重点银叶合果芋离体培养与快速繁殖研究①

重点银叶合果芋离体培养与快速繁殖研究①
重点银叶合果芋离体培养与快速繁殖研究①

第29卷第10期 西南大学学报(自然科学版) 2007年10月Vol畅29 No畅10JournalofSouthwestUniversity(NaturalScienceEdition)Oct畅 2007

文章编号:16739868(2007)10013405

银叶合果芋离体培养与快速繁殖研究①

徐安辉, 刘奕清, 陈泽雄, 刘长春

重庆文理学院花卉研究所,生命科学系;重庆高校园林花卉工程研究中心,重庆永川402160摘要:试验研究了不同质量浓度的6‐BA和NAA对银叶合果芋离体培养的影响.结果表明,采用茎段作为外植体进行初代诱导较好;较好的增殖配方为MS+BA3畅0mg/L+NAA0畅1mg/L;再生芽高生长最佳配方为MS+BA1畅0mg/L+NAA0畅1mg/L;生根培养基则以1/2MS+NAA0畅1mg/L为最佳.炼苗移栽成活率在95%以上.

关 键 词:合果芋;离体培养;快速繁殖

中图分类号:Q949畅71+7畅2文献标识码:A

银叶合果芋(Syngoniumpodophyllumcv畅Silverknight)为天南星科多年生常绿草本植物,原产中南美洲热带地区.叶片常丛生,幼株叶片为戟形,成熟植株的叶片常分裂成5~9枚裂片;叶心形,叶面乳白色带浅黄,叶缘绿色,叶柄短[1].银叶合果芋体态优美,色泽淡雅活泼,生命力强,容易栽培,对光照的适应性较强,有净化空气和保湿的功能[2],是较理想的室内喜阴观叶植物.

合果芋常规繁殖,种源较少,无法在短期内获得大量的植株[3],采用植物组织培养技术繁殖组培苗,则可达到繁殖速度快、量大、生长整齐、质量稳定等目的,满足市场的大量需求[4].合果芋属有50多个栽培品种[5],银叶合果芋是常见的栽培品种之一,目前其组织培养研究国内尚未见报道.试验以银叶合果芋顶芽和腋芽为外植体,研究了不同质量浓度的6‐BA、NAA对银叶合果芋离体培养不定芽产生及生根的影响,探讨适合银叶合果芋离体繁殖的激素质量浓度组合,建立银叶合果芋组织培养快速繁殖技术体系,为其组培快繁和商品化生产、遗传转化和植物品种定向改良研究提供基础.

1 材料与方法

1畅1 供试材料

选用2~3年生健壮无病虫害的盆栽银叶合果芋植株,于晴天午后采腋芽和顶芽作为外植体.将外植体材料放入保鲜袋中,带回实验室,待用.

1畅2 试验方法

1畅2畅1 初代诱导

将外植体去除叶片后,先用自来水冲洗10min,接着用洗衣粉溶液浸泡8min,然后用自来水冲洗干净,将材料在超净工作台上用70%的酒精浸泡30s,再用0畅1%的HgCl2消毒8~10min(每杯放20个材料),最后用无菌水冲洗4~5次.在无菌条件下,将处理后的无菌外植体接种到MS+6‐BA1畅0mg/L+NAA0畅1mg/L(单位下同),附加蔗糖3畅0%,pH6畅0的诱导培养基中,置于光照培养室培养,及时剔除污染材料.

1畅2畅2 增殖培养

把获得的无菌再生芽接种到MS+6‐BA(1畅0,2畅0,3畅0,4畅0,5畅0mg/L)+NAA(0,0畅1,0畅2,0畅3mg/L),蔗糖3畅0%,琼脂4畅5g/L,pH6畅0的增殖培养基中,每杯接种3个芽,每个处理3个重复,共

①收稿日期:20070625

基金项目:重庆市科委攻关项目(2006AC1061);重庆市教委重大平台建设项目(GCZX0713).

作者简介:徐安辉(1982),男,湖北麻城人,实验员,主要从事花卉离体繁殖的科研工作.

通讯作者:刘奕清,教授.

20个处理.定期观察银叶合果芋生长情况,培养30d后统计其增殖系数和平均苗高(其中高于0畅3cm以上的芽苗统计入数).

1畅2畅3 生根培养

银叶合果芋单株芽苗长至2畅5cm左右,接种至生根培养基1/2MS+NAA(0畅1,0畅3,0畅5mg/L)中,附

加3畅0%的蔗糖,pH调至6畅0.培养30d之后,统计生根率、每株长根的条数.

1畅2畅4 炼苗与移栽

当试管苗根长至0畅5~1cm并有3至4条侧根时,移入温室,炼苗3~5d,从杯中取出并洗净培养基,

移栽到盛有基质的营养袋中,置于温室培养.移植基质配方为锯木屑+泥土+珍珠岩(体积比6∶3∶1).1畅3 培养条件

试验材料均在植物组培室中培养,诱导培养利用室内自然散射光(不开灯),继代增殖和壮苗生根培

养,光照12h/d,光照强度2000lx,温度(28±2)℃.炼苗与移栽温室,遮光70%,相对湿度70%~80%,

温度(20~28)℃.

1畅4 统计方法

试验数据应用DPS(DataProcessSystem)统计分析软件进行显著性检验,经F检验差异显著之后,用Duncan新复极差法进行处理间的多重比较.

2 结果与分析

2畅1 不同外植体的初代诱导

灭菌腋芽接种在诱导培养基中培养,20d后有绿色芽点出现,30d后芽高约0畅5cm,诱导率为35畅4%.顶芽接种在相同的诱导培养基上,培养40d基部开始膨大,50d后芽开始生长,诱导率为31畅1%.由此表明,使用腋芽作为外植体建立无菌体系所用的时间较短.

2畅2 不同浓度的6‐BA和NAA对增殖的影响

银叶合果芋再生芽接种到含有不同浓度6‐BA和NAA的增殖培养基中(表1),10d后长出新芽(图1).培养30d后,试验结果表明,不同浓度的6‐BA和NAA的组合对银叶合果芋的增殖有较大的影响.6‐BA能促进银叶合果芋芽形成丛生芽,在NAA浓度相同的条件下,随着6‐BA浓度从1畅0增加到4畅0,增殖系数逐渐增大,当6‐BA浓度高于4畅0后,则不利于芽的分化;在6‐BA浓度相同的条件下,随NAA浓度增大,增殖系数呈下降趋势.一定浓度范围内,增大6‐BA和NAA比值有利于芽的分化.由表1可知,在20个处理中,处理14(MS+6‐BA4畅0+NAA0畅1)对芽苗的增殖效果最好,增殖系数为5畅89,但

表1 6‐BA和NAA对银叶合果芋芽增殖的影响

处理

6‐BA

/(mg?L-1)

NAA

/(mg?L-1)

接种芽团数增殖系数5%显著水平1%极显著水平

11畅0091畅56fG

21畅00畅192畅89deCDEF31畅00畅292畅44eEFG

41畅00畅392畅33eFG

52畅0092畅11efFG

62畅00畅193畅67bcBCD

72畅00畅293畅44cdBCDE82畅00畅392畅78deDEF

93畅0092畅33eFG

103畅00畅195畅22aA

113畅00畅293畅89bcBC

123畅00畅393畅44cdBCDE134畅0092畅67deDEF144畅00畅195畅89aA

154畅00畅294畅22bB

164畅00畅392畅67deDEF175畅0092畅78deDEF185畅00畅192畅56eEFG195畅00畅292畅22efFG

205畅00畅392畅44eEFG

注:同一列后有相同字母者表示差异不显著(小写字母,p<0畅05;大写字母p<0畅01畅Duncan新复极差法).下同.531

第10期 徐安辉,等:银叶合果芋离体培养与快速繁殖研究

芽苗茎节短,细弱,处理10(MS+6‐BA3畅0+NAA0畅1)增殖效果次之,其增殖系数为5畅22(图2).处理1(MS+6‐BA1畅0)增殖系数最小,为1畅56.方差分析表明,处理10和处理14与其它处理在5%水平上差异显著,在1%水平上差异极显著,而二者之间在5%和1%水平上差异均不显著.综合来看,在本试验处理范围内,处理10

效果较好.

图1

 银叶合果芋继代增殖培养图2 银叶合果芋试管苗

2畅3 不同浓度的6‐BA和NAA对再生芽高的影响

通过在培养基中添加不同浓度的6‐BA和NAA,试验结果表明:外源激素对银叶合果芋试管苗高生长有显著影响.低浓度的6‐BA有利于芽生长,随浓度增加,6‐BA对苗高有抑制作用;NAA对芽苗高度的生长有一定的抑制作用,NAA浓度增大,植株生长的高度呈下降趋势.从表2试验结果看,处理1(MS+6‐BA1畅0)试管苗平均高度最高,达2畅9cm,处理2和处理3次之,其平均苗高分别为2畅7cm和2畅63cm.处理17(MS+6‐BA5畅0)试管苗平均高度最低,为1畅40cm.方差分析结果表明,5%水平下,处理1和处理2之间差异不显著,而处理1与其它处理均存在显著差异;在1%极显著水平下,处理1、处理2与处理3之间差异均不显著,处理1与其它处理(除处理2和处理3外)之间存在极显著差异.

表2 6‐BA和NAA对银叶合果芋芽高的影响

处理6‐BA/(mg?L

-1

NAA

/(mg?L

-1

接种芽团数

平均苗高/cm5%显著水平

1%极显著水平

11畅0092畅90aA21畅0

0畅1

92畅70abAB31畅00畅292畅63bcAB41畅00畅392畅47bcdeBC52畅0092畅27deCD62畅00畅192畅50bcdBC72畅00畅292畅43cdeBC82畅00畅392畅20efCDE93畅0091畅83ghFGH103畅00畅192畅37deBC113畅00畅292畅23deCD123畅00畅391畅97fgDEF134畅0091畅50ijHI144畅00畅191畅87ghEFG154畅00畅291畅73ghiFGHI164畅00畅391畅67hiFGHI175畅0091畅40jI185畅00畅191畅73ghiFGHI195畅00畅291畅53ijGHI20

5畅0

0畅3

1畅60

hij

GHI

631西南大学学报(自然科学版) 第29卷

2畅4 不同浓度的NAA对银叶合果芋生根的影响

在1/2MS培养基中添加不同浓度的NAA,研究其对银叶合果芋试管苗生根的影响,试验结果表明,不同的生根培养基都能诱导生根,但生根率有很大的差异,其中以培养基1/2MS+NAA0畅1的诱导生根率91畅7%为最高,且根与苗均较粗壮,较高浓度的NAA对根系诱导具有明显的抑制作用(表3).方差分析表明,1/2MS+NAA0畅1的配方处理与其它处理之间在5%和1%水平上差异均显著.

表3 不同浓度NAA对生根诱导的影响

培养基接种数/株有根株数/株生根数/条平均生根条数/条根诱导率/%1/2MS+NAA0畅051210262畅6bB83畅31/2MS+NAA0畅11211343畅4aA91畅71/2MS+NAA0畅3128232畅875bB66畅71/2MS+NAA0畅5

12

1畅8cC

41畅7

2畅5 炼苗与移栽

把已长根的银叶合果芋试管苗移入温室,遮光70%,炼苗3~5d,从杯中取出洗净培养基,移植在装有锯木屑+泥土+珍珠岩(体积比6∶3∶1)的基质(采用50%多菌灵800倍液对基质进行消毒)中,移栽后立即喷水保湿.前10d每天喷水3~4次,之后适量浇水,15d后浇灌N,P,K三元复合肥,以后每7d施肥1次,经此方法炼苗,银叶合果芋试管苗移栽成活率达到95%以上(图

3).

图3 银叶合果芋试管苗移栽

3 结论与讨论

以诱导茎段萌发腋芽获取无菌苗,时间短、效率较高.最优化的增殖体系不但要求有较高的增殖率,

而且还要有正常的形态、颜色以及便于转接所需要的植株茎高[6,7]

.在本试验中,综合增殖系数和芽苗高考虑,银叶合果芋试管苗最佳增殖配方为处理10(MS+BA3畅0+NAA0畅1).与处理1相比,处理2再生苗平均高度略低,但增殖系数高,能形成更多的有效苗,选择处理2(MS+BA1畅0+NAA0畅1)作为再生植株高生长最佳配方.

在植物组培快繁中,增殖系数和增殖周期一直是人们关心的问题,只有增殖系数高,增殖快,在生产

31第10期 徐安辉,等:银叶合果芋离体培养与快速繁殖研究

831西南大学学报(自然科学版) 第29卷

实践中才有应用价值[7].本试验表明,通过合适的6‐BA和NAA的浓度组合,银叶合果芋组培可以取得理想的增殖效果.配合6‐BA和NAA的组合,在NAA浓度相同的条件下(一定浓度范围内),随6‐BA浓度增大,试管苗增殖系数增大,芽苗高降低.在6‐BA浓度相同的条件下,低浓度的NAA(0畅1mg/L)对于银叶合果芋的生长有较好的促进作用,说明银叶合果芋的内源生长素水平较高,高浓度的外源生长素水平会影响其生长.配合6‐BA和NAA的组合可促进芽苗增殖和伸长,对改善植株的品质有较好的效果.在一定浓度范围内,增加细胞分裂素和生长素的比值有利于芽的分化,这与Skoog等研究一致[8].本试验的较好增殖配方与金琎[3]的结论有一定的差别,这可能与试验材料品种、试验时间有关.

NAA对再生植株生根有促进效应,培养基1/2MS+NAA0畅1对银叶合果芋再生植株生根壮苗有促进作用.生根后进行炼苗培养,使植株能尽快适应特殊培养之外的自养发育和外界的温度、湿度、光照强度的变化,同时使其具备一定程度的抗微生物感染的能力.移栽基质要求疏松较肥沃,既保水又透气,移栽成活率高,有利于进行工厂化商业性生产.

参考文献:

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[8] 艾 勇.提高植物组织培养效率的几点认识[J].种子,2005,24(8):9395.

InvitroCultureandRapidPropagationof

Syngoniumpodophyllumcv畅SilverKnight

XUAn‐hui, LIUYi‐qing, CHENZe‐xiong, LIUChang‐chun

FlowerResearchInstitute,Dept畅ofLifeScience,ChongqingUniversityofArtsandScience;

GardenandFlowerEngineeringResearchCenterofChongqingColleges,YongchuanChongqing402160,China

Abstract:Syngoniumpodophyllumcv畅SilverKnightwasculturedinvitroonmediacontaining6‐BAandNAAindifferentcombinations.Asexplants,stemsegmentswerebetterforpreliminaryinduction.ThemediumMS+BA3畅0mg/L+NAA0畅1mg/Lwassuitableformultiplication.ThemediumMS+BA1畅0mg/L+NAA0畅1mg/Lprovedsatisfactoryfortheelongationoftheregeneratedshoots.Theoptimumrootingmediumwas1/2MS+NAA0畅1mg/L.Morethan95%ofthehardenedplantletssurvivedaftertransplanting.

Keywords:Syngoniumpodophyllum;invitroculture;rapidpropagation

责任编辑 欧 宾

园艺植物组织培养形考一-0006-浙江电大辅导资料

请认真阅读完再下载:预览的题目顺序完全和您自己的试题顺序完全相同再下载! 园艺植物组织培养形考一-0006 浙江广播电视大学形成性测评系统课程代码:3305830 参考资料 试卷总分:100 判断题(共26题,共52分) 1.(2分) 再分化是指脱分化后具有分生能力的细胞再经过与原来相同的分化工程,重新形成各类组织和器官甚至形成完整植株的过程。 √ × 参考答案:√ 2.(2分) 人工配制培养基的主要成分包括:水分、无机盐、有机物、植物激素、培养物的支持材料五大类。 √ × 参考答案:√ 3.(2分) 在组培实验室装修时,尤其注意灭菌、洗涤区域的地面应耐湿防滑、并排水良好。 √ × 参考答案:√ 4.(2分) 已污染的玻璃器皿需经124℃灭菌消毒处理。 √ × 参考答案:√ 5.(2分) 外植体是指从植物体外围、具有活力的培养材料。 √ × 参考答案:× 6.(2分) 相比其他培养基,MS培养基的硝酸盐含量较低。 √ × 参考答案:× 7.(2分) 6-BA在稀酸中不能溶解,可用热蒸馏水助溶。 √ × 参考答案:√ 8.(2分) 植物组织培养技术可使再生作用在更大范围内表现出来,表现为种类增加及再生部位扩大。

√ × 参考答案:√ 9.(2分) 植物组织培养的组培材料仅使用植物体的小块组织,这就保证了材料的生物学来源单一和遗传背景一致,有利于组培的成功。 √ × 参考答案:√ 10.(2分) 胚胎培养就是对植物成熟胚的离体培养。 √ × 参考答案:× 11.(2分) 用量筒定容时,应平视溶液凹面与刻度线卡齐。 √ × 参考答案:√ 12.(2分) 缓冲间是进入无菌操作区域的缓冲场地,缓冲间的门应该与无菌操作区域的门对开,使缓冲间形成空气对流,从而减少污染。 √ × 参考答案:× 13.(2分) 天然有机复合物的成分比较复杂,大多含有氨基酸、激素等一些活性物质,因而能明显促进细胞和组织的增殖和分化。 √ × 参考答案:√ 14.(2分) 超净工作台能将空气通过由特制的微孔泡沫塑料片层叠合组成的“超级滤清器”后吹送出来,形成无尘无菌的超净空气层流,从而使超净工作台面保持无菌状态。 √ × 参考答案:√ 15.(2分) 在植物组织培养中,紧实的愈伤组织是进行悬浮培养最适合的培养材料。 √ × 参考答案:× 16.(2分) 一般来说,愈伤组织的增殖生长只发生在与琼脂接触的表面,而不与琼脂接触的一面极少细

植物组织培养报告

植物组织培养报告内部编号:(YUUT-TBBY-MMUT-URRUY-UOOY-DBUYI-0128)

大蒜茎尖的组织培养 谢婷婷江宋青万嫣文吕凌宇一、实验目的 掌握植物组织培养的相关理论知识及操作方法; 通过自行设计并完成实验,提高动手能力和思维能力; 利用植物细胞的全能性,使大蒜茎尖经过脱分化作用形成愈伤组织,再分化为有结构的组织和器官,最终增殖培育出大量品质优良的大蒜试管苗。二、实验原理 植物组织培养是利用植物细胞的全能性原理。植物组织培养是在无菌环境下,将离体的植物器官、组织以至单个细胞,在人工配置的培养基上培养,使其能够继续生长,甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下,原来已经分化停止生长的细胞,又能重新分裂,形成没有组织结构的细胞团,即愈伤组织。这一过程称为“脱分化”。已经脱分化的愈伤组织,在一定条件下,又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官,这一过程称“再分化”。 三、实验材料、试剂和器材 1 供试材料 以购于府前菜场的大蒜为实验材料,实验在丽水学院生态学院组培实验室进行。 2 仪器与设备 超净工作台、培养事、电子天平、烧杯、容量瓶、玻璃棒、量筒、移液

管。 3 试剂 70%酒精、95%酒精、0.1%升汞、蔗糖、琼脂条、6-BA(1.5 mg/L;2.0 mg/L)、2,4-D(2.0 mg/L)、NAA(1.0 mg/L;)、IBA(2.0 mg/L)、10倍的大量元素、100倍的微量元素、100倍的铁盐、100倍的有机物。 四、实验步骤 1.培养基的配制及灭菌 诱导培养基:MS+6-BA 2.0 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L 出芽培养基:MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L 生根培养基:MS+IBA 2.0 mg/L (1)将MS母液(10倍的大量元素、100倍的微量元素、100倍的铁盐、100倍的有机物)按顺序排列、检查是否失效。 (2)在装有3/4蒸馏水的容器中加入0.7%琼脂和3%蔗糖,加热溶化。(3)依次吸取适量各种母液移到容器中。 (4)用蒸馏水定容到相应体积。 (5)调节pH值(用0.1M的NaOH或HCl调节)至5.8-6.0。 (6)向培养基中加入适量激素。 (7)将配制好的培养基进行分装(20-30ml/瓶)。 (8)用两层称量纸包扎瓶口,并用橡皮筋扎牢,然后在高压灭菌锅中121 ℃下灭菌 20 min 。取出三角烧瓶放在台子上,冷却后备用。接种操作所需的一切用具(烧杯、培养皿、灭菌水等),需同时灭菌。 (9)将灭菌后的培养基于常温下放置一星期,观察有无污染。

2.植物离体繁殖(植物组织培养)

第二章植物离体繁殖 植物离体繁殖: 利用组织培养技术对外植体进行离体培养,短期内获得遗传性一致的大量再生植株。也叫快繁或微繁。 和传统方法突出特点: 1、繁殖效率高:增值率高,生长速度快,可周年生产,在一个短暂的时间,由单一个体开始,能产生出大量的遗传组成相同的植株。(如苹果矮化砧木茎尖8个月可繁殖6万株,石刁柏一个腋芽一年可繁殖7万株) 2、培养条件可控性强:人为提供培养基及小气候,便于对环境进行控制,省去田间栽培繁杂劳动。 3、便于管理、占地面积小:30m2可存放1万多培养瓶,约10万多苗木。 4、利于种质资源的保存及交换。 快速繁殖的应用 (1)短期内获得大量形状优良、整齐一致的种苗群体。加快引进新种、新育良种的繁殖,促进优良品种推广和应用。(2)大量繁育原来常规方法不能进行无性繁殖、难繁殖和繁殖速度慢的一些植物,尤其对一些珍、稀、濒危的植物的繁殖有更重要的意义。 (3)作为培育新品种的有效手段,繁殖和保存育种材料。如远缘杂种、多倍体、突变体。 (4)通过茎尖培养等技术脱毒,扩增脱毒苗,达到提纯复壮良种的目的。 一、植物快繁的器官形成方式 由于植物种类不同,器官再生及快速繁殖的方式也不同。 1、短枝发生型:外植体为带叶单芽茎段,培养为完整植株。 特点:一次成苗,培养过程简单,容易移栽成活,遗传性状稳定。例如:葡萄、红薯等试管苗繁殖。 2、器官型:外植体带有顶芽或腋芽。培养后形成丛生芽,转入生根培养基,诱导生根成苗,扩大繁殖。 特点:由单芽到丛芽,繁殖速度快,遗传性状稳定,多数花卉、苗木的快繁属于此类。 3、器官发生型:直接由外植体上或从愈伤组织产生不定芽,经过脱分化与再分化成苗。 特点:繁殖速度快,由愈伤组织再生植株,遗传不稳定。烟草、水稻、小麦、番茄等。 4、胚胎发生型:外植体脱分化产生愈伤组织或细胞团,再分化为胚状体产生小植株(球形期、心形期、鱼雷期、子叶期)特点:发生数量大,速度快,结构完整,人工种子繁殖,遗传变异。 5、原球茎发生型:兰科。 茎尖或腋芽外植体通过形成原球茎,而发育为完整植株。 二、植物快繁的程序和关键技术 离体无性繁殖的程序包括:无菌母株的制备,继代芽的增殖,芽苗生根培养,再生植株的锻炼和移栽。 1、无菌母株的制备 初代培养:在无菌条件下,制备无菌繁殖的材料称为无菌母株,或繁殖母株。 选取遗传性状优良、稳定,生长健壮、无病虫害植株上的外植体,经适当有效灭菌处理后,接种在培养基上,诱导其产生芽(腑芽或不定芽)和愈伤组织。 注意:培养基激素配比,取材的年龄、大小和生理状态。 初代培养的启动生长方式:腋芽被刺激后生长;茎段、叶片、其它器官伤口处产生不定芽;外植体切口产生愈伤组织。此阶段一般需要4-6周。 ↗愈伤组织 2、继代芽的增殖 无菌母株再次切割继代培养,芽分化增殖成丛芽,加快繁殖速度。 在快速繁殖过程中,随培养时间和继代次数增加,芽分化和生长速率降低,称为驯化现象,与内源激素和恒定培养条件有关,故可以调节激素配比或变温处理,提高繁殖速度。 3、芽苗生根培养 诱导无根苗生根的方法有两种:试管内生根和试管外生根。 1)试管内生根:将无菌小枝条转入生根培养基中进行培养。 提高生根率的措施: ①降低无机盐和有机物含量(如1/2MS或1/4MS培养基)

组织培养实验报告

植物组织培养实验报告 一、实验目的 1.掌握无菌操作的植物组织培养方法; 2.通过配置ms培养基母液,掌握母液的配置和保存方法; 3.通过诱导豌豆根、茎、 叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法; 4.通过诱导豌豆茎、叶形成愈伤组织学习愈伤组织的建立方法; 5.了解植物细胞通 过分裂、增殖、分化、发育, 最终长成完整再生植株的过程, 加深对植物细胞的全能性的理 解。 二、实验原理(一)植物组织培养 植物组织培养是把植物的器官,组织以至单个细胞,应用无菌操作使其在人工条件下, 能够继续生长,甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下,原来已经分 化停止生长的细胞,又能重新分裂,形成没有组织结构的细胞团,即愈伤组织。这一过程称 为“脱分化作用”,已经“脱分化”的愈伤组织,在一定条件下,又能重新分化形成输导系统 以及根和芽等组织和器官,这一过程称“再分化作用”。(二)植物细胞的全能性 植物细胞的全能性即是每个植物的本细胞或性细胞都具有该植物的全套遗传基因,在一 定培养条件下每个细胞都可发育成一个与母体一样的植株。(三)组织的分化与器官建 成 外植体诱导出愈伤组织后,经过继代培养,可以在愈伤组织内部形成一类分生组织即具 有分生能力的小细胞团,然后,再分化成不同的器官原基。有些情况下,外植体不经愈伤组 织而直接诱导出芽、根。 (四)培养基的组成 培养基中各成分的比例及浓度与细胞或组织的生长或分化所需要的最佳条件相近,似成 功地使用该培养基进行组织培养的主要条件。营养培养基一般由无机营养、碳源和能源、维 生素、植物激素(生长调节剂)和包括有机氮、酸和复杂物质的添加剂组成。 三、实验器材 高压灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养室镊子、记号笔、橡皮筋、玻 璃器皿、三角烧瓶、烧杯、量筒、剪刀、棉塞、绳子、牛皮纸、酒精灯、喷雾器等。 四、实验材料 豌豆种子 五、实验药品 药品、70% 酒精、 0.1% 升汞、ms培养基、蒸馏水、naoh、 84消毒液、蔗糖、琼脂 等。 六、实验步骤 (一)培养基母液的配制 表1.ms培养基个成分的含量(单位:mg/l) 表2.ms培养基所需母液以及扩大倍数 名称大量元素微量元素 ca盐 mg盐 fe盐有机肌醇激素 扩大倍数 50 50 50 50 50 100 100 100 定容体积(ml) 500 500 500 500 500 200 200 50 吸取毫升数/l 20 20 20 20 20 10 10 5 (注:吸取毫升数为每升培养基所吸取的母液的体积) 表3.配制母液所需的药品及称取量

植物组织培养实验报告

植物组织培养实验报告 学院:生命科学技术学院 班级:11生物技术(制品) 学号:2011192017 姓名:李鹏

植物组织培养实验报告 实验一植物组织培养母液的配制 一、实验目的 1.了解植物组织培养基本培养基的组分及其作用。 2.学习掌握植物组织培养MS培养基的配制方法。 二、实验原理 培养基是植物组织培养中离体组织赖以生存和发育的条件。大多数培养基的成分是有无机盐、有机化合物(碳源、维生素、肌醇、氨基酸等)、生长调节物质、水分和其他附加物等五大类物质组成。 无机盐类由大量元素和微量元素组成。大量元素中,氮类化合物主要以硝酸类和铵类化合物的形式存在,但在培养基中多用硝酸类,也可以将硝酸类和铵类混合使用;磷和硫常用磷酸盐和硫酸盐来提供;钾是培养基中主要的阳离子;钙、钠、镁的需要量较少。微量元素包括碘、锰、铜、锌、钴、铁。培养基中的铁离子,大多数以螯合物的形式存在,即硫酸亚铁与乙二胺四乙酸二钠的混合。 有机化合物包括碳源、维生素、肌醇、氨基酸等。培养中的植物组织和细胞的光合作用较弱,因此,需要在培养基中附加一些碳水化合物物来提供营养需要。培养基中的碳水化合物通常为蔗糖。蔗糖除了作为培养基的碳源和能源外,对维持培养基的渗透压也起着重要的作用。在培养基中加入维生素有助于细胞的分裂和增长。一般包括VB1、B6、烟酸、生物素、叶酸、泛酸钙、VC。肌醇在糖类的相互转化、维生素和激素的利用等方面具有重要的催进作用。 常用的植物生长调节物质包括以下三类:①生长素类:吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、二氯苯氧乙酸(2,4-D)②细胞分裂素:玉米素(ZT)6-苄基嘌呤(6-BA)和激动素(KT)。③赤霉素:组织培养中使用的赤霉素只有一种,即赤霉酸(GA3)。 培养基中的其他附加物包括人工合成和天然的有机物附加物。其中最为常见的为酵母提取物。琼脂作为培养基的支持物,也是最常用的邮寄附加物,他可以是培养基呈固体状态,以利于组织和细胞的培养。 植物组织培养是否成功,在很大的程度上取决于培养基的选择之上。目前普遍使用的是MS培养基。MS固体培养基可用于诱导愈伤组织,或用于胚胎、茎段、茎尖及花药的培养等。MS培养基的硝酸盐、钾和铵的含量略高于其他的培养基,也是它被普遍使用的原因之一。 三、实验材料、试剂、配方和仪器设备 1.试剂 NH 4NO 3 ,KNO 3 ,KH 2 PO 4 ,CaCl 2 ·2H 2 O ,MgSO 4 ·7H 2 O,FeSO 4 ·7H 2 O Na 2-EDTA,MnSO 4 ·4H 2 O,ZnSO 4 ·7H 2 O,H 3 BO 3 ,KI,Na 2 MoO 4 ·2H 2 O CuSO 4 ·5H 2 O,CoCl 2 ·6H 2 O,肌醇,甘氨酸,盐酸硫胺素,盐酸吡哆醇,烟酸, 蒸馏水。 2.仪器设备 电子天平,烧杯(50ml、100ml、500ml)量筒(1000ml、100ml、25ml),容量瓶(1000ml、500ml、100ml),移液管(10ml,5ml,1ml)试剂瓶,玻璃棒数支,药匙,称量纸等。

园艺植物组织培养形考一-0003

园艺植物组织培养形考一 -0003 试卷总分:100 判断题(共26题,共52分) 开始说明: 结束说明: 1.(2分) 琼脂本身营养丰富,是一种由海藻中提取的高分子碳水化合物。 √ × 2.(2分) 根据培养方式植物组织培养可分为固体培养和液体培养,其中液体培养是最常用的方法。 √ × 3.(2分)

再分化是指脱分化后具有分生能力的细胞再经过与原来相同的分化工程,重新形成各类组织和器官甚至形成完整植株的过程。 √ × 4.(2分) 一般来说,愈伤组织的增殖生长只发生在与琼脂接触的表面,而不与琼脂接触的一面极少细胞增殖,只是细胞分化形成紧密的组织块。 √ × 5.(2分) 继代培养(增殖培养)就是将初代培养得到的培养物转移到新的相同培养基上进行培养。 √ × 6.(2分) 天然有机复合物的成分比较复杂,大多含有氨基酸、激素等一些活性物质,因而能明显促进细胞和组织的增殖和分化。 √ × 7.(2分) 缓冲间是进入无菌操作区域的缓冲场地,缓冲间的门应该与无菌操作区域的门对开,使缓冲间形成空气对流,从而减少污染。

√ × 8.(2分) White培养基无机盐含量较低,常用于诱导芽的培养。 √ × 9.(2分) 超净工作台能将空气通过由特制的微孔泡沫塑料片层叠合组成的“超级滤清器”后吹送出来,形成无尘无菌的超净空气层流,从而使超净工作台面保持无菌状态。 √ × 10.(2分) 胚状体就是离体培养条件下没有经过受精过程,但经过胚胎发育过程,所形成的胚的类似物的统称。 √ × 11.(2分) 植物组织培养技术可使再生作用在更大范围内表现出来,表现为种类增加及再生部位扩大。

植物组织培养实验报告

植物组织培养实验报告 摘要:以大豆子叶为外植体,在MS培养基上附加不同浓度、不同种类的植物激素,以研究不同激素组合和不同浓度对大豆子叶愈伤诱导率的影响,并练习无菌操作。实验结果显示第2组即MS+6-BA(2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)和第 3 组即MS+KT(0.5mg/L)+2,4-D(1.0mg/L) 培养基中愈伤组织诱导率较高,为较佳的愈伤组织诱导组合。 关键词:大豆;植物组织培养;无菌操作;愈伤组织 1.材料与方法 1.1实验材料:大豆子叶 1.2实验试剂与仪器 (1)试剂:75%酒精、MS干粉、蔗糖、琼脂、植物生长调节剂(NAA、2,4-D、KT、6-BA)、无菌水、升汞、NaOH溶液 (2)仪器:超菌净工作台、圆纸片、培养皿、封口膜、称量纸、千分之一天平、不锈钢杯子、移液枪、试管、高压灭菌锅、注射器、酒精灯、镊子、手术刀、搁置架、烧杯、电炉。 1.3实验方法 1.3.1培养基的配制与灭菌 1.3.1.1 配制培养基的准备阶段 (1)准备80个培养试管及封口膜,2个小培养皿、1个大培养皿,用洗衣粉、自来水洗净,再用蒸馏水把每个培养试管、润洗一下。带晾干后将试管编号1-80;(2)在称量纸上用百分之一天平分别称取1.5g 琼脂4份,7.5g 蔗糖4份,在烧杯里用千分之一天平上称取1.185g MS干粉4份(烧杯不要清洗);

(3)剪小圆纸片40,均分在两个小培养皿小能从中自由取出为宜;剪大圆纸片10,均分在两个大培养皿中。然后分别用报纸包好。 (4)把接种工具手术刀、镊子、剪刀等用报纸包好。 1.3.1.2 配制培养基 (1)在装有MS干粉的烧杯中按下表加入植物生长调节剂 实验所用的所有激素浓度均为0.5mg/mL 激素的加样量(ml) 编号培养基配置 6-BA NAA KT 2,4-D 1 MS+6-BA(1.0mg/L)+NAA(0.5mg/L) 0.5 0.25 2 MS+6-BA(2.0mg/L)+NAA(1.0mg/L) 1.0 0.5 3 MS+KT(0.5mg/L)+2,4-D(1.0mg/L) 0.25 0.5 4 MS+KT(1.0mg/L)+2,4-D(2.0mg/L) 0. 5 1.0 (2)用量筒量取250ml(稍多)蒸馏水,取一个不锈钢杯子加入150ml蒸馏水和称量好的琼脂,在电炉子加热沸腾2min,再加入混合好的MS培养基1号和蔗糖,混合沸腾2min,用剩余的蒸馏水定容至250ml; (3)当温度降到60℃左右时,将溶液pH 调至5.8,一般加4滴NaOH溶液即可;(4)取编号1-20的培养试管,用大量注射器以每瓶12.5ml 左右培养基分装在培养试管中,用封口膜封口,4支一捆捆扎好。 (5)用相同的方法配置2-4号培养基,并分装、捆扎。 1.3.1.3高压湿热灭菌 (1)将包好的接种工具,包好的培养皿,以及分装好的试管一起放到高温灭菌

植物组织培养试题与答案(集合版)

植物组织培养练习题 1.植物组织培养:指要人工控制的条件下,将植物体的任何部分,或器官、或组织、或细胞, 进行离体培养,使之发育形成完整植物体。所谓人工控制的条件,即营养条件和环境条件; 植物体的任何一部分是指根、茎、叶、花、果、实以及它们的组织切片和细胞。 2.愈伤组织培养:将外植体接种在人工培养基上,由于植物生长调节剂的存在,而使其细胞 脱分化形成愈伤组织,然后通过再分化形成再生植株。 3.外植体:植物组织培养中的各种接种材料,包括植物体的各种器官、组织、细胞和原生质 体等。 4.脱分化:一个已停止分裂的成熟细胞转变为分生状态,并形成未分化的愈伤组织的现象。 5、接种:把经过表面灭菌后的外植体切碎或分离出器官、组织、细胞,转放到无菌培养基上的 全部操作过程。 6、褐变:外植体在培养过程中体内的多酚氧化酶被激活,使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类 物质,这种致死性的褐化物不但向外扩散使培养基逐渐变成褐色,而且还会抑制其他酶的活性,严重影响外植体的脱分化和器官分化,最后变褐而死亡的现象。 二填空 植物组织培养根据培养方式分为固体培养和液体培养。 2、植物组织培养类型分为愈伤组织培养、器官培养、胚培养、细胞和原生质体培养。 3、组织培养的主要应用领域有快速繁殖、脱毒、体细胞无性系变异和新品种培育、单倍体育种、种质保存、遗传转化、次生代谢物的生产等几个方面。 4、茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为快速繁殖和脱毒培养两种类型。 5、一般组织培养的几道工序如下:培养器皿的清洗、培养基的配制、分装和高压灭菌;无菌操作——材料的表面灭菌和接种,培养;试管苗的驯化、移栽与初期管理。 6、在进行植物组织培养室设计时,其设计应包括洗涤室、准备室、灭菌室、无菌操作室、培养室、细胞学实验室、摄影室等分室,另加驯化室、温室和大棚。 7、培养基的成分主要包括无机营养、氨基酸、有机附加物、维生素、糖、琼脂、激素、活性炭、PH。 8、植物器官培养主要是指植物的根、茎、叶、花器和幼小果实的无菌培养。 9、细胞全能性是指植物的每一个细胞都携带有一完整的基因组,并具有发育成完整植株的潜在能力。 10、玻璃化现象是指试管苗的一种生长失调症状,当植物材料进行离体繁殖时,有些培养物的嫩茎、叶片往往会出现半透明状和水渍状,这种现象称为玻璃化。其苗称为玻璃化苗。

浅析植物离体快繁过程中常见的问题

目录 摘要 (1) 关键词…………………………………………………………………………………………… 1 Abstract…………………………………………………………………………………………… 1 Keywords (1) 1 污染 (2) 1.1 污染的种类 (2) 1.2 污染的因素 (2) 1.2.1 外植体本身 (2) 1.2.2 外植体灭菌 (2) 1.2.3 接种和培养环境 (3) 2 褐化 (3) 2.1 褐化原因 (3) 2.2 影响褐变的因素 (3) 2.3 防止褐变的方法 (4) 2.3.1 外植体的选择 (4) 2.3.2 适宜的培养基和培养条件 (4) 2.3.3 加入抗氧化剂和吸附剂 (4) 2.3.4 反复转接 (4) 3 玻璃化 (4) 3.1 玻璃化苗的特点与发生原因 (4) 3.1.1 玻璃化苗的特点 (4) 3.1.2 发生原因 (4) 3.2 影响玻璃化苗的因素 (5) 3.2.1 生长调节剂 (5) 3.2.2 温度 (5) 3.2.3 湿度 (5) 3.2.4 消毒方法 (5) 3.2.5 光照时间 (5) 3.2.6 培养基 (5) 3.2.7 继代次数 (5) 4 其他常见问题及其解决措施 (5) 4.1 初始培养阶段 (5) 4.2 继代培养阶段 (6) 致谢 (7) 参考文献 (7)

浅析植物离体快繁过程中常见的问题 摘要 探讨了影响了植物组织培养的主要因素,分析了污染、褐变、玻璃化及其他常见问题,并提出了解决措施。认为:污染主要是由灭菌不彻底和环境不洁造成的,加强外植体和培养基的灭菌,对培养环境及其用具彻底消毒,可大大降低污染率。植物品种、取材部位及环境条件与褐变的发生密切相关,选择适宜的外植体,进行外植体,调价抗氧化剂和吸附剂等可有效控制褐变。培养基的种类、温度、通气状况等会影响玻璃苗的发生,选择适当培养基,降低温度,增强光照,改善通风等可使玻璃化率降低。 关键词 组织培养;污染,褐化,玻璃化 According to the rapid propagation process of in vitro in common problem Abstract Discusses the influence of the main factors of plant tissue culture, this paper analyzes the pollution, Browning, vitrification and other common problems, and proposes the measures. Think: pollution is mainly composed of sterilization is not complete and the environment caused by the unclean, strengthen the explant and culture medium sterilization for training environment and its appliance disinfection, can greatly reduce the rate of pollution. Plant variety, based site and environment and the occurrence of Browning closely related, the choice of appropriate explant, explant, introduce antioxidants and adsorbent, etc can effectively control the Browning. The kinds of culture medium, temperature and ventilation situation will influence the occurrence of glass seedlings, choose proper culture medium, reduce the temperature, and enhance the illumination, improve ventilation can make glass transition rate to decrease. Keywords Tissue culture; Pollution, Browning, vitrificatio

植物组织培养 (2)

植物组织培养:是指在无菌和人工控制的环境条件下,利用人工培养基,对离体的植物胚胎、器官、组织、细胞及原生质体进行培养,使其再生细胞或完整植株的技术。又称为植物离体培养 离体生态学:是指研究离体培养环境条件控制的科学,其研究对象是培养基、植物材料和人工环境条件 外植体:用于离体培养的那部分植物器官、组织或细胞 愈伤组织(callus):是指外植体因受伤或在离体培养时,其细胞进行活跃的分裂增殖而形成的一种无特定结构和功能的组织 植物组织培养的特点 1.组培技术是无菌操作技术。 2.组培材料处于完全的异养状态。 3.组培材料可以是离体状态的器官、组织、细胞或原生质体。 4.组织培养物可以形成克隆(clone,无性繁殖系),也可以进行茎芽增殖或生根 5.组培容器内的气体和环境气体可通过封口材料进行交换,相对湿度通常是几乎100%,因此,组培苗叶片表面一般都无角质层或蜡质层,且气孔保卫细胞功能缺乏,气孔始终都是张开的。 6.组培的环境温度、光照强度和时间都是人为设定的,其参数可调 植物组织培养的研究类型 组织培养 器官培养 胚胎培养 细胞培养 原生质体培养 植物组织培养的研究任务 研究离体培养条件下,细胞、组织或器官所需营养条件和环境条件,细胞、组织或器官的形态发生和代谢规律,植物脱毒方法和机理,植物特别是一些难繁植物的大量快速繁殖方法,细胞融合方法和机理,再生个体的遗传和变异,种质资源的离体保存机理和方法等 德国植物学家Schleiden和动物学家Schwann于1838-1839年提出的细胞学说 德国植物学家Haberlandt于1902年提出了植物细胞具有全能性 李继侗和沈同1933年成功培养了银杏的胚。 1952年,Morel和Martin提出了植物脱毒(virus free)技术 Guha和Maheshwari等——花药培养 Cocking等-原生质体培养

园艺植物组织培养完整版

植物组织培养 填空(每空1分,共10分)名词解释(共20分) 简答题(每小题8分,共40分)论述2题15分2013.12.11 名词解释 1、外植体:植物组织培养中,使用的各种器官、组织和细胞统称为外植体。 2、细胞核重编程:是细胞内的基因表达由一种类型变成另一种类型。通过这一技术,可以在同一个体上将较容易获得的细胞类型转变成另一种较难获得的细胞类型。这一技术的实现将能避免异体移植产生的免疫排斥反应。 3、直接器官发生:直接从外植体的细胞形成器官原基,然后发育成器官。 4、愈伤组织:是指在培养或自然条件下,植物细胞脱分化,不断增殖所产生的主要由薄壁细胞构成的不定形的组织. 5、褐化现象:指对于富含多酚化合物的植物,在接种时由于切割或剥离使组织收到伤害,该类物质会在多分氧化酶的作用下氧化褐变,是培养基变黑,并严重抑制外植体生长和分化,严重时导致培养物死亡。 6、复幼现象:在离体培养环境下,取自成龄植株的外植体由于适应环境而一步步向幼龄方向变化。 7、胚状体:在离体培养条件下,植物离体培养的细胞、组织、器官也可以产生类似胚的结构,其形成也经历一个类似胚胎发生和发育过程,这种类似胚的结构称为胚状体。8、植物超低温种质保存:将植物的离体材料包括茎尖、分生组织胚胎花粉愈伤组织、悬浮细胞、原生质体等,经过一定的方法处理后在超低温条件下进行保存的方法。 条件培养基 9、无菌:是指使培养器皿、器械、培养基和培养材料等处于无真菌、细菌、病毒等微生物的状态,以保证培养材料在培养器皿中正常生长和发育。 10、植物茎段培养:植物茎段培差是指对植物的带有一个以上定芽或不定芽的外植体进行离体培养的技术。 11、脱分化:也称去分化,是指离体培养条件下生长的细胞、组织或器官经过细胞分裂或不分裂逐渐失去原来的结构和功能而恢复分生状态,形成无组织结构的细胞团或愈伤组织或成为未分化细胞特性的细胞的过程。 12、再分化:离体培养的植物细胞和组织细胞可以由脱分化状态重新进化分化,形成另一种或几种类型的细胞、组织、器官,甚至形成完整植株,这个过程称为再分化。 13、原球茎:原球茎是兰花种子发芽过程中的一种形态学构造。是短缩的、呈珠粒状的、由胚生细胞组成的、类似嫩茎的器官。 14、植物器官培养:对植物体各种器官及器官原基进行离体培养的方法。包括根、茎、叶、花、果实、种子等的培养。 15、胚胎培养:对植物成熟胚和未成熟胚以及胚器官进行离体培养的方法,称为胚胎培养。 16、体细胞无性系变异育种:指体细胞无性系变异在育种中可以改良作物品种拓宽种质资源,以及加强外源基因向栽培中的渐渗。 17、体细胞胚胎发生:植物离体培养细胞产生胚状体的过程。 18、离体授粉:或称试管受精、离体受精,指将未授粉的子房或胚珠从母体上分离下来,

植物组织培养实验报告

植物组织培养实验报告 一实验目的 让植物组织经过脱分化作用,形成愈伤组织,经过再分化作用,愈伤组织又能重新分化为有结构的组织和器官,最终形成完整的植株。 二实验原理 植物组织培养是把植物的器官,组织以至单个细胞,应用无菌操作使其在人工条件下,能够继续生长,甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下,原来已经分化停止生长的细胞,又能重新分裂,形成没有组织结构的细胞团,即愈伤组织。这一过程称为“脱分化作用”,已经“脱分化”的愈伤组织,在一定条件下,又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官,这一过程称“再分化作用”。植物激素在此过程中起着重要的作用,吲哚乙酸(IAA )和 6 –苄基氨基腺嘌呤(6 – BA )的比例,决定了根和芽的分化。 三实验器材 (一)试剂 乙醇、IAA 或 2 ,4 – D 、HgCl 2 (或次氯酸钠)、6- 苄基氨基腺嘌呤(6-BA ) MS 培养基 (二)仪器设备 培养室,高压灭菌锅,水浴锅,解剖刀,三角烧瓶(100mL ),烧杯,量筒,培养皿,超净工作台,分析天平,长镊子,剪刀,橡皮筋等 三实验步骤 1. 配制培养基 (1 )愈伤组织诱导培养基:MS 培养基(蔗糖含量为10 g/L ,2,4 – D 含量为 2 mg/L ,琼脂10 g/L )。 (2 )试验培养基:在MS 培养基中按表33 – 1 加入IAA 和6–BA 。 吲哚乙酸先用少量0.1 mol/L NaOH 溶解,6- 苄基氨基腺嘌呤先用少量0.1 mol/L HCl 溶解,然后用蒸馏水稀释,再加入培养基中。 2. 培养基灭菌 将配好的培养基加入琼脂加热溶解,调至pH 5.8 ,趁热分装于100 mL 三角烧瓶中,每瓶约20 mL 。待培养基冷却凝固后,用两层称量纸包扎瓶口,并用橡皮筋扎牢,然后在高压灭菌锅中121 ℃( 1 kg/cm 2 )下灭菌20 min 。取出三角烧瓶放在台子上,

植物组织培养习题及答案

0.填空 1.根据培养的材料,植物组织培养分:愈伤组织培养、(器官培养、细胞格养、原生质体培养(悬浮培养 2.植物组织培养的发展分为三个阶段:萌芽阶段、奠基阶段,快速发展和快速发展和应用阶段 3,1902年,Haberlandt提出了植物细胞“全能性”学说,1934年, White出版了《植物组织培养手册》培养等类型从而使植物组织培养为一门新兴学科。 一.填空、 1,组织培养实验室必要的设备有超净工作台、高压灭菌器、调机、_天平、显微镜、_蒸馏水,发生器,酸度计 养基成分主要包括①无机营养成分、②有机营养成分)、_③植物生长调节物质、_④碳水化合物、⑤其它物质 3、培养基最常用的碳源是_蔗糖,使用浓度在1%-5%常用3% 4、糖在植物组织培养中是不可缺少的,它不但作为离体组织棱以生长的碳源而且还能维持培养基渗透压 5、在固体培养时琼脂是使用最方便、最好的凝固剂和支持物般用量6-10g/L之间 6.驯化的目的:在于于提高试管苗对外界环境条件的适应性,提高其光合作用的能力,促使试健壮,提高苗的移裁成活 7、生长素/细胞分裂素的高低决定着外植体的发育方向,其比值高:有利于根的形成和愈伤组织的形成:低:有利于芽的形成 8、培养基灭菌一般在108kPa的压力下,锅内温度达_121℃C,维持_20-30min、 9.选择外植体时应选择①选择优良的种质、②选健壮的植株、③选最适的时期和④选取适宜的大小。 10、诱导胚状体比诱导芽的优点:(1)数量多、(2)速度快、_(3)结构完整 11、试管苗的生态环境:高温且恒温、高湿、弱光、无菌 12、培养基中加入活性炭的目的:利用其吸附能力,减少一些有害物质的影响大 13、筛选培养基的方法:单因子试验法、多因子试验法、广谱实验法 14、植物培养技术:灭菌、接种种、培养、驯化四个环节 15、试管苗的驯化注意:基质、温、光、水、肥、气的综合管理 二.填空 1.绝大多数培养植物再生植株时都先经过愈伤组织阶段 2.愈伤伤组织形成大致经历诱导期、分裂期一和分化期三个时期 3、愈用植物生长调节物质时要注意:种类和浓度生长素和细胞分裂素的比值4.愈伤组织的形态发生方式主要有不定芽方式和胚状体方式 5.组织培养细胞再分化包括四个水平:细胞水平的再分化、组织水平的再分化、器官水平的再分化(器宣发生)和植株水平的分化 三.填空: 1.植物器官培养主要是指植物的根、茎、叶、花器和幼小果实的无菌培养。 2、茎尖培养根据培养目的和取材大小分为茎尖分生组织培养和普通茎尖培养两种类型。前者主要是对茎尖长度不超过,最小只有几十微米的茎尖进行培养,目的是获得无病毒植株:后者是对几毫米乃至几十毫米长的茎尖、芽尖及侧芽的培养,目的是离体快繁 3.不定芽产生的途径一是从外植体上直接产生二是从由外植体诱导产生的愈伤组织上产生 4.离体叶培养是指包括叶原基、叶栖、叶鞘、叶片、子吐等叶组织的无菌培养 5.在离体叶培养中,6-BA和KT利于芽的形成;24D利于愈伤组织的形成 四.填空 1、胚胎培养包括幼胚培养、成熟胚培养、胚乳培养、胚珠培养以及子房培养 2、离体胚的培养分为二种类型:。成熟胚培养和_幼胚培养六

植物离体快速繁殖

植物组织培养:离体条件下利用人工培养条件在无菌情况下培养、生长、发育再生出完整植株的过程。外植体:由活体植物体上提取下来的,接种在培养基上的无菌细胞、组织、器官等。植物细胞的全能性:植物细胞具有该植物体全部遗传的可能性,在一定条件下具有发育成完整植物体的潜在能力。脱分化:将来自已分化组织的已停止分裂的细胞从植物体部分的抑制性影响下解脱出来,恢复细胞的分裂活性。再分化经脱分化的组织或细胞在一定的培养条件下可有转变为各种不同细胞类型的能力。 第二章设备与培养条件 实验室组成:化学实验室、洗涤菌室、无菌操作室、培养室、细胞学实验室。1化学实验室:完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、配制、培养基分装等。主要设备:药品柜、防尘橱(放置培养容器)、冰箱、天平、蒸馏水器、酸度计及常用的培养基配制用玻璃仪器. 2 洗涤、灭菌室:完成各种器具的洗涤、干燥、保存、培养基的灭菌等。主要设备:水池、操作台、高压灭菌锅、干燥灭菌器(如烘箱)等。3无菌操作室(接种室):主要用于植物材料的消毒、接种、培养物的转移、试管苗的继代、原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程序。主要设备:紫外光源、超净工作台、消毒器、酒精灯、接种器械(接种镊子、剪刀、解剖刀、接种针)等。4培养室:培养室是将接种的材料进行培养生长的场所。主要设备:培养架(控温控光控湿)、摇床、培养箱、紫外光源等。5细胞学实验室:用于对培养物的观察分析与培养物的计数等。主要设备:双筒实体显微镜、显微镜、倒置显微镜等。6其他小型仪器设备:分注器、血球计数器、移液枪、过滤灭菌器、电炉等加热器具、磁力搅拌器、低速台式离心机等。 第三章培养基及其制备 培养基的成分主要可以分水、无机盐、有机物、天然复合物、培养体的支持材料等五大类。常用的培养基及特点如下:(1)MS培养基特点是无机盐和离子浓度较高,为较稳定的平衡溶液。(2)B5培养基其主要特点是含有较低的铵,这可能对不少培养物的生长有抑制作用。(3)White培养基其特点是无机机盐数量较低,适于生根培养。(4)N6培养基其特点是成分较简单,KNO3和(NH4)2SO4含量高。(5)KM —8P培养基其特点是有机成分较复杂,它包括了所有的单糖和维生素,广泛用于原生质融合的培养。水是植物原生质体的组成成分,也是一切代谢过程的介质和溶媒。1无机营养--①大量元素,指浓度大于0.5mmol/L的元素等。其作用是:(1)N 是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成分,是生命不可缺少的物质。(2)P 是磷脂的主要成分。在植物组织培养过程中,向培养基内添加磷,不仅增加养分、提供能量,而且也促进对N的吸收,增加蛋白质在植物体中的积累。(3)K 对碳水化合物合成、转移、以及氮素代谢等有密切关系。K增加时,蛋白质合成增加,维管束、纤维组织发达,对胚的分化有促进作用。但(4)Mg、S和Ca、Mg 是叶绿素的组成成分,又是激酶的活化剂;S 是含S氨基酸和蛋白质的组成成分。Ca是构成细胞壁的一种成分,Ca对细胞分裂、保护质膜不受破坏有显著作用,铁是一些氧化酶、细胞色素氧化酶、过氧化氢酶等的组成成分。同时,它又是叶绿素形成的必要条件。培养基中的铁对胚的形成、芽的分化和幼苗转绿有促进作用。也是植物组织培养中不可缺少的元素,缺少这些物质会导致生长、发育异常现象。②微量元素,作为酶的辅助因子或激活剂参与代谢的调节③缺素症④稀土元素,对试管苗的生长分化生根愈伤组织诱导生长体细胞胚的发生以及提高次生代谢物的产量有促进作用2有机营养成分①碳源,对细胞增殖起作用也影响细胞分化②维生素类,对生长分化等有很好促进作用③肌醇,糖类的转化中其重要作用,是细胞壁的构建材料④氨基酸,可直接被细胞吸收⑤天然复合物,对细胞的增殖与分化有明显的促进作用,但对器官的分化作用不明显3培养材料的支持物4活性炭吸附培养基及培养物分泌物中的抑制物质,抑制外植体褐变防止玻璃苗的产生促进培养物生长和分化促进生根5抗生素防止外植体内生菌造成的污染6抗氧化物,作用抑制外植体的褐变7硝酸银促进愈伤组织器官发生或体细胞胚胎发生的作用,使原再生困难的物种分化再生植株母液的配置与保存:①大量元素母液,即含N.P.K.Ca.Mg.S等六种盐类的混合溶液,一般配成浓度10倍或20倍母液。②微量元素母液,含有除Fe以外的B.Mn.Cu.Zn,Mo.CL等盐类的混合溶液,因含量低,一般配成100倍或200倍母液。③铁盐母液④有机物母液⑤植物生长调节物质母液1生长素类,作用促进细胞伸长和分裂,促进生根抑制器官脱落,性别控制,延长休眠,顶端优势,单性结实等作用2细胞分裂素类作用,促进细胞分裂和分化,诱导胚状体和不定芽的形成,延缓组织的衰老并增强蛋白质的合成。3赤霉素作用,加速细胞的伸长生长,促进细胞分裂。脱落酸具有抑制细胞分裂和伸长促进脱落和衰老促进休眠和提高抗逆等能力4多胺作用,调控部分植物外植体不定根不定芽画押体细胞胚发生发育以及延缓原生质体衰老促进原生质体分裂及细胞克隆形成方面具有明显的效果5多效唑作用,控长矮化,促进分枝,分嶪促进生根成花坐果,延缓衰老,提高叶绿素含量,增强植物抗逆性等培养基的配置准备工作1实验用具的准备2试剂药品的准备3 Vo=V1/t 或Vo=(C1*V1)/Co Vo=吸取母液体积(mL)V1=配置培养基体积(mL)Co=母液浓度(mg/L)C1=配置培养基的浓度(mg/L)T=母液扩大倍数①取规定数量的糖源和凝固剂置于烧杯内,加蒸馏水至培养基最终体积的3/4在恒温水浴中加热使之溶解,加热过程应不断搅拌,防治结块。②根据计算所需量一次加入大量元素微量元素铁盐有机物生长调节物质母液及其他特殊附加物,搅拌均匀。③加水定容至规定体积,搅拌均匀。④调整培养基的PH值。⑤分装⑥封口 第四章植物材料 植物材料幼年期特点:植物生长快,呼吸强,核酸代谢和蛋白质合成快。成年期:代谢和生理活动慢,光合速率和呼吸速率下降。外植体的选择:1植物的种质选择2外植体的增值能力3外植体的大小4外植体的年龄和着生部位5取外植体的季节和时间6木本材料的特殊性灭菌的常用化学药品:1乙醇2升汞3次氯酸钠4漂白剂5过氧化氢6其他用于外植体体表灭菌的化学药品①茎尖茎段以及叶片等材料的灭菌流水冲洗,70%乙醇浸泡,冲洗,取0.1%升汞。最后用无菌水洗涤干净,备用。②果实和种子的灭菌冲洗20min 再用70%乙醇灭菌30s,用无菌水洗涤3次,取出果实内种子进行培养。如暴露了,用10%次氯酸钙溶液浸泡30min。

月季植物组织培养实验报告

月季植物组织培养实验报告 姓名:张恒玉 (天津师范大学10生乙10517085) 摘要:月季(Floribunda roses)为蔷薇科蔷薇属木本植物,其花姿优美,花 型丰富,花色齐备, 树型易修剪,栽培难度小;其花型大,美丽,幽雅,高贵。在鲜花应用中,月季花的地位和比重与日俱增,是世界上著名的四大切花之一。植物组织培养主要以绿色植物细胞或组织块为研究主要对象,把植物体上的生活器官、组织块活细胞从整体上离体下来进行人工培养。以细胞全能性为理论基础对最适月季培养的培养基、激素、培养基质进行筛选,使离体组织经过脱分化和再分化而发育成新的植物个体。为月季的快繁和新品种的选育提供了新的途径,在月季的改良上显示了很大的应用潜力。 关键词:月季组织培养 Rose Plant Tissue Culture Lab Report Name: ZhangHengyu (Tianjin Normal University college of Life Science, Biological Sciences 300387) Abstract:Rose (Floribunda roses) for the woody Rosaceae Rosa, the beautiful flower position, abundant flowers, colors available, easy to trim the tree, planting small difficulty; its flowers large, beautiful, elegant, noble. Applications in the flowers, the status and the proportion rose growing is the world's leading one of the four cut flowers. Plant Tissue Culture main object of the green plant cells or tissue blocks for research, Of life on the plant organ, tissue block living cells isolated from the whole down the artificial culture, Cell totipotency theory based on the optimum rose culture medium, hormones, culture media filter, Isolated tissue and develop into new individual plants after dedifferentiation and redifferentiation. breeding of new varieties offer a new way, in the rose show a significant improvement potential applications. Keywords: Rose tissue culture 1 月季介绍

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