肝素钠生产工艺综述
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一、肝素分类
它与蛋白质结合在一起存在于肠肝素是哺乳动物体内含的一种粘多糖，粘膜、肺、肝等器官内，肝素与蛋白质分离提取后，具有抗凝血、抗血栓、降血脂等多种生理活性，是防止动脉粥样硬化，心脑血管疾病的显效药物。，相当肝素是由猪或羊黏膜提取，平均分子量为15000(标准)(1) 普通稳定。的称为低分子肝素。低分子肝素与普通肝6000(2) 通常把分子量小于素比较，其半衰期较长，抗血栓效果好，而抗凝出血倾向较弱，有取代、依诺肝素钠)(法安明普通肝素的趋势。近年临床常用的有：达肝素钠)。)克赛、低分子肝素钙(速避凝、那屈肝素钙(目前正在深入研究的肝素制剂中还有低抗凝活性肝素、改构型肝(3)
这些药物特点是具有低抗凝、高抗栓、作用时间长和出, 素、类肝素等血作用少的优点，很有开发前途。
二、肝素钠简介
Heparin Sodium Gansuna 英文名：拼音名：
本品系自猪的肠黏膜中提取的硫酸氨基葡萄糖的钠盐，属粘多糖类物而发挥抗凝作用。它对凝血过程的三)(AT-质，通过激活抗凝血酶ⅢⅢ精品文档．
精品文档个阶段均有影响，在体内外均有抗凝作用，可延长凝血时间、凝血酶原时间和凝血酶时间。口服不吸收，皮下、肌肉或静脉给药均吸收良好。（药典版）三、肝素钠检测
Heparin Sodium
英文名：拼音名：Gansuna
属黏多糖类本品系自猪或牛的肠黏膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的钠盐，的效价不得少每1mg 物质，具有延长血凝时间的作用。按干燥品计算，150 单位。于本品在水中易溶。【性状】本品为白色或类白色的粉末；有引湿性。40mg1ml 中含【比旋度】取本品，精密称定，加水溶解并稀释制成每°。E），比旋度应不小于＋35的溶液，依法测定（附录Ⅵ的2.5mg 分别加水制成每1ml 中含【鉴别】(1) 取本品与肝素标准品，第三法）试验，供试品和标准品所显斑点F 电泳法（附录Ⅴ溶液，照本品的水溶液显钠盐的鉴别反(2) 1.1 。～的迁移距离之比应为0.9
）。应（附录Ⅲ溶解后，依法测定（附录10ml0.10g ，加水酸碱度取本品【检查】7.5 。pH 值应为5.0 ～ⅥH），溶液应澄清无溶解后，，0.50g 加水10ml溶液的澄清度与颜色取本品的波长处测定，640nm A），在Ⅳ色；如显浑浊，照分光光度法（附录A号标准比色液（附录Ⅸ0.018；如显色，与黄色1 吸收度不得大于第一法）比较，不得更深。的溶液，照分光光度法（附4mg 取本品，加水制成每1ml 中含吸收度
280nm
在0.20的波长处，在）Ⅳ录A测定，260nm 其吸收度不得大于；精品文档．
精品文档。于0.15的波长处，其吸收度不得大万单位），加水40黏度精密称取本品（按实际测得的单位计算相当于量瓶中，研钵用水
冲洗并移入10ml适量研细，移入干燥并称定重量的水至刻度，摇℃内，俟温度平衡后，加25水浴量瓶中，将量瓶置25℃
的m 0.45μ计算供试品溶液的密度。取溶液，必要时用匀，称定重量，的毛mm第一法），用内径约为1 滤膜过滤，照黏度测定法（附录ⅥG 。测定其动力黏度，不得大于0.030Pa.s ℃±0.1 ℃细管，在25按干燥品计算，第二法）测定，照氮测定法（附录ⅦD总氮量取本品， 2.5 ％。1.3％～含总氮量应为）进行有机破ⅦC取本品约25mg，精密称定，照氧瓶燃烧法（附录硫
为吸收10ml燃烧瓶，以浓过氧化氢溶液1000ml0.1ml 与水坏，选用分2 15分钟后，加热缓缓煮沸液，俟生成的烟雾完全吸收后，置冰浴中％0.1 30ml，(pH3.7)50 ml钟，冷却，加乙醇－醋酸铵缓冲液，乙醇定至(0.05mol/L) 滴茜素红溶液0.3ml 为指示液，用高氯酸钡滴定液，的S(0.05mol/L) 1ml高氯酸钡滴定液相当于1.603mg 淡橙红色。每10.0％。按干燥品计算，含硫量不得少于减压干燥至恒重，60℃干燥失重取本品，置五氧化二磷干燥器内，在）。（附录ⅧL减失重量不得过5.0%％～遗留残渣应为28.0Ⅷ（附录N），0.50g 炽灼残渣取本品，依法检查41.0％。摇匀，量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，100ml 取本品钾盐0.10g ，置干燥℃（精密称取在；B作为供试品溶液（）另量取标准氯化钾溶液150精品文档．
精品文档量瓶中，加水溶解并稀释至，置1000ml1 小时的分析纯氯化钾191mg
）溶液稀释至刻度，摇匀，量瓶中，加（B 5.0ml，置50ml刻度，摇
匀）杂质检查法）ⅣD作为对照溶液（A）。照原子吸收分光光度法（附录的波长处分别测定，应符合规定。在766.5nm
第二法），含重金属不得H0.50g ，依法检查（附录Ⅷ重金属取本品三十。过百万分之
依法单位的溶液，中含1000热原取本品，加氯化钠注射液制成每1ml 2ml ，应符合规定。1kg ⅪD），剂量按家兔体重每注射检查（附
录
）测定，应符合规定；测ⅫD【效价测定】照肝素生物检定法（附
录得的结果应％。110 为标示量的91％～抗凝血药。【类别】
密封，在凉暗处保存。【贮藏】
肝素钠注射液【制剂】
四、肝素钠生产工艺流程
斤，按斤肠粘膜加入清水1001、盐解：将刮好的新鲜肠粘膜，每100PH 的工业盐，搅拌均匀，再加烧碱液调肠粘膜和水的总重量，加入4%分钟加水搅拌一次，度，加温时每50--5510--20值为8--9，缓慢升温度，96--982恒温小时，注意要间隔搅拌。恒温结束后，要快速升温
到目尼龙布过滤。分钟，趁热捞出上层的渣子。用恒温10100精品
文档．
精品文档注意：
肝素和蛋白质加盐过少，加盐过多会使下一步交换吸附含量超过规定，分离不完全，碱性过强，会使肝素降解破坏，收率下降。同时还能使
一些蛋白质溶解度增大，造成过滤困难。碱性不足造成提取液偏酸，则在高温的情况下，肝素迅速破坏，升温过急会使蛋白质早凝固，影响肝素的分解和溶出。时，5--5%3。2、吸附：待提取液温度冷至50--55度，应检测盐浓度为需用清水将树脂洗净已处理号的树脂。5%如树脂上含有盐水，即可加入分钟为宜，搅转/控干，方可使用。搅拌吸附6--8小时，转速60--80拌须使树脂上下翻动，否则吸附效果差，收率低。吸附完毕，弃去上层目的尼龙布过滤出树脂。加入提取液的树脂量：新吸附液，然后用100 ％。加入，旧树脂可按提取液的树脂可按提取液的5--6%8--10
度左右的温水，漂洗干净。再放入与树脂403、洗涤：过滤后的树脂用分钟，除去洗涤)10--20重量相等的盐溶液中(盐溶液的浓度为5%左右低分子肝素和一些蛋白质，然后将树脂过滤。的盐溶液中搅20--22%第一次洗脱将过滤号的树脂放入浓度为4、洗脱：过滤后将树脂控干进7。：小时，树脂和盐水的比例为10。5--6拌洗脱小时以上，树脂和盐，搅拌16--18%3行第二次洗脱，调盐溶液浓度为水的比例与第一次相同，过滤后的水即是药液。
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精品文档10--12PH值为调除杂：将稀碱水加入洗脱后的药液里，要快搅慢加，5、小时后，抽出上层药液，下沉的是杂质，且分钟，静止沉淀20搅拌2 渣子放另外桶内过滤。过滤后的药液和下次药液除杂时合并待用。
，即可加入5值为PH7--7。6、沉淀：将抽出除杂后的药液加入盐酸调由于酒精的浓度不同，(酒精进行沉淀。向药液里加入酒精要快搅
慢加。加盖密，用酒精计测量酒精度为30--35%因此沉淀肝素的酒精用量不等)小时。弃去废酒精收集糊状肝素。注意在抽出废酒精时，20封，沉淀以备集中脱不可抽动沉淀的肝素。将多次生产的肝素钠
浆收集在一起，水干燥。
的酒精内95%脱水：、将生产的肝素钠浆，用双层的确良布过滤后放入7小时，加盖密封。过滤后按上述方法重复一次，使其充分的将
20浸泡肝素上的水分交换下来。
、干燥：待肝素钠浆沥干后，放在不锈钢盘中烘干，用铲子来回的翻8度，注意温度低于要求是不易烘干的，温度高50--55动，温度保持在度时会使肝素钠的生物活性下降。干燥后的肝素很易吸潮，应及于60时用双层塑料袋密封包装，于通风干燥处存放。精品文档．
精品文档五、肝素钠精制新工艺,本工艺采用酶解结合氧化法精制肝素，在该过程中采用低温离心技术粗品肝素钠中残留杂蛋白在纯化过程
中很难解决在除酸性蛋白过程中，,被除去的缺点。在粗品肝素钠中
加入胰蛋白酶对这些杂蛋白进行酶解,从而提高精品肝素钠的效价和效价回收率。再结合一次氧化除杂过程1、工艺流程
2、溶解水浴℃50左右NaCI溶液进行溶解。称取适量肝素钠粗品加质量分数3% 小时，过滤除不溶性杂质。静置28.0加热，用NaOH
溶液调pH至、酶解法除蛋白3蛋白质复合物的形式存在，通过酶解
或盐解肝素在动物体内是以肝素-去除复合物的蛋白质成分，游离肝素。但在实际生产过程中，复合物的解离，蛋白质的除去是不完全的，粗品中总存在数量不等的蛋白质。粗可以进一步去除粗品中残存的结合蛋白质，不品肝素钠必须经过精制，的肝素活性得到释放而”“仅因杂蛋白的去除而提高效价，而且因被掩蔽获得较高活性。为此，利用蛋白水解酶专一水解蛋白的特点，并结合调采用酶解除蛋白法，该法能在除去蛋白质,酸除蛋白和氧化除蛋白方法时较少影响肝素总效价。使残留在肝素中的少量蛋白质降在肝素钠溶液中加入少量的胰蛋白酶，再结合调酸碱和氧化蛋白质复合物中解离出来，,从肝素-解成小分子肽制得精品肝素钠的效价和效加回收率均有不同程度提高。法除蛋白,精品文档．
精品文档，反应时间40℃7~9，温度pH 酶解反应条件：蛋白酶加入量0.05%，5h。4、调酸除蛋白加入亚硫酸氢钠作保护剂。在在调酸除蛋白过程中，为防止肝素失活, 低温下离心脱除蛋白。、氧化条件5 。，时间15h2/% pH8.5H2O2用量，温度25~27℃6、沉淀乙醇沉淀。抽出上清液得沉淀物，，加人等量的95%将氧化液调pH6.5 将沉淀物慢慢加无水酒精或丙酮中脱水。、干燥7 3，真空干燥小时以上即得精品。55℃
采用酶解结合过氧化氢一次氧化的肝素钠精制工艺，产品较白，且效价效价回收率以上，和效价回收率均高于二次氧化方法，效价达150U/mg以上。95 %达
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