醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白
学号：200900140157 班级：09生科3班姓名：俞华军时间：2011/03/27
一．实验目的
1.掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离蛋白质的原理和方法。
2.掌握电泳仪的使用方法。
二．实验原理
蛋白质是两性电解质。在pH小于其等电点的溶液中，蛋白质为正离子，在电场中向阴极定向移动，在pH大于其等电点的溶液中，蛋白质为负离子，在电场中想阳极移动。血清中含有书中蛋白质，它们所具有的可解离基团不同，在同一pH值得溶液中，所带净电荷不同，因此在电场中的移动速度不同，故可利用电泳法将它们分离。
血清中含有白蛋白、α—球蛋白、β—球蛋白、γ—球蛋白等，各种蛋白质由于氨基酸组分、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同（见表一），在电场中迁移速度不同，由表一可知，血清中5中蛋白质的等电点大部分低于pH7.0，所以在缓冲液（pH8.6）中，它们都电离成负离子，在电场中向阳极移动。
在一定范围内，蛋白质的含量与结合的染料量成正比，故可将蛋白质区带剪下，分别用0.4mol/L的氢氧化钠溶液浸洗下来，进行比色，测定其相对含量。也可以将染色后的薄膜直接用光密度计扫描，测定其相对含量。
肾病、弥漫性肝损害、肝硬化、原发性肝癌、多发性骨髓瘤、慢性炎症、妊娠等都可以使血清中蛋白含量下降，肾病时α1、α2、β—球蛋白升高，γ—球蛋白降低。肝硬化时α2、β—球蛋白降低，而α1、γ—球蛋白升高。所以，可以测定人体血清中蛋白含量的值来诊断一些疾病。
三．实验器材
试剂：巴比妥—巴比妥钠缓冲液、95%乙醇、无水乙醇、冰醋酸、染色液用品：醋酸纤维薄膜（x2）、人血清、培养皿（x3）、载玻片、盖玻片、电吹风、吸管5ml（x1）、2ml（x2）、直流稳压电泳仪、电泳槽、镊子、
滤纸、烧杯100ml（x2）、锥形瓶300ml（x2）
1.薄膜浸泡
选择可用的醋酸纤维薄膜（2cmx8cm）两条，浸于缓冲液中30min以上；
2.电泳仪准备
连接号电泳仪的线路，检查电路是否可用，检查完毕后往电泳槽中导入电解液，即巴比妥—巴比妥钠缓冲液；
3.点样
（1）将浸泡30min以上的醋酸纤维薄膜弄镊子轻轻取出，将薄膜一面平放在干净滤纸上，几秒后，把薄膜翻过来，把另一面平放在滤纸上，吸
去多余的缓冲液，吸完后把薄膜平放于干净的玻璃上，准备点样；
（2）取几滴人血清样品于载玻片上，根据薄膜大小裁剪盖玻片大小，然后用盖玻片轻轻蘸取血清样品，然后轻轻与薄一端1.5cm处接触，待
薄膜上有一条清晰的血清痕迹即可点样结束；
4.电泳
（1）用镊子夹住薄膜两端，并把薄膜拉直，轻轻放到电极桥上，点样端为阴极，并用镊子压薄膜与电极桥接触的两端，使其接触紧密；
（2）平衡10min后打开电源，调至90V，预电泳10min，随后再把电压调至110V，电泳50min—1h；
5.染色
电泳完毕后，将薄膜浸于染色液中9min—10min
6.漂洗
（1）配制漂洗液：45ml95%乙醇+5ml冰乙酸+50ml蒸馏水；
（2）把染色完后的薄膜弄镊子取出，用漂洗液漂洗至背景为灰蓝色（大概3—4次），漂洗结束后把薄膜贴于干净的玻璃上，用吹风机吹干。
7.透明和取带
（1）配制透明液：以无水乙醇：冰乙酸=7:3的比例配20ml；
（2）薄膜用吹风机吹干后，浸入透明液中，值背景为透明为止，大概10min 左右，取出薄膜并贴于干净玻璃上，用吹风机吹干后轻轻从薄膜上揭
下蛋白质带。
五．实验结果记录与处理
1.薄膜浸泡必须30min以上，否则会影响电泳效果，取出薄膜吸取过多的缓冲液时，要注意不能长久放置于滤纸上，这样会使渗透于薄膜内的缓冲液被吸出来，使电泳时蛋白质不能完全分开，影响最后结果，而本次实验中，蛋白质区带区分并不明显，可能与此有关。
2.连接电泳仪线路时要注意正负极，用前检查电泳仪是否可用，在打开电源之前一定要把电压旋钮调至零，否则一打开电源，瞬间电压过高会烧坏仪器。
3.在往电解槽中加入电极液时要注意电极液高度不能超过红色划线，且电极槽液面要保持一致，同时要漫过电桥，否则无法形成回路，不能进行电泳。
4.点样时要注意只需轻轻的点一下即可，有一条清晰的血清痕迹即可，且要注意不要距端口太近，而如果重复点样，重复点样会导致电泳结果不清晰，条带混杂，本次实验部分条带出现这种情况，可能是这个原因。
5.在把薄膜放到电桥上时，要注意点样区不能接触到电桥上的滤纸，且点样区放在阴极端，还有，薄膜必须要拉直，中间部分不能与电解槽接触。
6.配制漂洗液、透明液利用冰乙酸时要注意不能接触到手、皮肤或衣物，因为冰乙酸有强烈的腐蚀性，同时也要注意不可闻其气味，因为冰乙酸气味及其浓烈，对鼻黏膜有损害；染色液用完要注意回收。
7.漂洗时要注意时间产度，背景色变为灰蓝色即可，过度漂洗会使蛋白质条带也被洗掉，影响最后实验的结果。
8.进行透明时也要注意时间长度，时间过长也会引起蛋白质条带被清洗，但是过短也会使条带无法被撕下。
9.撕条带必须在完全干燥后，判断是否干燥的方法为用手触摸一下薄膜，要是感觉不粘手，则说明可以揭下，否则不能揭；在干燥时要注意也不能过度，过度则不易揭下，此时可以用蒸馏水润湿一下再揭下。
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白 【实验目的】 掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白的原理和方法。 【实验原理】 蛋白质是两性电解质。在pH值小于其等电点的溶液中，蛋白质为正离子，在电场中向阴极移动；在pH值大于其等电点的溶液中，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动。血清中含有数种蛋白质，它们所具有的可解离基团不同，在同一pH的溶液中，所带净电荷不同，故可利用电泳法将它们分离。 血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等，各种蛋白质由于氨基酸祖坟、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同，在电场中迁移速度不同。由表可知，血清中5种蛋白质的等电点大部分低于pH值7.0，所以在pH8.6的缓冲液中，它们都电离成负离子，在电场中向阳极移动。 表1 人血清中各种蛋白质的等电点及相对分子质量 蛋白质名称等电点相对分子质量 白蛋白 4.88 69000 α1-球蛋白 5.06 200000 α2-球蛋白 5.06 300000 β-球蛋白 5.12 90000~150000 γ-球蛋白 6.85~7.50 156000~300000 在一定范围内，蛋白质的含量与结合的染料量成正比，故可将蛋白质区带剪下，分别用0.4mol/L NaOH 溶液浸洗下来，进行比色，测定其相对含量。也可以将染色后的薄膜直接用光密度计扫描，测定其相对含量。 肾病、弥漫性肝损害、肝硬化、原发性肝癌、多发性骨髓瘤、慢性炎症、妊娠等都可以使白蛋白下降。肾病时α1、α2、β球蛋白升高，γ-球蛋白降低。肝硬化时α2、β-球蛋白降低，而α1、γ-球蛋白升高。 【实验器材及试剂】 器材：醋酸纤维薄膜，人血清或牛血清，烧杯，培养皿，镊子，载玻片，盖玻片，电吹风，电泳槽，直流稳压电泳仪，剪刀，手套，滤纸；
醋酸纤维素薄膜电泳指导
醋酸纤维素薄膜电泳指导
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白目的和要求? 目的和要求? 掌握醋酸纤维薄膜电泳的原理及操作方法原理? 原理? 带电质点在电场中向着反向电极移动的现象称为电泳其移动方向及速度取电泳，电泳决于本身所带电荷的性质和数量、电场强度以及溶液pH 等因素。蛋白质分子在溶液中的电泳是因其分子具有一些游离的可解离基团如-COOH、-NH2、-OH 等，因而在某种pH 值溶液中蛋白质分子带有一定的电荷。混合蛋白样品中由于各蛋白质的等电点不同，在同一pH 溶液中所带的电荷性质及电荷数目不同，因此在电场中各种蛋白质泳动的方向和速度也不同，从而使蛋白质混合样品得以分离。血清中含有白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白等，其氨基酸组分、立体构象、相对分子质量、等电点及形状等均有所不同。由下表可见，血清中 5 种蛋白质的等电点大多低于pH7.0，pH8.6 的缓冲液中都电离成负离子(羧基解在离)，故在电场中均向阳极移动。蛋白质种类清/白蛋白α1-球蛋白α2-球蛋白β-球蛋白γ-球蛋白等电点(pI) 4.88 5.06 5.06 5.12 6.85~7.50 相对分子量(Mr) 69 000 200 000 300 000 90 000~150 000 156 000~300 000 在一定范围内，蛋白质的含量与结合的染料量成正比，故可将各蛋白质区带剪下，分别用0.4 mol/L NaOH 溶液浸洗下来，通过比色法或将染色后的薄膜直接用光密度计扫描，以测定特定电泳区带的蛋白质相对含量。本实验采用的醋酸纤维薄膜电泳法是以醋酸纤维薄膜为支持物。醋酸纤维素是将纤维素的羟基乙酰化后形成的纤维醋酸酯，将其溶于有机溶剂(如丙酮、氯仿、乙酸乙酯等)后于聚乙烯材料上涂
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量 实验报告
生物化学实验报告 姓名： 学号: 专业年级: 组别: 生物化学与分子生物学实验教学中心 实验名称血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量 实验日期实验地点 合作者指导老师 评分教师签名批改日期 一、实验目得 1、１、学习醋酸纤维薄膜电泳得基本原理与操作方法； 1、2、了解电泳技术得一般原理； １、3、掌握电泳分离血清蛋白质及其定性定量得方法。 二、实验原理 2、1、血清中各种蛋白质得等电点不同，一般都低于pＨ７、4。它们在pH8、6得缓冲液中均解离带负电荷，在电场中向正极移动.由于血清中各种蛋白质分子大小、形状及所带得电荷量不同，在醋酸纤维素薄膜上电泳得速度也不同。因此可以将它们分离
为清蛋白(Ａlbumin）、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β－球蛋白、γ-球蛋白5条区带. 2、2、血清中不同蛋白质得等电点、分子量及含量 血清蛋白质等电点分子量占总蛋白 得% 清蛋白4、64６9，0０0 57~72 α1－球蛋白5、０6 2００，0０0 2～５ α2—球蛋白 5、06 3０0,000 4～9 β－球蛋白 5、12 ９0，000～１5０，０00 6、5～１２ γ—球蛋白 6、８5～7、３ 1５６,000~950，000 12~2０ 缓冲液ｐH=8、6，ｐI＜pH. 血清蛋白带负电荷,在电场中向正极移动。 预测血清蛋白电泳区带图 血清蛋白依次分为清蛋白，球蛋白得α１、α2、β、γ五个区带 2、3、①膜条经过氨基黑1０B染色后显出清晰色带;②各色带蛋白质含量与染料结 合量基本成正比；③可将各色带剪开，分别溶于碱性溶液中；④用分光光度法计算各种 蛋白质得百分数。
三、材料与方法： 3、1、实验材料： 3、1、1、实验试剂：①样品:健康人血清（新鲜、无溶血);②巴比妥—巴比妥钠缓冲液（pH8、６,离子强度０、０6mol/L）;③氨基黑１0Ｂ染色液;④漂洗液;⑤洗脱液：0、4mol/NaOH溶液。 ３、１、2、实验器材：①Ｖ－１100分光光度计(×1）；②恒温水浴箱(×１）; ③试管(×6)、试管架(×1）；④1000μL加样枪(×1)、加样枪架(×1);⑤醋酸纤维薄膜（2cm*8ｃm,厚度１20μm）；⑥培养皿(×5)；⑦点样器或载玻片(×１）；⑧平头镊子(×2）;⑨剪刀（×1）;⑩电泳槽（×１)；?直流稳压电泳仪（×１) 3、2、实验步骤
醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白
醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白 [目的与原理] 掌握醋酸纤维素薄膜电泳原理及操作技术，利用该电泳技术分析和测定人或鱼血清中各种蛋白质相对百分含量。 醋酸纤维素薄膜电泳（cellulose acetate membrance electrophoresis）以醋酸纤维薄膜为支持物。它是纤维素的醋酸酯，由纤维素的羟基经乙酰化而制成。它溶于丙酮等有机溶液中，即可涂布成均一细密的微孔薄膜，厚度以0.1mm—0.15mm为宜。太厚吸水性差，分离效果不好；太薄则膜片缺少应有的机械强度则易碎。 本实验以醋酸纤维素为支持物，分离各种血清蛋白，血清中含有清蛋白，α—球蛋白、β—球蛋白、γ—球蛋白和各种脂蛋白等。各种蛋白质由于氨基酸组分、立体构象、分子量、等电点及形状不同（表1-2-8），在电场中迁移速度不同，分子量小、等电点低、在相同碱性pH 缓冲系统中，带负电荷多的蛋白质颗粒在电场中迁移速度快 例如，以醋酸纤维素薄膜为支持物，正常人血清在pH8.6的缓冲体系中电泳1h左右，染色后显示5条区带。清蛋白泳动最快，其余依次为α1—，α2—，β—，及γ—球蛋白（如图1-2-7）。这些区带经洗脱后可用分光光度计法定量，也可直接进行光吸收扫描自动绘出区带吸收峰及相对百分比。临床医学常利用它们间相对百分比的改变或异常区带的出现作为临床鉴别诊断的依据。此法由于操作简单、快速、分辨率高及重复性好等优点。目前，以成为临床生化检验的常规操作之一。它不仅可用于分离血清蛋白，还可以分离脂蛋白，血红蛋白及同工酶的分离测定。 图1-2-7正常人血清醋酸纤维素薄膜电泳示意图 1．为清蛋白，2，3，4，5，分别为α1—，α2—，β—，及γ—球蛋白，6为点样原点 [试剂与器材] 试剂： 1、巴比妥—巴比妥钠缓冲液（pH8.6，0.07mol/L，离子强度0.06）：称取1.66g巴比妥（AR）和12.76g巴比妥钠（AR），置于三角烧瓶中，加蒸馏水约600ml，稍加热溶解，冷却后用蒸馏水定容至1000ml。置4℃保存，备用。 2、血清蛋白染色 （1）染色液（0.5%氨基黑10B）：称取0.5g氨基黑10B，加蒸馏水40ml，甲醇（AR）50ml，冰乙酸（AR）10ml混匀溶解后置具塞试剂瓶中贮存。 （2）漂洗液：取95%乙醇（AR）45ml，冰乙酸（AR）5ml和蒸馏水50 ml混匀置具塞试剂瓶贮存。 （3）透明液：临用前配制。
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳实验报告
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳实验报告 实验名称血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量 实验日期实验地点xx实验室 合作者xxx 指导老师xxx 评分教师签名批改日期 一、实验目的 1.1.学习醋酸纤维薄膜电泳的基本原理和操作方法； 1.2.了解电泳技术的一般原理； 1.3.掌握电泳分离血清蛋白质及其定性定量的方法。 二、实验原理 2.1.血清中各种蛋白质的等电点不同，一般都低于pH7.4。它们在pH8.6的缓冲液中均解离带负电荷，在电场中向正极移动。由于血清中各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同，在醋酸纤维素薄膜上电泳的速度也不同。 血清蛋白质等电点分子量占总蛋白的％ 清蛋白 4.64 69,000 57～72 α1－球蛋白 5.06 200,000 2～5 α2－球蛋白 5.06 300,000 4～9 β－球蛋白 5.12 90,000～150,000 6.5～12 γ－球蛋白 6.85～7.3 156,000～950,000 12～20 缓冲液pH=8.6，pI＜pH。
血清蛋白带负电荷，在电场中向正极移动。 预测血清蛋白电泳区带图 血清蛋白依次分为清蛋白，球蛋白的α1、α2、β、γ五个区带 2.3.①膜条经过氨基黑10B染色后显出清晰色带；②各色带蛋白质含量与染料结合量基本成正比；③可将各色带剪开，分别溶于碱性溶液中；④用分光光度法计算各种蛋白质的百分数。 三、材料与方法： 3.1.实验材料： 3.1.1.实验试剂：①样品：健康人血清（新鲜、无溶血）；②巴比妥-巴比妥钠缓冲液（pH8.6，离子强度0.06mol/L）；③氨基黑10B染色液；④漂洗液；⑤洗脱液：0.4mol/NaOH溶液。 3.1.2.实验器材：①V-1100分光光度计（×1）；②恒温水浴箱（×1）；③试管（×6）、试管架（×1）；④1000μL加样枪（×1）、加样枪架（×1）；⑤醋酸纤维薄膜（2cm*8cm，厚度120μm）；⑥培养皿（×5）；⑦点样器或载玻片（×1）；⑧平头镊子（×2）；⑨剪刀（×1）；⑩电泳槽（×1）；?直流稳压电泳仪（×1） 3.2.实验步骤 1．准备与点样：①取2×8cm的膜条；②亚光面距一端1.5cm处取一点样线；③充分浸透在巴比妥缓冲液中；④取出膜条，用滤纸吸去多余的缓冲液；⑤点样器下端粘上薄层血清；⑥垂直点样。 点样示意图：
实验三-血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
实验三血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 醋酸纤维素薄膜电泳分析技术是目前临床常规测定中应用最广的方法，具有微量、快速、简便、吸附作用和电渗作用小、分离区带清晰、灵敏度及分辨率高等特点。醋酸纤维素薄膜还可进行透明化处理，便于照相和扫描计算结果。广泛应用于血清蛋白、血红蛋白、糖蛋白、脂蛋白、结合球蛋白、同工酶的分离和测定。 【目的】 1.掌握电泳法分离蛋白质的原理、操作方法。 2.了解电泳法分离蛋白质的临床意义。 【原理】 带电粒子在电场中向与其电性相反的电极泳动的现象称为电泳。血清中各种蛋白质的等电点大多在pH4.0～7.3之间，在pH8.6的缓冲液中均带负电荷，在电场中都向正极移动。由于血清中各种蛋白质的等电点不同，因此在同一pH环境中所带负电荷多少不同，又由于其分子大小不同，所以在电场中泳动速度也不同。分子小而带电荷多者，泳动速度较快；反之，则泳动速度较慢。因此通过电泳可将血清蛋白质分为5条区带，从正极端依次分为清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β-球蛋白和γ球蛋白等，经染色可计算出各蛋白质含量的百分数。 【器材】 醋酸纤维素薄膜（2cm×8cm）、培养皿、滤纸、无齿镊、剪子、加样器（可用盖玻片或或微量加样器）、直尺、铅笔、玻璃板（8cm×12cm）、试管、试管架、吸管、电泳仪、电泳槽、分光光度计或吸光度扫描计。 【试剂】 1. 巴比妥缓冲液(pH8.6，0.07mol/L，离子强度0.06) 称取巴比妥钠12.76g、巴比妥1.66g，加500毫升蒸馏水，加热溶解。待冷至室温后，再加蒸馏水至1000毫升。 2. 氨基黑10B染色液 称取氨基黑10B 0.5g加入冰醋酸10ml、甲醇50ml,混匀，加蒸馏水至100ml。 3. 漂洗液 甲醇45ml、冰醋酸5ml，混匀后加蒸馏水至100ml。 4. 洗脱液 0.4mol／LNaOH溶液。
实验三_醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白
山东大学实验报告2011年 3月27日 张行润系年级2009级生科4班学号7 同组者于潜 科目生物化学实验题目醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白仪器编号105 一、实验目的 掌握醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白的原理和方法。二、实验原理 蛋白质是两性电解质。在pH值小于其等电点的溶液中，蛋白质为正离子，在电场中向阴极移动；在pH值大于其等电点的溶液中，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动。血清中含有数种蛋白质，它们所具有的可解离基团不同，在同一pH的溶液中，所带净电荷不同，故可利用电泳法将它们分离。 血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等，各种蛋白质由于氨基酸祖坟、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同，在电场中迁移速度不同。由表可知，血清中5种蛋白质的等电点大部分低于pH值7.0，所以在pH8.6的缓冲液中，它们都电离成负离子，在电场中向阳极移动。
在一定范围内，蛋白质的含量与结合的燃染料量成正比，故可将蛋白质区带剪下，分别用0.4mol/L NaOH溶液浸洗下来，进行比色，测定其相对含量。也可以将染色后的薄膜直接用光密度计扫描，测定其相对含量。 肾病、弥漫性肝损害、肝硬化、原发性肝癌、多发性骨髓瘤、慢性炎症、妊娠等都可以使白蛋白下降。肾病时α1、α2、β球蛋白升高，γ-球蛋白降低。肝硬化时α2、β-球蛋白降低，而α1、γ-球蛋白升高。 三、实验器材 1、醋酸纤维薄膜（2cm*8cm，厚度120μm） 2、人血清； 3、烧杯及培养皿数只； 4、点样器； 5、竹镊子； 6、玻璃棒； 7、电吹风； 8、试管六只； 9、恒温水浴锅； 10、电泳槽； 11、直流稳压电泳仪； 12、剪刀 四、实验试剂 1.电极缓冲液 2.染色液（可重复使用，使用后回收）
实验三 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳要点
实验三血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 一、目的： 1、掌握醋酸纤维薄膜电泳的基本原理和操作方法 2、学会常用电泳的使用方法 3、了解用醋酸纤维薄膜作支持物的优点及使用范围 二、原理： 由于各种血清蛋白质的等电点不同，因此在pH8.6的缓冲液中，各种血清蛋白质所带电荷量不同，同时由于它们的分子量也不同，造成电泳迁移率不同，所以在醋酸纤维薄膜上，电泳后，可将各种血清蛋白质分离开。 三、器材： 醋酸纤维薄膜（2×8cm）、电泳仪、点样器（盖玻片）、培养皿、粗滤纸、玻璃板（载玻片）、镊子等。 四、试剂： 巴比妥缓冲液（pH8.6，离子强度0.07。巴比妥钠12.7g、巴比妥1.66g于蒸馏水中加热溶解后再加水至1000ml） 氨基黑染色液（氯基黑10B0.5g、甲醇50ml、冰醋酸10ml、蒸馏水10ml） 漂洗液（95％乙醇45ml、冰醋酸5ml、蒸馏水50ml） 血清 五、操作： 1、识别标记：将薄膜切成2.5×8cm的小片。在薄膜无光泽面(正面)的一端约2cm处用铅笔划一线，以标明点样位置。 2、浸泡：用镊子将薄膜无光泽面向下，漂浮于巴比妥缓冲液面上(缓冲液盛于培养皿中)，使膜条自然浸湿下沉。大约10min。 3、点样：取出薄膜，用滤纸将表面的明水吸干，然后平铺在载玻片上（无光泽面朝上），将盖玻片先在小培养皿中的血清中沾一下，再在距膜条一端2cm处轻轻地水平落下并随即提起，这样即在膜条上点上了细条状的血清样品。 4、电泳：在电泳槽内加入缓冲液，使两个电极槽内的液面等高，将膜条平悬于电泳槽支架的滤纸桥上（先剪裁尺寸合适的滤纸条，取双层滤纸条附着在电泳槽的支架上，使它的一端与支架的前沿对齐，而另一端浸入电极槽的缓冲溶液内。用缓冲溶液将滤纸全部润湿并驱除气泡，使滤纸紧贴在支架上，即为滤纸桥）。点样端靠近负极，盖严电泳室，160V，45min。 5、染色：将膜条取出，放在显色液中显色10min。
醋酸纤维薄膜电泳 实验报告
实验九醋酸纤维薄膜电泳 一、实验目的 学习掌握电泳原理 学习醋酸纤维薄膜电泳的操作方法及染色鉴定 二. 实验原理 带电质点在电场中向带有异相电荷的电极移动，这种现象称为电泳。电泳的基本原理 带电的胶粒或大分子在外加电场中，向带相反电荷的电极作定向移动的现象称为电泳。生物分子都带电荷，其电荷的多少取决于分子性质及其所在介质的pH及其组成。由于混合物中各组分所带电荷性质、电荷数量以及分子量的不同，在同一电场的作用下，各组分泳动的方向和速度也各异。因此，在一定时间内各组分移动的距离不同，从而达到分离鉴定各组分的目的。 在电场中，推动带电质点运动的力（F）等于质点所带净电荷量（Q）与电场强度（X）的乘积。F＝QX 质点的前移同样要受到阻力（ f ）的影响，对于一个球形质点，服从Stoke定律，即：f ＝6πr ην（r为质点半径，η为介质粘滞系数，ν为质点移动速度） 当质点在电场中作稳定运动时：F＝f 即：QX＝6πrην 在具体实验中，移动速度V为单位时间t（单位为s）内移动的距离d（单位为cm），即V＝d/t。电场强度X为单位距离L（单位为cm）内电势差E （单位为伏特），即 X＝E/L。将这两个公式代入上述公式，得到 U=v/X=dL/Et d=u*Et/L 由此可以得到两种物质移动距离的差为 △d=(d A-d B)=(u A-u B)Et/L 从这个公式可以看出物质能否进行分离决定于二者的迁移率。 影响因素 1. 待分离大分子的性质：所带的电荷、分子大小和形状，分子带的电荷量越大、直径越小、形状越接近球形，则其电泳迁移速度越快 2. 缓冲液pH和离子强度：pH值距离其等电点愈远，其所带净电荷量就越大，电泳的速度也就越大；但是pH过高或过低引起蛋白变性，缓冲液通常要保持一定的离子强度；强度过低，则缓冲能力差，不易维持PH恒定，离子强度过高，在待分离分子周围形成较强的带相反电荷的离子扩散层（即离子氛），降低了蛋白质的带电量，使电泳速度减
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验 一．实验原理 1、电泳是指带电质点在电场中向本身所带电荷相反的电极移动的现象。在一定pH条件下，不同的质点由于具有不同的等电点而带不同性质的电荷，因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同，即它们的电泳迁移率不同，因此，可使它们分离。 2、影响电泳迁移率的外界因素：电场强度、溶液的pH值、溶液的离子强度和电渗现象。 3、影响电泳迁移率的内在因素：质点所带净电荷的量、质点的大小和形状。 4、采用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法称为醋酸纤维素薄膜电泳。醋酸纤维素薄膜电泳具有微量、快速、简便、分辨力高，对样品无拖尾和吸附现象等优点。 5、醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯，将它溶于有机溶剂（如：丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。该膜具有均一的泡沫状的结构，厚度约为120 μm，有很强的通透性，对分子移动阻力很小。 6、本实验以醋酸纤维素为电泳支持物，分离各种血清蛋白。血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白和各种脂蛋白等。各种蛋白质由于氨基酸组成、分子量、等电点及形状不同，在电场中的迁移速度不同。以醋酸纤维素薄膜为支持物，正常人血清在pH8.6的缓冲体系中电泳，染色后可显示5条区带。其中清蛋白的泳动速度最快，其余依次为α1-、α2-、β-及γ-球蛋白。 二．实验仪器和试剂 ?器材 醋酸纤维素薄膜（3×8cm），培养皿，载玻片，电泳仪，电泳槽，粗滤纸，镊子 ?材料 新鲜血清（未溶血） ?试剂 1、巴比妥缓冲液（pH 8.6，离子强度0.06）： 巴比妥1.66g, 巴比妥钠12.76g，加水至1000ml。置4℃冰箱保存，备用。（已配置） 2、染色液：氨基黑10B 0.5g, 甲醇50ml, 冰醋酸10ml，蒸馏 水40ml，混匀。 3、漂洗液：含95％乙醇45ml，冰醋酸5ml，蒸馏水50ml，混匀。 4、NaOH溶液：称取NaOH 16g，定容至1000ml。 三．实验过程 一.准备与点样 1.将薄膜剪成3×8cm的小条，在薄膜无光泽面距一端1.5cm处用铅笔轻轻划一条直线，表示点样位置。
实验三,醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质
实验3 醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白质 一、实验目的 学习醋酸纤维薄膜电泳法的原理及操作。 测定人血清中各种蛋白质相对百分含量。 二、基本原理 蛋白质是两性电解质。在pH小于其等电点的溶液中，蛋白质为正离子，在电场中向阴极移动；在pH大于其等电点的溶液中，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动。血清中含有数种蛋白质，分别为白蛋白,α1球蛋白,α2球蛋白,β球蛋白,γ球蛋白,它们所具有的可解离基不同，在同一pH的溶液中，所带净电荷不同，因此在电场中移动速度不同，故可利用电泳法将它们分离。 醋酸纤维(二乙酸纤维素)薄膜具有匀一的泡沫状结构 (厚约120 μm)，渗透性强，对分子移动无阻力，用它作区带电泳的支持物，具有用样量少，分离清晰，无吸附作用，应用范围广和快速简便等优点。目前已广泛用于血清蛋白、脂蛋白、血红蛋白、糖蛋白、酶的分离和免疫电泳等方面。 三、试剂与器材 1．巴比妥—巴比妥钠缓冲液(pH 8.6，0.075 mol／L)： 称取巴比妥钠(A．R)15.4g和巴比妥(A．R．)2.76g，溶于蒸馏水，稀释至1000mL。用酸度计校测后使用。 2．染色液： 氨基黑10B 0.2g、甲醇(A．R)20mL、冰乙酸(A．R.)4mL，加蒸馏水16mL，混匀即可。 3. 漂洗液： 乙醇(A．R)90mL、冰乙酸(A．R)10 mL，加蒸馏水100mL，混匀即可。（现配现用）4．透明液： 冰乙酸(A．R)10mL、无水乙醇30mL（1：3），混匀即得。（现配现用） 5．人血清(新鲜、无溶血现象)。 6．器材： 醋酸纤维薄膜(12×8cm，2×8cm)；厚度120μm；培养皿直径Ф10cm(×8)；点样器(或载玻片)；直尺；铅笔；竹镊子；玻璃棒；烧杯50ml(×2)，200ml (×1)；试管1．5×15cm(×8)；吸管5mL(×1)；水浴锅；电泳槽；直流稳压电泳仪；分光光度计；剪刀。 三、操作步骤 1．搭滤纸桥： 取干净滤纸，折两次使之成为三层滤纸，再折一次，然后附着在电泳槽的支架上，使它一端支架的前沿对齐，而另一端浸入电泳槽的缓冲液中，用缓冲液将滤纸全部湿润驱除气泡，使滤纸紧贴在支架上。 2．点样： 将醋酸纤维薄膜切成8×2cm条状(或根据需要决定薄膜的大小)，在距一端1.5cm处用铅笔轻轻划一直线，然后浸入缓冲液中，完全浸透后（大约30min），用镊子轻轻取出，将薄膜无光泽的一面向上，平放在于净滤纸上，薄膜上再放一张干净滤纸，吸去多余的
醋酸纤维素薄膜电泳法
1.不悔梦归处，只恨太匆匆。 2.有些人错过了，永远无法在回到从前;有些人即使遇到了，永远都无法在一起，这些都是一种刻骨铭心的痛! 3.每一个人都有青春，每一个青春都有一个故事，每个故事都有一个遗憾，每个遗憾都有它的青春美。 4.方茴说：“可能人总有点什么事，是想忘也忘不了的。” 5.方茴说：“那时候我们不说爱，爱是多么遥远、多么沉重的字眼啊。我们只说喜欢，就算喜欢也是偷偷摸摸的。” 6.方茴说：“我觉得之所以说相见不如怀念，是因为相见只能让人在现实面前无奈地哀悼伤痛，而怀念却可以把已经注定的谎言变成童话。” 7.在村头有一截巨大的雷击木，直径十几米，此时主干上唯一的柳条已经在朝霞中掩去了莹光，变得普普通通了。 8.这些孩子都很活泼与好动，即便吃饭时也都不太老实，不少人抱着陶碗从自家出来，凑到了一起。 9.石村周围草木丰茂，猛兽众多，可守着大山，村人的食物相对来说却算不上丰盛，只是一些粗麦饼、野果以及孩子们碗中少量的肉食。 附录ⅣA醋酸纤维素薄膜电泳法 试剂（1)巴比妥缓冲液(pH8.6) 称取巴比妥2.76g、巴比妥钠15.45g，加水溶解使成1000ml。 （2)氨基黑染色液称取氨基黑10B 0.5g，溶于甲醇50ml、冰醋酸10ml及水40ml的混合液中。 （3)漂洗液量取乙醇45ml、冰醋酸5ml及水50ml，混匀。 （4)透明液量取冰醋酸25ml、无水乙醇75ml，混匀。 测定法取醋酸纤维素薄膜，裁成2cm×8cm膜条，将无光泽面向下，浸入巴比妥缓冲液(pH8.6)中,待完全浸透，取出夹于滤纸中，轻轻吸去多余的缓冲液后，将膜条无光泽面向上，置含巴比妥缓冲液(pH8.6)的电泳槽架上，通过滤纸桥浸入巴比妥缓冲液(pH8.6)中。于膜条上距负极端2cm处，条状滴加蛋白含量约5％的供试品溶液2～3μl,在0.4～0.6mA/cm ［总电流量=电流量(mA/cm)×每条膜的宽度（cm）×膜条数］电流条件下电泳；同时取新鲜人血清作对照，电泳时间以白蛋白与丙种球蛋白之间的电泳展开距离约2cm为宜。电泳完毕，将膜条取下浸于氨基黑或丽春红染色液中，2～3分钟后，用漂洗液浸洗数次，直至脱去底色为止。将洗净并完全干燥的膜条浸于透明液中，待全部浸透后，取出平铺于洁净的玻板上，干燥后即成透明薄膜，可供测定纯度和作标本长期保存。将干燥的醋酸纤维素薄膜用色谱扫描仪采用反射（未透明薄膜）或透射（已透明薄膜）方式在记录器上自动绘出各蛋白组分曲线图，以人血清作对照，按峰面积计算各蛋白组分的含量(%)。 附注：采用全自动电泳仪操作时，参考仪器使用说明书进行。 1.“噢，居然有土龙肉，给我一块！” 2.老人们都笑了，自巨石上起身。而那些身材健壮如虎的成年人则是一阵笑骂，数落着自己的孩子，拎着骨棒与阔剑也快步向自家中走去。 3.石村不是很大，男女老少加起来能有三百多人，屋子都是巨石砌成的，简朴而自然。 4.在村头有一截巨大的雷击木，直径十几米，此时主干上唯一的柳条已经在朝霞中掩去了莹光，变得普普通通了。 5.这些孩子都很活泼与好动，即便吃饭时也都不太老实，不少人抱着陶碗从自家出来，凑到了一起。 6.石村周围草木丰茂，猛兽众多，可守着大山，村人的食物相对来说却算不上丰盛，只是一些粗麦饼、野果以及孩子们碗中少量的肉食。
实验十血清醋酸纤维薄膜电泳实验报告
实验十：血清醋酸纤维薄膜电泳 【实验名称】：血清醋酸纤维薄膜电泳 室温：25° （一）实验目的： 1.学习醋酸纤维薄膜电泳原理。 2.掌握血清醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质的技术。 3.熟悉血清蛋白组分定量方法，并确定血清中蛋白与球蛋白的比值。（二）实验原理： 血清绝大多数蛋白质的等电点在pH5.0～7.0。在pH8.6的巴比妥缓冲液中，血清蛋白全部带负电荷，在直流电场中向正电极移动，移动的速度与带电蛋白质颗 粒所带电荷成正比，与蛋白质颗粒的大小成反比。如果样品点在醋酸纤维薄膜的同 一条线上，电泳相同的时间，不同的蛋白质颗粒移动的距离不同，通过染色，薄膜 条上的血清的蛋白质被分离成不同的条带。将此薄膜条透明，可以进行扫描，或将 色带剪下，将颜色洗脱，进行比色，都能获得各色带所含蛋白质占血清总蛋白的百 分比，并可计算血清中清蛋白／球蛋白比值，正常值为1.5～2.5。 （三）实验材料与仪器： 1．实验仪器材料：1、醋酸纤维薄膜（2cm*8cm，厚度120μm）2、人血清；3、烧杯及培养皿数只；4、x光片；5、镊子；6、试管六只；7、电泳槽；8、 直流稳压电泳仪；9、7220型分光光度计；10、剪刀 2．实验试剂：1、巴比妥-巴比妥钠缓冲液：取两个大烧杯，分别称取巴比妥钠和巴比妥溶解于500ml蒸馏水中；2、染色液，可反复使用；3、漂洗液：取 乙醇45ml，冰醋酸10ml，混匀；4、浸出液：0.4mol/L NaOH溶液； （四）实验步骤： 1、准备和点样 取一条醋酸纤维薄膜，侵入缓冲液中，完全侵泡后，用镊子轻轻取出，将薄膜 无光泽的一面向上，平放在干净滤纸上，再放一张干净滤纸吸取多余的缓冲液。 用X光片蘸取少量血清，然后轻轻于距离薄膜端1.5cm处接触，样品即成一条 线突于纤维膜上。待血清透入膜内，将薄膜放在电泳槽上。 2、电泳 接通电源，设定电泳电压为100V，通电50min. 3、染色漂洗 电泳完毕后，将薄膜侵泡在染色液中5min～10min.取出，用漂洗液漂至背景 无色。 4、定量 取出六只试管，将漂净的薄膜用滤纸吸干，剪下薄膜上各条蛋白质色带，另取 一条与各区带相近似宽的无蛋白质附着的空白薄膜，分别侵泡于4.0ml 0.4mol/L NaOH 溶液中，然后用7200型分光光度计在650nm处比色，以空白条薄膜洗 出液为空白调零，测定各管的吸光度。 (五) 实验数据记录：
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白实验报告-推荐下载
前言 血清蛋白： 血清蛋白是血液中脂肪酸的携带者。当身体需要能量或者需要 建造材料时，脂肪细胞就把脂肪酸释放到血液中 ，脂肪酸被血清蛋 白获取，并被运送到需要的部位。 牛血清白蛋白的相对分子质量为10 的4次方这个级别，它不是一定的，是多聚物，有的地方测的70 000，这就是一个数据了。在做PCR 的时候会用到它。 牛血清蛋白是血液的主要成分，分子量68kD 。等电点4.8。含 氮量16%，含糖量0.08%。仅含已糖和已糖胺，含脂量只有0.2%。 白蛋白由581个氨基酸残基组成，其中35个半胱氨酸组成17个二 硫键，在肽链的第34位有一自由巯基。白蛋白可与多种阳离子、阴 离子和其他小分子物质结合。血液中的白蛋白主要起维持渗透压作 用、PH 缓冲作用、载体作用和营养作用。在动物细胞无血清培养中， 添加白蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用。醋酸纤维薄膜电泳： 、管路敷设技术通过管线不仅可以解决吊顶层配置不规范高中资料试卷问题，而且可保障各类管路习题到位。在管路敷设过程中，要加强看护关于管路高中资料试卷连接管口处理高中资料试卷弯扁度固定盒位置保护层防腐跨接地线弯曲半径标高等，要求技术交底。管线敷设技术包含线槽、管架等多项方式，为解决高中语文电气课件中管壁薄、接口不严等问题，合理利用管线敷设技术。线缆敷设原则：在分线盒处，当不同电压回路交叉时，应采用金属隔板进行隔开处理；同一线槽内，强电回路须同时切断习题电源，线缆敷设完毕，要进行检查和检测处理。、电气课件中调试对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行 高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料试卷相互作用与相互关系，根据生产工艺高中资料试卷要求，对电气设备进行空载与带负荷下高中资料试卷调控试验；对设备进行调整使其在正常工况下与过度工作下都可以正常工作；对于继电保护进行整核对定值，审核与校对图纸，编写复杂设备与装置高中资料试卷调试方案，编写重要设备高中资料试卷试验方案以及系统启动方案；对整套启动过程中高中资料试卷电气设备进行调试工作并且进行过关运行高中资料试卷技术指导。对于调试过程中高中资料试卷技术问题，作为调试人员，需要在事前掌握图纸资料、设备制造厂家出具高中资料试卷试验报告与相关技术资料，并且了解现场设备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。 、电气设备调试高中资料试卷技术电力保护装置调试技术，电力保护高中资料试卷配置技术是指机组在进行继电保护高中资料试卷总体配置时，需要在最大限度内来确保机组高中资料试卷安全，并且尽可能地缩小故障高中资料试卷破坏范围，或者对某些异常高中资料试卷工况进行自动处理，尤其要避免错误高中资料试卷保护装置动作，并且拒绝动作，来避免不必要高中资料试卷突然停机。因此，电力高中资料试卷保护装置调试技术，要求电力保护装置做到准确灵活。对于差动保护装置高中资料试卷调试技术是指发电机一变压器组在发生内部故障时，需要进行外部电源高中资料试卷切除从而采用高中资料试卷主要保护装置。
实验十：血清醋酸纤维薄膜电泳 实验报告
实验十：血清醋酸纤维薄膜电泳【实验名称】：血清醋酸纤维薄膜电泳 09救援一班第3大组李岚宇2009222336 室温：25° （一）实验目的： 1.学习醋酸纤维薄膜电泳原理。 2.掌握血清醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质的技术。 3.熟悉血清蛋白组分定量方法，并确定血清中蛋白与球蛋白的比值。（二）实验原理： 血清绝大多数蛋白质的等电点在pH5.0～7.0。在pH8.6的巴比妥缓冲液中，血清蛋白全部带负电荷，在直流电场中向正电极移动，移动的速度与带电蛋白质颗 粒所带电荷成正比，与蛋白质颗粒的大小成反比。如果样品点在醋酸纤维薄膜的同 一条线上，电泳相同的时间，不同的蛋白质颗粒移动的距离不同，通过染色，薄膜 条上的血清的蛋白质被分离成不同的条带。将此薄膜条透明，可以进行扫描，或将 色带剪下，将颜色洗脱，进行比色，都能获得各色带所含蛋白质占血清总蛋白的百 分比，并可计算血清中清蛋白／球蛋白比值，正常值为1.5～2.5。 （三）实验材料与仪器： 1．实验仪器材料：1、醋酸纤维薄膜（2cm*8cm，厚度120μm）2、人血清；3、烧杯及培养皿数只；4、x光片；5、镊子；6、试管六只；7、电泳槽；8、 直流稳压电泳仪；9、7220型分光光度计；10、剪刀 2．实验试剂：1、巴比妥-巴比妥钠缓冲液：取两个大烧杯，分别称取巴比妥钠和巴比妥溶解于500ml蒸馏水中；2、染色液，可反复使用；3、漂洗液：取 乙醇45ml，冰醋酸10ml，混匀；4、浸出液：0.4mol/L NaOH溶液；（四）实验步骤： 1、准备和点样 取一条醋酸纤维薄膜，侵入缓冲液中，完全侵泡后，用镊子轻轻取出，将薄膜 无光泽的一面向上，平放在干净滤纸上，再放一张干净滤纸吸取多余的缓冲液。 用X光片蘸取少量血清，然后轻轻于距离薄膜端1.5cm处接触，样品即成一条 线突于纤维膜上。待血清透入膜内，将薄膜放在电泳槽上。 2、电泳 接通电源，设定电泳电压为100V，通电50min. 3、染色漂洗 电泳完毕后，将薄膜侵泡在染色液中5min～10min.取出，用漂洗液漂至背景 无色。 4、定量 取出六只试管，将漂净的薄膜用滤纸吸干，剪下薄膜上各条蛋白质色带，另取 一条与各区带相近似宽的无蛋白质附着的空白薄膜，分别侵泡于4.0ml 0.4mol/L NaOH 溶液中，然后用7200型分光光度计在650nm处比色，以空白条薄膜洗 出液为空白调零，测定各管的吸光度。
醋酸纤维素薄膜电泳
醋酸纤维素薄膜电泳 原理： 醋酸纤维素薄膜电泳（cellulose acetate membrance electrophoresis）以醋酸纤维薄膜为支持物。它是纤维素的醋酸酯，由纤维素的羟基经乙酰化而制成。它溶于丙酮等有机溶液中，即可涂布成均一细密的微孔薄膜，厚度以0.1mm—0.15mm 为宜。太厚吸水性差，分离效果不好；太薄则膜片缺少应有的机械强度则易碎。 应用： 醋酸纤维素薄膜电泳操作简单、快速、廉价。已经广泛用于血清蛋白，血红蛋白，球蛋白，脂蛋白，糖蛋白，甲胎蛋白，类固醇及同工酶等的分离分析中，尽管它的分辨力比聚丙酰胺凝胶电泳低，但它具有简单，快速等优点。 特点： 1.（1）醋酸纤维素薄膜对蛋白质样品吸附极少，无“拖尾”现象，染色后背景能完全脱色，各种蛋白质染色带分离清晰，因而提高了测定的精确性。 （2）快速省时。由于醋酸纤维素薄膜亲水性较滤纸小，薄膜中所容纳的缓冲液也较少，电渗作用
小，电泳时大部分电流是由样品传导的，所以分离速度快，电泳时间短，一般电泳45—60min即可，加上染色，脱色，整个电泳完成仅需90min左右。 （3）灵敏度高，样品用量少。血清蛋白仅需2μl血清，甚至加样体积少至0.1μl，仅含5μg 蛋白样品也可得到清晰的分离带。临床医学检验利用这一点，检测在病理情况下微量异常蛋白的改变。 （4）应用面广。某些蛋白在纸上电泳不易分离，如胎儿甲种球蛋白，溶菌酶，胰岛素，组蛋白等用醋酸纤维薄膜电泳能较好地分离。 （5）醋酸纤维素薄膜电泳染色后，经冰乙酸，乙醇混合液或其它溶液浸泡后可制成透明的干板，有利于扫描定量及长期保存。 2、醋酸纤维素薄膜电泳与聚丙烯酰胺凝胶电泳相比，操作简单，但分离效果不太好。如血清蛋白在醋酸纤维素薄膜电泳中，只能分离出5—6条区带，而聚丙烯酰胺凝胶电泳可分离出数10条区带。 补充： 根据样品理化性质，从提高电泳速度和分辨力出发选择缓冲液的种类，pH和离子强度。选择好的缓冲液最好是挥发性强，对显色或紫外光等观察区带没有影响，若样品含盐量较高时，宜采用含盐缓
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白实验报告
醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白实验报告 前言 血清蛋白: 血清蛋白是血液中脂肪酸的载体当身体需要能量或建筑材料时，脂肪细胞将脂肪酸释放到血液中，脂肪酸被血清蛋白捕获并运送到所需的位置 牛血清白蛋白的相对分子质量是10的四次方，这是不确定的，但是是一种聚合物，并且在一些地方测量到70，000，这是一个数据。它将用于聚合酶链反应 牛血清蛋白是血液的主要成分，分子量为68kD。等电点4.8氮含量16%，糖含量0.08%只含有己糖和己糖胺，脂肪含量仅为0.2%白蛋白由581个氨基酸残基组成，其中35个半胱氨酸残基形成17个二硫键，在肽链的第34位有一个游离巯基白蛋白可以与各种阳离子、阴离子和其他小分子物质结合血液中的白蛋白主要起维持渗透压、缓冲液、载体和营养的作用。在动物细胞的无血清培养中，白蛋白的加入可以起到生理和机械的保护作用和载体作用。 醋酸纤维素薄膜电泳: 醋酸纤维素薄膜电泳以醋酸纤维素薄膜为载体它是纤维素的乙酸酯，由纤维素的羟基乙酰化而成。它溶解在有机溶液如丙酮中，并可被涂覆成厚度为0.1毫米-0.15毫米的均匀微孔膜太稠，吸水性差，分离效果差；如果它太薄，如果它缺乏应有的机械强度，膜就会变脆。
醋酸纤维素薄膜电泳操作简单、快速、廉价。它已广泛应用于血清蛋白、血红蛋白、球蛋白、脂蛋白、糖白蛋白、甲胎蛋白、类固醇激素和同工酶等的分离和分析。虽然其分辨率低于聚丙烯酰胺凝胶电泳，但具有简单、快速的优点。功能: 1。(1)醋酸纤维素膜对蛋白质样品的吸附很少，没有“拖尾”现象。染色后，背景可以完全脱色，各种蛋白染色带可以清晰分离，提高了测定的准确性。 (2)快速节省时间醋酸纤维素膜的亲水性比滤纸差，膜中含有的缓冲溶液少，电渗少，电泳时大部分电流由样品传导，分离速度快，电泳时间短。一般来说，电泳时间只有45-60分钟。染色和脱色后，整个电泳过程只需约90分钟。 (3)灵敏度高，样品消耗少。血清蛋白仅需要2μl血清，即使样品体积小至0.1μl，对于仅含5μg蛋白的样品也可获得清晰的分离带。临床医学检查用它来检测病理条件下微量异常蛋白的变化。(4)应用广泛有些蛋白质不容易用纸电泳分离，如胎儿α球蛋白、溶菌酶、胰岛素、组蛋白等。醋酸纤维素膜电泳可以更好地分离。(5)电泳染色后，醋酸纤维素膜可浸泡在冰醋酸、乙醇混合溶液或其他溶液中，形成透明的干板，有利于扫描定量和长期保存。2.与聚丙烯酰胺凝胶电泳相比，醋酸纤维素薄膜电泳操作简单，但分离效果不是很好。例如，在醋酸纤维素薄膜电泳中，只有5-6条带能与白蛋白分离，而在聚丙烯酰胺凝胶电泳中，只有10条带能与白蛋白分离。 1。实验目的
实验一 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
实验一血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳 【实验目的】 （1）了解电泳的一般原理，掌握醋酸纤维素薄膜电泳操作技术。 （2）测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。 【实验原理】 带电荷的胶体粒子在电场中移动的现象称电泳。醋酸纤维素薄膜电泳法是以醋酸纤维素薄膜作为支持物。 血清中含多种蛋白质，当在pH这8.6时，这些蛋白质均带负电，它们在电场中向阳极移动，由于各种蛋白质所带负电荷多少及颗粒大小不同，所以在同一电场，同一pH环境中涌动速度不同。 本实验以醋酸纤维素为电泳支持物，分离各种血清蛋白。血清中含有清蛋白，α~球蛋白，β~球蛋白，γ~球蛋白和各种脂蛋白等。各种蛋白质由于氨基酸组分，立体构象，分子量，等电点及形状不同，在电场中迁移速度不同。分子量小，等电点低，相同碱性pH。 表1 人血清中12种蛋白质的等电点及分子量 缓冲体系中，带负电喝多的蛋白质颗粒在电场中移动速度快。例如，以醋酸纤维素薄膜为支持物，正常人血清中pH=8.6的缓冲体系中电泳1h左右，染色后可显示5条区带。清
蛋白泳动最快，其余依次为α1~，α2~,β~及γ~球蛋白。这些区带经洗脱后可用分光光度法 定量，也可直接进行光吸收扫描自动绘出区带吸收峰及相对百分比。临床医学常利用它们异 常区带的出现作为临床鉴别诊断的依据。此法由于操作简单，快速。 图1 正常人血清醋酸纤维素薄膜电泳示意图 为清蛋白，2，3，4，5分别为α1,α2,β~及γ~球蛋白，6为点样原点 清蛋白球蛋白附注 α1 α2 βγ 妊娠↓↓↑↓中毒时更明显，产后2-3个月正常婴儿↑↑↑6个月时γ正常，其他成分6-10岁时正常糖尿病↓ 多发性骨髓瘤↑↑↑↑异常球蛋白，可在β和γ区带间出现M区带肝硬变↓↓↑↑↑↑在晚期失代偿时 阻塞性黄疸↑ 无丙种球蛋白血症↓↓ 全身性红斑狼疮↓↑↑↑ 类风湿性关节炎↓↑ 风湿热↑↑ 淀粉样变性↓↓↑↑ 肾病↓↑↑↑↓
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量 实验报告
生物化学实验报告 姓名: 学号: 专业年级: 组别: 生物化学与分子生物学实验教学中心 实验名称血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量 实验日期实验地点 合作者指导老师 评分教师签名批改日期 一、实验目的 1、1、学习醋酸纤维薄膜电泳的基本原理与操作方法; 1、2、了解电泳技术的一般原理; 1、3、掌握电泳分离血清蛋白质及其定性定量的方法。 二、实验原理 2、1、血清中各种蛋白质的等电点不同,一般都低于pH7、4。它们在pH8、6的缓冲液中均解离带负电荷,在电场中向正极移动。由于血清中各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同,在醋酸纤维素薄膜上电泳的速度也不同。因此可以将它们分离为清
蛋白(Albumin)、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白5条区带。 2、2、血清中不同蛋白质的等电点、分子量及含量 血清蛋白质等电点分子量占总蛋白的％ 清蛋白 4、64 69,000 57～72 α1－球蛋白 5、06 200,000 2～5 α2－球蛋白 5、06 300,000 4～9 β－球蛋白 5、12 90,000～150,000 6、5～12 γ－球蛋白 6、85～7、3 156,000～950,000 12～20 缓冲液pH=8、6,pI＜pH。 血清蛋白带负电荷,在电场中向正极移动。 预测血清蛋白电泳区带图 血清蛋白依次分为清蛋白,球蛋白的α1、α2、β、γ五个区带 2、3、①膜条经过氨基黑10B染色后显出清晰色带;②各色带蛋白质含量与染料结合量基本成正比;③可将各色带剪开,分别溶于碱性溶液中;④用分光光度法计算各种蛋白质的百分数。 三、材料与方法: 3、1、实验材料: 3、1、1、实验试剂:①样品:健康人血清(新鲜、无溶血);②巴比妥-巴比妥钠缓冲液(pH8、6,离子强度0、06mol/L);③氨基黑10B染色液;④漂洗液;⑤洗脱液:0、4mol/NaOH溶液。