二甲双胍对兔动脉粥样硬化NF_B表达及血清高敏C反应蛋白水平的影响

二甲双胍对兔动脉粥样硬化NF_B表达及血清高敏C反应蛋白水平的影响
二甲双胍对兔动脉粥样硬化NF_B表达及血清高敏C反应蛋白水平的影响

[文章编号] 1000-4718(2008)12-2339-05

 [收稿日期]2007-10-14 [修回日期]2008-02-283[基金项目]湖北省科技厅攻关资助项目(No .4-261)△通讯作者E -mail:wxiang128@https://www.360docs.net/doc/fb13112510.html,

二甲双胍对兔动脉粥样硬化NF -κB 表达及血清

高敏C 反应蛋白水平的影响

3

李松南1

, 王 祥

1△

, 曾秋棠1, 冯义柏1, 郭和平1, 王天红1, 邓荷萍

2

(华中科技大学同济医学院心血管病研究所,协和医院1心内科,2超声科,湖北武汉430022)

[摘 要] 目的:研究二甲双胍对动脉粥样硬化家兔主动脉血管壁中NF -κB 、I κB α表达和血清中高敏C 反应蛋白(hs -CRP )浓度的影响,探讨其可能的抗动脉粥样硬化机制。方法:24只新西兰大耳白兔随机分为3组:空白对照组(contr ol 组)、粥样硬化组(AS 组)和二甲双胍治疗组(M et 组)。采用免疫内皮损伤加高胆固醇饮食的方法复制家免动脉粥样硬化模型并经升主动脉高频超声证实,然后Met 组给予二甲双胍150mg ?kg -1?d -1喂养8周,至第16周实验结束时抽血检测血脂、血清高敏C 反应蛋白(hs -CRP ),分别采用免疫组织化学和W estern bl ot 2ting 方法检测家兔主动脉中NF -κB p65亚基及其抑制蛋白I κB α的表达。结果:与contr ol 组相比,AS 组血清

hs -CRP 显著增高(1127±0143vs 3196±0163,P <0101),主动脉血管壁中胞核NF -κB p65亚基表达增强(P <

0101)、胞浆I κB α表达明显减弱(P <0101);与AS 组比较,M et 组血清hs -CRP 明显降低(2179±0140vs 3196±0163,P <0105),胞核NF -κB p65亚基表达减弱(P <0105)、胞浆I κB α表达增强(P <0105)。结论:二甲双胍能够抑制动脉粥样硬化家兔血管壁中I κB 的降解和NF -κB 的活化,并降低血清中hs -CRP,提示二甲双胍具有抗炎症作用,可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一。

[关键词] 二甲双胍;动脉硬化;NF -κB;C 反应蛋白质;炎症

[中图分类号] R363 [文献标识码] A

Effects of m etfor m i n on nuclear factor -κB expressi on and seru m h i gh

sen siti v ity C -reacti ve prote i n level i n a therosclerosis m odel of rabb it

L I Song -nan 1,WANG Xiang 1,ZENG Q iu -tang 1,FENG Yi -bo 1,G UO He -p ing 1

,WANG Tian -hong 1,DENG He -p ing

2

(1D epart m ent of Cardiology,

2

D epart m ent of Echocardiography,U nion Hospital,TongjiM edical College,Huazhong U niver 2

sity of Science and Technology,W uhan 430022,China .E -m ail:w xiang 128@163.co m )

[ABSTRACT] A I M :To investigate the effects of metf or m in on nuclear fact or -κB (NF -κB ),its inhibit or I κB,

and the level of seru m high sensitivity C -reactive p r otein (hs -CRP )in rabbits .M ETHOD S:24Ne w Zealand male rab 2bits were random ly divided int o contr ol gr oup,ather oscler osis (AS )gr oup and metfor m in (M et )gr oup.AS gr oup and Met gr oup were made as models by cholester olenriched diets feeding and vascular inti m al i m munol ogic injury .The AS model was confir med by high frequency ultras ound .Met gr oup were given metfor m in 150mg ?kg -1

?d -1for 8weeks .A t the end

of experi m ent,seru m hs -CRP and seru m li p ids in all three gr oup s were detected .

I m munohist oche m istry and W estern

bl otting technique were app lied t o detect the exp ressi on of nucleus NF -κB p65and cyt op las ma I κB

αin aorta in all three gr oup s .RESUL TS:Compared t o nor mal contr ol gr oup,the level of seru m hs -CRP was elevated (1127±0143v s 3196±

0163,P <0101),the exp ressi on of nucleus NF -κB p65increased significantly (P <0101)while the exp ressi on of I κB

αreduced significantly (P <0101).Compared t o AS gr oup,metfor m in significantly reduced the level of seru m hs -CRP (2179±0140vs 3196±0163,P <0105)and the exp ressi on of nucleus NF -κB p65(P <0101),and increased the ex 2

p ressi on of I κB α(P <0105).CO NCL US I O N:M etf or m in inhibits the activati on of NF -κB p65and the degradati on of I κB α,and decreases the levels of seru m hs -CRP in AS rabbits .These results suggest thatmetf or m in exerts direct vascular

anti -infla mmat ory effects .It may be one i m portant mechanis m of metfor m in πs antiather ogenic p r operties .

[KE Y WO RD S] Metfor m in;A rteri oscler osis;NF -kappa B;C -reactive p r otein;I nfla mmati on

?

9332?中国病理生理杂志 Chinese Journal of Pathophysi ol ogy 2008,24(12):2339-2343

动脉硬化(arteri oscler osis,AS)目前被认为是血管壁的慢性炎症增殖性疾病[1],多种炎症因子参与了AS的发生发展。核因子κB(nuclear fact or-kappa B,NF-κB)是一种具有多向基因转录调节作用的蛋白质,活化的NF-κB可以调节多种基因尤其是炎症免疫相关基因的转录,如趋化因子、细胞黏附分子、细胞因子等。研究表明,NF-κB广泛存在于AS 病变处血管平滑肌细胞、内皮细胞及单核巨噬细胞中[2,3],其活化目前被认为是AS发生的始动机制之一。已证实降糖药物二甲双胍(metf or m in)对实验动物有显著的抗动脉粥样硬化特性[4],著名的英国前瞻性糖尿病研究(UKP DS)也发现二甲双胍具有独立于其降糖作用以外的降低2型糖尿病患者大血管病变(主要是AS)发生率和死亡率的作用[5,6]。本实验通过观察二甲双胍对动脉粥样硬化家兔主动脉血管壁细胞中NF-κB及其抑制蛋白IκBα表达的影响和血清中高敏C反应蛋白(hs-CRP)浓度的变化,来探讨其可能的抗AS机制。

材 料 和 方 法

1 材料

胆固醇和牛血清白蛋白(BS A,武汉亚法生物技术有限公司),hs-CRP试剂盒(上海申索佑福医学诊断用品有限公司),NF-κB p65单克隆抗体和IκBα多克隆抗体(武汉博士德生物工程有限公司),羊抗兔HRP-I gG(Santa Cruz),十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺(S DS-P AGE)和硝酸纤维素膜(NC膜) (I nvitr ogen),ECL发光剂(Pierce),盐酸二甲双胍片(北京京丰制药有限公司)。

2 方法

2.1 家兔AS模型的建立 健康215月龄雄性新西兰大耳白兔24只(普通级,购自同济医学院实验动物中心),适应性喂养1周后,采用随机数字表法分为3组:空白对照组(contr ol组,8只)、粥样硬化组(AS组, 8只)和二甲双胍治疗组(Met组,8只)。Contr ol组每只家兔给予普通饲料150g/d,自由饮水;AS组和Met 组家兔经耳缘静脉1次性注射10%牛血清白蛋白1mL/kg,随后给予高脂饮食(含胆固醇1%、猪油715%)150g/d,自由饮水。饲养至第8周,经升主动脉高频超声探查(GE V ivid7彩色多普勒超声仪,i13L 术中探头),可见与contr ol组比较,AS组和Met组家兔升主动脉内中膜(inti m a-media thickness,I M T)明显增厚,并可见斑块形成(图1),提示AS模型建立成功。AS组继续高脂饮食喂养,Met组在高脂饮食喂养的基础上给予二甲双胍150mg?kg-1?d-1(二甲双胍片溶于生理盐水中配制成5%溶液,每日定时灌胃1次;家兔体重每周记录1次,据此调整灌胃剂量)。家兔均分笼喂养,喂满16周

Fig1 Sonogra m of ascending aorta on the8th week.Left:chol2 ester olenriched diets feeding gr oup(AS gr oup or Met

treat m ent gr oup);right:contr ol gr oup.AAO:ascending

aorta;I M T:arterial inti m a-media thickness;p la:ath2

er oscler otic p laque.

图1 第8周时,高脂喂养的家兔(AS组和M et组)与con2 trol组家兔的升主动脉超声图像

2.2 血脂血糖及血清hs-CRP的测定 分别于实验第0、8、16周经耳中动脉取空腹血2mL,3000r/m in 离心10m in,采用酶标法测定血清总胆固醇(t otal cholester ol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high density li pop r otein cholester ol, HDL-C),采用Fried wald公式计算低密度脂蛋白胆固醇(l ow density li pop r otein cholester ol,LDL-C);按照CRP试剂盒说明检测血清hs-CRP浓度。

2.3 病理学观察 3组动物在喂满l6周后经兔耳缘静脉注入过量苯巴比妥钠处死,开胸、迅速分离、离断升主动脉至腹主动脉段血管。取主动脉弓处约015c m血管组织置入10%中性甲醛缓冲液中固定24h,经脱水、透明、浸蜡、包埋与石蜡切片处理后,行HE染色,光镜下经摄相装置输入彩色病理图像分析系统。其余血管组织置入冻存管中-70℃冰箱中保存。

2.4 免疫组织化学染色 石蜡包块每4μm切片,采用免疫组织化学SP法检测主动脉壁NF-κB p65和IκBα的表达情况,严格按说明书操作。

2.5 W estern bl otting 取出冻存于-70℃的血管组织,采用R I P A裂解缓冲液分别提取胞浆蛋白IκBα和胞核蛋白NF-κB p65亚基,B radford法测定蛋白质含量;加2×S DS上样缓冲液煮沸5m in后上样,每孔20μg,以8%S DS-P AGE凝胶电泳分离(200V、45m in),以湿法转硝酸纤维素膜(100V、60m in);丽春红S应用液染膜,P BS液洗膜3m in×3次;3% BS A封闭1h后,P BS液洗膜15m in×3次,加入Ⅰ抗4℃孵育过夜,再洗膜15m in×3次后加入辣根过氧化物酶标记的Ⅱ抗,室温下孵育1h,洗膜15m in

?

4

3

2

?

×3次后,标准ECL法底物发光。用凝胶成像分析软件Gel p r o312对蛋白含量密度分析,并与内参照结果比较。每组实验重复3次。

3 统计学处理

数据用均数±标准差( x±s)表示,选用SPSS 1310统计软件,组间差异性比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA)。

结 果

1 一般情况

实验过程中,AS组有一只家兔死亡,Met组有2只家兔死亡,至实验结束正常对照组有8只家兔,AS 组7只家兔,Met组6只。实验结束时3组家兔的体重无显著差异(P>0105)。

2 血脂结果

0周时,各实验组家兔的血脂水平无显著差异;8周、16周时,AS组与Met组家兔血脂水平与contr ol 组比较明显升高(P<0101),尤其是LDL-C水平, Met组总体血脂和LDL-C水平与AS组相比有下降的趋势,但未显示出统计学差异(P>0105),见表1。

表1 各组家兔血脂水平的改变

Tab1 Changes in bl ood li p ids level of rabbits in each gr oup (mmol/L. x±s.n=6)

Group0week8th week16th week Control

 TC1.66±0.06 1.58±0.163.53±0.60

 TG0.72±0.090.75±0.220.82±0.17

 HDL-C0.57±0.130.58±0.090.66±0.07

 LDL-C0.60±0.150.63±0.122.52±0.61

AS

 TC1.55±0.1124.01±2.793347.17±7.2233

 TG0.77±0.16 3.21±0.562.64±1.05

 HDL-C0.61±0.10 1.13±0.340.70±0.18

 LDL-C0.54±0.2121.42±2.543345.28±6.9233 Met

 TC1.67±0.0923.84±2.1933△41.38±11.7333△ TG0.76±0.13 3.26±0.612.27±1.61

 HDL-C0.58±0.12 1.08±0.190.65±0.13

 LDL-C0.57±0.1721.01±1.7633△39.70±11.1433△ 3P<0101vs contr ol gr oup;△P>0105vs AS gr oup.

3 血清中hs-CRP的浓度

如表2所示,AS组家兔血清hs-CRP较之contr ol 组显著增高(P<0101);给予二甲双胍干预8周后Met 组家兔血清hs-CRP有较明显的降低(P<0105)。4 主动脉病理学改变

Contr ol组主动脉内膜大致正常,内皮细胞完整

表2 血中hs-CRP浓度变化

Tab2 Seru m hs-CRP level in each gr oup(mg/L. x±s.n=6) Gr oup Seru m hs-CRP

Contr ol1.27±0.43

AS3.96±0.6333

Met2.79±0.403

 33P<0101vs contr ol gr oup;3P<0105vs AS gr oup.

连续;AS组主动脉内膜明显增厚,内皮细胞损伤脱落,平滑肌细胞显著增生,可见到由大量泡沫细胞构成的脂质斑块,斑块内尚有较多炎症细胞浸润;Met 组内膜增生程度较AS组明显减轻,斑块体积显著减小,见图2。

5 NF-κB p65和IκBα的免疫组织化学分析NF-κB p65的表达以血管壁细胞(内皮细胞、平滑肌细胞和单核细胞)胞核黄褐着色为阳性;IκBα的表达以血管壁细胞胞浆和胞膜黄染为阳性。Con2 tr ol组血管壁很少见到胞核NF-κB p65阳性表达细胞,细胞胞浆中IκBα呈较强表达;AS组血管壁NF-κB p65呈强表达,多数细胞胞核中可见到大量黄褐色颗粒状物沉积,IκBα的表达较之contr ol组明显减少;Met组血管壁中亦可见一定数量NF-κB p65阳性表达细胞,但较AS组表达明显减弱,IκBα的表达较AS组有所增强,但弱于contr ol组,见图3。6 W estern blotti n g分析

电泳条带及半定量分析显示,contr ol组胞核内仅有少量NF-κB p65亚基表达,AS组NF-κB p65表达量增加(P<0101),Met组与AS组比较可见NF-κB p65亚基的表达减少(P<0105);AS组胞浆IκBα降解,较contr ol组表达减少(P<0101),Met组与AS组比较胞浆IκBα表达增加(P<0105),见图4、5。

讨 论

AS是多因素疾病,近年来病理生理学研究证实,AS是慢性低度炎症性疾病[1,7]。核因子κB作为一种核转录调节因子,主要由p50和p65两个亚基组成,静止状态下与其抑制蛋白IκB结合以三聚体的形式存在于细胞浆中,受到某些刺激(如氧化应激、LPS、T NF-α等),IκB在IκB激酶(I KK)的作用下磷酸化而最终泛素化降解,活化的NF-κB p65转入胞核,与靶基因上启动子区域的特定序列特异性结合,启动相应基因转录和蛋白质表达。NF-κB调节多种炎症及免疫相关基因的表达,其众多靶基因表达产物(如I L-6、I L-8、I F N、CRP、MMPs、I CAM-1、VCAM-1等)都参与AS斑块的形成和进展[8]。已有的研究表明在AS斑块处NF-κB明显活化,并且其活化程度与AS病变程度正相关。

?

1

4

3

2

?

Fig 2 HE staining of rabbit πs aorta fr om different gr oup s (HE,×40).

图2 

家兔主动脉病理学改变

Fig 3 I m munohist oche m istry staining shows NF -κB p65(upper )and I κB α(l ower )exp ressi on in artery in 3gr oup s (×400).图3 NF -κB p65(上)和I κB

α(下)

的免疫组织化学染色Fig 4 Pr otein exp ressi on of NF -κB p65and I κB

αfr om differ 2ent gr oup s .

图4 各组家兔主动脉血管壁细胞NF -κB p65和I κB

α的表达

二甲双胍是国际糖尿病联盟(I D F )指南中推荐的2型糖尿病患者降糖药物治疗的基石,广泛应用于临床。它减少肝脏葡萄糖异生及肝糖输出,近来还发现具有增加纤溶、抑制P A I -1、调节脂质代谢、

改善内皮功能、减少糖基化终末产物等作用[9]

。既往动物和临床试验已表明二甲双胍具有显著的抗动

脉粥样硬化的特性[4]

,但具体机制尚不明确,上述各种作用都可能参与其中

Fig 5 Changes of NF -κB p65and I κB αconcentrati on . x ±s .n

=6.

33

P <0101vs contr ol gr oup;

##

P <0105vs AS

gr oup.

图5 各组家兔血管壁细胞NF -κB p65和I κB

α蛋白含量 本实验通过免疫损伤加高脂饮食的方法建立了

家兔的动脉粥样硬化模型,并采用高频超声探查的方法验证建模成功。低密度脂蛋白胆固醇浸润到血管内膜,造成内皮损伤,始动损伤免疫炎症反应,经内皮细胞氧化修饰的低密度脂蛋白胆固醇活化血管

?

2432?

内皮细胞、平滑肌细胞及单核巨噬细胞中的NF-κB[10],而启动相应免疫炎症基因的表达。在AS组家兔可以观察到主动脉血管壁中IκBα明显降解,而胞核中NF-κB的表达量显著增加,同时伴有血清中炎症指标hs-CRP浓度的增加。hs-CRP不仅是心血管疾病的危险标志之一[11],而且通过多种途径直接参与了AS的进程。本实验发现二甲双胍干预(150mg?kg-1?d-1)能够减缓高脂饮食所致家兔主动脉粥样硬化病变的进展,显著降低病变部位抑制蛋白IκBα的降解和NF-κB的活化,并使得血清hs-CRP水平降低,揭示二甲双胍可能具有抑制慢性炎症反应的功能。

慢性低度炎症状态目前被认为是2型糖尿病和动脉粥样硬化性疾病的共同土壤之一[12],对其中的免疫炎症机制进行干预成为目前研究的一个热点。国外有临床试验显示,糖耐量异常(I GT)和2型糖尿病患者接受二甲双胍治疗可以降低血清中可溶性细胞间黏附分子-1(sI CAM-1)、血管细胞粘附分子-1(s VCAM-1)和E-选择素等炎症介质水平,而且这种作用与血糖控制水平无关[13,14]。新近又有学者发现二甲双胍可以通过剂量依赖性地抑制NF-κB的活化而减弱I L-β/T NF-α诱导的培养皿中血管壁细胞(EC、单核细胞等)炎症细胞因子的表达,提示其具有直接的抗炎作用,进一步的研究显示,二甲双胍是通过阻断磷脂酰肌醇-3激酶(P I3K)-Akt信号通路来实现对NF-κB活化的抑制[15]。但也有研究认为二甲双胍是通过活化AMP 激活的蛋白激酶(AMP-activated p r otein kinase, AMPK)来抑制I KK的活性,从而减弱IκB的磷酸化和降解,最终抑制NF-κB的活化[16]。

综上,我们在动物实验中证实了二甲双胍的抗动脉粥样硬化作用,并且首次发现二甲双胍可以抑制高脂饮食所致动脉粥样硬化家兔血管壁中NF-κB的活化,并降低血清中hs-CRP,提示二甲双胍具有抗炎症作用,这可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一。

[参 考 文 献]

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2

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高敏C-反应蛋白是检查什么的

全国体检预约平台 全国体检预约平台 高敏C-反应蛋白是检查什么的 高敏C 反应蛋白,是血浆中的一种C 反应蛋白。C 反应蛋白是由肝脏合成的一种全身性炎症反应急性期的非特异性标志物, 是心血管事件危险最强有力的预测因子之一。那么, 高敏C-反应蛋白是检查什么的? CRP 阳性,亦可见于肺炎,肾炎,恶性肿瘤及急性感染,外伤和组织坏死,心肌梗死,心功能不全,多发性骨髓瘤,白血病,胆石症,肝炎,痢疾,风湿热, PM,PSS,结节性多动脉炎,SLE,结核和菌苗接种等.这个检查明确,结合医生具体治疗。 高敏C 反应蛋白衡量的是人体发炎的程度,包括了慢性瘘管炎、尿道感染或牙龈发炎等各种情况。这种蛋白质的含量越高,人体患上心脏病的几率也越高。因为体内发生的明显炎症都会增大血管发炎的可能。“女性健康指导曾对二万八千多名女性做过一个调查,结果表明,体内C-反应蛋白含量较高的女性因心血管疾病去世的几率是较低人群的3.1倍。要降低C-反应蛋白含量(这能让生理年龄年轻4至7岁),是有办法的,比如补充一些抗生素,运动,服用阿司匹林、非类固醇类消炎药如布洛芬(不要在一天内同时补充阿司匹林和布洛芬,只要坚持服用一种药物即可),以及斯达汀类降血脂药物 总之,快速C-反应蛋白测定有助于临床相关疾病的诊断及治疗,它可用于鉴别细菌或病毒感染、监测病情、监控术后感染、抗生素疗效观察、预测心血管病危险等。进行快速C-反应蛋白测定,只需采集患者手指血20,放入检测仪器后,数分钟即可检测出C-反应蛋白在血中的浓度,半小时内即可发出检验报告,临床医生可根据需要和血细胞分析同时检测,也可进行单项检测。 本文来源:杭州入职体检https://www.360docs.net/doc/fb13112510.html,/0571/cl/t40

高敏C反应蛋白在诊断冠心病的应用

高敏C反应蛋白在诊断冠心病的应用 发表时间:2014-07-24T10:13:05.373Z 来源:《中外健康文摘》2014年第20期供稿作者:魏建勋 [导读] 由于机体内其他慢性损伤和炎症反应也可导致hs-CRP不同程度的升高,因此在诊断和治疗时需参照其他指标,更能提高hs-CRP的价值。 魏建勋(沈阳市苏家屯区中心医院生化室 110101) 【摘要】目的:探讨高敏C反应蛋白(hs-CRP)在诊断和治疗冠心病的应用价值。方法:应用免疫散射比浊法检测结果:检测229例CHD患者,发现hs-CRP与冠心病病情变化呈正相关。 【关键词】高敏C反应蛋白冠心病 【中图分类号】R541.4 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085(2014)20-0148-01 CRP被认为是第一个急性时相反应蛋白,在1930年,Tillet等发现在急性炎症中血清出现一种可结合肺炎球菌细胞壁C-多糖的蛋白质,命名为C反应蛋白,同时也是急性时相反应蛋白中最重要的蛋白之一,是一种敏感的炎症标志物,在急性创伤和感染时其血清浓度急剧升高,早年由于测定方法的限制,对C反应蛋白的测定极不敏感,限制了CRP的临床应用,随着分子生物学和免疫学的发展,其测定方法可 达到精确,微量,定量检测。用于新的方法测定出低浓度的CRP,称为高敏C反应蛋白hs-CRP。因此在我院住院患者中选出已经诊断为冠心病(CHD)的患者,观察他们入院和出院hs-CRP的变化。 仪器与试剂:西门子Pro特种蛋白仪,原厂试剂及校准和质控品。 对象:229例冠心病患者为我院2010-2013年心血管科住院患者,男142例,女87例,对照组77例,包括治疗无效死亡病例。样本及处理:均为静脉采血,应用SPSS统计软件进行分析。治疗前hs-CRP(mg/L)17.45(5.7-32.8),治疗后3.9(2.7-9.0),对照组0.76(0-2.1)与治疗前相比P<0.001。 讨论:研究证明,CRP在急性冠脉综合征中具有预测作用,与其他两种心肌损伤的血清标志物相比,CRP对不稳定性心绞痛的诊断敏感性显著高于肌钙蛋白I,肌酸激酶同工酶CK-MB这是由于血液中肌钙蛋白I,肌酸激酶同工酶CK-MB主要来自于心肌细胞,只有当心肌细胞出现缺血、缺氧发生变性、坏死时才通过破损的细胞膜释放入血,所以对心肌细胞微小损伤缺乏敏感性,相反,CRP是人体对炎症反应很敏感的炎症反应蛋白,在心肌动脉血管亚安装早期,即可轻度升高,早于其他两种标志物出现在血中。hs-CRP测定,发现其轻度升高可预测不稳定性心绞痛患者急性冠状动脉梗死的危险性,对无症状的患者,前瞻性研究显示,hs-CRP灵敏度高的测定才可做出预测。冠心病的病理基础是动脉炎,继而产生粥样硬化,炎症在其中起到重要作用,CRP是炎症时血浆急剧升高的急性时相反应蛋白,它不仅是炎症标志物,也参与了炎症本身,CRP具有抗炎和促炎的双重作用,可与低密度载脂蛋白一起沉积在血管壁上,又可介导补体激活促使炎症加剧动脉炎(AS)的形成和CHD的发生。使用阿司匹林和他汀类药物可降低AS和CHD发生。由于冠心病的发生及其变化病程较长,系统性血管炎症反应较弱,体内合成的CRP含量较低,有人进行冠脉造影检查发现,CRP浓度与冠状动脉硬化程度明显相关,随着冠状动脉硬化程度加重,CRP水平也明显增加,粥样斑块增大时CRP的沉积增多,冠心病患者血清中CRP含量明显增加,可能与处于活动期的粥样硬化斑块炎症的刺激和组织损伤有关,CRP水平的增加可反映病变活动度,CRP与冠状动脉病变程度相关。传统的CRP检测方法检测范围在3-200mg/L,检测能力在3-5mg/L,而健康人群CRP生理浓度在2mg/L以下,平均在0.8mg/L。而>3.0mg/L就可以作为冠心病的预测指标,在冠心病急性发作期间,不管在住院期间或出院后,检测hs-CRP均有意义,随着治疗好转,hs-CRP的浓度也明显下降,如果持续高水平则预后不良,采取一些措施,降低hs-CRP浓度,可改善其病情。已经确诊的CHD患者有数据表明,hs-CRP比TnT更具有判断预后的价值。由于机体内其他慢性损伤和炎症反应也可导致hs-CRP不同程度的升高,因此在诊断和治疗时需参照其他指标,更能提高hs-CRP的价值。参考文献 [1]董解菊,李真,高敏.C-反应蛋白作为冠心病危险因子的临床应用价值国外医学.临床生物化学与检验分册,2005,10 697-699 [2]尤国文,高敏.C-反应蛋白:冠心病诊断和危险的预警指标.国外医学.临床生物化学与检验分册,2005,10 700-702

高敏C反应蛋白对动脉硬化及心血管事件的早期诊断意义

高敏反应蛋白对动脉硬化及心血管事件的早期诊断意义 C 师姗姗,刘幼文,金光临,王 涓,曾繁芳 (广东省深圳市孙逸仙心血管医院,广东深圳) 518020收稿日期:修订日期:作者简介:2012-02-202012-06-19(1978);师姗姗-,女,本科,主治医师。 动脉硬化是一类与炎症反应密切相关的疾病,但炎症因子如高敏反应蛋白在动脉硬化发生发展所起的作用仍存在争议。心血管高危因素人群中血浆水平高且颈动脉内中膜厚度亦有不同程度的增厚,可用来评价动 脉硬化的存在及其程度。但这种检测方法具有滞后性,为此,故本研究首次探讨不同基线水平对及心血管事件发生的预测效率。 本研究收集了从年月至年月在深圳市孙逸仙心血管医院门诊和住院病人,并经详细病史询问、体格检查及相关实验室检查明确诊断既往无心绞痛、心肌梗死、短暂性脑缺血发作、缺血性脑卒中并可每个月随访次,连续者。排除既往有心血管病史、>、肝肾功能异常者、>或已有斑块形成、近期感染者。符合上述要求者例。 基本资料采集及分组 名研究对象入选后即进行危险因素评估,危险因素包括:男性年龄岁,女性>岁;吸烟;>;血脂:甘油三酯>,总胆固醇>,低密度脂蛋白胆固醇>,高密度脂蛋白胆固醇<;高血压;型糖尿病。依据基线四分位值,将其分为组,基线值范围分别为:组<,组~,组~,组>。 血浆等指标的检测 清晨采集空腹静脉血,采用自动免疫分析系统放射免疫法检测血浆,最低检测值为。同时检测血脂、血糖。  颈动脉内中膜厚度的检测 的检测由深圳市孙逸仙心血管医院超声科两位检测人员独立进行。采用线阵分析探头,对研究对象进行双侧颈总动脉内中膜厚度的测量颈总动脉分叉处近段为本实验所采用固定检测点,取左右测量值的平均值为检测值。随访者每个月测量一次,颈动脉内中膜厚度年增加值计算如下:随访值-基线值随访时间,单位为。  心脑血管事件随访 心脑血管事件在本研究中定义为心肌梗死、缺血性脑卒中以及心血管事件相关的死亡。心肌梗死:典型心肌缺血临床症状、心电图显示心肌梗死变化、血心肌坏死标记物升高;缺血性脑卒中:脑缺血相关临床症状、头颅脑缺血坏死灶;死亡:与心、脑血管事件相关的死亡。  采用统计软件进行统计学处理。采用相关分析;用多重线性回归分析、年龄、性别、血脂、血糖、血压和的相互关系;用方差分析和检验进行组间比较。以<为差异有统计学意义。 [1] [2] [3] [4] 2 C (Hs-CRP)Hs-CRP (CIMT)CIMT Hs-CRP CIMT 1.1200710200810612a Hs-CRP 10mg/L /CIMT 0.9mm 751.21.2.175>5565BMI 28kg/m (TG) 1.7mmol/L (TC)5.18mmol/L -(LDL-C) 3.37mmol/L -(HDL-C) 1.04 mmol/L 2(T2DM)Hs-CRP 4Hs-CRP A 0.8mg/L B 0.8 1.40mg/L C 1.41 2.0mg/L D 2.0mg/L 1.2.2Hs-CRP 3mL IMMAGE ()Hs-CRP 0.2mg/L 1.2.3CIMT 7.5MHz (1cm )6CIMT ()/(mm/a)1.2.4CT 1.3SPSS11.0Pearson Hs-CRP CIMT 0.051资料和方法研究对象 方法 统计学处理 q P 摘 要:关键词:中图分类号:文献标识码:文章编号:目的 方法结果结论DOI:C (Hs-CRP)75Hs-CRP 4Hs-CRP TC LDL-C HDL-C TG 6121824BMI 2Hs-CRP (0.05)2(=0.57)BMI 2Hs-CRP CIMT (0.01)Hs-CRP (=0.57)244CIMT Hs-CRP C R 741B 1005-4057(2012)05-0507-03 10.3969/j.issn.1005-4057.2012.05.010 探讨高敏反应蛋白对动脉硬化及心血管事件发生的早期诊断意义。名动脉硬化 患者根据基线四分位值将其分为组,比较其空腹血浆、、、、、血糖、临床一般情况及初次就诊和、、、个月复查时的颈动脉内中膜厚度。、吸烟、收缩期高血压、他汀类药物和型糖尿病均与相关<,尤以型糖尿病最明显。多重线性回归分析模型显示,、吸烟、收缩期高血压、他汀类药物、型糖尿病和均与有关<,尤其是最明显β。个月随访期间,第区组增长最明显。有独立的动脉硬化和心血管事件预测价值。 高敏反应蛋白;颈动脉内中膜厚度;心血管事件  P r P

常规C反应蛋白与高敏C反应蛋白的区别

常规C 反应蛋白与高敏C 反应蛋白有啥不同? 2016-01-27 07:05 来源:丁香园作者:hzdlj字体大小-|+ 经常会有丁香园站友在论坛里问「高敏 C 反应蛋白」和「常规 C 反应蛋白」的区别,也有很多站友作出了较为科学的解释。但是总体来看,很多解释虽然正确,但用词太专业,导致难以理解。 为便于大家理解这两个概念,特此力争通过通俗易懂的语言来谈谈自己的看法。 超基础知识:C 反应蛋白 各位看官,我们首先来说说 C 反应蛋白,这是一个大家都很熟悉的指标,无论是诊断学的教科书,还是临床生化、临床免疫学的教科书,都将这个指标描述成「炎症指标」。换句话说,外周血C 反应蛋白增高,提示体内可能存在较为强烈的炎症反应。因此,C 反应蛋白常常用于很多感染性疾病和自身免疫性疾病的诊断和严重程度的评估。 C 反应蛋白与心血管疾病 好了,花开两朵,各表一支。 现在我们来说说心脑血管疾病的发病机制。长期以来,人们认为脂质沉积是导致心脑血管疾病(急性心肌梗死、脑梗赛、脑出血、冠心病等)的主要原因,因此采用了各种降脂药去防治心脑血管疾病。然而,在预防心血管疾病的过程中,人们发现一个问题:单独降脂虽然可以很大程度上降低心脑血管疾病的发病率,但是并不能做到完全阻止心脑血管疾病的发生,这就说明:脂质沉积学说并不能完全阐释心脑血管疾病发生的原因,肯定还有别的发病机制存在。 为此,人类进行了不懈的努力跟探索。近几十年来年,人们逐渐认识到:炎症反应与心脑血管疾病存在密切的关系,支持这一学说的一个证据就是很多研究发现外周血C 反应蛋白水平与心脑血管疾病有关。 这些证据大多来自一些队列研究,也就说,研究者先找一些普通人来(当然是很大的样本),检测一下他们的C 反应蛋白(此时的C 反应蛋白暂且称为「基线(baseline)C 反应蛋白」),然后对这些人进行随访,分析是不是当初基线C 反应蛋白水平越高的人,将来发生心脑血管事件的概率越高。 结果他观察到如果一个人平时的C 反应蛋白水平很高,将来发生心血脑管事件的风险也越高。也就是说,C 反应蛋白是心脑血管事件的危险因子。 然而,在开展C 反应蛋白与心脑血管事件的研究中,有一个问题令研究者感到很「不爽」:就是大部分健康人的C 反应蛋白水平低于检测下限(10 mg/L),但是他们仍然会发生心脑血管事件。这一现象一个可能的解释就是检测下限(10 mg/L)以内的C 反应蛋白水平的变化,与心脑血管疾病仍然有关。 C 反应蛋白的监测下限问题 关于检测下限的概念,容我啰嗦两句。理论上讲,任何一种检测方法,只要你放标本上去,肯定能出一个数,报一个检测结果。但在实际工作中,对于低浓度的样本,检测结果的变异就十分巨大。比如我们最熟悉的血红蛋白检测,如果患者的血红蛋白是100 g/L,检测系统一不小心检测成了101 g/L,变异才1%,显然是无伤大雅,完全可以接受。但是如果一个标本的血红蛋白是1 g/L,检验系统一不小心将其弄成了2 g/L,误差就是100% 了,显然是无法接受的。人们常把检测下限定在变异为20% 时的浓度。 有些医院出的普通C 反应蛋白报告,虽然浓度在10 mg/L 以下,但结果可能就是不可靠的。当然,不同的C 反应蛋白检测系统的检测下限略有差异,一般都在5-10 mg/L。 高敏C 反应蛋白 我们继续说检测下限的C 反应蛋白水平与心脑血管疾病的关系。 举个例子来说明:如果患者 A 的 C 反应蛋白水平是 1 mg/L,患者B 的C 反应蛋白水平

_高敏C-反应蛋白的临床意义与检测方法

高敏C-反应蛋白的临床意义与检测方法 瞿国英1综述,唐志慧2审校(1.上海市潍坊社区卫生服务中心 200122;2.上海市浦南医院) 【关键词】 高敏C-反应蛋白; 心血管疾病; 新生儿感染 中图分类号:R446.1文献标志码:A文章编号:1672-9455(2009)08-0603-02 近年来随着检测技术的发展,高敏C-反应蛋白(hig h se n-sitivity C-reactiv e protein,hs-CRP)检测受到越来越广泛的关注。本文对CRP的生物学特性,特别是在心血管疾病和新生儿感染性疾病中的临床应用及检测方法等几方面进行扼要综述。 1 生物学特性 C-反应蛋白是一种由肝脏合成的典型的急性时相反应蛋白,因能和肺炎链球菌荚膜C多糖结合而得名。CRP是环状五球体蛋白,相对分子质量约120kd,由5个(每个含206个氨基酸)相同单体以非共价键构成,这个特征性的结构把CRP归类于pe ntr axins族里(pentraxins为在所有脊椎动物和多数无脊椎动物中发现的具有免疫防御性钙结合蛋白)[1]。 在细胞因子白细胞介素-6(IL-6)家族诱导下,CRP在肝脏中合成迅速,在急性相反应高峰时肝脏合成蛋白能力的20%是直接指向C RP的合成。CRP在炎性反应感染因素和组织损伤6h后逐渐上升,到24~48h到达顶峰,其半衰期约为19 h,但一旦其与配体结合,可能更快速地被清除[1]。 CRP能结合多种内源性和外源性的物质(配体),然后通过调理作用促进它们从血液及组织中清除。在钙离子存在的情况下,CRP能结合坏死的内源性物质和衰老的细胞,经磷酸胆碱结合DN A和组蛋白。当正常的脂质双层结构被破坏,致使内部磷脂暴露时,CRP即发生与宿主细胞的结合,大多数外源性物质是细菌、真菌和寄生虫中的细胞壁磷酸胆碱。CRP 能识别分布在微生物或改变了机体组织上的配体,并与配体结合,激活补体系统;能与T细胞特异结合,改变或限制其功能;还能抑制血小板的聚集及活化反应;CRP还具有重要的免疫调节作用,能增加巨噬细胞的活性和运动,促进对各种细菌和异物的吞噬,刺激单核细胞表面的组织因子表达及其他免疫调节功能[2]。 CRP的参考范围:成人和儿童为0.068~8.2mg/L,中值为0.58mg/L;新生儿和脐带血小于0.6mg/L;出生后第4天至1个月婴儿小于1.6mg/L;分娩时妇女小于47mg/L[1]。 hs-CRP检验即通过胶乳增强等方法可检测出(0.1~10 mg/L)的浓度,该水平已被证实可预示冠状动脉疾病发生及治疗后的预后判断。另外,在新生儿感染性疾病中可提高诊断准确性,因新生儿肝脏发育不完全成熟,不能快速产生大量C RP,无法达到常规方法所能检测到的浓度水平[3]。 2 临床应用 2.1 hs-C RP在心血管疾病中的应用 冠心病(cor onary hear t disease,CH D)是发达国家人口死亡的主要原因,在我国其发病率也在逐年增加,严重危害着人们的身体健康。冠心病的常见危险因素除高血脂、高血压、吸烟、糖尿病、家族史、肥胖等,已确定了共246个危险因素。传统危险因素不能完全阐明疾病的发生,随着基因组学和蛋白质组学的发展,将有更多的因素用于CHD的临床评价。近年来已经明确炎性反应机制在C HD的发病和并发症中起重要作用[4]。 实验室和临床数据已证实,动脉粥样硬化并不是一种简单的脂质沉积疾病,炎性反应在动脉粥样硬化的起始和进展过程中也扮演着一个关键性的角色。在动脉壁的粥样硬化中主要有单核细胞、T淋巴细胞的大量浸润。在斑块的表面即斑块最脆弱的位置,炎性反应细胞大量渗入,使斑块不稳定而爆裂。此过程中的细胞因子引起肝脏合成CRP增加。CRP在动脉粥样硬化的形成和发展中有以下几个方面的作用:(1)调节巨噬细胞摄入低密度脂蛋白胆固醇有助于泡沫细胞的形成;(2)刺激巨噬细胞产生血栓前组织因子;(3)激活粥样斑块内的补体系统,导致斑块不稳定,增强不稳定斑块的血管活性;(4)诱导粘连分子表达;(5)致敏内皮细胞,产生CD4+T细胞介导的细胞毒作用造成损坏,C RP水平升高与内皮细胞功能衰竭和动脉粥样硬化的进程相关[2]。 近几年来根据对各种类型动脉粥样硬化的研究,证实hs-CRP在急性冠状动脉综合征中具有预测价值和在表观健康人群中具有预测能力,被认为是心血管事件危险最强有力的预测因子之一。许多前瞻性研究已证实,在已确诊的心血管疾病个体中,hs-CRP是将来发生心血管疾病发病率和死亡率的预测指标。更大的临床价值是证实hs-CRP浓度能预测首次冠状动脉疾病的发作和危险性。根据hs-CRP的浓度值,每个患者将被归入某一危险性等级中:即小于1mg/L为相对低危险, 1.0~3.0mg/L为中度危险,大于3.0mg/L为高度危险。在长期的研究过程中,hs-CRP的个体化变异性较低,是良好、稳定的生化预测指标。但如hs-CRP>10mg/L,建议2周后复查,以排除感染、炎性反应或组织损伤所致升高[5,9]。 另外,hs-CRP可作为心血管疾病治疗的预后判断,他汀类药物和阿司匹林治疗可以降低CRP水平及心血管事件危险度。研究证明,阿司匹林和普阀他汀2种药物均具有抗炎的特性,对hs-CRP浓度增高人群可有效减少将来冠状动脉事件的发生。研究者们一直在寻找合适的治疗措施,通过对hs-C RP 的监测,试图降低其浓度水平,以达到控制C HD发病的危险性[9]。 2.2 hs-CRP在新生儿感染性疾病中的应用 新生儿感染是儿科临床较常见的疾病,特别是新生儿败血症有很高的发病率和死亡率,诊断和预后依靠早期发现和有效的抗生素治疗,所以需要有一个敏感、特异的细菌感染性指标。最初的临床指标对诊断败血症没有特异性,但治疗却必须立即进行。另外,微生物学培养需经72h后,而且并不能在大多数感染者中检出。因此在诊断确定以前,抗生素治疗成为新生儿感染的怀疑患者常规的治疗手段。过去由于对CRP检测方法的敏感性不同,而且新生儿由于肝脏功能的不完全成熟,不能产生足够准确计量的浓度水平,所以对CRP应用于新生儿感染诊断有过长期的争论[3]。研究发现,健康新生儿血清hs-CRP从出生后到1个月内的平均值为0.033mg/L(95%CI,0.012~0.32mg/L )。由于分娩条件的不同,新生儿出生后hs-CRP浓度水平可能有一个生理性的增高,但一般不会超出1.6mg/L,而且随着

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