家兔急性弥漫性血管内凝血

家兔弥漫性血管内凝血

摘要：

目的：复制急性实验性DIC动物模型，通过血浆鱼精蛋白副凝试验、纤维蛋白原定量、血小板计数所测的几项血液学实验结果，讨论急性DIC的发病机制，并初步了解检查急性DIC的几项血液学的常规方法。

方法：通过给家兔耳缘静脉缓慢注射兔脑粉制作急性实验性DIC动物模型，测定家兔注入兔脑粉前5分钟、注入兔脑粉开始后10分钟及40分钟后3P实验、纤维蛋白原定量和BPC的血液学实验结果并比较。

结果：DIC前后血压、呼吸频率、血小板计数、3P试验、纤维蛋白原定量。

结论：DIC为促凝物质大量入血引发凝血系统被激活，凝血因子和血小板大量消耗，继发纤溶系统激活，进而发生出血综合征。

关键词：弥漫性血管内凝血;家兔DIC模型;血浆鱼精蛋白副凝试验;纤维蛋白原定量;血小板计数

前言：弥漫性血管内凝血是指在某些致病因子作用下凝血因子或血小板被激活，大量可溶性促凝物质入血，弥漫性微血管内血栓形成，继之因凝血因子及血小板被大量消耗及纤维蛋白溶解亢进而发生的出血综合征。临床上，DIC患者主要表现为出血、休克、脏器功能障碍和贫血。

实验室检查是DIC诊断的一项重要依据，有确诊意义的化验能直接反映凝血酶或纤溶酶活性。基于此，为了了解DIC的血液学变化和发病机制，初步了解检查急性DIC的几项血液学的常规方法，我组进行了本次实验。

1.实验材料：

1.1动物：健康、清洁家兔一只（母，1.95kg，南方医科大学实验动物中心提供）

1.2器材：电热恒温水浴箱，秒表，小试管架，5ml试管×8，血细胞计数版，离心机，

分光光度计，显微镜，注射器（1ml一支，5ml一支，10ml一支，50ml一支），加样

枪，2ml离心管×6，家兔手术台，哺乳动物手术器械，手术线，纱布，粗剪，止血

钳，组织剪，眼科剪，眼科镊，动脉夹。

1.3药品和试剂：4%兔脑粉生理盐水浸液，1%硫酸鱼精蛋白液，血小板稀释液，20%乌

拉坦，0.1%肝素生理盐水，生理盐水，饱和氯化钠溶液。

1.4仪器设备：PcLab计算机生物信号采集处理系统，压力换能器，动静脉插管，三通管

2.测量指标：

2.1凝血系统指标：血小板计数、纤维蛋白原定量

2.2纤溶系统指标：鱼精蛋白副凝试验（3P试验）

3.实验动物的制备方法及步骤：

3.1动物麻醉固定备皮：挑选家兔，捉拿，称量体重（Kg），按家兔体重计算麻醉量（20%

乌拉坦5ml/kg），耳缘静脉缓慢注射，待家兔四肢肌肉松弛，疼痛反射、角膜反射消

失，呼吸平稳后，将其固定于手术台上。用粗剪去除家兔颈部兔毛。

3.2静脉插管：沿家兔颈正中线切开皮肤，钝性分离右侧颈静脉，穿双线，闭夹近心端，

结扎远心端，剪开静脉插入预先充满生理盐水的压力换能器的导管。

3.3动脉插管：钝性分离出左颈总动脉，穿双线，结扎远心端，夹闭近心端，剪开动脉

插入预先充满生理盐水并与PcLab数据采集系统通过压力换能器相连的导管。

待各项指标稳定后，观察并记录正常血压、呼吸。

3.4取血样本：用充有0.4ml 0.1%肝素生理盐水的5ml注射器经颈总动脉取血3ml，分两

管，测定正常指标：3P试验，纤维蛋白原定量，血小板计数。

3.5复制DIC模型：经颈静脉缓慢注射4%兔脑粉溶液（3ml/kg），注射速度为1~2ml/min。

3.615min后测定并记录血压、呼吸，采血测定3P试验、纤维蛋白原、血小板计数并记

录。

3.745min后重复上述测量一次并记录。

4.试验项目：

4.1血小板计数(BPC)：吸血小板稀释液0.38ml于一小试管内，用血红蛋白吸管取血20

μl，立即加入血小板稀释液内，充分摇匀后，用滴管将上述混悬液一小滴滴入计数板内，静置5min后，用高倍镜计数5个中方格内血小板数，乘以1000，得每立方毫米血小板数。

4.2血浆鱼精蛋白副实验(3P试验)：取血浆0.4ml置于小试管内，加入1%硫酸鱼精蛋白

液0。1ml，混匀，室温下静置30min，于观察终点前，将试管轻轻摇动，有白色纤维或凝块为阳性，均匀浑浊、无白色纤维为阴性。

4.3纤维蛋白原定量（饱和盐水法）：

4.3.1取血浆3ml置于试管中，加入饱和氯化钠溶液2.7ml,充分混匀，置37℃水浴中

孵育3min

4.3.2以生理盐水代替饱和氯化钠溶液，进行同样操作，作为对照管。

4.3.3以对照管调零，测出光密度（波长520mm）后，计算纤维蛋白原含量。

5.实验结果：

表1 DIC前后家兔各项指标的观察与记录

血压(mmHg) 呼吸频率

(次/分)

血小板数量

（109/L）

纤维蛋白原定量

(g/L)

3P实验结果

正常状态150/130 57 160 0.2 阴性

DIC后15min 95/82 66 86 1.62 阳性

DIC后45min 65/46 80 60 0.16 阳性

6.结果分析：

6.1以正常状态的指标为标准，DIC后15min，家兔舒张压和收缩压均下降，弥漫性血

管内凝血导致的循环系统衰竭。呼吸略微增加，可能为循环衰竭引起的血中CO2

分压的增加导致呼吸中枢的兴奋。血小板数量减少，说明由于凝血物质兔脑粉的入

血，凝血系统被激活，血小板大量消耗。纤维蛋白原含量增加，说明凝血系统被激

活，大量凝血因子被释放。3P试验结果阳性，说明血浆中纤维蛋白单体增多，凝

血系统被激活。此时，家兔处于DIC高凝期。

6.2DIC后45min，家兔舒张压和收缩压进一步下降，说明循环系统进一步衰竭，导致休

克，呼吸频率增加，说明家兔出现呼吸困难和呼吸衰竭。血小板数量进一步减少，说明由于凝血物质兔脑粉的入血，凝血系统迅速被激活，随着时间的延长，血小板进行性减少。纤维蛋白原较正常状态值和DIC后都要少，说明DIC后45min时，纤维蛋白原大量消耗。3P试验呈阳性，说明血浆中纤维蛋白单体的增多，凝血系统的激活。此时，家兔处于DIC消耗性低凝期。

7.实验结论：

7.1弥漫性血管性凝血（DIC）:促凝物质的大量入血，外源性凝血系统激活，凝血因子和

血小板被激活，使凝血酶增多，微循环中形成广泛性的微血栓，继而因凝血因子和血小板的大量耗竭，引起继发性纤溶系统的激活，机体出现以止、凝血障碍为特征的病理生理过程。

7.2DIC时，大量微血栓引起微循环衰竭，可导致缺血性器官功能障碍。微血栓主要阻塞

局部微循环，造成器官缺血、局灶性坏死。严重或持续时间较长可致器官功能衰竭。

DIC轻者可影响个别器官的部分功能，重者可累及多个器官，同时或相继出现两种或

两种以上脏器功能障碍，发生多器官功能衰竭，这也是DIC引起患者死亡的重要原

因之一。

7.3DIC导致休克：大量微血栓形成阻塞微血管，使回心血量减少；广泛出血可使血容量

减少；心肌损伤使心排出量减少；FⅩⅡ的激活可激活激肽系统、补体系统和纤溶系

统，产生一些血管活性物质，使微血管平滑肌舒张，管壁通透性增加，外周阻力下

降，回心血量减少；FDP的某些成分也可以增强组胺激肽的作用，促进微血管扩张。

导致微循环障碍，促进休克的形成。

7.4DIC的治疗:

7.4.1DIC早期（弥漫性微血栓形成期）以微血栓形成为主，此期治疗目的在于抑制

广泛性微血栓形成，防止血小板及各种凝血因子进一步消耗，因此治疗以抗

凝为主。

7.4.2DIC中期（消耗性低凝期）此期微血栓形成仍在进行，抗凝治疗仍然必不可少，

但因凝血因子进行性消耗，临床中引发出血情况，故在充分抗凝基础上，应

进行补充血小板和凝血因子的替代治疗。

7.4.3DIC晚期（继发性纤溶亢进期）此期微血栓形成已基本停止，继发性纤溶亢进

为主要矛盾。若临床确认纤溶亢进是出血首要原因，则可适量应用抗纤溶药

物，同时，由于凝血因子和血小板消耗，也应积极补充。

参考文献:

1.王建枝,殷莲华.病理生理学第八版.人卫出版社 2013

2.朱大年,王庭槐.生理学第八版.人卫出版社 2013

3.金春华.机能实验学.科学出版社 2012