s胚胎干细胞自我更新的分子机制
解剖科学进展 Progress of Anatomical Sciences 2004,10(4):349～352
胚胎干细胞自我更新的分子机制
李芳菲,王亚平
(重庆医科大学基础医学院,重庆400016)
【摘要】 调节胚胎干细胞(ES)细胞自我更新是一个复杂的分子信号系统,当这个信号系统处于总体平衡时,ES细胞的自我更新才能得以维持。只有明确了这些信号通路的功能才能实现对ES细胞的应用,并发展以干细胞为基础的下游技术。本文从重要的细胞因子L IF、Oct4、Nanog及细胞周期的影响等方面综述了ES细胞自我更新分子机制的研究进展。
【中图分类号】R321 【文献标识码】A 【文章编号】100622947(2004)04-0349-04
The Molecular Mechanisms of the Self2renew al of Embryonic Stem Cells
L I Fang2fei,WAN G Ya2ping
(Basal Medical College,Chongqing University of Medical Sciences,Chongqing400016China)
【Abstract】 Embryonic stem cell(ES cell)self2renewal is regulated by a complex molecular signal system,its fate depends on the balance of the signaling network which is constituted by multiple intracellular signaling path2 ways.Understanding how these signaling pathways functions in ES cell fate determination will enable the future ma2 nipulation of ES cells,which can aid in the development of stem cell2based technologies.This review intends to give
a overview on the molecular mechanisms of the self2renewal of embryonic stem cells with focus on important cy2
tokines:L IF,Oct4,Nanog and cell cycle.
胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES cells)是由早期胚胎内细胞团(ICM)或原始生殖细胞(P GC 细胞)经体外分离、抑制分化培养获得的多能性细胞,具有两个显著的生物学特性,一是在体外可无限增殖,且能维持未分化状态,即能够自我更新;二是可以被诱导分化为多种类型细胞,即分化的多向性。ES的这些特性使其成为研究胚胎早期发育、细胞移植治疗、组织工程等领域的重要工具。而ES细胞广泛应用的前提是明确其自我更新和多向分化的调控机制。近年来,国内外学者在信号转导网络等方面进行了有成效的探讨。本文就ES细胞自我更新的分子机制的研究进展作以综述。
1 L IF及其信号转导系统
1.1 L IF基因及受体
白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor, L IF)是IL26家族中的一种多功能细胞因子。20世纪60年代末,研究者发现了一种能促进髓系白血病
【收稿日期】2004-07-08细胞M1分化并抑制其生长的诱导因子,命名为D2因子。Hilton等1988年从小鼠krebs22腹水瘤细胞的条件培养液中分离到L IF,并证明L IF与D2因子为同一物质;同年Smith、Williams等[1,2]先后发现L IF具有抑制鼠ES细胞分化的作用。人们逐渐意识到L IF在对细胞生长、增殖分化、胚胎发育等方面的广泛生物学功能。目前在培养基中添加L IF 已是体外培养ES细胞的常规做法,而培养系统中的L IF可来自重组蛋白,也可由饲养层细胞分泌[3]。实验证明,在ES细胞体外培养体系中撤除L IF 将导致细胞分化[4]。L IF通过激活由细胞表面受体开始的信号转导系统作用于ES细胞的自我更新。ES细胞表面的L IF受体(L IFR)是L IF特异性受体亚基L IFRβ和IL26家族通用受体亚基gp130组成的杂二聚体。一个L IF分子结合二分子L IFRβ和一分子gp130,但功能性L IF复合体则是由L IF、L IFRβ、gp130按1∶1∶1的比例组成的[5]。Viswanathan等证明L IF不仅持续支持ES细胞的自我更新,而且L IF对ES细胞的作用存在浓度依赖性,高浓度的L IF(≥500pm)具有较强的支持作
用。推测可能存在着一个配体/受体信号阈(Lig2 and/Receptor Signaling Threshold L IST),功能性复合体的浓度阈决定着ES细胞的命运[6]。
1.2 L IF介导的信号转导系统
L IF2L IFR/gp1302Jak2Stat3是目前已知的维持ES细胞未分化状态的主要信号通路。20世纪90年代早期发现的Jak2Stat通路将细胞表面的受体复合物与细胞核的基因转录直接联系起来。目前已知的Stat家族有7个成员,长度为750～800个氨基酸残基。该家族蛋白的特征是存在SH2(Src homology 2)区域和羧基末端的一个酪氨酸磷酸化位点,能被Jak激酶磷酸化。其中Stat3的磷酸化依赖于L IF 及其他IL26家族细胞因子的诱导,是Jaks的关键底物,与ES细胞自我复制密切相关。Stat3最初以无活性形式存在胞浆中,Jak激酶结合于跨膜的L IF 受体复合物,当L IF与L IF受体复合物结合后,Jak 激酶被接触性激活,同时磷酸化gp130胞浆区域的酪氨酸残基,Stat3上的SH2识别L IF受体的磷酸化酪氨酸,引起Stat3活化,进而,Jak激酶使Stat3羧基端的酪氨酸残基磷酸化,磷酸化的Stat3从受体复合物上脱落,以一个Stat3分子的磷酸化酪氨酸为另一个Stat3分子的停泊位点(docking site),形成二聚体,移位到细胞核,与靶基因的增强子结合,激活转录。研究表明,即使在L IF存在的情况下, Stat3的突变失活也将诱导ES细胞分化;没有L IF 时,仅激活Stat3亦可起到维持ES细胞不分化的作用。因此,Stat3的激活对于L IF介导的ES细胞自我更新是必需的[6,7]。
除Jak2Stat3外,IL26家族成员还激活MAR K/ ER K信号通路。L IF受体被激活后活化SHP22(the SH22containing protein tyrosine phosphatase22),继而激活MAR K(mitogen2activated protein kinase),并最终触动ER K(extracellular2signal2related kinase)向胞核移位,调节转录。ER K的激活将抑制Jak的活性,即削弱ES的自我更新能力[8]。实验证明,抑制ER K虽然不能代替Stats的激活,却能提高Stats的活性。因此在ES细胞中Jak2Stat3与MAR K/ER K 是一种拮抗关系,分别对维持ES细胞的未分化状态起正性和负性调节作用[9]。
最近研究发现,抑制Src家族激酶会引起ES细胞未分化标志表达的下降,但并不影响Jak2Stat3和MAR K/ER K。Src家族可能介导了L IF的第三条信号转导通路[10]。
总之,L IF及其信号转导系统在维持ES细胞自我更新中有着至关重要的作用,Stat3与ER K的总体平衡可能决定ES细胞自我更新的效率。尽管一些研究发现L IF2L IFR/gp1302Jak2Stat3通路对于ES细胞的多向分化是不必要的[11],它仍然为细胞因子信号通路决定细胞的命运提供了有力的证据和模型。
2 Oct4对ES细胞自我更新的作用
L IF并不是维持ES细胞未分化状态的唯一功能因子,许多实验表明,OCT4是另一条有效的分子途径。Oct4属于Pou2V转录因子家族,在全能或多能干细胞中表达。在囊胚阶段,表达在内细胞群(ICM),而滋养外胚层和原始内胚层中Oct基因表达均下调;在随后的胚胎发育过程中只有原始生殖细胞(primordial germ cells P GCs)持续表达Oct4。同样Oct4在ES细胞中也有丰富表达,一旦触动ES 细胞分化,表达立即下调[12]。而敲除Oct4基因的ES细胞将发生类似于内胚层和滋养层的细胞分化。这些证据表明,Oct4对抑制ICM分化,维持未分化状态是必需的。Niwa等观察了ES细胞Oct4表达的调控,结果显示Oct4蛋白的数量可能决定ES细胞的不同命运,Oct4表达水平在50%～150%范围内可维持ES细胞自我更新,表达水平超过这个范围使ES细胞分化为原始内胚层细胞,而表达水平低于这个范围则使ES细胞分化为滋养层细胞[13]。目前对Oct4靶基因的了解还较少,Fgf4是较早被发现的Oct4靶基因,Oct4可能通过调节Fgf4的表达间接地起到维持ES细胞未分化状态的作用。转录因子Sox3和Foxd3等也被证明与Oct4途径有关。
3 N anog:新的转录调控因子
Chambers等[14]和Mitsui等[15](2003)同时报道了一种在囊胚内细胞群、原始生殖细胞以及ES 细胞表达的新转录因子,命名为Nanog。Nanog基因属于同源盒基因。实验证明,在维持ES细胞的自我更新的调控网络中,Nanog是与Stat3和Oct4平行的另一条分子途径[16]。在Nanog基因持续表达的ES细胞培养体系中撤除L IF后,ES细胞在形态学上无明显变化,Oct4表达水平维持正常。Nanog基因缺失的ICM及ES细胞的多方向分化能力下降。Nanog不能激活Stat3,Stat3也不诱导Nanog表达,推测Nanog与Stat3可能有共同的靶序列但传导途径并不交叉。Oct4缺失的ES细胞仍
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然有Nanog表达,但不能起到维持ES细胞不分化的作用,因此Nanog与Oct4在功能上是有关联的[15]。
4 细胞周期对分化的抑制作用
细胞的增殖是通过细胞周期来实现的。ES细胞是如何以自我更新的方式进行增殖,并在增殖过程中抑制分化、维持多向分化的潜能,这一系列问题都离不开细胞周期的调控。体细胞细胞周期有序进行和转换点的顺利通过主要是依赖与细胞周期蛋白依赖激酶(cyclin dependent kinases CD Ks)/细胞周期蛋白(cyclin)有序地激活与失活,并通过细胞周期依赖的底物蛋白RB的磷酸化/去磷酸化和泛素介导的蛋白水解系统来实现的。在体细胞G1期,低磷酸化RB抑制细胞进入S期,使G1期进入暂停阶段,随后再被cyclin/CD Ks复合物依次磷酸化,细胞得以进入S期。目前研究较多的是cyclinD/CD K4、cyclinD/CD K6和cyclinE/CD K2。相反,胚胎干细胞的G1期很短,约1.5h,细胞周期中大部分为S 期。在G1期中未发现低磷酸化RB,即ES细胞有丝分裂后,不经过暂停阶段,RB立即被再磷酸化[9]。有证据说明RB途径并不调节ES细胞周期。肿瘤抑制物p16ink4a通过阻遏cyclinD/CD K4、cy2 clinD/CD K6或cyclinE/CD K2抑制细胞生长,但对ES细胞不起作用,当ES细胞开始分化后才对p16ink4a敏感[17];RB家族基因缺失的T KO细胞与ES细胞有相似的增殖行为,即在G1期没有停滞阶段,缺乏G1期检查点。因此有人提出假说,认为ES细胞的G1/S期转换不依赖RB途径,而ES细胞中表达的RB蛋白能使其在失去维持自我更新的信号刺激后立即开始G1期停滞的细胞周期调节。
细胞周期G1/S的转换是否依赖gp130信号的问题目前仍未解决。尽管撤消L IF引起ES细胞分化而不是细胞周期停止,但由于细胞周期调控在分化早期就已经改变,所以不能排除Stat3能调节ES 细胞周期关键调控因子的表达,促进ES细胞进入S 期的可能。有实验表明Stat3的靶基因c2myc和pim在细胞周期转换中起作用[18]。
磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol232OH kinase PI3K)因可催化PI3位的磷酸化而得名,为85K D的调节亚单位和110K D的催化亚单位组成的异二聚体。Smith A等报道,PI3K可能促进细胞周期进入S期,gp130信号可能通过PI3K作用于G1/S期转换[9],但PI3K在ES细胞的自我更新中究竟起什么样的作用还未得到证实。
5 结语
ES细胞的自我更新是在分裂后产生两个完全相同的子代干细胞,即对称性的自我复制,不会出现增殖极限或衰老,始终保持正常的二倍体核型和带型。调节ES细胞自我更新的是一个复杂的信号网络。目前研究得最多是的L IF2L IFR/gp1302Jak2 Stat3信号通路,ES细胞在适当范围内表达Oct4是另一条有效途径。而过度表达Oct4却会引起ES 细胞分化,与撤除L IF引起的分化情况相似,这提示Oct4与L IF时间存在联系。Nanog与Oct4之间的合作也得到了证实。但有哪些蛋白因子在它们之间相互作用,他们又分别增强了哪些靶基因的转录,目前仍知之甚少。总之,了解ES细胞自我更新的分子机制对掌握和利用ES细胞的生物学特性是至关重要的,只有但调节细胞的信号系统处于总体平衡时,ES细胞的自我更新才能得以维持。进一步研究L IF、Oct4、Nanog等转录因子的分子途径以及这些途径之间的网络关系将有利于理解ES细胞自我更新的机制。
【参考文献】
[1]Smith A G,Heath J K,Donaldson DD,et al.Inhibition of pluripo2
tential embryonic stem cell differentiation by purified polypeptides [J].Nature,988,336(6200):688-690.
[2]Williams RL,Hilton DJ,Pease S,et al.Myeloid leukaemia in2
hibitory factor maintains the developmental potential of embryonic stem cells[J].Nature,1988,336(6200):684-687.
[3]Burt R K,Verda L,K im DA,et al.Embryonic stem cells as an al2
ternate marrow donor source engraftment without graft2versus2 host disease[J].J Exp Med,2004,199:895-904.
[4]Duval D,Malaise M,Reinhardt B,et al.A p38inhibitor allows to
dissociate differentiation and apoptotic processes triggered upon L IF withdrawal in mouse embryonic stem cells[J].Cell Death Dif2 fer,2004,11(3):331-341.
[5]Molyneaux KA,Schaible K,Wylie C,et al.GP130,the shared
receptor for the L IF/IL6cytokine family in the mouse,is not re2 quired for early germ cell differentiation,but is required cell2au2 tonomously in oocytes for ovulation[J].Development,2003, 130:4287-4294.
[6]Viswanathan S,Benatar T,Rose2John S,et al.Ligand/receptor
signaling threshold(L IST)model accounts for gp1302mediated embryonic stem cell self2renewal responses to L IF and HIL26[J].
Stem Cells,2002,20:119-138.
[7]Matsuda T,Nakamura T,Nakao K,et al.STAT3activation is
sufficient to maintain an undifferentiated state of mouse embryonic stem cells[J].EMBO J,1999,18(15):4261-4269.
?
1
5
3
?
2004年第10卷第4期 李芳菲等 胚胎干细胞自我更新的分子机制
[8]Smith ER,Smedbery JL,Rula ME,et al.Regulation of Ras2
MAPK pathway mitogenic activity by restricting nuclear entry of activated MAPK in endoderm differentiation of embryonic carci2 noma and stem cells[J].J Cell Biol,2004,164(5):689-699. [9]Burdon T,Stracey C,Chambers I,et al.Suppression of SHP22
and ER K signalling promotes self2renewal of mouse embryonic stem cells[J].Dev Biol,1999,210(1):30-43.
[10]Anneren C,Cowan CA,Melton DA.The Src family of tyrosine
kinases is important for embryonic stem cell self2renewal[J].J Biol Chem,2004,279(30):31590-31598.
[11]Carpenter M K,Rosler ES,Fisk G J,et al.Properties of four hu2
man embryonic stem cell lines maintained in a feeder2free culture system[J].Dev Dyn,2004,229(2):243-258.
[12]Hay DC,Sutherland L,Clark J,et al.Oct24knockdown induces
similar patterns of endoderm and trophoblast differentiation mark2 ers in human and mouse embryonic stem cells[J].Stem Cells, 2004,22(2):225-235.
[13]Niwa H,Miyazaki J,Smith A G.Quantitative expression of Oct2
3/4defines differentiation,dedifferentiation or self2renewal of ES
cells[J].Nat G enet,2000,24(4):372-376.
[14]Chambers I,Colby D,Robertson M,et al.Functional expression
cloning of Nanog,a pluripotency sustaining factor in embryonic stem cells[J].Cell,2003,113(5):643-655.
[15]Mitsui K,Tokuzawa Y,Itoh H,et al.The homeoprotein Nanog
is required for maintenance of pluripotency in mouse epiblast and ES cells[J].Cell,2003,113(5):631-642.
[16]Hart AH,Hartley L,Ibrahim M,et al.Identification,cloning
and expression analysis of the pluripotency promoting Nanog genes in mouse and human[J].Dev Dyn,2004,230(1):187-198. [17]Savatier P,Lapillonne H,Grunsven LA,et al.Withdrawal of
differentiation inhibitory activity/leukemia inhibitory factor up2 regulates D2type cyclins and cyclin2dependent kinase inhibitors in mouse embryonic stem cells[J].Oncogene,1996,12(2):309-
322.
[18]Shirogane T,Fukada T,Muller J M,et al.Synergistic roles for
Pim21and c2Myc in STAT32mediated cell cycle progression and antiapoptosis[J].Immunity,1999,11(6):709-719.
(上接第348页)
[13]G alli R,Fiocco R,De Filippis L,et al.Emx2regulates the pro2
liferation of stem cells of the adult mammlian central nervous sys2 tem[J].Development,2002,129(7):1633-1644.
[14]Sakakibara S,Nakamura Y,Y oshida T,et al.RNA2binding pro2
tein Musashi family:roles for CNS stem cells and a subpopulation of ependymal cells revealed by targeted disruption and antisense ablation[J].Proc Natl Acad Sci USA,2002,99(23):15194-
15199.
[15]Yung S,Solen G,J urcsak J,et al.Differential modulation of
BMP signaling promotes the elaboration of cerebral cortical GABAergic neurons or oligodendrocytes from a common sonic hedgehog2responsive ventral forebrain progenitor species[J].Proc Natl Acad Sci USA,2002,99(25):16273-16278.
[16]Calza L,Fernandez M,G iuliani A,et al.Thyroid hormone acti2
vates oligodendrocyte precursors and increases a myelin2forming protein and N GF content in the spinal cord during experimental al2 lergic encephalomyelitis[J].Proc Natl Acad Sci USA,2002,99
(5):3258-3263.
[17]K im HM,Qu T,Kriho V,et al.Reelin function in neural stem
cell biology[J].Proc Natl Acad Sci USA,2002,99(6):4020-
4025.
[18]Leavitt BR,Hernit2Grant CS,Macklis JD.Mature astrocytes
transform into transitional radial glia within adult mouse neocortex that supports directed migration of transplanted immature neurons [J].Exp Neurol,1999,157(1):43-57.
[19]Arvidsson A,Collin T,K irik D,et al.Neuronal replacement
from endogenous precursors in the adult brain after stroke[J].
Nat Med,2002,8(9):963-970.
[20]Magavi SS,Leavitt BR,Macklis JD.Induction of neurogenesis in
the neocortex of adult mice[J].Nature,2000,405(6789):951-
955.
[21]Lie DC,Dziewczapolski G,Willhoite AR,et al.The adult sub2
stantia nigra contains progenitor cells with neurogenic potential [J].J Neurosci,2002,22(15):6639-6649.
[22]Wolswijk G.Oligodendrocyte precursor cells in the demyelinated
multiple sclerosis spinal cord[J].Brain,2002,125(Pt2):338-
349.
[23]Qu T,Brannen CL,K im HM,et al.Human neural stem cells
improve cognitive function of aged brain[J].Neuroreport,2001, 12(6):1127-1132.
[24]Monje M,Mizumatsu S,Fike J R,et al.Irradiation induces neu2
ral precursor2cell dysfunction[J].Nat Med,2002,8(9):955-
962.
[25]Kempermann G,G ast D,G age FH.Neuroplasticity in old age:
sustained fivefold induction of hippocampal neurogenesis by long2 term environmental enrichment[J].Ann Neurol,2002,52(2): 135-143.
[26]Yandava BD,Billinghurst LL,Snyder EY.”G lobal”cell replace2
ment is feasible via neural stem cell transplantation:evidence from the dysmyelinated shiverer mouse brain[J].Proc Natl Acad Sci USA,1999,96(11):7029-7034.
[27]Aboody KS,Brown A,Rainov N G,et al.Neural stem cells dis2
play extensive tropism for pathology in adult brain:Evidence from intracranial gliomas[J].Proc Natl Acad Sci USA,2000,97
(23):12846-12851.
[28]Lynch WP,Sharpe AH,Snyder EY.Neural stem cells as en2
graftable packaging lines can mediate gene delivery to microglia: Evidence from studying retroviral env2related neurodegeneration [J].J Virology,1999,73(8):6841-6851.
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工作个人表现自我鉴定五篇
工作个人表现自我鉴定五篇 工作个人表现自我鉴定篇一 本人自xxxx年xx月xx日起进入xx公司从事xx工作，在不知不觉中已经过了x个月的试用期。在这段时间里，我感悟颇多，虽然这并不是我的第一份工作，然而在此期间，我对于工作一贯谦虚谨慎、认真负责的工作态度，从来没有改变过。 在本部门工作中，我一直严格要求自己，认真及时地完成领导布置的每一项任务，并虚心向同事学习，不断改正工作中的不足；对于集团及公司的制度和规定都是认真学习并严格贯彻执行；另外，本人具有很强的团队合作精神，能很好的协调及沟通，配合各部门负责人落实及完成公司各项工作，并热心帮助其他同事，与人相处和谐融洽。 在过去的几个月中，经过不断的学习和自我提高，已经适应了自己的本职工作，然而对于一个初入公司的新人，要全面融入企业的方方面面，可能在一些问题的考虑上还不够全面，然而我相信，经过公司领导及同事的悉心指导和帮助，我一定能在今后的工作中更好的提高自己的业务水平和综合素质，更好的完成本职工作，不断谋求与企业的共同发展！
工作个人表现自我鉴定篇二 时光如梭，转眼间几个月的实习期即将过去，在这几个月的实习期里，在学校、公司、站区领导的关怀下，在各位师傅的精心培育、热情鼓励帮助下，我不断学习、实践，使自己由一个懵懂迷茫的毕业生逐渐成长为一名合格的地铁新员工。 通过这几个月的实习工作，我不光巩固了以往在课堂上所掌握的相关专业知识，也学习到了一些为人处事办事效率课堂上学习不到的新的内容，而且自己的个人能力、社会交往能力也有了较大的提高。 通过这几个月的实习，我学会了很多之前没有接触过的专业性的知识。使我对地铁客运服务这个专业有了更深入的认识和了解，一些的日常工作我也能够试着自己去独立完成。我在思想上由一个涉世未深的毕业生转化为一名地铁分公司的新员工，工作方面和个人能力方面也有了一定的进步。但是也可以看到自身的缺陷和不足，在票务实习中，对面乘客心中不免有些压力，毕竟自己经验太少。 但是站区领导、师傅十分关心我，让我慢慢来，一步一步的，不着急，不要有压力，像对综控各种突发事件办理的过程知识掌握很欠缺，TVM暂停服务后的处理工作掌握的力
我国人类胚胎干细胞指导原则
为保证促进我国人胚胎干细胞研究的健康发展，2003年12月24日科技部和卫生部联合下发了12条《人胚胎干细胞研究伦理指导原则》。明确了人胚胎干细胞的来源定义、获得方式、研究行为规范等，并再次申明中国禁止进行生殖性克隆人的任何研究，禁止买卖人类配子、受精卵、胚胎或胎儿组织。 近年，国际上对人胚胎干细胞研究的争论激烈，我国对此的态度支持治疗性研究，反对生殖性研究。据科技部有关官员介绍，为规范我国这一领域的研究，"十五"以来，科技部和卫生部与我国医学研究、社会伦理、科研管理专家反复研究论证，依据联合国教科文组织有关讨论和其他国家的相关法规，综合制定出这一指导原则，要求各省、区、直辖市、科技厅(委)、卫生厅(局)有关部门在开展生物医学领域人胚胎干细胞的研究活动中遵守国家有关规定，尊重国际公认的生命伦理准则。 我国人胚胎干细胞研究伦理指导原则 第一条为了使我国生物医学领域人胚胎干细胞研究符合生命伦理规范，保证国际公认的生命伦理准则和我国的相关规定得到尊重和遵守，促进人胚胎干细胞研究的健康发展，制定本指导原则。 第二条本指导原则所称的人胚胎干细胞包括人胚胎来源的干细胞、生殖细胞起源的干细胞和通过核移植所获得的干细胞。 第三条凡在中华人民共和国境内从事涉及人胚胎干细胞的研究活动，必须遵守本指导原则。 第四条禁止进行生殖性克隆人的任何研究。 第五条用于研究的人胚胎干细胞只能通过下列方式获得：（一）体外受精时多余的配子或囊胚；（二）自然或自愿选择流产的胎儿细胞；（三）体细胞核移植技术所获得的囊胚和单性分裂囊胚；（四）自愿捐献的生殖细胞。 第六条进行人胚胎干细胞研究，必须遵守以下行为规范：（一）利用体外受精、体细胞核移植、单性复制技术或遗传修饰获得的囊胚，其体外培养期限自受精或核移植开始不得超过１４天。（二）不得将前款中获得的已用于研究的人囊胚植入人或任何其他动物的生殖系统。（三）不得将人的生殖细胞与其他物种的生殖细胞结合。 第七条禁止买卖人类配子、受精卵、胚胎或胎儿组织。 第八条进行人胚胎干细胞研究，必须认真贯彻知情同意与知情选择原则，签署知情同意书，保护受试者的隐私。 前款所指的知情同意和知情选择是指研究人员应当在实验前，用准确、清晰、通俗的语言向受试者如实告知有关实验的预期目的和可能产生的后果和风险，获得他们的同意并签署知情同意书。 第九条从事人胚胎干细胞的研究单位应成立包括生物学、医学、法律或社会学等有关方面的研究和管理人员组成的伦理委员会，其职责是对人胚胎干细胞研究的伦理学及科学性进行综合审查、咨询与监督。
小鼠胚胎干细胞培养
以下培养针对于小鼠的R1胚胎干细胞系，其它胚胎干细胞的培养可以参考。不过人的胚胎干细胞培养不可以采用下面的protocol，需要用专用的protocol和培养基。 一般培养－－维持ES细胞处于未分化状态 ES细胞培养用含有LIF（白血病抑制因子）和Feed细胞的培养基（高糖）来阻止细胞的分化。为细胞提供包被有0.1％明胶的平板作为粘附细胞的基质。建议每2－3天从达到80％－90％融合的平板按1：8的比率传代细胞一次，细胞传代以后，在将细胞接种在0.1％明胶包被的培养皿之前，通过预先将细胞接种在没有经过包被的组织培养板2个小时，使分化细胞粘附，从而将分化和未分化细胞分开。将细胞全程置于37℃，5％CO2，100％湿度条件下培养。如果在Feed细胞，那么就需要采用MMC进行处理，抑制Feed细胞增殖，但仍然能保持其分泌LIF因子的活性。下文中暂不提及Feed细胞。Feed细胞可以来源于STO细胞或原代胚胎成纤维细胞。 培养基 ES: 配制一20×不含DMEM，HS，LIF的溶液（该溶液也能用于EB培养基－－见下文）。分装在50ml 离心管中，（稀释为2×，每管42ml），贮存在-20℃。通过将21ml该溶液，HS和LIF加入450ml DMEM中制备培养基，0.22 μm滤膜过滤。贮存于4℃，时间不要超过2周。 贮存液 DMEM（高糖） 马血清（HS） L-谷氨酰胺（200mM） MEM NEAA（10mM） HEPES（1M） β-巯基乙醇（55Mm） PEST LIF 复苏细胞 细胞被冻存在10％二甲基亚砜（DMSO）中防止结晶的形成，结晶的形成会损害细胞。然而，二甲基亚砜对细胞有毒性，快速的进行细胞复苏是很重要的。 步骤： 1．从液氮中取出一管细胞； 2．将冻存管置于37℃水浴中2分钟（或放到管内溶液恰好完全溶解）； 3．将细胞转移到一15ml Falcon管中； 4．加入5ml ES培养基（用培养基冲洗冻存管）； 5．离心3分钟； 6．弃上清，用2ml ES培养基重悬细胞，至少吹打10次； 7．接种在明胶包被（见下文）的6孔或6cm组织培养皿； 8．孵育。 冻存细胞 冻存液
干细胞治疗工作流程图
干细胞治疗工作流程 脐带血临床采集流程 干细胞是一种未分化的细胞，具有自我更新、分化、发育再生各种组织器官和人体的潜在功能。 脐带血广泛的应用前景备受关注，脐带血本属于废弃物，但是医学技术的进步使得它的价值得到了空前的提升。1989年，法国的鲁克罗曼教授用HLA 相合的同胞脐带血干细胞进行移植，成功地治疗了一例遗传性疾病—可尼贫血症，之后短短的15年的时间，医学界利用脐带血干细胞已成功治愈和改善了多种疾病，包括:血液系统疾病、免疫系统疾病、神经和血管系统疾病、脑部疾病、肿瘤、糖尿病等。现在在儿童的干细胞移植方面，由于可以存在1-2个HLA位点的不配型，免疫排斥反应小等原因，脐带血干细胞已成为治疗一些重大疾病的有效手段。同时，干细胞的进一步开发，还可用于抗衰老、器官修复、美容等保健领域。干细胞技术和临床应用的飞速发展，给人类的健康带来了新的希望和保障。但是作为采集脐带血最主要的工作人员，我们所需要的操作是非常简单的，但是对于术中操作之外，我们还是会遇到以下的问题。解决这些问题，我们才能放心的采集，存储，备用。但是真正合法，安全，便捷的让脐带血的干细胞移植到有需要的患者体，需要按以下流程操作： 脐带血采集条件： 以初产妇、年龄在45岁以或35岁以经产妇，身体健康者为宜。 脐带血安全流程
1、传染病检查：孕妇在产前要做好身体检查。这些检查包括:肝功能是否正常，有无梅毒螺旋体，艾滋病病毒(HIV )、乙型肝炎病毒(HBV )、丙型肝炎病毒(HCV)等病原体检测。如果其中有一样是阳性的话，就不要再进行采集了。 2、采集和储存的无菌观念：在自然分娩的情况下，一定要注意消毒。被厌氧菌和需氧菌污染，检测为阳性时都不能储存和使用。在脐血被采集后，应该尽快保存在2-8℃的恒温箱中，并远离辐射源，不要让X射线照到。这样的脐带血经科学实验证实，放置24小时或在-23℃以下48小时，其中的干细胞的活性是没有明显影响的，但最长不应该超过72小时。 采集流程 何种方法采集脐带血更好些呢？Solves[5]等证实了剖宫产情况下，以下两种采集方法体采集法对得到的脐带血除血细胞比容及血小板外，其他各项没有明显不同。 体采集法：产妇施行常规的子宫横切术，将胎儿取出后，立即用两把止血钳夹住脐带，将其与胎儿分离，然后用碘酒和70%酒精消毒脐带，做脐静脉穿刺后，脐带血通过重力的作用流人含抗凝剂的无菌采集袋，采集完将其放入4℃冰箱中保存。 体外采集法：同样对产妇行子宫横切术，待胎盘自然或人工剥离后，立即将其置于采集区，胎盘取出与进行采集之间时间尽可能缩短，将胎盘放在一个中间有孔的可供脐带自然垂下的采集台上，对脐带进行严格消毒后行脐静脉穿刺，血液在重力的作用下流人采集袋中，将其放人4℃冰箱保存。 脐带血贮存 因为脐血的采集、运输、储存和应用事实上有别于一般血液，国际上通行的管理法规都将血液和组织细胞分别管理，而我国目前的法规对脐血干细胞库
心理学知识之自我防御机制
心理学知识之自我防御机制 自我防御机制最早于精神分析学派创始人弗洛伊德提出，他认为态度作为一种自卫机制，能让人在受到贬抑时用来保护自己。在教师招聘类考试中主要以客观题形式备考。通过概念理解以及举例的方式来进行知识考查。下面是有关自我防御机制的概念解释以及例子，希望可以帮助同学们。 (一)否认： 作用：通过好像它不存在的方式来处理引起焦虑的刺激。这是一种比较简单的防御机制，具有儿童的心理的特点。 举例：拒绝医生所下的患癌通知。 (二)移置(转移)： 作用：将冲动指向威胁较小的目标，通常是把对强者的情绪、欲望转移到弱者身上。 举例：以猛烈的关门来替代攻击某人;踢猫效应;找替罪羊。 (三)理智化： 作用：通过关注事物的理智层面来回避不能接受的情感部分。 举例：将注意力放在葬礼的细节而不是悲伤上。 (四)投射： 作用：把自己不能接受的冲动归为别人。 举例：在工作中犯了错误，不是承认它而是认为同事无能。(甩锅) (五)文饰(合理化)： 作用：给行为一个貌似有理但不正确的解释，这个解释并非行为的真正原因。 举例：辩称每晚喝酒有助于降低血压。 (六)反向： 作用：因为真实信念会引起焦虑而持相反信念。 举例：持种族偏见的人走极端，公然信奉该种族。(物极必反)。 (七)退行：
作用：受到威胁时，退回到早期的发展阶段。 举例：没有得到期望的结果就乱发脾气。 (八)压抑： 作用：将不想要的想法排除在意识之外。 举例：忘记创伤性事件的某些方面。 (九)升华： 作用：将不被接受的冲动以社会可接受的方式表达出来。 举例：通过成为拳击手来表达攻击倾向;通过成为国家监听人员来满足自身的窥私癖。 (十)压制： 作用：将不想出现的想法推进至潜意识。 举例：主动尝试忘掉引起焦虑的事件。 (十一)抵消： 作用：尝试撤销不能接受的行为或者想法。 举例：侮辱别人后又过分赞美他。 例题： 小明去买东西，人家多找了10元钱，他一直在犹豫是否要还回去，又想如果是别人也许不会还。这属于自我防御机制中的( ) A.压抑 B.转换 C.投射 D.文饰 【答案】C。解析：投射效应是指因个人具有某种特性而推断他人也具有与自己相同特性的社会心理现象，即“以己度人”“将心比心”，认为别人也一定会有和自己类似的言行和需要。故选C。
个人表现自我鉴定怎么写
个人表现自我鉴定怎么写 工作以来，在单位领导的精心培育和教导下，通过自身的不断努力，无论是思想上、 学习上还是工作上，都取得了长足的发展和巨大的收获，现将工作总结如下： 思想上，积极参加政治学习，坚持四项基本原则，拥护党的各项方针政策，自觉遵守 各项法规。 工作上，本人自xxxx年工作以来，先后在某某部门、某某科室、会计科等科室工作过，不管走到哪里，都严格要求自己，刻苦钻研业务，争当行家里手。就是凭着这样一种 坚定的信念，我已熟练掌握储蓄、会计、计划、信用卡、个贷等业务，成为xx行业务的 行家里手。 记得，刚进xx行，为了尽快掌握xx行业行业知识，我每天苦学6个多小时，但我每 天都风雨无阻，特别是冬天，冰天雪地，怕挤不上车，我常常要提前两、三个小时上班， 就是那时起我养成了早到单位的习惯，现在每天都是第一个到行里，先打扫卫生，再看看 业务书或准备准备一天的工作，也是这个习惯，给了我充足的时间学习到更多的业务知识，为我几年来工作的顺利开展打下了良好的基础。 我工作过的岗位大部分在前台，为了能更好的服务客户，针对不同层次、不同需求的 客户，我给予不同的帮助和服务，记得有一位第一次到我行客户，当我了解到他要贷款买 二手房时，由于他不知该怎么办，只是有个想法，我便详细地向他介绍了个贷的所有手续。除了在服务客户上我尽心尽力，在行里组织的各项活动中我也积极响应，经常参加单位组 织的各项竞赛，展示自我，并取得了优异的成绩，受到了单位的嘉奖。 学习上，自从参加工作以来，我从没有放弃学习理论知识和业务知识。由于我毕业财 校属于中专，刚工作我就利用业余时间自学大专，并于xx年毕业，但我没有满足于现状，又于xx年自修东北大学金融本科，由于学习勤奋刻苦，成绩优良，学习中受到老师充分 肯定，目前正在积极准备论文答辩。不但掌握和提高了金融知识，也有了一定的理论水平，完全达到了本科生所具有的水准。学习理论的同时，更加钻研业务，把学到的金融知识融 会到工作中去，使业务水平不断提高，并于xx年参加全国中级经济师资格考试，顺利通 过同时被行里聘为中级师。在多年的业务知识考核当中，每次会计业务资格考试都达到1 级水平。 最后，我想说的是，上面只是我工作中取得的一点成绩，这与单位的领导和同事们的 帮助是分不开的。我始终坚信一句话“一根火柴再亮，也只有豆大的光。但倘若用一根火 柴去点燃一堆火柴，则会熊熊燃烧”。我希望用我亮丽的青春，去点燃周围每个人的激情。
人胚胎干细胞研究的临床意义
人胚胎干细胞研究的临床意义 [关键词] 人胚胎干 健康讯: 吕广秀 20XX14上海市解放军第85医院儿科1998年11月，美国James和John Gearhart领导的2个科学小组分别发表论文阐述如何利用囊胚和原始的胚胎生殖细胞培养出可能的人全能型胚胎干细胞（ES cells）和胚胎生殖细胞系（EG cells）［1，2］。ES细胞最引人关注的2条特征是:ES细胞能在体外条件下生长，在原始的去分化条件下能够无限地分裂;同时在体外培养的所有时间内都能保持胚胎来源细胞的一个关键性特征—全能性，即发育成成体中各种细胞的能力。ES细胞的应用前景十分令人鼓舞。胚胎干细胞可以作为研究人类胚胎发育、出生缺陷及胚胎瘤等疾病的新的手段;可以用于至今为止尚未进行的关于的方法;制造人类疾病模型以利用于基础研究、药物开发和毒理学研究，如果克隆技术可以从患者自体组织中获得干细胞，则它们可解决用于治疗退行性疾病的组织短缺以及结束在移植治疗中使用免疫抑制剂;另外干细胞还可以用来作为基因治疗的一种新的基因运载系统。总之，其前景十分广泛。 1 胚胎干细胞的一般定义特征考虑到ES或EG细胞的特性，可以认为有一些表型是所有的ES细胞都应该具有的，其他一些特点可能是属于从不同种属或不同组织中分离出来的某种特定全能性细胞所特有，或表现出在胚胎发育过程中某个特定阶段所具有的特征。一般认为全能性干细胞所应具有的特征如下:（1）来源于一个全能性的细胞群体;（2）具有正常的细胞核型;（3）具永生性，在胚胎状态下能无限制的分裂;（4）培养的细胞株在体外或在畸胎瘤中能自发分化成胚胎外组织（extraembryonic tissues）和分属所有3种胚层的体细胞。但到目前为止，所有已培养成功的哺乳动物细胞中，除小鼠外，灵长类动物ES细胞只满足上述4条标准的前3条。一些研究人员将ES细胞的定义限定为那些能分化成包括生殖细胞在内的所有的细胞。但出于伦理上的原因，来源于人的ES细胞不可能进行试验以验证是否满足这一标准。因此，如果来源于人的细胞能满足其他3条关于ES细胞的一般定义，我们就认为它属于ES细胞。需要指出的是，要从体外培养或畸胎瘤试验验证一个ES细胞能否分化成所有组织类型的细胞是十分困难的，因为不论在体外培养条件下或畸胎瘤中，一些组织都是十分罕见的。 2 胚胎干细胞的最新研究James Thomson和同事于1998年报道利用治疗不孕症所遗弃的囊胚分离出ES细胞。他们所使用的技术与分离小鼠ES细胞相似:将可能
小鼠胚胎干细胞mES小鼠iPS培养Protocol
小鼠胚胎干细胞（mES细胞）、小鼠iPS细胞培养Protocol MEF细胞铺制： 1. 在T25培养瓶中加入0.2%明胶，摇匀后覆盖底面即可，于37℃细胞培养箱至 少放置15 min以上。 2. 吸除0.2%明胶，加入事先水浴加热至37℃的MEF完全培养液。一般地，一 个T25培养瓶中加入5 ml MEF完全培养液。 3. 按实验需要：小鼠胚胎干细胞使用KM-r P3 MEF或CF-1 P3 MEF；小鼠iPS 使用ICR-r P3 MEF，复苏MEF细胞若干支。将冻存管从液氮中取出，置于37℃水浴中使之迅速融解，取出后拿到超净台内用75%酒精擦拭冻存管旋口处及外壁，防止污染。 4. 将冻存管内细胞悬液转移至含2 ml MEF完全培养液的15 ml离心管内，以 1000 rpm，离心5 min，离心后将上清液吸除，另加入新鲜的MEF完全培养液1 ml，重悬后按照一个T25培养瓶铺1?106的MEF细胞，平均加入到T25培养瓶中，轻轻摇匀后置于37℃细胞培养箱。24 h以后可以传入小鼠胚胎干细胞或小鼠iPS细胞。 5. 复苏或传代小鼠胚胎干细胞或小鼠iPS细胞前，将T25培养瓶中的MEF完全 培养液吸除，加入2 ml小鼠胚胎干细胞、小鼠iPS细胞完全培养液轻轻冲洗一遍后吸除，加入新鲜的小鼠胚胎干细胞、小鼠iPS细胞完全培养液待用。 复苏： 1. 将小鼠胚胎干细胞、小鼠iPS细胞冻存管从液氮中取出，置于37℃水浴中使 之迅速融解，取出后拿到超净台内用75%酒精擦拭冻存管旋口处及外壁，防止污染。 2. 将冻存管内细胞悬液转移至含3-4 ml小鼠胚胎干细胞、小鼠iPS细胞完全培 养液的15 ml离心管内，以1000 rpm，离心5 min。 3. 离心后将上清液吸除，另加入新鲜的小鼠胚胎干细胞、小鼠iPS细胞完全培 养液2 ml，吹打悬浮。 4. 重复吹打，制成单细胞悬液，尽量避免气泡。 5. 转移至1个已经铺好MEF细胞的T25培养瓶中培养。 6. 每天更换小鼠胚胎干细胞、小鼠iPS细胞完全培养液。 传代： 1.一般在复苏后第2-3天传代，视克隆大小和密度而定。 2.吸除废液。 3.用PBS（不含钙镁离子）轻轻冲洗一遍。
成体神经干细胞分化及自我更新的调控机制
成体神经干细胞分化及自我更新的调控机制 研究小组成员：陈静雯、蒋显、林珑、欧阳川、王朝、杨怡 指导教师：袭荣文博士 介绍 已有证据表明，成体哺乳动物大脑中的神经发生贯穿整个生命周期。神经干细胞的分化及自我更新是这一过程的基础并对神经组织的修复和维持起着重要作用。许多神经退行性疾病也与其功能的失调相关。深入研究成体神经干细胞最终将有助于确立干细胞治疗的方案。我们组的研究兴趣在于探索影响成体神经干细胞分化或自我更新的分子，尤其是希望能找出一条起较为关键作用的调控通路。为此，我们选用繁殖周期短，基因组序列已知，干细胞研究相对清楚的果蝇作为实验动物，通过大规模人工诱变，筛选出与成体神经干细胞分化调控相关的候选基因，最终通过酵母双杂交，基因沉默（或过量表达）观察相关蛋白表达量变化等方法推测出并验证其中起主导性作用的信号通路。 小组活动 7月17日 选择成体神经干细胞作为研究对象，确定小组成员。组员初步讨论了各自对成体神经干细胞的研究兴趣，交流了对其相关背景的了解。讨论后发现虽然大家都对成体神经干细胞有感性的认识，但这方面的背景知识都比较欠缺，不清楚目前围绕这一课题的研究方向以及研究进展，不能具化出一个研究课题，决定先阅读相关文献以尽快弥补对成体神经干细胞研究领域及现状的认识不足。 7月19日PM9：00
组员交流了各自查阅文献后新增加的认识以及心得，经过讨论，初步将研究课题定为成体神经干细胞的自我更新，并设立公共邮箱，将文献发到公邮中，以方便组员阅读。 7月27日PM9:00 最终确定小组的课题为成体神经干细胞分化及自我更新的调控机制。讨论过程中提出了两种实验方向：一是以一种或几种参与调控的特异性蛋白为导向，研究其对成体神经干细胞的影响，二是以调控通路为导向，即通过追踪成体神经干细胞不同时期蛋白表达的动态变化，找到可能参与调控的候选基因，通过基因沉默或过量表达等方法，设法找到它们之间的相互关系，推测并最终验证出一条信号通路。经过讨论决定采用第二种方案，因为相对于前者，后者更加系统全面（当然工作量也更大）。 7月28日PM:3:00 邀请指导老师---袭荣文老师与小组成员座谈。袭老师启发式的提问以及耐心的讲解帮助大家建立起了一个更加清晰明确的实验思路，同时也使大家注意到了一些实际操作中的关键问题，比如如何建立一个实验系统，选择哪种实验动物，怎样鉴定并监测成体神经干细胞的动态变化等等，而这些具体问题是大家之前都没有细致考虑过的。与老师座谈结束后，小组成员又就老师提出的有关实验操作的问题进行了讨论，最后由欧阳川负责整理实验的整体流程。 实验思路 1.通过对不同时期神经干细胞的蛋白质组分析，找到特异性最高，表达最稳定的蛋白作为标记靶分子，与GFP融合，建立分子标记。 2利用GFP，通过FACS筛选出可用于实验的细胞，分离，鉴定，体外培养。 3.选择果蝇作为实验动物，进行大规模人工诱变，筛选出具有与中枢神经修复，维持有关的突变表型的个体，通过染色体核型分析和基因测序找出突变基因，建立一个参与调控神经干细胞活动的候选基因库。 4通过查阅相关文献报道，推测可能存在于同一条调控通路中的基因，并对其相互作用做出猜想和假设 5.通过局部两两检测，检验推测，具体方法包括： a.免疫共沉淀试验 b.酵母双杂交 c.基因沉默或转染瞬时高表达后对相关基因进行实时定量PCR，对相关蛋白进行western blotting 检测其表达变化. 6.得出一个信号通路的草图，从全局层面进行进一步的实验验证。 有待解决的问题： 1.界定神经干细胞的存在 成体神经干细胞的干细胞特性---自我更新以及具有分化成多种神经细胞的潜能---在体外是通过神经球和贴壁单层细胞培养实验证明的，但是目前还没有实验能够清楚地证明在体内进行的自我更新和分化。因此需要设计出直接的工具来更有力地界定神经干细胞的存在。 2.找到神经干细胞特异性的分子标记 目前用于追踪细胞世系的标记包括Nestin,GFAP,Sox2等，但这些分子标记都表达在异质的细胞群中，而且并不清楚表达这些分子标记的细胞是否就是神经干细胞。
在职期间表现自我鉴定_模板
在职期间表现自我鉴定_模板 在职期间表现自我鉴定（一） 年月出生，族，年月参加工作，年月入党，历任畜牧局科员、县委办秘书、常务秘书（副科级），现任县委办公室副主任。 同志政治素质较高，工作作风扎实，具有较强的组织协调能力，出色地完成了分管的常务、保密、督查工作任务，得到了领导的一致认可和好评。具体表现是： 一是认真学习，政治素质高。某同志能够自觉坚持党性锻炼，注重提高自己的政治修养，不断改造世界观、人生观、价值观，持之以恒地学习马列主义、毛泽东思想、邓小平理论和“三个代表”重要思想，自觉学习党的路线、方针、政策，在实际工作中始终坚持党的基本路线不动摇，在大是大非面前保持政治上的清醒与坚定。该同志在保持共产党员先进性教育活动中，能够虚心学习，认真整改提高，时刻注意言行，树立了党员干部的良好形象。 二是善于协调，工作能力强。某同志多年从事常务工作，实践经验丰富，组织协调能力强，在协调工作上，及时、果敢、主动，对一些矛盾灵活处理，能够很好地协调上下左右、方方面面的关系。领导交办的每件事、每项工作都够协调到位、落实到位。特别是在处理群众上访事件上，他积极协调公安、信访等各方面力量，对上访群众及时分流，有效控制局面，全年未发生一起群众冲击县委办公室，影响领导正常办公的情况，表现出其出色的协调能力。 三是勤奋敬业，工作效果好。某同志工作兢兢业业，孜孜不倦，取得了良好的工作绩效。分管的常务、督查、保密工作都得到了上级和领导的认可。常务工作线长、面广、事杂，他不分昼夜、起早贪晚，适时、适当地做好了勤务工作，圆满地完成了会务工作，特别是出色地完成了省、市领导的接待任务，得到了上级主要领导的赞许。同时，压缩不必要支出，加强后勤保障，保证了办公室高效、有序地运转。保密工作，他坚持不断完善工作机制、加强管理和指导、强化人员培训，推进了全县保密工作上水平。在督查工作上，他对肉羊产业开发、项目建设等重大事项进行全程监督，定期通报，有力地推动了工作开展和落实。今年，承办上级党委交办的查办件件、本级县委领导的批办件件，办结率都达到。 四是廉洁自律，自身要求严。自觉遵守国家的法律、法规，遵守各项规章制度，自觉抵制不良习气，努力做到清正廉洁。不论是在上班时间，还是八小时以外，均能够严格要求，自觉维护党的纪律，严格规范自己的行为，从不搞特殊。要求别人做到的，自己首先做到，禁止别人做的，自己首先不做，时时处处以一个党员干部的标准严格要求自己。同时，该同志心胸宽容大度，待人诚恳、友善，尊敬领导，团结同志，能够较好的处理与领导和同事的关系，有着很强的号召力和凝聚力。 在职期间表现自我鉴定（二） 工作以来，在单位领导的精心培育和教导下，通过自身的不断努力，无论是思想上、学习上还是工作上，都取得了长足的发展和巨大的收获，现将工作如下： 思想上，积极参加政治学习，坚持四项基本原则，拥护党的各项方针政策，自觉遵守各项法规。 工作上，本人自xxxx年工作以来，先后在某某部门、某某科室、会计科等科室工作过，不管走到哪里，都严格要求自己，刻苦钻研业务，争当行家里手。就是凭着这样一种坚定的信念，我已熟练掌握储蓄、会计、、信用卡、个贷等业务，成为XX行业务的行家里手。 记得，刚进XX行，为了尽快掌握XX行业务，我每天都提前一个多小时到岗，练习点钞、打算盘、储蓄业务，虽然那时住处离工作单位要坐车1个多小时，但我每天都风雨无阻，特别是冬天，冰天雪地，怕挤不上车，我常常要提前两、三个小时上班，就是那时起我养成了原创文秘网站：文秘知音早到单位的习惯，现在每天都是第一个到行里，先打扫卫生，再
人胚胎干细胞的研究发展
人胚胎干细胞的研究发展 摘要：叙述了人胚胎干细胞（hES细胞）的研究现状，并对hES 细胞的研究进展及其应用前景等全面综述。 关键词：人，胚胎干细胞，原始生殖细胞，全能性，多功能性干细胞(Stemcell)是一类具有自我更新能力的多潜能细胞，即干细胞保持未定向分化状态和具有增殖能力，在合适的条件下或给予合适的信号，它可以分化成多种功能细胞或组织器官，又称其为“万用细胞”。干细胞来源于胚胎、胎儿组织和成年组织。根据发育阶段，干细胞分为胚胎干细胞和成体干细胞。1998 年Thomson等第一次从胚胎中分离培养了人体胚胎干细胞(hES C)，并随后发现它能分化为体内几乎所有的细胞后，由此掀起全球范围内的hESC研究热潮。 人胚胎干细胞的生理意义：人胚胎干细胞最有价值的应用是用来修复甚至替换已丧失功能的组织和器官，因为它具有发育分化成所有类型组织细胞的能力。任何导致丧失正常细胞的疾病都可以通过移植由胚胎干细胞分化而来的特异组织细胞来治疗，如用神经细胞治疗神经变性疾病（帕金森综合征、亨廷顿舞蹈症、阿尔茨海默病等），用造血干细胞重建造血功能，用胰岛细胞治疗糖尿病，用心肌细胞修复已坏死的心肌等。 1 人胚胎干细胞的来源 胚胎干细胞来源于着床前的囊胚内细胞团或早期胚胎的原始生殖细胞是一大类未分化的二倍体全能干细胞，具有无限增殖、自我更新
和多向分化的潜能。 2 人胚胎干细胞的生物学特性 (1)具有分化的多潜能性，在体外可诱导分化出属于三个胚层的分化细胞; (2)具有种系传递功能; (3)具有长期的未分化增殖能力，细胞不仅能分化成各种器官组织，而且能增殖生成新的保持同种性状的ES 细胞; (4)易于进行基因改造操作; (5)保留了正常的二倍体的性质且核型正常; (6)胚胎干细胞端粒酶活性呈阳性,具有维持端粒长度,保持干细胞增殖能力的重要作用。 3 人胚胎干细胞的培养 (1) 常规培养液常用的基础培养基有改良伊格尔培养基(MEM)α、达氏修正依氏培养基(DMEM)、组织培养基(TCM)199、F12 等合成培养基，以DMEM应用最为普遍。它的主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机离子和一些其他辅助物质。 (2) 无血清培养基血清中含有许多未知的成分和一些分化诱导因子，不利与ESC未分化状态的维持。为此人们尝试使用无血清培养液、化学合成培养液’进行ESC的培养，加入刺激细胞生长的激素、细胞因子等，实验表明ESC增殖旺盛，且能保持未分化状态，并认为无血清培养基优于血清培养基。但也有学者认为含血清培养液更利于胚胎干细胞向中胚层细胞分化,是因为血清中富含中胚层诱导因子,
小鼠胚胎干细胞的培养
小鼠胚胎干细胞分化为精子细胞的研究进展 郑晨光生科091 学号090304109 (河北科技大学生物科学与工程学院石家庄050018) 摘要:胚胎干细胞(ESCs) 是一种具有分化发育为三个胚层组织细胞潜能的全能性细胞, 哺乳动物的精子起源于原始生殖细胞(PGCs), ESCs 可分化为PGCs, 并进一步分化为精子细胞。通过在培养基中添加诱导分化因子(如维甲酸等) 或与希望诱导分化的目的细胞(如Sertoli细胞等) 共培养, 并通过鉴别ESCs分化为生殖细胞的各阶段特异性基因标志物 c-kit、VASA、DAZL、fragilis、miwi、mil1和mil2等, 获取不同阶段的生殖细胞。鼠的ESCs 已诱导出了不成熟的精子细胞, 但到目前为止尚无成熟精子培养成功, 且诱导分化的效率很低。 关键字：小鼠；胚胎干细胞；精子 胚胎干细胞是由哺乳动物早期胚胎分离克隆的一类未分化二倍体细胞, 能在体外增殖, 并能保持未分化状态。在一定条件下可以分化为包括生殖细胞在内的三个胚层的所有细胞类型。目前, 已从ESCs 诱导出神经细胞、心肌细胞、肝细胞、骨细胞、胰岛素分泌细胞等。小鼠胚胎干细胞体外已成功诱导分化为精子细胞和卵母细胞, 人胚胎干细胞理论上也具备分化为生殖细胞的潜能。2003 年5 月Hubner 等成功将鼠胚胎干细胞体外分化为生殖系统的卵母细胞,并在Science 上报道了该成果。近来有实验室从小鼠ESCs体外分化产生雄性原始生殖细胞, 孵育分化后注入到卵母细胞可发育成囊胚, 且检验为正常的二倍体核型。本文从小鼠胚胎干细胞定向分化为精子细胞的基因标记和方法学2 个方面, 对ESCs 向精子细胞分化的最新研究进展作一综述。 1 原始生殖细胞的发育 雌、雄鼠合笼至母鼠见阴栓后(days post-coitum,dpc) 7 d ,鼠胚胎中出现原始生殖细胞(primordiralgerm cells, PGCs), 经过增殖, 移行到生殖嵴, 并继续分化为生殖干细胞(germ stem cells, GSCs), 这些细胞是精子和卵子发生的基础。大部分研究者都认为, PGCs 是生殖细胞最初的形式,小鼠胚胎在三个胚层形成时, PGCs同时出现。PGCs 从性腺原条移行到尿囊再移行到近端内胚层中, dpc 7 d 后在中胚层远端可观察到PGCs, dpc 8 d移行到尿囊再到原肠, 这被称为移行期PGCs, 在dpc 9.5-11.0 d , 移行至生殖嵴, 这一阶段被称为移行后期PGCs, 当PGCs 分化为生殖母细胞时, 睾丸或卵巢的结构就已经确立。对于雄性小鼠, 生殖母细胞一直停留在有丝分裂期直到出生后2 d , 然后到达输精管基底膜或者停留在管腔中退化, 那些存活下来的细胞则继续分化为GSCs, 经过多细胞分化阶段, 分化为精母细胞, 精母细胞减数分裂为精子细胞, 后者最终分化为精子。也就是说, 在雄性胚胎中生殖细胞要经历移行前期P G C s 、移行期PGCs、移行后PGCs 、生殖母细胞、A 型精原细胞、GSCs 和减数分裂前生殖细胞, 才形成成熟的精子。在这段复杂漫长的变化中, 有多种不同的特异基因的表达。 2 生殖细胞分化的基因标记 PGCs的很多标志物在未分化的ESCs 上也有表达, 摆在研究者面前的挑战就是如何区分这2种细胞。且ESCs 在分化为PGCs 的过程中, 各个阶段 的基因标记也不同。ESCs的分化依赖于特异基因表达, 在生殖细胞分化中起关键作用的基因有c - k i t 、V A S A 、DAZL、fragilis、miwi、mil1和mil2等, 这些基因的表达有阶段特异性, 即在生殖细胞的不同发育阶段, 它们分别稳定地表达, 从而成为原始生殖细
体内间充质干细胞自我更新、分化及其调控相关组织干细胞的机制研究
项目名称： 体内间充质干细胞自我更新、分化及其 调控相关组织干细胞的机制研究 首席科学家：李保界上海交通大学 起止年限：2012.1 至2016.8 依托部 门： 上海市科委
一、关键科学问题及研究内容 拟解决的关键科学问题 基于MSC广谱的疾病治疗应用前景，针对目前对MSC的微环境、自我更新、 分化机理等缺乏系统研究的现状, 本课题拟解决以下关键科学问题: 1. 通过建立脂肪细胞、成骨细胞、骨髓HSC 缺乏及血管再生受阻的动物模型，探讨这 几种细胞是否作为骨髓MSC 的微环境调节MSC 的干性维持、自我更新与分化，寻找这些细胞旁分泌的活性分子在其中的作用，并探讨这些活性分子在抵抗组织衰老、促进组织再生与损伤修复中的作用。 2. 通过在体研究PTHrP-Bmi1 BMP-MAPK p16和p53通路等在调控MSC自我更新 与分化中的作用机制，阐释MSC 自我更新与分化的关键信号分子在抵抗组织衰老，促进组织再生及损伤修复中的作用，并与微环境中的信号分子建立联系。 3. 通过系统地分析MSC 自我更新、分化过程中表观遗传学的改变，寻找受DNA 甲基 化、组蛋白修饰、non-coding RNA调控的目标基因。结合基因表达图谱，阐释在MSC 的维持、自我更新及分化中的新表观遗传学基础。利用基因敲除小鼠，研究若干关键表观遗传调控基因在MSC 自我更新与分化中的作用及机制，并研究其与信号通路的关系。 4. 通过对骨折愈合、HSC 造血和神经损伤修复的在体研究，阐释MSC 及其分化细胞 在这些过程中的作用和机制，以期为MSC 的临床应用提供理论依据和指导。探讨两种活性分子通过促进MSC 增殖及向成骨细胞分化，加速骨形成和骨折愈合以及促进HSC 造血和神经再生与修复的应用前景。
自我防御机制
自我防御机制 自我防御机制的概念 自我防御机制是自我面对有可能的威胁和伤害时一系列的反应机制。即当自我受到外界的人或者是环境因素的威胁而引起强烈的焦虑和罪恶感时，焦虑将无意识地激活一系列的防御机制，以某种歪曲现实的方式来保护自我，缓和或消除不安和痛苦。它包括：否认、压抑、合理化、移置、投射、反向形成、过度代偿、抵消、升华、幽默和认同的11种形式。 自我防御机制的提出 关于自我防御机制，首先由西格蒙德?弗洛伊德提出，后由他的女儿安娜?弗洛伊德对之进行了系统的研究。在她的著作《自我和防御机制》中强调“每一个人，无论是正常人还是神经症患者的某种行为或言语都在不同程度上使用全部防御机制中的一个或几个特征性的组成成份。” 只要能够运用这些防御机制来维持平衡，而没有表现出适应不良的行为，那就不能看作是病态。只有在不适当的时机，不适当地应用防御机制以致不论在自己内心安宁方面还是与他人的交往方面都和他的生活不相称、不相和谐时才可以称之为病态。如果一个人对任何有意识的或无意识的不愉快情感都做出刻板的、不加选择的、公式化、自动化的防御反应，便可以认为他是患了神经症。 自我防御的常见种类： 自我防御机制有很多，可给予不同的分类。如成熟性防御和不成
熟性防御、积极防御和消极防御等等。现将几种常见的防御机制介绍如下： (1)否认，是指对某种痛苦的现实无意识地加以否定。由于不承认似乎就不会痛苦。鸵鸟把它的头埋在沙子里就意味着不可接受的东西不存在，否认正是如此。一个心爱的人已死亡，可仍相信或认定他还活着或即将回来，甚至还为他做些什么；一个癌症病人可否认自己患了严重的迫近死亡的疾病，尽管他也可能就是一位通晓该疾病的知名度很高的医生。这一过程可使一个人逐渐地接受现实而不致一下子承受不了坏消息或痛苦。的确是一种保护性质的、正常的防御。只有在干扰了正常行为时才能算是病态的。 (2)压抑，是指把意识所不能接受的观念、情感或冲动抑制到无意识中去。它虽不能随意回忆，但可通过其他心理机制的作用以伪装的形式出现。如对痛苦体验或创伤性事件的选择性遗忘就是压抑的表现。 (3)合理化，又称文饰作用，指无意识地用一种通过似乎有理的解释或实际上站不住脚的理由来为其难以接受的情感、行为或动机辩护以使其可以接受。如对儿童的躯体虐待可说成是“玉不琢不成器，树不伐不成材”、“打是疼骂是爱”。合理化有两种表现：一是酸葡萄心理，即把得不到的东西说成是不好的；二是甜柠檬心理，即当得不到葡萄而只有柠檬时，就说柠檬是甜的。两者均是掩盖其错误或失败，以保持内心的安宁。 (4)移置，是无意识地将指向某一对象的情绪、意图或幻想转移
人胚胎干细胞研究进展
人胚胎干细胞的研究进展 周进学号10170807 【摘要】干细胞( Stem Cell)是一类具有分化潜能和自我复制的早期未分化细胞。胚胎干细胞( Embryonic stem cells, ES细胞)是一种早期胚胎内细胞（inner cell mass, ICM）或原始生殖细胞（primordial germ cell, PGC）经体外分化抑制培养，分离和克隆得到的具有发育全能性的高度未分化细胞。人类胚胎干细胞系的建立是人类发育生物学研究的重大突破,揭示了人体发生发展奥秘的进程,可能为现代临床医疗模式带来革命性的变化。现对人类胚胎干细胞的来源,建系、生物学特性、应用前景及所涉及的伦理学问题作一综述。 【关键词】胚胎干细胞；克隆；伦理学,医学;综述 1、胚胎干细胞的概念 胚胎干细胞是从哺乳动物早期胚胎内细胞团(ICM)或桑椹胚分离出来的、能在体外长期培养的、高度未分化的全能细胞系,可在适合的条件下分化为胎儿或成体的各种类型的组织细胞。 胚胎干细胞属全能干细胞。ESCs 这一名词因其来源于胚胎而得名, 但从研究角度来说, 其概念一直没有一个特殊的标准, 2001 年美国国立卫生院根据Austin Smith 对小鼠ESCs 的研究, 概括了ESCs 的一些基本特征, 对其概念提出了一系列标准[1]: ①、来源于内细胞团或囊胚上胚层; ②、能够无限地进行对称分裂并保持未分化状态( 长期自我更新) ; ③、显示并维持正常、完整( 二倍体) 和稳定的染色体核型; ④、全能的ESCs 能够分化成三个胚层( 内胚层、中胚层、外胚层) 来源的所有细胞类型;⑤、在发育过程中能整合到所有胚胎组织中( 体外经长期培养的小鼠ESCs, 被植入另一胚胎形成嵌合体动物后, 仍能产生所有组织) ; ⑥、具有能克隆形成胚胎细胞系的能力, 并能产生卵子或精子细胞; ⑦、基因克隆, 即一个单一的ESCs 能产生一群具有相同遗传特性的细胞( 克隆) , 这些细胞有着与亲代细胞
小鼠胚胎干细胞培养体系的建立
第19卷第2期 江西农业大学学报 V o l.19,N o.2 1997年6月 A cta A gricu ltu rae U n iversitatis J iangx ien sis June,1997 α 小鼠胚胎干细胞培养体系的建立 汪河海1 刘红林2 范必勤1 钟 卉3 丁家桐4 (1 江苏农科院牧医所,南京 210014;2 南京农业大学动物科技学院,南京 210059;3 南京铁道医学院,南京 210009;4 扬州大学农学院动物科学系 225009) 摘 要 通过探讨影响小鼠胎儿成纤维细胞饲养层制备及胚胎干细胞体外培养的若干因素,建立了小鼠胚胎干细胞体外培养体系,并建成小鼠ES细胞系。 关键词:小鼠;胚胎干细胞;培养体系;ES细胞系 中图分类号:S865.1 胚胎干细胞又称ES细胞(Em b ryon ic Stem Cells)。其特点是在体外特定的培养条件下能保持其只生长、不分化的增殖状态,并具早期胚胎细胞发育的全能性。哺乳动物的ES细胞系自Evan s和Kaufm an(1981)首次建立以来[1],引起人们高度的重视,并被广泛地用于动物发育遗传学的基础理论研究和转基因动物的生产实践。但ES细胞系要在体外克隆成功,必须有成纤维细胞或STO细胞饲养层的支持[2],为建立有效的哺乳动物ES细胞体外培养体系,本文就影响小鼠胎儿成纤维细胞饲养层制备及胚胎干细胞体外培养的若干因素做初步探讨,为今后进一步开展研究奠定基础。 1 材料和方法 111 动物准备 选3～4月龄的性成熟的昆明鼠,母鼠自然发情或超排后与公鼠交配,第2天早晨检查阴道栓,见栓查为发情受精。妊娠至一定日龄后取其胚胎或胎儿用于分离囊胚内细胞团细胞或制备胎儿成纤维细胞饲养层。 112 溶液的配制 按日本学者管原七郎的配方配制D PB S液,胰蛋白酶溶液、DM E M液及ES细胞培养液(配方略)。 113 胎儿成纤维细胞饲养层的制备 α
弗洛伊德十种自我防御机制
弗洛伊德归纳了十种自我防御机制，分别为： 1.压抑：是指一切为社会道德、宗教法律所不能容许的冲动、欲望，在不知不觉中被抑制到无意识之中，使人自己不能意识到其存在。这种机制叫做压抑。只有在压抑作用发生的条件下,以下9种机制才能发生.! 压抑的正面作用是：当个体产生与社会规范相悖的内心冲动或需求时，如果个体不加以压抑和控制而任其发展下去，就不可避免地导致挫折并产生焦虑和痛苦。压抑起到保持其心境安宁；维持正常的人际关系和社会秩序的作用。一个成熟的有修养的人是一个懂得运用压抑作用的人。 但是压抑也有其负面作用，因为被压抑的欲望与冲动并未消失，只不过是在意识的监督之下暂时潜伏下来，一旦有机会就可能活跃起来，引起意识领域轻微和短暂的扰乱现象。同时，如果过分地使用压抑作用，把自己正常的欲望和本能拼命地加以压抑，就会形成一种病态的反应。如强迫型人格异常者，就与他们过分地使用压抑作用心理防卫机制有很大的关系。 2.投射：把自己的愿望与动机归于他人，断言他人有此动机、愿望，然而这些东西往往都是超我所不能容的。投射又称外射作用，是指个体将自己不喜欢或不能承受但又是自己具有的冲动、动机、态度和行为转移到他人或周围事物上，认为他人或周围事物也有这样的动机和行为。如“以小人之心度君子之腹”、“我见青山多抚媚，青山见我亦多情”等就是投射作用的写照。投射作用是客观存在的，通常又是无意识的。 3.否认：有意识或无意识地拒绝承认那些使人感到焦虑或痛苦的事件，似乎其从未发生过。 否认是指把已经发生的不愉快的事情加以否认，认为它根本没有发生过。其目的是以拒绝承认痛苦事实来躲避心理紧张和不安，是一种最简单、最原始的心理防卫机制。 否认可以在一定的程度上保护自己，给自己多一些时间来思考并作出决定。但它并不能使被否定的问题得到解决，从长远来看是不足取的。如果严重的话，还会减低人们对现实的