实验六丝状真菌形态特征观察.
微生物学实验一 微生物制片及形态观察
实验一微生物制片及形态观察一、显微镜油镜的使用显微技术是微生物检验技术中最常用的技术之一。
显微镜的种类很多，在实验室中常用的有：普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。
1. 结构光学显微镜是由光学放大系统和机械装置两部分组成。
光学系统一般包括目镜、物镜、聚光器、光源等；机械系统一般包括镜筒、物镜转换器、镜台、镜臂和底座等（图1－1）。
图1－1 光学显微镜结构图标本的放大主要由物镜完成，物镜放大倍数越大，它的焦距越短。
焦距越小，物镜的透镜和玻片间距离（工作距离）也小。
油镜的工作距离很短，使用时需格外注意。
目镜只起放大作用，不能提高分辨率，标准目镜的放大倍数是十倍。
聚光镜能使光线照射标本后进入物镜，形成一个大角度的锥形光柱，因而对提高物镜分辨率是很重要的。
聚光镜可以上下移动，以调节光的明暗，可变光栏可以调节入射光束的大小。
显微镜用光源，自然光和灯光都可以，以灯光较好，因光色和强度都容易控制。
一般的显微镜可用普通的灯光，质量高的显微镜要用显微镜灯，才能充分发挥其性能。
有些需要很强照明，如暗视野照明、摄影等，常常使用卤素灯作为光源。
2. 原理显微镜的放大效能（分辨率）是由所用光波长短和物镜数值口径决定，缩短使用的光波波长或增加数值口径可以提高分辨率，可见光的光波幅度比较窄，紫外光波长短可以提高分辨率，但不能用肉眼直接观察。
所以利用减小光波长来提高光学显微镜分辨率是有限的，提高数值口径是提高分辨率的理想措施。
要增加数值口径，可以提高介质折射率，当空气为介质时折射率为1，而香柏油的折射率为1.51，和载片玻璃的折射率（1.52）相近，这样光线可以不发生折射而直接通过载片、香柏油进入物镜，从而提高分辨率。
显微镜总的放大倍数是目镜和物镜放大倍数的乘积，而物镜的放大倍数越高，分辨率越高。
3. 使用方法1）低倍镜观察先将低倍物镜的位置固定好，然后放置标本片，转动反光镜，调好光线，将物镜提高，向下调至看到标本，再用细调对准焦距进行观察。
丝状真菌的鉴定
鉴定得分
数量及 百分比(%)
使用布鲁克丝状真菌库
v1.0 ≥2.0 ≥1.7 ＜1.7 错误
联合布鲁克和BMU数据库 ≥2.0 ≥1.7 ＜1.7 错误
55 67 37 7
90 104 0 7
(49.5) (60.4) (33.3) (6.3) (81.1) (93.7) (0) (6.3)
111株毛霉：根霉属(48)，毛霉属(41)，横梗霉属(11)，根毛霉属(4)，小 克银汉霉属(5)，共头霉属(2)
染色：乳酸酚棉兰染色
02 丝状真菌MALDI-TOF MS鉴定
MALDI-TOF MS鉴定丝状真菌
样品制备 ➢ 直接转移法 ➢ 甲酸提取法—推荐
数据库 ➢ 商业数据库 ➢ 补充数据库
其他影响因素 ➢ 黑色素抑制 ➢ 沙氏葡萄糖液体培养基旋转培养
MALDI-TOF MS-毛霉目真菌的鉴定
• Centraalbureau voor Schimmelcultures (hppt://www.cbs.knaw.nl)
04 常见丝状真菌鉴定
曲霉-直接镜检
曲霉-分生孢子头
分生孢子 瓶梗 顶囊 分生孢子柄
梗基
足细胞
烟曲霉 Aspergillus fumigatus
黄曲霉 Aspergillus flavus
毛霉目真菌-直接镜检
孢囊孢子
柱孢囊
囊轴
囊托
顶囊 孢囊梗
匍匐菌丝
单孢囊
假根
厚壁孢子
粉孢子
毛霉目基本结构
接合孢子 茎孢子
Lichtheimia
横梗霉（Lichtheimia）, 毛霉（Mucor）, 根毛霉（Rhizomucor）和根霉（Rhizopus）的孢子囊特征
微生物学实验教程
微生物学实验内容实验一 . 显微镜的使用及细菌的简单染色实验二 . 细菌的革兰氏染色实验三 . 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别实验四 . 酵母菌的数量测定实验五 . 酵母菌的大小测定实验六 . 微生物菌落的观察实验实验七 . 霉菌的形态观察实验八 . 培养基的制备与灭菌实验九 . 放线菌的形态及菌落特征的观察实验十 . 微生物的纯种分离培养实验一 . 普通光学显微镜的使用一、目的要求1. 学习并掌握油镜的原理和使用方法。
2. 复习普通台式显微镜的结构、各部分的功能和使用方法。
二 . 显微镜的基本结构及油镜的工作原理现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜。
它们由机械装置和光学系统两大部分组成。
在显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，它直接影响着显微镜的分辨率。
而在普通光学显微镜通常配置的几种物镜中，油镜的放大倍数最大，对微生物学研究最为重要。
与其他物镜相比，油镜的使用比较特殊，需在载玻片与镜头之间加滴镜油，这主要有如下二方面的原因：1. 增加照明亮度油镜的放大倍数可达 100Χ，放大倍数这样大的镜头，焦距很短，直径很小，但所需要的光照强度却最大。
从承载标本的玻片透过来的光线，因介质密度不同（从玻片进入空气，再进入镜头），有些光线会因折射或全反射，不能进入镜头，致使在使用油镜时会因射入的光线较少，物像显现不清。
所以为了不使通过的光线有所损失，在使用油镜时须在油镜与玻片之间加入与玻璃的折射率（n=1.55）相仿的油镜（通常用香柏游，其折射率 n=1.52）。
2. 增加显微镜的分辨率显微镜的分辨率或分辨力 (resolution or resolving power) 是指显微镜能辨别两点之间的最小距离的能力。
从物理学角度看，光学显微镜的分辨率受光的干涉现象及所用物镜性能的限制，可表示为：（公式 P16 ）式中λ= 光波波长；NA=物镜的数值孔径值。
光学显微镜的光源不可能超出可见光的波长范围（ 0.4--0.7μm），而数值孔径值则取决于物镜的镜口角和玻片与镜头间介质的折射率，可表示为： NA=n × sin α式中α为光线最大入射角的半数。
实验7-霉菌的形态观察_图文
实验八霉菌的形态观察一、实验原理霉菌的营养体是分枝的菌丝体。
霉菌在潮湿条件下生长繁殖长出丝状、绒毛状或蜘蛛网状的菌丝体。
菌丝分为营养菌丝与气生菌丝，营养菌丝匍匐于培养基的表面或生于培养基内吸收养料，从营养菌丝上长出伸于空中的菌丝为气生菌丝系，可分化出产生孢子的结构。
菌丝的直径一般比细菌和放线菌大得多。
菌丝在显微镜下观察呈管状，有的有横隔膜将菌丝分割为多个细胞，有的菌丝无横隔膜整个菌丝体为1个单细胞。
霉菌的菌落形态较大，质地较疏松，颜色各不相同。
霉菌无性繁殖或有性繁殖可形成不同类型的孢子。
菌丝、孢子及菌落等特征，因霉菌的种类而异，因而为种类鉴定非常重要的依据。
由于霉菌的菌丝体较粗，而且孢子容易飞散，若在水中溶易变形，显微测量时与实际值存在人为偏差，故观察时将其置于棉蓝乳酚油中，既有保持其正常的形态、使细胞不易干燥及杀菌防腐作用，还因棉蓝染料的存在而对菌丝与孢子具有染色作用，真菌的显微观察时常用棉蓝乳酚油作为浮载剂。
二、主要仪器及设备曲霉(Aspergillus sp．)，青霉(Penicillium sp．)，根霉(Rhizopus sp．)；棉蓝乳酸油染色液，载玻片，盖玻片，解剖针，滤纸，显微镜等。
三、操作步骤1、取95%酒精浸泡的载玻片1块，火焰烧去酒精；2、冷却后在载玻片中央滴棉蓝乳酚油1滴；3、以解剖针从霉菌菌落上挑少许菌丝体置于染液中；4、以解剖针使菌丝体在染液中充分展开；5、将1洁净的盖玻片盖于染液上，以滤纸吸去盖玻片边缘过剩的染液；6、显微镜下20X、40X物镜观察绘图。
四、注意事项1、菌丝体在浮载剂中必须充分展开；2、盖盖玻片时必须斜着缓慢放下，否则在盖上异形成气泡。
五、实验报告1、绘制有隔菌丝与无隔菌丝图2、绘制青霉菌及曲霉菌的分生孢子梗图。
3、霉菌显微观察制片与细菌有何不同？II 四大类细胞型微生物的菌落特征比较观察一、实验原理菌落形态是指某种微生物在一定的培养基上由单个菌体形成的群体形态。
丝状真菌生长的测定
菌体干重法：液体培养真菌的生长期完成后，过滤菌丝、洗涤、离心、烘
干、称量干重。这种测定法比较直接而可靠，但仅适用于菌体浓度较高的样品， 而且要求样品中不含有菌体以外的其它干物质。 菌体湿重法：也可以采用测定菌丝湿重法，把烘干步骤省去。但无论测定 干重或湿重，大都用于工业发酵过程的检测。 真菌的生长还可用间接的方法测定，如全氮量和核糖核酸的分析，一般干 的菌丝体含氮量是4.5-8.5%，核糖核酸是2.0-4.0%。另外，还可以分析培养基 中糖的消耗量、氧的吸收量等作为测定生长量的指标。这些方法大都是工业生 产中所采用的方法。
（三）直线生长速率的测定 这一方法使用并不广泛。它是在“Ｕ”形培养管中进行的。培养管长40厘
米，内径约1.3厘米，在两端5厘米处弯成45°角，如图所示。
在培养管中加入适量的溶化的琼脂培养基，达到培养管直径的一半，两端加 棉塞后灭菌。凝固后从一端接种，然后按时测定生长距离，并计算生验内容：菌丝顶端延长生长的测定 1．配制 PDA培养基，高压灭菌备用 2．制备PDA培养基平板，在平板中心点接黑根霉，于28℃培养15h左右。 3．用显微镜的镜台测微尺来校对目镜测微尺。镜台测微尺100格共长1mm，每
格为10μm，标定目镜测微尺上每小格表示多少μm。
4．将黑根霉平板放置于显微镜台上，在菌落边缘选择单根菌丝边缘，在低倍镜 下聚焦。 5．将目镜测微尺与菌丝平行，并选择菌丝开始出现侧枝的位置与目镜测微尺上
细胞质的泡囊起源于高尔基体，高尔基体、核、内质网一起存在于亚顶端部位。
1970年，Grove等人提出了菌丝顶端生长的泡囊假说：
二、菌丝顶端生长的机制 泡囊作用的三重性： 1. 运输细胞壁溶解酶去破坏原来壁 组成之间的键;
2. 运输新的壁物质，并在壁合成酶
实验五 霉菌的形态观察讲解
8
细菌生理生化反应
9
实验原理
细菌生理生化反应
霉菌的营养体是分枝的丝状体。其个体比细菌和放线 菌大得多，分为基内菌丝和气生菌丝。气生菌丝生长到一 定阶段又可分化出繁殖菌丝。不同霉菌的繁殖菌丝可以形 成不同的孢子。霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及孢子的 形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。
20
细菌生理生化反应
关键步骤及注意事项
一． 1.倒平板要厚一些，接种时划线要密。且不能 将培养基划破。
二． 2.插片时要有一定角度（45度）并与划线垂直。 三． 3.放玻璃纸时，使玻璃纸紧贴培养基表面，不
留空隙。 四． 4.扦片时要等到盖玻片完全冷却后在扦入培养
基中。
21
实验结果示意图
细菌生理生化反应
6片，用旧报纸隔层叠好灭菌(每小组)
三．灭菌条件：121℃、30min
13
细菌生理生化反应
一．3.倒平板
1. 每组倒2个马丁氏平板
二．4.扦片法
1. 接种：每小组用连续划线法接种青霉菌介入 一个马丁氏平板中
2. 扦片：将灭菌的盖玻片垂直菌线以45度角插 入培养皿内的培养基中，插入深约为1/2或 1/3(6片）
4
细菌生理生化反应
一． 霉菌是由许多交织在一起的菌丝体构成。在潮 湿条件下生长繁殖，长出丝状、绒毛状或蜘蛛 网状的菌丝体，并在形态及功能上分化成多种 特化结构。菌丝在显微镜下观察呈管状，有的 有横隔将菌丝分割为多细胞（如青霉、曲霉）， 有的菌丝没有横隔（如毛霉、根霉）。
二． 霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗 得多（约为3-10μm）,常是细菌菌体宽度的几 倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。 霉菌菌丝较粗大，细胞易收缩变形，且孢子容 易飞散。
丝状真菌形态观察
实验四 结 束
�
The major classes of fungi
Oomycetes(卵菌纲) Zygomycetes(接合菌纲) Ascomycetes(子囊菌) Basidiomycetes(担子菌纲) Deuteromycetes(半知菌纲)
观察霉菌的形态) 实验程序(观察霉菌的形态)
青霉, 青霉,黑曲霉观察
Mucor racemosus Geotrichum candidum Aspergillus niger Penicillium notatum Rhizopus oryzae
Several types of sexual spores
Oospores(卵孢子) Zygospores(接合孢子) Ascospores(子囊孢子) Basidiospores(担孢子)
实
验
四
丝状真菌形态的观察
丝状真菌形态的观察
目的要求 实验材料 实验程序 思考题
目的要求
学习观察丝状真菌形态的基本方法 加深理解丝状真菌的形态特征
实验材料
青霉, 丝状真菌培养物 :青霉,黑曲霉 水浸片法:根霉, 水浸片法:根霉,白地霉 显微镜,载玻片,接种环,解剖针,酒精灯, 显微镜,载玻片,接种环,解剖针,酒精灯, 镊子等. 镊子等. 乳酚油,碘液,酒精,蒸馏水等. 乳酚油,碘液,酒精,蒸馏水等.
囊轴columella 囊轴 囊托apophysis 囊托 孢子囊sporangium 孢子囊
匍匐菌丝stolon 匍匐菌丝 假根rhizoid 假根
孢子囊 sporangium
囊轴columella 囊轴
囊托apophysis 囊托 孢囊孢子sporangiospores 孢囊孢子
丝状真菌地鉴定主要根据形态特征
丝状真菌地鉴定主要根据形态特征。
形态特征包括群体形态和个体形态。
1、群体形态群体形态即菌落的形态。
观察菌落形态时多采用固定的培养基，将固体培养基制成平板，以点植法接种，即用接种针尖沾取少量孢子点植在平板上适当的位置，例如中心，或三角形的三点。
然后于25－28℃培养一定时间（如2、4、7、10天）进行观察，观察时可用肉眼或借助放大镜、低倍镜、解剖镜等。
观察的要点一般包括下列几项：1）大小：它反映生长或发育速度，通常测量菌落的直径。
2）颜色：包括菌落表面子实体、气生菌丝、菌核的颜色和基内的颜色，还应注意培养基颜色的变化。
3）菌落表面的纹饰：如皱纹、辐射沟纹、同心环、整个菌落致密或疏松等。
4）菌落的质地：即菌落外观呈毡状、绒毛状、棉絮状、粉粒状、革质状，有无成束状或绳状的气菌丝。
5）菌落的高度：菌落扁平或凸起，中心部分凸起或凹陷。
气生菌丝的高度。
6）菌落的边缘：全缘、锯齿状、树枝状等。
7）渗出物：指菌落表面有无液滴、液滴的颜色和数量。
2、个体形态个体形态指菌丝的特征，子实体的形态(如孢子囊。
子囊壳、子囊、担子果等的形态)，孢子的形态（如孢囊孢子、分生孢子、芽孢子、节孢子、厚垣孢子、卵孢子、接合孢子、担孢子等）。
由于丝状真菌的个体大都较小，必须制成载片标本在显微镜下观察。
丝状真菌的制片比较简单，通常将乳酸苯酚（Lactophenol）液一滴，滴于载片上，再用解剖针挑取欲观察的培养物置此液滴内，并且用针尖将其分散开勿使成团，盖好盖片即得载片标本。
这种载片可保存数月，如盖片四周涂封漆则可保存数年。
1两种分生孢子, 大型分生孢子呈镰刀形，小型分生孢子呈椭圆形2孢子长方形，接连成链菌丝断裂为成串的节孢子3灰绿色，绒毛状，表面有绿色的孢子孢子圆球形，呈绿色孢子大小(μm)：3.03～4.26分生孢子梗顶端膨大，表面的产孢瓶体上成链的分生孢子。
微生物学及微生物学实验课程教学大纲
微生物学及微生物学实验课程教学大纲课程名称：微生物学（Microbiology）课程编码：15课程类别：学科基础课总学时数：50学分：3开课单位：生命科学学院微生物教研室适用专业：生物科学适用对象：本科（四年）一、课程的性质、类型、目的和任务微生物学是生物科学专业本科教育中必修的一门学科基础课。
该课程所教授的基本概念、基本理论和基本方法是构成本专业学生科学素养的重要组成部分，是一个从事生物技术及相关学科的科学工作者和工程技术人员所必备的。
微生物学课程对学生进一步学习相关知识和从事相关领域的科学研究工作来说，都是其它课程所不能替代的。
通过微生物学课程的学习，可以使学生很好的掌握微生物学的专业知识，为从事微生物学领域的研究打下坚实的基础，同时，为其它课程如分子生物学，遗传学，生态学等课程的学习奠定良好的基础。
通过微生物学课程的教学，应使学生对微生物学的基本概念、基本理论和基本方法有比较系统的认识和正确的理解，为进一步学习打下坚实的基础。
在微生物学课程的各个教学环节中，都应在传授知识的同时，注重学生分析问题和解决问题能力的培养，注重学生探索精神和创新意识的培养，努力实现学生知识、能力、素质的协调发展。
二、本课程与其它课程的联系与分工本课程宜从三年级第一学期开始，但要确保学生学习本课程前具有所需要的有机化学，无机化学，生物化学基础。
三、教学内容及教学基本要求[1]表示“了解”；[2]表示“理解”或“熟悉”；[3]表示“掌握”；△表示自学内容；○表示略讲内容绪论微生物与人类微生物学的研究对象[1]；微生物学的发展简史[2]；微生物的特点[3]微生物学及其分科○重点：微生物的含义、特点和发展简史难点：微生物难以认识的原因教学手段：多媒体教学教学方法：讲授法作业：微生物学发展史如何分期？各期的时间、实质、创始人和特点是什么？思考题：为什么说“因果难联”的解决是微生物学发展过程中取得重大创新的不竭动力？第一章原核微生物的形态、构造和功能第一节细菌细菌的形态结构及其功能[3]；细菌的群体形态[2]；细菌的繁殖方式[3]重点：细菌的结构特征、群体特征和繁殖方式难点：细菌的结构特征教学手段：多媒体教学教学方法：讲授法作业：1. 对细菌细胞的一般构造和特殊构造设计一简明的表解。
实验六丝状真菌形态特征观察.
实验六丝状真菌形态特征观察杨明轩生物111 1102040128一、实验目的1、观察并描述真菌菌落特征。
2、掌握制作水压片观察真菌的方法。
3、区分丝状真菌的军体特征及其形态特点。
二、实验原理毛霉和根霉都属于真菌的结合菌门。
菌落生长迅速，表面呈棉花样，初为白色，以后变灰至褐灰色。
菌丝单细胞无横隔，有分支，多核。
毛霉无假根；根霉有假根和匍匐死。
无性生殖产生孢囊孢子。
孢囊梗直接由菌丝体上长出，孢囊梗顶端膨大形成孢囊，孢囊成熟破裂后，露出囊轴，囊轴基部与孢囊梗连接处称为囊托。
毛霉无囊托，根霉的假根上方产生孢囊梗。
孢囊孢子呈球形、卵形或不规则形。
有性生殖形成接合孢子，常为异宗配合。
这些结构均可通过水压片进行观察。
很多青霉、曲霉及镰刀菌尚未发现它们的有性生殖阶段，称为半知菌。
这三种菌的无性生殖阶段均有特征性的分生孢子梗及分生孢子形态和分生孢子着生方式。
青霉菌落多为灰绿色，菌落质地绒状、絮状、绳状或束状，成熟后表面呈粉末状。
青霉菌丝可直接分化为分生孢子梗，其顶端具有对称或不对称的扫帚状分枝，其上着生几轮小梗，小梗顶端着生成串的球状或卵状的绿色分生孢子。
曲霉菌落呈绒毛状或絮状，表面有同心圆形的轮状带。
分生孢子梗长在厚壁的足细胞上，不分枝，顶端膨大呈球形、椭圆形或棍棒状顶囊。
其表面着生一层或两层小梗，下层为柱状初生小梗，上层为瓶装次生小梗，顶端着生成串的球状分生孢子。
镰刀菌菌落呈绒毛状，多为白色、粉红色或紫红色。
菌丝分隔有分枝。
具有两种分生孢子。
小型分生孢子梗分枝或不分枝，其顶端有链状或假头状着生的小型分生孢子。
大型分生孢子梗不分枝，其顶端着生镰刀状大型分生孢子多隔，单生或丛生。
三、实验材料1、菌种：毛霉(Mucor sp.)牛” “”型菌株、根霉(Rhizopussp.)、青霉 (Penicillium sp.)、曲霉(Aspergillus sp.)、镰刀菌(Fusarium sp.)2、浮载剂：乳酸酚溶液3、培养基：真菌培养基4、其他：无菌培养皿、载玻片、盖玻片、无菌水、擦镜纸、吸水纸、接种钩四、实验方法1、形态观察（1）直接观察：不打开培养皿盖，将培养皿置于载物台上，在低倍镜下直接观察。
丝状真菌的鉴定
04 常见丝状真菌鉴定
曲霉-直接镜检
曲霉-分生孢子头
分生孢子 瓶梗 顶囊 分生孢子柄
梗基
足细胞
烟曲霉 Aspergillus fumigatus
黄曲霉 Aspergillus flavus
丝状真菌的鉴定
北京大学第一医院皮肤科
主讲人：余进
余进 主任医师
北京大学第一医院 教授、博士生导师
中国微生物学会临床微生物学委 员会青年委员会副主任委员及真 菌学组副组长
中国微生物学会医学微生物学与 免疫学专委会真菌学组副组长
01
目
02
03
录
04
05
丝状真菌形态鉴定
丝状真菌MALDI-TOF MS鉴定 丝状真菌DNA测序鉴定 常见丝状真菌鉴定 总结
镰刀菌—直接镜检
镰刀菌形态特征
瓶梗
复出芽细胞
单瓶梗
复瓶梗
大分生孢子
小分生孢子
芽生孢子
厚垣孢子
足细胞
茄病镰刀菌Fusarium solani
尖孢镰刀菌 Fusarium oxysporum
层生镰刀菌 Fusarium proliferatum
轮状镰刀菌 Fusarium verticillioides
絮状表皮癣菌 Epidermophyton floccosum
05 丝状真菌鉴定总结
感谢聆听
少根根霉 Rhizopus arrhizus
不规则毛霉 Mucor irregularis
微小根毛霉 Rhizomucor pusillus
棘状小克银汉霉 Cunninghamella echinulata
《微生物学》教学日历
第六周
第七周
实验四：功能微生物的形态鉴定（一）
—丝状菌形态观察（4学时）
1插片培养法、载片培养法制片
2显微镜的使用及丝状菌形态观察
5
第八周
实验五：功能微生物的形态鉴定（二）
—细菌革兰氏染色法和芽孢染色法（3学时）
1细菌革兰氏染色法
2细菌芽孢染色法
6
第九周
实验六：功能微生物的形态鉴定（三）
—酵母菌的形态观察及计数（3学时）
二、朊病毒
三、其他亚病毒因子
第三节、病毒与实践（0.5学时）
一、噬菌体与发酵工业
二、昆虫病毒与生物防治
三、病毒在基因工程中的应用
第五章 微生物的营养与培养基（6学时）
第一节：微生物的6类营养要素（2学时）
一、营养和营养物
二、微生物的6类营养要素
第二节：微生物的营养类型（1学时）
一、微生物营养类型的依据
第二节 微生物的生长规律（1学时）
第三节 影响微生物生长的主要因素（1学时）
一、温度对微生物生长的影响
二、氧气对微生物生长的影响
三、pH值对微生物生长的影响
第四节 微生物培养法概论（1学时）
一、实验室培养法：好氧法、厌氧法
二、生产实践中培养微生物的装置
第五节 有害微生物的控制 （2学时）
一、几个基路
二、微生物及人类对微生物世界的认识史
三、微生物的五大共性
第二章 原核生物的形态构造和功能（6学时）
第一节 细菌（3学时）
一、细菌的形态大小、结构与功能（2.5学时）（重点，配合图片、视频、动画讲解和虚拟实验）
二、细菌的群体形态（0.5学时）（难点，配合学生自己采样制作微生物平板，实物讲解）
真菌学实验报告
真菌学实验报告一.实验目的：1.1了解真菌形态的基本特征。
1.2掌握丝状真菌制片方法。
1.3掌握内生真菌的分离方法1.4掌握真菌的鉴定方法。
二.前言：真菌广泛分布于地球表面,从高山、湖泊到田野、森林，从海洋、高空到赤道、两极，到处都有真菌。
真菌虽然不在空气中生长繁殖，但它的孢子却成群的漂浮在天空，只要稍微注意你会发现人类原来生活在真菌的汪洋大海中。
当今世界，生物技术已迈入世界经济的支柱产业，真菌学在生物技术的大潮中得到了长足的发展。
真菌是原始的真核生物，具有广泛的多样性，真菌生长我繁殖迅速，在很短的时间内就可以得到比动物和植物多得多的后代，能够直接、快速地进行遗传性状分离的分析。
因此，真菌可以作为研究基础生物学过程中的一个重要工具，真菌基因的多样性以及真菌分子生物学的发展，为生物技术产业提供了一个广阔的天地。
植物的生长环境直接影响内生真菌的生物多样性，植物物种的年代越久远，其生物内生真菌的多样性越丰富：抗病原性能越强的植物，其所含的内生真菌具有抗菌活性的可能行就越大；其所含的内生真菌有可能产生与植物相同或相似的抗菌无知或产生抗菌活性物质可能参与了药用植物的抗菌过程，本实验通过植物病原真菌和G+、G-细菌的抑制实验发现茎，根，花，种子或果实内生真菌的代谢产物具有不同程度的抑菌能力，并且对G+、G-有普片遍的抑菌作用。
研究和开发内生真菌的寻找新的抗菌活性物质具有广泛的应用前景。
三.材料与方法：3.1.1材料：在校园内采集银杏、喜树、桂花树样品包括叶、茎、根、花、种子或果实。
3.1.2.药品与试剂：葡萄糖、蛋白胨、KH2P04·3H2O、MgSO4·7H2O，马铃薯、琼脂。
孟加拉红，青霉素，链霉素，甲基蓝，蛋白胨，酵母膏，蔗糖，磷酸盐，葡萄糖，琼脂条，无菌水等。
消毒剂：75%的乙醇，0.1%升汞（HgCl2），次氯酸钠溶液（含活性氯10%），30%双氧水。
双蒸水、琼脂糖，Tris饱和酚、巯基乙醇(β- Mercaptoethanol)，石英砂，Tris饱和酚，氯仿，异戊醇，无水乙醇，硼酸，冰醋酸，氯化钠，盐酸，氢氧化钠，EDTA，CTAB。
实验二真菌形态观察(一)
实验二、真菌形态观察（一）1目的：认识真菌营养体及变态，认识真菌无性和有性孢子类型。
掌握鞭毛菌亚门和接合菌亚门的主要形态特征。
掌握临时玻片的制作方法和绘图技术。
2原理：真菌营养生长阶段的结构称为营养体，当营养生长进行到一定时期，就开始转入繁殖阶段，形成繁殖体，即子实体。
营养体主要为菌丝体，主要变态有吸器、假根、菌核、子座以及根状索菌等。
繁殖体主要包括无性孢子和有性孢子。
通常制作临时玻片来观察病原物在植物上着生的情况以及病原物的形态特征。
3材料用具番茄晚疫病菌装片，辣椒疫霉病菌装片，黑根霉装片，酵母菌悬浮液等培养真菌，植物病害组织。
挑针，刀片，木块，酒精灯，火柴，载玻片，盖玻片，纱布，乳酚油，二甲苯，显微镜，吸水纸，擦镜纸。
投影仪，多媒体课件等。
4内容与方法（自己写，包括主要内容即可）4.1 临时玻片4．1 .1浮载剂制作临时玻片都要使用浮载剂，浮载剂的作用是防止材料干燥和集中光线，以利于显微镜下观察。
浮载剂的种类很多，最常用的是水和乳酚油，其次是甘油、甘油明胶，希尔浮载剂等。
(1)水：水浮载剂一般使用蒸馏水，应用最为方便。
对细菌、真菌孢子等无不利影响。
观察细菌、线虫活动，真菌孢子萌发都必须用水作浮载剂。
测量真菌菌丝直径和真菌孢子大小时也以水作浮载剂为好。
但是用水作浮载剂制片时较易形成气泡，制成的玻片也易干燥而不能保存。
(2)乳酚油：乳酚油长期以来一直是真菌学和植物病理学工作者习惯使用的浮载剂。
乳酚油的组成如下：苯酚结晶(加热熔化)20ml，乳酸20ml，甘油40ml、水20ml。
各成分混合后成为油状粘稠液体，具杀死和固定病原物的作用，可使干瘪的真菌孢子膨胀复原，还可使病组织变得略为透明。
如在乳酚油中加入0．05--0．1％的染料制成棉蓝乳酚油，藏红乳酚油等，还能使菌丝或孢子略微着色，更便于观察。
用乳粉油制作的玻片可长期保持湿润不会干燥，它的缺点中，很难精确测量病原物的大小。
另外，乳酚油能与许多封固剂起作用，盖玻片也易滑动，不易封固。
丝状真菌简介修订稿
丝状真菌简介WEIHUA system office room 【WEIHUA 16H-WEIHUA WEIHUA8Q8-丝状真菌简介丝状真菌 - 概述霉菌并不是一个生物分类学的名称，而是丝状真菌的通称，意即“发霉的真菌”。
丝状真菌的菌丝呈长管、分枝状，宽度2～10微米，可不断自前端生长并分枝，无横隔壁，具多个细胞核，并往往能形成分枝繁茂的菌丝体，但又不象蘑菇那样产生大型的子实体。
在潮湿温暖的地方，很多物品上长出一些肉眼可见的绒毛状、絮状或蛛网状的菌落，那就是丝状真菌。
丝状真菌常用孢子的颜色来称呼，如黑霉菌、红霉菌或青霉菌。
丝状真菌 - 菌落特征A、形态较大，质地疏松，外观干燥，不透明，呈现或松或紧的形状。
B、菌落和培养基间的连接紧密，不易挑取，菌落正面与反面的颜色、构造，以及边缘与中心的颜色、构造常不一致。
C、菌丝有营养菌丝和气生菌丝的分化，而气生菌丝没有毛细管水，故它们的菌落必然与细菌或酵母菌的不同，较接近放线菌。
丝状真菌 - 菌丝丝状真菌构成丝状真菌营养体的基本单位是菌丝。
菌丝是一种管状的细丝，把它放在显微镜下观察，很像一根透明胶管，它的直径一般为2~10微米，比细菌和放线菌的细胞约粗几倍到几十倍。
菌丝可伸长并产生分枝，许多分枝的菌丝相互交织在一起，就叫菌丝体。
类型根据菌丝中是否存在隔膜，可把菌丝分成两种类型：无隔膜菌丝：菌丝中无隔膜，整团菌丝体就是一个单细胞，其中含有多个细胞核。
这是低等真菌（即鞭毛菌亚门和接合菌亚门中的霉菌）所具有的菌丝类型。
有隔膜菌丝：菌丝中有隔膜，被隔膜隔开的一段菌丝就是一个细胞，菌丝体由很多个细胞组成，每个细胞内有1个或多个细胞核。
在隔膜上有1至多个小孔，使细胞之间的细胞质和营养物质可以相互沟通。
这是高等真菌（即子囊菌亚门和半知菌亚门中的霉菌）所具有的菌丝类型。
菌丝变态丝状真菌为适应不同的环境条件和更有效地摄取营养满足生长发育的需要，许多丝状真菌的菌丝可以分化成一些特殊的形态和组织，这种特化的形态称为菌丝变态。
实验十一、真菌的培养及形态观察11.09
接种针挑取少许菌丝于其上，使其摊开 轻轻盖上盖玻片（切勿产生气泡） 采用低倍或高倍观察
担子菌的观察：平菇菌褶置于载玻片上，滴加美蓝
（KOH)少许，加盖玻片后轻压盖玻片使标本变薄、 透明，然后在高倍镜下观察菌丝或担子菌的锁状联 合。
思考题
酵母菌和霉菌在形态结构上各有何特点？
酵母菌的生长特征？
真菌菌丝片段
（二）菌落特征
霉菌的菌落大、疏松、 干燥、不透明，多呈 绒毛状、絮状或网状
等，菌体可沿培养基
表面蔓延生长，菌落 可呈红、黄、绿、青
绿、青灰、黑、白、
灰等多种颜色。
三、担子菌（Basidiomycotina）
担子菌亚门真菌一般称为担子菌，是真菌中最高等的类型。 常见的各种蘑菇、木耳、银耳、灵芝等，都是担子菌的担子果。 担子菌可以形成三种类型的菌丝体，即初生菌丝体、次生菌丝体 和三生菌丝体。
分无性繁殖和有性繁殖两大类，主要是无性繁殖。
无性繁殖：包括芽殖、裂殖等，以芽殖为主。 有性繁殖：主要是产生子囊孢子。
二、霉菌(molds)
(一）形态与结构
丝状菌能长出菌丝
（hypha），菌丝延伸分
支，有的菌丝上长出孢子，
各种丝状菌长出的菌丝与
孢子形态不同，是鉴别霉
菌的重要标志。
菌丝按分化程度分：
①无隔菌丝（nonseptate hypha)
为长管状单细胞，细胞质内含多个 核。其生长表现为菌丝的延长和细 胞核的增多。这是低等真菌所具有 的菌丝类型。
②有隔菌丝(septate hypha)
菌丝中有隔膜，被隔膜隔开的一段菌丝就是一个细胞，菌丝 由多个细胞组成，每个细胞内有一至多个核。隔膜上有单孔 或多孔，细胞质和细胞核可自由流通。
丝状真菌的快速鉴定及药敏试验
丝状真菌的快速鉴定及药敏试验彭阳;许超;王玉月;何彩珍;许昕;毛易捷;史伟峰【摘要】Objective To evaluate the application of matrix-assisted laser desorption ionization-time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) technology in the identification of filamentous fungi,and analyze the susceptibility of filamentous fungi to commonly used antibiotics.Methods A total of 100 strains of filamentous fungi were collected and identified rapidly by MALDI-TOF MS.The obtained results were compared with those from microscopic examination.The susceptibility of filamentous fungi was detected by the Etest method.Results Among 100 strains of filamentous fungi identified by MALDI-TOF MS,61 reached to the specieslevel(score≥2.000),36 to the genus level(score between 1.700 and1.999),and 3 failed to be identified (score ＜ 1.700).There was inconsistent results for one strain of filamentous fungi between MALDI-TOF MS and microscopic examination.The MIC90 of amphotericin B against Epidermophytonfloccosum was 0.19 μg/mL,while that against Aspergillus flavus wa s above 32 μg/mL.The MIC90 of itraconazole against Trichophyton tonsurans,Microsporum canis and Epidermophytonfloccosum were all below 0.38 μg/mL,while that against Aspergillus niger was above 32 μg/mL.The MIC90 of fluconazol were above 256 μg/mL for most of strains.The MIC90 of voriconazole and caspofungin against Aspergillus fumigatus,Aspergillus flavus,Aspergillusniger,Trichophyton rubrum,Trichophyton tonsurans and Microsporumcanis were ≤0.38 μg/mL and ≤ 1 μg/mL,respectively.Conclusion The MALDI-TOF MS technology may be used to identify the filamentous fungi isolated from clinical specimens quickly,accurately and high-throughput.Voriconazole and caspofungin have effective anti-filamentous fungi activity.%目的评估基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术在丝状真菌鉴定中的作用,分析常用抗菌药物对丝状真菌的药敏试验结果.方法收集100株丝状真菌,采用MALDI-TOF MS进行快速鉴定,并与显微镜检查结果进行比对;用E-test法进行丝状真菌药敏试验.结果 MALDI-TOF MS对100株丝状真菌鉴定达到种鉴定水平的有61株(得分≥2.000),达到属鉴定水平的有36株(1.700～1.999),未能鉴定的有3株(＜1.700);与镜检结果不一致的有1株.两性霉素B对絮状表皮癣菌的90％最低抑菌浓度(MIC90)为0.19 μg/mL,而对黄曲霉的MIC90＞32 μg/mL.伊曲康唑对断发毛癣菌、犬小孢子菌和絮状表皮癣菌的MIC90均＜0.38 μg/mL,而对黑曲霉的MIC90＞32 μg/mL.氟康唑对大部分受试菌株的MIC90均＞256μg/mL.伏立康唑和卡泊芬净对烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉、红色毛癣菌、断发毛癣菌和犬小孢子菌的MIC90分别≤0.38μg/mL和≤1μg/mL.结论 MALDI-TOF MS技术可快速、准确、高通量检测临床分离的丝状真菌.伏立康唑和卡泊芬净对丝状真菌具有较好的抗菌活性.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2017(035)007【总页数】5页(P486-490)【关键词】基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱;丝状真菌;真菌药敏试验【作者】彭阳;许超;王玉月;何彩珍;许昕;毛易捷;史伟峰【作者单位】苏州大学附属第三医院检验科,江苏常州213003;苏州大学附属第三医院检验科,江苏常州213003;苏州大学附属第三医院检验科,江苏常州213003;苏州大学附属第三医院检验科,江苏常州213003;苏州大学附属第三医院检验科,江苏常州213003;苏州大学附属第三医院检验科,江苏常州213003;苏州大学附属第三医院检验科,江苏常州213003【正文语种】中文【中图分类】R446.5近年来，由于器官移植、免疫抑制剂使用、侵入性治疗、恶性肿瘤、HIV感染等患者逐年增多，以及广谱抗菌药物的广泛应用，丝状真菌的感染比例呈上升趋势。
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实验六丝状真菌形态特征观察
杨明轩生物111 1102040128
一、实验目的
1、观察并描述真菌菌落特征。
2、掌握制作水压片观察真菌的方法。
3、区分丝状真菌的军体特征及其形态特点。
二、实验原理
毛霉和根霉都属于真菌的结合菌门。
菌落生长迅速，表面呈棉花样，初为白色，以后变灰至褐灰色。
菌丝单细胞无横隔，有分支，多核。
毛霉无假根；根霉有假根和匍匐死。
无性生殖产生孢囊孢子。
孢囊梗直接由菌丝体上长出，孢囊梗顶端膨大形成孢囊，孢囊成熟破裂后，露出囊轴，囊轴基部与孢囊梗连接处称为囊托。
毛霉无囊托，根霉的假根上方产生孢囊梗。
孢囊孢子呈球形、卵形或不规则形。
有性生殖形成接合孢子，常为异宗配合。
这些结构均可通过水压片进行观察。
很多青霉、曲霉及镰刀菌尚未发现它们的有性生殖阶段，称为半知菌。
这三种菌的无性生殖阶段均有特征性的分生孢子梗及分生孢子形态和分生孢子着生方式。
青霉菌落多为灰绿色，菌落质地绒状、絮状、绳状或束状，成熟后表面呈粉末状。
青霉菌丝可直接分化为分生孢子梗，其顶端具有对称或不对称的扫帚状分枝，其上着生几轮小梗，小梗顶端着生成串的球状或卵状的绿色分生孢子。
曲霉菌落呈绒毛状或絮状，表面有同心圆形的轮状带。
分生孢子梗长在厚壁的足细胞上，不分枝，顶端膨大呈球形、椭圆形或棍棒状顶囊。
其表面着生一层或两层小梗，下层为柱状初生小梗，上层为瓶装次生小梗，顶端着生成串的球状分生孢子。
镰刀菌菌落呈绒毛状，多为白色、粉红色或紫红色。
菌丝分隔有分枝。
具有两种分生孢子。
小型分生孢子梗分枝或不分枝，其顶端有链状或假头状着生的小型分生孢子。
大型分生孢子梗不分枝，其顶端着生镰刀状大型分生孢子多隔，单生或丛生。
三、实验材料
1、菌种：毛霉(Mucor sp.)牛” “”型菌株、根霉(Rhizopussp.)、青霉 (Penicillium sp.)、
曲霉(Aspergillus sp.)、镰刀菌(Fusarium sp.)
2、浮载剂：乳酸酚溶液
3、培养基：真菌培养基
4、其他：无菌培养皿、载玻片、盖玻片、无菌水、擦镜纸、吸水
纸、接种钩
四、实验方法
1、形态观察
（1）直接观察：不打开培养皿盖，将培养皿置于载物台上，在低倍镜下直接观察。
（2）制水压片：取一洁净的载玻片，于中央滴一滴乳酸酚溶液，用接种钩挑取少量菌丝及孢囊与染液中，用两根接种针将其拉松散，再轻轻盖上盖玻片，置于高倍镜下观察。
（桔青霉和黑曲霉要观察足细胞，在挑菌时应当挑取少量培养基）。
2、毛霉接合孢子观察
（1）培养：分别在已经倒好的马铃薯葡萄糖培养基的平皿背面中央画一条线，于线左右分别标牛” “”，然后取相应的毛霉菌株接种，并在26C恒温箱中倒置培养7 天。
（2）镜检：制作水压片，观察。
五、实验结果
菌落特征描述
毛霉根霉
(Rhizopus
sp.) 青霉
(Penicillium.sp )
曲霉
(Aspergillus
sp.)
镰刀菌
（Fusarium
sp.）
菌种
(Mucor
sp.)
菌丝
棉絮状絮状绒状绒状绒状
质地
中央粉红正面中央灰绿色，中央褐色，
灰白色灰白色色，
颜色边缘灰白色边缘灰白色
边缘白色
背面
白色
白色
灰白色
颜色
根霉、毛霉、青霉、曲霉和镰刀菌的菌落特征和形态结构差异
毛霉属 表面呈棉絮状，初为白色，后
多单细胞无横隔，有分枝，多
抱囊抱子
变灰至褐灰色。
核。
有：抱囊梗， 轴，囊领。
抱子囊，囊
有：匍匐丝，假根，抱囊梗与假 抱囊抱子
根对生，囊轴、囊托。
曲霉属 中央为黑色的抱子，边缘白 色，
为新生菌丝。
有同心圆形 的轮廓带。
角变现象。
抱囊梗、足细胞、顶囊；初生小 梗柱状；次生小梗瓶状。
分生抱子成链状排 列，球形。
镰刀菌 菌落白色、粉红色或紫红色， 菌丝分枝，有分隔。
厚垣抱子、小型分
属 绒状，产生紫红色色素。
生抱子链状或假头 状；大型分生抱子 镰刀状，单生或丛 生。
代表属菌落特征
菌丝特征
无性繁殖 中央粉红 灰白色
色， 边缘白色
根霉属菌落表面絮状，无色素 青霉属 正面灰绿色，茸状，成熟后表 面
呈粉状。
分生抱子梗扫帚状分枝。
小梗多 轮。
分生抱子，绿色, 球形或卵形。