XXX药品中残留溶剂内标法检测方法验证方案(DOC)

XXX中甲醇、乙醇、正己烷、甲苯残留检

测方法验证方案

方案编号:

姓名职位签名日期起草XXX 质量研究员

审核XXX 质量副部长

审核XXX QA

批准XXX 质量部长

概述 XXX是生产XX的起始物料,生产该物料工艺中使用的溶剂有:甲醇、乙醇、正己烷、甲苯。根据ICH要求需要开发方法对这些残留溶剂进行检测,该方法属于杂质定量分析,根据USP<1225>要求需要验证的内容有:系统适用性、专属性、线性、范围、灵敏度、准确度、重复性、中间精密度、耐用性。

1.验证所需试剂

甲苯 AR级或更高级别

甲醇 AR级或更高级别

乙醇 AR级或更高级别

正己烷 AR级或更高级别

正庚烷 AR级或更高级别

N,N-二甲基甲酰胺(DMF) HPLC级或更高级别

2.试验所需仪器或设备

气相色谱仪带有FID检测器

气相色谱柱DB-624,30 m×0.53 mm,3.0μm石英毛细管柱

高纯氮气

量瓶

移液管

电子分析天平(十万分之一)

3.验证内容

3.1系统适用性

目的:对由分析设备、实验操作、被分析供试品组成的完整的系统进行评估。接受标准:

计算对照溶液图谱中甲醇、乙醇、正己烷、正庚烷、甲苯峰面积的相对标准偏差RSD%,均不得过5%。

3.1.1溶液制备见附件分析方法中对照溶液的制备。

3.1.2分析

待色谱系统稳定后,按下面序列表进样分析。

名称进样针数

空白(溶剂)2针或更多

对照品溶液(S)6针

3.2专属性

目的:确保采用的方法能正确测定出被测物的特性。

接受标准:

?空白溶液图谱中目标峰出峰位置附近无显著干扰峰。

?分离度测试溶液(RS)图谱中目标峰与相邻峰的分离度应不小于1.5。

3.2.1溶液制备

?样品溶液制成浓度约为20mg/ml的DMF溶液。称取1.0g样品置50ml量瓶

中,加溶剂约30ml使溶解,加溶剂定容至刻度,摇匀。标记为Sample。

?乙醇定位溶液制成乙醇浓度为0.08%(v/v)的DMF溶液。量取乙醇40μl

置50ml量瓶中加溶剂溶解并稀释至刻度,摇匀,标记为Ethanol。

?甲醇定位溶液制成甲醇浓度为0.002%(v/v)的DMF溶液。量取甲醇50μl

置50ml量瓶中加溶剂溶解并稀释至刻度,摇匀,标记为MCBY,再量取该溶液1ml置50ml量瓶中加溶剂溶解并稀释至刻度,摇匀,标记为Methanol。

?正己烷定位溶液制成正己烷浓度为0.002%(v/v)的DMF溶液。量取正己

烷50μl置50ml量瓶中加溶剂溶解并稀释至刻度,摇匀,标记为HCBY,再量取该溶液1ml置50ml量瓶中加溶剂溶解并稀释至刻度,摇匀,标记为Hexane。

?甲苯定位溶液制成甲苯浓度为0.002%(v/v)的DMF溶液。量取甲苯50μl

置50ml量瓶中加溶剂溶解并稀释至刻度,摇匀,标记为TCBY,再量取该溶液1ml置50ml量瓶中加溶剂溶解并稀释至刻度,摇匀,标记为Toluene。

?正庚烷定位溶液制成正庚烷浓度为0.04%(v/v)的DMF溶液。量取正庚烷

20μl置50ml量瓶中加溶剂溶解并稀释至刻度,摇匀,标记为Heptane。

?分离度测试溶液制成含供试品20mg/ml、其他各溶剂浓度同工作对照品溶

液的混合溶液。分别量取乙醇40μl、正庚烷20μl、MCBY溶液1ml、HCBY 溶液1ml、TCBY溶液1ml置已称有1.0g样品并加30ml溶剂溶解的量瓶中,再加溶剂定容至刻度,摇匀,标记为RS。

3.2.2分析

待色谱系统稳定后,按下面序列表进样分析。

名称进样针数

空白(溶剂)2针或更多

Sample 1针

对照品溶液(S)6针

Ethanol 1针

Methanol 1针

Hexane 1针

Toluene 1针

Heptane 1针

分离度测试溶液(RS)1针

3.3线性

目的:测试在给定的范围内,待测物的响应值与供试品中被分析物的浓度成正比例关系的程度。

接受标准:

以甲醇、乙醇、正己烷、甲苯测试所得峰面积与正庚烷峰面积比值为纵坐标,浓度为横坐标分别计算线性相关系数r,均应不小于0.950。

3.3.1溶液制备

量取乙醇6 ml、甲苯、甲醇、正己烷各0.5ml,置50ml量瓶中,加溶剂稀释至刻度摇匀,作为线性储备溶液a。

量取线性储备溶液a 0.5ml置50ml量瓶中,加溶剂稀释至刻度摇匀,标记为线性储备液b.

取线性储备溶液a 1ml,内标溶液5ml置50ml量瓶中,加溶剂至刻度,摇匀,标记为L-01。

取线性储备溶液a 1.5ml,内标溶液10ml置100ml量瓶中,加溶剂至刻度,摇匀,标记为L-02。

取线性储备溶液a 0.5ml,内标溶液5ml置50ml量瓶中,加溶剂至刻度,摇匀,标记为L-03。

取线性储备溶液a 0.5ml,内标溶液10ml置100ml量瓶中,加溶剂至刻度,摇匀,标记为L-04。

取线性储备溶液b 2ml,内标溶液1ml置10ml量瓶中,加溶剂至刻度,摇匀,标记为L-05。

取线性储备溶液b 1ml,内标溶液1ml置10ml量瓶中,加溶剂至刻度,摇匀,标记为L-06。

取线性储备溶液b 1ml,内标溶液2ml置20ml量瓶中,加溶剂至刻度,摇匀,标记为L-07。

标记乙醇(% W/W)正己烷(%

W/W)

甲醇(% W/W)甲苯(% W/W)

L-01 9.48 0.66 0.79 0.87 L-02 7.11 0.495 0.5925 0.6525 L-03 4.74 0.33 0.395 0.435

L-04 2.37 0.165 0.1975 0.2175

L-05 0.948 0.066 0.079 0.087

L-06 0.474 0.033 0.0395 0.0435

L-07 0.237 0.0165 0.01975 0.02175

3.3.2分析

待色谱系统稳定后,按下面序列表进样分析。

名称进样针数

空白(溶剂)2针或更多

对照品溶液(S)6针

空白(溶剂)1针或更多

L-07、L-06、L-05、L-04、L-03、L-02、L-01 各1针

3.4检出限

目的:确定试样中的被测溶剂能够被检出的最低量。

接受标准:检出浓度不得高于限度的15%,信噪比应≥3.

取线性项下的溶液,当某个溶液中的某个溶剂峰信噪比不小于3时,对应溶液浓度即可作为该溶剂检出限浓度,即为检出限;如果L-07溶液中某个溶剂峰信噪比大于10,则以L-07作为该溶液检出限溶液,不再另外稀释。

3.5定量限

目的:确定试样中的被测溶剂能够被定量的最低量。

接受标准:检出浓度不得高于限度的50%,信噪比应≥10.

当线性项下的某个溶液中的某个溶剂峰信噪比不小于10,该溶液浓度即可作为定量限浓度,即为定量限。如L-07溶液中某个对照品峰信噪比大于10,则以线性中L-06作为定量限溶液,不再另外稀释。

3.6方法准确度

目的:考察残留溶剂分析方法测定结果与真实值或参考值接近的程度。

接受标准:

?单一回收率应在75%~125%之间。

?各浓度水平内的回收率RSD值应不大于20%。

3.6.1溶液制备

3.6.1.1空白样品溶液取XXX样品一批,按附件方法供试品溶液制备精密称取三份,制备成供试品溶液,分别标记为:U-1、U-2、U-3。

3.6.1.2 50%工作浓度准确度测试溶液量取乙醇20ml、正己烷0.5ml、甲苯0.5ml、甲醇0.5ml置100ml量瓶中,加溶剂稀释至刻度,摇匀,再量取该0.5ml、内标溶液25ml置250ml的量瓶中,加入溶剂稀释至刻度摇匀,作为50%浓度稀释液。称取1.0g样品置50ml量瓶中,加50%浓度稀释液使溶解,再加溶剂定容至刻度,摇匀。平行制备三份,标记为CR-01、CR-02、CR-03。

3.6.1.3 100%工作浓度准确度测试溶液量取乙醇20ml、正己烷0.5ml、甲苯0.5ml、甲醇0.5ml置100ml量瓶中,加溶剂稀释至刻度,摇匀,再量取该1ml、内标溶液25ml置250ml的量瓶中,加入溶剂稀释至刻度摇匀,作为100%浓度稀释液。称取1.0g样品置50ml量瓶中,加100%浓度稀释液使溶解,再加溶剂定容至刻度,摇匀。平行制备三份,标记为CR-04、CR-05、CR-06。

3.6.1.4 150%工作浓度准确度测试溶液量取乙醇20ml、正己烷0.5ml、甲苯0.5ml、甲醇0.5ml置100ml量瓶中,加溶剂稀释至刻度,摇匀,再量取该1.5ml、内标溶液25ml置250ml的量瓶中,加入溶剂稀释至刻度摇匀,作为150%浓度稀释液。称取1.0g样品置50ml量瓶中,加150%浓度稀释液使溶解,再加溶剂定容至刻度,摇匀。平行制备三份,标记为CR-07、CR-08、CR-09。

名称150% Level 100% Level 50% Level

乙醇 4.74% (w/w) 3.16% (w/w) 1.58% (w/w)

正己烷0.099% (w/w) 0.066% (w/w) 0.033% (w/w)

甲醇0.1185% (w/w) 0.079% (w/w) 0.0395% (w/w)

甲苯0.1305% (w/w) 0.087% (w/w) 0.0435% (w/w) XXX 20 mg/mL 20 mg/mL 20 mg/mL

正庚烷0.04% (v/v) 0.04% (v/v) 0.04% (v/v)

3.6.2分析

待色谱系统稳定后,按下面序列表进样分析。按内标法测定准确度测试溶液中甲醇、乙醇、正己烷、甲苯的量,扣除空白残留,而后除以溶液配制时甲醇、乙醇、正己烷、甲苯的加入量,即得回收率。

名称进样针数

空白(溶剂)2针或更多

对照品溶液(S)6针

空白(溶剂)1针或更多

空白样品溶液(U-1、U-2、U-3)各1针

各1针

准确度测试溶液(CR-01、CR-02、CR-03、

CR-04、CR-05、CR-06、CR-07、CR-08、CR-09)

准确度测试溶液测得量-空白样品含量

计算公式:回收率%= ×100%

对照加入量

3.7精密度

由于实际供试品中目标残留溶剂有些能够检出,有些未检出,此时比较供试品含量测定结果无法反映精密度。故以准确度项下100%工作浓度测试溶液代替供试品考察精密度。

3.7.1重复性

目的:在相同的操作条件下,测试在较短时间间隔精密度。

接受标准:六份测试溶液所得图谱中甲醇、乙醇、正己烷、甲苯测得量的RSD 值不得过20%。

3.7.1.1溶液制备

按附件中供试品溶液制备方法6.2.3 项制备6份,标记为U-1、U-2、U-3、U-4、U-5、U-6。

3.7.1.2分析

待色谱系统稳定后,按下面序列表进样分析。

名称进样针数

空白(溶剂)2针或更多

对照品溶液(S)6针

空白(溶剂)1针或更多

重复性测试溶液(U-1、U-2 、U-3、U-4、U-5、U-6)各1针

3.8.2 中间精密度

目的:按照重复性实验的测定程序,评价在改变实验员、日期条件下不同仪器上所得结果之间的精密度。

接受标准:

两个分析人员测得每批残留溶剂结果应一致:甲醇、正己烷、甲苯残留量绝对差值应不得过0.1%;乙醇残留量绝对差值应不得过0.7%.

3.8.2.1溶液制备取三批产品,由两个不同的分析员在不同日按供试品溶液制备方法每批各制备两份溶液并采用不同仪器进行检测,按内标法计算甲醇、乙醇、正己烷、甲苯的残留量。

3.8.2.2分析待色谱系统稳定后,两个分析人员各按下面序列表进样分析。名称进样针数

空白(溶剂)2针或更多

对照品溶液(S)6针

空白(溶剂)1针或更多

中间精密度测试溶液lot1(U-1、U-2)各1针

中间精密度测试溶液lot2(U-1、U-2)各1针

中间精密度测试溶液lot3(U-1、U-2)各1针

3.9 耐用性

目的:确认在测定条件有微小变动时,测定结果不受影响的承受程度。

接受标准:

改变不同色谱条件后,系统适用性应符合要求。即对照溶液图谱中甲醇、乙醇、正己烷、正庚烷、甲苯峰面积的相对标准偏差RSD%值,均不得过5%。

3.9.1溶液制备按附件中6.2.2.4项对照溶液制备方法制备。

3.9.2分析

3.9.2.1不同载气流速

将载气流速分别设置为4.8ml/min、5.2ml/min,其余色谱条件按附件中色谱条件设置。待色谱系统稳定后,按下面序列表进样分析。

名称进样针数

空白(溶剂)2针或更多

对照品溶液(S)6针

3.9.2.2 不同进样口温度

将进样口温度设置为235℃、245℃,其余色谱条件按附件中色谱条件设置。待色谱系统稳定后,按下面序列表进样分析。

名称进样针数

空白(溶剂)2针或更多

对照品溶液(S)6针

3.9.2.3不同检测器温度

将检测器温度设置为235℃、245℃,其余色谱条件按附件中色谱条件设置。待色谱系统稳定后,按下面序列表进样分析。

名称进样针数

空白(溶剂)2针或更多

对照品溶液(S)6针

3.9.2.4 不同色谱柱

采用两个批号的30 m×0.53 mm×3.0 μm石英毛细管柱,DB-624,其余色谱条件按附件中色谱条件设置。待色谱系统稳定后,按下面序列表进样分析。

名称进样针数

空白(溶剂)2针或更多

对照品溶液(S)6针

4.再验证周期

若分析方法的改变超出方法验证范围,或产品生产工艺发生改变,需对分析方法进行再验证。

5.偏差及纠正措施

该方法验证过程中,是否产生了偏差,若有,应将所出现的所有偏差和所采取的纠正措施应记录在“偏差清单”中。对因发生偏差而导致的任何变更控制,应有记录并在报告中加以说明。

序号项目偏差内容产生的原因及采取的措施负责人完成日期

6.附件1 分析方法

6.1色谱条件

仪器Agilent 6890 GC带FID检测器,或等效仪器

色谱柱DB-624,30 m×0.53 mm,3.0μm石英毛细管柱

载气氮气

流速 5.0ml/min

柱温起始温度40℃,以3℃/min的升温速率升温至80℃,

保持2min,再以30℃/min的升温速率升温至200℃,

保持10min。

进样口温度240℃

检测器温度240℃

进样量1μl

分流比5:1

6.2 溶液制备

6.2.1溶剂 N,N-二甲基甲酰胺(DMF)

6.2.2对照溶液

6.2.2.1内标溶液制备0.4%(V/V)的正庚烷的DMF溶液。精密量取0.4ml正庚烷置100ml量瓶,加溶剂稀释至刻度,摇匀。

6.2.2.2对照储备液1 量取乙醇20ml、正己烷0.5ml、甲苯0.5ml、甲醇0.5ml 置50ml量瓶中,加溶剂稀释至刻度,摇匀。

6.2.2.3对照储备液2 量取1ml对照储备液1置100ml量瓶中加溶剂稀释至刻度,摇匀。

6.2.2.4工作对照溶液量取2ml对照储备液2、1ml内标溶液置10ml量瓶中,加溶剂稀释至刻度,摇匀,标记为S。

Solvent % V/V %W/W in sample 密度(g/ml) Ethanol 0.08 3.16 0.789

n-Hexane 0.002 0.066 0.660

Methanol 0.002 0.079 0.793

Toluene 0.002 0.087 0.866

6.2.3 供试品溶液称取1.0g样品置50ml量瓶中,加溶剂约30ml使溶解,再

加内标溶液5ml,加溶剂定容至刻度,摇匀。平行制备两份,标记为U-1、U-2。

6.3 系统适用性

空白溶剂应无干扰,若有干扰,可积分时扣除空白。连续6针工作对照溶液

所得色谱图中各溶剂峰面积RSD值均应不得过5%。

6.4 计算

(Riu)(Du)(Vis)(dis)(100)

C%=────────────

(Ris)(Wu)

式中:dis为对照品的密度,g/mL(甲苯 0.866g/mL;甲醇 0.793g/mL;乙醇0.789g/mL;正己烷0.660g/mL);

Riu为供试品溶液图谱中溶剂与内标物正庚烷峰面积的比值;

Ris为工作对照溶液图谱中溶剂与内标物正庚烷峰面积的比值;

Du为供试品溶液稀释倍数,50;

Vis为工作对照溶液中溶剂的体积比,乙醇0.0008;正己烷0.00002;甲醇0.00002;甲苯0.00002.

Wu为供试品的称量,g。

6.5 限度标准

甲苯不得过0.5% ;正己烷不得过0.5%;甲醇不得过0.5%;乙醇不得过7.0%。

6.6数据处理

测试方法数据报告

残留溶剂(GC)系统适用性相对标准偏差RSD% 保留整数

溶剂残留量,%

≥0.1% 保留一位小数

≥0.05%且<0.1% <0.1%

<0.05% 未检出(ND)

7.附件2 典型图谱

7.1空白溶剂图谱

XXX药品中残留溶剂内标法检测方法验证方案(DOC)

7.2对照溶液图谱

XXX药品中残留溶剂内标法检测方法验证方案(DOC)

7.3供试品溶液图谱

XXX药品中残留溶剂内标法检测方法验证方案(DOC)

8.参考依据

8.1药品GMP指南(2010年版)之质量控制实验室与物料系统,129~142

8.2美国药典USP39<1225>

9.版本变更历史

版本日期主要变更描述

01 2016.8.25 初次起草

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