行了较系统的研究.通过正交试验,得出PSB生长的 最适条件为光照度3000 lx、微好氧、30℃、pH 7.0.在此基础上,建立了PSB在模拟味精废水条件下以乙酸钠为底物的生长 动力学模型,其参数为:饱和常数Ks=0.20-0.24 g·L-1,最大比生长速率Lmax=0.038-0.044 h-1,试验表明该模型能够较 好地描述PSB的生长情况. 关键词:光合细菌;正交试验;优化培养;动力学模型 Optimal cultivation and growth kinetics of photosynthetic bacteria Abstract: This paper gives a detail study on the optimal growth conditions of temperature, illumination, pH and dissolved oxygen for photosynthetic bacteria. With the orthogonal experiment, the optimal culture conditions for the growth of photosynthetic bacteria were determined: illumination intensity 3000 lx, faintly aerobic, 30℃, pH 7.0. Under the optimal cultivation and the simulated monosodium-glutmate wastewater conditions, a kinetics model on the growth of photosynthetic bacteria in the substrate of CH3COONa was set up. The parameters in the model are as follows: the saturation constantKs0. 20-0.24 g·L-1and the maximum specific growth rateLmax0.038-0.044 h-1. The experiment results showed that this model could describe the growth data of PSB very well. Key words: photosynthetic bacteria; orthogonal experiment; optimal cultivation; kinetics model 光合细菌(photosynthetic bacteria,简称PSB)是自然界中广泛存在,比较古老的细菌类群,是一大类能 进行光合作用的原核生物的总称[1].近年来,随着人们对PSB形态、结构、生理生化以及生态等特性研究 和认识的不断深入,发现PSB,特别是其中的红螺菌科能利用多种硫化物或有机物作为其光合作用的供氢 体和碳源,在厌氧光照、好氧光照、甚至好氧黑暗环境中都能很好地增殖,且能耐受很高盐度和浓度的有机 物,具有很强的分解、去除有机物的能力,显示其在高浓度、高盐度有机废水处理中的独特优势和广阔应用 前景,成为废水处理技术研究的一个新方向[2].同时,因其菌体富含蛋白质和胡萝卜素,可作为单细胞蛋白 应用于种植业、养畜业和渔业以及作为各种食用色素[3-5].PSB的上述特点,吸引着人们对其进行发掘、研 究和商品化生产.研究PSB的优化培养条件和生长动力学,对其规模化生产和资源化开发利用
146种常用培养基配方 THE COMPOSITION OF MEDIA 培养基及成分 1. Acetobacter Medium (醋酸菌培养基) Glucose (葡萄糖) 100g Yeasst extract (酵母膏) 10g CaCO3 20g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) 1000ml Adjust (调) pH to 6.8 适用范围：恶臭醋酸杆菌混浊变种 2. Nutrient Agar (营养肉汁琼脂) Pepton (蛋白胨) 5g Beef extract (牛肉膏) 30g NaCl 5g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) Adjust (调) pH to 7.0-7.2 [Note]：When cultivation of Bacillus，5mg of to MnSO4.H2O may be added . It is favorable to promote spore formation . 适用范围：产气气杆菌、粪产碱杆菌、蜡状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌蕈状变种、地衣形芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、尘埃芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌深黑变种、苏云金芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种（青虫菌）、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种、苏云金芽孢杆菌猝倒亚种、产氨短杆菌、黄色短杆菌、谷氨酸棒状杆菌、北京棒杆菌、大肠埃希氏菌（大肠杆菌）、铜绿假单胞菌（绿脓杆菌）、凸形假单胞杆菌、荧光假单胞菌、弯曲假单胞菌、恶臭假单胞菌、假单胞杆菌、藤黄八叠球菌、亚黄八叠球菌、尿素八叠球菌、金黄色葡萄球菌、运动发酵单孢菌 3. Azotobacter Medium (固氮菌培养基) KH2PO4 0.2g K2HPO4 0.8g MgSO4.7H2O 0.2g CaSO4.2H2O 0.1g Na2MoO4.2H2O Trace(微量) Yeast axtract(酵母膏) 0.5g Mannitol(甘露醇) 20g FeCl3 Tract(微量) Distilled water (蒸馏水) 1000ml Agar (琼脂) 15g Adjust (调) pH to 7.2 适用范围：固氮菌、胶质芽孢杆菌 4. Corn Meal Medium (玉米粉培养基) Maize flour (玉米粉) 5g Peptone (蛋白胨) 0.1g Glucose (葡萄糖) 1g Tap water (自来水) 1000ml