甘油分析方法
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甘油分析方法
甘油的化学分析方法
过碘酸钠法（GB/T 13216.6—91）
原理：在强酸性介质中，过碘酸钠将三个相连羟基的甘油氧化分解成甲酸和甲醛，用NaOH中和生成的甲酸，用pH值计指示终点。从NaOH标准溶液的消耗量计算甘油的含量。
CH2OH-CHOH-CH2OH+2NaIO4→2HCHO+HCOOH+2NaIO3+H2O
试剂
蒸馏水：不含二氧化碳。
乙二醇稀释溶液：1体积不含甘油的乙二醇，用酚酞作指示剂中和后，再用1体积水稀释。
硫酸溶液：约0.1mol/L。
甲酸钠溶液：约0.1mol/L。
过碘酸钠酸性溶液的制备：称取60g（精确至0.1g）过碘酸钠，溶于已加入120mL 硫酸溶液的约500mL的水中，边加入边冷却，转移到1000mL容量瓶中，用水稀释到刻度并摇匀。必要时用玻璃过滤器过滤。
溶液的酸度校核：空白试验所用NaOH溶液的体积应不少于4.5mL，这与基本反应产生的酸度相当。
NaOH溶液：约0.05mol/L。
NaOH标准溶液：约0.125 mol/L。
酚酞指示剂：溶解0.5g酚酞于95%（体积比）乙醇中，稀释至100mL。
仪器
滴定管：50mL。
pH值计：pH值计应用两种缓冲溶液校准。
a：邻苯二甲酸氢钾溶液：0.05mol/L（10.12g/L），20℃时pH值为4.00；
b：10水四硼酸二钠（Na2B4O7·10H2O）溶液：0.01mol/L（3.81g/L），20℃时pH值为9.22。
测定步骤
（1）试验份：称取含甘油不大于0.5g的样品（精确至0.0002g）。如果不知甘油的大致含量，应称取0.5g样品进行预测（如果甘油含量大于75%，最
好称取0.5g+0.1g样品，精确至0.0002g），置于500mL容量瓶中，用水
稀释至刻度，摇匀后取50mL此溶液用于测定。
（2）试验溶液的制备：对碱性样品或样品酸化时出现焦油沉淀，可将试验份放入配有回流冷凝器的烧瓶中，需要时稀释到50mL，加2滴酚酞指示
剂，用硫酸溶液中和到刚好褪色。再加入5mL硫酸溶液，煮沸5min，
冷却，必要时过滤，并用水洗涤过滤器。滤液转入600mL烧杯中。无上
述情况时则可将样品直接放入烧杯进行测定。
（3）滴定：用水稀释试样至体积约250mL，在不断搅拌下，加入NaOH溶液，调节pH值至7.9±0.1。加入50mL过碘酸钠溶液，混合搅匀，盖上表面
皿，在温度不超过35℃的暗处放置30min。然后加入10mL乙二醇稀释
溶液，混合，在相同条件下放置20min。加5.0mL甲酸钠溶液，用NaOH
标准溶液滴定至pH值7.9±0.2。.
（4）空白试验：在相同条件下，用相同量的试剂和稀释水，用50mL水代替样品，做空白试验。但加入过碘酸钠溶液之前，空白溶液应调节pH值
至6.5，加入过碘酸钠溶液之后，滴定终点至pH值也是6.5。
（5）计算：
甘油含量（质量，%）=（V1-V2）×c×0.0921×100÷m=9.21c(V1-V2)/m
式中V1—测定样品耗用NaOH标准溶液的体积，mL；
V2—空白实验耗用NaOH标准溶液的体积，mL；
m—试验份的质量，g；
c—NaOH标准溶液的浓度，mol/L；
0.0921—甘油的毫摩尔质量，g/mmol。
两个平行实验的允许误差为0.2。
JIS食品甘油标准、FCCⅢ标准、美国药典甘油标准等叙述的方法（与GB/T 13216.6—91相当）操作如下：
正确取出约0.5g的甘油，加水成500mL，正确抽取50mL，加水约200mL。加入NaOH或H2SO4溶液调节pH值至7.9±0.1。然后加入50mL6%的过碘酸钠，轻轻摇动，放置30min后，加入10mL50%的乙二醇，摇动，再放置暗处20min。加入5mL浓度为1mol/L的甲酸钠水溶液，用0.1mol/L的NaOH溶液（ISO用0.125mol/L的NaOH溶液）滴定到pH值为7.9±0.1表示终点，同时做空白试验。并且试验时用新煮沸的蒸馏水。
每毫升0.1mol/L的NaOH溶液相当于9.209mg的甘油。
重铬酸钾法
高纯度甘油可以采用重铬酸钾法。
原理：甘油在酸性溶液中能被重铬酸钾氧化成二氧化碳和水，过量的重铬酸钾将碘化钾氧化成碘，用硫代硫酸钠滴定析出的碘，从而计算甘油含量。
3C3H8O3+7K2Cr2O7+28H2SO4→7K2SO4+9CO2+7Cr2(SO4)3+40H2O
K2Cr2O7+6KI+7H2SO4→Cr2(SO4)3+4K2SO4+3I2+7H2O
3I2+6S2O32-→6I-+3S4O62-
有以上三式可知，1mol硫代硫酸钠相当于92.0944÷2÷7=6.578g甘油。
试剂
硫代硫酸钠标准溶液：0.1mol/L。
碘化钾：20%溶液。
淀粉指示剂：0.5%溶液。
重铬酸钾溶液：89g/L。
测定：称取样品1g左右（精确至0.0002g），移入250mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。取出10mL于锥形瓶中，加入25mL重铬酸钾溶液及30mL硫酸（1:1，体积比），瓶口放置一玻璃漏斗，于水浴上加热2h，冷却后移入250mL 容量瓶中，用水稀释到刻度，摇匀。取25mL于500mL具塞锥形瓶中，加入15mL20%
的碘化钾溶液，盖上瓶塞，于暗处放置10min，加水300mL，然后用0.1mol/L的硫代硫酸钠标准溶液滴定，近终点时加入淀粉指示剂数滴，继续滴定至溶液由蓝色变成亮绿色。同时作空白试验。
计算：甘油含量按下式计算。
甘油%= [（V2-V1）×c×0.006578／(m×10／250×25／250﹚] ×100
式中V1—滴定样品时耗用硫代硫酸钠标准溶液的体积，mL；
V2—滴定空白时耗用硫代硫酸钠标准溶液的体积，mL；
c—硫代硫酸钠标准溶液的浓度，mol/L；
m—试验份的质量，g；
0.006578—1mmol硫代硫酸钠相当于甘油的质量，g。
比色法
在碱性条件下，把甘油生成铜络合物，进行比色测定。
在10mL甘油中，加入10mL21%的NaOH溶液，再加入6mL6%的氯化亚铜溶液，充分混合后并离心分离，取上层溶液在635nm处进行比色测定。
另外，也有把甘油用重铬酸钾氧化分解进行定量的方法。
在甘油（0.25g以下）中，加入25mL0.0092%的重铬酸钾溶液和30mL浓硫酸，在水浴中煮沸20min，使甘油分解，在587nm处测定重铬酸钾的消耗量。作为重铬酸钾方法的变更方法，再加入二苯胺脲，在540nm处进行测定。
此外，对低含量的甘油如皂基中的甘油含量的测定，可采用如下操作的分光光度法进行。
原理：将定量的皂基（或肥皂、脂肪酸）用硫酸分解，生成的脂肪酸用石油醚萃取后，残留于水中的甘油用过碘酸氧化成甲酸和甲醛，将甲醛用1，8-二羟基-3,6-二萘磺酸显色，用分光光度计测定紫红色溶液的吸光度，求出甘油的含量。本法适于测定甘油含量低于0.5%的试样。
操作：将定量的皂基（或肥皂、脂肪酸）用硫酸分解，生成的脂肪酸用石油醚萃取后，残留水溶液（250mL）作为试样。
（3）加入1mL氯化亚锡溶液和10mL1，8-二羟基-3,6-二萘磺酸，混合。在水浴上加热30min，冷却后用稀硫酸稀释到100mL。
（4）用10nm比色池在571nm处（本溶液最大吸收波长在571nm附近）测定吸光度，同时用水进行空白测定。由试样的吸光度与空白试验的吸光度
之差，从预先制作的甘油吸光度曲线求出甘油的含量（%）。
C=m1×100×250／V×m×1000×1000=0.025m1／Vm
式中
C—甘油含量，%
m1—由标准曲线求出的甘油含量，μg；
V—取试样溶液的量，mL；
m—样品量，g。
色谱法测定甘油
气相色谱法
气相色谱法测定甘油的色谱柱有许多种，通常柱温控制在180℃左右，以Celite(硅藻土、镁氟石)作为担体，聚乙二醇-6000作固定液，可以圆满地分析甘油产品。
J.Synder用Tenax-GC柱，柱温从150℃升至240℃对甘油进行分析，并和过碘酸法进行了比较。
N.Chambers对润湿剂中的甘油、甘露醇、山梨糖醇等乙酰化物用1.5%的
QFI-HMDS80-100目色谱柱，在柱温200℃的条件下进行分析。乙酰化操作如下：在60-100mg样品中，加入吡啶、无水乙酸（50:50，体积比）10mL。在水浴中进行反应。
也有用80-100目的活性炭，0.8%的THEED-Carbopack C色谱柱，在柱温125℃下进行分析的报告。
另外，三甲基硅烷化的甘油、聚合甘油用Silicone OV-17 1.3%为固定液，担体100-200目的色谱柱，从90℃升温至350℃，升温速率在5℃/min下进行。三甲基硅烷化操作如下：在0.18-0.22g甘油中，加入1mL吡啶和0.4mL六甲基二氯硅烷、0.4mL三甲基氯硅烷，在80℃下反应5min，静止后取上层清液进行分析。
高压液相色谱法
用屋太芝公司分析糖类专用的反向柱，以乙腈：水=92.5:7.5（体积比）作为洗脱剂，以视差折光仪为检测器，可以对甘油进行分析。
另外，也可以用水系的凝胶渗透色谱对甘油进行分析。分析条件如下。
色谱柱：Asahipak GS-220H(7.6mmID×250mL)。
柱温：40℃。
流量：0.5mL/min。
检测器：视差折光仪。
样品：0.5%甘油20μL。
洗脱剂：水。
相关文献
1.HPLC检测生物柴油生产过程中副产物甘油含量的研究张宏武,王璐,产竹华,夏永军,陈蕴,许赣荣(江南大学工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡214122) 主要仪器
Angilent 1100系列高效液相色谱仪,KDC-16H高速台式离心机。
最佳色谱条件:色谱柱:ZORBAX NH2(250mm×4. 6 mm,5μm);检测器:示差检测器;柱温30℃;流动相:70%乙腈;流速1mL/min。甘油最低检测限为2mg/L,回收率为94. 34%~99.43%,相对标准偏差为1.03%。与传统化学方法相比,高效液相色谱法快速简便,结果准确,重现性好。
2.分光光度法测定甘油合剂中甘油的含量徐秀丽,成立军,刘伦(泰山医学院第
一教学医院,山东泰安271000)
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